CN112462015A - 一种氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法 - Google Patents
一种氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112462015A CN112462015A CN202011294497.4A CN202011294497A CN112462015A CN 112462015 A CN112462015 A CN 112462015A CN 202011294497 A CN202011294497 A CN 202011294497A CN 112462015 A CN112462015 A CN 112462015A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- test
- bacterial endotoxin
- hydrobromide
- water
- interference
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/15—Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/579—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving limulus lysate
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法,包括如下步骤:鲎试剂灵敏度复核;确定氢溴酸瑞马***细菌内毒素限值以及最小稀释浓度;方法进行干扰实验,确认不存在干扰的供试品浓度;实验中用10‑30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供试品,并用细菌内毒素检测用水稀释得到供试品溶液;氢溴酸瑞马***细菌内毒素检查:用10‑30mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解氢溴酸瑞马***供试品,并用细菌内毒素检查用水稀释至不存在干扰的有效浓度进行细菌内毒素检查。该方法用一定浓度的聚山梨酯‑80水溶液溶解样品,可以消除供试品对细菌内毒素的干扰作用,方法简便易操作,实用性高。
Description
技术领域
本发明涉及细菌内毒素的检测技术领域,具体涉及一种氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法。
背景技术
细菌内毒素是革兰氏隐形细菌所产生的具有各种生物活性的大分子物质,其主要化学成分为脂多糖,内毒素是注射剂药品(原料等)中的主要污染物质。
鲎试验法是细菌内毒素的常用检测方法,其利用鲎试剂与内毒素发生凝集反应的机理,以定性或定量检测药品或机体血液中的感染细菌内毒素的一种体外检测方法。
药典中细菌内毒素检查一般用细菌内毒素检查用水溶解、稀释,然而,本发明人在研究过程中发现,用细菌内毒素检查用水(BET水)溶解并稀释氢溴酸瑞马***,对其细菌内毒素检测有抑制干扰作用,无法进行氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检查。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明提供一种氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法,该方法选用一定浓度的聚山梨酯-80溶解样品,可以消除氢溴酸瑞马***细菌内毒素检查过程中的抑制干扰作用。
为了达到上述技术效果,本发明提供了如下技术方案:
一种氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法,包括如下步骤:
(1)鲎试剂灵敏度复核,确保鲎试剂灵敏度结果在0.5λ~2.0λ之间;
(2)确定氢溴酸瑞马***细菌内毒素限值以及最小稀释浓度;
(3)进行干扰实验,确认不存在干扰的供试品浓度;实验中用10-30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供试品,并用细菌内毒素检测用水稀释得到供试品溶液;
(4)氢溴酸瑞马***细菌内毒素检查:用10-30mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解氢溴酸瑞马***供试品,并用细菌内毒素检查用水稀释至不存在干扰的有效浓度进行细菌内毒素检查。
其中,步骤(3)中的干扰试验,具体操作过程依据《中国药典》2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法(凝胶法)进行细菌内毒素干扰实验。
进一步地,步骤(3)中,采用10-20mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供试品。
进一步地,步骤(4)中,用10-20mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解供试品。
进一步地,在干扰实验之前,进行干扰预实验,初步确认不存在抑制干扰的供试品浓度范围。
进一步地,干扰预实验中,采用10-30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解、并用细菌内毒素检查用水稀释供试品。
进一步地,干扰预实验中,采用10-20mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解、并用细菌内毒素检查用水稀释供试品。
进一步地,干扰试验之后,进行细菌内毒素回收试验,确认用10-30mg/ml聚山梨酯80水溶液溶解供试品并用细菌内毒素检查用水稀释得到的供试品溶液用于对供试品细菌内毒素检查不存在干扰。
进一步地,供试品细菌内毒素限值定为每1mg氢溴酸瑞马***中含细菌内毒素的量不超过0.1EU。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:本发明采用特定浓度的聚山梨酯80对氢溴酸瑞马***供试品进行溶解并采用细菌内毒素检查用水稀释,消除了供试品对细菌内毒素的干扰作用,实现了水溶性药品氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测,且该方法简便易操作,可以作为氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法,值得推广应用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的解释和说明。
