CN112451542A - 一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药及制备方法和应用 - Google Patents

一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药及制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种白蛋白/透明质酸纳米复合物‑铂类前药及制备方法和应用，利用碳二亚胺法制备出酰肼化透明质酸；将其与白蛋白制成质量浓度为0.05％～10％、pH为6～10的水溶液；在搅拌条件下以0.5～20毫升/分钟的速度滴加乙醇，其用量为水溶液体积的2～10倍；加入醛基化透明质酸溶液，反应1～24小时后离心分离出纳米复合物；将纳米复合物与铂类药物溶液混合0.5～12小时，经离心分离和冷冻干燥过程得到铂类纳米前药。该铂类纳米前药粒径在80～150纳米范围可控，载药量可达20％，纳米复合物生物相容性优异。该制备方法原料易得、工艺过程简单、反应条件温和，适用于多种铂类抗肿瘤药物。

Description

一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药及制备方法和 应用
技术领域
本发明属于生物医药材料领域，具体涉及一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药及制备方法和应用。
背景技术
透明质酸是天然生物高分子，具有优异的吸水和保水性能、生物相容性和生物可降解性，并且没有免疫原性或免疫原性极低，已广泛用于化妆品、整形、美容产品和药物载体等领域。尤其是在药物载体方面，透明质酸含有丰富的侧羧基，改性方法灵活多样，既可制备纳米药物载体，也可制成载药物的可注射凝胶体系，在药物靶向递送和局部递送中应用广泛。
铂类抗肿瘤药物在肿瘤化疗中具有举足轻重的地位，很多肿瘤的化疗方案都会涉及铂类抗肿瘤药物。然而，目前铂类抗肿瘤药物多是以游离态的溶液形式施用，存在肿瘤积累效率低、对正常组织的毒副作用大、易代谢排出体外等问题，严重制约着铂类抗肿瘤药物的临床应用。近些年的研究表明，将铂类抗肿瘤药物搭载于纳米载体中，可克服游离态药物存在的上述问题。目前研究主要聚焦于顺铂的纳米化，主要途径有两类：一是，由于顺铂没有可直接用于连接于载体的化学键，通常需要进行羧基化改性再通过化学键连接于载体上，存在改变药物效果的风险或程序复杂的问题；二是，将顺铂经羧基-铂配位作用载于含羧基的载体上，但这种方法通常需要24～36小时的配位反应过程，制备周期较长且装载效率不够理想。
白蛋白是球形蛋白，具有优异的生物相容性和生物可降解性以及无免疫原性，具有作为疏水性化疗药物递送载体的天然优势，可显著增加难溶性药物在血浆中的溶解度、延长药物半衰期和降低药物毒副作用，已用于紫杉醇、白藜芦醇、甲氨蝶呤等药物的递送。然而，白蛋白在铂类抗肿瘤药物递送中的应用极少。与此同时，白蛋白作为纳米载体的一个重要技术难题是实现纳米颗粒结构的稳定。目前，多采用戊二醛交联方法，然而它存在明显的细胞毒性。
发明内容
本发明的目的是提供一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药及制备方法和应用，既避免使用对细胞有毒性的戊二醛交联剂，又无需对铂类抗肿瘤做任何化学或物理修饰，还克服了现有铂类抗肿瘤药物载体适用铂类药物数量单一、药物装载时间长、效率不高等问题。
本发明的一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，包括以下步骤：
一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，包括如下步骤：
(1)向透明质酸水溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化羧基反应0.5～6小时，再加入二元酰肼室温反应12～72小时，经透析和冷冻干燥，得到酰肼化透明质酸；
(2)将白蛋白和酰肼化透明质酸制成pH为6～10的水溶液，然后滴加乙醇，滴毕后加入醛基化透明质酸溶液，继续搅拌1～24小时，经离心分离和冷冻干燥，得到白蛋白/透明质酸纳米复合物；
(3)将白蛋白/透明质酸纳米复合物分散于水中形成悬液，将悬液与铂类抗肿瘤药物溶液混合，搅拌0.5～12小时后进行离心和冷冻干燥，得到白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药。
本发明进一步的改进在于，所述步骤(1)中的透明质酸的分子量为3000Da～1000kDa；透明质酸水溶液的质量浓度为1％～10％；1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的加入量为透明质酸中羧基摩尔数的6％～65％。
本发明进一步的改进在于，所述步骤(1)中的二元酰肼为3,3'-二硫代二丙酰肼、乙二酰肼或己二酸二酰肼。
本发明进一步的改进在于，所述步骤(1)中的酰肼化透明质酸的酰肼化度为5％-60％。
本发明进一步的改进在于，所述步骤(2)中的白蛋白为牛白蛋白或人白蛋白；乙醇的用量为水溶液体积的2～10倍。
本发明进一步的改进在于，所述步骤(2)中的白蛋白和酰肼化透明质酸的质量比为10:1～1:10。
本发明进一步的改进在于，所述步骤(2)中的醛基化透明质酸的醛基化度为10％～100％，醛基化透明质酸用量为酰肼化透明质酸和白蛋白总质量的2％～25％。
本发明进一步的改进在于，所述步骤(3)中的铂类抗肿瘤药物为顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂或洛铂；悬液的质量浓度为0.05％～10％，铂类抗肿瘤药物溶液的浓度为0.2～26毫克/毫升，悬液与铂类抗肿瘤药物溶液的体积比3:1～1:3。
一种根据上述的方法制备的白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药，该前药的粒径在80～150纳米范围内可控，载药量为8％～20％。
一种如上述的白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药在制备用于治疗乳腺癌和肝癌药物中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：(1)铂元素与酰肼基团具有配位作用且呈现非特异性结合，使得本发明的白蛋白/透明质酸纳米复合物可用于装载不同种类的含铂抗肿瘤药物，如顺铂、卡铂、奈达铂或奥沙利铂等；(2)避免使用细胞毒性的戊二醛交联剂，而采用细胞毒性极小甚至无毒性的醛基化透明质酸大分子，作为白蛋白/透明质酸纳米复合物的结构稳定剂，生物相容性更好；(3)该纳米前药表面为透明质酸，它是很多肿瘤细胞表面CD44受体的配体分子，可通过EPR效应和配体-受体特异性作用实现被动靶向肿瘤和经CD44主动靶向肿瘤细胞的双重靶向功能；(4)纳米载体是利用乙醇对白蛋白的非溶剂化作用经自组装过程实现的，所得纳米前药粒径均一性好，呈现单峰分布，粒径分布窄且主要集中于100纳米，铂类药物与载体之间经pH敏感性配位键连接，具有pH敏感性药物释放行为；(5)纳米载体制备及药物装载均是在室温下水相中完成的，药物通过配位键作用可在数个小时内有效装载于纳米载体上，具有工艺条件温和，药物装载过程简单、效率高且所需时间短的优点，临床转化潜力大。
附图说明
图1是实施例1合成的白蛋白/透明质酸纳米复合物的粒径分布图。
图2是实施例1合成的白蛋白/透明质酸纳米复合物的透射电子显微镜照片。
图3是实施例1合成的白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的透射电子显微镜照片。
图4是实施例1合成的白蛋白/透明质酸纳米复合物-顺铂前药的抗肿瘤细胞增殖效果图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步描述，但本发明并不限于此。
本发明的一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，包括如下步骤：
(1)酰肼化透明质酸制备：将一定分子量透明质酸溶于水中形成质量浓度为1％～10％的水溶液，然后加入羧基摩尔数6％～65％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化羧基0.5～6小时，再加入羧基摩尔数24％～300％的二元酰肼室温反应12～72小时，经透析和冷冻干燥过程，得到酰肼化透明质酸。
(2)白蛋白/透明质酸纳米复合物制备：将白蛋白和酰肼化透明质酸按一定质量比加入到水中，制成pH为6～10的水溶液，接着在搅拌条件下以0.5～20毫升/分钟的速度滴加水溶液体积2～10倍量的乙醇，随后加入醛基化透明质酸溶液，继续搅拌1～24小时后，经离心分离和冷冻干燥获得白蛋白/透明质酸纳米复合物。
(3)白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药：将(2)中纳米复合物分散于水中形成质量浓度为0.05％～10％的悬液，然后与浓度为0.2～26毫克/毫升的铂类抗肿瘤药物溶液按体积比3:1～1:3混合，搅拌0.5～12小时后进行离心和冷冻干燥，获得所述的白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药。
所述步骤(1)中的透明质酸的分子量为3000Da～1000kDa。
所述步骤(1)中的二元酰肼为3,3'-二硫代二丙酰肼、乙二酰肼、己二酸二酰肼等。
所述步骤(1)中的酰肼化透明质酸的酰肼化度为5％-60％。
所述步骤(2)中的白蛋白为牛白蛋白或人白蛋白。
所述步骤(2)中的白蛋白和透明质酸的质量比为10:1～1:10。
所述步骤(2)中的醛基化透明质酸的醛基化度为10％～100％，其用量为酰肼化透明质酸和白蛋白总质量的2％～25％。
所述步骤(3)中的铂类抗肿瘤药物为顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂或洛铂。
所述步骤的离心分离转速为5000～25000转/分钟，所述的冷冻干燥为零下20摄氏度保持12～48小时。
一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药，粒径在80～150纳米范围内可控，载药量为8％～20％，对表达CD44受体的多种实体瘤具有主动靶向功能，可用于乳腺癌和肝癌等多种实体瘤的治疗。
下面为具体实施例。
实施例1
(1)酰肼化透明质酸制备：将1克分子量为10kDa的透明质酸溶于100毫升的水中制成水溶液，用盐酸将pH调至5，然后加入含0.23克1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的5毫升水溶液，反应0.5小时后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐摩尔数10倍的3,3'-二硫代二丙酰肼，继续搅拌24小时后进行透析和冷冻干燥2天，得到酰肼化度为40％的酰肼化透明质酸。
(2)白蛋白/透明质酸纳米复合物制备：将250毫克牛白蛋白和50毫克酰肼化透明质酸制成pH为9的12.5毫升水溶液，接着在搅拌条件下以1毫升/分钟的速度滴加50毫升乙醇，随后加入450微升含15毫克醛基化度为50％的醛基化透明质酸的水溶液，继续搅拌12小时后，经离心分离和冷冻干燥获得白蛋白/透明质酸纳米复合物。
(3)白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药：将12毫克白蛋白/透明质酸纳米复合物分散于2毫升水中形成悬液，然后与浓度为1毫克/毫升的顺铂溶液按体积比1:3混合，搅拌12小时后进行离心和冷冻干燥，获得所述的白蛋白/透明质酸纳米复合物-顺铂前药。
本实施例合成的白蛋白/透明质酸纳米复合物经动态光散射法测得的粒径分布见图1。由图1可以看出，粒径分布集中于130纳米处，粒径分布呈现单峰。
本实施例合成的白蛋白/透明质酸纳米复合物的透射电子显微镜照片见图2。由图2可知，其颗粒呈现球形或近球形形貌，粒径分布比较均匀，粒径均在50纳米以下，显著低于动态光散射法测得的结果，原因是透射电子显微镜观察到的样品处于干态，而动态光散射法测得的是水动力学体积，且透明质酸吸水保水性很强，导致二者差异很大，属于正常现象。
本实施例合成的白蛋白/透明质酸纳米复合物-顺铂前药的透射电子显微镜照片见图3。由图3可知，与载药前的纳米复合物相比，顺铂装载后形成的纳米前药的形貌略有变化，但分散性和粒径变化不大。
本实施例合成的白蛋白/透明质酸纳米复合物-顺铂前药对HepG2肝癌细胞增殖的抑制作用见图4。由图4可知，与相同浓度的游离顺铂对照组相比，纳米前药组在24小时时的细胞存活率略高，而在48和72小时时的细胞存活率明显降低，表明最初24小时内纳米前药对细胞增殖的抑制作用不如游离顺铂，但48和72小时后的抑制作用好于游离顺铂，这与纳米前药需要从纳米粒中释放出来方可发挥作用有关。
实施例2
(1)酰肼化透明质酸制备：将分子量为8000Da的透明质酸溶于水中形成质量浓度为8％的水溶液，然后加入羧基摩尔数6％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基反应2小时，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐摩尔数5倍的3,3'-二硫代二丙酰肼室温反应30小时，经透析和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为5％的酰肼化透明质酸。
(2)牛白蛋白/透明质酸纳米复合物制备：将牛白蛋白和酰肼化透明质酸按质量比8:1制成pH为8.5的水溶液，接着在搅拌条件下以5毫升/分钟的速度滴加水溶液体积4倍量的乙醇，随后加入醛基化度为80％的醛基化透明质酸溶液，其用量为酰肼化透明质酸和白蛋白总质量的3％，继续搅拌15小时后，经离心分离和冷冻干燥获得白蛋白/透明质酸纳米复合物。
(3)白蛋白/透明质酸纳米复合物-顺铂前药：将(2)中纳米复合物分散于水中形成质量浓度为2％的悬液，然后与浓度为0.6毫克/毫升的顺铂溶液按体积比1:1.2混合，搅拌4小时后以10000转/分钟的转速进行离心，再在零下20摄氏度保持28小时冷冻干燥，获得所述的白蛋白/透明质酸纳米复合物-顺铂前药。
实施例3
(1)酰肼化透明质酸制备：将分子量为50kDa的透明质酸溶于水中形成质量浓度为2％的水溶液，然后加入羧基摩尔数22％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基反应1.5小时，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐摩尔数8倍的己二酸二酰肼室温反应48小时，经透析和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为20％的酰肼化透明质酸。
(2)牛白蛋白/透明质酸纳米复合物制备：将牛白蛋白和酰肼化透明质酸按质量比5:1制成pH为8的水溶液，接着在搅拌条件下以5毫升/分钟的速度滴加水溶液体积5倍量的乙醇，随后加入醛基化度为65％的醛基化透明质酸溶液，其用量为酰肼化透明质酸和白蛋白总质量的12％，继续搅拌4小时后，经离心分离和冷冻干燥获得白蛋白/透明质酸纳米复合物。
(3)白蛋白/透明质酸纳米复合物-卡铂前药：将(2)中纳米复合物分散于水中形成质量浓度为0.05％的悬液，然后与浓度为8毫克/毫升的卡铂溶液按体积比3:2混合，搅拌5小时后以12000转/分钟的转速进行离心，再在零下20摄氏度保持40小时冷冻干燥，获得所述的白蛋白/透明质酸纳米复合物-卡铂前药。
实施例4
(1)酰肼化透明质酸制备：将分子量为8000Da的透明质酸溶于水中形成质量浓度为7％的水溶液，然后加入羧基摩尔数43％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基反应2.5小时，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐摩尔数10倍的3,3'-二硫代二丙酰肼室温反应26小时，经透析和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为40％的酰肼化透明质酸。
(2)人白蛋白/透明质酸纳米复合物制备：将人白蛋白和酰肼化透明质酸按质量比1:1制成pH为8的水溶液，接着在搅拌条件下以14毫升/分钟的速度滴加水溶液体积5倍量的乙醇，随后加入醛基化度为100％的醛基化透明质酸溶液，其用量为酰肼化透明质酸和白蛋白总质量的3％，继续搅拌6小时后，经离心分离和冷冻干燥获得白蛋白/透明质酸纳米复合物。
(3)白蛋白/透明质酸纳米复合物-奈达铂前药：将(2)中纳米复合物分散于水中形成质量浓度为9％的悬液，然后与浓度为6毫克/毫升的奈达铂溶液按体积比1:3混合，搅拌8小时后以20000转/分钟的转速进行离心，再在零下20摄氏度保持36小时冷冻干燥，获得所述的白蛋白/透明质酸纳米复合物-奈达铂前药。
实施例5
(1)酰肼化透明质酸制备：将分子量为100kDa的透明质酸溶于水中形成质量浓度为1.2％的水溶液，然后加入羧基摩尔数22％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基反应3.5小时，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐摩尔数5倍的乙二酰肼室温反应72小时，经透析和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为20％的酰肼化透明质酸。
(2)人白蛋白/透明质酸纳米复合物制备：将人白蛋白和酰肼化透明质酸按质量比1:3制成pH为10的水溶液，接着在搅拌条件下以15毫升/分钟的速度滴加水溶液体积6倍量的乙醇，随后加入醛基化度为15％的醛基化透明质酸溶液，其用量为酰肼化透明质酸和白蛋白总质量的18％，继续搅拌5小时后，经离心分离和冷冻干燥获得白蛋白/透明质酸纳米复合物。
(3)白蛋白/透明质酸纳米复合物-洛铂前药：将(2)中纳米复合物分散于水中形成质量浓度为6％的悬液，然后与浓度为9毫克/毫升的洛铂溶液按体积比1:1混合，搅拌3.5小时后以21000转/分钟的转速进行离心，再在零下20摄氏度保持48小时冷冻干燥，获得所述的白蛋白/透明质酸纳米复合物-洛铂前药。
实施例6
(1)酰肼化透明质酸制备：将分子量为100kDa的透明质酸溶于水中形成质量浓度为1％的水溶液，然后加入羧基摩尔数5.5％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基反应0.5小时，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐摩尔数10倍的乙二酰肼室温反应50小时，经透析和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为5％的酰肼化透明质酸。
(2)人白蛋白/透明质酸纳米复合物制备：将人白蛋白和酰肼化透明质酸按质量比1:7制成pH为6的水溶液，接着在搅拌条件下以15毫升/分钟的速度滴加水溶液体积5倍量的乙醇，随后加入醛基化度为10％的醛基化透明质酸溶液，其用量为酰肼化透明质酸和白蛋白总质量的20％，继续搅拌1小时后，经离心分离和冷冻干燥获得白蛋白/透明质酸纳米复合物。
(3)白蛋白/透明质酸纳米复合物-洛铂前药：将步骤(2)中纳米复合物分散于水中形成质量浓度为0.05％的悬液，然后与浓度为10毫克/毫升的洛铂溶液按体积比3:1混合，搅拌0.5小时后以21000转/分钟的转速进行离心，再在零下20摄氏度保持48小时冷冻干燥，获得所述的白蛋白/透明质酸纳米复合物-洛铂前药。
实施例7
(1)酰肼化透明质酸制备：将分子量为100kDa的透明质酸溶于水中形成质量浓度为10％的水溶液，然后加入羧基摩尔数63％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基反应6小时，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐摩尔数8倍的乙二酰肼室温反应36小时，经透析和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为60％的酰肼化透明质酸。
(2)人白蛋白/透明质酸纳米复合物制备：将人白蛋白和酰肼化透明质酸按质量比5:1制成pH为7的水溶液，接着在搅拌条件下以15毫升/分钟的速度滴加水溶液体积7倍量的乙醇，随后加入醛基化度为50％的醛基化透明质酸溶液，其用量为酰肼化透明质酸和白蛋白总质量的10％，继续搅拌24小时后，经离心分离和冷冻干燥获得白蛋白/透明质酸纳米复合物。
(3)白蛋白/透明质酸纳米复合物-洛铂前药：将步骤(2)中纳米复合物分散于水中形成质量浓度为2％的悬液，然后与浓度为4毫克/毫升的洛铂溶液按体积比2:1混合，搅拌6小时后以21000转/分钟的转速进行离心，再在零下20摄氏度保持48小时冷冻干燥，获得所述的白蛋白/透明质酸纳米复合物-洛铂前药。
实施例8
(1)酰肼化透明质酸制备：将分子量为3000Da的透明质酸溶于水中形成质量浓度为5％的水溶液，然后加入羧基摩尔数43％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基反应3小时，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐摩尔数9倍的乙二酰肼室温反应72小时，经透析和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为40％的酰肼化透明质酸。
(2)人白蛋白/透明质酸纳米复合物制备：将人白蛋白和酰肼化透明质酸按质量比10:1制成pH为8的水溶液，接着在搅拌条件下以15毫升/分钟的速度滴加水溶液体积10倍量的乙醇，随后加入醛基化度为100％的醛基化透明质酸溶液，其用量为酰肼化透明质酸和白蛋白总质量的25％，继续搅拌10小时后，经离心分离和冷冻干燥获得白蛋白/透明质酸纳米复合物。
(3)白蛋白/透明质酸纳米复合物-洛铂前药：将步骤(2)中纳米复合物分散于水中形成质量浓度为1％的悬液，然后与浓度为0.2毫克/毫升的洛铂溶液按体积比1:3混合，搅拌12小时后以21000转/分钟的转速进行离心，再在零下20摄氏度保持48小时冷冻干燥，获得所述的白蛋白/透明质酸纳米复合物-洛铂前药。
实施例9
(1)酰肼化透明质酸制备：将分子量为500kDa的透明质酸溶于水中形成质量浓度为3％的水溶液，然后加入羧基摩尔数52％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基反应5小时，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐摩尔数8.5倍的乙二酰肼室温反应12小时，经透析和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为50％的酰肼化透明质酸。
(2)人白蛋白/透明质酸纳米复合物制备：将人白蛋白和酰肼化透明质酸按质量比1:10制成pH为9的水溶液，接着在搅拌条件下以15毫升/分钟的速度滴加水溶液体积2倍量的乙醇，随后加入醛基化度为65％的醛基化透明质酸溶液，其用量为酰肼化透明质酸和白蛋白总质量的2％，继续搅拌15小时后，经离心分离和冷冻干燥获得白蛋白/透明质酸纳米复合物。
(3)白蛋白/透明质酸纳米复合物-洛铂前药：将步骤(2)中纳米复合物分散于水中形成质量浓度为10％的悬液，然后与浓度为26毫克/毫升的洛铂溶液按体积比3:1混合，搅拌5小时后以21000转/分钟的转速进行离心，再在零下20摄氏度保持48小时冷冻干燥，获得所述的白蛋白/透明质酸纳米复合物-洛铂前药。
本发明利用碳二亚胺法制备出酰肼化透明质酸；将其与白蛋白制成水溶液；在搅拌条件下以0.5～20毫升/分钟的速度滴加乙醇；加入醛基化透明质酸溶液，反应1～24小时后离心分离出纳米复合物；将纳米复合物与铂类药物溶液混合0.5～12小时，经离心分离和冷冻干燥过程得到铂类纳米前药。该铂类纳米前药粒径在80～150纳米范围可控，载药量为8％～20％，纳米复合物生物相容性优异。该制备方法原料易得、工艺过程简单、反应条件温和，适用于多种铂类抗肿瘤药物。

Claims (10)

1.一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)向透明质酸水溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化羧基反应0.5～6小时，再加入二元酰肼室温反应12～72小时，经透析和冷冻干燥，得到酰肼化透明质酸；
(2)将白蛋白和酰肼化透明质酸制成pH为6～10的水溶液，然后滴加乙醇，滴毕后加入醛基化透明质酸溶液，继续搅拌1～24小时，经离心分离和冷冻干燥，得到白蛋白/透明质酸纳米复合物；
(3)将白蛋白/透明质酸纳米复合物分散于水中形成悬液，将悬液与铂类抗肿瘤药物溶液混合，搅拌0.5～12小时后进行离心和冷冻干燥，得到白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药。
2.根据权利要求1所述的一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的透明质酸的分子量为3000Da～1000kDa；透明质酸水溶液的质量浓度为1％～10％；1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的加入量为透明质酸中羧基摩尔数的6％～65％。
3.根据权利要求1所述的一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的二元酰肼为3,3'-二硫代二丙酰肼、乙二酰肼或己二酸二酰肼。
4.根据权利要求1所述的一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的酰肼化透明质酸的酰肼化度为5％-60％。
5.根据权利要求1所述的一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的白蛋白为牛白蛋白或人白蛋白；乙醇的用量为水溶液体积的2～10倍。
6.根据权利要求1所述的一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的白蛋白和酰肼化透明质酸的质量比为10:1～1:10。
7.根据权利要求1所述的一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的醛基化透明质酸的醛基化度为10％～100％，醛基化透明质酸用量为酰肼化透明质酸和白蛋白总质量的2％～25％。
8.根据权利要求1所述的一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的铂类抗肿瘤药物为顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂或洛铂；悬液的质量浓度为0.05％～10％，铂类抗肿瘤药物溶液的浓度为0.2～26毫克/毫升，悬液与铂类抗肿瘤药物溶液的体积比3:1～1:3。
9.一种根据权利要求1-8中任意一项所述的方法制备的白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药，其特征在于，该前药的粒径在80～150纳米范围内可控，载药量为8％～20％。
10.一种如权利要求9所述的白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药在制备用于治疗乳腺癌和肝癌药物中的应用。
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