CN112684166A - 测定人体胃泌素g17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 - Google Patents
测定人体胃泌素g17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112684166A CN112684166A CN202011391200.6A CN202011391200A CN112684166A CN 112684166 A CN112684166 A CN 112684166A CN 202011391200 A CN202011391200 A CN 202011391200A CN 112684166 A CN112684166 A CN 112684166A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- concentration
- gastrin
- reagent
- monoclonal antibody
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 title claims abstract description 95
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 101001002317 Homo sapiens Gastrin Proteins 0.000 title claims abstract description 17
- 238000002038 chemiluminescence detection Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 77
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 44
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 28
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 46
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 38
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 24
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 24
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 18
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 18
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 18
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 14
- GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N N-ethyl-succinimide Natural products CCN1C(=O)CCC1=O GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 claims description 13
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 12
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 8
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 7
- XVBRCOKDZVQYAY-UHFFFAOYSA-N bronidox Chemical compound [O-][N+](=O)C1(Br)COCOC1 XVBRCOKDZVQYAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 7
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 7
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 6
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 claims description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 claims description 6
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 6
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 6
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 6
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 6
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 6
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 claims description 6
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 claims description 6
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 claims description 6
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 claims description 6
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 claims description 6
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims description 6
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims description 6
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 claims description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 4
- 101800000285 Big gastrin Proteins 0.000 claims description 3
- 101000945318 Homo sapiens Calponin-1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000652736 Homo sapiens Transgelin Proteins 0.000 claims description 3
- 102100031013 Transgelin Human genes 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 3