本发明采用的试剂、标准品及供试品如表1所示:
表1
本发明中参照《中国药典》2020年版第四部通则1143细菌内毒素检查法(凝胶法)的有关规定,复核鲎试剂灵敏度、确定供试品细菌内毒素限值以及最小稀释浓度。
经复核,本发明使用的鲎试剂灵敏度测得值λc(λc表示鲎试剂的灵敏度测得值)均在0.5λ~2λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)范围内,符合要求,可按标示灵敏度值进行试验。
按照《中国药典》2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法规定,确定氢溴酸瑞马***细菌内毒素限值为:
考虑到临床用药安全性将本品细菌内毒素限值定为:每1mg氢溴酸瑞马***中含细菌内毒素的量应小于0.1EU。
实施例1
干扰预试验:取供试品氢溴酸瑞马***,用2个厂家的鲎试剂(λ=0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验,结果见表2。
供试品溶液(A)的制备:精密称取供试品适量,用10mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液将供试品溶解制成浓度100mg/mL,并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C):取细菌内毒素工作标准品,加检查用水1.0mL使溶解,漩涡混合15min,用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B):分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL混匀。
阴性对照(D):细菌内毒素检查用水。
表2供试品干扰预试验结果
注:1.(+)为形成凝胶且倒置不变形,(-)为未形成凝胶或形成凝胶但倒置变形;
2.(+)/(-)个数代表平行管数。下同。
结果表明:供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂不存在干扰。
实施例2
干扰预试验:取供试品氢溴酸瑞马***,用2个厂家的鲎试剂(λ=0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验,结果见表3。
供试品溶液(A)的制备:精密称取供试品适量,用20mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液将供试品溶解制成浓度100mg/mL,并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C):取细菌内毒素工作标准品,加检查用水1.0mL使溶解,漩涡混合15min,用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B):分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL混匀。
阴性对照(D):细菌内毒素检查用水。
表3供试品干扰预试验结果
结果表明:供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂不存在干扰。
实施例3
干扰预试验:取供试品氢溴酸瑞马***(批号:180102),用2个厂家的鲎试剂(λ=0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验,结果见表4。
供试品溶液(A)的制备:精密称取供试品适量,用30mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液将供试品溶解制成浓度100mg/mL,并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C):取细菌内毒素工作标准品,加检查用水1.0mL使溶解,漩涡混合15min,用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B):分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL混匀。
阴性对照(D):细菌内毒素检查用水。
表4供试品干扰预试验结果
结果表明:供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂不存在干扰。
实施例4
聚山梨酯80的水溶液细菌内毒素回收试验:取细菌内毒素工作标准品1支用细菌内毒素检查用水溶解,置于漩涡混合仪上混合15min。精密称取供试品适量,用10mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液溶解并加入高浓度低剂量的细菌内毒素标准品,制成100mg/mL的供试液中含细菌内毒素工作标准品浓度为20EU/mL。用细菌内毒素检查用水并将供试品制成含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)四种浓度的细菌内毒素的供试品阳性溶液(B)(供试品的浓度均为0.6mg/mL),对每一浓度平行做4支。另取细菌内毒素检查用水制备内毒素标准对照溶液(C)含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)四种浓度各2支,取细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管(D)。依法操作,并记录结果,依法操作实验,结果见表5。
表5回收试验结果
注:(1)λC为鲎试剂灵敏度的测定值,λC=antilg(∑X/n)。下同。
(2)表中“/”表示样品无相关操作,故不涉及相应结果。下同。
表5显示:供试品溶液(A)和阴性对照管(D)所有平行管均为阴性,鲎试剂标示灵敏度的对照系列(C)和干扰系列(B)的结果均符合鲎试剂灵敏度复核要求。λc均在0.5λ~2λ范围内,说明10mg/mL聚山梨酯80(注射用)水溶液和细菌内毒素检查用水对供试品细菌内毒素检查不存在干扰,可以用10mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液、细菌内毒素检查用水对供试品细菌内毒素检查进行溶解及稀释。
实施例5
聚山梨酯80的水溶液细菌内毒素回收试验:取细菌内毒素工作标准品1支用细菌内毒素检查用水溶解,置于漩涡混合仪上混合15min。精密称取供试品适量,用20mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液溶解并加入高浓度低剂量的细菌内毒素标准品,制成100mg/mL的供试液中含细菌内毒素工作标准品浓度为20EU/mL。用细菌内毒素检查用水并将供试品制成含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)四种浓度的细菌内毒素的供试品阳性溶液(B)(供试品的浓度均为0.6mg/mL),对每一浓度平行做4支。另取细菌内毒素检查用水制备内毒素标准对照溶液(C)含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)四种浓度各2支,取细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管(D)。依法操作,并记录结果,依法操作实验,结果见表6。
表6回收试验结果
表6显示:供试品溶液(A)和阴性对照管(D)所有平行管均为阴性,鲎试剂标示灵敏度的对照系列(C)和干扰系列(B)的结果均符合鲎试剂灵敏度复核要求。λc均在0.5λ~2λ范围内,说明20mg/mL聚山梨酯80(注射用)水溶液和细菌内毒素检查用水对供试品细菌内毒素检查不存在干扰,可以用20mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液、细菌内毒素检查用水对供试品细菌内毒素检查进行溶解及稀释。
实施例6
聚山梨酯80的水溶液细菌内毒素回收试验:取细菌内毒素工作标准品1支用细菌内毒素检查用水溶解,置于漩涡混合仪上混合15min。精密称取供试品适量,用30mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液溶解并加入高浓度低剂量的细菌内毒素标准品,制成100mg/mL的供试液中含细菌内毒素工作标准品浓度为20EU/mL。用细菌内毒素检查用水并将供试品制成含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)四种浓度的细菌内毒素的供试品阳性溶液(B)(供试品的浓度均为0.6mg/mL),对每一浓度平行做4支。另取细菌内毒素检查用水制备内毒素标准对照溶液(C)含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)四种浓度各2支,取细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管(D)。依法操作,并记录结果,依法操作实验,结果见表7。
表7回收试验结果
表7显示:供试品溶液(A)和阴性对照管(D)所有平行管均为阴性,鲎试剂标示灵敏度的对照系列(C)和干扰系列(B)的结果均符合鲎试剂灵敏度复核要求。λc均在0.5λ~2λ范围内,说明30mg/mL聚山梨酯80(注射用)水溶液和细菌内毒素检查用水对供试品细菌内毒素检查不存在干扰,可以用30mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液、细菌内毒素检查用水对供试品细菌内毒素检查进行溶解及稀释。
实施例7
干扰实验:干扰实验中使用的鲎试剂的标识灵敏度为0.06EU/mL,根据C=λ/L(C为供试品溶液最小有效稀释浓度,λ为鲎试剂标识灵敏度,L细菌内毒素限值),得到供试品溶液有效稀释浓度为0.6mg/mL,根据预实验结果,该浓度不存在干扰,故选择0.6mg/mL进行正式实验。
精密称取供试品适量,用10mg/ml聚山梨酯80(注射用)的水溶液溶解供试品,制成为100mg/ml的浓度,并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成0.6mg/ml,制备含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四种浓度的细菌内毒素的供试品阳性溶液(B)(选用两个公司的鲎试剂、三批供试品分别进行实验,供试品分别标号为供试品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),对每一浓度平行做4支。另取细菌内毒素检查用水制备内毒素标准对照溶液含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四种浓度各2支(C),取细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管(D)。取供试品0.6mg/ml的浓度2支做供试品阴性(A)。依法操作,并记录结果。
接受标准:无细菌内毒素浓度的供试品溶液平行管(A)均为阴性,阴性细菌内毒素检查用水平行管均为(D)阴性,含内毒素浓度细菌内毒素检查用水溶液(C)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求,含内毒素浓度的供试品溶液(B)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求。
实验结果如表8所示。
表8氢溴酸瑞马***细菌内毒素干扰试验结果
试验结果表明:无细菌内毒素浓度的供试品溶液(A)和阴性细菌内毒素检查用水(D)平行管均为阴性,含内毒素浓度细菌内毒素检查用水溶液(C)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求,含内毒素浓度的供试品溶液(B)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求,λc均在0.5λ~2λ范围内,符合规定。
实施例8
干扰实验:干扰实验中使用的鲎试剂的标识灵敏度为0.06EU/mL,根据C=λ/L(C为供试品溶液有效稀释浓度,λ为鲎试剂标识灵敏度,L细菌内毒素限值),得到供试品溶液有效稀释浓度为0.6mg/mL,根据预实验结果,该浓度不存在干扰,故选择0.6mg/mL进行正式实验。
精密称取供试品适量,用20mg/ml聚山梨酯80(注射用)的水溶液溶解供试品,制成为100mg/ml的浓度,并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成0.6mg/ml,制备含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四种浓度的细菌内毒素的供试品阳性溶液(B)(选用两个公司的鲎试剂、三批供试品分别进行实验,供试品分别标号为供试品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),对每一浓度平行做4支。另取细菌内毒素检查用水制备内毒素标准对照溶液含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四种浓度各2支(C),取细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管(D)。取供试品0.6mg/ml的浓度2支做供试品阴性(A)。依法操作,并记录结果。
接受标准:无细菌内毒素浓度的供试品溶液平行管(A)均为阴性,阴性细菌内毒素检查用水平行管均为(D)阴性,含内毒素浓度细菌内毒素检查用水溶液(C)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求,含内毒素浓度的供试品溶液(B)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求。
实验结果如表9所示。
表9氢溴酸瑞马***细菌内毒素干扰试验结果
试验结果表明:无细菌内毒素浓度的供试品溶液(A)和阴性细菌内毒素检查用水(D)平行管均为阴性,含内毒素浓度细菌内毒素检查用水溶液(C)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求,含内毒素浓度的供试品溶液(B)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求,λc均在0.5λ~2λ范围内,符合规定。
实施例9
干扰实验:干扰实验中使用的鲎试剂的标识灵敏度为0.06EU/mL,根据C=λ/L(C为供试品溶液有效稀释浓度,λ为鲎试剂标识灵敏度,L细菌内毒素限值),得到供试品溶液有效稀释浓度为0.6mg/mL,根据预实验结果,该浓度不存在干扰,故选择0.6mg/mL进行正式实验。
精密称取供试品适量,用30mg/ml聚山梨酯80(注射用)的水溶液溶解供试品,制成为100mg/ml的浓度,并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成0.6mg/ml,制备含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四种浓度的细菌内毒素的供试品阳性溶液(B)(选用两个公司的鲎试剂、三批供试品分别进行实验,供试品分别标号为供试品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),对每一浓度平行做4支。另取细菌内毒素检查用水制备内毒素标准对照溶液含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四种浓度各2支(C),取细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管(D)。取供试品0.6mg/ml的浓度2支做供试品阴性(A)。依法操作,并记录结果。
接受标准:无细菌内毒素浓度的供试品溶液平行管(A)均为阴性,阴性细菌内毒素检查用水平行管均为(D)阴性,含内毒素浓度细菌内毒素检查用水溶液(C)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求,含内毒素浓度的供试品溶液(B)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求。
实验结果如表10所示。
表10氢溴酸瑞马***细菌内毒素干扰试验结果
试验结果表明:无细菌内毒素浓度的供试品溶液(A)和阴性细菌内毒素检查用水(D)平行管均为阴性,含内毒素浓度细菌内毒素检查用水溶液(C)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求,含内毒素浓度的供试品溶液(B)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求,λc均在0.5λ~2λ范围内,符合规定。
对比例1
干扰预试验:取供试品氢溴酸瑞马***,用2个厂家的鲎试剂(λ=0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验,结果见表3。
供试品溶液(A)的制备:精密称取供试品适量,细菌内毒素检查用水将供试品溶解制成浓度100mg/mL,并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C):取细菌内毒素工作标准品,加细菌内毒素检查用水1.0mL使溶解,漩涡混合15min,用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B):分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、0.125mg/mL混匀。
阴性对照(D):细菌内毒素检查用水。
表11供试品干扰预试验结果
结果表明:供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂存在干扰。
对比例2
干扰预试验:取供试品氢溴酸瑞马***,用2个厂家的鲎试剂(λ=0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验,结果见表3。
供试品溶液(A)的制备:精密称取供试品适量,用5mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液将供试品溶解制成浓度100mg/mL,并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C):取细菌内毒素工作标准品,加检查用水1.0mL使溶解,漩涡混合15min,用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B):分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL混匀。
阴性对照(D):细菌内毒素检查用水。
表12供试品干扰预试验结果
结果表明:供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂存在干扰。
对比例3
干扰预试验:取供试品氢溴酸瑞马***,用2个厂家的鲎试剂(λ=0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验,结果见表3。
供试品溶液(A)的制备:精密称取供试品适量,用35mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液将供试品溶解制成浓度100mg/mL,并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C):取细菌内毒素工作标准品,加检查用水1.0mL使溶解,漩涡混合15min,用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B):分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、0.125mg/mL混匀。
阴性对照(D):细菌内毒素检查用水。
表13供试品干扰预试验结果
结果表明:供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂存在干扰。
对比例4
干扰预试验:取供试品氢溴酸瑞马***,用2个厂家的鲎试剂(λ=0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验,结果见表3。
供试品溶液(A)的制备:精密称取供试品适量,二甲亚砜将供试品溶解制成浓度100mg/mL,并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C):取细菌内毒素工作标准品,加细菌内毒素检查用水1.0mL使溶解,漩涡混合15min,用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B):分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL混匀。
阴性对照(D):细菌内毒素检查用水。
表14供试品干扰预试验结果
结果表明:供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂存在干扰。
对比例5
干扰预试验:取供试品氢溴酸瑞马***,用2个厂家的鲎试剂(λ=0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验,结果见表3。
供试品溶液(A)的制备:精密称取供试品适量,5mg/mL的聚乙二醇400将供试品溶解制成浓度100mg/mL,并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C):取细菌内毒素工作标准品,加细菌内毒素检查用水1.0mL使溶解,漩涡混合15min,用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B):分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL混匀。
阴性对照(D):细菌内毒素检查用水。
表16供试品干扰预试验结果
结果表明:供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂存在干扰。
对比例6
干扰预试验:取供试品氢溴酸瑞马***,用2个厂家的鲎试剂(λ=0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验,结果见表3。
供试品溶液(A)的制备:精密称取供试品适量,5mg/mL的单月桂酸酯(PEG400ML)将供试品溶解制成浓度100mg/mL,并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C):取细菌内毒素工作标准品,加细菌内毒素检查用水1.0mL使溶解,漩涡混合15min,用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/ml和0.5EU/ml。
供试品阳性对照(B):分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL混匀。
阴性对照(D):细菌内毒素检查用水。
表17供试品干扰预试验结果
结果表明:供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂存在干扰。
尽管这里参照本发明的解释性实施例对本发明进行了描述,上述实施例仅为本发明较佳的实施方式,本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,应该理解,本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式,这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。
Claims (8)
1.一种氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)鲎试剂灵敏度复核,确保鲎试剂灵敏度结果在0.5λ~2.0λ之间;
(2)确定氢溴酸瑞马***细菌内毒素限值以及最小稀释浓度;
(3)进行干扰实验,确认不存在干扰的供试品浓度;实验中用10-30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供试品,并用细菌内毒素检测用水稀释得到供试品溶液;
(4)氢溴酸瑞马***细菌内毒素检查:用10-30mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解氢溴酸瑞马***供试品,并用细菌内毒素检查用水稀释至不存在干扰的有效浓度进行细菌内毒素检查。
2.根据权利要求1所述的氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法,其特征在于,步骤(3)中,采用10-20mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供试品。
3.根据权利要求1所述的氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法,其特征在于,步骤(4)中,用10-20mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解供试品。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法,其特征在于,在干扰实验之前,进行干扰预实验,初步确认不存在抑制干扰的供试品浓度范围。
5.根据权利要求4所述的氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法,其特征在于,干扰预实验中,采用10-30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解、并用细菌内毒素检查用水稀释供试品。
6.根据权利要求5所示的氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法,其特征在于,干扰预实验中,采用10-20mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解、并用细菌内毒素检查用水稀释供试品。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法,其特征在于,干扰试验之后,进行细菌内毒素回收试验,确认用10-30mg/ml聚山梨酯80水溶液溶解供试品并用细菌内毒素检查用水稀释得到的供试品溶液用于对供试品细菌内毒素检查不存在干扰。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法,其特征在于,供试品细菌内毒素限值定为每1mg氢溴酸瑞马***中含细菌内毒素的量不超过0.1EU。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011294497.4A CN112462015B (zh) | 2020-11-18 | 2020-11-18 | 一种氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011294497.4A CN112462015B (zh) | 2020-11-18 | 2020-11-18 | 一种氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112462015A true CN112462015A (zh) | 2021-03-09 |
CN112462015B CN112462015B (zh) | 2022-07-12 |
Family
ID=74837184
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011294497.4A Active CN112462015B (zh) | 2020-11-18 | 2020-11-18 | 一种氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112462015B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113607903A (zh) * | 2021-07-30 | 2021-11-05 | 振德医疗用品股份有限公司 | 一种检测含有正电荷聚合物细菌内毒素的方法 |
Citations (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5378610A (en) * | 1990-09-28 | 1995-01-03 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) | Method for assaying endotoxin in serum or plasma using limulus amoebocyte lysate |
WO2005062051A1 (de) * | 2003-12-20 | 2005-07-07 | Profos Ag | Verfahren zum nachweis von endotoxin |
JPWO2006137444A1 (ja) * | 2005-06-22 | 2009-01-22 | 生化学工業株式会社 | リポアラビノマンナンの反応性除去方法とその応用 |
US20090143292A1 (en) * | 2007-08-29 | 2009-06-04 | Neose Technologies, Inc. | Liquid Formulation of G-CSF Conjugate |
EP2637662A1 (en) * | 2010-11-08 | 2013-09-18 | PAION UK Ltd. | Dosing regimen for sedation with cns 7056 (remimazolam) |
WO2013174883A1 (en) * | 2012-05-22 | 2013-11-28 | Paion Uk Limited | Compositions comprising short-acting benzodiazepines |
CN103520227A (zh) * | 2013-10-09 | 2014-01-22 | 南京农业大学 | 一种板蓝根注射用原位凝胶及其制备方法 |
WO2015076340A1 (ja) * | 2013-11-21 | 2015-05-28 | 小野薬品工業株式会社 | 全身麻酔および/または鎮静のための注射用組成物 |
US20160161490A1 (en) * | 2014-12-05 | 2016-06-09 | Sawai Pharmaceutical Co., Ltd. | Reagent for measuring endotoxin and method for measuring endotoxin |
CN105866080A (zh) * | 2016-04-05 | 2016-08-17 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 重组鲎三因子试剂及其检测内毒素的方法 |
CN106383113A (zh) * | 2016-08-26 | 2017-02-08 | 天津大学 | 一种提高生物气溶胶中内毒素采集和检测效率的方法 |
CN107198691A (zh) * | 2016-03-17 | 2017-09-26 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 一种瑞马***的药物组合物 |
US20180188249A1 (en) * | 2015-07-28 | 2018-07-05 | Forschungszentrum Borstel Leibniz-Zentrum Fuer Medizin Und Biowissenschaften | Improved bacterial endotoxin test for the determination of endotoxins |
CN108503644A (zh) * | 2016-12-09 | 2018-09-07 | 成都倍特药业有限公司 | 一种苯并二氮杂*衍生物的氢溴酸盐及其制备方法和用途 |
CN109613228A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-04-12 | 湛江安度斯生物有限公司 | 一种减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测的方法 |
CN109641000A (zh) * | 2016-04-14 | 2019-04-16 | Paion英国有限公司 | 经口吸入和经鼻用的苯并二氮杂*类 |
US20190359619A1 (en) * | 2017-02-09 | 2019-11-28 | Watson Laboratories Inc. | Process for the preparation of remimazolam and solid state forms of remimazolam salts |
CN111141909A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-05-12 | 南京健友生化制药股份有限公司 | 一种凝胶法检测硫代甘油中细菌内毒素的方法 |
US20200300874A1 (en) * | 2017-11-09 | 2020-09-24 | Andreas BUCHBERGER | Method and kit for sample preparation and endotoxin determination |
CN111700864A (zh) * | 2020-06-28 | 2020-09-25 | 海南倍特药业有限公司 | 一种注射用伏立康唑的制备方法 |
CN111781365A (zh) * | 2020-06-29 | 2020-10-16 | 南京健友生化制药股份有限公司 | 一种凝胶法检测盐酸右美托咪定中细菌内毒素的方法 |
CN111850089A (zh) * | 2019-04-28 | 2020-10-30 | 成都倍特药业股份有限公司 | 抑菌性β受体激动剂药物的微生物限度检查方法及组合物 |
-
2020
- 2020-11-18 CN CN202011294497.4A patent/CN112462015B/zh active Active
Patent Citations (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5378610A (en) * | 1990-09-28 | 1995-01-03 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) | Method for assaying endotoxin in serum or plasma using limulus amoebocyte lysate |
WO2005062051A1 (de) * | 2003-12-20 | 2005-07-07 | Profos Ag | Verfahren zum nachweis von endotoxin |
JPWO2006137444A1 (ja) * | 2005-06-22 | 2009-01-22 | 生化学工業株式会社 | リポアラビノマンナンの反応性除去方法とその応用 |
US20090143292A1 (en) * | 2007-08-29 | 2009-06-04 | Neose Technologies, Inc. | Liquid Formulation of G-CSF Conjugate |
EP2637662A1 (en) * | 2010-11-08 | 2013-09-18 | PAION UK Ltd. | Dosing regimen for sedation with cns 7056 (remimazolam) |
WO2013174883A1 (en) * | 2012-05-22 | 2013-11-28 | Paion Uk Limited | Compositions comprising short-acting benzodiazepines |
CN108578413A (zh) * | 2012-05-22 | 2018-09-28 | Paion英国有限公司 | 包含短效苯二氮杂*类化合物的组合物 |
CN103520227A (zh) * | 2013-10-09 | 2014-01-22 | 南京农业大学 | 一种板蓝根注射用原位凝胶及其制备方法 |
WO2015076340A1 (ja) * | 2013-11-21 | 2015-05-28 | 小野薬品工業株式会社 | 全身麻酔および/または鎮静のための注射用組成物 |
US20160161490A1 (en) * | 2014-12-05 | 2016-06-09 | Sawai Pharmaceutical Co., Ltd. | Reagent for measuring endotoxin and method for measuring endotoxin |
US20180188249A1 (en) * | 2015-07-28 | 2018-07-05 | Forschungszentrum Borstel Leibniz-Zentrum Fuer Medizin Und Biowissenschaften | Improved bacterial endotoxin test for the determination of endotoxins |
CN111638346A (zh) * | 2015-07-28 | 2020-09-08 | 博斯特尔莱布尼茨林根岑特鲁姆研究中心 | 用于测定内毒素的改善的细菌内毒素测试 |
CN107198691A (zh) * | 2016-03-17 | 2017-09-26 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 一种瑞马***的药物组合物 |
CN105866080A (zh) * | 2016-04-05 | 2016-08-17 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 重组鲎三因子试剂及其检测内毒素的方法 |
CN109641000A (zh) * | 2016-04-14 | 2019-04-16 | Paion英国有限公司 | 经口吸入和经鼻用的苯并二氮杂*类 |
CN106383113A (zh) * | 2016-08-26 | 2017-02-08 | 天津大学 | 一种提高生物气溶胶中内毒素采集和检测效率的方法 |
CN108503644A (zh) * | 2016-12-09 | 2018-09-07 | 成都倍特药业有限公司 | 一种苯并二氮杂*衍生物的氢溴酸盐及其制备方法和用途 |
US20190359619A1 (en) * | 2017-02-09 | 2019-11-28 | Watson Laboratories Inc. | Process for the preparation of remimazolam and solid state forms of remimazolam salts |
US20200300874A1 (en) * | 2017-11-09 | 2020-09-24 | Andreas BUCHBERGER | Method and kit for sample preparation and endotoxin determination |
CN109613228A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-04-12 | 湛江安度斯生物有限公司 | 一种减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测的方法 |
CN111850089A (zh) * | 2019-04-28 | 2020-10-30 | 成都倍特药业股份有限公司 | 抑菌性β受体激动剂药物的微生物限度检查方法及组合物 |
CN111141909A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-05-12 | 南京健友生化制药股份有限公司 | 一种凝胶法检测硫代甘油中细菌内毒素的方法 |
CN111700864A (zh) * | 2020-06-28 | 2020-09-25 | 海南倍特药业有限公司 | 一种注射用伏立康唑的制备方法 |
CN111781365A (zh) * | 2020-06-29 | 2020-10-16 | 南京健友生化制药股份有限公司 | 一种凝胶法检测盐酸右美托咪定中细菌内毒素的方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JONATHAN WONG等: "Endotoxin detection in end-stage kidney disease", 《JOURNAL OF CLINICAL PATHOLOGY》 * |
商军等: "油剂普鲁卡因青霉素注射液细菌内毒素检查方法的研究", 《中国兽药杂志》 * |
张婷婷等: "紫杉醇细菌内毒素检查法的研究", 《中国药品标准》 * |
朱巍巍等: "内毒素的检测方法与临床应用进展", 《诊断学理论与实践》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113607903A (zh) * | 2021-07-30 | 2021-11-05 | 振德医疗用品股份有限公司 | 一种检测含有正电荷聚合物细菌内毒素的方法 |
CN113607903B (zh) * | 2021-07-30 | 2024-03-15 | 振德医疗用品股份有限公司 | 一种检测含有正电荷聚合物细菌内毒素的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN112462015B (zh) | 2022-07-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112462015B (zh) | 一种氢溴酸瑞马***细菌内毒素的检测方法 | |
CN106048052A (zh) | 用于检测食品中金黄色葡萄球菌和整合子的试剂盒和方法 | |
CN111141909B (zh) | 一种凝胶法检测硫代甘油中细菌内毒素的方法 | |
CN103837673A (zh) | 一种检测盐酸溴己新原料的细菌内毒素含量的方法 | |
CN110954392A (zh) | 一种酶法制备头孢丙烯中酶蛋白残留的检测方法 | |
Singh et al. | Spectrophotometric determination of corticosteroids and its application in pharmaceutical formulation | |
CN116754663A (zh) | 药物中苯甲酸、苯甲醛、苯甲醇和氯化苄的检测方法 | |
CN111781365A (zh) | 一种凝胶法检测盐酸右美托咪定中细菌内毒素的方法 | |
Basavaiah et al. | Spectrophotometric analysis of some phenothiazine neuroleptics using chloramine-T | |
Jatlow | Ultraviolet spectrophotometric measurement of chlordiazepoxide in plasma | |
CN116678694A (zh) | 棕榈酸帕利哌酮的细菌内毒素的检测方法 | |
CN116106435B (zh) | 一种含有9种抗生素的标准溶液的制备方法及应用 | |
US20070196927A1 (en) | Method For Qualitative And/Or Quantitative Detection Of Polyethylene Glycols In Biological Fluids | |
Sharma et al. | Spectrophotometric and atomic absorption spectrometric determination and validation of azathioprine in API and pharmaceutical dosage form | |
CN117907052A (zh) | 一种油酸钠中细菌内毒素检查方法 | |
CN117191520A (zh) | 肾上腺素原料药细菌内毒素检测方法 | |
Ibrahim et al. | Determination of tolterodine via ion pair complex using spectrophotometric method in pharmaceutical formulation | |
CN116106441A (zh) | 高效液相色谱-串联质谱同时测定牛羊肉中6种药物残留量的方法 | |
CN115420565A (zh) | 检测曲安奈德注射液中细菌内毒素的方法 | |
CN101299010A (zh) | 那西肽制剂含量的检测方法 | |
CN101887062A (zh) | 含有13c-尿素溶液的检测幽门螺旋杆菌试剂盒 | |
Ramesh et al. | Spectrophotometric determination of ofloxacin in pharmaceuticals by redox reaction | |
Karunasree et al. | In vitro protein binding study of ciprofloxacin by new UV-spectrophotometric method | |
Koupparis et al. | Automated stopped-flow system in pharmaceutical and clinical analysis: Kinetic determination of acetaminophen in formulations and serum by using the iron (II)—2, 4, 6-tris (2-pyridyl)-s-triazine | |
CN115343431A (zh) | 一种乳剂样品中细菌内毒素的检查方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |