CN112512638A - 抗siglec-7抗体及其使用方法 - Google Patents

抗siglec-7抗体及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本公开总体上涉及组合物，所述组合物包含特异性地结合Siglec‑7蛋白，例如人Siglec‑7或哺乳动物Siglec‑7内的一个或多个表位并且具有改进的和/或增强的功能特征的抗体，例如单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、抗体片段等；以及此类组合物用于预防有需要的个体、降低有需要的个体的风险或治疗有需要的个体的用途。

Description

抗SIGLEC-7抗体及其使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年6月8日提交的美国临时申请号62/682,439的权益，所述临时申请特此以引用的方式整体并入。
呈ASCII文本文件形式的序列表的提交
呈ASCII文本文件形式的以下提交的内容以引用的方式整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名称：735022002340SEQLIST.TXT，记录日期：2019年6月3日，大小：43KB)。
技术领域
本公开涉及抗Siglec-7抗体以及此类抗体的治疗用途。
背景技术
结合唾液酸的Ig样凝集素-7(Siglec-7)是在免疫和造血细胞上表达的1型免疫球蛋白样跨膜蛋白，所述免疫和造血细胞包括未成熟的和成熟的骨髓细胞如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞、肥大细胞和小神经胶质细胞，以及淋巴细胞如天然杀伤细胞和T细胞亚群(Crocker等人(2007)Nat Rev Immunol.7:255–266；Angata和Varki(2000)Glycobiology 10:4:431-438；Nicoll等人(1999)JBC 274:48:34089-34095；Falco等人(1999)J.Exp.Med.190:793-802)。
Siglec-7含有细胞外N-末端Ig样(免疫球蛋白样)V-型结构域、两个Ig样C2-组结构域以及一个共有ITIM基序和不一致膜远端ITIM样基序(在其细胞质结构域中)。由于在唾液酸酶处理后结合的丧失，Siglec-7显示以唾液酸依赖性方式结合红细胞。所述结合被认为是由α2-3或α2-6唾液酸键联介导的(Nicoll等人(1999)JBC 274:48:34089-34095；Angata和Varki(2000)Glycobiology 10:4:431-438)。进一步的研究揭示，Siglec-7更有效地结合α2-8二唾液酸残基(亲和力为10nM)，并且与末端α2-3或α2-6唾液酸相比，对分支的α2-6唾液酸残基展现更高的亲和力(Yamaji(2002)J.Biol.Chem.277:8 6324-6332)。体内Siglec-7配体在b系列神经节苷脂如GD2、GD3和GT1b上表达，其可在中枢神经***细胞、黑素瘤细胞和T细胞亚群中发现(Urmacher等人(1989)Am.J.Dermatopathol.11:577-581；Kniep等人(1993)Blood82:1776-1786)。Siglec-7的N-末端V-组Ig-样结构域的高分辨率晶体结构表明Siglec家族成员的配体结合特异性存在于可变C-C'环中(Alphey等人(2003)J.Biol.Chem 278:5 3372-3377)。
多项研究表明Siglec-7在天然杀伤细胞的功能、T细胞受体信号传导的调控和DC中信号传导的衰减中的抑制作用(Crocker等人,(2012)Ann.N Y Acad.Sci.1253,102–111；Pillai等人,(2012)Annu.Rev.Immunol.30,357–392；von Gunten和Bochner(2008)Ann.N YAcad.Sci.1143,61–82；Ikehara等人(2004)J.Biol.Chem.279:41 43117-43125；Nicoll等人(2003)Eur.J.Imm.33:6:1642-1648；Hudak等人(2013)Nat.Chem.Biol.；Bax等人(2007)J.Imm 179:12:8216-8224；Lock等人(2004)Immunobiology 209:1-2:199-207)。对天然杀伤细胞的功能研究已经证明表达Siglec-7结合唾液酸配体的肿瘤细胞抑制NK细胞活化和肿瘤细胞杀伤。许多人肿瘤稳健地上调唾液酸配体，这使得能够免疫逃避和癌症进展(Jandus等人(2014)J.Clinic.Invest.124:4:1810-1820)。此外，Hudak等人进行了糖被膜工程化并且显示保护用合成唾液酸苷(sialoside)含糖聚合物包被的细胞免于NK细胞毒性。已提出，肿瘤上的唾液酸上调促进强烈抑制天然杀伤细胞免疫监视的“超自我”状态(Macauley和Paulson(2014)Nat.Chem.Biol.10:1:7-8)。
不存在Siglec-7的明显小鼠同系物；然而，小鼠Siglec-E是53％相似的，因此是最接近相关的Siglec。在小鼠中，Siglec-E的遗传失活不会导致明显的发育、组织学或行为异常；并且Siglec-E缺陷型小鼠正常繁殖，从而表明Siglec-E不是必需基因并且其功能可能限于先天免疫(McMillan等人(2013)Blood 121:11:2084-2094)。在用气溶胶LPS激发Siglec-E缺陷型小鼠后，展示肺中嗜中性粒细胞募集增加，这可通过阻断β2-整联蛋白CD11b而逆转。Siglec-E缺陷型嗜中性粒细胞显示以CD11b依赖性方式增加Syk和p38 MAPK的磷酸化。此数据表明Siglec-E在急性肺部炎症模型中遏制嗜中性粒细胞募集(McMillan等人(2013)Blood 121:11:2084-2094)。
在肿瘤学中，由于交联Siglec-7抑制细胞增殖，所以Siglec-7已被认为是慢性和急性骨髓性白血病的治疗靶标(Vitale等人(1999)PNAS 96:15091-15096；Vitale等人(2001)PNAS 98:10:5764-5769)。还已显示Siglec-7活性抑制细胞因子诱导的细胞增殖(Orr等人(2007)J.Biol.Chem.282:3418-3422)。
针对Siglec-7的抗体已经描述于例如WO2011038301；Jandus等人(2014)J.Clinical Invest.124:4:1810-1820；Varchetta等人(2012)PLOS One 7:9:e45821etal.(2012).Falco等人(1999)J.Exp.Med.190:793-802；Nicoll等人(1999)JBC 274:48:34089-34095；Nicoll等人(2003)Eur.J.Imm.33:1642–1648中。然而，这些抗体不显示治疗性抗体所需的功能特征。
因此，需要特异性地结合Siglec-7并降低细胞表面上的Siglec-7表达、减少Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用和/或降低一种或多种Siglec-7活性的治疗性抗体以便治疗与不希望的Siglec-7活性相关的一种或多种疾病、病症和疾患。
本文所引用的所有参考文献(包括专利、专利申请和公布)均特此以引用的方式整体并入。
发明内容
本公开总体上涉及包含特异性地结合人类Siglec-7的抗体，例如单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、抗体片段等的组合物；以及使用此类组合物的方法。
本公开的某些方面至少部分地基于鉴定(例如，相对于具有包含序列SEQ ID NO:61的重链可变区和包含序列SEQ ID NO:62的轻链可变区的抗Siglec-7抗体)具有改进的和/或增强的功能特征的抗Siglec-7抗体。本公开的某些方面至少部分地基于鉴定(例如，相对于具有包含序列SEQ ID NO:38的重链可变区和包含序列SEQ ID NO:50的轻链可变区的抗Siglec-7抗体)具有改进的和/或增强的功能特征(改进的和/或增强的降低人原代免疫细胞上的Siglec-7的细胞表面水平的能力)和/或具有改进的和/或增强的结合动力学的抗Siglec-7抗体。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体对于人Siglec-7具有比具有包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少100倍的KD。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体对于人Siglec-7具有比具有包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少5.3倍的KD。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体在体外以比具有包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少约50％的EC50降低Siglec-7的细胞表面水平。在一些实施方案中，如通过流式细胞术，所测量，本公开的抗Siglec-7抗体在体外以比具有包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少约10％的EC50降低Siglec-7的细胞表面水平。在一些实施方案中，如通过流式细胞术所测量，所述抗体比包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体的效力高至少4.2倍；或比包含含有SEQ IDNO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体的效力高至少1.4倍。有利地，所述抗Siglec-7抗体在体外以在约33.2pM至约25.4nM范围内的半最大有效浓度(EC50)降低Siglec-7的细胞水平，结合至人细胞(如人原代树突细胞)，并且对于人Siglec-7具有在约124nM至约1pM范围内的解离常数(KD)。
因此，在一个方面，本公开涉及一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：HVR-H1，所述HVR-H1包含根据式I的序列：GYAFTX1X2WMN(SEQ ID NO:6)，其中X1是E、M、G或A，并且X2是T、A或Y；HVR-H2，所述HVR-H2包含根据式II的序列：RIFPGX1GHTN(SEQ ID NO:9)，其中X1是L或Y；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)的序列。
在另一个方面，本公开涉及一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含：HVR-L1，所述HVR-L1包含根据式III的序列：RX1SX2DX3NTYLN(SEQ ID NO:15)，其中X1是G或A，X2是Q或E，并且X3是I、T或A；HVR-L2，所述HVR-L2包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含根据式IV的序列：QX1GX2X3X4PWT(SEQ ID NO:24)，其中X1是Q或G，X2是N或G，X3是L、T、V或I，并且X4是L或K；并且其中所述抗体不是包含以下轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含：包含RASQDINTYLN(SEQ ID NO:65)的序列的HVR-L1、包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列的HVR-L2和包含QQGNTLPWT(SEQ ID NO:20)的序列的HVR-L3。
在另一个方面，本公开涉及一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：HVR-H1，所述HVR-H1包含根据式I的序列：GYAFTX1X2WMN(SEQ ID NO:6)，其中X1是E、M、G或A，并且X2是T、A或Y；HVR-H2，所述HVR-H2包含根据式II的序列：RIFPGX1GHTN(SEQ ID NO:9)，其中X1是L或Y；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)的序列；并且所述轻链可变区包含：HVR-L1，所述HVR-L1包含根据式III的序列：RX1SX2DX3NTYLN(SEQ ID NO:15)，其中X1是G或A，X2是Q或E，并且X3是I、T或A；HVR-L2，所述HVR-L2包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含根据式IV的序列：QX1GX2X3X4PWT(SEQ ID NO:24)，其中X1是Q或G，X2是N或G，X3是L、T、V或I，并且X4是L或K。
在另一个方面，本公开涉及一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：HVR-H1，所述HVR-H1包含选自由SEQID NO:1-5组成的组的氨基酸序列；HVR-H2，所述HVR-H2包含选自由SEQ ID NO:7-8组成的组的氨基酸序列；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：HVR-L1，所述HVR-L1包含选自由SEQ ID NO:11-14组成的组的氨基酸序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含选自由SEQ ID NO:17-23组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTMAWMN(SEQ ID NO:2)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGYGHTN(SEQ ID NO:8)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ IDNO:10)；HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNLLPWT(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTGYWMN(SEQ ID NO:3)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)；HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDTNTYLN(SEQ ID NO:12)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNTLPWT(SEQ ID NO:20)。在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTGYWMN(SEQ ID NO:3)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)；HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNILPWT(SEQ ID NO:23)。在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTAAWMN(SEQ ID NO:4)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)；HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNILPWT(SEQ ID NO:23)。
本公开的其他方面涉及一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含Kabat CDR；和/或所述轻链可变区包含Kabat CDR。在一些实施方案中，所述重链可变区包含CDR-H1，所述CDR-H1包含GYAFTAAWMN(SEQ ID NO:4)的序列；CDR-H2，所述CDR-H2包含RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)的序列；以及CDR-H3，所述CDR-H3包含DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)的序列。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含CDR-L1，所述CDR-L1包含RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)的序列；CDR-L2，所述CDR-L2包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列；以及CDR-L3，所述CDR-L3包含QQGNILPWT(SEQID NO:23)的序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含CDR-H1，所述CDR-H1包含GYAFTAAWMN(SEQ ID NO:4)的序列；CDR-H2，所述CDR-H2包含RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)的序列；以及CDR-H3，所述CDR-H3包含DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)的序列；并且所述轻链可变区包含CDR-L1，所述CDR-L1包含RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)的序列；CDR-L2，所述CDR-L2包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列；以及CDR-L3，所述CDR-L3包含QQGNILPWT(SEQ ID NO:23)的序列。
在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述重链可变区包含选自VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VH FR1包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS(SEQ ID NO:25)的序列；VH FR2包含根据式V的序列：WVRQAX1GQX2LEWIG(SEQ ID NO:29)，其中X1是P或R，并且X2是G或R；VH FR3包含YAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:30)的序列；并且VH FR4包含序列WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:31)；和/或所述轻链包含选自VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VL FR1包含DIQMTQSPSSLSASVG DRVTITC(SEQ ID NO:32)的序列；VL FR2包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:33)的序列；VL FR3包含GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:34)的序列；并且VL FR4包含FGQGTKLEIK(SEQ IDNO:35)的序列。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述重链可变区包含选自VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VH FR1包含SEQ ID NO:25的序列；VH FR2包含选自由SEQ ID NO:26-28组成的组的序列；VH FR3包含SEQ ID NO:30的序列；并且VH FR4包含SEQ ID NO:31的序列；和/或所述轻链包含选自VLFR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VL FR1包含SEQ IDNO:32的序列；VL FR2包含SEQ ID NO:33的序列；VL FR3包含SEQ ID NO:34的序列；并且VLFR4包含SEQ ID NO:35的序列。
在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:36-48组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:49-60组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含：包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的轻链可变区；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链可变区；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区；或包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个方面，本公开涉及一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的轻链可变区。在一个方面，本公开涉及一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链可变区。在一个方面，本公开涉及一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQID NO:42的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。在一个方面，本公开涉及一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQ IDNO:43的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。
在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗体具有IgG类、IgM类或IgA类。在一些实施方案中，所述抗体具有IgG类并且具有IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4同种型。
在一些实施方案中，所述Fc区包含位置P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置L234A、L235A和P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；所述Fc区包含位置N297A处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；或所述Fc区包含位置S267E和L328F处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。
在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述Siglec-7蛋白是非人灵长类动物Siglec-7蛋白或人蛋白。在一些实施方案中，所述Siglec-7是野生型蛋白。在一些实施方案中，所述Siglec-7蛋白是天然存在的变体。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述Siglec-7蛋白在选自由以下组成的组的一种或多种细胞上表达：人树突细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人嗜中性粒细胞、人自然杀伤(NK)细胞、人T细胞、人T辅助细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞以及人小神经胶质细胞。
在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗体特异性地结合至人Siglec-7蛋白。在一些实施方案中，所述抗体结合至人Siglec-7蛋白，并且不与来自另一物种的Siglec-7直向同源物或同源物交叉反应。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗体是结合至包含非人灵长类动物Siglec-7蛋白或人Siglec-7蛋白上的氨基酸残基的表位的抗体片段。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗体是结合至选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白的抗体片段：人Siglec-7、人Siglec-7的天然存在的变体和人Siglec-7的疾病变体。在一些实施方案中，所述抗体片段与第二抗体片段交联，所述第二抗体片段结合至选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白：人Siglec-7、人Siglec-7的天然存在的变体和人Siglec-7的疾病变体。在一些实施方案中，所述片段是Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv或scFv片段。
在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗体是人源化抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、多价抗体、缀合抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体是识别第一抗原和第二抗原的双特异性抗体。在一些实施方案中，所述第一抗原是Siglec-7，并且所述第二抗原是：促进跨血脑屏障的转运的抗原；选自由以下组成的组的促进跨血脑屏障的转运的抗原：转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、***受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(LPR-1和2)、白喉毒素受体、CRM197、美洲驼单结构域抗体、TMEM 30(A)、蛋白质转导结构域、TAT、Syn-B、穿膜肽、聚精氨酸肽、血管肽以及ANG1005；选自由致病肽或蛋白质和致病核酸组成的组的致病因子，其中所述致病肽或蛋白质选自由以下组成的组：淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、超氧化物歧化酶(SOD)、中介素、催乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽，并且所述致病核酸是反义GGCCCC(G2C4)重复序列-扩增RNA；在免疫细胞上表达的配体和/或蛋白质，其中所述配体和/或蛋白质选自由以下组成的组：CD33、CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1受体以及磷脂酰丝氨酸；以及在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖脂。
在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗体与一种或多种特异性地结合致病因子的抗体组合使用，所述致病因子选自由以下组成的组：致病肽、致病蛋白、淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、中介素、催乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、超氧化物歧化酶(SOD)、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽，以及它们的任何组合；或与结合选自由以下组成的组的免疫调节蛋白的一种或多种抗体组合使用：CD33、CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR3、DR5、CD39、CD70、CD73、LAG3、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1受体、磷脂酰丝氨酸、致病核酸、反义GGCCCC(G2C4)重复序列扩增RNA以及它们的任何组合。
在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗体对于人Siglec-7具有比包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少4倍；或比包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少1倍的解离常数(KD)，其中所述KD是通过生物层干涉测量法来测定。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗体对于人Siglec-7具有在约124nM至约1pM或小于约1pM范围内的解离常数(KD)，并且其中所述KD是通过生物层干涉测量法来测定。
在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗体降低Siglec-7的细胞表面水平。在一些实施方案中，所述Siglec-7在人树突细胞的表面上表达。在一些实施方案中，所述抗体在体外降低Siglec-7的细胞表面水平。在一些实施方案中，如通过流式细胞术所测量，所述抗体在体外以小于150pM的半最大有效浓度(EC50)降低Siglec-7的细胞表面水平。在一些实施方案中，如通过流式细胞术所测量，所述抗体在体外以比包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少50％；或比包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少10％的EC50降低Siglec-7的细胞表面水平。在一些实施方案中，Siglec-7的细胞表面水平被降低到至少20％。在一些实施方案中，如通过流式细胞术所测量，所述抗体比包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体的效力高至少4.2倍；或比包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体的效力高至少1.4倍。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体与包含选自由以下组成的组的抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域的抗体竞争结合至Siglec-7：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1、S7AB-H8.45.2以及它们的任何组合。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体与包含选自由以下组成的组的抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域的抗体结合基本相同的Siglec-7表位：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1和S7AB-H8.45.2。
在另一个方面，本公开涉及分离的核酸，所述分离的核酸包含编码本文所述的任何抗体的核酸序列。
在另一个方面，本公开涉及载体，所述载体包含本文所述的任何核酸。在一些实施方案中，所述载体是表达载体和/或展示载体。
在另一个方面，本公开涉及分离的宿主细胞，所述分离的宿主细胞包含本文所述的任何核酸或载体。
在另一个方面，本公开涉及一种产生结合至Siglec-7的抗体的方法，所述方法包括培养本文所述的任何宿主细胞，以便产生所述抗体。在一些实施方案中，所述方法还包括回收由所述细胞产生的抗体。
在另一个方面，本公开涉及一种通过本文所述的任何方法产生的抗体。
在另一个方面，本公开涉及药物组合物，所述药物组合物包含本文所述的任何抗体和药学上可接受的载体。在一些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何抗体用于制备药物的用途。
在另一个方面，本公开涉及一种预防疾病、病症或损伤、降低疾病、病症或损伤的风险或治疗疾病、病症或损伤的方法，所述疾病、病症或损伤选自由以下组成的组：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、混合性痴呆、Tau蛋白病、感染以及癌症，所述方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的本文所述的任何抗体。在一些实施方案中，所述疾病、病症或损伤是癌症。在一些实施方案中，所述癌症选自由以下组成的组：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)以及多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何抗体用于制备可用于预防疾病、病症或损伤、降低疾病、病症或损伤的风险或治疗疾病、病症或损伤的药物中的用途，所述疾病、病症或损伤选自由以下组成的组：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、混合性痴呆、Tau蛋白病、感染以及癌症。在一些实施方案中，所述疾病、病症或损伤是癌症。在一些实施方案中，所述癌症选自由以下组成的组：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)以及多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，所述癌症表达增加的或高水平的Siglec-7配体。在一些实施方案中，所述Siglec-7配体是α-2,3-连接的唾液酸和α-2,6-连接的唾液酸、二唾液酸半乳糖基红细胞糖苷酯、二唾液酸乳糖四糖基神经酰胺和/或二唾液酸GalNAc乳糖四糖基神经酰胺中的一者或多者。在一些实施方案中，所述癌症具有增加的或高水平的肿瘤浸润NK细胞。
附图说明
图1描绘来自测量人源化Siglec-7抗体与原代人单核细胞来源的树突细胞的结合的流式细胞术测定的结果。
图2描绘测量亲和力成熟的人源化Siglec-7抗体与原代人单核细胞来源的树突细胞的结合的流式细胞术结果。
图3描绘来自用亲和力成熟的Siglec-7抗体处理后测量原代人树突细胞表面上的Siglec-7水平的流式细胞术测定的结果。
图4描绘来自测量在用不同浓度的含有不同Fc区的Siglec-7抗体处理后原代人树突细胞表面上的Siglec-7水平的流式细胞术测定的结果。
图5A描绘测量注射有Siglec-7抗体的人Siglec-7转基因小鼠中骨髓细胞表面上的人Siglec-7水平的流式细胞术结果。图5B描绘测量注射有Siglec-7抗体的人Siglec-7转基因小鼠中自然杀伤(NK)细胞表面上的人Siglec-7水平的流式细胞术结果。
图6描绘测量注射有Siglec-7抗体的人Siglec-7转基因小鼠中循环CD11b+Gr1+细胞表面上的人Siglec-7水平的流式细胞术结果。
图7描绘来自测量Siglec-7抗体的ADCC活性的测定的结果。
图8描绘来自在Siglec-7抗体存在下的CDC测定的结果。
具体实施方式
一般技术
本文描述或引用的技术和程序通常被本领域技术人员熟知并且通常使用常规方法学来采用，例如像描述于以下中的广泛使用的方法：Sambrook等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual第3版(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold SpringHarbor,N.Y.；Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel,等人编,(2003))；系列Methods in Enzymology(Academic Press,Inc.):PCR 2:A PracticalApproach(M.J.MacPherson,B.D.Hames和G.R.Taylor编(1995)),Harlow和Lane,编(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,以及Animal Cell Culture(R.I.Freshney,编(1987))；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait,编,1984)；Methods in MolecularBiology,Humana Press；Cell Biology:A Laboratory Notebook(J.E.Cellis,编,1998)Academic Press；Animal Cell Culture(R.I.Freshney),编,1987)；Introduction toCell and Tissue Culture(J.P.Mather和P.E.Roberts,1998)Plenum Press；Cell andTissue Culture:Laboratory Procedures(A.Doyle,J.B.Griffiths,和D.G.Newell,编,1993-8)J.Wiley and Sons；Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir和C.C.Blackwell,编)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller和M.P.Calos,编,1987)；PCR:The Polymerase Chain Reaction,(Mullis等人,编,1994)；Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan等人,编,1991)；Short Protocols inMolecular Biology(Wiley and Sons,1999)；Immunobiology(C.A.Janeway和P.Travers,1997)；Antibodies(P.Finch,1997)；Antibodies:A Practical Approach(D.Catty.,编,IRL Press,1988-1989)；Monoclonal Antibodies:A Practical Approach(P.Shepherd和C.Dean,编,Oxford University Press,2000)；Using Antibodies:A Laboratory Manual(E.Harlow和D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999)；The Antibodies(M.Zanetti和J.D.Capra,编,Harwood Academic Publishers,1995)；以及Cancer:Principles and Practice of Oncology(V.T.DeVita等人,编辑,J.B.LippincottCompany,1993)。
定义
如本文所用，术语“预防”包括关于个体的特定疾病、病症或疾患的发生或复发提供预防。个体可能易患、易感特定疾病、病症或疾患，或处于发展这种疾病、病症或疾患的风险中，但尚未被诊断患有所述疾病、病症或疾患。
如本文所用，处于发展特定疾病、病症或疾患的“风险”的个体在本文描述的治疗方法之前可能具有或可能不具有可检测到的疾病或疾病症状，并且可能已显示或可能未显示可检测到的疾病或疾病症状。“处于风险”表示个体具有一种或多种风险因素，所述风险因素是如本领域中所已知与特定疾病、病症或疾患的发展有关的可测量的参数。与没有这些风险因素中的一种或多种的个体相比，具有这些风险因素中的一种或多种的个体发展特定疾病、病症或疾患的可能性更高。
如本文所用，术语“治疗”是指设计用来在临床病理学过程中改变所治疗的个体的天然过程的临床介入。治疗的合意作用包括降低特定疾病、病症或疾患的进展速率、改善或缓解特定疾病、病症或疾患的病理状态以及缓和或改善特定疾病、病症或疾患的预后。例如当与特定疾病、病症或疾患相关的一种或多种症状得到减轻或消除时，个体得到成功“治疗”。
“有效量”是指在必需剂量下且持续必需的时期，至少有效实现所需治疗或预防结果的量。有效量可在一次或多次施用中提供。本文的有效量可根据多种因素而不同，如个体的疾病状态、年龄、性别以及重量和治疗在个体体内引发所希望的应答的能力。有效量还是其中治疗有益作用超过治疗的任何毒性或有害作用的量。对于预防性用途，有利或所需的结果包括诸如以下的结果：消除或减少风险、减轻严重性或延缓疾病(包括所述疾病的生物化学的、组织学的和/或行为的症状、在所述疾病发展期间存在的所述疾病的并发症和中间病理表型)的发作。对于治疗性用途，有利或所需的结果包括诸如以下的临床结果：减少由疾病引起的一种或多种症状、提高患有疾病的患者的生活质量、减少治疗疾病所需的其它药物的剂量、诸如通过靶向来增强另一种药物的作用、延缓疾病进展和/或延长存活。药物、化合物或药物组合物的有效量是足以直接地或间接地完成预防性或治疗性治疗的量。在临床背景中所理解的是，与另一种药物、化合物或药物组合物结合，药物、化合物或药物组合物的有效量可以或可以不实现。因此，可认为“有效量”处于施用一种或多种治疗剂的背景中，并且如果与一种或多种其它药剂结合可实现或实现了理想结果，那么可认为单一药剂是以有效量给予的。
如本文所用，与另一种化合物或组合物“联合”施用包括同时施用和/或在不同时间施用。联合施用还包括作为共同制剂施用或作为独立组合物施用，包括以不同的给药频率或间隔并且使用相同的施用途径或不同的施用途径。
出于治疗、预防或降低风险目的的“个体”是指被归类为哺乳动物的任何动物，包括人、家养动物和农场动物，以及动物园动物、运动动物或宠物动物，如狗、马、兔、牛、猪、仓鼠、沙鼠、小鼠、雪貂、大鼠、猫等。优选地，所述个体是人。
术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中可与“抗体”互换使用。本文中的术语“抗体”是广义上使用的并且特定地涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种完整的抗体形成的多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们展示所需的生物活性。
基本的4链抗体单元是主要由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成的异四聚糖蛋白。VH和VL的配对一起形成单一抗原结合位点。关于不同类别的抗体的结构和性质，参见例如，Basic andClinical Immunology,第8版,Daniel P.Stites,Abba I.Terr和Tristram G.Parslow(编),Appleton&Lange,Norwalk,CT,1994,第71页和第6章。
来自任何脊椎动物物种的L链可基于其恒定结构域的氨基酸序列指定为两种明显不同类型(称为卡帕(“κ”)和拉姆达(“λ”))中的一者。取决于其重链的恒定结构域(CH)的氨基酸序列，免疫球蛋白可归属于不同的类别或同种型。存在五种类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其分别具有指定为阿尔法(“α”)、德尔塔(“δ”)、艾普斯龙(“ε”)、伽马(“γ”)和缪(“μ”)的重链。基于CH序列和功能的相对小的差异，γ和α类别被进一步分成亚类(同种型)，例如，人表达以下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的，并且通常描述于例如Abbas等人,Cellularand Molecular Immunology,第4版(W.B.Saunders Co.,2000)中。
“天然抗体”通常是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成。每条轻链都借助一个共价二硫键连接到一条重链，但不同免疫球蛋白同种型的重链中二硫键链的数量不同。每条重链和轻链还具有规律性间隔的链内二硫桥。每条重链在一端具有一个可变结构域(VH)，之后跟随多个恒定结构域。每条轻链在一端具有一个可变结构域(VL)并且在另一端具有一个恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对准，并且轻链的可变结构域与重链的可变结构域对准。据悉，具体的氨基酸残基形成了轻链可变结构域与重链可变结构域之间的界面。
“分离的”抗体(如本公开的抗Siglec-7抗体)是已经从其生产环境的组分(例如，天然或重组地)鉴定、分离和/或回收的抗体。优选地，分离的多肽不与来自其生产环境的所有其它污染物组分缔合。来自其生产环境的污染组分(如由重组转染的细胞产生的那些污染组分)是通常将干扰抗体的研究、诊断或治疗用途的物质，并且可包括酶、激素以及其它蛋白质或非蛋白质溶质。在优选实施方案中，所述多肽将：(1)被纯化至如通过例如劳立法(Lowry method)所测定大于95重量％的抗体且在一些实施方案中纯化至大于99重量％；(2)被纯化至足以通过使用旋杯式测序仪获得N端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或(3)通过使用考马斯蓝(Coomassie blue)或优选银染色，在非还原或还原条件下进行SDS-PAGE被纯化至均质。分离的抗体包括重组T细胞内的原位抗体，因为抗体的天然环境的至少一种组分将不存在。然而，通常将通过至少一个纯化步骤来制备分离的多肽或抗体。
抗体(如本公开的抗Siglec-7抗体)的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链和轻链的可变结构域可分别称为“VH”和“VL”。这些结构域通常是抗体中最可变的部分(相对于同一类别的其它抗体)并含有抗原结合位点。
术语“可变”是指以下事实：可变结构域的某些区段在抗体(如本公开的抗Siglec-7抗体)之间的序列中存在广泛差异。V结构域介导抗原结合并限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性并不是均匀分布在整个可变结构域的范围内。而是，在轻链和重链可变结构域中，可变性集中在三个称为高变区(HVR)的区段中。可变结构域的更高度保守的部分称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含由三个HVR连接的四个FR区域，所述四个FR基本上采用β-片层构型，所述三个HVR形成连接β-片层结构的环并且在一些情况下形成β-片层结构的部分。在每个链中的HVR由FR区保持紧靠在一起，并且与来自另一条链的HVR促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等人,Sequences ofImmunological Interest,第5版,National Institute of Health,Bethesda,MD(1991))。虽然恒定结构域并不直接参与抗体与抗原的结合，但表现各种效应子功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上同质抗体的群体获得的抗体(如本公开的抗Siglec-7抗体)，即构成所述群体的单独抗体是相同的，除了可能以微量存在的可能的天然存在的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化，酰胺化)。单克隆抗体是高度特异性的，从而针对一个或多个抗原位点。在一些实施方案中，本公开的单克隆抗体可以是双特异性抗体。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂不同，各单克隆抗体针对一个或多个抗原位点上的单一决定簇。修饰语“单克隆”指示抗体是从实质上均质的抗体群体获得的特性，且不应解释为需要通过任何特定方法来产生所述抗体。例如，待根据本公开使用的单克隆抗体可通过各种技术来制备，所述技术包括例如噬菌体展示技术(参见例如，Clackson等人,Nature,352:624-628(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA101(34):12467-472(2004)；以及Lee等人,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)、杂交瘤方法(例如，Kohler和Milstein.,Nature,256:495-97(1975)；Hongo等人,Hybridoma,14(3):253-260(1995)；Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor LaboratoryPress,第2版1988)；Hammerling等人,Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重组DNA方法(参见例如，美国专利号4,816,567)以及用于在具有部分或全部人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中产生人或人样抗体的技术(参见例如，WO 1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO1991/10741；Jakobovits等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 90:2551(1993)；Jakobovits等人,Nature 362:255-258(1993)；Bruggemann等人,Year in Immunol.7:33(1993)；美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；以及5,661,016；Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg等人,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-813(1994)；Fishwild等人,Nature Biotechnol.14:845-851(1996)；Neuberger,Nature Biotechnol.14:826(1996)；以及Lonberg和Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995)。
术语“全长抗体”、“完整抗体”或“全抗体”可互换使用来指与抗体片段相反，呈其基本上完整形式的抗体，如本公开的抗Siglec-7抗体。具体地说，全抗体包括具有重链和轻链(包括Fc区)的抗体。恒定结构域可为天然序列恒定结构域(例如人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。在一些情况下，完整抗体可具有一种或多种效应子功能。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选地所述完整抗体的抗原结合区和/或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利5,641,870，实施例2；Zapata等人,Protein Eng.8(10):1057-1062(1995))；单链抗体分子以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
抗体(如本公开的抗Siglec-7抗体)的木瓜蛋白酶消化产生称为“Fab”片段的两个相同的抗原结合片段和反映容易结晶的能力名称的残余“Fc”片段。Fab片段由整条L链连同H链的可变区结构域(VH)以及一条重链的第一个恒定结构域(CH1)组成。每个Fab片段相对于抗原结合是单价的，即它具有单个抗原结合位点。抗体的胃蛋白酶处理产生单个大F(ab')2片段，所述片段大致对应于具有不同抗原结合活性且仍能够交联抗原的两个二硫化物连接的Fab片段。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于在CH1结构域的羧基末端处具有一些另外的残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文中的Fab'的名称，其中恒定结构域的一个或多个半胱氨酸残基带有游离硫醇基。F(ab')2抗体片段最初以其之间具有铰链半胱氨酸的Fab'片段对形式产生。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。
Fc片段包含通过二硫化物结合在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体的效应子功能由Fc区中的序列决定，所述区域也被某些类型的细胞上发现的Fc受体(FcR)识别。
“Fv”是含有完全抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由处于紧密、非共价缔合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。从这两个结构域的折叠发出六个高变环(各自来自H和L链的3个环)，所述高变环贡献氨基酸残基以用于抗原结合并赋予抗体以抗原结合特异性。然而，甚至单个可变结构域(或仅包含三个对抗原有特异性的HVR的一半Fv)具有识别和结合抗原的能力，尽管与整个结合位点相比，处于较低的亲和力下。
“单链Fv”也缩写为“sFv”或“scFv”是包含连接成单条多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，sFv多肽还包含VH与VL结构域之间的多肽接头，所述接头使得sFv能够形成抗原结合所需的结构。关于sFv的综述，参见Pluckthun in The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编,Springer-Verlag,New York,第269-315页(1994)。
抗体(如本公开的抗Siglec-7抗体)的“功能片段”包含完整抗体的一部分，通常包括完整抗体的抗原结合区或可变区或抗体的F区，所述F区保留或具有改变的FcR结合能力。抗体片段的实例包括线性抗体、单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“双抗体”是指通过在VH与VL结构域之间用短接头(约5-10个残基)构建sFv片段(参见前面的段落)制备的小抗体片段，以使得实现V结构域的链间而非链内配对，由此产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两种“交叉”sFv片段的异二聚体，其中两种抗体的VH和VL结构域存在于不同的多肽链上。双抗体更详细地描述于例如EP 404,097；WO 93/11161；Hollinger等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 90:6444-48(1993)中。
