CN112442443A - 一种核酸提取扩增一体化检测方法及检测连管 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种核酸提取扩增一体化检测方法及检测连管，通过将分别装有裂解液、清洗液和反应液的试管呈水平排布并在顶部进行连通，分别在两管之间设置隔离装置，从而将裂解液、清洗液和反应液进行隔离；将样品加入装有裂解液的试管，在试管顶部利用外部磁体控制试管内的磁珠提取核酸，通过外部机构在试管顶部打开隔离装置，然后带动磁珠进入清洗液管，最终进入反应液管进行扩增，通过荧光检测扩增过程，从而实现核酸提取扩增检测的一体化。

Description

一种核酸提取扩增一体化检测方法及检测连管
技术领域
本使发明属于体外诊断领域，涉及一种核酸提取扩增一体化检测方法及检测连管。
背景技术
磁珠法核酸提取原理是依据与硅胶膜离心柱相同的原理，运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用二氧化硅包被的纳米磁性微球的超顺磁性，在Chaotropic盐（盐酸胍、异硫氰酸胍等）和外加磁场的作用下，能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA，可应用在临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。
核酸扩增检测技术是通过为核酸片段提供体外扩增的条件，使之成指数大量扩增并在核酸扩增过程中加入荧光染料或荧光标记物，采用光学装置检测出荧光信号的强弱，通过对荧光信号的处理分析得出核酸扩增结果的过程。
从核酸提取到扩增检测中间包含裂解、清洗、洗脱、扩增等步骤，目前主流技术必须要求在标准实验室中分步进行，整个过程容易对样本核酸造成污染，操作难度达，对操作人员要求高，不利于核酸检测技术的推广。
发明内容
为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种核酸提取扩增一体化检测方法及检测连管，极大的简化了从核酸提取到扩增的操作难度，提高了检测效率，有效避免环境对样本的污染，提高检测准确度。
本发明的技术方案：一种核酸提取扩增一体化检测方法，其特征在于：通过将分别装有裂解液、清洗液和反应液的试管呈水平排布并在顶部进行连通，分别在两管之间设置隔离装置，从而将裂解液、清洗液和反应液进行隔离；将样品加入装有裂解液的试管，在试管顶部利用外部磁体控制试管内的磁珠提取核酸，通过外部机构在试管顶部打开隔离装置，然后带动磁珠进入清洗液管，最终进入反应液管进行扩增，通过荧光检测扩增过程，从而实现核酸提取扩增检测的一体化。
前述的一种核酸提取扩增一体化检测方法，其特征在于：所述裂解液管、清洗液管、反应液管的连通管顶部为平面。
前述的一种核酸提取扩增一体化检测方法，其特征在于：所述隔离装置由三脚柱塞、弹簧和隔离腔组成，三脚柱塞在隔离腔内上下移动实现打开和关闭隔离装置的功能。
前述的一种核酸提取扩增一体化检测方法，其特征在于：所述反应液管的隔离装置上设置有毛细管。
前述的一种核酸提取扩增一体化检测方法，其特征在于：所述核酸扩增反应所需的生物试剂存储在毛细管内，当外部机构打开隔离装置时，毛细管内的生物试剂被注射至反应液管内，实现生物试剂的转移。
一种核酸提取扩增一体化检测方法的检测连管，其特征在于：包括顶部带翻盖（1）的盒体（2），用于连通裂解液管（3）、清洗液管（4）、反应液管（5）的连通管（6），分别用于隔离裂解液管（3）、清洗液管（4）、反应液管（5）的隔离装置（7），用于储存生物试剂的毛细管（8）。
前述的一种核酸提取扩增一体化检测方法的检测连管，其特征在于：所述隔离装置（7），包括三脚柱塞（9），弹簧（10），隔离腔（11）。
前述的一种核酸提取扩增一体化检测方法的检测连管，其特征在于：所述毛细管（8）设置在清洗液管（4）和反应液管（5）之间的隔离装置（7）上。
前述的一种核酸提取扩增一体化检测方法的检测连管，其特征在于：所述毛细管（8）连接在隔离腔（11）和反应液管（5）之间。
前述的一种核酸提取扩增一体化检测方法的检测连管，其特征在于：所述隔离腔（11）的尾部设置有通孔。
与现有技术相比，本发明的增益效果为：本发明采用连通管将裂解液管、清洗液管、反应液管连接在一起，整个提取扩增过程在密闭条件下进行，有效避免了环境污染。本发明整个实验过程通过设备全自动完成提取扩增检测，极大的简化了实验操作难度。本发明采用水平排布方式可在反应液管顶部设置热盖解决扩增反应过程中的蒸发问题。
附图说明
图1为本发明的剖视图。
图2为本发明的立体视图。
图3本发明的三视图，主视图为仰视图。
图4为三脚柱塞立体视图。
图5位三脚柱塞三视图。
图6为隔离腔局部放大图。
具体实施方式
下面将结合本发明的附图，将本发明的技术实施方案清楚、完整的描述。
实施例。一种核酸提取扩增一体化检测方法，其特征在于：通过将分别装有裂解液、清洗液和反应液的试管呈水平排布并在顶部进行连通，分别在两管之间设置隔离装置，从而将裂解液、清洗液和反应液进行隔离；将样品加入装有裂解液的试管，在试管顶部利用外部磁体控制试管内的磁珠提取核酸，通过外部机构在试管顶部打开隔离装置，然后带动磁珠进入清洗液管，最终进入反应液管进行扩增，通过荧光检测扩增过程，从而实现核酸提取扩增的一体化。
所述裂解液管、清洗液管、反应液管的连通管顶部为平面，外部磁体可在该平面水平移动。
所述隔离装置由三脚柱塞、弹簧和隔离腔组成，三脚柱塞的顶部两脚要高出连通管顶部平面，三脚柱塞在隔离腔内上下移动实现打开和关闭隔离装置的功能，外部磁体可在三脚柱塞头部两脚之间穿行。
所述反应液管的隔离装置上设置有毛细管。
所述核酸扩增反应所需的生物试剂存储在毛细管内，当外部机构克服弹簧力，下压三脚柱塞时打开隔离装置，由于隔离腔体为密封结构，随着三脚柱塞的下移毛细管内的生物试剂被注射至反应液管内，实现生物试剂的转移。
需要理解到的是：本实施例虽然对本发明作了比较详细的说明，但是这些说明，只是对发明的简单说明，而不是对发明的限制，任何不超出本发明实质精神内的发明创造，均落入发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种核酸提取扩增一体化检测方法，其特征在于：通过将分别装有裂解液、清洗液和反应液的试管呈水平排布并在顶部进行连通，分别在两管之间设置隔离装置，从而将裂解液、清洗液和反应液进行隔离；将样品加入装有裂解液的试管，在试管顶部利用外部磁体控制试管内的磁珠提取核酸，通过外部机构在试管顶部打开隔离装置，然后带动磁珠进入清洗液管，最终进入反应液管进行扩增，通过荧光检测扩增过程，从而实现核酸提取扩增检测的一体化。
2.如权利要求1所述的一种核酸提取扩增一体化检测方法，其特征在于：所述裂解液管、清洗液管、反应液管的连通管顶部为平面。
3.如权利要求1所述的一种核酸提取扩增一体化检测方法，其特征在于：所述反应液管的隔离装置上设置有毛细管。
4.如权利要求1所述的一种核酸提取扩增一体化检测方法，其特征在于：所述隔离装置由三脚柱塞、弹簧和隔离腔组成，三脚柱塞在隔离腔内上下移动实现打开和关闭隔离装置的功能。
5.如权利要求1所述的一种核酸提取扩增一体化检测方法，其特征在于：所述核酸扩增反应所需的生物试剂存储在毛细管内，当外部机构打开隔离装置时，毛细管内的生物试剂被注射至反应液管内，实现生物试剂的转移。
6.实现权利要求1至5任意一项所述的一种核酸提取扩增一体化检测方法的检测连管，其特征在于：包括顶部带翻盖（1）的盒体（2），用于连通裂解液管（3）、清洗液管（4）、反应液管（5）的连通管（6），分别用于隔离裂解液管（3）、清洗液管（4）、反应液管（5）的隔离装置（7），用于储存生物试剂的毛细管（8）。
7.如权利要求6所述的一种核酸提取扩增一体化检测方法的检测连管，其特征在于：所述隔离装置（7），包括三脚柱塞（9），弹簧（10），隔离腔（11）。
8.如权利要求6所述的一种核酸提取扩增一体化检测方法的检测连管，其特征在于：所述毛细管（8）设置在清洗液管（4）和反应液管（5）之间的隔离装置（7）上。
9.如权利要求6所述的一种核酸提取扩增一体化检测方法的检测连管，其特征在于：所述毛细管（8）连接在隔离腔（11）和反应液管（5）之间。
10.如权利要求7所述的一种核酸提取扩增一体化检测方法的检测连管，其特征在于：所述隔离腔（11）的尾部设置有通孔。
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