CN112584828A - 人***瘤病毒高危感染的疗法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种药物组合物，其包含含***盐的化合物和选自柠檬酸，乙酸，苹果酸，碳酸，硫酸，硝酸，盐酸，水果酸及其混合物的药学上可接受的酸。该组合物用于预防或治疗女性患者的内部生殖器官被至少一种选自HPV16，HPV18，HPV31，HPV33和HPV58的人***瘤病毒(HPV)感染。该组合物经***施用。

Description

人***瘤病毒高危感染的疗法

本发明涉及减少***分泌物中诸如人***瘤病毒(HPV)、p16和Ki-67等危险因子，以及预防或治疗内部生殖器官例如***或子宫颈的高危HPV感染。

***瘤病毒是高度多样的(De Villiers,E.M.等人(2004)，Classification ofpapillomaviruses.Virology,324(1),17-27)。HPV的类型超过100种，散布在***瘤病毒的不同属和种中，其基因组通常具有少于55％的序列同一性。其中，只有约10％-15％是“高危”(即潜在致癌因子)，其他则是良性的，例如引起疣状物(疣)。

当前针对高危型HPV感染的防护标准是疫苗接种。例如，佳达修

(silgard)是广泛使用的重组HPV疫苗，靶向HPV6、HPV11、HPV16和HPV18，后者被认为是高危。但是，该疫苗仅适用于预防，因此对于在疫苗接种之前更可能已经感染过其中一种HPV类型的年长者而言可能无效。对于任何全身疗法，接种疫苗的副作用的风险往往高于局部疗法的相关副作用的风险。此外，要达到疫苗接种要求是很挑战的，因为一部分普通民众目前对一般性疫苗接种、以及尤其对HPV疫苗不认同。

因此，本发明的目的是提供一种对高危HPV如HPV16或HPV18感染的改进疗法，特别是对已被这些HPV类型之一感染的患者有效和/或可以局部应用的疗法。

本发明涉及一种药物组合物，其包含含***盐的化合物和药学可接受的酸，所述药学可接受的酸选自柠檬酸、乙酸、苹果酸、碳酸、硫酸、硝酸、盐酸、水果酸(例如苹果酸、柠檬酸、酒石酸、草酸和富马酸，特别是柠檬酸)及它们的混合物。所述组合物用于减少女性患者***分泌物中的诸如HPV、p16和/或Ki-67等危险因子，和/或用于(附加性)预防或治疗女性患者内部生殖器官被至少一种选自HPV16、HPV18、HPV31、HPV33和HPV58的HPV感染，特别是当HPV为HPV16和/或HPV18时。所述组合物经***内施用于患者。

在本发明的过程中，令人惊讶地发现，尽管HPV16以及HPV18在进化上彼此相距甚远，但当所述药物组合物经***施用时，对这两种高危HPV类型是有效的(参见de Villiers等人，图1)。这被控制下的临床试验确认(见实施例2)。

尽管先前已公开了药物组合物用于其他治疗适应症，但这些公开并未预示或暗示本发明：

US 2003/0180387 A1涉及一种用于提高含硒水溶液的抗氧化能力的方法。它公开了一种制剂，其包含药学上可施用的或与食物相容的形式的硒，即***盐(selenite)，以及药学上可接受或与食物相容的酸，所述酸选自柠檬酸、乙酸、苹果酸、碳酸、各种果酸及其混合物，所述制剂可用于预防或治疗单纯疱疹感染，以及多种其他适应症。但是，该文献既没有公开***内的应用，也没有公开靶器官是女性患者的内部生殖器官，也没有公开抗***瘤病毒的组合物的应用。

US 2005/0048134 A1涉及局部或颊部施用含***盐的化合物的用途。***瘤病毒感染、尤其生殖区感染的治疗或预防已被公开为众多适应症之一。但是，该文献既没有公开***内的应用，也没有公开靶器官是女性患者的内部生殖器官，也没有公开抗上述高危HPV类型的组合物的应用。

US 2013/0323328 A1涉及用于治疗宫颈不典型增生或癌的含有***盐或含有含***盐的化合物的药物制剂。但是，该文件总体上没有提及对感染的预防或治疗，尤其未提及上述高危型HPV。该文件的教导甚至背离了本发明，因为它声称“对HPV感染的阳性检测通常不会影响后续的治疗决定”，并且该公开内容“并不代表针对特定病原体的策略，反而是，它旨在直接治疗子宫颈的炎症、不典型增生和/或癌，即在潜在病原体引起疾病症状后(很长一段时间之后)也可以使用。”

HPV感染可以被特异性检测，例如对活检标本(例如宫颈涂片)进行聚合酶链反应(PCR)或转录介导的扩增(TMA)试验、或本领域已知的其他方法，因为HPV16、HPV18、HPV31、HPV33和HPV58的基因组序列都是已知的。这些HPV类型的基因组序列在例如国家生物技术信息中心(NCBI)GenBank中以下列登录号发布：K02718.1(HPV16)，X05015.1(HPV18)，J04353.1(HPV31)，M12732.1(HPV33)和D90400.1(HPV58)。

p16(也称为p16^INK4a或细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A)是一种由人体中CDKN2A基因编码的蛋白质。p16的过度表达是某些与癌症相关的转化性高危HPV感染的生物标志物。Ki-67(也称为KI-67或MKI 67)是由MKI67基因在人体中编码的蛋白质。Ki-67是细胞增殖的生物标志物。这两种生物标志物都可以通过例如

PLUS测试法(罗氏，瑞士)来测试，这是一种可商购的、已获批准的细胞学测试法(例如，见Ravarino,A.等(2012).CINtec PLUS immunocytochemistry as a tool for the cytologic diagnosis ofglandular lesions of the cervix uteri.American Journal of Clinical Pathology,138(5),652-656)。

在本发明的过程中，发现本发明的疗法在与生物标志物p16和Ki-67相关联时特别有效地抵抗HPV16、HPV18、HPV31、HPV33或HPV58的感染。因此，在本发明的优选实施方案中，患者至少在内部生殖器官的区域中是p16阳性，优选p16阳性且Ki-67阳性。优选地，药物组合物一直施用到患者在所述区域变为p16阴性，优选p16阴性且Ki-67阴性。

技术人员知道如何评估内部生殖器官的区域是否为p16阳性，例如对该区域进行活检并使用本领域已知的p16测定法(例如免疫细胞化学测定法)。优选地，如果从内部生殖器官的区域获得的活检标本中至少一个细胞，优选至少两个邻接细胞，更优选至少三个邻接细胞，甚至更优选至少五个邻接细胞，特别是至少十个邻接细胞，与健康对照组织例如活检标本中的健康邻接细胞相比，过度表达p16(优选其中每个所述细胞是上皮细胞)，则将该活检标本定义为p16阳性。相反地，如果少于十个邻接细胞，优选少于五个邻接细胞，更优选少于三个邻接细胞，甚至更优选少于两个细胞，特别是零个细胞，与健康对照组织例如活检标本中的健康邻接细胞相比，过度表达p16(优选其中每个所述细胞是上皮细胞)，则这种活检标本优选地定义为p16阴性。

此外，技术人员还知道如何评估内部生殖器官的区域是否为Ki-67阳性，例如对该区域进行活检并使用本领域已知的Ki-67测定法(例如免疫细胞化学测定法)。优选地，如果从内部生殖器官的区域获得的活检标本中至少一个细胞，优选至少两个相邻细胞，更优选至少三个相邻细胞，甚至更优选至少五个相邻细胞，尤其至少十个邻接细胞，与健康对照组织例如活检标本中的健康邻接细胞相比，过度表达Ki-67(优选其中每个所述细胞是上皮细胞)，则将该活检标本定义为Ki-67阳性。相反，如果活检标本中少于十个邻接细胞，优选少于五个邻接细胞，更优选少于三个邻接细胞，甚至更优选少于两个细胞，特别是零个细胞，与健康对照组织例如活检标本中的健康邻接细胞相比，过表达Ki-67(优选其中每个所述细胞是上皮细胞)，则该活检标本优选地定义为Ki-67阴性。

在特别优选的情况下，“p16阳性且Ki-67阳性”被定义为在现有

PLUS测试法(罗氏，瑞士)中的阳性结果，尤其是如

PLUS指南(Roche，2016年)所述。在该指南中，阳性结果定义为存在至少一个双重染色的宫颈上皮细胞(细胞质染成褐色(p16)，细胞核染成红色(Ki-67))。

在本发明的过程中，事实证明，本发明的组合物在令人惊讶的低硒浓度下也有效。因此，在另一个优选的实施方案中，药物组合物的总硒含量为每5毫升组合物中0.01mg-1.25mg，优选0.025mg-1.00mg，更优选0.05mg-0.75mg，甚至更优选0.10mg-0.50mg，还更优选0.15mg-0.40mg，尤其是0.20mg-0.30mg。显而易见的是，“总硒含量”并不意味着硒必须作为元素硒存在于组合物中。举例来说，每5ml组合物中0.83mg***钠作为唯一的含硒化合物对应于每5ml中0.25mg的总硒含量(“硒当量含量”)。

还发现，每次施用的硒剂量可以很低并且仍然有效。根据另一个优选实施方案，硒的总剂量为每次施用时0.01mg-1.25mg，优选0.025mg-1.00mg，更优选0.05mg-0.75mg，甚至更优选0.10mg-0.50mg，再更优选0.15mg-0.40mg，尤其是0.20mg-0.30mg。很明显，“总硒剂量”并不意味着硒必须以元素硒的形式存在于剂量中。举例来说，每次施用时0.83mg***钠作为所施用剂量单位的唯一含硒化合物对应于0.25mg的总硒剂量(“硒当量剂量”)。

为了提高效力，优选药物组合物每天施用至少一次，优选施用至少30天，更优选至少60天，甚至更优选至少90天。

事实证明，每天仅施用一次该组合物适合于达到有效性。由于这比每天施用数次进一步降低了副作用的风险，因此另一个优选的实施方案涉及本发明的药物组合物每天施用一次，优选施用至少30天，更优选至少60天，甚至更优选至少90天。

药物组合物的施用在患者月经期间可以中断。

根据另一优选实施方案，施用所述组合物直至不再检测到内部生殖器官或其区域的感染。

根据本发明使用的药物组合物可以另外包含其他合适的成分和/或药学上可接受的赋形剂。

优选地，根据本发明使用的药物组合物包含***钠形式的***盐(其主要以五水合物形式存在，在40℃时开始释放结晶水)。

在本发明的另一个优选实施方案中，所述组合物包含一种或多种酸，其总量为每100g组合物中1mg至10g酸，更优选10mg至5g酸，特别是100mg至1g酸(特别是当酸以固体形式添加时)。或者，酸也可以以其液体形式添加(例如伴有水，即作为水溶液)。水和水溶液，分别任选包含其他成分，可以以0至(约)99.9g，优选50至99g，特别是80至98g的量添加至每100g的本发明组合物中。

根据另一优选实施方案，组合物的形式为凝胶、悬浮液、乳剂、栓剂如明胶胶囊或无明胶的胶囊、喷雾剂或粉剂。

当以凝胶形式存在时，根据本发明使用的药物组合物优选包含胶凝剂。无机和有机含水胶凝剂都可以用作胶凝剂。特别合适的胶凝剂是纤维素衍生物，特别是羧甲基纤维素，甲基纤维素，羟丙基纤维素，以及，特别是羟乙基纤维素。优选地，每100g组合物中，所述胶凝剂，特别是羟乙基纤维素的使用总浓度为0.1g至30g，更优选0.5g至5g，特别是1g至3g。

根据本发明使用的组合物的另一特别优选的实施方案，尤其当该组合物以凝胶形式存在时，包含二氧化硅，特别是高度分散的二氧化硅，例如根据WO2001/85852A1，作为技术悬浮介质和/或作为吸附剂。优选地，每100g组合物中使用100mg至50g，更优选500mg至10g，特别是1g至5g的量的SiO₂。

根据本发明使用的组合物优选pH值小于7.0，更优选小于5.0，特别是在4.0至2.5之间。

有利地，组合物可以包含其他赋形剂和/或其他活性成分，特别是缓冲物质，着色剂，稳定剂，防腐剂，载体物质或它们的组合。防腐剂的优选实例是山梨酸钾和苯甲酸钠。

此外，组合物可另外包含其他活性剂，例如抗生素，抗病毒剂，抗真菌药，止痛剂，抗炎剂或其组合。

本发明还涉及一种延迟女性患者的内部生殖器官被选自HPV16、HPV18、HPV31、HPV33和HPV58中的至少一种HPV感染的发作或治疗该感染的方法，该方法包括：

-获得本文定义的药物组合物；和

-向患者施用有效量的组合物，其中所述组合物经***内施用。

在本发明的整个上下文中，本文所用的术语“预防”是指完全或几乎完全或至少(优选显著)程度地阻止疾病状态或病症在患者或受试者中发生，尤其是当患者或受试者易患所述疾病状态或病症时。

通常，患者(优选内部生殖器官被至少一种选自HPV16，HPV18，HPV31，HPV33和HPV58(特别是HPV16和/或HPV18)的HPV感染，且尤其是已诊断为有所述感染)需要本发明的处理。在用于预防HPV感染的本发明处理的背景下，患者可以是尚无HPV感染但有发展为HPV感染的风险的患者。

在此，接受本发明的预防或治疗的患者优选大于20岁，优选大于30岁，甚至更优选大于40岁，还更优选大于50岁。

已发现本发明的处理在免疫抑制的患者中不那么有效。因此，优选患者不是免疫抑制患者。另外地或替代地，患者优选地不患有癌症和/或慢性病毒性疾病(除了HPV感染)。

优选地，本文提到的内部生殖器官是患者的***或子宫颈。

在本文中，关于基因(产物)A的术语“过表达”或类似术语通常可以例如表示活检标本中A的表达水平(例如，通过Western印迹或免疫组织化学或免疫细胞化学测量)比适当对照(例如相同类型的健康组织)的表达水平高至少1.2倍(即增加至少20％)，优选至少1.4倍，更优选至少1.6，甚至更优选至少1.8，特别是至少2.0。

本发明通过以下附图和实施例进一步说明，但不限于此。

图1：HPV类型16、18、31、33和58的清除率。与未处理的对照组相比，在经本发明疗法处理的组中观察到HPV16，HPV18，HPV31，HPV33和HPV58的更大清除率。“HPV阴性”：未检测到存在HPV16，HPV18，HPV31，HPV33和HPV58。“HPV阳性”：检测到存在HPV16，HPV18，HPV31，HPV33和/或HPV58。“筛查时”：对患者的初始筛查，“第三次随访”：每天一次的处理进行了3x28天后。

图2：p16/Ki-67状态的改善。与未治疗的对照组相比，在经本发明疗法处理的组中观察到p16/Ki-67双染色阳性的缓解率高得多。“p16/Ki-67-染色阴性”：按

PLUS测试法(罗氏，瑞士)确定为阴性。“p16/Ki-67-染色阳性”：按

PLUS测试法(罗氏，瑞士)确定为阳性。“筛查时”：对患者的初始筛查，“第三次随访”：每天一次的处理进行了3x28天后。

实施例1–用于***内治疗HPV16、18、31、33和58型感染的药物组合物

所述组合物是具有以下成分的水性***凝胶(每5ml凝胶)：

实施例2–控制下的临床试验

本试验是一项随机、有预期的、对照组开放标签的多中心研究，每天一次用实施例1的组合物进行处理，共进行3x28天(n＝116名女性患者，年龄25-60岁，无慢性病毒性疾病、癌症和免疫抑制性处理)。每日剂量为5ml组合物，经***施用。

处理组有58例患者(用实施例1的组合物处理)，对照组有58例患者(未处理)。处理组平均年龄为34.5+/-7.4岁，对照组为33.6+/-7.5岁。

这些受试者是在3个中心招募的。宫颈涂片按本领域已知的标准程序收集，保存在称为

(Becton&Dickinson)的特定液体环境中。样品用

PLUS细胞学试剂盒(罗氏，瑞士)等进行分析。

临床试验遵循2013年赫尔辛基宣言和ISO 14155:2011+Cor 1:2011的伦理原则而进行。

结果：

评估数据表明，处理组患者的所有测量参数的结果都明显改善。仅有少数轻微不良事件被报道。

与未处理的对照组相比，在用本发明疗法处理的组中观察到HPV16，HPV18，HPV31，HPV33和HPV58的更大清除率(见图1)。

此外，与未处理的对照组相比，在用本发明疗法处理的组中观察到了来自p16/Ki-67双染色阳性的明显更大缓解率(见图2)。

这些结果证明了该组合物特别适合本文提到的HPV适应症。

Claims (15)

1.药物组合物，包含含***盐的化合物和药学上可接受的酸，所述酸选自柠檬酸、乙酸、苹果酸、碳酸、硫酸、硝酸、盐酸、果酸及它们的混合物，所述组合物用于预防或处理女性患者的内部生殖器官的感染，所述感染是被至少一种选自HPV16、HPV18、HPV31、HPV33和HPV58的人***瘤病毒(HPV)感染，其中所述组合物是经***内施用的组合物。

2.根据权利要求1的用途的药物组合物，其中所述患者在内部生殖器官的至少一个区域中是p16-阳性，优选是p16-阳性且Ki-67-阳性，优选地，其中所述组合物一直施用到患者在所述区域中变为p16-阴性，优选p16-阴性且Ki-67-阴性。

3.根据权利要求1或2的用途的药物组合物，其中，每5毫升组合物中硒的总含量为0.01mg-1.25mg，优选为0.025mg-1.00mg，更优选为0.05mg-0.75mg，甚至更优选为0.10mg-0.50mg，还更优选0.15mg-0.40mg，尤其是0.20mg-0.30mg。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的用途的药物组合物，其中，每次施用时硒的总剂量为0.01mg-1.25mg，优选为0.025mg-1.00mg，更优选为0.05mg-0.75mg，甚至更优选为0.10mg-0.50mg，还更优选为0.15mg-0.40mg，尤其是0.20mg-0.30mg。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的用途的药物组合物，其中所述组合物至少每天施用一次，优选持续施用至少30天，更优选至少60天，甚至更优选至少90天；任选地，其中所述施用在患者月经期间中断。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的用途的药物组合物，其中所述组合物每天施用一次，任选地其中在患者月经期间中断施用。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的用途的药物组合物，其中，所述施用在患者月经期间中断。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的用途的药物组合物，其中，所述组合物一直施用到不能再检测到内部生殖器官的感染为止。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的用途的药物组合物，其中所述组合物以凝胶，悬浮液，乳剂，诸如明胶胶囊或无明胶胶囊等栓剂，喷雾剂或粉剂的形式存在。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的用途的药物组合物，其中所述组合物还包含二氧化硅，优选高度分散的二氧化硅。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的药物组合物，其中，所述组合物的pH小于7.0，优选小于5.0，特别是4.0至2.5之间。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的用途的药物组合物，其中，所述药学上可接受的酸为柠檬酸。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的用途的药物组合物，其中，所述含***盐的化合物为***钠。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的用途的药物组合物，其中，所述内部生殖器官是所述患者的***或子宫颈。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的用途的药物组合物，其中，所述患者除了HPV感染之外无癌症和/或慢性病毒性疾病，和/或其中所述患者未受免疫抑制。

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