如本文所用，“嵌合抗体”是指一种抗体(免疫球蛋白)，诸如本公开的嵌合抗Siglec-7抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而所述链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体以及此类抗体的片段中的对应序列相同或同源，只要它们表现出所需的生物活性即可(美国专利号4,816,567；Morrison等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA，81:6851-55(1984))。本文中的目标嵌合抗体包括
Figure BDA0002921167240000251
抗体，其中所述抗体的抗原结合区源自通过例如用目标抗原免疫猕猴产生的抗体。如本文所用，“人源化抗体”用于“嵌合抗体”的子集。
“人源化”形式的非人(例如鼠类)抗体(如本公开的抗Siglec-7抗体)是含有源自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体是人免疫球蛋白(接受者抗体)，其中来自接受者的HVR的残基被来自诸如小鼠、大鼠、兔或非人类灵长类动物的非人物种(供体抗体)的HVR的具有所需特异性、亲和力和能力的残基置换。在一些情况下，人免疫球蛋白的FR残基被相应的非人残基置换。另外，人源化抗体可包含在接受者抗体中或在供体抗体中没有见到的残基。可产生这些修饰来进一步细化抗体性能，如结合亲和力。通常，人源化抗体将包含至少一个且通常两个可变结构域的基本全部，其中全部或基本全部的高变环对应于非人免疫球蛋白序列的那些高变环且全部或基本全部的FR区为人免疫球蛋白序列的那些FR区，但是FR区可包含一个或多个单独的FR残基取代，所述取代提高抗体性能，如结合亲和力、异构化、免疫原性等。FR中这些氨基酸取代的数目在H链中通常不超过6个，并且在L链中不超过3个。所述人源化抗体可任选地还应当至少包括免疫球蛋白恒定区(Fc)的一部分，典型地人免疫球蛋白的一部分。关于进一步细节，参见例如，Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)；和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。还参见例如，Vaswani和Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995)；Hurle和Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)；以及美国专利号6,982,321和7,087,409。
“人抗体”是具有对应于由人产生的抗体(如本公开的抗Siglec-7抗体)的氨基酸序列的氨基酸序列和/或已使用如本文公开的用于制备人抗体的任一种技术制造的抗体。人抗体的定义特异性地排除了包括非人抗原结合残基的人源化抗体。可使用本领域中已知的各种技术(包括噬菌体展示文库)产生人抗体。Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581(1991)。也可用于制备人单克隆抗体的方法是描述于Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,第77页(1985)；Boerner等人,J.Immunol.,147(1):86-95(1991)中的方法。还参见van Dijk和vande Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)。人抗体可通过将抗原施用于转基因动物来制备，所述转基因动物已经被修饰以响应于抗原激发而产生此类抗体，但其内源基因座已经失效，例如免疫的异种小鼠(关于XENOMOUSETM技术，参见例如，美国专利号6,075,181和6,150,584)。关于经由人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体，还参见例如，Li等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。
当在本文中使用时，术语“高变区”、“HVR”或“HV”是指抗体可变结构域的区域，如本公开的抗Siglec-7抗体的区域，所述区域在序列中是高变的和/或形成结构限定的环。一般来说，抗体包含六个HVR；三个在VH中(H1、H2、H3)，且三个在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3展示6种HVR的最多样化，并且特别是认为H3在赋予针对抗体的良好特异性方面发挥独特作用。参见例如，Xu等人,Immunity 13:37-45(2000)；Johnson和Wu in Methodsin Molecular Biology 248:1-25(Lo,编,Human Press,Totowa,NJ,2003))。实际上，由重链组成的天然存在的骆驼科抗体仅在没有轻链的情况下是功能性且稳定的。参见例如，Hamers-Casterman等人,Nature 363:446-448(1993)和Sheriff等人,NatureStruct.Biol.3:733-736(1996)。
许多HVR描述正在使用中，并包含在本文中。在一些实施方案中，所述HVR可以是基于序列可变性的Kabat互补决定区(CDR)并且是最常使用的(Kabat等人，同上)。在一些实施方案中，所述HVR可以是Clothia CDR。而Chothia是指结构环的位置(Chothia和LeskJ.Mol.Biol.196:901-917(1987))。在一些实施方案中，所述HVR可以是AbM CDR。AbM HVR表示Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷，并且是通过Oxford Molecular的AbM抗体建模软件来使用。在一些实施方案中，所述HVR可以是“接触”CDR。“接触”HVR是基于分析可用复合物晶体结构的。来自这些HVR中的每一个的残基如下所述。
Figure BDA0002921167240000271
HVR可包含如下的“延伸的HVR”：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)，以及VH中的26-35(H1)、50-65或49-65(优选的实施方案)(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些延伸的HVR定义中的每一个，可变结构域残基是根据EU或Kabat等人，同上进行编号。
“框架”或“FR”残基是除如本文所定义的HVR残基以外的那些可变结构域残基。
短语“如Kabat中的可变结构域残基编号”或“如Kabat中的氨基酸位置编号”及其变化形式是指用于Kabat等人，上文中的抗体编译的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号***。使用此编号***，实际线性氨基酸序列可含有较少或另外的氨基酸，其对应于可变结构域的FR或HVR的缩短或对其进行的***。例如，重链可变结构域可包括H2的残基52之后的单个氨基酸***(根据Kabat的残基52a)和重链FR残基82之后的***残基(例如根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。可通过在抗体序列的同源区处与“标准”Kabat编号序列比对来确定给定抗体的残基的Kabat编号。
当提及可变结构域中的残基时，通常使用Kabat编号***(大约轻链的残基1-107和重链的残基1-113)(例如，Kabat等人,Sequences of Immunological Interest.第5版.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。“EU编号***”或“EU索引”通常在提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时使用(例如，Kabat等人，上文中报告的EU索引)。“如Kabat中的EU索引”是指人IgG1 EU抗体的残基编号。除非本文另有说明，否则对抗体的可变结构域中的残基编号的提及是指由Kabat编号***编号的残基。除非本文另有说明，否则对抗体的恒定结构域中的残基编号的提及是指由EU编号***编号的残基(例如，参见美国专利公布号2010-280227)。
如本文所用的“受体人框架”是包含源自人免疫球蛋白框架或人共有框架的VL或VH框架的氨基酸序列的框架。“源自”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含其相同的氨基酸序列，或者其可含有预先存在的氨基酸序列变化。在一些实施方案中，预先存在的氨基酸变化的数目是10或更小，9或更小，8或更小，7或更小，6或更小，5或更小，4或更小，3或更小，或2或更小。当在VH中存在预先存在的氨基酸变化时，优选那些变化仅在位置71H、73H和78H中的三个、两个或一个处发生；例如，那些位置处的氨基酸残基可以是71A、73T和/或78A。在一个实施方案中，VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
“人共有框架”是代表在人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常存在的氨基酸残基的框架。一般来说，人免疫球蛋白VL或VH序列选自可变结构域序列的亚组。一般来说，所述序列亚组是如在Kabat等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中的亚组。实例包括对于VL，所述亚组可以是如Kabat等人，同上中的亚组κI、κII、κIII或κIV。此外，对于VH，所述亚组可以是如Kabat等人，同上的亚组I、亚组II或亚组III。
例如本公开的抗Siglec-7抗体的指定位置处的“氨基酸修饰”是指指定残基的取代或缺失，或邻近指定残基***至少一个氨基酸残基。“邻近”指定残基的***是指在其一个至两个残基内***。***可为指定残基的N末端或C末端。本文优选的氨基酸修饰是取代。
“亲和力成熟”抗体(如本公开的抗Siglec-7抗体)是一个或多个HVR中具有一个或多个改变的抗体，所述变化导致与不具有那些改变的亲本抗体相比，抗体对于抗原的亲和力提高。在一个实施方案中，亲和力成熟抗体对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔亲和力。亲和力成熟抗体是通过本领域中已知的程序产生。例如，Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992)描述了通过VH-和VL-结构域改组的亲和力成熟。对HVR和/或框架残基的随机诱变由例如以下文献描述：Barbas等人Proc Nat.Acad.Sci.USA 91:3809-3813(1994)；Schier等人Gene 169:147-155(1995)；Yelton等人J.Immunol.155:1994-2004(1995)；Jackson等人,J.Immunol.154(7):3310-9(1995)；以及Hawkins等人,J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。
如本文所用，术语“特异性地识别”或“特异性地结合”是指可测量的和可再现的相互作用，诸如靶标与抗体(如本公开的抗Siglec-7抗体)之间的吸引或结合，所述吸引或结合在存在包括生物分子的分子的异源群体的情况下确定靶标的存在。例如，特异性或优先结合靶标或表位的抗体(如本公开的抗Siglec-7抗体)是以比它结合至其它靶标或靶标的其它表位更大的亲和力、亲合力、更容易和/或更大的持续时间结合至靶标或表位。通过阅读这个定义还应理解，例如，特异性或优先结合至第一靶标的抗体(或部分)可以或可以不特异性或优先结合至第二靶标。因此，“特异性结合”或“优先结合”并不一定需要(尽管其可包括)排外的结合。特异性地结合至靶标的抗体可具有至少约10 3M-1或10 4M-1，有时约105M-1或10 6M-1，在其它情况下约10 6M-1或10 7M-1、约10 8M-1至10 9M-1或约10 10M-1至10 11M-1或更高的缔合常数。多种免疫测定形式可用于选择与特定蛋白质特异性免疫反应的抗体。例如，固相ELISA免疫测定常规地用于选择与蛋白质特异性免疫反应的单克隆抗体。关于可用来确定特异性免疫反应的免疫测定形式和条件的描述，参见例如Harlow和Lane(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Publications,New York。
如本文所用，Siglec-7蛋白与第二种蛋白质之间的“相互作用”包括但不限于蛋白质-蛋白质相互作用、物理相互作用、化学相互作用、结合、共价结合和离子结合。如本文所用，当抗体破坏、减少或完全消除两种蛋白质之间的相互作用时，抗体“抑制两种蛋白质之间的相互作用”。当本公开的抗体或其片段结合至两种蛋白质中的一种时，所述抗体或其片段“抑制两种蛋白质之间的相互作用”。
“激动剂”抗体或“活化”抗体是在抗体结合抗原后诱导(例如增加)所述抗原的一种或多种活性或功能的抗体，如本公开的激动剂抗Siglec-7抗体。
“阻断”抗体、“拮抗剂”抗体或“抑制性”抗体是在抗体结合抗原后抑制或减少(例如降低)抗体与一种或多种配体的结合和/或在抗体结合抗原后抑制或减少(例如降低)所述抗原的一种或多种活性或功能的抗体，如本公开的抗Siglec-7抗体。在一些实施方案中，阻断抗体、拮抗剂抗体或抑制性抗体基本上或完全抑制抗原与所述抗原的一种或多种配体的结合和/或所述抗原的一种或多种活性或功能。
抗体“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物活性，并且随抗体同种型变化。
本文的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C末端区，其包括天然序列Fc区和变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可能变化，但是人IgG重链Fc区通常被定义为从位置Cys226或Pro230处的氨基酸残基延伸至其羧基末端。例如，Fc区的C-末端赖氨酸(根据EU或Kabat编号***的残基447)可例如在抗体的生产或纯化期间或通过重组改造编码抗体重链的核酸。因此，完整抗体的组合物可包含除去所有K447残基的抗体群体，不除去K447残基的抗体群体和具有有或无K447残基的抗体混合物的抗体群体。用于本公开的抗体的合适的天然序列Fc区包括人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
“天然序列Fc区”包含的氨基酸序列与自然界中所存在的Fc区的氨基酸序列相同。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1 Fc区(非A和A同种异型)；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；以及天然序列人IgG4 Fc区以及其天然存在的变体。
“变体Fc区”所包含的氨基酸序列与天然序列Fc区的氨基酸序列的不同之处在于至少一个氨基酸修饰，优选一个或多个氨基酸序列。优选地，与天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区相比，变体Fc区具有至少一个氨基酸取代，例如，在天然序列Fc区中或在亲本多肽的Fc区中约1至约10个氨基酸取代，并且优选约1至约5个氨基酸取代。本文中的变体Fc区将优选与天然序列Fc区和/或与亲本多肽的Fc区具有至少约80％同源性，并且最优选与其具有至少约90％同源性，更优选与其具有至少约95％同源性。
“Fc受体”或“FcR”描述结合至抗体Fc区的受体。优选的FcR是天然序列人FcR。此外，优选的FcR是结合IgG抗体(γ受体)并且包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体的FcR，包括这些受体的等位基因变体和可变剪接形式，FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，它们具有主要在其细胞质结构域中不同的相似氨基酸序列。活化受体FcγRIIA在其细胞质域中含有免疫受体酪氨酸基活化基序(“ITAM”)。抑制受体FcγRIIB在其细胞质域中含有免疫受体酪氨酸基抑制基序(“ITIM”)。(参见例如，M.
Figure BDA0002921167240000321
Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcR综述于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)；Capel等人,Immunomethods 4:25-34(1994)；以及deHaas等人,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中。本文中的术语“FcR”涵盖其它FcR，包括将来待鉴定的那些FcR。FcR也可增加抗体的血清半衰期。
可例如在转基因小鼠或表达人FcRn的转染的人细胞系中或者在施用了具有变体Fc区的多肽的灵长类动物中测定与体内FcRn的结合以及人FcRn高亲和力结合多肽的血清半衰期。WO 2004/42072(Presta)描述了具有提高的或减弱的与FcR的结合的抗体变体。还参见例如Shields等人,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。
如本文所用，就肽、多肽或抗体序列而言的“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同源性”是指，在比对序列并且引入缺口(如果需要的话)以获得最大序列同一性百分比之后，候选序列中与特定肽或多肽序列中氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比，而不考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分。用于测定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以属于本领域中的技能的多种方式实现，所述方式例如使用可公开获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGNTM(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定用于测量比对的适当参数，包括对所比较的序列的全长获得最大比对所需的本领域中已知的任何算法。
“分离的”细胞是从在产生其的环境中通常与其缔合的至少一种污染细胞鉴定并且分离的分子或细胞。在一些实施方案中，分离的细胞不与同生产环境相关的所有组分缔合。分离的细胞呈不同于它在自然界中所存在的形式或配置的形式。分离的细胞与组织、器官或个体中天然存在的细胞不同。在一些实施方案中，分离的细胞是本公开的宿主细胞。
编码抗体(如本公开的抗Siglec-7抗体)的“分离的”核酸分子是从在产生其的环境中通常与其缔合的至少一种污染核酸分子鉴定并且分离的核酸分子。优选地，分离的核酸不与同生产环境相关的所有组分缔合。编码本文的多肽和抗体的分离的核酸分子呈不同于它在自然界中所存在的形式或配置的形式。分离的核酸分子因此不同于在细胞中天然存在的编码本文的多肽和抗体的核酸。
如本文所用的术语“载体”意指能够转运其已连接的另一核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，所述质粒是指可将额外的DNA区段连接到其中的环状双链DNA。另一种类型的载体是噬菌体载体。另一种类型的载体是病毒载体，其中额外的DNA区段可被连接到病毒基因组中。某些载体能够在它们被引入至其中的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体以及附加型哺乳动物载体)。其它载体(例如，非附加型哺乳动物载体)可以在引入到宿主细胞中后整合到宿主细胞的基因组中，并且由此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导它们所可操作地连接的基因的表达。所述载体在本文中称为“重组表达载体”或简称为“表达载体”。一般而言，可用于重组DNA技术中的表达载体经常呈质粒形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可互换地使用，因为质粒是载体的最通常使用形式。
如本文可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指具有任何长度的核苷酸的聚合物，并且包括DNA和RNA。所述核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基和/或它们的类似物、或可通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应并入聚合物中的任何底物。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，如甲基化核苷酸及其类似物。如果存在，那么可在聚合物组装之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰。核苷酸的序列可由非核苷酸组分间断。多核苷酸可包含在合成后进行的修饰，如缀合至标记。其它类型的修饰包括，例如，“加帽(cap)”、用类似物取代一种或多种天然存在的核苷酸、核苷酸间修饰，例如像，具有不带电荷的键联(例如，膦酸甲酯、磷酸三酯、磷酰胺酸酯(phosphoamidate)、氨基甲酸酯(carbamate)，等等)和具有带电荷的键联(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯，等等)的那些、含有侧悬部分(例如像，蛋白质(例如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸，等等))的那些、具有嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素)的那些、含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属，等等)的那些、含有烷化剂(alkylator)的那些、具有修饰的键联(例如，α端基异构核酸，等等)的那些、以及一种或多种多核苷酸未修饰形式。此外，通常存在于糖类中的任何羟基可被(例如)膦酸酯基、磷酸酯基置换、被标准保护基保护或被活化以提供与另外核苷酸的另外键联，或可与固体或半固体载体缀合。5'和3'末端OH可以被磷酸化或被胺或具有1至20个碳原子的有机加帽基团部分而取代。其它羟基也可衍生成标准保护基。多核苷酸还可以包含本领域众所周知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括，例如，2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基、2'-氟-或2'-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-端基异构糖、差向异构糖(如***糖、木糖或来苏糖)、吡喃糖糖、呋喃糖糖、景天庚酮糖、无环类似物以及碱性核苷类似物(如甲基核苷)。一个或多个磷酸二酯键联可由替代连接基团来置换。这些替代连接基团包括，但不限于，其中磷酸酯被P(O)S(“硫代酸酯(thioate)”)、P(S)S(“二硫代酸酯(dithioate)”)、(O)NR2(“酰胺化物(amidate)”)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2(“甲缩醛(formacetal)”)置换的实施方案，其中每个R或R'独立地是H或任选含有醚(-O-)键联的取代的或未取代的烷基(1-20个C)、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基(araldyl)。多核苷酸中并非所有键联都需要相同。前文描述适用于本文所提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
“宿主细胞”包括可以是或已成为用于并入多核苷酸***物的载体的接受者的个别细胞或细胞培养物。宿主细胞包括单一宿主细胞的子代，并且子代可由于天然、偶然或故意突变而不一定与初始亲本细胞完全相同(在形态方面或在基因组DNA互补体方面)。宿主细胞包括用本公开的多核苷酸体内转染的细胞。
如本文所用的“载体”包括在所采用的剂量和浓度下对暴露于其的细胞或哺乳动物无毒的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。通常生理学上可接受的载体是pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载体的实例包括缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐以及其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖以及其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖醇，如甘露糖醇或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；和/或非离子型表面活性剂类，如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)以及PLURONICSTM。
如本文所用的术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的通常误差范围。本文中对“约”某一个值或参数的提及包括(以及描述)针对所述值或参数本身的实施方案。
如本文中和所附权利要求中所使用，单数形式“一个/种(a/an)”和“所述”包括复数提及物，除非上下文另外清楚地指示。例如，对一种“抗体”的引用是对一种至许多抗体(如摩尔量)的引用，并且包括本领域技术人员已知的其等效物等。
应理解，本文中描述的本公开的方面和实施方案包括“包含”方面和实施方案、“由方面和实施方案组成”和/或“主要由方面和实施方案组成”。
综述
本公开部分涉及抗Siglec-7抗体，所述抗Siglec-7抗体相对于具有包含SEQ IDNO:61的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体或相对于具有包含SEQ ID NO:38的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体表现出一种或多种改进的和/或增强的功能特征。非限制性的改进的和/或增强的功能特性包括，例如，抗体能够以更高的亲和力结合Siglec-7、降低Siglec-7的细胞表面水平、降低用于下调Siglec-7的细胞表面水平的半最大有效浓度(EC50)、改进Siglec-7的细胞表面水平的最大降低或它们的任何组合。本文还考虑了具有不同Fc变体的抗Siglec-7抗体，所述抗Siglec-7抗体表现出一种或多种改进的和/或增强的功能特征，包括降低用于下调Siglec-7的细胞表面水平的半最大有效浓度(EC50)以及改进Siglec-7细胞表面水平的最大降低。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体相对于具有包含SEQ ID NO:61的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体或相对于具有包含SEQ ID NO:38的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体在降低Siglec-7的细胞表面水平方面具有更高的效力。
本公开进一步涉及制备和使用如本文所述的抗Siglec-7抗体的方法；含有此类抗体的药物组合物；编码此类抗体的核酸；以及含有编码此类抗体的核酸的宿主细胞。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体可具有一种或多种活性，所述活性至少部分是由于抗体通过诱导Siglec-7的降解、下调、裂解、受体脱敏和/或溶酶体靶向而降低Siglec-7的细胞表达(例如细胞表面表达)的能力。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体表现出一种或多种以下特性：a.对于人Siglec-7具有低于具有包含SEQ ID NO:61的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体的解离常数(KD)；b.结合至人细胞，如原代人树突细胞；c.以低于具有包含SEQ ID NO:61的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体的半最大有效浓度(EC50)降低Siglec-7的细胞表面水平(例如，在体外降低原代人树突细胞上的Siglec-7的细胞表面水平)；d.例如当通过表面等离子体共振或生物层干涉测量法测定KD时，对于人Siglec-7具有可在约0.001nM至约124nM范围内的解离常数(KD)；和/或e.例如当在体外通过流式细胞术测定EC50时，以可在约33.2pM至约25.4nM范围内的半最大有效浓度(EC50)降低Siglec-7的细胞表面水平(例如，在体外降低原代人树突细胞上的Siglec-7的细胞表面水平)。如本文所公开，半最大有效浓度(EC50)是指本公开的抗Siglec-7抗体使细胞上或细胞中的Siglec-7的细胞水平降低至未处理的细胞的Siglec-7的细胞水平一半的浓度，或者抗体达到与细胞上的Siglec-7的半最大结合的浓度。
有利地，与对照抗Siglec-7抗体(例如，具有包含SEQ ID NO:61的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)相比，本公开的抗Siglec-7抗体更有效地(例如，以更低的EC50)降低Siglec-7的细胞表面表达(例如，达大约30.8倍)(参见例如实施例3)。在一些实施方案中，与对照抗Siglec-7抗体(例如，具有包含SEQ ID NO:38的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)相比，本公开的抗Siglec-7抗体更有效地(例如，以更低的EC50)降低Siglec-7的细胞表面表达(例如，达大约10.2倍)(参见例如实施例3)。此外，有利地，与对照抗Siglec-7抗体(例如，具有包含SEQ ID NO:61的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)相比，本公开的抗Siglec-7抗体对Siglec-7具有更高的亲和力(例如，达到高大约1,240倍的亲和力)(例如，如通过生物层干涉测量法所测量的更低KD值)(参见例如，实施例1和3)。出人意料地，对Siglec-7的更高亲和力并不一定与Siglec-7的细胞表面表达降低的能力或效力的增加相关(参见例如，实施例2和5)。
Siglec-7蛋白
在一个方面，本公开提供与本公开的Siglec-7蛋白内的区域(如表位)相互作用或以其它方式结合至所述区域的抗体，如分离的(例如单克隆)抗体。在一些实施方案中，所述抗体以改进的/增强的动力学(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:61的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体)与本公开的Siglec-7蛋白内的区域(如表位)相互作用或以其它方式结合至所述区域。在一些实施方案中，所述抗体以低于对照抗体(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:61的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体)的半最大有效浓度(EC50)与人细胞(如树突细胞)上的Siglec-7蛋白内的区域(如表位)相互作用或以其它方式结合至所述区域。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体结合至Siglec-7蛋白并在与Siglec-7蛋白结合后调节一种或多种Siglec-7活性，例如，与细胞上的Siglec-7表达相关的活性。本公开的Siglec-7蛋白包括但不限于哺乳动物Siglec-7蛋白、非人灵长类动物Siglec-7蛋白和人Siglec-7蛋白。
Siglec-7被不同地称为Siglec-7分子、结合唾液酸的Ig样凝集素7、AIRM1、CD328、CDw328、D-Siglec、QA79、SIGLEC19P、SIGLECP2、p75以及p75/AIRM1。
Siglec-7是主要在免疫细胞和造血细胞上表达的免疫球蛋白样受体，所述细胞包括但不限于单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞、肥大细胞、小神经胶质细胞、淋巴细胞、天然杀伤细胞以及T细胞亚群。
人Siglec-7的氨基酸序列在下文中列出为SEQ ID NO:63：
Figure BDA0002921167240000391
在一些实施方案中，所述Siglec-7是包含信号序列的前蛋白。在一些实施方案中，所述Siglec-7是成熟蛋白质。在一些实施方案中，所述成熟Siglec-7蛋白不包含信号序列。在一些实施方案中，所述成熟Siglec-7蛋白在细胞上表达。在一些实施方案中，所述成熟Siglec-7蛋白在细胞，如细胞表面上表达，所述细胞包括但不限于人树突细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人嗜中性粒细胞、人NK细胞、人T细胞、人辅助T细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞以及人小神经胶质细胞。本公开的抗Siglec-7抗体可结合在本文公开的任何细胞上表达的本公开的任何Siglec-7蛋白。
本公开的Siglec-7蛋白(如人Siglec-7)含有若干结构域，包括但不限于位于SEQID NO:63的氨基酸残基1-18处的信号序列，位于SEQ ID NO:63的氨基酸残基39-122处的细胞外免疫球蛋白样可变型(IgV)结构域，位于SEQ ID NO:63的氨基酸残基150-233和240-336的两个Ig-样C2-型结构域，位于SEQ ID NO:63的氨基酸残基354-376处的跨膜结构域，位于SEQ ID NO:63的氨基酸残基435-440处的ITIM基序1以及位于SEQ ID NO:63的氨基酸残基459-463处的ITIM基序2。如本领域技术人员将理解，本公开的结构域的起始和结束残基可根据所使用的计算机建模程序或用于确定结构域的方法而变化。
本公开的某些方面提供与人Siglec-7或其同系物(包括但不限于来自其它非人灵长类动物物种的非人灵长类动物Siglec-7蛋白和Siglec-7直向同源物)结合的抗Siglec-7抗体。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:61的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体)以改进的/增强的结合动力学结合至人Siglec-7或其同系物。
因此，如本文所用，本公开的“Siglec-7”蛋白包括但不限于哺乳动物Siglec-7蛋白、非人灵长类动物Siglec-7蛋白、人Siglec-7蛋白和灵长类动物Siglec-7蛋白。另外，本公开的抗Siglec-7抗体可结合人Siglec-7蛋白或灵长类动物Siglec-7蛋白内的表位。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体可特异性地结合至人Siglec-7。
在一些实施方案中，本公开的抗体可以pH依赖性方式结合Siglec-7。在一些实施方案中，本公开的抗体可在中性pH下结合至Siglec-7并被内化而不与Siglec-7蛋白解离。或者，在酸性pH下，本公开的抗体一旦被内化并随后通过内体/溶酶体途径降解就可从Siglec-7解离。在某些实施方案中，抗Siglec-7抗体在5.5至8.0、5.5至7.5、5.5至7.0、5.5至6.5、5.5至6.0、6.0至8.0、6.5至8.0、7.0至8.0、7.5至8.0、6.0至7.5、6.0至7.0、6.5至7.5范围内的pH下结合Siglec-7。在某些实施方案中，抗Siglec-7抗体在小于6.0、小于5.5、小于5.0、小于4.5、小于4.0、小于3.5、小于3.0、小于2.5或小于2.0的pH下从Siglec-7解离。
在一些实施方案中，本公开的抗体结合至本公开的野生型Siglec-7蛋白、其天然存在的变体和/或其疾病变体。
在一些实施方案中，降低Siglec-7的细胞水平的本公开的抗体结合至在细胞表面上表达的Siglec-7蛋白，所述细胞包括但不限于人树突细胞、人巨噬细胞、人NK细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人嗜中性粒细胞、人T细胞、人T辅助细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞、人骨髓来源的免疫抑制细胞和人小神经胶质细胞。在一些实施方案中，本公开的降低Siglec-7的细胞水平和/或抑制Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用或与Siglec-7结合或相互作用的抗体与细胞表面上表达的Siglec-7蛋白结合，并在与表面表达的Siglec-7蛋白结合后调节(例如诱导或抑制)本公开的至少一种Siglec-7活性。在本公开的一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体特异性地结合至Siglec-7蛋白。在本公开的一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体进一步结合至至少一种另外的Siglec蛋白。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体调节至少一种另外的Siglec蛋白或表达所述至少一种另外的Siglec蛋白的细胞的一种或多种活性。
Siglec-7配体
本公开的Siglec-7蛋白可与一种或多种Siglec-7配体相互作用(例如结合)。
示例性Siglec-7配体包括但不限于唾液酸、含唾液酸的糖脂、含唾液酸的糖蛋白、含α-2,8-二唾液酸的糖脂、含支链α-2,6-连接的唾液酸的糖蛋白、含末端α-2,6-连接的唾液酸的糖脂、含末端α-2,3-连接的唾液酸的糖蛋白、二唾液酸神经节苷脂(例如含有与唾液酸化聚糖连接的神经酰胺的神经节苷脂或糖脂)、分泌的粘蛋白、在红细胞上表达的Siglec-7配体、在细菌细胞上表达的Siglec-7配体、在凋亡细胞上表达的Siglec-7配体、在神经细胞上表达的Siglec-7配体、在神经胶质细胞上表达的Siglec-7配体、在小神经胶质细胞上表达的Siglec-7配体、在星形胶质细胞上表达的Siglec-7配体、在肿瘤细胞上表达的Siglec-7配体、在病毒上表达的Siglec-7配体、在树突细胞上表达的Siglec-7配体、与β淀粉样蛋白斑块结合的Siglec-7配体、与Tau缠结结合的Siglec-7配体、致病蛋白上的Siglec-7配体、致病肽上的Siglec-7配体、在巨噬细胞上表达的Siglec-7配体、在肿瘤相关巨噬细胞上表达的Siglec-7配体、在嗜中性粒细胞上表达的Siglec-7配体、在单核细胞上表达的Siglec-7配体、在天然杀伤细胞上表达的Siglec-7配体、在T细胞上表达的Siglec-7配体、在T辅助细胞上表达的Siglec-7配体、在细胞毒性T细胞上表达的Siglec-7配体、在B细胞上表达的Siglec-7配体、在肿瘤包埋的免疫抑制树突细胞上表达的Siglec-7配体、在肿瘤包埋的免疫抑制巨噬细胞上表达的Siglec-7配体、在肿瘤包埋的免疫抑制嗜中性粒细胞上表达的Siglec-7配体、在肿瘤包埋的免疫抑制NK细胞上表达的Siglec-7配体、在骨髓源性抑制细胞上表达的Siglec-7配体、在骨髓源性免疫抑制细胞上表达的Siglec-7配体以及在调控性T细胞上表达的Siglec-7配体。在一些实施方案中，本公开的Siglec-7配体是神经节苷脂(例如，二唾液酸神经节苷脂)。二唾液酸神经节苷脂通常共有乳-神经酰胺核心和一个或多个唾液酸残基。
合适的神经节苷脂(例如，二唾液酸神经节苷脂)配体的其他实例在表A中列出。通常，神经节苷脂(例如，二唾液酸神经节苷脂)是由糖链上连接有一种或多种唾液酸(例如，n-乙酰基-神经氨酸，NANA)的鞘糖脂构成的分子。
表A：示例性神经节苷脂Siglec-7配体的结构
Figure BDA0002921167240000421
Figure BDA0002921167240000431
Siglec-7抗体
本公开的某些方面涉及包含一种或多种改进的和/或增强的功能特征的抗Siglec-7抗体。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含相对于对照抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)的一种或多种改进的和/或增强的功能特征。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体对Siglec-7(例如，人Siglec-7)具有高于对照抗Siglec-7抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ IDNO:62的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)的亲和力。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体以低于对照抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)的半最大有效浓度(EC50)结合至人细胞，如树突细胞。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体以低于对照抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:61的序列的重链可变区和含有SEQ IDNO:62的序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)的半最大有效浓度(EC50)降低Siglec-7的细胞水平(例如，细胞表面水平)。
Siglec-7的细胞水平可指但不限于Siglec-7的细胞表面水平、Siglec-7的细胞内水平和Siglec-7的总水平。在一些实施方案中，Siglec-7的细胞水平的降低包括Siglec-7的细胞表面水平的降低。在一些实施方案中，降低Siglec-7的细胞水平(例如，Siglec-7的细胞表面水平)的本公开的抗Siglec-7抗体具有一种或多种以下特征：(1)抑制或降低一种或多种Siglec-7活性；(2)抑制或降低Siglec-7与一种或多种其配体结合的能力；(3)降低表达Siglec-7的细胞中的Siglec-7表达的能力；(4)与Siglec-7蛋白相互作用、结合或识别Siglec-7蛋白的能力；(5)与Siglec-7蛋白特异性地相互作用或结合的能力；以及(6)治疗、改善或预防本文描述或考虑的疾病或病症的任何方面的能力。
本公开的抗Siglec-7抗体可对靶抗原(例如，人Siglec-7)具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。在某些实施方案中，所述抗体的解离常数(KD)是约0.001nM至约124nM。在某些实施方案中，所述抗体的KD是约0.001nM至约54.1nM。在某些实施方案中，所述抗体的KD是约0.10nM至约2.2nM。在某些实施方案中，所述抗体的KD是约0.198nM至约0.740nM。在一些实施方案中，所述抗体的KD小于约或等于约130nM、120nM、110nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、9.5nM、9nM、8.5nM、8nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5.5nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、.05nM、.01nM、.005nM、.004nM、.003nM、.002nM或.001nM。在一些实施方案中，所述抗体的KD小于约46.3nM。在一些实施方案中，所述抗体的KD大于约或等于约.001nM、.005nM、.01nM、.05nM、0.1nM、0.2nM、0.3nM、0.4nM、0.5nM、0.6nM、0.7nM、0.8nM、0.9nM、1nM、1.5nM、2nM、2.5nM、3nM 3.5nM、4nM、4.5nM、5nM、5.5nM、6nM、6.5nM、7nM、7.5nM、8nM、8.5nM、9nM、9.5nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、110nM或120nM。即，所述抗体的KD可以是具有约130nM、120nM、110nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、9.5nM、9nM、8.5nM、8nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5.5nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、.05nM、.01nM、.005nM、.004nM、.003nM、.002nM或.001nM的上限和约.001nM、.005nM、.01nM、.05nM、0.1nM、0.2nM、0.3nM、0.4nM、0.5nM、0.6nM、0.7nM、0.8nM、0.9nM、1nM、1.5nM、2nM、2.5nM、3nM、3.5nM、4nM、4.5nM、5nM、5.5nM、6nM、6.5nM、7nM、7.5nM、8nM、8.5nM、9nM、9.5nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、110nM或120nM的独立选择的下限的亲和力范围中的任一个，其中所述下限低于所述上限。在一些实施方案中，所述抗体的KD是约10nM、约9nM、约8nM、约7nM、约6nM、约5nM、约4nM、约3nM、约2nM、约1nM、约900pM、约800pM、约700pM、约600pM、约500pM、约400pM、约300pM、约200pM、约100pM、约90pM、约80pM、约70pM、约60pM、约50pM、约40pM、约30pM、约20pM、约10pM、约9pM、约8pM、约7pM、约6pM、约5pM、约4pM、约3pM、约2pM或约1pM中的任一个。
在一些实施方案中，所述抗体的KD等于约0.198nM。
测量抗体亲和力的各种方法是本领域已知的，包括例如使用表面等离子体共振或生物层干涉测量法(参见例如，下文的实施例1)。在一些实施方案中，对Siglec-7的KD在大约25℃的温度下测定。在一些实施方案中，对Siglec-7的KD在大约4℃的温度下测定。在一些实施方案中，使用单价抗体(例如，Fab)或单价形式的全长抗体来测定KD。在一些实施方案中，使用二价抗体和单体重组Siglec-7蛋白来测定KD。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体对Siglec-7具有比对照抗Siglec-7抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)更低的解离常数(KD)。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体对靶标(例如，人Siglec-7)的KD比对照抗Siglec-7抗体对靶标的KD(例如，包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体对靶标(例如，人Siglec-7)的KD比对照抗Siglec-7抗体对靶标的KD(例如，包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ IDNO:50的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)低至少约1倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约12.5倍、至少约15倍、至少约17.5倍、至少约20倍、至少约22.5倍、至少约25倍、至少约27.5倍、至少约30倍、至少约50倍、至少约100倍、至少约200倍、至少约300倍、至少约400倍、至少约500倍、至少约600倍、至少约700倍、至少约800倍、至少约900倍或至少约1000倍。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体对于人Siglec-7具有比具有包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少100倍的KD。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体对于人Siglec-7具有比具有包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少50倍的KD。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体对于人Siglec-7具有比具有包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少10倍的KD。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体对于人Siglec-7具有比具有包含SEQID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少5倍的KD。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体对于人Siglec-7具有比具有包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少2倍的KD。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体对于人Siglec-7具有比具有包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少5.3倍的KD。
在一些实施方案中，通过表面等离子体共振来测量亲和力。在一些实施方案中，通过生物层干涉测量法来测量亲和力。在一些实施方案中，在大约25℃的温度下测量亲和力。在一些实施方案中，在大约4℃的温度下测量亲和力。在一些实施方案中，使用如下文实施例1中所述的实验方法来测量亲和力。
本公开的抗Siglec-7抗体可以皮摩尔范围内的半最大有效浓度(EC50)(例如，当在体外使用原代人树突细胞测量时)降低Siglec-7的细胞水平(例如，细胞表面水平)。在某些实施方案中，所述抗体的EC50是约0.1pM至约25.4nM。在某些实施方案中，所述抗体的EC50是约30pM至约25.4nM。在某些实施方案中，所述抗体的EC50是约33.2pM至约25.4nM。在某些实施方案中，所述抗体的EC50是约33.2pM至约3.0nM。在某些实施方案中，所述抗体的EC50是约33.2pM至约1.0nM。在某些实施方案中，所述抗体的EC50是约33.2pM至约500pM。在某些实施方案中，所述抗体的EC50是约33.2pM至约400pM。在某些实施方案中，所述抗体的EC50是约33.2pM至约300pM。在某些实施方案中，所述抗体的EC50是约33.2pM至约200pM。在某些实施方案中，所述抗体的EC50是约33.2pM至约100pM。
在一些实施方案中，所述抗体的EC50小于约或等于约500pM、475pM、450pM、425pM、400pM、375pM、350pM、325pM、300pM、275pM、250pM、225pM、200pM、175pM、150pM、125pM、100pM、90pM、80pM、70pM、60pM、50pM、40pM、30pM、20pM、10pM、1pM或0.5pM。
在一些实施方案中，所述抗体的EC50小于约447.0pM。在一些实施方案中，所述抗体的EC50大于约或等于约0.1pM、0.5pM、1pM、10pM、20pM、30pM、40pM、50pM、60pM、70pM、80pM、90pM、100pM、125pM、150pM、175pM、200pM、225pM、250pM、275pM、300pM、325pM、350pM、375pM、400pM或425pM。即，所述抗体的EC50可以是具有约425pM、400pM、375pM、350pM、325pM、300pM、275pM、250pM、225pM、200pM、175pM、150pM、125pM、100pM、90pM、80pM、70pM、60pM、50pM、40pM、30pM、20pM、10pM、1pM或0.5pM的上限和约0.1pM、0.5pM、1pM、10pM、20pM、30pM、40pM、50pM、60pM、70pM、80pM、90pM、100pM、125pM、150pM、175pM、200pM、225pM、250pM、275pM、300pM、325pM、350pM、375pM或400pM的独立选择的下限的范围中的任一个，其中所述下限小于上限。在一些实施方案中，所述抗体的EC50是约1pM、2pM、3pM、4pM、5pM、6pM、7pM、8pM、9pM、10pM、15pM、20pM、25pM、30pM、35pM、40pM、45pM、50pM、55pM、60pM、65pM、70pM、75pM、80pM、85pM、90pM、95pM、100pM、105pM、110pM、115pM、120pM、125pM、130pM、135pM、140pM、145pM、150pM、155pM、160pM、165pM、170pM、175pM、180pM、185pM、190pM、195pM或200pM中的任一个。
在一些实施方案中，所述抗体的EC50是约61.2pM。
测量抗体EC50值的各种方法是本领域已知的，包括例如通过流式细胞术进行测量(参见例如，下文的实施例2)。在一些实施方案中，使用原代人树突细胞在体外测量EC50。在一些实施方案中，使用原代人单核细胞在体外测量EC50。在一些实施方案中，使用原代人巨噬细胞在体外测量EC50。在一些实施方案中，使用经人Siglec-7转染的培养细胞在体外测量EC50。在一些实施方案中，在大约4℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，在大约25℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，在大约35℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，在大约37℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，使用单价抗体(例如，Fab)或单价形式的全长抗体来测定EC50。在一些实施方案中，使用含有展示增强的Fc受体结合的恒定区的抗体测定EC50。在一些实施方案中，使用含有展示降低的Fc受体结合的恒定区的抗体测定EC50。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体相对于具有包含SEQ ID NO:61的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体或相对于具有包含SEQ ID NO:38的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体在降低Siglec-7的细胞表面水平方面具有更高的效力。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体以比对照抗Siglec-7抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)更低的EC50降低Siglec-7的细胞水平(例如，细胞表面水平)(例如，如使用原代人树突细胞在体外所测量)。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体以比对照抗Siglec-7抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)的EC50低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的EC50降低Siglec-7的细胞水平(例如，细胞表面水平)。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体以比对照抗Siglec-7抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗Siglec-7抗体)的EC50低至少约1倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约12.5倍、至少约15倍、至少约17.5倍、至少约20倍、至少约22.5倍、至少约25倍、至少约27.5倍、至少约30倍、至少约50倍或至少约100倍的EC50降低Siglec-7的细胞水平(例如，细胞表面水平)。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体具有比具有包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少30.8倍的EC50。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体具有比具有包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少10.2倍的EC50。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体具有比具有包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少16.7倍的EC50。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体具有比具有包含SEQ IDNO:38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少5.6倍的EC50。在一些实施方案中，使用原代人树突细胞在体外测量EC50。在一些实施方案中，使用原代人单核细胞在体外测量EC50。在一些实施方案中，使用原代人巨噬细胞在体外测量EC50。在一些实施方案中，使用经人Siglec-7转染的培养细胞在体外测量EC50。在一些实施方案中，通过流式细胞术测量EC50。在一些实施方案中，在大约25℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，在大约35℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，在大约37℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，使用含有展示增强的Fc受体结合的恒定区的抗体测定EC50。在一些实施方案中，使用含有展示降低的Fc受体结合的恒定区的抗体测定EC50。在一些实施方案中，使用如下文实施例2中所述的实验方法来测量EC50。
本文描述的或本领域中已知的任何体外基于细胞的测定或合适的体内模型可用于测量Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如结合)的抑制或降低。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体通过降低Siglec-7表达(例如，通过降低Siglec-7的细胞表面表达)来抑制或降低Siglec-7与一种或多种Silgel-7配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，利用本文所述的或本领域中已知的任何体外测定或基于细胞的培养测定，在饱和抗体浓度下，本公开的抗Siglec-7抗体使Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如，结合)抑制或降低至少21％、至少22％、至少23％、至少24％、至少25％、至少26％、至少27％、至少28％、至少29％、至少30％、至少31％、至少32％、至少33％、至少34％、至少35％、至少36％、至少37％、至少38％、至少39％、至少40％、至少41％、至少42％、至少43％、至少44％、至少45％、至少46％、至少47％、至少48％、至少49％、至少50％、至少51％、至少52％、至少53％、至少54％、至少55％、至少56％、至少57％、至少58％、至少59％、至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更多。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体抑制Siglec-7的细胞表面簇集。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体抑制Siglec-7蛋白的一种或多种活性，包括但不限于，抵消Src家族酪氨酸激酶如Syk、LCK、FYM和/或ZAP70对Tyr-437和Tyr-460的一种或多种磷酸化；募集并结合至酪氨酸特异性蛋白磷酸酶SHP1和SHP2；募集并结合至PLC-γ1，其充当发动蛋白-1的鸟嘌呤核苷酸交换因子；募集并结合至含SH2结构域的蛋白质(例如Crk1)；募集并结合至脾酪氨酸激酶Syk；募集并结合至SH3-SH2-SH3生长因子受体结合蛋白2(Grb2)；募集并结合至多种含SH2的蛋白质；通过蛋白激酶C磷酸化Ser-307和Ser-342；调节单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞中的一种或多种抗炎细胞因子IL-4、IL-10、IL-13、IL-35、IL-16、TGF-β、IL-1Ra、G-CSF以及TNF、IFN-β1a、IFN-β1b或IL-6的可溶性受体的表达；减少细胞内钙动员；调节单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞中的一种或多种促炎性细胞因子IFN-a4、IFN-b、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、CRP、IL-33、MCP-1和MIP-1-β的表达；调节一种或多种选自以下的蛋白质的表达：C1qa、C1qB、C1qC、C1s、C1R、C4、C2、C3、ITGB2、HMOX1、LAT2、CASP1、CSTA、VSIG4、MS4A4A、C3AR1、GPX1、TyroBP、ALOX5AP、ITGAM、SLC7A7、CD4、ITGAX、PYCARD、CD14、CD16、HLA-DR和CCR2；抑制细胞外信号调控激酶(ERK)磷酸化；减少多种细胞蛋白上的酪氨酸磷酸化；调节C-C趋化因子受体7(CCR7)的表达；抑制针对表达CCL19的细胞和表达CCL21的细胞的小神经胶质细胞趋化性；活化磷酸肌醇3-激酶；减少单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞和/或小神经胶质细胞的细胞生长；减少由树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞、M2小神经胶质细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和/或M2巨噬细胞诱导的T细胞增殖；抑制破骨细胞产生，降低破骨细胞生成速率或两者；减少嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的存活；减少嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的增殖；抑制嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的迁移；降低嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的一种或多种功能；抑制嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的成熟；增加单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的细胞死亡和凋亡；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的吞噬活性；减少单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的整体功能；含ITAM受体的磷酸化；介导ITAM信号传导的信号传导分子的磷酸化；减少模式识别受体的活化；减少Toll样受体的活化；减少细胞碎片和蛋白质碎片的损伤相关清除的活化；Siglec-7与一种或多种其配体之间的相互作用；Siglec-7与共受体之间的相互作用；减少选自凋亡神经元清除、神经组织碎片清除、功能障碍性突触清除、非神经组织碎片清除、细菌或其它异物清除、致病蛋白清除和肿瘤细胞清除的一种或多种类型的清除；抑制凋亡神经元、神经组织碎片、非神经组织碎片、细菌、其它异物、致病蛋白、致病肽、致病核酸、致病脂质或肿瘤细胞中的一者或多者的吞噬作用；抑制致病核酸的清除，如致病核酸是反义GGCCCC(G2C4)重复序列扩增RNA；活化致病蛋白的清除，所述致病蛋白选自淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、中介素、催乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽；抑制对选自以下的不同类型的癌症的有益免疫应答：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、急性骨髓性白血病、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤和甲状腺癌；抑制对选自以下的不同类型的神经病症的有益免疫应答：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease)、血管性痴呆、混合性痴呆、克罗伊茨费尔特-雅格布病(Creutzfeldt-Jakob disease)、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病(Huntington’s disease)、Tau蛋白病(taupathy disease)、那须哈科拉病(Nasu-Hakoladisease)、中风、急性创伤、慢性创伤、特发性震颤、***(Behcet's disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、路易体痴呆(dementia with Lewy bodies)、多***萎缩症、夏伊-德拉戈综合征(Shy-Drager syndrome)、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿性病症、类肉瘤病、老化疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性和多发性硬化症；抑制对选自以下的不同类型的炎症性病症和感染性病症的有益免疫应答：狼疮、急性和慢性结肠炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病和骨佩吉特氏病(Paget's disease of bone)；结合至肿瘤细胞上的Siglec-7配体；结合至树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞、嗜中性粒细胞和/或巨噬细胞上的Siglec-7配体；抑制通过以下中的一者或多者的肿瘤细胞杀伤：小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞；抑制以下中的一者或多者的抗肿瘤细胞增殖活性：小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞；抑制以下中的一者或多者的抗肿瘤细胞转移活性：小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞；促进免疫抑制树突细胞、免疫抑制巨噬细胞、骨髓源性抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞或调控性T细胞；抑制一种或多种含ITAM基序的受体，如TREM1、TREM2、FcγR、DAP10和DAP12；抑制含有基序D/Ex0–2YxxL/IX6–8YxxL/I(SEQ ID NO:67)的一种或多种受体；抑制通过一种或多种模式识别受体(PRR)的信号传导，如鉴定病原体相关分子模式(PAMP)的受体和鉴定损伤相关分子模式(DAMP)的受体；抑制通过一种或多种Toll样受体的信号传导；抑制JAK-STAT信号传导途径；抑制活化的B细胞的核因子κ-轻链增强子(NFκB)；抑制PLCγ/PKC/钙动员；抑制PI3K/Akt、Ras/MAPK信号传导；降低在小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者上表达的一种或多种炎性受体(如CD86)的表达；增加一种或多种Siglec-7依赖性基因的表达；破坏的Siglec-7依赖性基因表达的正常化；以及降低一种或多种ITAM依赖性基因(如NFAT转录因子)的表达。
在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体抑制本公开的Siglec-7蛋白与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如结合)，所述配体包括但不限于，在红细胞上表达的Siglec-7配体、在细菌细胞上表达的Siglec-7配体、在凋亡细胞上表达的Siglec-7配体、在肿瘤细胞上表达的Siglec-7配体、在病毒上表达的Siglec-7配体、在树突细胞上表达的Siglec-7配体、在神经细胞上表达的Siglec-7配体、在神经胶质细胞上表达的Siglec-7配体、在小神经胶质细胞上表达的Siglec-7配体、在星形胶质细胞上表达的Siglec-7配体、β淀粉样蛋白斑块上的Siglec-7配体、Tau缠结上的Siglec-7配体、致病蛋白上的Siglec-7配体、致病肽上的Siglec-7配体、在巨噬细胞上表达的Siglec-7配体、在自然杀伤细胞上表达的Siglec-7配体、在T细胞上表达的Siglec-7配体、在T辅助细胞上表达的Siglec-7配体、在细胞毒性T细胞上表达的Siglec-7配体、在B细胞上表达的Siglec-7配体、在肿瘤包埋的免疫抑制树突细胞上表达的Siglec-7配体、在肿瘤包埋的免疫抑制巨噬细胞上表达的Siglec-7配体、在骨髓源性抑制细胞上表达的Siglec-7配体、在调控性T细胞上表达的Siglec-7配体、分泌的粘蛋白、唾液酸、含唾液酸的糖脂、含唾液酸的糖蛋白、含α-2,6连接的唾液酸的糖脂、含α-2,6连接的唾液酸的糖蛋白、含α-2,3连接的唾液酸的糖脂、含α-2,3连接的唾液酸的糖蛋白、α-1酸性糖蛋白(AGP)、CD24蛋白以及神经节苷脂。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体结合至在细胞表面上表达的本公开的Siglec-7蛋白，并且裸抗体抑制Siglec-7蛋白与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，结合至本公开的Siglec-7蛋白的本公开的抗Siglec-7抗体通过降低可用于在细胞表面上或细胞内与这些蛋白质相互作用的Siglec-7的有效水平来抑制Siglec-7蛋白与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如结合)。在一些实施方案中，结合至本公开的Siglec-7蛋白的本公开的抗Siglec-7抗体通过诱导Siglec-7的降解来抑制Siglec-7蛋白与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如结合)。
如本文所用，Siglec-7的水平可指编码Siglec-7的基因的表达水平；编码Siglec-7的一种或多种转录物的表达水平；Siglec-7蛋白的表达水平；和/或细胞内和/或细胞表面上存在的Siglec-7蛋白的量。本领域中用于测量基因表达、转录、翻译和/或蛋白质丰度或定位的水平的任何已知方法可用于测定Siglec-7的水平。
另外，本公开的抗Siglec-7抗体可用于预防以下疾病、降低所述疾病的风险或治疗所述疾病：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、混合性痴呆、克罗伊茨费尔特-雅格布病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、Tau蛋白病、那须哈科拉病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经***狼疮、***、帕金森氏病、路易体痴呆、多***萎缩症、夏伊-德拉戈综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿性病症、类肉瘤病、老化疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病、癌症(包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达Siglec-7的肿瘤、甲状腺癌)、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克氏感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和/或流感嗜血杆菌。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体可用于诱导或促进有需要的个体中一种或多种免疫细胞的存活、成熟、功能性、迁移或增殖；或用于降低有需要的个体中以下各项的活性、功能性或存活：调控性T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制树突细胞、肿瘤包埋的免疫抑制巨噬细胞、骨髓源性抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)细胞和/或慢性骨髓性白血病(CML)细胞。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体是单克隆抗体。
在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体降低Siglec-7的细胞水平(例如，细胞表面水平、细胞内水平和/或总水平)。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体诱导Siglec-7的下调。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体诱导Siglec-7的裂解。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体诱导Siglec-7的内化。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体诱导Siglec-7的脱落。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体诱导Siglec-7的降解。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体诱导Siglec-7的脱敏。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体充当配体模拟物以瞬时活化Siglec-7。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体充当配体模拟物并且在诱导Siglec-7的细胞水平降低和/或抑制Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如结合)之前瞬时活化Siglec-7。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体充当配体模拟物并且在诱导Siglec-7的降解之前瞬时活化Siglec-7。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体充当配体模拟物并且在诱导Siglec-7的裂解之前瞬时活化Siglec-7。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体充当配体模拟物并且在诱导Siglec-7的内化之前瞬时活化Siglec-7。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体充当配体模拟物并且在诱导Siglec-7的脱落之前瞬时活化Siglec-7。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体充当配体模拟物并且在诱导Siglec-7表达的下调之前瞬时活化Siglec-7。在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体充当配体模拟物并且在诱导Siglec-7的脱敏之前瞬时活化Siglec-7。
在一些实施方案中，本公开的分离的抗Siglec-7抗体是人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、多价抗体或嵌合抗体。此类抗体的示例性描述在整个本公开中发现。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体结合至人Siglec-7或其同源物，包括但不限于哺乳动物Siglec-7蛋白或非人灵长类动物Siglec-7蛋白。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体特异性地结合至人Siglec-7。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体结合至人Siglec-7，并且不与来自其他物种的Siglec-7直向同源物或同源物交叉反应。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体结合至在细胞表面上表达的本公开的Siglec-7蛋白并且在结合至表面表达的Siglec-7蛋白后调节(例如，诱导或抑制)本公开的一种或多种Siglec-7活性。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体是惰性抗体。
抗Siglec-7示例性抗体
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体结合至人Siglec-7的表位，所述表位与由包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体结合的Siglec-7表位相同或重叠。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体结合由包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体结合的基本相同的Siglec-7表位。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体竞争性地抑制包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体的结合。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体与包含含有SEQ IDNO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体竞争结合至Siglec-7。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体竞争性地抑制至少一种选自表1-5、6A-6C、7A-7C、8A-8D、9A-9D、10和11中列出的任何抗体的抗体的结合。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体竞争性地抑制至少一种包含选自以下的抗体的重链可变区和轻链可变区的抗体的结合：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1、S7AB-H8.45.2以及它们的任何组合。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体与一种或多种包含选自以下的抗体的重链可变区和轻链可变区的抗体竞争结合至Siglec-7：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1、S7AB-H8.45.2以及它们的任何组合，其中如通过表面等离子体共振所测量，与所述抗Siglec-7抗体不存在下与Siglec-7的结合相比，所述抗Siglec-7抗体使本文所述的竞争性抗Siglec-7抗体与Siglec-7的结合降低约50％至100％范围内的量。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体与一种或多种抗体竞争结合至Siglec-7，其中如通过表面等离子体共振所测量，与所述抗Siglec-7抗体不存在下与Siglec-7的结合相比，所述抗Siglec-7抗体使本文所述的一种或多种竞争性抗Siglec-7抗体的结合降低至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体使一种或多种竞争性抗Siglec-7抗体与Siglec-7的结合降低100％是指如通过表面等离子体共振所测量，所述抗Siglec-7抗体基本上完全阻断一种或多种包含选自以下的抗体的重链可变区和轻链可变区的抗体与Siglec-7的结合：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1、S7AB-H8.45.2以及它们的任何组合。
在一些实施方案中，与包含选自S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1和S7AB-H8.45.2的抗体的重链可变区和轻链可变区的抗体竞争的本公开的抗Siglec-7抗体在竞争测定中以对应于10:1比率、9:1比率、8:1比率、7:1比率、6:1比率、5:1比率、4:1比率、3:1比率、2:1比率、1:1比率、0.75:1比率、0.5:1比率、0.25:1比率、0.1:1比率、0.075:1比率、0.050:1比率、0.025:1比率、0.01:1比率、0.0075:比率、0.0050:1比率、0.0025:1比率、0.001:比率、0.00075:1比率、0.00050:1比率、0.00025:1比率、0.0001:比率、1:10比率、1:9比率、1:8比率、1:7比率、1:6比率、1:5比率、1:4比率、1:3比率、1:2比率、1:0.75比率、1:0.5比率、1:0.25比率、1:0.1比率、1:0.075比率、1:0.050比率、1:0.025比率、1:0.01比率、1:0.0075比率、1:0.0050比率、1:0.0025比率、1:0.001比率、1:0.00075比率、1:0.00050比率、1:0.00025比率或1:0.0001比率(本公开的抗Siglec-7抗体:本文所述的竞争性抗Siglec-7抗体)的量存在。
在一些实施方案中，与竞争测定中本文所述的一种或多种竞争性抗Siglec-7抗体的量相比，与包含选自以下的抗体的重链可变区和轻链可变区的抗体竞争的本公开的抗Siglec-7抗体以约1.5倍至100倍或大于100倍范围内的量的过量存在：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1、S7AB-H8.45。在一些实施方案中，与竞争测定中本文所述的一种或多种竞争性抗Siglec-7抗体的量相比，本公开的抗Siglec-7抗体的丰度高约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍或100倍。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体结合至人Siglec-7的表位，所述表位与由至少一种选自表1-5、6A-6C、7A-7C、8A-8D、9A-9D、10和11中列出的任何抗体的抗体结合的Siglec-7表位相同或重叠。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体结合至与由至少一种包含选自以下的抗体的重链可变区和轻链可变区的抗体结合的Siglec-7表位相同或重叠的人Siglec-7的表位：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体结合由至少一种选自表1-5、6A-6C、7A-7C、8A-8D、9A-9D、10和11中列出的任何抗体的抗体结合的基本相同的Siglec-7表位。在一些实施方案中，结合“基本相同的Siglec-7表位”是指结合所述表位中的至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的氨基酸残基。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体结合由至少一种包含选自以下的抗体的重链可变区和轻链可变区的抗体结合的基本相同的Siglec-7表位：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2。用于作图抗体所结合的表位的详细示例性方法提供于Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols,”于Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中。
可利用本领域已知的任何合适的竞争测定或Siglec-7结合测定(如BIAcore分析、生物层干涉测量法、ELISA测定或流式细胞术)来确定抗Siglec-7抗体是否与一种或多种选自以下的抗体竞争结合至Siglec-7：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1、S7AB-H8.45.2以及它们的任何组合。
在示例性竞争测定中，将固定的Siglec-7或细胞表面上表达Siglec-7的细胞在包含结合至Siglec-7的第一标记抗体(例如人或非人灵长类动物)和第二未标记抗体的溶液中孵育，所述第二未标记抗体正在针对其与所述第一抗体竞争结合至Siglec-7的能力进行测试。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定的Siglec-7或表达Siglec-7的细胞在包含第一标记抗体而不含第二未标记抗体的溶液中孵育。在容许第一抗体与Siglec-7结合的条件下孵育之后，移除过量未结合的抗体，并且测量与固定的Siglec-7或表达Siglec-7的细胞缔合的标记的量。如果相对于对照样品，与固定的Siglec-7或表达Siglec-7的细胞缔合的标记的量在测试样品中基本上降低，则然后指示第二抗体与第一抗体竞争结合至Siglec-7。参见Harlow和Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
抗Siglec-7抗体轻链和重链可变区
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个或全部三个)选自HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表6A-6C所示)的HVR。在一些实施方案中，所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表6A-6C所示)。
在一些实施方案中，所述HVR-H1包含根据式I的序列：GYAFTX1X2WMN(SEQ ID NO:6)，其中X1是E、M、G或A，并且X2是T、A或Y。在一些实施方案中，所述HVR-H1包含选自SEQ IDNO:1-5的序列。在一些实施方案中，所述HVR-H2包含根据式II的序列：RIFPGX1GHTN(SEQ IDNO:9)，其中X1是L或Y。在一些实施方案中，所述HVR-H2包含选自SEQ ID NO:7-8的序列。在一些实施方案中，所述HVR-H3包含DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)的序列。
在一些实施方案中，所述重链可变区包含根据式I的HVR-H1、根据式II的HVR-H2和包含DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)的序列的HVR-H3。在一些实施方案中，所述重链可变区包含含有选自SEQ ID NO:1-5的序列的HVR-H1和含有选自SEQ ID NO:7-8的序列的HVR-H2以及含有SEQ ID NO:10的序列的HVR-H3。
在一些实施方案中，所述重链可变区包含抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1、S7AB-H8.45.2以及它们的任何组合的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表6A至6C所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，其中所述重链可变区包含以下中的一个或多个：(a)HVR-H1，所述HVR-H1包含与抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-H1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，所述HVR-H2包含与抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-H2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，所述HVR-H3包含与抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-H3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTAAWMN(SEQ ID NO:4)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQID NO:7)；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个或全部三个)选自HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表7A-7C所示)的HVR。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表7A-7C所示)。在一些实施方案中，所述抗体不是包含以下轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含RASQDINTYLN(SEQ ID NO:65)的序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含QQGNTLPWT(SEQ ID NO:20)的序列。
在一些实施方案中，所述HVR-L1包含根据式III的序列：RX1SX2DX3NTYLN(SEQ IDNO:15)，其中X1是G或A，X2是Q或E，并且X3是I、T或A。在一些实施方案中，所述HVR-L1包含选自SEQ ID NO:11-14的序列。在一些实施方案中，所述HVR-L2包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列。在一些实施方案中，所述HVR-L3包含根据式IV的序列：QX1GX2X3X4PWT(SEQ ID NO:24)，其中X1是Q或G，X2是N或G，X3是L、T、V或I，并且X4是L或K。在一些实施方案中，所述HVR-L3包含选自SEQ ID NO:17-23的序列。
在一些实施方案中，所述轻链可变区包含根据式III的HVR-L1、包含YTSRLHS(SEQID NO:16)的序列的HVR-L2和根据式IV的HVR-L3，并且所述抗体不是包含以下轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含RASQDINTYLN(SEQ ID NO:65)的序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含QQGNTLPWT(SEQ ID NO:20)的序列。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含含有选自SEQID NO:11-14的序列的HVR-L1、包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列的HVR-L2和包含选自SEQ ID NO:17-23的序列的HVR-L3，并且所述抗体不是包含以下轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含RASQDINTYLN(SEQ ID NO:65)的序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含QQGNTLPWT(SEQID NO:20)的序列。
在一些实施方案中，所述轻链可变区包含抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1、S7AB-H8.45.2以及它们的任何组合的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表7A至7C所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，其中所述轻链可变区包含以下中的一个或多个：(a)HVR-L1，所述HVR-L1包含与抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-L1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，所述HVR-L2包含与抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-L2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，所述HVR-L3包含与抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-L3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且所述抗体不是包含以下轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含RASQDINTYLN(SEQID NO:65)的序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含QQGNTLPWT(SEQ ID NO:20)的序列。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ IDNO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNILPWT(SEQ ID NO:23)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个或全部三个)选自HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表6A-6C所示)的HVR；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个或全部三个)选自HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表7A-7C所示)的HVR。在一些实施方案中，所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表6A-6C所示)，并且所述轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表7A-7C所示)。
在一些实施方案中，所述重链可变区包含根据式I的HVR-H1、根据式II的HVR-H2和包含DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)的序列的HVR-H3，并且所述轻链可变区包含根据式III的HVR-L1、包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列的HVR-L2和根据式IV的HVR-L3。在一些实施方案中，所述重链可变区包含含有选自SEQ ID NO:1-5的序列的HVR-H1和含有选自SEQ IDNO:7-8的序列的HVR-H2以及含有SEQ ID NO:10的序列的HVR-H3，并且所述轻链可变区包含含有选自SEQ ID NO:11-14的序列的HVR-L1和含有SEQ ID NO:16的序列的HVR-L2以及含有选自SEQ ID NO:17-23的序列的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1、S7AB-H8.45.2以及它们的任何组合的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表6A至6C所示)；和轻链可变区，所述轻链可变区包含抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1、S7AB-H8.45.2以及它们的任何组合的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表7A至7C所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3；和轻链可变区，所述轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，其中所述抗体包含抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表6A至6C和7A至6C所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含以下中的一个或多个：(a)HVR-H1，所述HVR-H1包含与抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-H1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，所述HVR-H2包含与抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-H2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，所述HVR-H3包含与抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-H3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且其中所述轻链可变区包含以下中的一个或多个：(a)HVR-L1，所述HVR-L1包含与抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-L1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，所述HVR-L2包含与抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-L2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，所述HVR-L3包含与抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的HVR-L3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且所述抗体不是包含以下轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含RASQDINTYLN(SEQ ID NO:65)的序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含QQGNTLPWT(SEQ ID NO:20)的序列。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含(a)HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTMAWMN(SEQ ID NO:2)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGYGHTN(SEQID NO:8)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)；HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNLLPWT(SEQ ID NO:17)；(b)HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTGYWMN(SEQ ID NO:3)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)；HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDTNTYLN(SEQ ID NO:12)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNTLPWT(SEQ ID NO:20)；(c)HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTGYWMN(SEQ ID NO:3)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)；HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNILPWT(SEQ ID NO:23)；或(d)HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTAAWMN(SEQ ID NO:4)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)；HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNILPWT(SEQ ID NO:23)。
在具体实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTAAWMN(SEQ ID NO:4)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQID NO:7)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)；HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNILPWT(SEQ ID NO:23)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:36-48的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQ IDNO:43的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的重链可变区(如表10所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTAAWMN(SEQ ID NO:4)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:49-60的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含SEQ IDNO:60的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的轻链可变区(如表11所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNILPWT(SEQ ID NO:23)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:36-48组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:49-60组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:41、42和43组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:52、55和60组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含：包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的轻链可变区；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链可变区；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区；或包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个方面，本公开的抗Siglec-7抗体结合至Siglec-7蛋白，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:36-48组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:49-60组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:41、42和43组成的组的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:52、55和60组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，(a)所述重链可变区包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列；(b)所述重链可变区包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列；(c)所述重链可变区包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；或(d)所述重链可变区包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列。
在一个方面，本公开的抗Siglec-7抗体结合至Siglec-7蛋白，其中所述抗体包含(a)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的轻链可变区；(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链可变区；(c)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ IDNO:60的氨基酸序列的轻链可变区；或(d)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的重链可变区(如表10所示)，和抗体S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的轻链可变区(如表11所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:40、41、42、43和44的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.11、S7AB-H8.13、S7AB-H8.18、S7AB-H8.20、S7AB-H8.35、S7AB-H8.43或S7AB-H8.44的重链可变区(如表10所示)。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:52、54、55、58和60的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.11、S7AB-H8.13、S7AB-H8.18、S7AB-H8.20、S7AB-H8.35、S7AB-H8.43或S7AB-H8.44的轻链可变区(如表11所示)。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:40、41、42、43和44的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:52、54、55、58和60的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.11、S7AB-H8.13、S7AB-H8.18、S7AB-H8.20、S7AB-H8.35、S7AB-H8.43或S7AB-H8.44的重链可变区(如表10所示)，和抗体S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.11、S7AB-H8.13、S7AB-H8.18、S7AB-H8.20、S7AB-H8.35、S7AB-H8.43或S7AB-H8.44的轻链可变区(如表11所示)。
本公开的任何抗体可由细胞系产生。在一些实施方案中，所述细胞系是哺乳动物细胞系。在某些实施方案中，所述细胞系是杂交瘤细胞系。在其它实施方案中，所述细胞系是可以是酵母细胞系。可使用本领域中已知的适用于抗体产生的任何细胞系来产生本公开的抗体。用于抗体产生的示例性细胞系在整个本公开中描述。
在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含选自以下的抗体的重链可变区和轻链可变区的抗Siglec-7单克隆抗体：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体S7AB-H8.1的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体S7AB-H8.1的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:40的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:40的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.1或SEQ ID NO:40的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.1的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.1的HVR-H2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.1的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:52的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:52的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.1或SEQ ID NO:52的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.1的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.1的HVR-L2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.1的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.2的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:41的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.2的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.2的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:41的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体S7AB-H8.2的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.2的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体S7AB-H8.2的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.2的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:41的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.2的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:41的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.2的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:41的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.2或SEQ ID NO:41的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.2的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.2的HVR-H2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.2的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.2的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.2的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:52的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.2的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:52的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.2或SEQ ID NO:52的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.2的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.2的HVR-L2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.2的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.11的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.11的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:54的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.11的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体S7AB-H8.11的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.11的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:54的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体S7AB-H8.11的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.11的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.11的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:40的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.11的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:40的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.11或SEQ ID NO:40的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.11的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.11的HVR-H2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.11的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.11的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:54的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.11的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:54的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.11的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:54的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.11或SEQ ID NO:54的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.11的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.11的HVR-L2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.11的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.13的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.13的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:54的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.13的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体S7AB-H8.13的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.13的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:54的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体S7AB-H8.13的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.13的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.13的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:42的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.13的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:42的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.13或SEQ ID NO:42的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.13的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.13的HVR-H2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.13的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.13的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:54的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.13的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:54的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.13的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:54的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.13或SEQ ID NO:54的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.13的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.13的HVR-L2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.13的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.18的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.18的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:55的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.18的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体S7AB-H8.18的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.18的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:55的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体S7AB-H8.18的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.18的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.18的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:42的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.18的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:42的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.18或SEQ ID NO:42的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.18的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.18的HVR-H2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.18的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.18的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:55的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.18的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:55的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.18的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:55的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.18或SEQ ID NO:55的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.18的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.18的HVR-L2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.18的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.20的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.20的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:55的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.20的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体S7AB-H8.20的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.20的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:55的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体S7AB-H8.20的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.20的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.20的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:44的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.20的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:44的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.20或SEQ ID NO:44的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.20的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.20的HVR-H2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.20的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.20的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:55的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.20的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:55的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.20的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:55的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.20或SEQ ID NO:55的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.20的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.20的HVR-L2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.20的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.35的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.35的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.35的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体S7AB-H8.35的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.35的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体S7AB-H8.35的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.35的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.35的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:44的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.35的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:44的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.35或SEQ ID NO:44的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.35的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.35的HVR-H2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.35的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.35的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.35的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:58的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.35的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:58的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.35或SEQ ID NO:58的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.35的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.35的HVR-L2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.35的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.43的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.43的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.43的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体S7AB-H8.43的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.43的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体S7AB-H8.43的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.43的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.43的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:42的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.43的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:42的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.43或SEQ ID NO:42的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.43的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.43的HVR-H2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.43的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.43的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.43的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:60的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.43的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:60的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.43或SEQ ID NO:60的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.43的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.43的HVR-L2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.43的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.44的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:43的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.44的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.44的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:43的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体S7AB-H8.44的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体S7AB-H8.44的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体S7AB-H8.44的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.44的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:43的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.44的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:43的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.44的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:43的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.44或SEQ ID NO:43的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.44的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.44的HVR-H2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.44的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含与抗体S7AB-H8.44的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列，并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守性取代、***或缺失)，但是包含所述序列的抗Siglec-7抗体保留结合至Siglec-7的能力。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.44的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:60的氨基酸序列中，总计1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体S7AB-H8.44的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:60的氨基酸序列中，总计1至5个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些实施方案中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区中(即，在FR区中)。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗Siglec-7抗体包含抗体S7AB-H8.44或SEQ ID NO:60的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体S7AB-H8.44的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体S7AB-H8.44的HVR-L2氨基酸序列，以及(c)抗体S7AB-H8.44的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是抗Siglec-7单克隆抗体S7AB-H8。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是与S7AB-H8结合基本相同的Siglec-7表位的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含单克隆抗体S7AB-H8的重链可变区的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含单克隆抗体S7AB-H8的轻链可变区的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含单克隆抗体S7AB-H8的重链可变区和轻链可变区的分离的抗体。
在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是抗Siglec-7单克隆抗体S7AB-H9。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是与S7AB-H9结合基本相同的Siglec-7表位的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含单克隆抗体S7AB-H9的重链可变区的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含单克隆抗体S7AB-H9的轻链可变区的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含单克隆抗体S7AB-H9的重链可变区和轻链可变区的分离的抗体。
在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是抗Siglec-7单克隆抗体S7AB-H11。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是与S7AB-H11结合基本相同的Siglec-7表位的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含单克隆抗体S7AB-H11的重链可变区的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含单克隆抗体S7AB-H11的轻链可变区的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含单克隆抗体S7AB-H11的重链可变区和轻链可变区的分离的抗体。
在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是抗Siglec-7单克隆抗体S7AB-H12。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是与S7AB-H12结合基本相同的Siglec-7表位的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含单克隆抗体S7AB-H12的重链可变区的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含单克隆抗体S7AB-H12的轻链可变区的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是包含单克隆抗体S7AB-H12的重链可变区和轻链可变区的分离的抗体。
在某些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是拮抗剂抗体。在某些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体是激动剂抗体或惰性抗体。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体具有IgG类、IgM类或IgA类。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体具有IgG类并且具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。
可通过本领域中已知的各种测定来鉴定、筛选和/或表征另外的抗Siglec-7抗体，例如特异性地结合至本公开的Siglec-7蛋白的抗体的物理/化学性质和/或生物活性。
能够结合Fcγ受体的抗Siglec-7抗体
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体保留结合Fcγ(Fcγ)受体的能力。在一些实施方案中，当此类抗体具有与受体活化相容的正确表位特异性时，此类抗体可具有使其能够聚簇并瞬时刺激例如Siglec-7受体的特征。在一些实施方案中，此类抗体随后可通过诱导Siglec-7降解、Siglec-7脱敏、Siglec-7裂解、Siglec-7内化、Siglec-7脱落、Siglec-7表达的下调和/或Siglec-7的溶酶体降解而充当Siglec-7表达和/或Siglec-7蛋白的一种或多种活性的长期抑制剂。
在体内，本公开的抗Siglec-7抗体可簇集受体并通过多种潜在机制中的任何一种或多种瞬时活化Siglec-7。人抗体如IgG2的一些同种型由于其独特的结构而具有簇集受体或保留受体呈簇集构型、从而瞬时活化受体如Siglec-7而不结合至Fc受体的内在能力(例如，White等人,(2015)Cancer Cell 27,138–148)。
在一些实施方案中，其它抗体可通过结合至邻近细胞上的Fcγ受体来簇集受体(例如，Siglec-7)。在一些实施方案中，抗体的恒定IgG Fc区与Fcγ受体的结合可导致抗体的聚集，并且抗体进而可聚集它们通过它们的可变区所结合的受体(Chu等人(2008)MolImmunol,45:3926-3933；以及Wilson等人,(2011)Cancer Cell 19,101–113)。在一些实施方案中，结合至不引发细胞因子分泌、氧化爆发、增加的吞噬和增强的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的抑制性Fcγ受体FcγR(FcγRIIB)是体内簇集抗体的优选方式，因为与FcγRIIB结合不与不利的免疫应答效应相关。
存在本公开的抗Siglec-7抗体可簇集受体的其它机制。例如，如上所述，交联在一起的抗体片段(例如，Fab片段)可用于以与具有结合Fcγ受体的Fc区的抗体相似的方式簇集受体(例如，Siglec-7)。在一些实施方案中，如果交联的抗体片段(例如，Fab片段)诱导细胞表面上的受体簇集并结合靶标上的适当表位(例如，Siglec-7)，则所述抗体片段可瞬时充当激动剂抗体。
因此，在一些实施方案中，结合Siglec-7蛋白的本公开的抗体可包括抗体，所述抗体在它们例如降低Siglec-7的细胞水平、抑制一种或多种Siglec-7活性和/或抑制Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如结合)之前由于其表位特异性而结合Siglec-7并瞬时活化一种或多种Siglec-7活性。在一些实施方案中，此类抗体可结合至Siglec-7上的配体结合位点并瞬时模拟天然配体的作用，或者通过结合至一个或多个不是配体结合位点的结构域来刺激靶抗原转导信号。在一些实施方案中，此类抗体不会干扰配体结合。在一些实施方案中，无论抗体是否结合至Siglec-7上的配体结合位点，所述抗体都可随后通过诱导Siglec-7降解、Siglec-7脱敏、Siglec-7裂解、Siglec-7内化、Siglec-7脱落、Siglec-7表达的下调和/或Siglec-7的溶酶体降解来充当Siglec-7表达和/或Siglec-7蛋白的一种或多种活性的长期抑制剂。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体是瞬时诱导Siglec-7蛋白的一种或多种活性的抗体。可利用本领域中已知和本文公开的任何合适的技术或测定来测试本公开的抗Siglec-7抗体瞬时诱导Siglec-7蛋白的一种或多种活性的能力。不管此类抗体瞬时诱导的活性，此类抗体都可随后通过诱导Siglec-7降解、Siglec-7脱敏、Siglec-7裂解、Siglec-7内化、Siglec-7脱落、Siglec-7表达的下调和/或Siglec-7的溶酶体降解来充当Siglec-7表达和/或Siglec-7蛋白的一种或多种活性的长期抑制剂。在一些实施方案中，所述Siglec-7抗体不依赖于与Fc受体的结合而瞬时诱导Siglec-7蛋白的一种或多种活性。
以下表B中提供了示例性抗体Fc同种型和修饰。在一些实施方案中，能够结合Fcγ受体的本公开的抗Siglec-7抗体具有在以下表B中列出的Fc同种型。
表B:能够结合Fcγ受体的示例性抗Siglec-7抗体Fc同种型
Figure BDA0002921167240001091
Figure BDA0002921167240001101
Figure BDA0002921167240001111
除了表C中描述的同种型，并且不希望受理论束缚，认为结合人中的Fcγ受体I、IIA、IIC、IIIA、IIIB和/或小鼠中的Fcγ受体I、III和IV的具有人IgG1或IgG3同种型及其突变体的抗体(例如Strohl(2009)Current Opinion in Biotechnology 2009,20:685–691)也可充当瞬时激动剂抗体。
在一些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体具有IgG类、IgM类或IgA类。在一些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在一些实施方案中，所述抗体包含在Fc区中在选自由以下组成的组的残基位置处的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个或全部十三个)氨基酸取代：C127S、L234A、L234F、L235A、L235E、S267E、N297A、K322A、L328F、A330S、P331S、E345R、E430G、S440Y以及它们的任何组合(残基位置根据EU或Kabat编号)。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置L234A、L235A和P331S处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置N297A处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置K322A和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置K322A、P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置S267E和L328F处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置C127S处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代。在一些实施方案中，本公开的Siglec-7抗体具有IgG1同种型，并且包含残基位置267处的S267E氨基酸取代和残基位置328处的L328F氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。
在某些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体具有IgG2同种型。在一些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体含有人IgG2恒定区。在一些实施方案中，所述人IgG2恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，所述抑制性Fc受体是抑制性Fc-γ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种修饰。例如，在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种氨基酸取代(例如，相对于同一同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一种或多种氨基酸取代选自V234A(Alegre等人,(1994)Transplantation 57:1537-1543.31；Xu等人,(2000)Cell Immunol,200:16-26)、G237A(Cole等人(1999)Transplantation,68:563-571)、H268Q、V309L、A330S、P331S(US 2007/0148167；Armour等人(1999)Eur J Immunol 29:2613-2624；Armour等人(2000)The Haematology Journal 1(Suppl.1):27；Armour等人(2000)The HaematologyJournal 1(Suppl.1):27)、C232S和/或C233S(White等人(2015)Cancer Cell 27,138–148)、S267E、L328F(Chu等人,(2008)Mol Immunol,45:3926-3933)、M252Y、S254T和/或T256E，其中所述氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例。
在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG2同种型，其具有包含C127S氨基酸取代的重链恒定结构域，其中氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例(White等人,(2015)Cancer Cell 27,138-148；Lightle等人,(2010)PROTEIN SCIENCE 19:753-762；以及WO2008079246)。
在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG2同种型，其具有包含C214S氨基酸取代的κ轻链恒定结构域，其中氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例(White等人,(2015)Cancer Cell 27,138-148；Lightle等人,(2010)PROTEIN SCIENCE 19:753-762；以及WO2008079246)。
在某些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体具有IgG1同种型。在一些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体含有小鼠IgG1恒定区。在一些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体含有人IgG1恒定区。在一些实施方案中，所述人IgG1恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，所述抑制性Fc受体是抑制性Fc-γ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种修饰。例如，在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种氨基酸取代(例如，相对于同一同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一种或多种氨基酸取代选自N297A(Bolt S等人(1993)Eur JImmunol 23:403-411)、D265A(Shields等人(2001)R.J.Biol.Chem.276,6591–6604)、D270A、L234A、L235A(Hutchins等人(1995)Proc Natl Acad Sci USA,92:11980-11984；Alegre等人,(1994)Transplantation 57:1537-1543.31；Xu等人,(2000)Cell Immunol,200:16-26)、G237A(Alegre等人(1994)Transplantation57:1537-1543.31；Xu等人(2000)Cell Immunol,200:16-26)、P238D、L328E、E233D、G237D、H268D、P271G、A330R、C226S、C229S、E233P、L234V、L234F、L235E(McEarchern等人,(2007)Blood,109:1185-1192)、P331S(Sazinsky等人,(2008)Proc Natl Acad Sci USA2008,105:20167-20172)、S267E、L328F、A330L、M252Y、S254T、T256E、N297Q、P238S、P238A、A327Q、A327G、P329A、K322A和/或T394D，其中所述氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例。
在一些实施方案中，所述抗体包含IgG2同种型重链恒定结构域1(CH1)和铰链区(White等人,(2015)Cancer Cell 27,138–148)。在某些实施方案中，所述IgG2同种型CH1和铰链区含有ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCP(SEQ ID NO:64)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体Fc区含有S267E氨基酸取代、L328F氨基酸取代或两者，和/或N297A或N297Q氨基酸取代，其中所述氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例。
在某些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体具有IgG4同种型。在一些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体含有人IgG4恒定区。在一些实施方案中，所述人IgG4恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，所述抑制性Fc受体是抑制性Fc-γ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种修饰。例如，在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种氨基酸取代(例如，相对于同一同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一种或多种氨基酸取代选自L235A、G237A、S228P、L236E(Reddy等人,(2000)J Immunol,164:1925-1933)、S267E、E318A、L328F、M252Y、S254T和/或T256E，其中所述氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例。
在某些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体具有杂合IgG2/4同种型。在一些实施方案中，所述Fcγ受体结合抗体包含含有人IgG2的根据EU或Kabat编号的氨基酸118至260以及人IgG4的根据EU或Kabat编号的氨基酸261-447的氨基酸序列(WO 1997/11971；WO2007/106585)。
在某些实施方案中，所述抗体含有小鼠IgG4恒定区(Bartholomaeus,等人(2014).J.Immunol.192,2091–2098)。
在一些实施方案中，所述Fc区进一步含有一种或多种另外的氨基酸取代，所述氨基酸取代选自由根据EU或Kabat编号的A330L、L234F、L235E或P331S以及它们的任何组合组成的组。
在某些实施方案中，所述抗体含有在Fc区中在选自C127S、L234A、L234F、L235A、L235E、S267E、K322A、L328F、A330S、P331S、E345R、E430G、S440Y以及它们的任何组合的残基位置处的一个或多个氨基酸取代，其中所述残基的编号是根据EU或Kabat编号。在一些实施方案中，所述Fc区包含位置P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有位置E430G、L234A、L235A和P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有位置N297A处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有位置E430G和P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有位置E430G和K322A处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有位置E430G、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有位置E430G、K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有位置E430G、K322A和A330S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有位置E430G、K322A和P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有位置S267E和L328F处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有位置C127S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。
在一些优选的实施方案中，所述Fc区含有位置S267E和L328F处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。
惰性抗体
本公开的抗Siglec-7抗体的另一类别包括惰性抗体。如本文所用，“惰性”抗体是指特异性地结合其靶抗原(例如Siglec-7)但不调节(例如降低/抑制或活化/诱导)抗原功能的抗体。例如，在Siglec-7的情况下，惰性抗体不调节Siglec-7的细胞水平，不调节Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如结合)，或不调节Siglec-7蛋白的一种或多种活性。在一些实施方案中，不具有在细胞表面上簇集Siglec-7的能力的抗体可以是惰性抗体，即使它们具有与受体活化相容的表位特异性。
在一些实施方案中，结合Siglec-7蛋白的抗体可包括结合Siglec-7，但由于它们的表位特异性或特性不会降低Siglec-7的细胞水平和/或抑制Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如结合)的抗体。在一些实施方案中，此类抗体可用作货物以例如将毒素(例如化学治疗剂)转运到肿瘤细胞中。因此，在一些实施方案中，本公开的抗体是结合Siglec-7但不能降低Siglec-7的细胞水平、抑制Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如结合)或诱导Siglec-7蛋白的一种或多种活性的惰性抗体。
降低或不降低细胞上Siglec-7的细胞水平的抗体可与展示与一种或多种Fcγ受体降低的结合的惰性Fc区组合。以下表C中提供了此类Fc区和修饰的实例。在一些实施方案中，具有惰性Fc区的抗体具有表C中列出的Fc同种型。
抑制性抗Siglec-7抗体
本公开的第三类抗Siglec-7抗体包括阻断或以其他方式抑制一种或多种Siglec-7活性的抗体。在一些实施方案中，结合Siglec-7蛋白的抗体可包括抗体，所述抗体降低Siglec-7的细胞水平(例如，Siglec-7的细胞表面水平)、抑制Siglec-7和/或一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如结合)并抑制Siglec-7蛋白的一种或多种活性。此类抗体通过在一种或多种Siglec-7配体存在下防止Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如结合)或通过防止信号转导从Siglec-7的细胞外结构域进入细胞质来抑制Siglec-7蛋白的一种或多种活性。抗体还可通过降低Siglec-7的细胞表面水平、诱导Siglec-7降解、Siglec-7脱敏、Siglec-7裂解、Siglec-7内化、Siglec-7脱落、Siglec-7表达的下调和/或Siglec-7的溶酶体降解来抑制Siglec-7蛋白的一种或多种活性。在一些实施方案中，此类抗Siglec-7抗体可能不会瞬时活化Siglec-7。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体可具有本公开的瞬时激动剂抗Siglec-7抗体的表位特异性，但具有不能结合Fcγ受体并因此不能例如瞬时簇集和活化Siglec-7的Fc结构域。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体具有但不限于一种或多种以下活性：降低Siglec-7蛋白与一种或多种Siglec-7配体如含唾液酸的糖脂或含唾液酸的糖蛋白结合的能力；降低细胞因子信号传导抑制因子(SOCS)蛋白(例如，SOCS3蛋白)与Siglec-7蛋白结合的能力；增加Siglec-7蛋白的蛋白酶体降解的能力；降低循环树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞表面上的Siglec-7的功能表达的能力；降低Src家族酪氨酸激酶如Syk、LCK、FYM和/或ZAP70对Tyr-437和Tyr-460的磷酸化的能力；减少募集和结合至酪氨酸特异性蛋白磷酸酶SHP1和SHP2的能力；减少募集和结合至PLC-g1的能力，所述PLC-g1充当发动蛋白-1的鸟嘌呤核苷酸交换因子；减少募集和结合至Crkl的能力；减少募集和结合至脾酪氨酸激酶Syk的能力；减少募集和结合至SH3-SH2-SH3生长因子受体结合蛋白2(Grb2)的能力；减少募集和结合至多种含SH2蛋白的能力；增加细胞内钙动员的能力；调节促炎性细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的产生的能力；降低磷酸肌醇3-激酶的活化的能力；增加单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的生长的能力；增加单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的存活的能力；增加多种细胞蛋白上的酪氨酸磷酸化的能力；增加单核细胞、巨噬细胞、树突细胞和/或小神经胶质细胞的吞噬活性的能力；增加单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖的能力；增加介导ITAM信号传导的信号传导分子的磷酸化的能力；增加模式识别受体的功能的能力；增加Toll样受体的功能的能力；增加损伤相关分子模式(DAMP)受体的功能的能力；调节C-C趋化因子受体7(CCR7)的表达的能力；以及增加细胞碎片和蛋白质碎片的清除的能力。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体具有展示与一种或多种Fcγ受体降低的结合的Fc区。以下表C中提供了此类Fc区和修饰的实例。在一些实施方案中，所述抗体具有表C中列出的Fc同种型。
具有降低的与Fcγ受体的结合的抗体Fc同种型
在一些实施方案中，具有降低的与Fcγ受体的结合的抗Siglec-7抗体具有以下表C中列出的Fc同种型。
表C：具有降低的与Fcγ受体的结合的示例性抗Siglec-7抗体Fc同种型
Figure BDA0002921167240001181
Figure BDA0002921167240001191
在某些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有IgG1同种型。在一些实施方案中，所述抗体含有小鼠IgG1恒定区。在一些实施方案中，所述抗体含有人IgG1恒定区。在一些实施方案中，所述人IgG1恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种修饰。例如，在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种氨基酸取代(例如，相对于同一同种型的野生型Fc区)。
在一些实施方案中，所述一种或多种氨基酸取代选自N297A、N297Q(Bolt S等人(1993)Eur J Immunol 23:403-411)、D265A、D270A、L234A、L235A(McEarchern等人,(2007)Blood,109:1185-1192)、C226S、C229S(McEarchern等人,(2007)Blood,109:1185-1192)、P238S(Davis等人,(2007)J Rheumatol,34:2204-2210)、E233P、L234V(McEarchern等人,(2007)Blood,109:1185-1192)、P238A、A327Q、A327G、P329A(Shields RL,等人,(2001)JBiol Chem.276(9):6591-604)、K322A、L234F、L235E(Hezareh,等人,(2001)J Virol 75,12161–12168；Oganesyan等人,(2008).Acta Crystallographica 64,700–704)、P331S(Oganesyan等人,(2008)Acta Crystallographica 64,700–704)、T394D(Wilkinson等人(2013)MAbs 5(3):406–417)、A330L、M252Y、S254T和/或T256E，其中所述氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例。在某些实施方案中，所述Fc区在对应于根据EU或Kabat编号惯例的甘氨酸236的位置处进一步包含氨基酸缺失。
在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有IgG1同种型，所述同种型具有包含根据EU或Kabat编号惯例的C220S氨基酸取代的重链恒定区。在一些实施方案中，所述Fc区进一步含有一种或多种另外的氨基酸取代，所述氨基酸取代选自根据EU或Kabat编号惯例的A330L、L234F、L235E或P331S。在某些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有IgG2同种型。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体含有人IgG2恒定区。在一些实施方案中，所述人IgG2恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种修饰。例如，在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种氨基酸取代(例如，相对于同一同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一种或多种氨基酸取代选自P238S、V234A、G237A、H268A、H268Q、H268E、V309L、N297A、N297Q、V309L、A330S、P331S、C232S、C233S、M252Y、S254T和/或T256E，其中所述氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例(Vafa O.等人,(2014)Methods 65:114–126)。
在某些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有IgG4同种型。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体含有人IgG4恒定区。在一些实施方案中，所述人IgG4恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种修饰。例如，在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种氨基酸取代(例如，相对于同一同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一种或多种氨基酸取代选自E233P、F234V、L235A、G237A、E318A(Hutchins等人(1995)ProcNatl Acad Sci USA,92:11980-11984)、S228P、L234A/F234A、L236E、S241P、L248E(Reddy等人,(2000)J Immunol,164:1925-1933；Angal等人,(1993)Mol Immunol.30(1):105-8；US8614299B2；Vafa O.等人,(2014)Methods65:114–126)、T394D、M252Y、S254T、T256E、N297A、和/或N297Q，其中所述氨基酸位置根据EU或Kabat编号。在一些实施方案中，所述抗体具有IgG4同种型，并且包含在残基位置228处的S228P氨基酸取代、在残基位置234处的F234A氨基酸取代以及在残基位置235处的L235A氨基酸取代(残基位置根据EU编号)。
在一些实施方案中，所述Fc区进一步含有一种或多种选自M252Y、S254T和/或T256E的另外氨基酸取代，其中所述氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例。
其它IgG突变
在一些实施方案中，本文所述的一种或多种IgG1变体可与A330L突变(Lazar等人,(2006)Proc Natl Acad Sci USA,103:4005-4010)或L234F、L235E和/或P331S突变中的一种或多种(Sazinsky等人,(2008)Proc Natl Acad Sci USA,105:20167-20172)组合以消除补体活化，其中所述氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例。在一些实施方案中，本文所述的IgG变体可与一种或多种突变组合以增强人血清中的抗Siglec-7抗体半衰期(例如根据EU或Kabat编号惯例的M252Y、S254T、T256E突变)(Dall’Acqua等人,(2006)J Biol Chem,281:23514-23524；以及Strohl等人,(2009)Current Opinion in Biotechnology,20:685–691)。
在一些实施方案中，本公开的IgG4变体可与根据EU或Kabat编号惯例的S228P突变(Angal等人,(1993)Mol Immunol,30:105-108)、和/或与Peters等人,(2012)J BiolChem.13；287(29):24525-33)中描述的一种或多种突变组合以增强抗体稳定化。
双特异性抗体
本公开的某些方面涉及结合至本公开的Siglec-7蛋白上的一个或多个结构域和第二抗原的双特异性抗体。产生双特异性抗体的方法是本领域中熟知的和本文描述的。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体结合至本公开的Siglec-7蛋白的一个或多个氨基酸残基，如人Siglec-7(SEQ ID NO:63)的一个或多个氨基酸残基，或Siglec-7蛋白上对应于SEQ ID NO:63的氨基酸残基的氨基酸残基。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体识别第一抗原和第二抗原。在一些实施方案中，第一抗原是Siglec-7蛋白或其天然存在的变体。在一些实施方案中，第二抗原也是Siglec-7蛋白或其天然存在的变体。在一些实施方案中，第二抗原是促进跨血脑屏障的转运的抗原(参见例如，Gabathuler R.,Neurobiol.Dis.37(2010)48-57)。此类第二抗原包括但不限于转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、***受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(LPR-1和2)、白喉毒素受体、CRM197、美洲驼单结构域抗体、TMEM 30(A)、蛋白质转导结构域、TAT、Syn-B、穿膜素、聚精氨酸肽、血管肽肽如ANG1005(参见例如，Gabathuler,2010)和其它在血脑屏障内皮细胞上富集的细胞表面蛋白质(参见例如，Daneman等人,PLoS One.2010年10月29日；5(10):e13741)。在一些实施方案中，第二抗原是致病蛋白，包括但不限于淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、中介素、催乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽。在一些实施方案中，第二抗原是在免疫细胞上表达的一种或多种配体和/或蛋白质，包括但不限于，CD33、CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1受体、CD3以及磷脂酰丝氨酸。在一些实施方案中，第二抗原是在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖脂。
抗体片段
本公开的某些方面涉及结合至本公开的Siglec-7蛋白、Siglec-7蛋白的天然存在的变体和Siglec-7蛋白的疾病变体中的一种或多种的抗体片段。在一些实施方案中，所述抗体片段是Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv或scFv片段。
在一些实施方案中，所述抗体片段与第二Siglec-7抗体和/或与一种或多种特异性地结合致病蛋白的抗体组合使用，所述致病蛋白选自：淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、中介素、催乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、超氧化物歧化酶(SOD)、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽以及它们的任何组合；或与结合选自由以下组成的组的免疫调节蛋白的一种或多种抗体组合使用：CD33、CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、CD47、CSF-1receptor、Siglec-5、Siglec-9、Siglec-11、磷脂酰丝氨酸以及它们的任何组合。
在一些实施方案中，本公开的抗体片段可以是与本公开的任何抗Siglec-7抗体结合相同表位的功能片段。在一些实施方案中，所述抗体片段是本公开的抗Siglec-7抗体或抗体片段的微型化型式，其具有相应全长抗体的相同表位，但具有小得多的分子量。此类微型化抗Siglec-7抗体片段可具有更好的脑渗透能力和更短的半衰期，这对于成像和诊断应用是有利的(参见例如，Lütje S等人,Bioconjug Chem.20142月19日；25(2):335-41；TavaréR等人,Proc Natl Acad Sci U S A.2014年1月21日；111(3):1108-13；以及Wiehr S等人,Prostate.2014年5月；74(7):743-55)。因此，在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体片段具有与其相应的全长抗体相比更好的脑渗透和/或具有与其相应的全长抗体相比更短的半衰期。
抗体框架
本文所述的任何抗体还包含框架。在一些实施方案中，所述框架是人免疫球蛋白框架。例如，在一些实施方案中，抗体(例如，抗Siglec-7抗体)包含如任何以上实施方案中的HVR，并且还包含受体人框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。人免疫球蛋白框架可以是人抗体的一部分，或者可通过用人框架区置换一个或多个内源框架来将非人抗体人源化。可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合”方法选择的框架区(参见例如，Sims等人J.Immunol.151:2296(1993))；源于轻链或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列的框架区(参见例如，Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；以及Presta等人，J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变)框架区或人生殖系框架区(参见例如，Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；以及由筛选FR文库获得的框架区(参见例如Baca等人,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)以及Rosok等人,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或全部四个)选自VHFR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4(如表8A-8D所示)的框架区。在一些实施方案中，所述VH FR1包含QVQLVQSGAEVKKPGASV KVSCKAS(SEQ ID NO:25)的序列。在一些实施方案中，所述VHFR2包含根据式V的序列：WVRQAX1GQX2LEWIG(SEQ ID NO:29)，其中X1是P或R，并且X2是G或R。在一些实施方案中，VH FR2包含选自由SEQ ID NO:26-28组成的组的序列。在一些实施方案中，所述VH FR3包含YAQKFQGRAT LTEDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:30)的序列。在一些实施方案中，VH FR4包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:31)的序列。在一些实施方案中，抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO:25的序列的VH FR1、根据式V的VH FR2、含有SEQ ID NO:30的序列的VH FR3以及含有SEQ ID NO:31的序列的VH FR4。
在一些实施方案中，抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO:25的序列的VH FR1、含有选自SEQ ID NO:26-28的序列的VH FR2、含有SEQ ID NO:30的序列的VH FR3以及含有SEQ ID NO:31的序列的VH FR4。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4(如表8A-8D所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或全部四个)选自VLFR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4(如表9A-9D所示)的框架区。在一些实施方案中，所述VL FR1包含DIQMTQSPSSLSASVGDR VTITC(SEQ ID NO:32)的序列。在一些实施方案中，所述VL FR2包含WYQQ KPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:33)的序列。在一些实施方案中，所述VL FR3包含GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:34)的序列。在一些实施方案中，所述VL FR4包含FGQGTKLEIK(SEQ ID NO:35)的序列。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含含有SEQ ID NO:32的序列的VL FR1、含有SEQ ID NO:33的序列的VL FR2、含有SEQ ID NO:34的序列的VL FR3以及含有SEQ ID NO:35的序列的VLFR4。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4(如表9A-9D所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或全部四个)选自VHFR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4(如表8A-8D所示)的框架区；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或全部四个)选自VLFR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4(如表9A-9D所示)的框架区。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO:25的序列的VH FR1、根据式V的VH FR2、含有SEQ ID NO:30的序列的VH FR3以及含有SEQ ID NO:31的序列的VHFR4；和轻链可变区，所述轻链可变区包含含有SEQ ID NO:32的序列的VL FR1、含有SEQ IDNO:33的序列的VL FR2、含有SEQ ID NO:34的序列的VL FR3以及含有SEQ ID NO:35的序列的VL FR4。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO:25的序列的VH FR1、含有选自SEQ ID NO:26-29的序列的VH FR2、含有SEQ ID NO:30的序列的VH FR3以及含有SEQ ID NO:31的序列的VH FR4；轻链可变区，所述轻链可变区包含含有SEQ ID NO:32的序列的VL FR1、含有SEQ ID NO:33的序列的VL FR2、含有SEQ ID NO:34的序列的VL FR3以及含有SEQ ID NO:35的序列的VL FR4。在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4(如表8A-8D所示)；和轻链可变区，所述轻链可变区包含抗体S7AB-H8、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4(如表9A-9D所示)。
Siglec-7活性
调节的免疫相关蛋白表达
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体可在与细胞中表达的Siglec-7蛋白结合后调节PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD11b、CD200R、CD163和/或CD206的表达。调节(例如增加或减少)表达可包括但不限于基因表达的调节、转录表达的调节或蛋白质表达的调节。可使用本领域中已知用于确定基因、转录物(例如，mRNA)和/或蛋白质表达的任何方法。例如，RNA印迹分析可用于确定抗炎介质基因表达水平，RT-PCR可用于测定抗炎介质转录的水平，并且蛋白质印迹分析可用于确定抗炎介质蛋白质水平。
如本文所用，如果PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD11b、CD200R、CD163和/或CD206在用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的受试者的一种或多种细胞中的表达与未用所述抗体治疗的相应受试者的一种或多种细胞中表达的PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD11b、CD200R、CD163和/或CD206的表达相比得到调节(例如，增加或减少)，则PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD11b、CD200R、CD163和/或CD206可具有调节的表达。在一些实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的相应受试者的一种或多种细胞中的PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206表达相比，所述抗体可将受试者的一种或多种细胞中的PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD11b、CD200R、CD163和/或CD206表达调节至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其它实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的相应受试者的一种或多种细胞中的PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD11b、CD200R、CD163和/或CD206表达相比，所述抗体将受试者的一种或多种细胞中的PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD11b、CD200R、CD163和/或CD206表达调节至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体可用于预防与PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD11b、CD200R、CD163和/或CD206的异常水平相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、混合性痴呆、克罗伊茨费尔特-雅格布病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、Tau蛋白病、那须哈科拉病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经***狼疮、***、帕金森氏病、路易体痴呆、多***萎缩症、夏伊-德拉戈综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿性病症、类肉瘤病、老化疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病、以及癌症(包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达Siglec-7的肿瘤、甲状腺癌)、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克氏感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和流感嗜血杆菌。
骨髓源性树突细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力的增强或正常化
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体可在与细胞中表达的Siglec-7蛋白结合后增强和/或正常化骨髓源性树突细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力。
在一些实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的相应受试者的一种或多种骨髓源性树突细胞中骨髓源性树突细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力相比，所述抗体可使骨髓源性树突细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力增强和/或正常化至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其它实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的相应受试者的一种或多种骨髓源性树突细胞中骨髓源性树突细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力相比，所述抗体可使受试者的一种或多种骨髓源性树突细胞中骨髓源性树突细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力增强和/或正常化至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体有益于预防与骨髓源性树突细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力降低或失调相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、混合性痴呆、克罗伊茨费尔特-雅格布病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、Tau蛋白病、那须哈科拉病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经***狼疮、***、帕金森氏病、路易体痴呆、多***萎缩症、夏伊-德拉戈综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿性病症、类肉瘤病、老化疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病、以及癌症(包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达Siglec-7的肿瘤、甲状腺癌)、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克氏感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和流感嗜血杆菌。
Siglec-7表达细胞的增殖和存活
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体可在与细胞上表达的Siglec-7蛋白结合后增加树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞和小神经胶质细胞的增殖、存活和/或功能。
小神经胶质细胞是一种类型的神经胶质细胞，其是脑和脊髓的驻留巨噬细胞并因此充当中枢神经***(CNS)中主动免疫防御的第一和主要形式。小神经胶质细胞构成脑内总胶质细胞群体的20％。小神经胶质细胞不断清除CNS的斑块、受损神经元和传染因子。脑和脊髓被认为是“免疫赦免”器官，因为它们通过一系列被称为血脑屏障的内皮细胞与身体其它部位分开，所述血脑屏障阻止大多数病原体到达易感神经组织。在传染因子直接引入脑或跨过血脑屏障的情况下，小神经胶质细胞必须迅速反应以限制炎症并在传染因子损伤敏感神经组织之前破坏传染因子。由于体内其它部位没有抗体(少数抗体足够小至跨过血脑屏障)，小神经胶质细胞必须能够识别异物、吞咽它们并充当活化T细胞的抗原呈递细胞。由于此过程必须迅速完成以防止潜在的致命损伤，所以小神经胶质细胞对CNS中的甚至小的病理变化也极其敏感。它们实现这种敏感性的部分原因是具有独特的钾通道，所述钾通道对细胞外钾的即使较小变化也做出反应。
如本文所用，本公开的巨噬细胞包括但不限于M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和M2巨噬细胞。如本文所用，本公开的小神经胶质细胞包括但不限于M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和M2小神经胶质细胞。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体可增加树突细胞、单核细胞和/或巨噬细胞上的CD80、CD83和/或CD86的表达。
如本文所用，如果用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖率、存活率和/或功能大于未用所述抗体治疗的相应受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖率、存活率和/或功能，则巨噬细胞、树突细胞、单核细胞、T细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖率、存活率和/或功能可包括增加的表达。在一些实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的相应受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖率、存活率和/或功能相比，所述抗体可使受试者中的树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖率、存活率和/或功能提高至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其它实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的相应受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖率、存活率和/或功能相比，所述抗体可使受试者中的树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖率、存活率和/或功能提高至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体有益于预防与树突细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、凋亡增加和/或功能的降低相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、混合性痴呆、克罗伊茨费尔特-雅格布病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、Tau蛋白病、那须哈科拉病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经***狼疮、***、帕金森氏病、路易体痴呆、多***萎缩症、夏伊-德拉戈综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿性病症、类肉瘤病、老化疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病、以及癌症(包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达Siglec-7的肿瘤、甲状腺癌)、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克氏感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和流感嗜血杆菌。
免疫细胞的Siglec-7依赖性活化
在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗Siglec-7抗体可增加细胞毒性T细胞、辅助T细胞或两者的活性。在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗Siglec-7抗体有益于预防与细胞毒性T细胞、辅助T细胞或两者的活性降低相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾病和/或疾患包括但不限于肿瘤，包括实体肿瘤如膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤以及甲状腺癌。
在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗Siglec-7抗体可诱导以下各项的增殖、存活、活性和/或数量的增加：T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞。在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗Siglec-7抗体在骨髓源性抑制细胞(MDSC)的存在下诱导以下各项的增殖、存活、活性和/或数目的增加：T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞。
如本文所用，如果在用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖率、存活率、活性和/或数目大于未用所述抗体治疗的相应受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖率、存活率、活性和/或数目，则T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖率、存活率、活性和/或数目可包括增加的比率。在一些实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的相应受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、活性和/或数目的水平相比，所述抗体可使受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、活性和/或数目提高至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其它实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的相应受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、活性和/或数目的水平相比，所述抗体可使受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、活性和/或数目提高至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
肿瘤相关免疫细胞的Siglec-7依赖性抑制
在一些实施方案中，本公开的激动剂抗Siglec-7抗体可降低CD14+骨髓细胞的活性、降低其增殖、降低其存活率、降低其功能性、降低其对肿瘤或淋巴器官(例如，脾和***)的浸润、降低其数目、降低肿瘤生长速率、减小肿瘤体积、降低或抑制骨髓源性抑制细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能和/或促进T调控性细胞或抑制性肿瘤包埋的免疫抑制树突细胞或肿瘤相关的巨噬细胞或骨髓源性抑制细胞的凋亡。在一些实施方案中，本公开的激动剂抗Siglec-7抗体有益于预防与一种或多种类型的免疫抑制细胞的活性相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患或疾病，包括但不限于肿瘤，包括不表达Siglec-7的实体肿瘤，如膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤、甲状腺癌以及表达Siglec-7的血液肿瘤，如白血病细胞。
在一些实施方案中，本公开的激动剂抗Siglec-7抗体可使CD14+骨髓细胞的数目增加、降低肿瘤生长速率、减小肿瘤体积、或降低或抑制骨髓源性抑制细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能。
在一些实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的相应受试者中CD14+骨髓细胞的数目、肿瘤生长速率、肿瘤体积或骨髓源性抑制细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能的水平相比，所述抗体可使受试者中CD14+骨髓细胞的数目降低、肿瘤生长速率降低、肿瘤体积减小或骨髓源性抑制细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能降低或抑制至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其它实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的相应受试者中CD14+骨髓细胞的数目、肿瘤生长速率、肿瘤体积或骨髓源性抑制细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能的水平相比，所述抗体可使受试者中CD14+骨髓细胞的数目降低、肿瘤生长速率降低、肿瘤体积减小或骨髓源性抑制细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能降低或抑制至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
检查点抑制剂疗法的功效增加
在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗Siglec-7抗体可提高一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法的功效，所述疗法如靶向CTLA4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的PD-1抑制剂或疗法。
在一些实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的接受一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法，如靶向CTLA4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的PD-1抑制剂或疗法的相应受试者中此类一种或多种疗法的有效性的水平相比，所述抗体可使接受一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法，如靶向CTLA4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的PD-1抑制剂或疗法的受试者中此类一种或多种疗法的功效提高至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其它实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的接受一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法，如靶向CTLA4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的PD-1抑制剂或疗法的相应受试者中此类一种或多种疗法的有效性的水平相比，所述抗体可使接受一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法，如靶向CTLA4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的PD-1抑制剂或疗法的受试者中此类一种或多种疗法的功效提高至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
化疗药物的功效增加
在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗Siglec-7抗体可增加一种或多种化学治疗剂的功效，所述化学治疗剂如吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、阿霉素
Figure BDA0002921167240001401
表柔比星
Figure BDA0002921167240001402
紫杉烷、紫杉醇
Figure BDA0002921167240001403
多西他赛
Figure BDA0002921167240001404
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0002921167240001405
卡铂
Figure BDA0002921167240001406
奥沙利铂
Figure BDA0002921167240001407
甲酰四氢叶酸、替莫唑胺
Figure BDA0002921167240001408
纳武单抗、西妥昔单抗、利妥昔单抗、抗PTK7-奥瑞斯他汀抗体-药物缀合物(PF-00647020)和/或抗EFNA4-加利车霉素缀合物。
在一些实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的接受此类一种或多种疗法的相应受试者中一种或多种化学治疗剂的有效性的水平相比，所述抗体可使接受此类一种或多种疗法的受试者中一种或多种化学治疗剂的功效提高至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在一些实施方案中，例如与未用本公开的抗Siglec-7抗体治疗的接受此类一种或多种疗法的相应受试者中一种或多种化学治疗剂的有效性的水平相比，所述抗体可使接受此类一种或多种疗法的受试者中一种或多种化学治疗剂的功效提高至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
抗体制备
本公开的抗Siglec-7抗体可涵盖多克隆抗体、单克隆抗体、人源化和嵌合抗体、人抗体、抗体片段(例如Fab、Fab'-SH、Fv、scFv和F(ab')2)、双特异性和多特异性抗体、多价抗体、异缀合物抗体、缀合抗体、文库衍生抗体、具有修饰效应子功能的抗体、含有抗体部分的融合蛋白以及包含抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它修饰构型，如具有本公开的Siglec-7蛋白的氨基酸残基的表位，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和共价修饰的抗体。抗Siglec-7抗体可以是人、鼠、大鼠或任何其它来源(包括嵌合或人源化抗体)。
(1)多克隆抗体
通常在动物中通过多次皮下(sc)或腹膜内(ip)注射相关抗原和佐剂来产生多克隆抗体，如多克隆抗Siglec-7抗体。使用双功能或衍生剂将相关抗原(例如，本公开的纯化或重组Siglec-7蛋白)缀合至在待免疫物种中具有免疫原性的蛋白质可以是有用的，所述蛋白质例如钥孔血蓝蛋白(KLH)、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂，所述双功能试剂或衍生剂例如马来酰亚胺苯甲酰磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基进行缀合)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2或R1N＝C＝NR，其中R和R1独立地是低级烷基基团。可使用的佐剂的实例包括弗氏完全佐剂(Freund's completeadjuvant)和MPL-TDM佐剂(单磷酰基脂质A、合成海藻糖二霉菌酸酯(synthetic trehalosedicorynomycolate))。免疫方案可由本领域的技术人员选择而无需过多实验。
通过将例如100μg(对于兔)或5μg(对于小鼠)的蛋白质或缀合物与3体积的弗氏完全佐剂组合并且将所述溶液皮内注射在多个部位来针对所需抗原、免疫原性缀合物或衍生物对动物进行免疫。一个月后，通过在多个部位皮下注射，用1/5至1/10的初始量的于弗氏完全佐剂中的肽或缀合物对动物加强免疫。七到十四天后，将动物放血并测定血清的抗体滴度。对动物加强免疫，直到效价稳定。缀合物也可在重组细胞培养物中制备为蛋白质融合体。此外，如明矾的聚集剂适用于增强免疫应答。
(2)单克隆抗体
单克隆抗体如单克隆抗Siglec-7抗体从基本上同质抗体的群体获得，即构成所述群体的各个抗体是相同的，除了可能以微量存在的可能的天然存在的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化，酰胺化)。因此，修饰语“单克隆”表明抗体的特征不是分立抗体的混合物。
例如，单克隆抗Siglec-7抗体可使用最初由Kohler等人,Nature,256:495(1975)描述的杂交瘤方法制备，或可通过重组DNA方法(美国专利号4,816,567)来制备。
在杂交瘤方法中，使小鼠或其它适当的宿主动物(诸如仓鼠)如上文所描述进行免疫以得到产生或能够产生将特异性结合至用于免疫的蛋白质(例如，本公开的纯化或重组Siglec-7蛋白)的抗体的淋巴细胞。可替代地，可体外免疫淋巴细胞。然后，使用合适的融合剂(诸如聚乙二醇)使淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合以形成杂交瘤细胞(Goding,MonoclonalAntibodies:Principles and Practice,第59-103页(Academic Press,1986))。
免疫剂通常将包括抗原蛋白(例如，本公开的纯化或重组Siglec-7蛋白)或其融合变体。一般来说，如果需要人来源的细胞，则使用外周血淋巴细胞(“PBL”)；而如果需要非人哺乳动物来源的细胞，则使用脾细胞或***细胞。然后使用合适的融合剂(如聚乙二醇)将淋巴细胞与永生化细胞系融合，以形成杂交瘤细胞。Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice,Academic Press(1986),第59-103页。
永生化细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，尤其是啮齿动物、牛或人来源的骨髓瘤细胞。通常，使用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。接种所制备的杂交瘤细胞，并使其在优选含有一种或多种抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞生长或存活的物质的合适的培养基中生长。例如，如果亲本骨髓瘤细胞缺乏酶次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT或HPRT)，那么用于杂交瘤的培养基通常将包括次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT培养基)，其是防止缺乏HGPRT的细胞的生长的物质。
优选的永生化骨髓瘤细胞是那些有效融合、支持通过所选择的抗体产生细胞的稳定高水平抗体产生，且对培养基(诸如HAT培养基)敏感的骨髓瘤细胞。在这些之中，优选的是鼠类骨髓瘤系，诸如源自MOPC-21和MPC-11小鼠肿瘤(可从Salk Institute CellDistribution Center,San Diego,California USA获得)的细胞系以及SP-2细胞及其衍生物(例如，X63-Ag8-653)(可从American Type Culture Collection,Manassas,VirginiaUSA获得)。人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系还被描述用于人单克隆抗体的产生(Kozbor,J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人,Monoclonal Antibody ProductionTechniques and Applications,第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987))。
可测定其中培养杂交瘤细胞的培养基中针对所需抗原的单克隆抗体(例如本公开的Siglec-7蛋白)的存在。优选地，可通过免疫沉淀法或通过体外结合测定(如放射免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA))来测定单克隆抗体的结合亲和力和特异性。此类技术和测定是本领域中已知的。例如，结合亲和力可通过Munson等人,Anal.Biochem.,107:220(1980)的斯卡查德分析(Scatchard analysis)确定。
在鉴定产生具有所需特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞后，就可通过有限稀释程序而将所述克隆进行亚克隆并且通过标准方法使其生长(Goding，同上)。用于这一目的的合适培养基包括例如D-MEM或RPMI-1640培养基。此外，杂交瘤细胞可作为哺乳动物体内的肿瘤在体内生长。
由亚克隆分泌的单克隆抗体可通过常规免疫球蛋白纯化程序(例如像蛋白质A-琼脂糖色谱法、羟基磷灰石色谱法、凝胶电泳、透析、亲和色谱法以及如上所述的其它方法)从培养基、腹水或血清中适合地分离。
抗Siglec-7单克隆抗体也可通过重组DNA方法来制备，如美国专利号4,816,567中公开和如上所述的那些方法。使用常规程序(例如，通过使用特异性地结合至编码鼠抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)来容易地将编码单克隆抗体的DNA分离和/或测序。杂交瘤细胞充当这类DNA的优选来源。一旦分离，就可将DNA置于表达载体中，然后将其转染至宿主细胞，如大肠杆菌细胞、猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、或不以另外的方式产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞中，以便在此类重组宿主细胞中合成单克隆抗体。关于在细菌中重组表达编码抗体的DNA的文献综述包括Skerra等人,Curr.Opin.Immunol.,5:256-262(1993)和Plückthun,Immunol.Rev.130:151-188(1992)。
在某些实施方案中，抗Siglec-7抗体可从使用在McCafferty等人,Nature,348:552-554(1990)中描述的技术产生的抗体噬菌体文库分离。Clackson等人,Nature,352:624-628(1991)和Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)描述了分别从噬菌体文库分离鼠抗体和人抗体。随后的公布描述通过链改组(Marks等人,Bio/Technology,10:779-783(1992))以及组合感染和体内重组作为构建非常大的噬菌体库的策略(Waterhouse等人,Nucl.Acids Res.,21:2265-2266(1993))来产生高亲和力(纳摩尔(“nM”)范围)的人抗体。因此，这些技术是用于分离具有所需特异性的单克隆抗体(例如，结合本公开的Siglec-7蛋白的那些)的传统单克隆抗体杂交瘤技术的可行替代方案。
还可例如通过取代人重链和轻链恒定结构域的编码序列代替同源鼠序列(美国专利号4,816,567；Morrison等人,Proc.Natl Acad.Sci.USA,81:6851(1984))或通过将非免疫球蛋白多肽的编码序列的全部或一部分共价连接至免疫球蛋白编码序列来修饰编码DNA的抗体或片段。通常，此类非免疫球蛋白多肽取代抗体的恒定结构域或它们取代抗体的一个抗原组合位点的可变结构域以产生嵌合二价抗体，所述抗体包含具有针对抗原的特异性的一个抗原组合位点和具有针对不同抗原的特异性的另一个抗原组合位点。
本文所述的单克隆抗体(例如，本公开的抗Siglec-7抗体或其片段)可单价制备，其制备是本领域中熟知的。例如，一种方法涉及免疫球蛋白轻链和修饰的重链的重组表达。重链通常在Fc区中的任何点处截短以便防止重链交联。或者，相关的半胱氨酸残基可被另一个氨基酸残基取代或被缺失以防止交联。体外方法也适合于制备单价抗体。消化抗体以产生其片段，尤其是Fab片段可使用本领域中已知的常规技术来完成。
可使用合成蛋白质化学中的已知方法(包括涉及交联剂的那些)在体外制备嵌合或杂合抗Siglec-7抗体。例如，可使用二硫化物交换反应或通过形成硫醚键来构建免疫毒素。用于此目的的适合试剂的实例包括亚氨基硫醇酯和甲基-4-巯基丁酰亚氨酸酯。
(3)人源化抗体
本公开的抗Siglec-7抗体或其抗体片段还可包括人源化或人抗体。非人(例如鼠)抗体的人源化形式是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fab、Fab'-SH、Fv、scFv、F(ab')2或抗体的其它抗原结合子序列)，其含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白(接受者抗体)，其中来自接受者的互补决定区(CDR)的残基被来自诸如小鼠、大鼠或兔的非人物种(供体抗体)的CDR的具有所需特异性、亲和力和能力的残基置换。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架残基被相应的非人残基置换。人源化抗体还可包含既不发现于接受者抗体中也不发现于输入CDR或框架序列中的残基。通常，所述人源化抗体将包含至少一个且通常两个可变结构域的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些CDR区且全部或基本全部的FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些FR区。所述人源化抗体优选地还将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常人免疫球蛋白的至少一部分。Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)和Presta,Curr.Opin.Struct.Biol.2:593-596(1992)。
用于人源化非人抗体的方法是本领域中熟知的。总体上，人源化抗体具有从非人来源引入其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称为“输入”残基，其通常取自“输入”可变结构域。人源化可基本上根据Winter和合作者，Jones等人,Nature321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science 239:1534-1536(1988)的方法，通过用啮齿动物CDR或CDR序列替换人抗体的相应序列来产生。因此，此类“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中基本上小于完整人可变结构域已被来自非人物种的对应序列取代。实际上，人源化抗体通常是人抗体，其中一些CDR残基和可能一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似部位的残基取代。
用于制备人源化抗体的人可变结构域轻链与重链的选择对降低抗原性来说是非常重要的。根据所谓的“最佳拟合”方法，针对已知的人可变结构域序列的整个文库筛选啮齿动物抗体的可变结构域的序列。与啮齿动物的序列最接近的人序列然后被接受作为人源化抗体的人框架(FR)。Sims等人,J.Immunol.,151:2296(1993)；Chothia等人,J.Mol.Biol.,196:901(1987)。另一种方法使用源自轻链或重链的特定亚组的所有人抗体的共有序列的特定框架。相同的框架可用于若干不同的人源化抗体。Carter等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 89:4285(1992)；Presta等人,J.Immunol.151:2623(1993)。
此外，重要的是抗体保留对抗原的高亲和力和其它有利的生物性质而被人源化。为实现这一目标，根据优选的方法，利用亲本序列和人源化序列的三维模型通过分析亲本序列和各种概念上人源化的产物的方法制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常可用并且是本领域的技术人员熟悉的。计算机程序可用，所述程序说明并展示选择的候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构。对这些展示的检查允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析可影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以这种方式，可从接受者和输入序列中选择FR残基并组合，以使得实现所需的抗体特征，如对一种或多种靶抗原(例如本公开的Siglec-7蛋白)的亲和力增加。通常，所述CDR残基直接并且最显著地牵涉于影响抗原结合。
考虑了各种形式的人源化抗Siglec-7抗体。例如，人源化抗Siglec-7抗体可以是抗体片段如Fab，其任选地与一种或多种细胞毒性剂缀合以便产生免疫缀合物。或者，人源化抗Siglec-7抗体可以是完整抗体，如完整IgG1抗体。
(4)抗体片段
在某些实施方案中，使用抗Siglec-7抗体片段而不是完整的抗Siglec-7抗体是有利的。较小的片段大小允许实现快速清除和更好的脑渗透。
已经开发了用于产生抗体片段的各种技术。传统上，这些片段是经由完整抗体的蛋白水解消化而衍生的(参见例如，Morimoto等人,J.Biochem.Biophys.Method.24:107-117(1992)；以及Brennan等人,Science 229:81(1985))。然而，现在可通过重组宿主细胞，例如使用编码本公开的抗Siglec-7抗体的核酸直接产生这些片段。所有Fab、Fv和scFv抗体片段都可在大肠杆菌中表达并且从其分泌，因而允许大量这些片段的直接生产。抗Siglec-7抗体片段还可从以上所讨论的抗体噬菌体文库分离。或者，Fab'-SH片段可直接从大肠杆菌中回收并且化学偶联以便形成F(ab')2片段(Carter等人,Bio/Technology 10:163-167(1992))。根据另一种方法，F(ab')2片段可直接从重组宿主细胞培养物中分离。具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab')2抗体片段的产生描述于美国专利号5,869,046中。在其它实施方案中，所选择的抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO 93/16185；美国专利号5,571,894和美国专利号5,587,458。抗Siglec-7抗体片段也可以是“线性抗体”，例如，如美国专利5,641,870中所描述。此类线性抗体片段可以是单特异性的或双特异性的。
(5)双特异性和多特异性抗体
双特异性抗体(BsAb)是对至少两种不同表位，包括相同或另一种蛋白质(例如本公开的一种或多种Siglec-7蛋白)上的那些表位具有结合特异性的抗体。或者，BsAb的一部分可配置为结合至靶Siglec-7抗原，并且另一部分可与结合至第二种蛋白质的臂组合。此类抗体可源自全长抗体或抗体片段(例如F(ab')2双特异性抗体)。
用于制备双特异性抗体的方法是本领域中已知的。全长双特异性抗体的传统产生是基于两个免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，其中两个链具有不同的特异性。Millstein等人,Nature,305:537-539(1983)。归因于免疫球蛋白重链和轻链的随机搭配，这些杂交瘤(四链瘤)产生10种不同抗体分子的一种潜在混合物，其中只有一个具有正确的双特异性结构。通常通过亲和色谱步骤进行的正确分子的纯化十分繁琐，并且产物产率是低的。类似的程序公开于WO 93/08829和Traunecker等人,EMBO J.,10:3655-3659(1991)中。
根据一种不同的方法，具有所需结合特异性的抗体可变结构域(抗体-抗原组合位点)融合至免疫球蛋白恒定结构域序列。所述融合优选与免疫球蛋白重链恒定结构域一起，所述免疫球蛋白重链恒定结构域包含铰链、CH2和CH3区的至少一部分。优选具有存在于至少一个融合体中的包含轻链结合所需的位点的第一重链恒定区(CH1)。将编码免疫球蛋白重链融合和(如果需要的话)免疫球蛋白轻链的DNA***单独表达载体，并且共同转染至合适宿主生物体中。当在构建中使用的三条多肽链的不等比率提供最佳产率时，这在实施方案中为调节三种多肽片段的相互比率提供了极大的灵活性。然而，当相等比率的至少两条多肽链的表达产生高产率或当所述比率不具有特定显著性时，有可能将两个或所有三条多肽链的编码序列***一个表达载体中。
在这种方法的优选实施方案中，双特异性抗体由在一个臂中具有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链和在另一个臂中的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(从而提供第二结合特异性)组成。据发现这种不对称结构有助于将所需的双特异性化合物与不想要的免疫球蛋白链组合分开，因为在仅一半的双特异性分子中存在免疫球蛋白轻链提供了简单的分离方式。这一方法在WO 94/04690中公开。关于产生双特异性抗体的进一步细节，参见，例如，Suresh等人,Methods in Enzymology121:210(1986)。
根据在WO 96/27011或美国专利号5,731,168中描述的另一种方法，一对抗体分子之间的界面可被工程化以便将从重组细胞培养物回收的异源二聚体的百分比最大化。优选的界面包含抗体恒定结构域的CH3区的至少一部分。在这种方法中，第一抗体分子的界面的一个或多个小氨基酸侧链用更大侧链(例如，酪氨酸或色氨酸)来置换。通过将大的氨基酸侧链置换为较小的侧链(例如，丙氨酸或苏氨酸)，在第二抗体分子的界面上生成与一条或多条大的侧链相同或相似大小的补偿“腔”。这提供了用于增加异源二聚体的产率超过其它不需要的最终产物如同源二聚体的机制。
已经在文献中描述了从抗体片段产生双特异性抗体的技术。例如，双特异性抗体可使用化学键联来制备。Brennan等人,Science 229:81(1985)描述了一种程序，其中完整抗体被蛋白水解裂解以产生F(ab')2片段。这些片段在存在二硫醇复合剂***的情况下还原，以便稳定邻近的二硫醇并且防止分子间二硫化物形成。所产生的Fab'片段然后被转化为硫代硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物。然后将Fab'-TNB衍生物之一再转化为Fab'-TNB衍生物以形成双特异性抗体。所产生的双特异性抗体可用作酶的选择性固定剂。
Fab'片段可直接从大肠杆菌中回收并化学偶联以形成双特异性抗体。Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225(1992)描述了完全人源化的双特异性抗体F(ab')2分子的产生。每个Fab'片段分别从大肠杆菌分泌并在体外进行定向化学偶联以形成双特异性抗体。由此形成的双特异性抗体能够结合至过度表达ErbB2受体的细胞和正常人T细胞，以及触发人细胞毒性淋巴细胞对人乳腺肿瘤靶标的溶解活性。
还已经描述了直接自重组细胞培养物制备和分离二价抗体片段的各种技术。例如，已使用亮氨酸拉链产生了二价抗体。Kostelny等人,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992)。来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合与两种不同抗体的Fab'部分连接。抗体同二聚体在铰链区处还原以形成单体，并且然后再次氧化以形成抗体异二聚体。由Hollinger等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)描述的“双抗体”技术已经提供了用于制备双特异性/二价抗体片段的替代机制。所述片段包含通过接头与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)，所述接头太短而不允许同一个链上的两个结构域之间的配对。因此，一个片段的VH和VL结构域被迫与另一个片段的互补VL和VH结构域配对，从而形成两个抗原结合位点。还已经报道了通过使用单链Fv(sFv)二聚体制备双特异性/二价抗体片段的另一种策略。参见Gruber等人,J.Immunol.,152:5368(1994)。
还考虑了具有超过两个价态的抗体。例如，可以制备三特异性抗体。Tutt等人,J.Immunol.147:60(1991)。
示例性双特异性抗体可结合至给定分子上的两个不同表位(例如，本公开的Siglec-7蛋白)。或者，靶向Siglec-7信号传导组分的臂可与结合至白细胞上的触发分子如T细胞受体分子(例如CD2、CD3、CD28或B7)或IgG的Fc受体(FcγR)(如FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)的臂组合，以便使细胞防御机制集中于表达特定蛋白质的细胞。双特异性抗体还可用于将细胞毒性剂定位至表达特定蛋白质的细胞。此类抗体拥有蛋白质结合臂和结合细胞毒性剂或放射性核素螯合剂(如EOTUBE、DPTA、DOTA或TETA)的臂。另一种目标双特异性抗体结合目标蛋白质并进一步结合组织因子(TF)。
(6)多价抗体
与二价抗体相比，多价抗体可由表达抗体所结合的抗原的细胞来更快地内在化(和/或异化)。本公开的抗Siglec-7抗体或其抗体片段可以是具有三个或更多个抗原结合位点的多价抗体(它们是IgM类别以外的)(例如，四价抗体)，所述抗体可通过编码抗体的多肽链的核酸的重组表达来容易地产生。多价抗体可包含二聚化结构域和三个或更多个抗原结合位点。优选的二聚化结构域包含Fc区或铰链区。在这种情形下，抗体将包含Fc区和Fc区的氨基末端的三个或更多个抗原结合位点。本文优选的多价抗体含有3个至约8个、但优选4个抗原结合位点。多价抗体含有至少一条多肽链(且优选两条多肽链)，其中一条或多条多肽链包含两个或更多个可变结构域。例如，所述一条或多条多肽链可包含VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc，其中VD1是第一可变结构域，VD2是第二可变结构域，Fc是Fc区的一条多肽链，X1和X2表示氨基酸或多肽，并且n是0或1。类似地，一条或多条多肽链可包含VH-CH1-柔性接头-VH-CH1-Fc区链；或VH-CH1-VH-CH1-Fc区链。本文的多价抗体优选地进一步包含至少两个(且优选四个)轻链可变结构域多肽。本文的多价抗体可(例如)包含约两个至约八个轻链可变结构域多肽。在此考虑的轻链可变结构域多肽包含轻链可变结构域，并且任选地进一步包含CL结构域。多价抗体可识别Siglec-7抗原以及但不限于另外的抗原Aβ肽、抗原或α突触核蛋白(alpha synuclain)蛋白抗原或Tau蛋白抗原或TDP-43蛋白抗原或朊病毒蛋白抗原或亨廷顿蛋白或RAN、翻译产物抗原，包括由甘氨酸-丙氨酸(GA)、甘氨酸-脯氨酸(GP)、甘氨酸-精氨酸(GR)、脯氨酸-丙氨酸(PA)或脯氨酸-精氨酸(PR)构成的二肽重复序列(DPR肽)，胰岛素受体、***受体、转铁蛋白受体或促进跨血脑屏障的抗体转移的任何其它抗原。
(7)异缀合物抗体
异缀合物抗体也在本公开的范围内。异缀合物抗体由两种共价连接的抗体(例如，本公开的抗Siglec-7抗体或其抗体片段)组成。举例来说，异缀合物中的一个抗体可偶联至抗生物素蛋白，另一个抗体可偶联至生物素。此类抗体已经(例如)被提出使免疫***细胞靶向至非期望的细胞(美国专利号4,676,980)并且已经用于治疗HIV感染。国际公布号WO91/00360、WO 92/200373和EP 0308936。考虑可使用合成蛋白质化学中的已知方法(包括涉及交联剂的那些)在体外制备所述抗体。例如，可使用二硫化物交换反应或通过形成硫醚键来构建免疫毒素。用于此目的的合适试剂的实例包括亚氨基硫醇酯和甲基-4-巯基丁酰亚胺酸酯以及例如在美国专利号4,676,980中公开的那些。异缀合物抗体可使用任何便利的交联方法来制成。合适交联剂在本领域中是熟知的，并且与许多交联技术一起在美国专利号4,676,980中公开。
(8)效应子功能工程化
修饰本公开的抗Siglec-7抗体以改变效应子功能和/或增加抗体的血清半衰期也可以是合乎需要的。例如，恒定区上的Fc受体结合位点可被修饰或突变以除去或降低对某些Fc受体如FcγRI,FcγRII和/或FcγRIII的结合亲和力。在一些实施方案中，通过除去抗体的Fc区的N-糖基化(例如，在IgG的CH 2结构域中)，效应子功能受损。在一些实施方案中，通过修饰人IgG的诸如233-236、297和/或327-331的区域来使效应子功能受损，如PCT WO99/58572和Armour等人,Molecular Immunology 40:585-593(2003)；Reddy等人,J.Immunology164:1925-1933(2000)中所描述。
为了增加抗体的血清半衰期，可例如将补救受体结合表位掺入到抗体(尤其是抗体片段)中，如在美国专利号5,739,277中所描述的。如本文所用，术语“补救受体结合表位”是指引起IgG分子的体内血清半衰期的增加的IgG分子(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)的Fc区的表位。
(9)其它氨基酸序列修饰
还考虑了本公开的抗Siglec-7抗体或其抗体片段的氨基酸序列修饰。例如，可能需要改善抗体或抗体片段的结合亲和力和/或其它生物性质。抗体或抗体片段的氨基酸序列变体可通过将适当核苷酸变化引入编码抗体或抗体片段的核酸中或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如抗体的氨基酸序列内的残基的缺失和/或***和/或取代。只要最终构建体具有所需特征(即与本公开的Siglec-7蛋白结合或物理相互作用的能力)，则进行缺失、***和取代的任何组合以达到最终构建体。氨基酸变化也可改变抗体的翻译后过程，如改变糖基化位点的数目或位置。
一种可用于鉴定抗Siglec-7抗体中为优选诱变位置的某些残基或区域的方法称作“丙氨酸扫描诱变”，如由Cunningham和Wells在Science,244:1081-1085(1989)中所描述。在此，鉴定残基或靶残基的组(例如，带电荷的残基诸如arg、asp、his、lys和glu)，并用中性或带负电荷的氨基酸(最优选丙氨酸或聚丙氨酸)置换以影响氨基酸与靶抗原的相互作用。然后，对于取代显示功能敏感度的那些氨基酸位置通过在(或针对)取代位点引入另外的或其它变体而被改善(refined)。因此，尽管用于引入氨基酸序列变异的位点被预先确定，但本身突变的性质不需要预先确定。例如，为了分析给定位点处突变的表现，在靶密码子或区域进行丙氨酸扫描或随机诱变，并筛选所表达的抗体变体的所需活性。
氨基酸序列***包括长度在一个残基至含有一百个或更多个残基的多肽的范围内的氨基(“N”)和/或羧基(“C”)末端融合，以及具有单个或多个氨基酸残基的序列内***。末端***的实例包括具有N末端甲硫氨酰基残基的抗体或融合至细胞毒性多肽的抗体。抗体分子的其它***变体包括抗体的N端或C端与增加抗体的血清半衰期的酶或多肽的融合。
另一种类型的变体是氨基酸取代变体。这些变体在抗体分子中有至少一个氨基酸残基被不同的残基取代。取代诱变最感兴趣的位点包括高变区，但也考虑了FR改变。保守性取代展示于以下表D中的标题“优选取代”下。如果此类取代产生生物活性的改变，则可引入在表D中命名为“示例性取代”的、或如下进一步参考氨基酸类别所述的更多实质性改变，并且筛选产物。
表D：氨基酸取代
Figure BDA0002921167240001541
Figure BDA0002921167240001551
抗体的生物性质的实质性修饰通过选择取代来实现，所述取代对维持(a)取代区域中的多肽主链的结构，例如呈薄片或螺旋构象；(b)分子在靶位点处的电荷或疏水性；或(c)侧链体积的影响显著不同。基于共同的侧链性质将天然存在的残基分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；
(2)中性亲水性：cys、ser、thr；
(3)酸性：asp、glu；
(4)碱性：asn、gln、his、lys、arg；
(5)影响链取向的残基：gly、pro；以及
(6)芳族：trp、tyr、phe。
非保守性取代需要将这些类别中的一类的成员更换成另一类别。
不参与维持抗体的适当构象的任何半胱氨酸残基还可被(通常用丝氨酸)取代以便改进分子的氧化稳定性并且防止异常交联。相反，可将半胱氨酸键添加至抗体以改进它的稳定性(特别是在抗体是如Fv片段的抗体片段的情况下)。
一种特别优选类型的取代变体涉及取代亲本抗体(例如，人源化或人抗Siglec-7抗体)的一个或多个高变区残基。一般而言，选择用于进一步发育的所得变体相对于产生它们的亲本抗体将具有改善的生物学性质。用于产生此类替代变体的便利方式涉及使用噬菌体展示的亲和力成熟。简言之，若干高变区位点(例如，6-7个位点)被突变以在每个位点产生所有可能的氨基酸取代。如此产生的抗体变体以单价方式从丝状噬菌体颗粒展示，作为与每个颗粒内包装的M13的基因III产物的融合物。然后，如本文所公开，针对噬菌体展示变体的生物活性(例如，结合亲和力)来筛选它们。为了鉴定用于修饰的候选高变区位点，可进行丙氨酸扫描诱变以鉴定对抗原结合有显著贡献的高变区残基。或者或另外，分析抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体与抗原(例如，本公开的Siglec-7蛋白)之间的接触点可能是有益的。根据本文阐述的技术，此类接触残基和相邻残基是用于取代的候选物。一旦产生了此类变体，就如本文所述对一组变体进行筛选，并且可选择在一种或多种相关测定中具有优异性质的抗体用于进一步发育。
抗体的另一种类型的氨基酸变体改变抗体的原始糖基化模式。改变是指缺失抗体中发现的一个或多个碳水化合物部分，和/或添加不存在于抗体中的一个或多个糖基化位点。
抗体的糖基化通常是N-连接的或O-连接的。N-连接是指碳水化合物部分连接于天冬酰胺残基的侧链。其中X是除脯氨酸之外的任何氨基酸的三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸是碳水化合物部分酶促连接于天冬酰胺侧链的识别序列。因此，在多肽中的这些三肽序列中的任何一个的存在产生潜在糖基化位点。O-连接的糖基化是指糖N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一与羟氨基酸连接，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，不过也可以使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。
糖化位点至抗体的添加宜通过改变氨基酸序列以使得其含有上述三肽序列中的一个或多个来实现(对于经N连接的糖化位点)。改变也可通过对原始蛋白的序列的一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基的添加或取代来造成(对于O-连接的糖基化位点)。
编码抗IgE抗体的氨基酸序列变体的核酸分子通过本领域中已知的多种方法来制备。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然存在的氨基酸序列变体的情况下)或通过抗体(例如本公开的抗Siglec-7抗体)或抗体片段的先前制备的变体或非变体型式的寡核苷酸介导(或定点)诱变、PCR诱变和盒式诱变制备。
(10)抗体缀合物
本公开的抗Siglec-7抗体或其抗体片段可与可检测标记、毒素或治疗剂缀合。可使用本领域中已知用于将分子如可检测标记、毒素或治疗剂缀合至抗体的任何合适的方法。
例如，药物缀合涉及将生物活性细胞毒性(抗癌剂)有效负载或药物偶联至特异性地靶向某种肿瘤标志物(例如，理想地，仅在肿瘤细胞之中或之上发现的蛋白质)的抗体。抗体在体内追踪这些蛋白质并将其自身附接到癌细胞表面。抗体与靶蛋白(抗原)之间的生物化学反应在肿瘤细胞中触发信号，其然后与细胞毒素一起吸收或内化抗体。在ADC被内化后，细胞毒性药物被释放并杀死癌症。由于这种靶向作用，理想情况下所述药物具有较低的副作用，并且比其它化学治疗药物给出更宽的治疗窗口。所公开的用于缀合抗体的技术是本领域中已知的(参见例如，Jane de Lartigue,OncLive2012年7月5日；ADC Review onantibody-drug conjugates；和Ducry等人,(2010).Bioconjugate Chemistry21(1):5–13)。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体可缀合至选自以下的毒素：蓖麻毒素、蓖麻毒素A链、多柔比星、道诺霉素、类美登素、紫杉醇、溴化乙锭、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、二羟基炭疽菌素二酮、放线菌素、白喉毒素、假单胞菌外毒素(PE)A、PE40、相思豆毒素、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-八叠球菌素、白树毒素、丝林霉素(mitogellin)、局限曲菌素(retstrictocin)、酚霉素、伊诺霉素、麻疯树逆境蛋白、巴豆毒素、加利车霉素、肥皂草抑制剂、糖皮质激素、奥瑞斯他汀、金霉素(auromycin)、钇、铋、康普瑞汀(combrestatin)、倍癌霉素(duocarmycins)、多拉司他汀、cc1065以及顺铂。
(11)其它抗体修饰
本公开的抗Siglec-7抗体或其抗体片段可进一步修饰以含有本领域中已知且容易获得的另外的非蛋白质部分。优选地，适合衍生化抗体的部分是水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)、和右旋糖酐或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性可具有制造优势。所述聚合物可具有任何分子量，并且可为分支或未分支的。连接到抗体的聚合物的数目可变化，并且如果连接多于一个聚合物，那么其可为相同或不同分子。一般来说，用于衍生化的聚合物的数目和/或类型可基于包括但不限于有待改善的抗体的特定性质或功能、抗体衍生物是否将在限定定条件下用于疗法中等考虑因素加以确定。此类技术和其它合适的制剂公开于Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,Alfonso Gennaro,编,PhiladelphiaCollege of Pharmacy and Science(2000)。
结合测定和其它测定
可例如通过已知的方法如ELISA、表面等离子体共振(SPR)、蛋白质印迹等来测试本公开的抗Siglec-7抗体的抗原结合活性。
在一些实施方案中，竞争测定可用于鉴定与本文所述的任何抗体竞争的抗体。在一些实施方案中，竞争测定可用于鉴定与表1-5、6A-6C、7A-7C、8A-8D、9A-9D、10和11中列出的或包含选自以下的抗体的重链可变区和轻链可变区的任何抗体竞争结合至Siglec-7的抗体：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2。在某些实施方案中，这种竞争性抗体结合至由表1-5、6A-6C、7A-7C、8A-8D、9A-9D、10和11中列出的或包含选自以下的抗体的重链可变区和轻链可变区的任何抗体结合的相同表位(例如，线性或构象表位)：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1或S7AB-H8.45.2。用于作图抗体所结合的表位的详细示例性方法提供于Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols,”于Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中。
在示例性竞争测定中，将固定的Siglec-7或细胞表面上表达Siglec-7的细胞在包含结合至Siglec-7的第一标记抗体(例如人或非人灵长类动物)和第二未标记抗体的溶液中孵育，所述第二未标记抗体正在针对其与所述第一抗体竞争结合至Siglec-7的能力进行测试。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定的Siglec-7或表达Siglec-7的细胞在包含第一标记抗体而不含第二未标记抗体的溶液中孵育。在容许第一抗体与Siglec-7结合的条件下孵育之后，移除过量未结合的抗体，并且测量与固定的Siglec-7或表达Siglec-7的细胞缔合的标记的量。如果相对于对照样品，与固定的Siglec-7或表达Siglec-7的细胞缔合的标记的量在测试样品中基本上降低，则然后指示第二抗体与第一抗体竞争结合至Siglec-7。参见Harlow和Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
核酸、载体和宿主细胞
可使用例如如美国专利号4,816,567中所描述的重组方法和组合物来产生本公开的抗Siglec-7抗体。在一些实施方案中，提供了具有编码本公开的任何抗Siglec-7抗体的核苷酸序列的分离的核酸。此类核酸可编码含有抗Siglec-7抗体的VL的氨基酸序列和/或含有抗Siglec-7抗体的VH的氨基酸序列(例如所述抗体的轻链和/或重链)。在一些实施方案中，提供一种或多种含有此类核酸的载体(例如表达载体)。在一些实施方案中，还提供一种含有这种核酸的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞含有(例如已用以下转导)：(1)含有编码含有抗体的VL的氨基酸序列和含有抗体的VH的氨基酸序列的核酸的载体，或(2)含有编码含有抗体的VL的氨基酸序列的核酸的第一载体和含有编码含有抗体的VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一些实施方案中，宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。
提供了制备本公开的抗Siglec-7抗体的方法。在一些实施方案中，所述方法包括在适合表达抗体的条件下培养含有编码抗Siglec-7抗体的核酸的本公开的宿主细胞。在一些实施方案中，随后从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。
为了重组产生本公开的抗Siglec-7抗体，分离编码抗Siglec-7抗体的核酸并将所述核酸***到一个或多个载体中以进一步在宿主细胞中克隆和/或表达。此类核酸可易于使用常规程序(例如通过使用能够特异性结合至编码抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)进行分离和测序。
本文所述的含有编码本公开的任何抗Siglec-7抗体的核酸序列或其片段多肽(包括抗体)的合适载体包括但不限于克隆载体和表达载体。合适的克隆载体可根据标准技术构建，或者可选自本领域中可用的大量克隆载体。尽管选择的克隆载体可根据预期使用的宿主细胞而变化，但有用的克隆载体通常具有自我复制的能力，可具有针对特定限制性内切核酸酶的单一靶标，和/或可携带可用于选择含有载体的克隆的标记的基因。合适的实例包括质粒和细菌病毒，例如，pUC18、pUC19、Bluescript(例如，pBS SK+)及其衍生物、mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA以及穿梭载体如pSA3和pAT28。这些和许多其它克隆载体可从商业供应商如BioRad、Strategene和Invitrogen获得。
表达载体通常是含有本公开的核酸的可复制多核苷酸构建体。所述表达载体通常可在宿主细胞中作为游离基因或染色体DNA的整体部分复制。合适的表达载体包括但不限于PCT公布号WO 87/04462中公开的质粒、病毒载体，包括腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、粘粒和表达载体。载体组分通常可包括但不限于以下中的一种或多种：信号序列；复制起点；一种或多种标记基因；合适的转录控制元件(如启动子、增强子和终止子)。为了表达(即翻译)，通常还需要一种或多种翻译控制元件，如核糖体结合位点、翻译起始位点和终止密码子。
含有目标核酸的载体可通过多种适当方式中的任一种引入宿主细胞，所述方式包括电穿孔；使用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-葡聚糖或其它物质转染；微粒轰击；脂质体转染；以及感染(例如，在载体是传染因子如牛痘病毒的情况下)。引入载体或多核苷酸的选择通常将取决于宿主细胞的特征。在一些实施方案中，所述载体含有核酸，所述核酸含有编码本公开的抗Siglec-7抗体的一条或多条氨基酸序列。
用于克隆或表达抗体编码载体的合适宿主细胞包括原核或真核细胞。例如，本公开的抗Siglec-7抗体可在细菌中产生，特别是当不需要糖基化和Fc效应子功能时。关于在细菌中表达抗体片段和多肽(例如，美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523；以及Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo,编,Humana Press,Totowa,NJ,2003),第245-254页，其描述在大肠杆菌中表达抗体片段)。在表达之后，抗体可从细菌细胞糊状物分离于可溶性部分中并且可进一步纯化。
除原核生物之外，诸如丝状真菌或酵母的真核微生物也为适于抗体编码性载体的克隆或表达宿主，包括糖基化路径已被“人源化”，从而产生具有部分或完全人糖基化型态的抗体的真菌和酵母菌株(例如，Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)；以及Li等人,Nat.Biotech.24:210-215(2006))。
用于表达糖基化抗体的合适宿主细胞还可来源于多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已鉴别众多可连同昆虫细胞一起使用的杆状病毒株，尤其是用于转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞。植物细胞培养物也可用作宿主(例如，美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429，其描述用于在转基因植物中产生抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
脊椎动物细胞也可用作宿主。例如，可使用适于悬浮生长的哺乳动物细胞系。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它实例是由SV40转化的猴肾CV1细胞系(COS-7)；人胚肾系(如例如Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977)中所述的293或293细胞)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞尔托利细胞(sertoli cells)(如例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述的TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人***细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；如例如Mather等人,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述的TRI细胞；MRC 5细胞；以及FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；以及骨髓瘤细胞系，如Y0、NS0及Sp2/0。对于适于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,NJ),第255-268页(2003)。
药物组合物
本公开的抗Siglec-7抗体可通过将抗Siglec-7抗体与适当药学上可接受的载体或稀释剂组合而并入用于治疗性施用的各种制剂中，并且可被配制成固体、半固体、液体或气体形式的制剂。此类制剂的实例包括但不限于片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、软膏剂、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球以及气雾剂。药物组合物可包括(取决于所需的制剂)药学上可接受的、非毒性稀释剂载体，所述稀释剂载体是常见用来配制用于动物或人施用的药物组合物的媒介物。选择所述稀释剂以免影响组合的生物活性。此类稀释剂的实例包括但不限于蒸馏水、缓冲水、生理盐水、PBS、林格氏溶液(Ringer’s solution)、右旋糖溶液和汉克氏溶液(Hank’s solution)。本公开的药物组合物或制剂还可包含其它载体、佐剂或非毒性非治疗性非免疫原性稳定剂、赋形剂等。所述组合物还可包含接近生理条件的另外物质，例如pH调节和缓冲剂、毒性调节剂、润湿剂和洗涤剂。
本公开的药物组合物还可例如包含诸如氧化剂的多种稳定剂中的任一种。当所述药物组合物包含多肽时，所述多肽可与多种熟知的化合物复合，所述化合物增强多肽的体内稳定性或另外增强其药理学性质(例如，增加多肽的半衰期、降低其毒性并增强溶解或吸收)。此类修饰或复合剂的实例包括但不限于硫酸盐、葡糖酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐。组合物的多肽也可与增强其体内属性的分子复合。此类分子包括但不限于碳水化合物、多元胺、氨基酸、其它肽、离子(例如，钠、钾、钙、镁、锰)和脂质。
适用于多种施用类型的制剂的另外实例可见于Remington’s PharmaceuticalSciences,Mace Publishing Company,Philadelphia,PA,第17版(1985)中。对于药物递送方法的简评，参见Langer,Science249:1527-1533(1990)。
对于口服施用，所述活性成分可以固体剂型(如胶囊剂、片剂和粉剂)施用或液体剂型(酏剂、糖浆剂和混悬剂)施用。可将活性组分与非活性成分和粉状载体一起封装在明胶胶囊中，所述粉状载体如葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露糖醇、淀粉、纤维素或纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸、糖精钠、滑石、碳酸镁。可添加以提供所需的颜色、味道、稳定性、缓冲能力、分散或其它已知所需的特征的另外非活性成分的实例是氧化铁红、硅胶、月桂基硫酸钠、二氧化钛以及可食用白色墨水。类似的稀释剂可用于制造压缩片剂。片剂和胶囊剂都可制成持续释放产品，以在数小时内提供药物的连续释放。压缩片剂可以是糖衣或薄膜包衣以掩蔽任何令人不愉快的味道并保护片剂不受大气的影响，或肠溶包衣以在胃肠道中选择性崩解。用于口服施用的液体剂型可含有着色剂和调味剂以增加患者的接受性。
用于胃肠外施用的制剂包括水性和非水性等张无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和致使制剂与预定接受者的血液等张的溶质；及水性和非水性无菌混悬液，其可包括悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂以及防腐剂。
用来配制药物组合物的组分优选地具有高纯度并且基本上不含潜在有害的污染物(例如，至少国家食品(NF)级、通常至少分析级并且更通常至少药物级)。此外，意图用于体内使用的组合物通常为无菌的。为了达到在使用之前必须合成给定的化合物的程度，所得到的产物通常基本上不含任何潜在的毒性剂、具体为任何内毒素，所述毒性剂可在合成或纯化过程期间存在。用于胃肠外施用的组合物也为无菌的，基本上等渗的并且在GMP条件下制得。
为了在脑或中枢神经***中保留和稳定化，可优化制剂。当药剂被施用到颅隔室中时，希望药剂保留在隔室中，并且不扩散或以其它方式跨过血脑屏障。稳定技术包括交联、多聚化或连接至诸如聚乙二醇、聚丙烯酰胺、中性蛋白质载体等的基团以便实现分子量的增加。
用于增加保留的其它策略包括在生物可降解或生物可侵蚀植入物中包埋本公开的抗Siglec-7抗体。治疗活性剂的释放速率由穿过聚合物基质的运输速率和植入物的生物降解来控制。药物通过聚合物屏障的运输还将受到化合物溶解度、聚合物亲水性、聚合物交联程度、聚合物在吸水时的膨胀以便使聚合物屏障更易透过药物、植入物的几何形状等影响。所述植入物具有与被选作植入部位的区域的大小和形状相称的尺寸。植入物可以是颗粒、片、贴片、斑块、纤维、微胶囊等，并且可具有与所选择的***部位相容的任何大小或形状。
所述植入物可为整体的，即活性剂均匀地分布于整个聚合物基质中或包封，其中活性剂的储库由聚合物基质包封。待使用的聚合物组合物的选择将随施用部位、所需的治疗时间段、患者耐受性、待治疗的疾病的性质等而变化。聚合物的特性将包括在植入部位的生物降解性、与目标药剂的相容性、易于包封、在生理环境中的半衰期。
可使用的生物可降解聚合物组合物可以是有机酯或醚，其在降解时产生生理上可接受的降解产物，包括单体。酸酐、酰胺、原酸酯等本身或与其它单体组合可使用。聚合物将是缩聚物。聚合物可以是交联的或非交联的。另外特别关注羟基脂肪族羧酸聚合物(呈均聚物或共聚物)及多糖。关注的聚酯包括D-乳酸、L-乳酸、外消旋乳酸、乙醇酸、聚己内酯及其组合的聚合物。通过使用L-乳酸酯或D-乳酸酯获得缓慢生物降解的聚合物，而使用外消旋物时降解基本上增强。特别关注乙醇酸和乳酸的共聚物，其中通过乙醇酸与乳酸的比率控制生物降解速率。最快降解的共聚物具有大致相等量的乙醇酸和乳酸，其中均聚物更耐降解。乙醇酸与乳酸的比率也将影响植入物的脆弱性，其中对于较大的几何形状，更柔性的植入物是合乎需要的。目标多糖是海藻酸钙和官能化纤维素，尤其是特征为不溶于水、分子量为约5kD至500kD的羧甲基纤维素酯等。生物可降解水凝胶也可用于本公开的植入物中。水凝胶通常是一种共聚物材料，其特征在于吸收液体的能力。可使用的示例性生物可降解水凝胶在以下文献中进行了描述：Heller in:Hydrogels in Medicine and Pharmacy,N.A.Peppes编,第III卷,CRC Press,Boca Raton,Fla.,1987,第137-149页。
药物剂量
含有本公开的抗Siglec-7抗体的本公开的药物组合物可根据已知的方法如作为团注静脉内施用或通过在一段时间内连续输注、通过肌内、腹膜内、脑脊髓内、颅内、脊柱内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、口服、局部或吸入途径施用至需要用所述抗体治疗的个体(优选人)。
本公开的药物组合物的剂量和所需药物浓度可根据预期的特定用途而变化。确定合适的施用剂量或途径完全在普通技术人员的技能范围内。动物实验为确定人疗法的有效剂量提供了可靠的指导。有效剂量的物种间缩放可按照以下文献中描述的原则进行：Mordenti,J.和Chappell,W.“The Use of Interspecies Scaling in Toxicokinetics,”In Toxicokinetics and New Drug Development,Yacobi等人,编,Pergamon Press,NewYork 1989,第42-46页。
为了体内施用本公开的本公开的任何抗Siglec-7抗体，正常剂量的量可取决于施用途径，从每天约10ng/kg至约100mg/kg的个体体重或更多、优选约1mg/kg/天至10mg/kg/天变化。为在若干天或更长时间内重复施用，根据待治疗的疾病、病症或疾患的严重程度，可持续治疗直至实现所需症状抑制。
示例性给药方案可包括施用约2mg/kg的抗Siglec-7抗体的初始剂量，随后每隔一周施用约1mg/kg的每周维持剂量。取决于医师所希望达到的药物动力学衰减的型态而定，其它剂量方案也可能适用。例如，本文预期一周向个体给予一次至二十一次。在某些实施方案中，可使用约3μg/kg至约2mg/kg(如约3μg/kg、约10μg/kg、约30μg/kg、约100μg/kg、约300μg/kg、约1mg/kg以及约2/mg/kg)范围内的给药。在某些实施方案中，给药频率是每天三次、每天两次、每天一次、每隔一天一次、每周一次、每两周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每十周一次或每月一次、每两个月一次、每三个月或更长一次。所述疗法的进展易于通过常规技术和测定进行监测。包括所施用的抗Siglec-7抗体的给药方案可独立于所使用的剂量随时间而变化。
用于特定抗Siglec-7抗体的剂量可在已经给予一次或多次施用Siglec-7药剂(如抗Siglec-7抗体)的个体中凭经验确定。个体被给予增量剂量的抗Siglec-7抗体。为了评估抗Siglec-7抗体的功效，可监测本公开的任何疾病、病症或疾患(例如，额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、癫痫发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤、脊髓损伤、长期抑郁症、动脉粥样硬化性血管疾病和正常老化的不良症状)的临床症状。
根据例如接受者的生理状况、施用目的是治疗性的还是预防性的和熟练从业人员已知的其它因素，本公开的抗Siglec-7抗体的施用可以是连续的或间断的。抗Siglec-7抗体的施用可在预先选择的时间段内基本上连续或可以是一系列间隔的剂量。
在文献中提供了关于特定剂量和递送方法的指导；参见例如美国专利号4,657,760；5,206,344；或5,225,212。在本公开的范围内的是不同的制剂对于不同的治疗和不同的病症将是有效的，并且意图治疗特定器官或组织的施用可能需要以不同于另一器官或组织的方式递送。而且，剂量可通过一次或多次分开的施用或通过连续输注施用。对于历经若干天或更长时间的重复施用，取决于情况，治疗持续直到出现所需疾病症状抑制。然而，可使用其它剂量方案。此疗法的进展易于通过常规技术和测定进行监测。
治疗用途
如本文所述，本公开的抗Siglec-7抗体可用于预防以下疾病、降低所述疾病的风险或治疗所述疾病：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、混合性痴呆、克罗伊茨费尔特-雅格布病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、Tau蛋白病、那须哈科拉病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经***狼疮、***、帕金森氏病、路易体痴呆、多***萎缩症、夏伊-德拉戈综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿性病症、类肉瘤病、老化疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病、癌症(包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达Siglec-7的肿瘤、甲状腺癌)、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克氏感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和/或流感嗜血杆菌。在一些实施方案中，所述Siglec-7抗体是激动剂抗体。在一些实施方案中，所述抗体是惰性抗体。在一些实施方案中，所述抗体是拮抗剂抗体。
在一些实施方案中，本公开提供预防以下疾病、降低所述疾病的风险或治疗所述疾病的方法：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、混合性痴呆、克罗伊茨费尔特-雅格布病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、Tau蛋白病、那须哈科拉病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经***狼疮、***、帕金森氏病、路易体痴呆、多***萎缩症、夏伊-德拉戈综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿性病症、类肉瘤病、老化疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病、癌症、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达Siglec-7的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克氏感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和/或流感嗜血杆菌，所述方法通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的抗体来进行，所述抗体降低Siglec-7的细胞水平、抑制Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用或两者。
在一些实施方案中，本公开提供通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的降低Siglec-7的细胞水平、抑制Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用或两者的抗体来预防癌症、降低癌症的风险或治疗癌症。在一些实施方案中，所述抗体抑制一种或多种选自以下的Siglec-7活性：(a)促进以下中的一种或多种的增殖、成熟、迁移、分化和/或功能性：免疫抑制树突细胞、免疫抑制巨噬细胞、免疫抑制嗜中性粒细胞、非致瘤性骨髓源性抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、非致瘤性CD14+骨髓细胞和调控性T细胞；(b)增强以下中的一种或多种浸润到肿瘤中：免疫抑制树突细胞、免疫抑制巨噬细胞、免疫抑制嗜中性粒细胞、非致瘤性骨髓源性抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞和调控性T细胞；(c)增加肿瘤、外周血或其它淋巴器官中肿瘤促进骨髓细胞/粒细胞免疫抑制细胞和/或非致瘤性CD14+骨髓细胞的数量；(d)减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的活化；(e)减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的浸润；(f)增加肿瘤体积；(g)增加肿瘤生长速率；(h)增加转移；(i)增加肿瘤复发率；(j)增加一种或多种PD-1配体的表达；(k)降低一种或多种调节抗肿瘤T细胞应答的免疫疗法或一种或多种癌症疫苗的功效，任选地其中所述一种或多种免疫疗法是靶向一种或多种选自由以下组成的组的蛋白质的免疫疗法：CD33、CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF-1受体以及它们的任何组合；以及(l)降低一种或多种化学治疗剂的功效，任选地其中所述一种或多种化学治疗剂是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、阿霉素
Figure BDA0002921167240001711
表柔比星
Figure BDA0002921167240001712
紫杉烷、紫杉醇
Figure BDA0002921167240001713
多西他赛
Figure BDA0002921167240001714
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0002921167240001715
卡铂
Figure BDA0002921167240001716
奥沙利铂
Figure BDA0002921167240001717
甲酰四氢叶酸、替莫唑胺
Figure BDA0002921167240001718
以及它们的任何组合。在一些实施方案中，所述抗体表现出一种或多种选自以下的活性：(a)增加肿瘤浸润性CD3+ T细胞的数目；(b)降低非致瘤性CD14+骨髓细胞中Siglec-7的水平，任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润性细胞，或任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞存在于血液中；(c)减少非致瘤性CD14+骨髓细胞的数目，任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润性细胞，或任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞存在于血液中；(d)降低一种或多种细胞中的PD-L1水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓源性抑制细胞(MDSC)；(e)降低实体瘤的肿瘤生长速率；(f)减小肿瘤体积；(g)提高一种或多种PD-1抑制剂的功效；(h)提高一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法的功效，任选地其中所述一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法靶向CTLA4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3、LAG3或它们的任何组合中的一者或多者；(i)提高一种或多种化学治疗剂的功效，任选地其中所述一种或多种化学治疗剂是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、阿霉素
Figure BDA0002921167240001719
表柔比星
Figure BDA00029211672400017110
紫杉烷、紫杉醇
Figure BDA00029211672400017111
多西他赛
Figure BDA0002921167240001721
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0002921167240001722
卡铂
Figure BDA0002921167240001723
奥沙利铂
Figure BDA0002921167240001724
甲酰四氢叶酸、替莫唑胺
Figure BDA0002921167240001725
以及它们的任何组合；以及(j)当缀合至化学或放射性毒素时杀死实体瘤和相关血管中的表达Siglec-7的免疫抑制骨髓细胞和/或表达CD14的细胞。
如本文所公开，本公开的抗Siglec-7抗体也可用于诱导和/或促进一种或多种免疫细胞(例如先天性免疫细胞或适应性免疫细胞)的存活成熟、功能性、迁移或增殖。在一些实施方案中，本公开提供诱导或促进有需要的个体中一种或多种免疫细胞的存活、成熟、功能性、迁移或增殖的方法，所述方法通过向所述个体施用治疗有效量的本公开的降低Siglec-7的细胞水平、抑制Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用或两者的抗体。在一些实施方案中，所述一种或多种免疫细胞选自树突细胞、巨噬细胞、小神经胶质细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞以及它们的任何组合。
在一些实施方案中，所述抗体是激动剂抗Siglec-7抗体。在一些实施方案中，所述抗体是本公开的瞬时激动剂抗Siglec-7抗体，所述抗体最初充当激动剂且然后充当长期拮抗剂抗体。在一些实施方案中，所述抗体是惰性抗Siglec-7抗体。在一些实施方案中，所述抗体是拮抗剂抗Siglec-7抗体。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体降低Siglec-7的细胞(例如，细胞表面、细胞内或总)水平。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体诱导Siglec-7的降解。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体诱导Siglec-7的裂解。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体诱导Siglec-7的内化。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体诱导Siglec-7的脱落。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体诱导Siglec-7表达的下调。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体抑制Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体瞬时活化并然后诱导Siglec-7的降解。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体瞬时活化并然后诱导Siglec-7的裂解。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体瞬时活化并然后诱导Siglec-7的内化。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体瞬时活化并然后诱导Siglec-7的脱落。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体瞬时活化并然后诱导Siglec-7表达的下调。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体瞬时活化并然后诱导Siglec-7的表达降低。在某些实施方案中，个体具有Siglec-7变体等位基因。
如本文所公开，本公开的抗Siglec-7抗体可进一步用于降低以下各项的活性、功能性或存活：调控性T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制树突细胞、肿瘤包埋的免疫抑制巨噬细胞、骨髓源性抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)细胞和/或慢性骨髓性白血病(CML)细胞。在一些实施方案中，本公开提供降低以下各项的活性、功能性或存活的方法：调控性T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制树突细胞、肿瘤包埋的免疫抑制巨噬细胞、骨髓源性抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)细胞或慢性骨髓性白血病(CML)细胞，所述方法通过向所述个体施用治疗有效量的与Siglec-7结合或相互作用的抗体来进行。在一些实施方案中，所述抗体选自拮抗剂抗体、惰性抗体或激动剂抗体。在一些实施方案中，所述抗体是本公开的分离的抗Siglec-7抗体或抗Siglec-7抗体缀合物。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体缀合物包含缀合至可检测标记物、毒素或治疗剂的抗Siglec-7抗体。
如本文所公开，本公开的抗Siglec-7抗体可用于在体外或体内降低一种或多种细胞上Siglec-7的细胞水平、抑制Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用或两者。在一些实施方案中，本公开提供通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的分离的抗Siglec-7抗体来降低所述个体的一种或多种细胞上Siglec-7的细胞水平、抑制Siglec-7与一种或多种Siglec-7配体之间的相互作用或两者的方法。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体降低体内Siglec-7的细胞水平。
如本文所公开的，本公开的抗Siglec-7抗体可用于降低一种或多种细胞(包括但不限于树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞和巨噬细胞)和/或细胞系上的Siglec-7的细胞水平。在一些实施方案中，本公开提供通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的抗Siglec-7抗体来降低所述个体中的一种或多种细胞上的Siglec-7的细胞水平的方法。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞选自树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞和巨噬细胞以及它们的任何组合。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体降低体内Siglec-7的细胞水平。Siglec-7的细胞水平可指但不限于Siglec-7的细胞表面水平、Siglec-7的细胞内水平和Siglec-7的总水平。在一些实施方案中，Siglec-7的细胞水平的降低包括Siglec-7的细胞表面水平的降低。如本文所用，Siglec-7的细胞表面水平可通过本文所述的或本领域已知的任何体外基于细胞的测定或合适的体内模型来测量。在一些实施方案中，Siglec-7的细胞水平的降低包括Siglec-7的细胞内水平的降低。如本文所用，Siglec-7的细胞内水平可通过本文所述的或本领域已知的任何体外基于细胞的测定或合适的体内模型来测量。在一些实施方案中，Siglec-7的细胞水平的降低包括Siglec-7的总水平的降低。如本文所用，Siglec-7的总水平可通过本文所述的或本领域已知的任何体外基于细胞的测定或合适的体内模型来测量。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体诱导Siglec-7降解、Siglec-7裂解、Siglec-7内化、Siglec-7脱落和/或Siglec-7表达的下调。在一些实施方案中，利用体外细胞测定在原代细胞(例如，树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞和巨噬细胞)上或细胞系上测量Siglec-7的细胞水平。
本公开的其它方面涉及一种选择有需要的受试者以用抗Siglec-7抗体进行治疗的方法，所述方法包括：a.从所述受试者获得样品(例如血液样品)；b.检测所述受试者中存在的Siglec-7等位基因；以及c.选择所述受试者以用与具有一种或多种Siglec-7等位基因的受试者中的Siglec-7结合或相互作用的抗体进行治疗。本公开的其它方面涉及一种评估有需要的受试者对与Siglec-7结合或相互作用的抗体的反应性的方法，所述方法包括：a.在向所述受试者施用抗Siglec-7抗体之前，测量从所述受试者获得的血液样品中非致瘤性骨髓细胞上CD45+和CD14+的表达水平；b.向所述受试者施用治疗有效量的所述抗体；以及c.在施用所述抗Siglec-7抗体后，测量从所述受试者获得的血液样品中非致瘤性骨髓细胞上CD45+和CD14+的表达水平，其中在施用所述抗Siglec-7抗体后非致瘤性骨髓细胞上CD45+CD14+的水平降低指示所述受试者对所述剂有反应。可使用任何合适的用于获得样品如血液样品的方法。此外，应了解，可使用任何检测Siglec-7变体和/或等位基因的已知方法，如SNP分析。在一些实施方案中，所述评估反应性的方法还包括施用一种或多种另外的治疗有效量的所述抗体。在一些实施方案中，所述受试者是人。
在一些实施方案中，所述个体具有Siglec-7的杂合变体。
在一些实施方案中，本公开的方法可进一步涉及抗Siglec-7抗体或双特异性抗Siglec-7抗体与结合至模式识别受体的抗体、结合至Toll样受体的抗体、结合至损伤相关分子模式(DAMP)受体的抗体和/或结合至细胞因子的抗体或针对白细胞介素的抗体)的共同施用。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向所述个体施用至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体，和/或一种或多种标准或研究性抗癌疗法。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体与所述抗Siglec-7抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体选自抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体和抗HVEM抗体、抗B-和T-淋巴细胞衰减子(BTLA)抗体、抗杀伤抑制性受体(KIR)抗体、抗GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、抗CD27抗体、抗CD33抗体、抗TNFα抗体、抗Siglec-5抗体、抗Siglec-9抗体、抗Siglec-11抗体、拮抗性抗TREM1抗体、拮抗性抗TREM2抗体以及它们的任何组合。在一些实施方案中，所述一种或多种标准或研究性抗癌疗法选自放射疗法、细胞毒性化学疗法、靶向疗法、伊马替尼疗法、曲妥珠单抗疗法、依那西普疗法、过继细胞转移(ACT)疗法、嵌合抗原受体T细胞转移(CAR-T)疗法、疫苗疗法以及细胞因子疗法。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向所述个体施用至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体与所述抗Siglec-7抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体选自抗CCL2抗体、抗CSF-1抗体、抗IL-2抗体以及其任何组合。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向所述个体施用至少一种特异性地结合至刺激性检查点蛋白的激动性抗体。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至刺激性检查点蛋白的激动性抗体与所述抗Siglec-7抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至刺激性检查点蛋白的激动性抗体选自激动剂抗CD40抗体、激动剂抗OX40抗体、激动剂抗ICOS抗体、激动剂抗CD28抗体、激动性抗TREM1抗体、激动性抗TREM2抗体、激动剂抗CD137/4-1BB抗体、激动剂抗CD27抗体、激动剂抗糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白GITR抗体以及它们的任何组合。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向所述个体施用至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，所述至少一种刺激性细胞因子与所述抗Siglec-7抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种刺激性细胞因子选自IFN-a4、IFN-b、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、CRP、IL-33、MCP-1、MIP-1-β以及它们的任何组合。
在一些实施方案中，受试者或个体是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于家养动物(例如，牛、羊、猫、狗、以及马)、灵长类动物(例如，人和非人灵长类动物，诸如猴)、兔、以及啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。在一些实施方案中，受试者或个体是人类。
痴呆
痴呆是一种非特异性综合征(即一组体征和症状)，其表现为先前未受损害的人严重丧失全局认知能力，超出正常衰老所可能预期的。由于独特的全脑损伤，痴呆可能是静息的。或者，痴呆可能是渐进的，由于身体的损伤或疾病导致长期下降。虽然痴呆症在老年人群中较为常见，但也可发生在65岁以前。受痴呆影响的认知领域包括但不限于记忆、注意广度、语言和问题解决。一般来说，在个体被诊断为患有痴呆之前，症状必须存在至少六个月。
痴呆的示例性形式包括但不限于额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、词义性痴呆和路易体痴呆。
在一些实施方案中，施用本公开的抗Siglec-7抗体可预防痴呆、降低痴呆的风险和/或治疗痴呆。在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体可调节患有痴呆的个体中的一种或多种Siglec-7活性。
额颞叶痴呆
额颞叶痴呆(FTD)是由大脑额叶的进行性恶化引起的疾患。随时间推移，退化可能进展至颞叶。患病率仅次于阿尔茨海默氏病(AD)，FTD占早老性痴呆症病例的20％。FTD的临床特征包括记忆缺失、行为异常、人格改变以及语言障碍(Cruts,M.&Van Broeckhoven,C.,Trends Genet.24:186-194(2008)；Neary,D.,等人,Neurology 51:1546-1554(1998)；Ratnavalli,E.,Brayne,C.,Dawson,K.&Hodges,J.R.,Neurology 58:1615-1621(2002))。
大部分FTD病例以常染色体显性方式遗传，但即使在一个家族中，症状也可跨越伴随行为障碍的FTD，至原发性进行性失语、皮质基底神经节变性。与大多数神经退行性疾病一样，FTD的特征可在于患病脑中特定蛋白质聚集体的病理性存在。历史上，FTD的第一次描述认识到神经原纤维缠结或皮克体内存在过度磷酸化Tau蛋白的神经元内累积。微管相关蛋白Tau的因果作用得到了若干家族中编码Tau蛋白的基因突变的鉴定的支持(Hutton,M.,等人,Nature 393:702-705(1998)。然而，大多数FTD大脑显示没有过度磷酸化Tau的累积，但对泛素(Ub)和TAR DNA结合蛋白(TDP43)缺失表现出免疫应答性(Neumann,M.,等人,Arch.Neurol.64:1388-1394(2007))。大多数带有Ub包涵体的那些FTD病例(FTD-U)显示在颗粒蛋白前体基因中携带突变。
在一些实施方案中，施用本公开的抗Siglec-7抗体可预防FTD、降低FTD的风险和/或治疗FTD。在一些实施方案中，施用抗Siglec-7抗体可调节患有FTD的个体中的一种或多种Siglec-7活性。
阿尔茨海默氏病
阿尔茨海默氏病(AD)是痴呆的最常见形式。该疾病无法治愈，其随着疾病的进展恶化，且最终导致死亡。大多数情况下，AD在65岁以上的人群中得到诊断。然而，不太普遍的早发型阿尔茨海默氏病可早得多地发生。
阿尔茨海默氏病的常见症状包括行为症状，如难以记住最近的事件；认知症状、困惑、易怒和攻击、情绪波动、语言障碍以及长期记忆丧失。随着疾病进展，身体机能丧失，最终导致死亡。阿尔茨海默氏病在变得完全明显之前发展未知和可变的时间量，并且可在未确诊的情况下进展多年。
在一些实施方案中，施用本公开的抗Siglec-7抗体可预防阿尔茨海默氏病、降低阿尔茨海默氏病的风险和/或治疗阿尔茨海默氏病。在一些实施方案中，施用抗Siglec-7抗体可调节患有阿尔茨海默氏病的个体中的一种或多种Siglec-7活性。
帕金森氏病
可被称为特发性或原发性帕金森综合征、运动功能减退的刚性综合症(HRS)或震颤性***帕金森氏病是影响运动***控制的神经退行性脑病症。脑中多巴胺产生细胞的进行性死亡导致帕金森氏病的主要症状。大多数情况下，帕金森氏病在50岁以上的人群中得到诊断。帕金森氏病在大多数人中是特发性的(没有已知原因)。然而，遗传因素也在所述疾病中起作用。
帕金森氏病的症状包括但不限于手、手臂、腿、下巴和面部的颤抖、肢体和躯干的肌肉强直、运动缓慢(运动迟缓)、姿势不稳定、行走困难、神经精神问题、言语或行为改变、抑郁、焦虑、疼痛、精神病、痴呆、幻觉、以及睡眠问题。
在一些实施方案中，施用本公开的抗Siglec-7抗体可预防帕金森氏病、降低帕金森氏病的风险和/或治疗帕金森氏病。在一些实施方案中，施用抗Siglec-7抗体可调节患有帕金森氏病的个体中的一种或多种Siglec-7活性。
肌萎缩性侧索硬化(ALS)
如本文所用，肌萎缩性侧索硬化(ALS)或运动神经元疾病或卢伽雷氏病(LouGehrig's disease)可互换使用，并且是指具有不同病因学的衰竭性疾病，其特征在于快速进行性无力、肌肉萎缩和束缚、肌肉痉挛、说话困难(构音障碍)、吞咽困难(difficultyswallowing)(吞咽困难(dysphagia))和呼吸困难(difficulty breathing)(呼吸困难(dyspnea))。
已经显示，颗粒蛋白前体在ALS中发挥作用(Schymick,JC等人,(2007)J NeurolNeurosurg Psychiatry.；78:754-6)并再次保护由引起ALS的蛋白质(如TDP-43)引起的损伤(Laird,AS et al.,(2010).PLoS ONE 5:e13368)。还证明了pro-NGF在脊髓损伤后诱导p75介导的少突胶质细胞和皮质脊髓神经元的死亡(Beatty等人,Neuron(2002),36,第375-386页；Giehl等人,Proc.Natl.Acad.Sci USA(2004),101,第6226-30页)。
在一些实施方案中，施用本公开的抗Siglec-7抗体可预防ALS、降低ALS的风险和/或治疗ALS。在一些实施方案中，施用抗Siglec-7抗体可调节患有肌萎缩性侧索硬化的个体中的一种或多种Siglec-7活性。
亨廷顿氏病
亨廷顿氏病(HD)是由亨廷顿基因(HTT)中的常染色体显性突变引起的遗传性神经退行性疾病。亨廷顿基因内的细胞因子-腺嘌呤-鸟嘌呤(CAG)三联体重复序列的扩增导致由所述基因编码的亨廷顿蛋白(Htt)的突变形式的产生。这种突变体亨廷顿蛋白(mHtt)是有毒的并且促成神经元死亡。亨廷顿氏病的症状最常出现在35岁与44岁之间，胆识它们可在任何年龄段出现。
亨廷顿氏病的症状包括但不限于运动控制问题、急躁、随机运动(舞蹈病)、异常眼运动、平衡受损、癫痫发作、咀嚼困难、吞咽困难、认知问题、言语改变、记忆缺陷、思维困难、失眠、疲劳、痴呆、人格变化、抑郁、焦虑以及强迫行为。
在一些实施方案中，施用本公开的抗Siglec-7抗体可预防亨廷顿氏病、降低亨廷顿氏病的风险和/或治疗亨廷顿氏病(HD)。在一些实施方案中，施用抗Siglec-7抗体可调节患有亨廷顿氏病的个体中的一种或多种Siglec-7活性。
Tau蛋白病
Tau蛋白病(Taupathy diseases)或Tau蛋白病(Tauopathies)是由脑内微管相关蛋白tau的聚集引起的一类神经退行性疾病。阿尔茨海默氏病(AD)是最熟知的Tau蛋白病，并且以不溶性神经原纤维缠结(NFT)的形式在神经元中累积tau蛋白。其它Tau蛋白疾病和病症包括进行性核上性麻痹、拳击员痴呆症、与染色体17有关的额颞叶痴呆和帕金森综合征、利替可-波帝格病(Lytico-Bodig disease)(关岛帕金森氏痴呆综合征(Parkinson-dementia complex of Guam))、缠结主导型痴呆、神经节神经胶质瘤和神经节细胞瘤、脑膜血管瘤病、亚急性硬化性全脑炎、铅中毒脑病、结节性硬化症、哈-斯二氏病(Hallervorden-Spatz disease)、脂褐质沉积症、皮克氏病(Pick’s disease)、皮质基底变性、嗜银颗粒性病(AGD)、亨廷顿氏病以及额颞叶变性。
在一些实施方案中，施用本公开的抗Siglec-7抗体可预防Tau蛋白病、降低Tau蛋白病的风险和/或治疗Tau蛋白病。在一些实施方案中，施用抗Siglec-7抗体可调节患有Tau蛋白病的个体中的一种或多种Siglec-7活性。
多发性硬化症
多发性硬化症(MS)也可被称为播散性硬化症或播散性脑脊髓炎。MS是一种炎性疾病，其中大脑和脊髓轴突周围的脂肪髓鞘受损，从而导致脱髓鞘和瘢痕形成以及广泛的体征和症状。MS影响大脑和脊髓中的神经细胞彼此有效通信的能力。神经细胞通过将称为动作电位的电信号向下传递给称为轴突的长纤维来进行通信，所述长纤维包含在称为髓磷脂的绝缘物质内。在MS中，身体自身的免疫***攻击并损伤髓磷脂。当髓磷脂丢失时，轴突不再能有效地传导信号。MS发病通常在年轻人中发生，并且在女性中更常见(http://en.wikipedia.org/wiki/Multiple_sclerosis-cite_note-pmid18970977-1)。
MS的症状包括但不限于感觉的变化，如敏感性丧失或麻刺感；刺痛或麻木，如感觉减退和感觉异常；肌无力；阵挛；肌肉痉挛；移动困难；协调和平衡困难，如共济失调；言语困难，如构音障碍或吞咽困难，如吞咽困难；视觉问题，如眼球震颤，包括光幻视的视神经炎以及复视；疲劳；急性或慢性疼痛；以及膀胱和肠道困难；不同程度的认知障碍；抑郁或情绪不稳定的情感症状；乌特霍夫现象(Uhthoff’s phenomenon)，其是由于暴露于高于平常环境温度而导致的现存症状恶化；和莱尔米体征(Lhermitte’s sign)，其是在弯曲脖子时向下和向后流动的电感觉。
在一些实施方案中，施用本公开的抗Siglec-7抗体可预防多发性硬化症、降低多发性硬化症的风险和/或治疗多发性硬化症。在一些实施方案中，施用抗Siglec-7抗体可调节患有多发性硬化症的个体中的一种或多种Siglec-7活性。
癌症
本公开的其它方面提供了通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的分离的抗Siglec-7抗体来预防癌症、降低癌症的风险或治疗癌症的方法。公开的任何分离的抗体都可用于这些方法中。在一些实施方案中，分离的抗体是本公开的激动剂抗体。在其它实施方案中，分离的抗体是本公开的拮抗剂抗体。在其它实施方案中，分离的抗体是本公开的惰性抗体。在其它实施方案中，分离的抗体是本公开的抗体缀合物。
如本文所公开，已知肿瘤微环境含有异质免疫浸润物，其包括T淋巴细胞、巨噬细胞以及骨髓/粒细胞谱系的细胞。T调控性细胞、肿瘤包埋的免疫抑制骨髓细胞和/或M2巨噬细胞在肿瘤中的存在和活性与不良预后相关。相比之下，细胞毒性T细胞的存在和活性有利于癌症治疗。预期直接或间接增强细胞毒性T细胞的活性并降低各种免疫抑制细胞的数目和活性的疗法提供显著治疗益处。开创性的临床前研究已经显示靶向免疫抑制细胞的药物(例如CSF1/CSF1R阻断抗体)与活化细胞毒性T细胞的免疫检查点阻断抗体之间的协同作用，从而表明操纵两种细胞类型在肿瘤模型中显示效力，其中个体疗法作用不佳(Zhu Y；Cancer Res.2014年9月15日；74(18):5057-69)。因此，在一些实施方案中，阻断在骨髓细胞、T细胞子集和肿瘤相关免疫细胞上表达的Siglec-7可刺激有益的抗肿瘤免疫应答，从而产生治疗性抗肿瘤免疫应答。
在一些实施方案中，用于预防癌症、降低癌症的风险或治疗患有癌症的个体的方法还包括向所述个体施用特异性地结合至抑制性检查点分子的至少一种抗体。与抑制性检查点分子特异性结合的抗体的实例包括但不限于抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、抗HVEM抗体、抗BTLA抗体、抗GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体以及其任何组合。在一些实施方案中，特异性地结合到抑制性检查点分子的至少一种抗体与本公开的拮抗剂抗Siglec-7抗体组合施用。
在一些实施方案中，待通过本公开的方法预防或治疗的癌症包括但不限于鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞癌肺癌、肺腺癌以及肺鳞状癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌或胃脏癌(gastric or stomach cancer)(包括胃肠癌和胃肠道间质癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、***、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、泌尿道癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌或肾脏癌(kidney orrenal cancer)、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛管癌、***癌、黑素瘤、浅表扩散性黑素瘤、恶性雀斑样痣黑素瘤、肢端雀斑样痣黑素瘤、结节性黑素瘤、多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、毛细胞白血病、慢性成髓细胞性白血病和移植后淋巴增殖性病症(PTLD)以及与瘢痣病相关的异常血管增生、水肿(如与脑肿瘤相关的水肿)、麦格氏综合征(Meigs’syndrome)、脑癌以及头颈癌和相关转移。在一些实施方案中，癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症选自非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、肾细胞癌、膀胱癌、卵巢癌、黑素瘤、乳腺癌、胃癌以及肝细胞癌。在一些实施方案中，癌症是三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，癌症可以是早期癌症或晚期癌症。在一些实施方案中，癌症可以是原发性肿瘤。在一些实施方案中，癌症可以是在第二部位处源自任何上述类型的癌症的转移性肿瘤。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体可用于预防癌症、降低癌症的风险或治疗癌症，所述癌症包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤以及甲状腺癌。
在一些实施方案中，所述癌症表达增加的或高水平的Siglec-7配体。在一些实施方案中，所述Siglec-7配体是α-2,3-连接的唾液酸和α-2,6-连接的唾液酸、二唾液酸半乳糖基红细胞糖苷酯、二唾液酸乳糖四糖基神经酰胺和/或二唾液酸GalNAc乳糖四糖基神经酰胺中的一者或多者。在一些实施方案中，所述癌症具有增加的或高水平的肿瘤浸润NK细胞。
在一些实施方案中，本公开提供了通过向患有癌症的个体施用治疗有效量的本公开的抗Siglec-7抗体来预防癌症、降低癌症的风险或治疗所述个体的方法。
在一些实施方案中，所述方法还包括向所述个体施用至少一种特异性地结合至抑制性免疫检查点分子的抗体和/或另一种标准或研究性抗癌疗法。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体与本公开的抗Siglec-7抗体组合施用。在一些实施方案中，特异性地结合至抑制性检查点分子的至少一种抗体选自抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体和抗HVEM抗体、抗B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)抗体、抗杀伤抑制性受体(KIR)抗体、抗GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、抗CD27抗体以及其任何组合。在一些实施方案中，所述标准或研究性抗癌疗法是选自以下各项的一种或多种疗法：放射疗法、细胞毒性化学疗法、靶向疗法、伊马替尼
Figure BDA0002921167240001851
曲妥珠单抗
Figure BDA0002921167240001852
过继细胞转移(ACT)、嵌合抗原受体T细胞转移(CAR-T)、疫苗疗法以及细胞因子疗法。
在一些实施方案中，所述方法还包括向所述个体施用至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体与本公开的抗Siglec-7抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体选自抗CCL2抗体、抗CSF-1抗体、抗IL-2抗体以及其任何组合。
在一些实施方案中，所述方法还包括向所述个体施用至少一种特异性地结合至刺激性免疫检查点蛋白的激动性抗体。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至刺激性检查点蛋白的激动性抗体与本公开抗Siglec-7抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至刺激性检查点蛋白的激动性抗体选自激动剂抗CD40抗体、激动剂抗OX40抗体、激动剂抗ICOS抗体、激动剂抗CD28抗体、激动剂抗CD137/4-1BB抗体、激动剂抗CD27抗体、激动剂抗糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白GITR抗体以及其任何组合。
在一些实施方案中，所述方法还包括向所述个体施用至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，所述至少一种刺激性细胞因子与本公开的抗Siglec-7抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种刺激性细胞因子选自IFN-a4、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、OSM、CNTF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18、CRP、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-2、IL-18、GM-CSF、G-CSF、CXCL10、IL-33、MCP-1、MIP-1-β以及它们的任何组合。
药盒/制品
本公开还提供含有本文所述的抗Siglec-7抗体或其功能片段的药盒和/或制品。本公开的药盒和/或制品可包括一个或多个含有本公开的纯化抗体的容器。在一些实施方案中，所述药盒和/或制品还包括根据本公开的方法的使用说明书。
在一些实施方案中，这些说明书包括施用本公开的抗Siglec-7抗体以根据本公开的任何方法预防选自以下的疾病、病症或损伤、降低所述疾病、病症或损伤的风险或治疗患有所述疾病、病症或损伤的个体的说明：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、混合性痴呆、克罗伊茨费尔特-雅格布病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、Tau蛋白病、那须哈科拉病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经***狼疮、***、帕金森氏病、路易体痴呆、多***萎缩症、夏伊-德拉戈综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿性病症、类肉瘤病、老化疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病、以及癌症(包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达Siglec-7的肿瘤、甲状腺癌)、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克氏感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和/或流感嗜血杆菌。
在一些实施方案中，所述说明书包括如何检测例如个体中、组织样品中或细胞中的Siglec-7蛋白质的描述。所述药盒和/或制品还可包括基于鉴定个体是否患有疾病和疾病阶段来选择适合于治疗的个体的描述。
在一些实施方案中，所述药盒和/或制品还可包括本公开的另一种抗体(例如，至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体，至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体和/或至少一种特异性地结合至刺激性检查点蛋白的激动性抗体)和/或至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，所述药盒和/或制品还可包括根据本公开的任何方法，与本文所述的抗Siglec-7抗体组合使用所述抗体和/或刺激细胞因子的说明书，与抗体和/或刺激性细胞因子组合使用本文所述的抗Siglec-7抗体的说明书，或使用本文描述的抗Siglec-7抗体和抗体和/或刺激性细胞因子的说明书。
所述说明书通常包括关于预期治疗的剂量、给药方案和施用途径的信息。所述容器可为单位剂量、散装(bulk)包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。在本公开的药盒和/或制品中提供的说明书通常是在标签或包装插页(例如包括在药盒中的纸张)上的书面说明，但机器可读指令(例如，在磁性或光存储盘上携带的指令)也是可以接受的。
标签或包装插页指示所述组合物用于治疗例如本公开的疾病。可提供说明书以实践本文所述的任何方法。
本公开的药盒和/或制品处于合适的包装中。合适的包装包括但不限于小瓶、瓶、罐、软包装(例如，密封的聚脂薄膜或塑料袋)等。还考虑与特定装置(如吸入器)、经鼻施用装置(例如雾化器))或输注装置(如微型泵)组合使用的包装。药盒和/或制品可具有无菌入口(例如，所述容器可以是具有皮下注射针头可刺穿的塞子的静脉内注射溶液袋或小瓶)。所述容器装还可具有无菌入口(例如，所述容器可以是具有皮下注射针头可刺穿的塞子的静脉注射溶液袋或小瓶)。所述组合物中的至少一种活性剂是本文所述的抗Siglec-7抗体。所述容器还可包括第二药物活性剂。
药盒和/或制品可任选地提供附加组成部分，如缓冲剂和解释性信息。通常，所述药盒包括容器和在容器上或与容器相关的标签或一张或多张包装插页。
诊断用途
本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗Siglec-7抗体)还具有诊断性用途。因此，本公开提供使用本公开的抗体或其功能片段用于诊断目的，诸如检测个体中或来源于个体的组织样品中的Siglec-7蛋白的方法。
在一些实施方案中，个体是人。在一些实施方案中，个体是患有本公开的疾病、病症或损伤或处于发展所述疾病、病症或损伤风险中的人患者。在一些实施方案中，所述诊断方法涉及检测生物样品如生物活检标本、组织或细胞中的Siglec-7蛋白。使本文所述的抗Siglec-7抗体与生物样品接触并检测抗原结合的抗体。例如，活检标本可用本文所述的抗Siglec-7抗体染色以便检测和/或定量疾病相关细胞。所述检测方法可涉及定量抗原结合抗体。生物样品中的抗体检测可用本领域中已知的任何方法进行，包括免疫荧光显微术、免疫细胞化学、免疫组织化学、ELISA、FACS分析、免疫沉淀或微正电子发射断层摄影术。在某些实施方案中，例如用18F放射性标记所述抗体，且随后利用微正电子发射断层摄影术分析进行检测。还可通过诸如正电子发射断层摄影术(PET)、X射线计算机断层摄影术、单光子发射计算机断层摄影术(SPECT)、计算机断层摄影术(CT)以及计算机轴向断层摄影术(CAT)的非侵入性技术在患者中定量抗体结合。
在其它实施方案中，本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗Siglec-7抗体)可用于检测和/或定量例如取自临床前疾病模型(例如，非人疾病模型)的脑标本中的小神经胶质细胞。如此，本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗Siglec-7抗体)可适用于评价与对照相比，在神经***疾病或损伤(如额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴、癫痫发作、视网膜营养不良、动脉粥样硬化性血管疾病、那须哈科拉病或多发性硬化症)的模型中在治疗后的治疗应答。
通过参考以下实施例将更完全地理解本公开。然而，所述实施例并不应当被解释为对本公开的范围进行限制。贯穿本公开的所有引用据此以引用的方式明确并入本文中。
实施例
实施例1：鼠抗Siglec-7抗体的人源化以及此类人源化变体的结合参数
以下实施例的目的是产生小鼠抗人Siglec-7抗体S7AB的人源化变体，并表征所述人源化抗体与Siglec-7的结合。所述S7AB含有重链可变区，所述重链可变区包含QVHLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYAFTNCWMNWVRQRPGKGLDWIGRIFPGNGHTNYSGKFKDKATLTEDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARDYSDYYFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:61)的序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含DVQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDINTYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:62)的序列。S7AB先前在WO2017/040301中公开为S7-10B5.1(SEQ ID NO:520和SEQ ID NO:513)。
通过将亲本小鼠抗体的CDR移植到在序列上最接近小鼠抗体的人种系框架上来将S7AB人源化。还产生了具有一种或多种框架回复突变的抗体。总共产生了S7AB的12种人源化抗体。所述抗体的重链可变区序列描绘于以下表10中。所述抗体的轻链可变区序列描绘于以下表11中。
通过流式细胞术评估S7AB的12种人源化抗体与原代树突细胞的结合。使用RosetteSepTM单核细胞分离抗体混合物(StemCell Technologies)从来自健康人供体的血液分离单核细胞。将分离的单核细胞通过100ng/mL GM-CSF和100ng/mL IL-4(Peprotech)分化为树突细胞。将树突细胞与抗Siglec-7抗体的稀释液在黑暗中在冰上孵育30分钟，然后与荧光缀合的抗人IgG第二抗体一起孵育30分钟。将细胞在FACS缓冲液(PBS+2％FBS，2mMEDTA)中洗涤2次，并在BD FACS Canto上进行流式细胞术。使用FlowJo软件(Ashland,OR)分析数据。结果示于图1中，并且每种抗体的半最大有效浓度(EC50)总结于以下表1中。
表1：人源化Siglec-7抗体与树突细胞的结合
抗体 EC<sub>50</sub>(nM)
S7AB-H1 4.6
S7AB-H2 1.8
S7AB-H3 1.6
S7AB-H4 3.2
S7AB-H5 1.1
S7AB-H6 1.6
S7AB-H7 3.3
S7AB-H8 1.5
S7AB-H9 1.5
S7AB-H10 6.3
S7AB-H11 1.2
S7AB-H12 5.6
虽然所有12种人源化抗体均结合至树突细胞，但8种抗体S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H11和S7AB-H12与其他抗体相比显示大体上更好的结合。根据标准技术(Estep等人(2013)MAbs 5(2):270-8)，在ForteBio测定中通过生物层干涉测量法测量了表现出稳健结合的四种人源化抗体S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H11和S7AB-H12的亲和力参数。在此测定中，将人源化抗体直接与S7AB进行比较。简言之，将所述抗体捕获在抗人或抗小鼠IgG Fc生物传感器(Pall ForteBio)上。然后使不同浓度(0-100nM)的组氨酸标记的人Siglec-7(NovoProtein)结合至捕获的抗Siglec-7表面上(200s缔合时间，900s解离时间)。使用1:1相互作用模型进行多浓度动力学分析以推导出每种抗体的缔合和解离速率常数(分别为ka和kd)。表观亲和力常数(KD)由比率kd/ka计算。结果示于以下表2中。
表2：人源化Siglec-7抗体的亲和力常数
抗体 表观k<sub>a</sub>(Ms)<sup>-1</sup> 表观k<sub>d</sub>(s<sup>-1</sup>) 表观K<sub>D</sub>(pM)
S7AB 1.95E+5 2.42E-4 1240
S7AB-H8 1.45E+5 1.25E-4 860
S7AB-H9 1.50E+5 1.12E-4 740
S7AB-H11 1.60E+5 1.72E-4 1070
S7AB-H12 1.50E+5 1.52E-4 1010
实施例2：使用人源化抗体进行的Siglec-7细胞表面下调
以下实施例的目的是测试人源化抗Siglec-7抗体(如实施例1中所描述)是否能够降低原代人树突细胞上的Siglec-7的细胞表面水平。
使用RosetteSepTM单核细胞分离抗体混合物(StemCell Technologies)从来自健康人供体的血液分离单核细胞。将分离的单核细胞通过100ng/mL GM-CSF和100ng/mL IL-4(Peprotech)分化为树突细胞。将树突细胞以100,000个细胞/孔涂铺在96孔板中，以200,000个细胞/mL涂铺在24孔板中，或者以在2mL补充有10％Hyclone FBS、2mM谷氨酰胺、pen/strep和非必需氨基酸的RPMI中500,000个细胞接种于6孔皿中。将抗Siglec-7抗体或同型对照抗体添加至孔中，并在37℃与5％CO2下孵育24小时。根据标准技术通过FACS分析来检测细胞表面受体表达。简言之，将细胞与荧光染料缀合的抗Siglec-7克隆6-434(BioLegend)在黑暗中在冰上孵育30分钟。将细胞在FACS缓冲液(PBS+2％FBS，2mM EDTA)中洗涤2次，并在BD FACS Canto上进行流式细胞术。使用FlowJo软件(Ashland,OR)分析数据，并将Siglec-7表面表达和下调计算为相对于抗体不存在下的表达的受体表达百分比。每种抗体的半最大有效浓度(EC50)总结于以下表3中。
表3：用人源化抗体进行的Siglec-7细胞表面下调
Figure BDA0002921167240001921
所有四种人源化抗体都能够降低Siglec-7的细胞表面水平，其中S7AB-H8是所述人源化抗体中最有效的。
实施例3：S7AB-H8的亲和力成熟以及此类亲和力成熟抗体的表征
此实施例的目的是产生并表征S7AB-H8的亲和力成熟的变体。
通过噬菌体展示进行AB-H8的亲和力成熟。简言之，将编码人源化抗体的重链和/或轻链的多核苷酸中的残基诱变并在噬菌体中表达。在重组人Siglec-7蛋白上进行几轮选择后，对所选噬菌体进行了测序，并在哺乳动物细胞中表达了重组抗体，并纯化以进行进一步分析。选择并产生了S7AB-H8的45种亲和力成熟变体抗体，即S7AB-H8.1至S7AB-H8.45。在亲和力成熟抗体S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.44和S7AB-H8.45的子集中，将另外的突变引入重链可变结构域中，从而产生另外的抗体：S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1和S7AB-H8.45.2。所述抗体的重链可变区HVR序列描绘于以下表6A至6C中。所述抗体的轻链可变区HVR序列描绘于以下表7A至7C中。所述抗体的重链框架区描绘于以下表8A至8D中。所述抗体的轻链框架区描绘于以下表9A至9D中。所述抗体的重链可变区序列描绘于以下表10中。所述抗体的轻链可变区序列描绘于以下表11中。
根据上述实施例1中描述的方法，通过生物层干涉测量法来测量S7AB-H8和变体S7AB-H8.1至S7AB-H8.45对人Siglec-7的亲和力。结果总结于以下表4中。
表4：S7AB-H8及其变体对人Siglec-7的亲和力测量值
Figure BDA0002921167240001931
Figure BDA0002921167240001941
与亲本抗体S7AB-H8相比，亲和力成熟抗体表现出广泛的亲和力，表观亲和力提高0.01至>1000倍。
还根据实施例1中描述的方法，通过流式细胞术评估了亲和力成熟抗体S7AB-H8.1至S7AB-H8.45与原代树突细胞的结合，并直接与亲本人源化抗体S7AB-H8和S7AB嵌合抗体进行了比较。亲和力成熟抗体中的9种，S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.11、S7AB-H8.13、S7AB-H8.18、S7AB-H8.20、S7AB-H8.35、S7AB-H8.43和S7AB-H8.44；S7AB-H8；以及S7AB嵌合抗体的结合结果在图2中示出。亲和力成熟抗体表现出与树突细胞的一系列结合。一些抗体(例如S7AB-H8.11和S7AB-H8.13)与嵌合Ab或亲本人源化抗体S7AB-H8相比结合程度较差；一些抗体(例如S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.20和S7AB-H8.35)与S7AB嵌合抗体或S7AB-H8相比结合程度适度更好；一些抗体(包括S7AB-H8.43和S7AB-H8.44)与S7AB嵌合抗体和S7AB-H8相比，显示显著增加的结合。出人意料地，与S7AB-H8.2相比，S7AB-H8.44和S7AB-H8.43展示与细胞的结合增加，尽管如通过生物层干涉测量法所测量，所述三种抗体对重组Siglec-7具有相似的结合亲和力(KD)。因此，抗体与细胞结合的强度不一定是通过其对重组蛋白的亲和力来预测的。
表征了亲和力成熟抗体的降低Siglec-7的细胞表面水平的能力，并且直接与S7AB-H8和S7AB嵌合抗体进行了比较。如以上实施例2中所描述进行原代树突细胞上Siglec-7的减少。半最大有效浓度(EC50)和Siglec-7的最大减少量总结于以下表5中，并且亲和力成熟抗体中的九种，S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.11、S7AB-H8.13、S7AB-H8.18、S7AB-H8.20、S7AB-H8.35、S7AB-H8.43和S7AB-H8.44的结果示于图3中。
表5：通过S7AB、S7AB-H8和亲和力成熟变体进行的Siglec-7细胞表面下调
Figure BDA0002921167240001951
Figure BDA0002921167240001961
Figure BDA0002921167240001971
Figure BDA0002921167240001981
亲和力成熟抗体它们的在降低Siglec-7的细胞表面水平的能力方面表现出广泛范围的效力。一些抗体(例如S7AB-H8.11和S7AB-H8.13)的效力显著低于S7AB-H8或S7AB嵌合抗体；多种抗体(例如S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.20和S7AB-H8.35)表现出与亲本抗体S7AB-H8相比效力的适度1.4至4倍增加；并且一些抗体(包括S7AB-H8.18、S7AB-H8.43和S7AB-H8.44)显示与S7AB-H8相比效力的大于5倍增加以及与S7AB嵌合抗体相比效力的大于15倍增加。所述抗体还展示最大程度地降低树突细胞表面上的Siglec-7水平的一系列能力。用一些抗体(例如S7AB-H8.11和S7AB-H8.13)处理树突状细胞导致超过40％的Siglec-7剩余在细胞表面上；用一些抗体(例如S7AB-H8.1、S7AB-H8.20、S7AB-H8.35和S7AB-H8.43)处理导致9％-20％的Siglec-7剩余在细胞表面上，与S7AB-H8相比相似或适度改进；用其他抗体(例如S7AB-H8.2和S7AB-H8.44)处理导致不到5％的Siglec-7剩余在树突状细胞表面上，这是相对于S7AB-H8和S7AB嵌合体两者的显著改进。
出人意料地，在降低Siglec-7细胞表面水平的能力方面具有最佳效力的抗体(S7AB-H8.18、S7AB-H.43和S7AB-H8.44)和具有最佳的树突细胞表面上的Siglec-7水平的最大降低的抗体(S7AB-H8.2和S7AB-H8.44)在所有测试的亲和力成熟抗体中未显示相对于S7AB-H8与人Siglec-7结合的最高倍数改进(参见表4)。因此，不通过其对Siglec-7的相对结合亲和力来预测在降低Siglec-7的细胞表面水平方面发挥最佳作用的抗体。
在所评估的61种亲和力成熟抗体中，与嵌合Ab和亲本人源化抗体S7AB-H8相比，S7AB-H8.44是表现出显著提高的效力和树突细胞表面上Siglec-7的最大降低的一些抗体之一。
表6A：抗Siglec-7抗体的重链HVR H1序列
Figure BDA0002921167240001991
表6B：抗Siglec-7抗体的重链HVR H2序列
Figure BDA0002921167240002001
表6C：抗Siglec-7抗体的重链HVR H3序列
Figure BDA0002921167240002011
表7A：抗Siglec-7抗体的轻链HVR L1序列
Figure BDA0002921167240002012
Figure BDA0002921167240002021
表7B：抗Siglec-7抗体的轻链HVR L2序列
Figure BDA0002921167240002031
表7C：抗Siglec-7抗体的轻链HVR L3序列
Figure BDA0002921167240002032
Figure BDA0002921167240002041
表8A：抗Siglec-7抗体的重链框架1序列
Figure BDA0002921167240002042
Figure BDA0002921167240002051
Figure BDA0002921167240002061
表8B：抗Siglec-7抗体的重链框架2序列
Figure BDA0002921167240002062
Figure BDA0002921167240002071
表8C.抗Siglec-7抗体的重链框架3序列
Figure BDA0002921167240002072
Figure BDA0002921167240002081
表8D：抗Siglec-7抗体的重链框架4序列
Figure BDA0002921167240002082
Figure BDA0002921167240002091
表9A：抗Siglec-7抗体的轻链框架1序列
Figure BDA0002921167240002092
Figure BDA0002921167240002101
表9B：抗Siglec-7抗体的轻链框架2序列
Figure BDA0002921167240002102
表9C：抗Siglec-7抗体的轻链框架3序列
Figure BDA0002921167240002111
表9D：抗Siglec-7抗体的轻链框架4序列
Figure BDA0002921167240002112
Figure BDA0002921167240002121
表10：抗Siglec-7抗体的重链可变区序列
Figure BDA0002921167240002122
Figure BDA0002921167240002131
Figure BDA0002921167240002141
表11：抗Siglec-7抗体的轻链可变区序列
Figure BDA0002921167240002151
Figure BDA0002921167240002161
实施例4：Fc区对内化Siglec-7抗体的影响的表征
此实施例的目的是评估Fc对Siglec-7抗体在体外和体内降低原代骨髓细胞上Siglec-7的细胞表面水平的能力的影响。
抗体的Fc区可与细胞表面上表达的Fcγ受体相互作用，并且内源性地表达Siglec-7的骨髓细胞和其他免疫细胞也表达多种Fcγ受体。因此，测试了抗体的Fc与细胞表面Fcγ受体之间的不同人IgG同种型相互作用的影响以及抗体的簇集能力对抗体内化受体的能力的影响。
产生了包含S7AB-H8.44可变区和不同人IgG变体的抗体。所测试的Fc包括IgG1，其结合所有Fcγ受体；IgG1 SELF，其含有S267E和L328F突变，并且表现出与CD32B和CD32A的R131变体的结合增强；IgG2，其仅显示与CD32A的显著结合；IgG1 LALAPS，其含有L234A、L235A和P331S突变；以及IgG1 N297A。后两种Fc变体几乎不结合或不结合至任何Fcγ受体。根据实施例2中描述的方法，评估了所有五种抗体的降低人原代树突细胞上的细胞表面Siglec-7水平的能力。数据显示在图4中，并且表12总结抗体的半最大有效浓度(EC50)和最大Siglec-7下调。
表12：用S7AB-H8.44的Fc变体进行的Siglec-7细胞表面下调
Figure BDA0002921167240002171
具有不同Fc变体的抗体在它们降低树突状细胞表面上的Siglec-7的水平方面表现出一系列效力，其中含有IgG1 SELF Fc的抗体最有效，其次是具有野生型IgG1 Fc的抗体，然后是具有IgG2 Fc的抗体。两种不与Fcγ受体结合的Fc在下调Siglec-7方面表现出最弱的效力。对于所有Fc变体，最大Siglec-7下调导致不到5％的Siglec-7剩余在细胞表面上，尽管与用IgG2、IgG1 LALAPS或IgG1 N297A处理相比，用IgG1或IgG1 SELF处理导致更少的Siglec-7剩余在细胞表面上。这些数据表明，Siglec-7抗体的效力和最大受体减少通过所述抗体与一种或多种Fcγ受体的相互作用而增强。
还评估了S7AB-H8.44 Fc变体的在体内降低免疫细胞上的Siglec-7水平的能力。在一组实验中，在对人Siglec-7而言转基因的免疫活性C57BL/6小鼠中评估了S7AB-H8.44Fc变体在体内下调Siglec-7的能力。这些小鼠在骨髓细胞、NK细胞和CD8+ T细胞上以与在人免疫细胞上观察到的水平相似的水平表达人Siglec-7(数据未示出)。在第0天以10mg/kg相小鼠施用S7AB-H8.44 huIgG1、S7AB-H8.44huIgG2、S7AB-H8.44 huIgG1 SELF、S7AB-H8.44 huIgG1 LALAPS或对照抗体的单次腹膜内注射，并且在给药后6小时、第2天、第7天和第14天采集血液样品，并加工以进行FACS分析。
简言之，首先将血液样品在冰冷的ACK裂解缓冲液中孵育5分钟以裂解红细胞，且然后用冷FACS缓冲液(PBS、2％FBS、2mM EDTA)充分洗涤。此程序重复两次。然后在抗小鼠CD3-太平洋蓝、抗小鼠-NK1.1-APC-eFluor780、抗小鼠-CD11b-PerCP-Cy5.5、抗小鼠-Gr1-PE-Cy7、抗人CD33-PE、抗人Siglec-7-APC和存活力染料(ThermoFisher，目录号L34957)存在下，将细胞在冷FACS缓冲液中在Fc封闭溶液存在下在冰上孵育30分钟，然后用冷FACS缓冲液洗涤两次。将细胞用PBS中的4％多聚甲醛固定。在BD FACS Fortessa细胞仪(BectonDickinson,San Jose,CA)上采集染色的细胞，并用FlowJo软件(Ashland OR)分析数据。在小鼠CD11b+小鼠Gr1+细胞群体和小鼠NK1.1+NK细胞上测定Siglec-7表达的水平，并将Siglec-7水平相对于来自用对照抗体给药的小鼠的样品进行标准化。
在施用单剂量的S7AB-H8.44 huIgG1、S7AB-H8.44 huIgG2、S7AB-H8.44 huIgG1SELF或S7AB-H8.44 huIgG1 LALAPS的人Siglec-7转基因小鼠中，循环骨髓细胞(图5A)和循环NK细胞(图5B)上的Siglec-7水平在给药后6小时内显著降低，0％-2％受体剩余在NK细胞上并且6％-29％受体剩余在骨髓细胞上。NK细胞上的Siglec-7水平在6小时最大程度地降低，而骨髓细胞上的Siglec-7水平在6小时后继续下降，并在48小时进一步降低。到第14天，骨髓细胞和NK细胞上的Siglec-7水平均恢复至对照水平。所有四种抗体Fc变体均表现出相似的动力学以及受体减少和恢复程度，因为在给药组之间未观察到统计学上的显著差异。
在另一组实验中，使用了人源化NSG小鼠(hu-NSG)。这些小鼠移植有人CD34+造血干细胞，购自Jackson Laboratory，并在移植后16周使用。在第0天以10mg/kg向小鼠施用S7AB-H8.44 huIgG1、S7AB-H8.44 huIgG2或对照抗体的单次静脉内注射，并且在给药后2小时、第6天和第14天采集血液样品，并加工以进行FACS分析。
简言之，首先将血液样品在冰冷的ACK裂解缓冲液中孵育5分钟以裂解红细胞，且然后用冷FACS缓冲液(PBS、2％FBS、2mM EDTA)充分洗涤。此程序重复两次。然后在抗人CD45-APC-eFluor780、抗小鼠CD45-FITC、抗人CD3-PE-Cy7、抗人CD14-太平洋蓝、抗人CD11b-PerCP-Cy5.5、抗人CD33-PE、抗人Siglec-7-APC和存活力染料(ThermoFisher，目录号L34957)存在下，将细胞在冷FACS缓冲液中在Fc封闭溶液存在下在冰上孵育30分钟，然后用冷FACS缓冲液洗涤两次。将细胞用PBS中的4％多聚甲醛固定。在BD FACS Fortessa细胞仪(Becton Dickinson,San Jose,CA)上采集染色的细胞，并用FlowJo软件(Ashland OR)分析数据。在huCD45+huCD14+细胞群体上测定Siglec-7表达的水平，并将Siglec-7水平相对于来自用对照抗体给药的小鼠的样品进行标准化。
如图6所示，在施用单剂量的S7AB-H8.44 huIgG1或S7AB-H8.44huIgG2的hu-NSG小鼠中，在两个处理组中循环骨髓细胞上的Siglec-7水平在2小时内显著降低，并且这种降低在给药后维持至少6天。到第14天，在两个处理组中Siglec-7的水平已恢复至接近对照抗体处理的小鼠至的水平。人IgG1和人IgG2同种型在人源化NSG小鼠中均导致相似的动力学和Siglec-7下调程度，因为两组之间的差异没有统计学意义。
S7AB-H8.44 IgG1(接合Fcγ受体的同种型)在体内显示类似于IgG2和IgG1LALAPS同种型的Siglec-7下调和恢复的动力学(其具有显著降低的或无Fcγ受体结合)的观察结果是出人意料的，因为在体外，S7AB-H8.44 Fc变体对Siglec-7下调的效力与抗体与Fcγ受体相互作用的强度相关。因此，AB-H8.44抗体在体内下调多种同种型上的Siglec-7方面有能力。
实施例5：具有不同Fc变体的Siglec-7抗体的ADCC活性
此实施例的目的是评估S7AB-H8.44抗体的Fc变体在表达Siglec-7的细胞上诱导ADCC(抗体依赖性细胞毒性)的能力。已显示ADCC高度依赖于抗体的Fc区与效应细胞上表达的Fcγ受体之间的相互作用。
针对ADCC评估了S7AB-H8.44抗体的四种不同的人Fc变体：野生型IgG1、IgG2、IgG1SELF和IgG1 LALAPS。使用两种不同的靶细胞系HL60细胞和U937细胞测试了ADCC。HL60和U937细胞均表达Siglec-7，其中与HL60细胞相比，U937细胞以更高的水平表达Siglec-7(数据未示出)。根据制造商的说明书，使用三种不同的效应物:靶标比例6:1、10:1和25:1，使用ADCC Reporter生物测定(Promega)进行ADCC测定。简言之，首先用10μg/mL的抗Siglec-7抗体对靶细胞进行调理，然后添加效应细胞，并在37℃与5％CO2下孵育6小时。通过添加荧光素酶测定试剂来定量ADCC活性，并在发光计(Biotek)上读取板。作为测定中的阳性对照包括在WO2012/045752中公开的CD33抗体克隆280-31-01(mut)，其已显示具有有效的ADCC活性。HL60和U937细胞均以低于Siglec-7的水平表达CD33(数据未示出)。来自ADCC测定的结果示于图7中。
在HL60细胞和U937细胞上以及在所有三种效应物:靶标比例下，阳性对照抗体诱导了ADCC。出人意料地，没有一种Siglec-7抗体诱导超过背景水平的ADCC活性，包括具有野生型IgG1 Fc的抗体(其是已显示诱导许多抗体的有效ADCC的同种型)。
实施例6：具有不同Fc变体的Siglec-7抗体的CDC活性
此实施例的目的是评估S7AB-H8.44抗体的Fc变体在表达Siglec-7的细胞上诱导CDC(补体依赖性细胞毒性)的潜力。通过靶标引发CDC，所述靶标通过可经由其Fc区有效结合并活化补体的抗体进行调理。因此，抗体诱导CDC的能力取决于其同种型：人IgG1和IgG1SELF通常在诱导CDC方面有能力，而IgG2和IgG1 LALAPS通常在诱导CDC方面较弱。
评估了S7AB-H8.44抗体的五种不同Fc变体诱导CDC的潜力：野生型人IgG1、人IgG2、人IgG1 SELF、人IgG1 LALAPS和人IgG1N297A。通过测量表达Siglec-7的细胞系U937上的补体活化、C3b沉积来测试CDC的潜力。简言之，将U937细胞与10μg/mL的Siglec-7抗体在冰上孵育30分钟。添加最终浓度为20％的合并的人血清(Innovative Research)，并将细胞在37℃下孵育2小时。将细胞用冷FACS缓冲液(PBS、2％FBS、2mM EDTA)洗涤一次，然后与抗C3b-APC和存活力染料(ThermoFisher，目录号L34957)在Fc封闭溶液存在下在冰上孵育30分钟。将细胞用冷FACS缓冲液洗涤两次，然后用PBS中的4％多聚甲醛固定。在BD FACSFortessa细胞仪(Becton Dickinson,San Jose,CA)上采集染色的细胞，并用FlowJo软件(Ashland OR)分析数据。通过U937细胞上的C3b的MFI确定C3b沉积的水平，并将沉积相对于来自用对照抗体处理的细胞的样品标准化。结果在图8中示出。
出人意料地，在所测试的S7AB-H8.44 Fc变体中，与对照抗体相比，仅IgG1 N297A同种型诱导显著增加的补体活化。IgG1和IgG1SELF同种型均未诱导高于背景水平的CDC活性。
序列表
<110> 艾利妥(Alector, LLC)
<120> 抗SIGLEC-7抗体及其使用方法
<130> 73502-20023.40
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> US 62/682,439
<151> 2018-06-08
<160> 67
<170> 用于Windows 4.0版的FastSEQ
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 1
Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Thr Trp Met Asn
1 5 10
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 2
Gly Tyr Ala Phe Thr Met Ala Trp Met Asn
1 5 10
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 3
Gly Tyr Ala Phe Thr Gly Tyr Trp Met Asn
1 5 10
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 4
Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Ala Trp Met Asn
1 5 10
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 5
Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Ala Trp Met Asn
1 5 10
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 6
<223> Xaa = Glu、Met、Gly或Ala
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Thr、Ala或Tyr
<400> 6
Gly Tyr Ala Phe Thr Xaa Xaa Trp Met Asn
1 5 10
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 7
Arg Ile Phe Pro Gly Leu Gly His Thr Asn
1 5 10
<210> 8
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 8
Arg Ile Phe Pro Gly Tyr Gly His Thr Asn
1 5 10
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 6
<223> Xaa = Leu或Tyr
<400> 9
Arg Ile Phe Pro Gly Xaa Gly His Thr Asn
1 5 10
<210> 10
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 10
Asp Tyr Ser Asp Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 11
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 11
Arg Gly Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 12
Arg Gly Ser Gln Asp Thr Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 13
Arg Ala Ser Glu Asp Ile Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 14
Arg Ala Ser Gln Asp Ala Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 2
<223> Xaa = Gly或Ala
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Gln或Glu
<220>
<221> 变体
<222> 6
<223> Xaa = Ile、Thr或Ala
<400> 15
Arg Xaa Ser Xaa Asp Xaa Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 16
Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 17
Gln Gln Gly Asn Leu Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 18
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1 5
<210> 19
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 19
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1 5
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 20
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<210> 21
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 21
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 22
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1 5
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<211> 9
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 23
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<220>
<223> 合成构建体
<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<221> 变体
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 25
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
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<220>
<223> 合成构建体
<400> 27
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<220>
<223> 合成构建体
<400> 28
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<211> 14
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<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 6
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<220>
<221> 变体
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1 5 10
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 30
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser
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Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
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<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 33
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 34
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 34
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
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<210> 35
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 35
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<210> 36
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 36
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Cys
20 25 30
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asn Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 37
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Cys
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asn Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 38
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 38
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Cys
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asn Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 39
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 39
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Cys
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asn Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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Ala Arg Asp Tyr Ser Asp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 40
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Thr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Leu Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Ser Asp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 41
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Met Ala
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Tyr Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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Ala Arg Asp Tyr Ser Asp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 42
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Leu Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Ser Asp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Ala
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Leu Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Ser Asp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 44
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Ala
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Tyr Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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Ala Arg Asp Tyr Ser Asp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 45
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 45
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Ala
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Leu Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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100 105 110
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115
<210> 46
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 46
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ala Ala
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Leu Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
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100 105 110
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115
<210> 47
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 47
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Ala
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Tyr Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
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100 105 110
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115
<210> 48
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Ala
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Tyr Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 49
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 49
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 50
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 50
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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65 70 75 80
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100 105
<210> 51
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 51
Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 52
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 52
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 53
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 53
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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100 105
<210> 54
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 54
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 55
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 55
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Ser Gln Asp Thr Asn Thr Tyr
20 25 30
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50 55 60
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 56
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 56
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asp Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 57
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 57
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ala Asn Thr Tyr
20 25 30
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Leu Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 58
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 58
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gly Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 59
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 59
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Val Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 60
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 60
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Ile Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 61
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 61
Gln Val His Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Cys
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asn Gly His Thr Asn Tyr Ser Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Glu Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Ser Asp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 62
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 62
Asp Val Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 63
<211> 467
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 63
Met Leu Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Gly Arg Glu Arg Val
1 5 10 15
Glu Gly Gln Lys Ser Asn Arg Lys Asp Tyr Ser Leu Thr Met Gln Ser
20 25 30
Ser Val Thr Val Gln Glu Gly Met Cys Val His Val Arg Cys Ser Phe
35 40 45
Ser Tyr Pro Val Asp Ser Gln Thr Asp Ser Asp Pro Val His Gly Tyr
50 55 60
Trp Phe Arg Ala Gly Asn Asp Ile Ser Trp Lys Ala Pro Val Ala Thr
65 70 75 80
Asn Asn Pro Ala Trp Ala Val Gln Glu Glu Thr Arg Asp Arg Phe His
85 90 95
Leu Leu Gly Asp Pro Gln Thr Lys Asn Cys Thr Leu Ser Ile Arg Asp
100 105 110
Ala Arg Met Ser Asp Ala Gly Arg Tyr Phe Phe Arg Met Glu Lys Gly
115 120 125
Asn Ile Lys Trp Asn Tyr Lys Tyr Asp Gln Leu Ser Val Asn Val Thr
130 135 140
Ala Leu Thr His Arg Pro Asn Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu Ser
145 150 155 160
Gly Cys Phe Gln Asn Leu Thr Cys Ser Val Pro Trp Ala Cys Glu Gln
165 170 175
Gly Thr Pro Pro Met Ile Ser Trp Met Gly Thr Ser Val Ser Pro Leu
180 185 190
His Pro Ser Thr Thr Arg Ser Ser Val Leu Thr Leu Ile Pro Gln Pro
195 200 205
Gln His His Gly Thr Ser Leu Thr Cys Gln Val Thr Leu Pro Gly Ala
210 215 220
Gly Val Thr Thr Asn Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Ser Tyr Pro Pro
225 230 235 240
Gln Asn Leu Thr Val Thr Val Phe Gln Gly Glu Gly Thr Ala Ser Thr
245 250 255
Ala Leu Gly Asn Ser Ser Ser Leu Ser Val Leu Glu Gly Gln Ser Leu
260 265 270
Arg Leu Val Cys Ala Val Asp Ser Asn Pro Pro Ala Arg Leu Ser Trp
275 280 285
Thr Trp Arg Ser Leu Thr Leu Tyr Pro Ser Gln Pro Ser Asn Pro Leu
290 295 300
Val Leu Glu Leu Gln Val His Leu Gly Asp Glu Gly Glu Phe Thr Cys
305 310 315 320
Arg Ala Gln Asn Ser Leu Gly Ser Gln His Val Ser Leu Asn Leu Ser
325 330 335
Leu Gln Gln Glu Tyr Thr Gly Lys Met Arg Pro Val Ser Gly Val Leu
340 345 350
Leu Gly Ala Val Gly Gly Ala Gly Ala Thr Ala Leu Val Phe Leu Ser
355 360 365
Phe Cys Val Ile Phe Ile Val Val Arg Ser Cys Arg Lys Lys Ser Ala
370 375 380
Arg Pro Ala Ala Asp Val Gly Asp Ile Gly Met Lys Asp Ala Asn Thr
385 390 395 400
Ile Arg Gly Ser Ala Ser Gln Gly Asn Leu Thr Glu Ser Trp Ala Asp
405 410 415
Asp Asn Pro Arg His His Gly Leu Ala Ala His Ser Ser Gly Glu Glu
420 425 430
Arg Glu Ile Gln Tyr Ala Pro Leu Ser Phe His Lys Gly Glu Pro Gln
435 440 445
Asp Leu Ser Gly Gln Glu Ala Thr Asn Asn Glu Tyr Ser Glu Ile Lys
450 455 460
Ile Pro Lys
465
<210> 64
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 64
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
100 105 110
<210> 65
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 65
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 66
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 66
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
100 105 110
<210> 67
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 1
<223> Xaa = Asp或Glu
<220>
<221> 变体
<222> 2、3
<223> Xaa = 任何氨基酸并且它们中的至多2个可存在或不存在
<220>
<221> 变体
<222> 5、6
<223> Xaa = 任何氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Leu或Ile
<220>
<221> 变体
<222> 8、9、10、11、12、13、14、15
<223> Xaa = 任何氨基酸并且至多2个可存在或不存在
<220>
<221> 变体
<222> 17、18
<223> Xaa = 任何氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> 19
<223> Xaa = Leu或Ile
<400> 67
Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa

Claims (50)

1.一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
HVR-H1，所述HVR-H1包含根据式I的序列：GYAFTX1X2WMN(SEQ ID NO:6)，其中X1是E、M、G或A，并且X2是T、A或Y；
HVR-H2，所述HVR-H2包含根据式II的序列：RIFPGX1GHTN(SEQ ID NO:9)，其中X1是L或Y；以及
HVR-H3，所述HVR-H3包含DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)的序列；并且
所述轻链可变区包含：
HVR-L1，所述HVR-L1包含根据式III的序列：RX1SX2DX3NTYLN(SEQ ID NO:15)，其中X1是G或A，X2是Q或E，并且X3是I、T或A；
HVR-L2，所述HVR-L2包含YTSRLHS(SEQ ID NO:16)的序列；以及
HVR-L3，所述HVR-L3包含根据式IV的序列：QX1GX2X3X4PWT(SEQ ID NO:24)，其中X1是Q或G，X2是N或G，X3是L、T、V或I，并且X4是L或K。
2.一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
HVR-H1，所述HVR-H1包含选自由SEQ ID NO:1-5组成的组的氨基酸序列；
HVR-H2，所述HVR-H2包含选自由SEQ ID NO:7-8组成的组的氨基酸序列；以及
HVR-H3，所述HVR-H3包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；并且
所述轻链可变区包含：
HVR-L1，所述HVR-L1包含选自由SEQ ID NO:11-14组成的组的氨基酸序列；
HVR-L2，所述HVR-L2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；以及
HVR-L3，所述HVR-L3包含选自由SEQ ID NO:17-23组成的组的氨基酸序列。
3.如权利要求1-2中任一项所述的抗体，其中：
(a)所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTMAWMN(SEQ ID NO:2)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGYGHTN(SEQ ID NO:8)，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNLLPWT(SEQ ID NO:17)；
(b)所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTGYWMN(SEQ ID NO:3)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDTNTYLN(SEQ ID NO:12)，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNTLPWT(SEQ ID NO:20)；
(c)所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTGYWMN(SEQ ID NO:3)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNILPWT(SEQ ID NO:23)；或
(d)所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTAAWMN(SEQ ID NO:4)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNILPWT(SEQ ID NO:23)。
4.一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：所述重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTMAWMN(SEQ ID NO:2)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGYGHTN(SEQ ID NO:8)，以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)，并且所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNLLPWT(SEQ ID NO:17)。
5.一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：所述重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTGYWMN(SEQ ID NO:3)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)，以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)，并且所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDTNTYLN(SEQ ID NO:12)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNTLPWT(SEQ ID NO:20)。
6.一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：所述重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTGYWMN(SEQ ID NO:3)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)，以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)，并且所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNILPWT(SEQ ID NO:23)。
7.一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：所述重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYAFTAAWMN(SEQ ID NO:4)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIFPGLGHTN(SEQ ID NO:7)，以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列DYSDYYFDY(SEQ ID NO:10)，并且所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RGSQDINTYLN(SEQ ID NO:11)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YTSRLHS(SEQ ID NO:16)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QQGNILPWT(SEQ ID NO:23)。
8.如权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:36-48组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:49-60组成的组的氨基酸序列。
9.如权利要求8所述的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的轻链可变区；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链可变区；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区；或包含SEQ IDNO:43的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。
10.一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的轻链可变区。
11.一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链可变区。
12.一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。
13.一种结合至Siglec-7蛋白的抗体，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。
14.如权利要求1-13中任一项所述的抗体，其中所述抗体具有IgG类、IgM类或IgA类。
15.如权利要求14所述的抗体，其中所述抗体具有IgG类并且具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。
16.如权利要求15所述的抗体，其中：
(a)Fc区包含位置P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。
(b)所述Fc区包含位置L234A、L235A和P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；
(c)所述Fc区包含位置N297A处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；或
(d)所述Fc区包含位置S267E和L328F处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。
17.如权利要求1-16中任一项所述的抗体，其中所述Siglec-7蛋白是非人灵长类动物蛋白或人蛋白。
18.如权利要求1-17中任一项所述的抗体，其中所述Siglec-7蛋白是野生型蛋白。
19.如权利要求1-17中任一项所述的抗体，其中所述Siglec-7蛋白是天然存在的变体。
20.如权利要求1-19中任一项所述的抗体，其中所述Siglec-7蛋白在选自由以下组成的组的一种或多种细胞上表达：人树突细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人嗜中性粒细胞、人自然杀伤(NK)细胞、人T细胞、人T辅助细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞以及人小神经胶质细胞。
21.如权利要求1-20中任一项所述的抗体，其中所述抗体特异性地结合至人Siglec-7蛋白。
22.如权利要求1-19中任一项所述的抗体，其中所述抗体是结合至包含非人灵长类动物Siglec-7蛋白或人Siglec-7蛋白上的氨基酸残基的表位的抗体片段。
23.如权利要求1-21中任一项所述的抗体，其中所述抗体是结合至选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白的抗体片段：人Siglec-7、人Siglec-7的天然存在的变体和人Siglec-7的疾病变体。
24.如权利要求23所述的抗体，其中所述抗体片段与第二抗体片段交联，所述第二抗体片段结合至选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白：人Siglec-7、人Siglec-7的天然存在的变体和人Siglec-7的疾病变体。
25.如权利要求22-24中任一项所述的抗体，其中所述抗体片段是Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv或scFv片段。
26.如权利要求1-25中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、多价抗体、缀合抗体或嵌合抗体。
27.如权利要求1-26中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
28.如权利要求1-26中任一项所述的抗体，其中所述抗体是识别第一抗原和第二抗原的双特异性抗体。
29.如权利要求28所述的抗体，其中所述第一抗原是Siglec-7，并且所述第二抗原是：
(a)在免疫细胞上表达的配体和/或蛋白质，其中所述配体和/或所述蛋白质选自由以下组成的组：CD33、CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1受体和磷脂酰丝氨酸；或
(b)在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖脂。
30.如权利要求1-29中任一项所述的抗体，其中所述抗体与一种或多种结合选自由以下组成的组的免疫调节蛋白的抗体组合使用：CD33、CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR3、DR5、CD39、CD70、CD73、LAG3、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1受体、磷脂酰丝氨酸、致病核酸、反义GGCCCC(G2C4)重复序列扩增RNA以及它们的任何组合。
31.如权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述抗体对于人Siglec-7具有比包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少4倍；或比包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少1倍的解离常数(KD)，其中所述KD是通过生物层干涉测量法来测定。
32.如权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述抗体对于人Siglec-7具有在约124nM至约1pM或小于约1pM范围内的解离常数(KD)，并且其中所述KD是通过生物层干涉测量法来测定。
33.如权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述抗体降低Siglec-7的细胞表面水平。
34.如权利要求33所述的抗体，其中所述Siglec-7在人树突细胞的表面上表达。
35.如权利要求33或权利要求34所述的抗体，其中所述抗体在体外降低Siglec-7的细胞表面水平。
36.如权利要求33-35中任一项所述的抗体，其中如通过流式细胞术所测量，所述抗体在体外以小于150pM的半最大有效浓度(EC50)降低Siglec-7的细胞表面水平。
37.如权利要求33-36中任一项所述的抗体，其中如通过流式细胞术所测量，所述抗体在体外以比包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少50％；或比包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体低至少10％的EC50降低Siglec-7的细胞表面水平。
38.如权利要求33所述的抗体，其中Siglec-7的细胞表面水平降到至少20％。
39.如权利要求38所述的抗体，其中如通过流式细胞术所测量，所述抗体比包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体的效力高至少4.2倍；或比包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链可变区的抗Siglec-7抗体的效力高至少1.4倍。
40.如权利要求1-39中任一项所述的抗体，其中所述抗体与包含选自由以下组成的组的抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域的抗体竞争结合至Siglec-7：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1、S7AB-H8.45.2以及它们的任何组合。
41.如权利要求1-40中任一项所述的抗体，其中所述抗体与包含选自由以下组成的组的抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域的抗体结合基本相同的Siglec-7表位：S7AB-H1、S7AB-H2、S7AB-H3、S7AB-H4、S7AB-H5、S7AB-H6、S7AB-H7、S7AB-H8、S7AB-H9、S7AB-H10、S7AB-H11、S7AB-H12、S7AB-H8.1、S7AB-H8.2、S7AB-H8.3、S7AB-H8.4、S7AB-H8.5、S7AB-H8.6、S7AB-H8.7、S7AB-H8.8、S7AB-H8.9、S7AB-H8.10、S7AB-H8.11、S7AB-H8.12、S7AB-H8.13、S7AB-H8.14、S7AB-H8.15、S7AB-H8.16、S7AB-H8.17、S7AB-H8.18、S7AB-H8.19、S7AB-H8.20、S7AB-H8.21、S7AB-H8.22、S7AB-H8.23、S7AB-H8.24、S7AB-H8.25、S7AB-H8.26、S7AB-H8.27、S7AB-H8.28、S7AB-H8.29、S7AB-H8.30、S7AB-H8.31、S7AB-H8.32、S7AB-H8.33、S7AB-H8.34、S7AB-H8.35、S7AB-H8.36、S7AB-H8.37、S7AB-H8.38、S7AB-H8.39、S7AB-H8.40、S7AB-H8.41、S7AB-H8.42、S7AB-H8.43、S7AB-H8.44、S7AB-H8.45、S7AB-H8.9.1、S7AB-H8.9.2、S7AB-H8.10.1、S7AB-H8.10.2、S7AB-H8.29.1、S7AB-H8.29.2、S7AB-H8.30.1、S7AB-H8.30.2、S7AB-H8.34.1、S7AB-H8.34.2、S7AB-H8.35.1、S7AB-H8.35.2、S7AB-H8.44.1、S7AB-H8.44.2、S7AB-H8.45.1和S7AB-H8.45.2。
42.一种分离的核酸，所述分离的核酸包含编码如权利要求1-41中任一项所述的抗体的核酸序列。
43.一种载体，所述载体包含如权利要求42所述的核酸。
44.一种分离的宿主细胞，所述分离的宿主细胞包含如权利要求43所述的载体。
45.一种产生结合至Siglec-7的抗体的方法，所述方法包括培养如权利要求44所述的细胞以便产生所述抗体。
46.如权利要求45所述的方法，所述方法还包括回收由所述细胞产生的所述抗体。
47.一种结合至Siglec-7的分离的抗体，所述分离的抗体通过如权利要求45或权利要求46所述的方法产生。
48.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1-41中任一项所述的抗体和药学上可接受的载体。
49.一种预防癌症、降低癌症的风险或治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的如权利要求1-41中任一项所述的抗体。
50.如权利要求49所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑色素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、***癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)以及多发性骨髓瘤。
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