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102400000948 Big gastrin Human genes 0.000 claims description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 2
- FMIHGWZLPSIAFY-WGFKALLTSA-N gastrin-34 Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 FMIHGWZLPSIAFY-WGFKALLTSA-N 0.000 claims description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 2
- 239000002960 lipid emulsion Substances 0.000 claims description 2
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 14
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 abstract 1
- 108010066264 gastrin 17 Proteins 0.000 description 10
- GKDWRERMBNGKCZ-RNXBIMIWSA-N gastrin-17 Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 GKDWRERMBNGKCZ-RNXBIMIWSA-N 0.000 description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 7
- -1 hydrochloride-activated gastrin Chemical class 0.000 description 7
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 description 6
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 description 6
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 6
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100034534 Adenomatous polyposis coli protein 2 Human genes 0.000 description 4
- 210000000712 G cell Anatomy 0.000 description 4
- 101000924579 Homo sapiens Adenomatous polyposis coli protein 2 Proteins 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 2
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 2
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 239000003629 gastrointestinal hormone Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- RZIMNEGTIDYAGZ-HNSJZBNRSA-N pro-gastrin Chemical compound N([C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 RZIMNEGTIDYAGZ-HNSJZBNRSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 210000004203 pyloric antrum Anatomy 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004300 Atrophic Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012327 Endoscopic diagnosis Methods 0.000 description 1
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108010047320 Pepsinogen A Proteins 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000005773 cancer-related death Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 208000016644 chronic atrophic gastritis Diseases 0.000 description 1
- 208000023652 chronic gastritis Diseases 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000012277 endoscopic treatment Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 description 1
- 230000027119 gastric acid secretion Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 201000011591 microinvasive gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000036632 reaction speed Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 208000018556 stomach disease Diseases 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明为测定人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒,试剂盒包括:磁分离试剂、R1试剂、R2试剂、校准品液系列和化学发光底物液;R2试剂为碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体稀释液,化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液,R1试剂为样品稀释液,校准品液系列为含有不同浓度胃泌素G17抗原的稀释液;其特征在于,所述磁分离试剂为包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠。本发明极大地提高了免疫反应的信号强度和灵敏度,使低含量物质在进行免疫结合时也能产生很强的化学发光信号,为胃泌素G17的检测提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。
Description
技术领域
本发明涉及医用诊断试剂领域,特别是涉及一种采用磁微粒化学发光技术和抗原-抗体结合技术检测人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒。
背景技术
我国是全世界当之无愧的“胃病大国”,消化性溃疡、慢性胃炎、胃癌是常见的胃类疾病,胃癌更是最常见的消化道肿瘤,为癌症相关死亡的主要原因。我国是胃癌高发国,约占世界胃癌数的1/2。相关文献报道,不同时期的胃癌经内镜微创治疗或外科手术治疗后五年生存率差异甚大。因此,早检出,早治疗是改善胃癌患者生存品质的重要渠道。
胃泌素是一种主要由胃窦和十二指肠的G细胞分泌的胃肠激素,对调节消化道功能和维持其结构完整有重要作用。目前发现的胃泌素分子,包括胃泌素原、甘氨酸延伸型胃泌素和酰胺化胃泌素等多种类型。其中,人体95%以上有生物活性的胃泌素是α-酰胺化胃泌素,主要含两种异构体G-17和G-34,其中80%~90%是6-17。
胃泌素17,是一个应用于临床医学的全新胃部指标,受到了国内外许多专家的关注。我国不仅将胃泌素17联合胃蛋白酶原辅助诊断胃黏膜疾病写入了“中国早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见”,国家科技部、中国健康促进基金会更是将该项目列为了科研课题。日本、韩国、芬兰已将其列入了胃癌防治规划。
胃泌素17是由胃窦部及十二指肠近端黏膜的G细胞分泌的一种胃肠激素。人体中G-17的生理作用主要是刺激胃酸和胃蛋白酶的分泌,促进黏膜的生长及调节胃肠道功能,因此对于胃肠道正常功能的维持具有非常重要的作用。在不同的病理条件下,G-17水平会发生不同的变化。当发生胃黏膜萎缩后,由于胃窦腺体丧失导致胃窦G细胞数量减少,进入血液循环的G-17水平降低;胃体萎缩导致胃酸分泌降低,对胃窦G细胞的抑制作用减弱,血清G-17分泌增加。因此认为血清G-17是胃窦萎缩的血清学标志物。
磁微粒化学发光法是免疫分析技术的新发展,该技术将磁性微球应用于免疫检测的固相,大大提高了反应的表面积,增加了抗原或抗体的吸附量,加快了反应速度,提高了检测的灵敏度。相比于时间免疫分辨荧光、免疫层析及ELI SA方法,具有准确度高、特异性好、精密度高、线性范围广、试剂稳定性良好等特点;目前磁微粒化学发光免疫分析技术已成为在免疫诊断领域全球使用最广泛的分析方法,也是免疫试剂重要的发展方向之一。现有技术胃泌素17的检测方法主要有酶联免疫法、时间分辨荧光免疫分析法、化学发光法等,然而这些方法具有线性范围窄,检测时间长等缺点,无法满足临床需求。
因此,目前尚需一种污染小、灵敏度高、操作简单、自动化程度高、特异性好、成本低的胃泌素G17检测试剂盒和使用方法。
发明内容
本发明旨在开发一种灵敏度高、无污染、操作简单、特异性好并且成本低廉的一种测定人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒。
基于上述目的,本发明提供一种测定人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒,包括:磁分离试剂、R1试剂、R2试剂、校准品液系列和化学发光底物液;磁分离试剂包括包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠,R1试剂为样品稀释液,R2试剂为碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体稀释液,校准品液系列为含有不同浓度胃泌素G17抗原的稀释液,化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液。
所述包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠包被方法为:
(1)洗涤磁珠:取100mg/mL的磁珠100uL,加入0.1M的MES缓冲液1mL,混匀5分钟,磁分离,去上清,重复洗涤3次;
(2)活化:取洗涤完成的磁珠,加入50ul EDC溶液(20mg/mL,使用冷藏的MES缓冲液配制后5分钟内使用),及50ulNHS溶液(20mg/mL,使用冷藏的MES缓冲液配制后5分钟内使用),充分混匀,室温振荡反应2h;
(3)活化后洗涤:反应结束后,磁分离,去上清,用MES溶液重悬洗涤3次;
(4)包被:向洗涤完成的磁珠中加入用0.05M硼酸缓冲液稀释后的胃泌素G17单克隆抗体,充分混匀,37℃摇床孵育18h;
(5)封闭:将孵育后的磁珠磁分离,去上清,加入1mL封闭液,混匀5分钟,磁分离,去上清,重复洗涤3次,得到包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠,浓度为10mg/mL;
(6)定容:用封闭液最终定容到10mL,浓度为1mg/mL,置于2-8℃平衡24h,得到胃泌素G17单克隆抗体包被的磁分离试剂;
所述封闭液为pH值为7.0~8.0,包括:PBS,浓度为0.02M;摩尔浓度为1M的氯化镁溶液;摩尔浓度为0.1M的氯化锌;牛血清白蛋白,浓度为10.0~50.0g/L;蔗糖:浓度为20.0~100.0g/L;Proclin300,浓度为1.05~4.20g/L;BRO(Bronidox),浓度为1.05~4.20g/L;其余组分为去离子水。
所述封闭液中还包括浓度为10.0~20.0g/L的甘油。
优选地,所述封闭液pH值为7.4,包括:PBS,浓度为0.02M;摩尔浓度为1M的氯化镁溶液;摩尔浓度为0.1M的氯化锌;牛血清白蛋白,浓度为10.0g/L;蔗糖:浓度为100.0g/L;甘油,浓度为20.0g/L;Proclin300,浓度为2.1g/L;Bronidox,浓度为2.1g/L;其余组分为去离子水。
另一方案,所述R1试剂为样品稀释液,包括缓冲液和阻断剂,缓冲液pH值为5.8~8.5,阻断剂,浓度为50~200ug/mL;缓冲液包括:Tris,浓度为5.98~6.52g/L;Proclin-300,浓度为0.98~1.99g/L;氯化钠,浓度为8.5~9.5g/L;牛血清白蛋白,浓度为10~30g/L;EDTA-2Na,浓度为1~10g/L;其余为去离子水。
另一方案,所述R1试剂为样品稀释液,缓冲液pH值为7.4,缓冲液包括Tris,浓度为6.05g/L;Proclin-300,浓度为1.99g/L;氯化钠,浓度为9g/L;牛血清白蛋白,浓度为10g/L;EDTA-2Na,浓度为2g/L;阻断剂,浓度为100ug/mL;其余为去离子水。
另一方案,所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体稀释液是由用SMCC活化的碱性磷酸酶与2-亚氨基硫烷盐酸盐活化的胃泌素G17单克隆抗体按照摩尔比混合均匀进行偶联反应后,使用Tris缓冲液平衡,凝胶柱进行不同分子大小片段的分离纯化,制得碱性磷酸酶标记的胃泌素G17标记抗体。
另一方案,所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体稀释液是用SMCC活化的碱性磷酸酶与2-亚氨基硫烷盐酸盐活化的胃泌素G17单克隆抗体按照摩尔比混合均匀进行偶联反应后,使用Tris缓冲液平衡,凝胶柱进行不同分子大小片段的分离纯化,制得碱性磷酸酶标记的胃泌素G17标记抗体,具体由浓度为0.3~0.6μg/mL碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体经缓冲液稀释而成。
另一方案,所述R2试剂缓冲液为pH值为5.8~8.5,缓冲液包括Tris,浓度为5.98~6.52g/L;Proclin-300,浓度为0.98~1.99g/L;硫柳汞,浓度为0.99~2.01g/L;氯化钠,浓度为8.5~9.5g/L;牛血清白蛋白,浓度为10~30g/L;Gelatin,浓度为5~10g/L;新生牛血清,浓度为30~50g/L;N-乙基顺丁烯二酰亚胺,浓度为0.85~2.05g/L;TritonX-100,浓度为0.98~1.99g/L,吐温-20,浓度为0.98-1.99g/L;其余为去离子水。
另一方案,所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体稀释液是由浓度为0.5μg/mL碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体经缓冲液稀释而成。
另一方案,所述R2试剂缓冲液pH值为7.4,缓冲液包括Tris,浓度为6.05g/L;Proclin-300,浓度为1.99g/L;硫柳汞,浓度为0.99g/L;氯化钠,浓度为8.98g/L;牛血清白蛋白,浓度为29.88g/L;Gelatin,浓度为9.86g/L;新生牛血清,浓度为50g/L;N-乙基顺丁烯二酰亚胺,浓度为1.05g/L;TritonX-100,浓度为0.98g/L;吐温-20,浓度为1.99g/L;其余为去离子水。
另一方案,所述校准品液系列为含有不同浓度胃泌素G17抗原的稀释液。
另一方案,所述校准品液系列的缓冲液为pH值为7.0~8.0,缓冲液组分包括PBS,浓度为0.02M;新生牛血清,浓度为250~500g/L;Casein(酪蛋白),浓度为10~30g/L;N-乙基顺丁烯二酰亚胺,浓度为0.85~2.05g/L;Proclin-300,浓度为1.98~1.99g/L;四环素,浓度为0.98~0.99g/L;其余组分为去离子水。
另一方案,所述校准品液系列,浓度范围为0~100pmol/L,缓冲液pH值为7.4,缓冲液组分包括PBS,浓度为0.02M;新生牛血清,浓度为500g/L;Casein,浓度为20g/L;N-乙基顺丁烯二酰亚胺,浓度为1.05g/L;Proclin-300,浓度为1.98g/L;四环素,浓度为0.99g/L;其余组分为去离子水。
另一方案,所述校准品液系列的不同浓度为0pmol/L、1pmol/L、5pmol/L、10pmol/L、50pmol/L、100pmol/L。
另一方案,所述化学发光底物液是摩尔浓度0.1~0.3M的碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液,pH值为8~10的摩尔浓度0.2M的Tris-HCl缓冲液,并含有0.2~0.4mg/mL的二氧杂环乙烷化合物(APCL)。
另一方案,所述化学发光底物液是摩尔浓度为0.2M,pH值为9.3的摩尔浓度0.2M的Tris-HCl缓冲液,并含有0.3mg/mL的二氧杂环乙烷化合物(APCL)。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
本发明试剂盒针对人体胃泌素G17的检测而设计,为一种磁微粒化学发光检测试剂盒,R1试剂不需要荧光素标记,磁分离试剂包被采用37℃恒温包被,并在封闭液中添加了多羟基物质,蔗糖能在溶液中产生玻璃态效应,提高了含G17的磁珠稳定性。同时试剂R1中添加了阻断剂,有效的消除了补体、嗜异性抗体等的影响,提高了样本检测准确性;试剂R2中添加了N-乙基顺丁烯二酰亚胺,有效的提升了试剂盒稳定性。
本发明提供的人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒可以与全自动化学发光分析仪联用,操作步骤极大简化,加大了检测速度和检测通量,提高了检测效率,同时避免了人为操作导致的误差。本发明的试剂盒特异性好、重复性好、成本低,检测精度高,稳定性好,能很好地用于人体胃泌素G17的检测,更能满足市场使用的综合性能需求。
附图说明
图1为本发明实施例2试剂盒中胃泌素G17的浓度-发光值曲线图;
图2为本发明实施例2试剂盒中与Biohit试剂盒样本检测相关性的结果图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图进一步解释本发明,但并不以此作为对本申请保护范围的限定。
本发明测定人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的组成包括磁分离试剂、R1试剂、R2试剂、校准品液系列和化学发光底物液。
磁分离试剂包括:1)磁微粒:包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠,浓度为10mg/mL;2)封闭液:PBS,浓度为0.02M;摩尔浓度为1M的氯化镁溶液;摩尔浓度为0.1M的氯化锌;牛血清白蛋白,浓度为10.0~50.0g/L;蔗糖:浓度为20.0~100.0g/L;Proclin300,浓度为1.05~4.20g/L;Bronidox,浓度为1.05~4.20g/L;其余组分为去离子水。磁分离试剂的封闭液pH值为7.0~8.0。
R1试剂包括:Tris,浓度为5.98~6.52g/L;Proclin-300,浓度为0.98~1.99g/L;氯化钠,浓度为8.5~9.5g/L;牛血清白蛋白,浓度为10~30g/L;十二烷基硫酸钠,浓度为1~5g/L;EDTA-2Na,浓度为1~10g/L;阻断剂,浓度为50~200ug/mL;其余为去离子水。R1试剂的缓冲液pH值为7.4,R1试剂的缓冲液指不包含阻断剂的剩余组分。
R2试剂包括:1)R2抗体:碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体,浓度为0.3~0.6μg/ml;2)缓冲液:包括Tris,浓度为5.98~6.52g/L;Proclin-300,浓度为0.98~1.99g/L;硫柳汞,浓度为0.99~2.01g/L;氯化钠,浓度为8.5~9.5g/L;牛血清白蛋白,浓度为10~30g/L;Gelatin,浓度为5~10g/L;新生牛血清,浓度为30~50g/L;N-乙基顺丁烯二酰亚胺,浓度为0.85~2.05g/L;TritonX-100,浓度为0.98~1.99g/L,吐温-20,浓度为0.98-1.99g/L;其余为去离子水。R2试剂的缓冲液pH值为5.8~8.5。
校准品液系列包括:1)胃泌素G17抗原的稀释液;2)缓冲液:缓冲液组分为包括PBS,浓度为0.02M;新生牛血清,浓度为250~500g/L;Casein,浓度为10~30g/L;N-乙基顺丁烯二酰亚胺,浓度为0.85~2.05g/L;Proclin-300,浓度为1.98~1.99g/L;四环素,浓度为0.98~0.99g/L;其余组分为去离子水。校准品液系列的缓冲液pH值为7.4。校准品液系列为含有不同浓度(0,1,5,10,50,100pmol/L)的试剂系列。
底物液为摩尔浓度0.1~0.3M碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液,其中,发光底物液中二氧杂环乙烷化合物(APCL)的浓度为0.2~0.4mg/mL,缓冲液为摩尔浓度为0.2M的Tris-HCl,pH值为8~10。
一种测定人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
配制磁分离试剂:1)按照磁微粒封闭液组分含量配制封闭液,对磁珠进行洗涤、活化,再对磁分离的去上清物洗涤、偶联、封闭,获得包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠;2)用磁分离试剂的封闭液对包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠进行定容,制备胃泌素G17单克隆抗体包被的磁分离试剂。
配制试剂R1:1)按照试剂R1缓冲液组分含量配制缓冲液,调节pH;2)添加阻断剂(阻断剂不属于缓冲液的组分)。
配制试剂R2:1)按照试剂R2缓冲液组分含量配制缓冲液,调节pH;2)制备碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体;3)将碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体用试剂R2缓冲液进行稀释。
配制校准品:1)按照校准品缓冲液组分含量配制磷酸盐缓冲液;2)将胃泌素G17抗原溶解于校准品缓冲液中配置成不同的浓度。
配制化学发光底物液:1)配制0.2M,pH值为9.3的Tris-HCl缓冲液,并添加0.3mg/mL的二氧杂环乙烷;2)将碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物溶解于缓冲液中。
人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的测定方法和绘制标准曲线
(1)首先,将30μL的校准品系列(浓度分别为0,1,5,10,50,100pmol/L)分别与50μL试剂R1、25μL磁分离试剂依次加入反应管中,37℃条件下混合温育15min;
(2)用清洗液洗涤3次以去除未结合的抗体和杂质;
(3)再加入100μL试剂R2,37℃条件下混合温育15min;
(4)用清洗液洗涤3次以去除未结合的抗体和杂质;
(5)加入发光底物液150μL,ALP催化底物发光后采用利德曼公司的化学发光检测仪测定相对发光强度(RLU),获得胃泌素G17浓度-发光值系列数值;
(6)根据胃泌素G17浓度-发光值系列数值进行拟合,获得胃泌素G17浓度-发光值标准曲线。
(7)根据拟合的胃泌素G17浓度-发光值标准曲线计算测定待测样本的浓度值。
在一定范围内RLU与胃泌素G17抗原浓度呈正比,通过内插法就可以从标准曲线上读取待测样本的胃泌素G17含量。
实施例1一种测定人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒包括磁分离试剂、R2试剂、校准品液系列和化学发光底物液。
本实施例中,磁分离试剂包括:1)磁微粒:包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠,浓度为10mg/mL;2)封闭液:PBS,浓度为0.02M;摩尔浓度为1M的氯化镁溶液;摩尔浓度为0.1M的氯化锌;牛血清白蛋白,浓度为10.0g/L;蔗糖:浓度为100.0g/L;Proclin300,浓度为2.1g/L;Bronidox,浓度为2.1g/L;其余组分为去离子水。磁分离试剂的封闭液pH值为7.4。
本实施例中,R1试剂包括:1)缓冲液Tris,浓度为6.05g/L;Proclin-300,浓度为1.99g/L;氯化钠,浓度为9g/L;牛血清白蛋白,浓度为10g/L;十二烷基磺酸钠,浓度为1g/L;EDTA-2Na,浓度为2g/L;阻断剂,浓度为100ug/mL;其余为去离子水。
本实施例中,R2试剂包括:1)R2抗体:碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体,浓度为0.5μg/ml;2)缓冲液:Tris,浓度为6.05g/L;Proclin-300,浓度为1.99g/L;硫柳汞,浓度为0.99g/L;氯化钠,浓度为8.98g/L;牛血清白蛋白,浓度为29.88g/L;Gelatin,浓度为9.86g/L;新生牛血清,浓度为50g/L;N-乙基顺丁烯二酰亚胺,浓度为1.05g/L;TritonX-100,浓度为0.98g/L;吐温-20,浓度为1.99g/L;其余为去离子水。R2试剂的缓冲液pH值优选为7.4。
本实施例中,校准品液系列包括:1)含有不同浓度胃泌素G17抗原的稀释液;2)缓冲液:PBS,浓度为0.02M;新生牛血清,浓度为500g/L;Casein,浓度为20g/L;N-乙基顺丁烯二酰亚胺,浓度为1.05g/L;Proclin-300,浓度为1.98g/L;四环素,浓度为0.99g/L;其余组分为去离子水。校准品液系列的缓冲液pH值为7.4。校准品系列为含有不同浓度(0,1,5,10,50,100pmol/L)实际系列。
本实施例中,底物液为碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液,其中,发光底物液中二氧杂环乙烷化合物(APCL)的浓度为0.3mg/mL,缓冲液为摩尔浓度为0.2M的Tris-HCl,pH值为9.3。
实施例2测定人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的制备和测定方法
(1)首先,将实施例1的30μl的校准品系列(浓度分别为0,1,5,10,50,100pmol/L)分别与实施例1的50μl试剂R1、25μl磁分离试剂依次加入反应管中,37℃条件下混合温育30min;
(2)用清洗液洗涤3次以去除未结合的抗体和杂质;
(3)再加入100μl试剂R2,37℃条件下混合温育15min;
(4)用清洗液洗涤3次以去除未结合的抗体和杂质;
(5)加入实施例1的发光底物液150μl,ALP催化底物发光后采用利德曼公司的化学发光检测仪测定相对发光强度(RLU),结果如下表所示:
表1
校准品(pmol/L) | 0 | 1 | 5 | 10 | 50 | 100 |
RLU(100000) | 0.08 | 1.23 | 4.58 | 8.59 | 38.47 | 71.27 |
(6)根据表1的数值进行拟合,获得(图1)所示胃泌素G17浓度-发光值标准曲线,纵坐标为发光值,横坐标为胃泌素G17浓度;
(7)将30μl的待测样品与实施例1的50μl试剂R1、25μl磁分离试剂依次加入反应管中,37℃条件下混合温育15min;
(8)用清洗液洗涤3次以去除未结合的抗体和杂质;
(9)再加入100μl试剂R2,37℃条件下混合温育15min;
(10)用清洗液洗涤3次以去除未结合的抗体和杂质;
(11)加入实施例1的发光底物液150μl,ALP催化底物发光后采用利德曼自研化学发光检测仪测定相对发光强度RLU为1566471;
(12)根据步骤(5)的胃泌素G17浓度-发光值标准曲线计算待测样品1566471对应的胃泌素G17浓度值为18.26pmol/L。
采用本发明上述检测试剂盒测定人体胃泌素G17含量时的方法学鉴定数据可达到如下指标:
空白限为≤0.1pmol/L;
胃泌素G17线性检测范围,1.0~100pmol/L;
精密度-分析内精密度平均为2.37%(n=10),分析间精密度平均为4.02%(n=10),精密度远低于国家要求,说明本发明试剂盒在实验过程中具有很好的可重复性;
准确度-将已知胃泌素G17浓度的高值血清采用已知胃泌素G17浓度的低值血清按1:9比例稀释后回收率为90%~100%;
内源性干扰—800mg/dl的血红蛋白、2000mg/dl的脂肪乳剂、20mg/dl胆红素、1500IU/ml类风湿因子检测结果偏差均小于10%;
特异性-与TG、Gastrin-34的交叉率均小于10%;
HOOK-Gastrin-17浓度高达100000pmol/L时无高剂量钩状效应;
本实施例的试剂盒与Biohit检测结果一致性较好,R2=0.9929(图2)。
上述步骤表明,本发明采用的双抗体夹心法的反应模式,利用化学发光检测技术与磁微粒免疫分离技术相结合的原理,定量检测人血清或血浆样品中的胃泌素G17含量,确保了检测的灵敏度,无污染、特异性强、操作简单、并且对样品的前处理要求低、可快速高通量检测大批量样本,便于临床试剂应用。本发明为临床检测人血清中的胃泌素G17提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。
所属领域的普通技术人员应当理解:以上任何实施例的讨论仅为示例性的,并非旨在暗示本发明的范围(包括权利要求)被限于这些例子;在本发明的思路下,以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合,并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化,为了简明它们没有在细节中提供。因此,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何省略、修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
本发明未述及之处适用于现有技术。
Claims (10)
1.一种测定人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒,包括:磁分离试剂、R1试剂、R2试剂、校准品液系列和化学发光底物液;R2试剂为碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体稀释液,化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液,R1试剂为样品稀释液,校准品液系列为含有不同浓度胃泌素G17抗原的稀释液;其特征在于,所述磁分离试剂为包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠,
所述包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠包被方法是:
(1)洗涤磁珠:取100mg/mL的磁珠100uL,加入0.1M的MES缓冲液1mL,混匀5分钟,磁分离,去上清,重复洗涤3次;
(2)活化:取洗涤完成的磁珠,加入20mg/mL、50uL EDC溶液及20mg/mL、50ulNHS溶液,充分混匀,室温振荡反应2h;
(3)活化后洗涤:反应结束后,磁分离,去上清,用MES溶液重悬洗涤3次;
(4)包被:向洗涤完成的磁珠中加入用0.05M硼酸缓冲液稀释后的胃泌素G17单克隆抗体,充分混匀,37℃摇床孵育18h;
(5)封闭:将孵育后的磁珠磁分离,去上清,加入1mL封闭液,混匀5分钟,磁分离,去上清,重复洗涤3次,得到包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠,浓度为10mg/mL;
(6)定容:用封闭液最终定容到10mL,浓度为1mg/mL,置于2-8℃平衡24h,得到胃泌素G17单克隆抗体包被的磁分离试剂;
所述封闭液为pH值为7.0~8.0,包括:PBS,浓度为0.02M;摩尔浓度为1M的氯化镁溶液;摩尔浓度为0.1M的氯化锌;牛血清白蛋白,浓度为10.0~50.0g/L;蔗糖,浓度为20.0~100.0g/L;Proclin300,浓度为1.05~4.20g/L;Bronidox,浓度为1.05~4.20g/L;其余组分为去离子水。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述封闭液中还包括浓度为10.0~20.0g/L的甘油。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述封闭液pH值为7.4,包括:PBS,浓度为0.02M;摩尔浓度为1M的氯化镁溶液;摩尔浓度为0.1M的氯化锌;牛血清白蛋白,浓度为10.0g/L;蔗糖,浓度为100.0g/L;甘油,浓度为20.0g/L;Proclin300,浓度为2.1g/L;Bronidox,浓度为2.1g/L;其余组分为去离子水。
4.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述R1试剂为含阻断剂的样品稀释液,pH值为5.8~8.5,包括:Tris,浓度为5.98~6.52g/L;Proclin-300,浓度为0.98~1.99g/L;氯化钠,浓度为8.5~9.5g/L;牛血清白蛋白,浓度为10~30g/L;EDTA-2Na,浓度为1~10g/L;阻断剂,浓度为50~200ug/mL;其余为去离子水;
优选地,所述R1试剂为含阻断剂的样品稀释液,pH值为7.4,包括:Tris,浓度为6.05g/L;Proclin-300,浓度为1.99g/L;氯化钠,浓度为9g/L;牛血清白蛋白,浓度为10g/L;EDTA-2Na,浓度为2g/L;阻断剂,浓度为100ug/mL;其余为去离子水。
5.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体稀释液是由用SMCC活化的碱性磷酸酶与2-亚氨基硫烷盐酸盐活化的胃泌素G17单克隆抗体按照摩尔比混合均匀进行偶联反应后,使用Tris缓冲液平衡,凝胶柱进行不同分子大小片段的分离纯化,制得碱性磷酸酶标记的胃泌素G17标记抗体。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体稀释液是由浓度为0.3~0.6μg/mL碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体经缓冲液稀释而成;
所述R2试剂缓冲液为pH值为5.8~8.5,缓冲液包括Tris,浓度为5.98~6.52g/L;Proclin-300,浓度为0.98~1.99g/L;硫柳汞,浓度为0.99~2.01g/L;氯化钠,浓度为8.5~9.5g/L;牛血清白蛋白,浓度为10~30g/L;Gelatin,浓度为5~10g/L;新生牛血清,浓度为30~50g/L;N-乙基顺丁烯二酰亚胺,浓度为0.85~2.05g/L;TritonX-100,浓度为0.98~1.99g/L,吐温-20,浓度为0.98-1.99g/L;其余为去离子水。
7.根据权利要求10所述的检测人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光试剂盒,其特征在于,所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体稀释液是由浓度为0.5μg/mL碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体经缓冲液稀释而成;
所述R2试剂缓冲液pH值为7.4,缓冲液包括Tris,浓度为6.05g/L;Proclin-300,浓度为1.99g/L;硫柳汞,浓度为0.99g/L;氯化钠,浓度为8.98g/L;牛血清白蛋白,浓度为29.88g/L;Gelatin,浓度为9.86g/L;新生牛血清,浓度为50g/L;N-乙基顺丁烯二酰亚胺,浓度为1.05g/L;TritonX-100,浓度为0.98g/L;吐温-20,浓度为1.99g/L;其余为去离子水。
8.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述校准品液系列的缓冲液为pH值为7.0~8.0,缓冲液组分包括:PBS,浓度为0.02M;新生牛血清,浓度为250~500g/L;Casein,浓度为10~30g/L;N-乙基顺丁烯二酰亚胺,浓度为0.85~2.05g/L;Proclin-300,浓度为1.98~1.99g/L;四环素,浓度为0.98~0.99g/L;其余组分为去离子水。
9.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述校准品液系列,浓度范围为0~100pmol/L,缓冲液pH值为7.4,缓冲液组分包括PBS,浓度为0.02M;新生牛血清,浓度为500g/L;Casein,浓度为20g/L;N-乙基顺丁烯二酰亚胺,浓度为1.05g/L;Proclin-300,浓度为1.98g/L;四环素,浓度为0.99g/L;其余组分为去离子水;
所述校准品液系列的不同浓度为0pmol/L、1pmol/L、5pmol/L、10pmol/L、50pmol/L、100pmol/L。
10.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,该试剂盒的空白限为≤0.1pmol/L;
胃泌素G17线性检测范围,1.0~100pmol/L;
分析内精密度平均为2.37%(n=10),分析间精密度平均为4.02%(n=10);
将已知胃泌素G17浓度的高值血清采用已知胃泌素G17浓度的低值血清按1:9比例稀释后回收率为90%~100%;
800mg/dl的血红蛋白、2000mg/dl的脂肪乳剂、20mg/dl胆红素、1500IU/ml类风湿因子检测结果偏差均小于10%;
与TG、Gastrin-34的交叉率均小于10%;
HOOK-Gastrin-17浓度为100000pmol/L时无高剂量钩状效应。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011391200.6A CN112684166A (zh) | 2020-12-02 | 2020-12-02 | 测定人体胃泌素g17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011391200.6A CN112684166A (zh) | 2020-12-02 | 2020-12-02 | 测定人体胃泌素g17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112684166A true CN112684166A (zh) | 2021-04-20 |
Family
ID=75447151
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011391200.6A Pending CN112684166A (zh) | 2020-12-02 | 2020-12-02 | 测定人体胃泌素g17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112684166A (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113391068A (zh) * | 2021-06-10 | 2021-09-14 | 中秀科技股份有限公司 | 用于bace1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 |
CN113391073A (zh) * | 2021-06-10 | 2021-09-14 | 中秀科技股份有限公司 | 用于nptx2的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 |
CN113804896A (zh) * | 2021-09-14 | 2021-12-17 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 测定人体血清中白介素-8含量的磁微粒化学发光试剂盒 |
CN113933521A (zh) * | 2021-09-26 | 2022-01-14 | 北京贝尔医疗设备有限公司 | 磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法和应用 |
CN114184603A (zh) * | 2021-11-11 | 2022-03-15 | 宁波海壹生物科技有限公司 | 一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒 |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08294397A (ja) * | 1995-04-27 | 1996-11-12 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | 免疫学的活性物質の測定方法 |
CN107942051A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-04-20 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种d‑二聚体检测试剂盒及其使用方法 |
US20180231540A1 (en) * | 2015-02-10 | 2018-08-16 | Shenzhen New Industries Biomedical Engineering Co., Ltd. | Reagent kit used for detecting gastrin-17, and preparation method and application for reagent kit |
CN109212188A (zh) * | 2018-09-26 | 2019-01-15 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种便于临床应用的胃泌素释放肽前体检测试剂盒 |
CN109307776A (zh) * | 2018-11-16 | 2019-02-05 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种改良的胃泌素17检测试剂盒 |
CN109521004A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-03-26 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 用于检测胶质纤维酸性蛋白(gfap)的磁微粒分离化学发光免疫测定法 |
CN109580956A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-04-05 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 用于检测β淀粉样蛋白(Aβ)的磁微粒分离化学发光免疫测定法 |
CN109580955A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-04-05 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 用于检测Tau蛋白(TAU)的磁微粒分离化学发光免疫测定法 |
CN110531086A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-12-03 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 一种测定人体前白蛋白含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法 |
CN111157748A (zh) * | 2020-01-07 | 2020-05-15 | 宁波奥丞生物科技有限公司 | 胃泌素17定量检测试剂盒 |
-
2020
- 2020-12-02 CN CN202011391200.6A patent/CN112684166A/zh active Pending
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08294397A (ja) * | 1995-04-27 | 1996-11-12 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | 免疫学的活性物質の測定方法 |
US20180231540A1 (en) * | 2015-02-10 | 2018-08-16 | Shenzhen New Industries Biomedical Engineering Co., Ltd. | Reagent kit used for detecting gastrin-17, and preparation method and application for reagent kit |
CN107942051A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-04-20 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种d‑二聚体检测试剂盒及其使用方法 |
CN109212188A (zh) * | 2018-09-26 | 2019-01-15 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种便于临床应用的胃泌素释放肽前体检测试剂盒 |
CN109307776A (zh) * | 2018-11-16 | 2019-02-05 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种改良的胃泌素17检测试剂盒 |
CN109521004A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-03-26 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 用于检测胶质纤维酸性蛋白(gfap)的磁微粒分离化学发光免疫测定法 |
CN109580956A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-04-05 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 用于检测β淀粉样蛋白(Aβ)的磁微粒分离化学发光免疫测定法 |
CN109580955A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-04-05 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 用于检测Tau蛋白(TAU)的磁微粒分离化学发光免疫测定法 |
CN110531086A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-12-03 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 一种测定人体前白蛋白含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法 |
CN111157748A (zh) * | 2020-01-07 | 2020-05-15 | 宁波奥丞生物科技有限公司 | 胃泌素17定量检测试剂盒 |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113391068A (zh) * | 2021-06-10 | 2021-09-14 | 中秀科技股份有限公司 | 用于bace1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 |
CN113391073A (zh) * | 2021-06-10 | 2021-09-14 | 中秀科技股份有限公司 | 用于nptx2的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 |
CN113804896A (zh) * | 2021-09-14 | 2021-12-17 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 测定人体血清中白介素-8含量的磁微粒化学发光试剂盒 |
CN113933521A (zh) * | 2021-09-26 | 2022-01-14 | 北京贝尔医疗设备有限公司 | 磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法和应用 |
CN114184603A (zh) * | 2021-11-11 | 2022-03-15 | 宁波海壹生物科技有限公司 | 一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112684166A (zh) | 测定人体胃泌素g17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 | |
CN105548565B (zh) | 一种用于检测克氏锥虫抗体的试剂盒及其制备和应用 | |
US10472400B2 (en) | Cardiac troponin I ultra-sensitive detection reagent kit, and ultra-sensitive detection method therefor | |
US20190219569A1 (en) | Fluorescence immunochromatographic detection card and a preparation method therefor and use thereof | |
CN112067826B (zh) | 基于高比活力碱性磷酸酶构建的NT-proBNP检测试剂盒及其应用 | |
EP3258266B1 (en) | Reagent kit used for detecting gastrin-17, and preparation method and application for reagent kit | |
CN107543932A (zh) | 一种降钙素的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法 | |
CN112014575B (zh) | 一种cyfra21-1测定试剂盒及其制备方法 | |
CN112526140A (zh) | 测定超敏肌钙蛋白t含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 | |
Mao et al. | Simultaneous detection of carcinoembryonic antigen and neuron-specific enolase in human serum based on time-resolved chemiluminescence immunoassay | |
CN113933506A (zh) | 测定人体壳多糖酶3样蛋白1(chi3l1)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 | |
CN113433318A (zh) | 一种检测甲胎蛋白异质体afp-l3含量的试剂盒及其检测方法和应用 | |
EP0399464A2 (en) | Assay method for a substance with a specific sugar chain | |
CN113933521A (zh) | 磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法和应用 | |
CN110579609A (zh) | Akr1b10化学发光定量检测试剂盒及其应用 | |
JP2010032360A (ja) | 磁性粒子を用いた測定対象物質の濃度測定法 | |
CN112379092A (zh) | 用于早期肺癌筛查的自身抗体联合检测免疫化学发光试剂盒及其制备方法 | |
US4578349A (en) | Immunoassay for carcinoembryonic antigen (CEA) | |
CN115032398B (zh) | 一种定量检测生物样品中抗体含量的方法 | |
CN115840038A (zh) | 检测(1-3)-β-D-葡聚糖含量的方法及其应用 | |
CN116298311A (zh) | 定量检测白介素18的磁微粒化学发光试剂盒及其应用 | |
KR100646305B1 (ko) | 코발라민 분석 | |
WO2010013525A1 (ja) | 複合体の測定方法およびそれに用いるキット | |
CN109444431A (zh) | 一种心脏肌球蛋白结合蛋白c的定量检测方法及检测试剂盒 | |
CN115078731B (zh) | 一种定量测定细胞角蛋白19片段的试剂盒及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210420 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |