CN112457999B - 一种富硒酿酒酵母菌株及其应用 - Google Patents

一种富硒酿酒酵母菌株及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112457999B
CN112457999B CN202011250139.3A CN202011250139A CN112457999B CN 112457999 B CN112457999 B CN 112457999B CN 202011250139 A CN202011250139 A CN 202011250139A CN 112457999 B CN112457999 B CN 112457999B
Authority
CN
China
Prior art keywords
selenium
yeast
saccharomyces cerevisiae
culture medium
glucose
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202011250139.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112457999A (zh
Inventor
王春安
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chongqing Blue Peptide Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Chongqing Blue Peptide Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chongqing Blue Peptide Biotechnology Co ltd filed Critical Chongqing Blue Peptide Biotechnology Co ltd
Priority to CN202011250139.3A priority Critical patent/CN112457999B/zh
Publication of CN112457999A publication Critical patent/CN112457999A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112457999B publication Critical patent/CN112457999B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/20—Inorganic substances, e.g. oligoelements
    • A23K20/30—Oligoelements
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
    • A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Fodder In General (AREA)

Abstract

本发明公开了一株富硒酿酒酵母菌株及其应用。所述菌株为Saccharomyces cervisiae TZJM，于2020年8月25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号：CGMCC No.20553，上述富硒酿酒酵母菌株能高效转化无机硒为有机硒，硒转化效率达到95%以上。本发明还公开了一种应用上述富硒酿酒酵母菌株制备酵母硒的方法，以富硒酿酒酵母菌株为发酵菌株、***钠为硒源，利用酵母发酵技术，通过生物转化将***钠变成植物酵母硒，酿酒酵母充分利用培养基中的硒源合成自身蛋白。本方法生产的酵母硒的硒含量达3000‑6000mg/kg，有机硒占总硒含量的99%以上，生物利用率高，环境污染小。将所述酵母硒应用到畜禽养殖中，可有效提高蛋鸡的产蛋率和蛋中硒含量，明显加速氟苯尼考的药物代谢，减少鸡蛋中的药物残留。

Description

一种富硒酿酒酵母菌株及其应用
技术领域
本发明属于微生物、微生物发酵和饲料添加剂领域，具体涉及一种富硒酿酒酵母菌株及其应用。
背景技术
硒(Se)，作为一种必须的微量元素，能够在动物体内多个生物过程中发挥重要功能，在过去的几十年里引起了营养学家的广泛关注。硒能够在抗氧化和内分泌、免疫功能中发挥重要作用。往饲料里额外添加硒源是在动物生产中补硒的常用途径，硒主要以无机硒和有机硒两种形式添加到动物饲料中，其中有机硒比无机硒具有更加高效的利用率和更低的毒性，对环境也不易造成污染。酵母用来制备有机硒成为了研究热点，但由于不同酵母菌种对硒的抗性有较大差异，从而对硒离子的吸收转化能力差异也很大。因此，有机硒的转化率不高，还含有一定比例的未完全转化的无机硒，对人体的健康易形成隐患。筛选一株能高效转化无机硒为有机硒的酵母菌株意义重大。
当前，畜禽养殖过程中大量或不科学使用抗生素等药物造成的药物残留问题，严重影响了产品质量，危害人们健康和生活质量，造成了严重的经济损失和不良影响。但是由于目前我国总体的养殖环境不佳，为防病治病需要又不得不继续使用抗生素等药物，这是当前养殖业面临的困惑和难点问题。开发一种能加速药物代谢的绿色生物饲料添加剂对减少对抗生素依赖、降低药物残留具有重要意义。微量元素是维持人体正常活动所必须的营养要素，它参与人体内许多重要的代谢过程。如：食物中长期缺乏钙、磷、锌时，可使细胞色素P450减少而影响代谢；铁、锌等微量元素可促进肝脏的药物代谢。硒具有独特的生化性质和药理作用，能提高体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能，显著提高吞噬细胞对病原微生物的杀菌活性，促进活性细胞因子和特异性抗体的产生。有机硒化合物因其广泛的生物学活性而成为抗肿瘤、心血管保护、抗病毒、抗菌、免疫调节及神经保护药物研发的热点，大量研究表明有机硒对肝脏有很强的保护作用，可以减少药物性肝损伤，这提示着有机硒可能具有促进机体组织器官(尤其是肝脏)对抗生素药物的代谢，加速药物排除和消除。
发明内容
本发明的目的是提供一种富硒酿酒酵母菌株，用于制备酵母硒，有机硒的转化效率达到95％以上。本发明的目的是通过以下措施实现的：
一种富硒酿酒酵母菌株，于2020年8月25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号：CGMCC No.20553。
本发明的另一目的是提供一种酵母硒，硒含量为3000-6000mg/kg，有机硒占总硒含量的比为99％以上。
本发明还提供了一种上述酵母硒的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：预种子液培养：将上述富硒酿酒酵母菌株活化后接种到200mL的 SD肉汤培养基中，在30℃下孵育18-24h，得到预种子液。
步骤2：种子液培养：20L种子罐中加入种子培养基，定容至10L，将步骤1所得的200mL预种子液全部接种到种子培养基中，在30℃恒温摇床培养，转速200-250r/min，培养18-24h，得到种子液。
步骤3：发酵罐发酵：发酵罐中加入500L初始培养基，将步骤2所得种子液全部接入，补料-分批操作对酵母进行高密度发酵培养。
步骤4：获得酵母硒：收集酵母菌体，洗涤菌体，加入复合酶，在40℃酶解2-2.5h(具体为2h或2.5h)，然后升温至50℃酶解0.5-1h(具体为0.5h或 1h)，高压均质机在50-100MPa(具体为50MPa或60MPa或100MPa)下匀浆2次对酵母进行破壁，将破壁后的酵母经冷冻干燥(真空度10Pa，温度为0℃至-50℃)2-4h(具体为2h或3h或4h)获得酵母硒。
上述制备方法中，所述SD肉汤培养基为***钠、SD肉汤-葡萄糖和蛋白胨的组合物，其中***钠0.09-0.13g/L(硒浓度为40-60mg/L)、SD肉汤-葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L，调节培养基pH为5.4-5.8。
所述种子培养基为***钠、葡萄糖、糖蜜、玉米浆、尿素、MgSO4·7H2O 和蛋白胨的组合物，其中***钠0.09-0.13g/L(硒浓度为40-60mg/L)，葡萄糖37.5g/L，糖蜜7.5g/L，玉米浆25g/L，尿素5g/L，MgSO4·7H2O 7.5g/L，调节培养基pH为5.4-5.8。
所述初始培养基为***钠、葡萄糖、糖蜜、玉米浆、尿素、KPO4、 MgSO4·7H2O的组合物，其中***钠0.09-0.13g/L(硒浓度为40-60mg/L)，葡萄糖0.124kg/L，糖蜜0.8g/L，玉米浆1.6g/L，尿素0.1g/L，KPO4 0.7g/L， MgSO4·7H2O 0.7g/L，调节培养基pH为5.4-5.8。
所述补料培养基为糖蜜和葡萄糖液混合物，其中糖蜜中的还原糖占总还原糖的30％-50％(具体为30％或40％或50％)，总还原糖浓度为500-700g/L(具体为500g/L或600g/L或700g/L)。
所述复合酶为葡聚糖酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶(质量比为1：2：2或1： 1：1)组成，葡聚糖酶的酶活为10000U/g，木瓜蛋白酶的酶活为80000U/g，碱性蛋白酶的酶活为60000U/g。本发明还提供了一种上述酵母硒在加速药物代谢方面的应用。所述药物为以氟衍生物为活性成分，包括：氟苯尼考。
有益效果：
1.本发明公开了一种富硒酿酒酵母菌株，能高效转化无机硒为有机硒，硒转化效率达到95％以上。
2.本发明提供了一种酵母硒，硒含量为3000-6000mg/kg，有机硒占总硒含量的99％以上，生物利用率高，环境污染小，有广泛的应用前景。
3.本发明提供了一种含有上述酵母硒的饲料，提高动物的生产性能，减少应激和疾病发生。
4.本发明提供了一种上述酵母硒的制备方法，以上述富硒酿酒酵母为发酵菌株，以***钠为硒源，利用酵母发酵技术，通过生物转化将***钠变成植物酵母硒，富硒酿酒酵母充分利用培养基中的硒源合成自身蛋白，可获得硒含量为 3000-6000mg/kg的酵母硒，其有机硒比例高达99％以上，实现大规模产业化的生产。
5.本发明还提供了一种上述酵母硒用在加速药物代谢方面的应用，减少动物机体对抗生素依赖、降低药物残留，增加动物的抗病能力，提高动物生产效能，改善动物产品的产量和质量，有助于畜牧业稳定健康的发展。
具体实施方案
下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员可以根据上述发明内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。
一、筛选富硒酿酒酵母菌株
(1)酿酒酵母菌的分离
马铃薯葡萄糖琼脂培养基：1)先将马铃薯去皮，切片，称200g并加争流束1000mL，煮沸半小时，用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL，制成20％的马铃薯汁；2)在20％的马铃薯汁中加入琼脂15g，煮沸融化，补加蒸馏水至1000 mL，并在115℃条件下高压灭菌20min；3)加入葡萄糖20g，冷却，制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基备用。
乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方和制备方法同马铃薯葡萄糖琼脂培养基，但不加琼脂而加乳酸，按每1000mL培养液中含5mL乳酸的量加入，并分装试管。
酵母菌分离：取来自3个不同猪场健康断奶仔猪粪便样3个，每个样品取少量接入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中，置28℃-30℃下培养24h，可见培养液变浑浊；用无菌吸管取上述培养后培养液0.1mL，注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中，置28℃-30℃下再培养24h；无菌操作取少许菌液置于载玻片中央的0.1％美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌形态和出芽生殖情况；活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用划线法将不着色形态和出芽生殖情况良好的酵母菌液接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板中，置28℃-30℃下培养24h，挑取单个菌落反复再次划线分离纯化，最终获得纯培养。共分离到11株酵母菌。
(2)酵母菌株耐高硒性能选育
制备含0.5％***钠的YPD液体培养基(酵母膏10g/L、蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L，再加***钠0.5％)，分别接种已培养24h的11株酵母菌液，接种量1％，于28℃-30℃下培养24h后观察。如果培养基变得浑浊，说明该菌株耐高硒，再美蓝染色镜检看是否染菌。最终得到3株耐高硒的酵母菌，分别命名为YZJM、TZJM、YTJM。
(3)酵母菌株转化无机硒能力选育
制备含硒浓度40-60mg/L的YPD液体培养基(酵母膏10g/L、蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L，再加***钠0.09-0.13g/L)，分别接种已培养24h的11株酵母菌液，接种量1％，于28℃-30℃下培养24h。将所得发酵液在8000-10000r/min 下离心20min，收集酵母菌体，洗涤菌体，干燥得到酵母硒粉。分析酵母硒中有机硒和无机硒含量(高建忠等，分析科学学报，2006，22(2)：157-160)，计算有机硒转化效率和酵母硒中有机硒占比。
由表1可知。三株酵母菌株吸收转化酵母硒能力差异非常大，其中菌株 TZJM效果最佳，制备的酵母硒粉中硒含量为2650mg/kg，有机硒占比99.5％，硒转化效率达到了95.8％，远高于菌株YZJM和菌株YTJM。因此，选择菌株 TZJM开展下一步的工作。
表1.三株酵母菌株转化无机硒效果对比
(4)酵母菌株鉴定
提取菌株TZJM的基因组，将菌株TZJM的18S rDNA进行扩增和测序(扩增和测序由北京奥科鼎盛生物科技有限公司进行)，其中，扩增得到额菌株TZJM 的18S rDNA核苷酸序列如下所述：
CATTTATACAGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATCGTTTA TTTGATAGTTCCTTTACTACATGGTATAACTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCTTAAAATCTCGACCCTTTGGAAGAGATGTATTTATTAGATAAAAAATC AATGTCTTCGGACTCTTTGATGATTCATAATAACTTTTCGAATCGCATGGCCTTGTGCTGGCGATGGTTCATTCAAATTTCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAG GATAGTGGCCTACCATGGTTTCAACGGGA
使用BLAST将该序列在NCBI中进行核酸序列比对，结果显示该菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，因此将菌株TZJM命名为酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)TZJM。该菌株于2020年8月25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为中国北京，保藏编号：CGMCC No.20553。
二、富硒酿酒酵母菌株制备酵母硒
1.预种子液培养：将所述酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)TZJM活化后接种到200mL的SD肉汤培养基中，在30℃下孵育18-24h，得到预种子液。
SD肉汤培养基为***钠、SD肉汤-葡萄糖和蛋白胨的组合物，其中***钠0.09-0.13g/L(硒浓度为40-60mg/L)、SD肉汤-葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L，调节pH为5.4-5.8。
2.种子液培养：在20L种子罐中进行，将所得的预种子液全部接种到种子培养基中，在30℃恒温摇床培养，转速200-250r/min，培养18-24h，得到种子液。
种子培养基为***钠、葡萄糖、糖蜜、玉米浆、尿素、MgSO4·7H2O和蛋白胨的组合物，其中***钠0.09-0.13g/L(硒浓度为40-60mg/L)，葡萄糖 37.5g/L，糖蜜7.5g/L，玉米浆25g/L，尿素5g/L，MgSO4·7H2O 7.5g/L，定容至10L，调节培养基pH＝5.4-5.8。
3.发酵罐发酵：在1m3的能够控制温度、pH、溶解氧、搅拌和泡沫的发酵罐中进行。对含500L初始培养基的发酵罐进行实罐灭菌，121℃灭菌20min，冷却至30℃时将步骤2)所得种子液全部接入。采用补料-分批操作进行发酵罐发酵：发酵开始后，当有乙醇生成，溶解氧上升的时候开始补加补料培养基，并以维持乙醇的量不上升、溶解氧不上升控制流加的营养物质，当溶解氧低至 15％-35％(具体可为15％-25％或25％-35％或20％-30％)时，控制营养物质流加量，维持溶氧不上升，在发酵8-12h(具体可为8h或12h)时补加补硒培养基，整个补硒过程在5-6h内完成，使发酵液最终硒浓度为100-300mg/L(具体可为 100mg/L或200mg/L或300mg/L)。采用流加氨水的方式补充氮源并控制发酵 pH为5.4-5.8，控制搅拌转速为200-300r/min，根据泡沫情况再补充消泡剂以控制泡沫。发酵36-38h(具体为36h或38h)时停止补料、补硒，发酵40h时结束，此时酵母产量为260-320g/L(具体为260g/L或300g/L或320g/L)。
发酵完毕后，将所得发酵液在8000-10000r/min下离心20min，收集酵母菌体，洗涤菌体，加入由葡聚糖酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶(质量比为1：2： 2或1：1：1)组成复合酶，在40℃酶解2-2.5h(具体为2h或2.5h)，然后升温至50℃酶解0.5-1h(具体为0.5h或1h)，最后再用高压均质机在50-100MPa (具体为50MPa或60MPa或100MPa)下匀浆2次对酵母进行破壁，将破壁后的酵母经冷冻干燥(真空度10Pa，温度为0℃至-50℃)2-4h(具体为2h或 3h或4h)获得酵母硒。
初始培养基的配制：由硒、碳源、氮源和无机盐组成的发酵培养基，***钠0.09-0.13g/L(使硒浓度为40-60mg/L)，葡萄糖0.124kg/L，糖蜜0.8g/L，玉米浆1.6g/L，尿素0.1g/L，KPO4 0.7g/L，MgSO4·7H2O 0.7g/L，调节pH 5.4-5.8，定容至500L。
补料培养基的配制：取经过稀释、调酸、煮沸、加碱中和和过滤处理的糖蜜与淀粉酶解产生的葡萄糖液混合，使糖蜜中的还原糖占总还原糖的30％-50％ (具体为30％或40％或50％)，加水或浓缩控制总还原糖浓度为500-700g/L(具体为500g/L或600g/L或700g/L)，121℃灭菌20min，冷却至30℃备用。
补硒培养基的配制：将***钠配成***钠水溶液，硒的浓度为50-200 g/L(具体为50g/L或100g/L或200g/L)，121℃灭菌20min，冷却至30℃备用。
所述复合酶为葡聚糖酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶(质量比为1：2：2或1： 1：1)组成。
所述葡聚糖酶的酶活为10000U/g；该酶活的定义为：在50℃、pH4.8条件下，1分钟水解大麦β-葡聚糖产生1μmol还原糖(以葡萄糖计)所需的酶量为1 个酶活单位(U)；
木瓜蛋白酶的酶活为80000U/g；该酶活的定义为：在40℃和pH值7.2的条件下，1min水解酪蛋白生成1μg酪氨酸所需的酶的量，即为1个酶活力单位 (U)；
所述碱性蛋白酶的酶活为60000U/g；该酶活的定义为：1g固体酶粉(或1ml液体酶)在40℃、pH值10.5下，1min水解酪蛋白产生lμg酪氨酸，定义为1个蛋白酶活力单位(U)。
三、酵母硒检测
采用氢化物-原子荧光光谱法(高建忠等，分析科学学报，2006，22(2)： 157-160)测定酵母硒中有机硒和无机硒含量，计算总硒含量和有机硒占总硒含量的比，结果表明，通过实施例二的制备方法所制备的酵母硒产品中，总硒含量达3000-6000mg/kg，且酵母硒中有机硒含量占比99％以上。
四、酵母硒在改善蛋鸡生产性能和加速药物代谢方面的应用
在生产性能试验的基础上，研究酵母硒对氟苯尼考药物代谢动力学的影响，并比较本发明酵母硒和市售酵母硒产品(购自安琪酵母股份有限公司)的效果。
1.饲养试验动物与饲粮
饲养试验采用单因子随机区组设计。选取(需要提前1周，每天观察，剔除不产蛋、产蛋率低的鸡)144只40周龄的生产性能相近的健康的海兰褐蛋鸡 (产蛋率约90.0％)，随机分成4个处理，每个处理6个重复，每个重复6只鸡，阶梯笼养，每笼(43×43×43cm)3只鸡。试验分为预试期2周、沉积试验2周，消除试验2周，预试期饲喂不添加酵母硒和抗生素的基础日粮，试验期分别采食各处理饲粮，消除期饲喂含酵母硒饲粮且不添加抗生素药物。处理见表2。
表2.药物代谢试验处理设置
试验饲粮将在参照NRC(1994)和NY/T 33-2004的基础上，结合海兰褐产蛋鸡饲养手册配制，试验拟采用玉米-豆粕型(粉料)基础饲粮，基础饲粮组成及营养水平见表3，药物和酵母硒在基础饲粮基础上添加，氟苯尼考添加量为200 g/t；本发明酵母硒中硒含量为5200mg/kg，市售酵母硒中硒含量不足4000mg/kg，为了试验严谨性，两种酵母硒添加量以硒计，硒添加量均为3g/t。
表3.蛋鸡日粮组成及营养水平(风干基础)
1.2饲养管理
采用半开放式鸡舍3层立体笼养，自然光照加人工补光，光照时间为16h/d、光照强度20LX，相对湿度50％-90％，自然通风。试验期间，鸡舍平均温度控制在30℃以内；高于33℃时对鸡舍采用通风、人工喷雾等方式降温。用温度表和湿度计记录全天温湿度(6h/次)。干粉料，每天加料、捡蛋、清粪各2次，匀料 4次，自由采食和饮水，常规免疫。
1.3指标测定与方法
1.3.1产蛋性能
正试期间，每天以重复为单位记录产蛋数、破软蛋数、蛋重和鸡只死亡数，每周以重复为单位计算正试期内平均产蛋率、平均日采食量、料蛋比、平均蛋重、破软蛋率、死淘率。
1.3.2鸡蛋品质和硒含量测定
测定鸡蛋品质，分离蛋清和蛋黄，混匀5枚蛋清、蛋黄，作为两个样品，用于测定其中硒含量。蛋壳、蛋清和蛋黄分别称重，以便于计算全蛋中的含量。
硒含量的测定：利用氢化物-原子荧光光谱法(参照GB5009.93-2010)测定饲粮和全蛋液中硒含量。
1.3.3药物测定
沉积和消除规律测定，见表4。沉积和消除各采样6个，分别测定蛋清、蛋黄中的药物残留量，根据蛋清和蛋黄的相对重量计算全蛋的药物残留情况。
氟苯尼考测定方法：参照《鸡蛋中氟苯尼考的测定液相色谱-串联质谱法》 (DB22/T 2044-2014)测定。
表4.试验处理方案
1.4数据统计和处理
数据经Excel处理，用SAS8.03软件中GLM程序进行单因子方差分析，方差分析差异显著者，Tukey法比较平均数间的差异显著性；若方差不齐则采用对数转换进行分析比较。P<0.05为差异显著，P<0.01时为极显著差异。
2结果
2.1生产性能
表5.饲粮酵母硒对产蛋鸡生产性能的影响
表5所示为产蛋鸡生产性能的结果，由表来看，1-2wk、3-4wk和5-6wk 期间，氟苯尼考组、氟苯尼考+本发明酵母硒组和氟苯尼考+市售酵母硒组的产蛋率数值上都高于不添加药物和酵母硒的对照组，其中氟苯尼考+本发明酵母硒组的产蛋率最高，1-2wk和3-4wk期间的产蛋率与对照组之间差异显著(P<0.05)；采食量方面，1-2wk期间，氟苯尼考组和氟苯尼考+本发明酵母硒组的采食量显著高于对照组(P<0.05)，氟苯尼考+市售酵母硒组的采食量数值也略高于对照组，但差异不显著；各组产蛋鸡的料蛋比在试验期间均为出现显著性差异；平均蛋重方面，氟苯尼考+本发明酵母硒组的数值最高，但各组之间差异均不显著。综合来看，饲粮中添加药物氟苯尼考和酵母硒能一定程度提高产蛋鸡的产蛋性能，添加本发明酵母硒效果优于仅市售酵母硒。
2.2氟苯尼考含量
表6.饲粮酵母硒对鸡蛋中氟苯尼考的影响
表6为试验沉积期和消除期鸡蛋中氟苯尼考含量的影响的结果。由表可知，饲粮中是否添加氟苯尼考直接影响了鸡蛋中氟苯尼考的含量，沉积期不同时间点对照组鸡蛋中氟苯尼考的含量均显著低于其他组(P<0.01)。在沉积期第2d和 3d，氟苯尼考组、氟苯尼考+本发明酵母硒组和氟苯尼考+市售酵母硒组的含量呈上升趋势，在第5d达到较高水平。
在改饲不添加氟苯尼考的消除期，鸡蛋中含量迅速下降，在第7d达到和对照组相当的水平，在同一时间点第3d时，氟苯尼考+本发明酵母硒组鸡蛋中氟苯尼考含量显著低于氟苯尼考组和氟苯尼考+市售酵母硒组；其余时间点，两个酵母硒组的鸡蛋氟苯尼考残留含量低于氟苯尼考组，数值上添加本发明酵母硒组的更低。这表明，添加酵母硒组的鸡蛋氟苯尼考含量下降得更快，且本发明酵母硒效果更佳。
2.3鸡蛋硒含量
表7.饲粮酵母硒对鸡蛋全蛋中硒含量(μg/100g)的影响
表7所示为试验期鸡蛋全蛋液中硒含量的结果。沉积期，两个饲粮添加酵母硒组的全蛋中硒含量在2-9d内逐步增加，9d及以后硒含量水平稳定。在沉积期第2d和3d各组鸡蛋中硒含量无显著差异，在第5d及以后的时间点氟苯尼考+本发明酵母硒组和氟苯尼考+市售酵母硒组显著高于对照组和氟苯尼考组(P<0.01)。在沉积期的各时间点，两个酵母硒组鸡蛋中硒含量显著高于对照组和氟苯尼考组(P<0.01)。在整个试验期个别时间点及试验最后，添加本发明酵母硒组鸡蛋中硒含量显著高于添加市售酵母硒组。这表明，添加本发明酵母硒可以有效提高鸡蛋中酵母硒的含量，在添加同样硒含量的情况下，其沉积效果较市售酵母硒更佳，这可能是因为本发明酵母硒中有机硒含量更高，吸收沉积效果更好。
饲粮中添加本发明酵母硒可以有效提高产蛋率，有助于鸡蛋中氟苯尼考的消除，且显著提高了鸡蛋中硒含量，其各方面效果均优于市售酵母硒产品。

Claims (5)

1.一种富硒酿酒酵母菌株，其特征在于：保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期是2020年8月25日，保藏号为CGMCC No. 20553。
2.如权利要求1所述富硒酿酒酵母菌株，有机硒的转化效率达95%以上。
3.一种酵母硒的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：预种子液培养：将权利要求1所述富硒酿酒酵母菌株活化后接种到200 mL的SD肉汤培养基中，在30℃下孵育18-24 h，得到预种子液；
步骤2：种子液培养：20 L种子罐中加入种子培养基，定容至10 L，将步骤1所得的200mL预种子液全部接种到种子培养基中，在30℃恒温摇床培养，转速200-250 r/min，培养18-24 h，得到种子液；
步骤3：发酵罐发酵：发酵罐中加入500 L初始培养基，将步骤2所得种子液全部接入，补料-分批操作对酵母进行高密度发酵培养；
步骤4：获得酵母硒：收集酵母菌体，洗涤菌体，加入复合酶，在40℃酶解2-2.5 h，然后升温至50℃酶解0.5-1 h，高压均质机在50-100 MPa下匀浆2次对酵母进行破壁，将破壁后的酵母经冷冻干燥2-4 h获得酵母硒。
4.如权利要求3所述的酵母硒的制备方法，所述SD肉汤培养基为***钠、SD肉汤-葡萄糖和蛋白胨的组合物，其中硒浓度为40-60 mg/L的***钠0.09-0.13g/L，SD肉汤-葡萄糖20 g/L，蛋白胨10 g/L，调节培养基pH为5.4-5.8；
所述种子培养基为***钠、葡萄糖、糖蜜、玉米浆、尿素、MgSO4·7H2O和蛋白胨的组合物，其中***钠0.09-0.13 g/L，葡萄糖37.5 g/L，糖蜜7.5 g/L，玉米浆25 g/L，尿素5 g/L，MgSO4·7H2O 7.5 g/L，调节培养基pH为5.4-5.8；
所述初始培养基为***钠、葡萄糖、糖蜜、玉米浆、尿素、K3PO4、MgSO4·7H2O 的组合物，其中***钠0.09-0.13 g/L，葡萄糖0.124 kg/L，糖蜜0.8 g/L，玉米浆1.6 g/L，尿素0.1 g/L，K3PO4 0.7 g/L，MgSO4·7H2O 0.7 g/L，调节培养基pH为5.4-5.8；
所述补料培养基为糖蜜和葡萄糖液混合物，其中糖蜜中的还原糖占总还原糖的30%-50%，总还原糖浓度为500-700g/L。
5.如权利要求4所述的酵母硒的制备方法，所述复合酶为葡聚糖酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶组成，葡聚糖酶的酶活为10000U/g，木瓜蛋白酶的酶活为80000U/g，碱性蛋白酶的酶活为60000U/g，葡聚糖酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶的质量比为1：2：2或1：1：1。
CN202011250139.3A 2020-11-10 2020-11-10 一种富硒酿酒酵母菌株及其应用 Active CN112457999B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011250139.3A CN112457999B (zh) 2020-11-10 2020-11-10 一种富硒酿酒酵母菌株及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011250139.3A CN112457999B (zh) 2020-11-10 2020-11-10 一种富硒酿酒酵母菌株及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112457999A CN112457999A (zh) 2021-03-09
CN112457999B true CN112457999B (zh) 2024-06-21

Family

ID=74826381

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011250139.3A Active CN112457999B (zh) 2020-11-10 2020-11-10 一种富硒酿酒酵母菌株及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112457999B (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113322223B (zh) * 2021-06-03 2023-09-12 重庆市畜牧科学院 富硒酵母基因工程菌及其表面展示***及其构建方法
CN114214216B (zh) * 2021-10-11 2023-11-17 厦门海嘉成生物科技有限公司 一种富硒酵母菌株及其应用
CN114854611B (zh) * 2022-02-16 2023-12-15 中国农业科学院油料作物研究所 一种富硒酵母菌、益生菌复合菌液以及发酵豆粕饲料
CN114958633B (zh) * 2022-07-14 2023-10-13 浙江忠梦昌健康科技有限公司 一种富营养素益生菌菌粉制备及其在羊奶粉中应用
CN115536460A (zh) * 2022-10-10 2022-12-30 赣州市畜牧水产研究所 利用畜禽粪便生产多微量元素富硒有机肥的生物技术及配方
CN117925429B (zh) * 2024-03-22 2024-06-21 中国农业大学 一种酿酒酵母及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101045908A (zh) * 2006-03-30 2007-10-03 安琪酵母股份有限公司 一种富硒酿酒酵母、富硒酵母产品及其生产方法
CN102559523A (zh) * 2011-12-29 2012-07-11 广州雅琪生物科技有限公司 一种富硒酵母、富硒酵母酶解物及其制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017026173A1 (ja) * 2015-08-07 2017-02-16 キッコーマン株式会社 セレノネインの製造方法
CN106244477B (zh) * 2016-10-12 2020-01-10 厦门元尊生物工程有限公司 一种富硒酿酒酵母菌株及其在制备富硒紫薯酵母产品中的应用
CN106906206A (zh) * 2017-04-26 2017-06-30 中国科学院合肥物质科学研究院 一种富硒酵母、制备方法及应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101045908A (zh) * 2006-03-30 2007-10-03 安琪酵母股份有限公司 一种富硒酿酒酵母、富硒酵母产品及其生产方法
CN102559523A (zh) * 2011-12-29 2012-07-11 广州雅琪生物科技有限公司 一种富硒酵母、富硒酵母酶解物及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN112457999A (zh) 2021-03-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112457999B (zh) 一种富硒酿酒酵母菌株及其应用
CN101690545B (zh) 一种菌剂与酶复合微生态制剂的生产方法
CN106260540B (zh) 一种用于教槽料的生物饲料及教槽料
CN109161509B (zh) 一株能防治牛羊腹泻病的菌株
CN106260504B (zh) 一种利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料的方法
CN105002116A (zh) 一种微生物秸秆饲料菌剂及其制备方法
CN103184174B (zh) 培养基中含腐植酸钠饲料用枯草芽孢杆菌生物制剂的生产
CN109022333A (zh) 一种复合微生物发酵菌剂的制备方法及其应用
CN103173371A (zh) 酿酒酵母与嗜酸乳杆菌的饲料用复合微生物制剂的生产
CN113413351A (zh) 一种具有美白抗衰功效的发酵液、发酵多肽及其制备方法和应用
CN110269146A (zh) 一种应用于饲料上的微生态制剂
CN105199978A (zh) 一种用于畜禽养殖的凝结芽孢杆菌制剂及其制备方法
KR101082838B1 (ko) 제과, 제빵 및 제면부산물을 이용한 효모균 미생물제
CN107760612B (zh) 一种黑曲霉yy07菌株及其在固体发酵生产饲用酸性蛋白酶中的应用
CN113100345A (zh) 一种提高免疫力猪饲料添加剂及猪饲料的制备方法
CN111700155A (zh) 含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法
CN103829040A (zh) 一种以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法与应用
CN109321478A (zh) 一种降解霉菌毒素的菌株yk18及其应用
CN111979171B (zh) 利用异麦芽酮糖母液和小球藻废液生产富硒酵母的方法
CN109504713A (zh) 利用拜氏梭菌制备高酯键腐植酸制剂的方法及应用
CN112779295B (zh) 一种产番茄红素酿酒酵母的高密度发酵培养基
CN111690573B (zh) 一种可用于动物肠道益生菌的希氏乳杆菌及其发酵制备的酵素和应用
CN110973353B (zh) 一种固态发酵苜蓿草粉饲料及其制备方法和应用
CN107897505B (zh) 发酵菌液、包含其的用于保育猪的产品及产品的制备方法和应用
CN114350534B (zh) 一种酿酒酵母菌、育肥羊生物饲料及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant