CN112424608A - 用于疾病的预后和管理的方法 - Google Patents

用于疾病的预后和管理的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112424608A
CN112424608A CN201980045566.7A CN201980045566A CN112424608A CN 112424608 A CN112424608 A CN 112424608A CN 201980045566 A CN201980045566 A CN 201980045566A CN 112424608 A CN112424608 A CN 112424608A
Authority
CN
China
Prior art keywords
als
subject
biomarker
scd14
patients
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201980045566.7A
Other languages
English (en)
Inventor
斯坦利·H·阿佩尔
大卫·R·比尔斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Methodist Hospital
Original Assignee
Methodist Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Methodist Hospital filed Critical Methodist Hospital
Publication of CN112424608A publication Critical patent/CN112424608A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere in G01N2333/705
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本公开内容总体上涉及用于肌萎缩侧索硬化(ALS)的预后和管理的方法，以及相关的组合物、试剂盒、固体支持物和用途。

Description

用于疾病的预后和管理的方法
本公开内容的领域
本公开内容总体上涉及用于肌萎缩侧索硬化(ALS)的预后和管理的方法，以及相关的组合物、试剂盒、固体支持物和用途。
相关申请
本申请要求2018年5月10日提交的题为"Methods for prognosis andmanagement of disease"的美国临时申请第62/669,915号的优先权，该美国临时申请的内容通过引用以其整体并入本文。
序列表的引用并入
本申请连同电子格式的序列表一起提交。序列表以题为35524033 Implicit ALSPCT_ST25.TXT的文件提供，该文件创建于2019年5月7日，大小是15,144个字节。电子格式的序列表中的信息通过引用以其整体并入。
本公开内容的背景
肌萎缩侧索硬化(ALS)，也称为Lou Gehrig病，是最常见、最具破坏性、并且也常常是致命的成人退行性运动神经元疾病，它选择性地破坏上运动神经元和下运动神经元。约10％的ALS患者具有阳性家族史，疾病通常作为显性性状遗传，而90％的患者是散发性的，没有家族史，反映了遗传易感性与环境之间的复杂相互作用。ALS“综合征”具有临床上异质的表现和病程，生存时间范围为几个月至几十年不等，但通常范围为从疾病症状开始后3至5年不等。生存期与若干因素有关，诸如与临床表型、发作时的年龄、性别、呼吸衰竭的早期存在和体重减轻有关(Lunetta C.等人，JAMA Neurol.2017；74(6):660-667)。现在认为ALS中的病理过程扩展超出了运动***，并且包括认知损害以及失调的中枢和外周免疫***。不幸的是，目前极少有效的治疗可用于改变这种疾病的病理生物学；姑息治疗(palliativecare)和对症治疗是这些患者的管理中至关重要的组成部分。
ALS的特征是发作区域、进展速度、疾病扩散模式以及上运动神经元(UMN)、下运动神经元(LMN)和认知病理学的相对负担的异质性。ALS中的这种表型变异性使疾病进展的测量变得复杂。随着ALS中的靶向治疗时代的到来，准确测量疾病负担和进展速度仍然是促进有效临床试验设计和实现对疾病发病机制的进一步了解以开发用于ALS的治疗的关键优先事项。
了解受试者中ALS的进展速度可以有助于制定适当的管理或治疗计划，另外，通常对受试者规划其生活的其他方面也更有帮助。对于大多数疾病，更快的进展速度指示对于以下的需求：比物理疗法或营养支持更积极的药物治疗；更有效的药物；或者可能以更高的剂量或以在给药周期之间更短的间隔递送相同的药物。在一些情况下，某些疗法可能对快速进展性疾病比对缓慢进展性疾病更有效。因此，缺乏取样时预测疾病进展速度的预后是使ALS/MND治疗方案个体化以优化个体患者的结果的障碍。因此，仍然存在对鉴定用于准确预测或确定受试者进展速度，诸如患有ALS的受试者是患有缓慢进展性疾病还是患有快速进展性疾病的方法的需求。
本公开内容的概述
本公开内容至少部分基于鉴定与受试者中ALS进展速度相关的ALS进展生物标志物。如本文展示的，与患有缓慢进展性ALS的受试者的生物样品中的相同生物标志物的水平相比，以及与健康受试者相比，患有快速进展性ALS的受试者的生物样品中的一种或更多种ALS进展生物标志物的水平通常增加(或升高)。相比之下，与患有快速进展性ALS的受试者的生物样品中的相同生物标志物的水平相比，患有缓慢进展性ALS的受试者的生物样品中的一种或更多种ALS进展生物标志物的水平通常减少(或降低)。因此，确定患有ALS的受试者的生物样品中的一种或更多种ALS进展生物标志物的水平可以用于确定ALS的进展速度。在特定实施方案中，确定受试者的生物样品中一种或更多种ALS进展生物标志物的水平用于确定该受试者是可能患有缓慢进展性ALS还是可能患有快速进展性ALS。这样的ALS进展生物标志物的实例是可溶性CD14(sCD14)和脂多糖结合蛋白(LBP)。
对患有ALS的受试者是可能具有快速疾病进展还是可能具有缓慢疾病进展的早期理解(本公开内容提供了这样做的手段)具有明显的益处和优势。对于被诊断为患有ALS的受试者，了解他们是可能具有快速疾病进展还是可能具有缓慢疾病进展，可以有助于做出适当的生活方式和财务决策。此外，了解可能的疾病进展速度可能影响治疗方案。例如，呼吸功能是决定生存的主要因素之一，并且具有快速进展标志物可能促进更早地使用非侵入性通气(NIV)。像呼吸功能一样，***饲管的时机是关键的，并且也是影响预期寿命的一个因素。一旦患有ALS的受试者进展至其呼吸功能明显恶化的程度，则麻醉师可能不愿意协助手术。因此，期望受试者了解其疾病进展，以便如果存在对快速进展的任何考虑可以尽早***饲管。在其他实例中，可以鉴定和选择患有快速进展性ALS的受试者纳入临床试验，评估新疗法的疗效。将这样的受试者纳入临床试验是期望的，因为较短的疾病进展时间段可以产生关于疗法的疗效的更快速证据。
因此，在一方面，提供了一种用于评估受试者中ALS的进展速度的方法，该方法包括：(a)确定从患有ALS的受试者获得的生物样品中生物标志物的水平，其中生物标志物是可溶性CD14(sCD14)或脂多糖结合蛋白(LBP)；和(b)基于生物样品中生物标志物的水平，例如相对于合适参考水平，确定受试者中ALS的可能进展速度。在特定实施方案中，确定ALS的进展速度促进确定患有ALS的受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS。在这样的情况下，该方法包括：(a)确定从患有ALS的受试者获得的生物样品中生物标志物的水平，其中生物标志物是可溶性CD14(sCD14)或脂多糖结合蛋白(LBP)；和(b)相对于合适的参考水平，基于生物样品中生物标志物的水平，确定受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS。
因此，提供了一种用于确定患有ALS的受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS的方法，该方法包括:(a)确定从患有ALS的受试者获得的生物样品中生物标志物的水平，其中生物标志物是可溶性CD14(sCD14)或脂多糖结合蛋白(LBP)；和(b)相对于合适的参考水平，基于生物样品中生物标志物的水平，确定受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS。例如，在参考水平代表健康受试者和/或已知患有缓慢进展性ALS的受试者的情况下，生物标志物水平相对于参考水平的增加可以指示受试者可能患有快速进展性ALS。在另一个实例中，在参考水平代表已知患有快速进展性ALS的受试者的情况下，相对于参考水平，生物标志物的相似水平可以指示受试者可能患有快速进展性ALS。在另外的实例中，在参考水平代表健康受试者和/或已知患有缓慢进展性ALS的受试者的情况下，相对于参考水平，生物标志物的相似水平可以指示受试者可能患有缓慢进展性ALS。在仍另外的实例中，在参考水平代表已知患有快速进展性ALS的受试者的情况下，生物标志物水平相对于参考水平的减少可以指示受试者可能患有缓慢进展性ALS。在特定实施方案中，参考水平是阈值水平，高于该阈值水平的受试者可能患有快速进展性ALS，并且低于该阈值水平的受试者可能具有缓慢进展性ALS。
在以上和本文描述的方法的具体实例中，该方法包括确定sCD14和LBP二者的水平。通常，生物样品选自由以下组成的组：血液、血浆、血清、尿液和脑脊液(CSF)。在一些实施方案中，该方法还包括测量生物样品中至少一种其他生物标志物的水平。在一个实例中，至少一种其他生物标志物选自由以下组成的组：CRP、MIF、sTNFRI和/或sTNFRII。例如，CRP、sTNFRI和/或sTNFRII水平相对于代表健康受试者或患有缓慢进展性ALS的受试者的参考水平的增加可以指示受试者患有快速进展性ALS。
在本公开内容的方法的一些实施方案中，进行了在测量生物标志物水平前获得生物样品的另外的步骤。在其他实施方案中，方法包括使受试者暴露于用于治疗ALS的治疗方案。
还提供了一种用于确定患有ALS的受试者中生物标志物水平的试剂盒，其中试剂盒包含对生物标志物有特异性的抗原结合分子，所述抗原结合分子允许测量生物样品中生物标志物的水平，其中生物标志物是sCD14或LBP。在一些实施方案中，试剂盒包含允许测量生物样品中sCD14和LBP的水平的对sCD14有特异性的抗原结合分子和对LBP有特异性的抗原结合分子。在另外的实施方案中，试剂盒还包含对选自CRP、MIF、sTNFRI、sTNFRII、NFL、pNfH、p75NTRECD、miR-206、miR-143-3p和miR-374b-5p的至少一种其他生物标志物有特异性的抗原结合分子。试剂盒还可以包含一种或更多种检测剂，和/或关于测量一种或更多种生物标志物的水平的说明材料。
在另一方面，本公开内容提供了一种固体支持物，所述固体支持物包含对生物标志物有特异性的抗原结合分子，其中生物标志物是sCD14或LBP。在一些实例中，支持物包含对sCD14有特异性的抗原结合分子和对LBP有特异性的抗原结合分子。在另外的实例中，固体支持物另外包含对选自CRP、MIF、sTNFRI、sTNFRII、NFL、pNfH、p75NTRECD、miR-206、miR-143-3p和/或miR-374b-5p的至少一种其他生物标志物有特异性的抗原结合分子。在一些实施方案中，固体支持物选自多孔板、载玻片、芯片或多于一个珠(a plurality of beads)。
在另外的方面，提供了一种对受试者分层(stratify)以治疗ALS的方法，该方法包括(a)根据以上和本文描述的方法，确定受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS，或者评估受试者中ALS的进展速度；和(b)基于受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS，或者基于受试者中ALS的进展速度，确定适于受试者的优化治疗方案。这样的用于对受试者分层的方法还可以进一步包括使受试者暴露于优化治疗方案。
本公开内容还提供了一种用于治疗可能患有快速进展性ALS的受试者的方法，该方法包括(a)基于受试者的生物样品中生物标志物的水平，选择可能患有快速进展性ALS的受试者，其中生物标志物是sCD14或LBP；和(b)使受试者暴露于为治疗快速进展性ALS而优化的治疗方案。生物样品可以是例如血液、血浆、血清、尿液或CSF。在一些实施方案中，步骤(a)包括基于受试者的生物样品中sCD14和LBP的水平选择可能患有快速进展性ALS的受试者。在该治疗方法的另外的实施方案中，在选择受试者前，该方法包括根据以上和本文描述的方法确定受试者是否可能患有快速进展性ALS。
在一些实施方案中，治疗方案包括施用抗神经退行性剂，诸如，例如，利鲁唑(riluzole)、依达拉奉(edaravone)、CD14拮抗剂、GM604、马赛替尼(masitinib)、补体途径抑制剂(例如C5a抑制剂，诸如PMX205或依库珠单抗(eculizumab))，或阻断CD40与CD40配体之间相互作用的剂(例如与CD40和/或CD40配体特异性结合的抗体，诸如AT-1502抗体)。在特定实施方案中，CD14拮抗剂是CD14拮抗性抗体，诸如选自以下的抗体：
(1)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000061
并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000062
(2)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000063
并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000065
和
(3)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000071
并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000072
在另外的实施方案中，治疗方案包括使受试者暴露于非侵入性通气，诸如平均容积保证压力支持(Average Volume Assured Pressure Support,AVAPS)、持续气道正压(CPAP)和/或双相气道正压(BiPAP)。在特定实例中，可能患有快速进展性ALS的受试者暴露于非侵入性通气早于如果受试者可能患有缓慢进展性ALS的情况。
本公开内容还提供了一种用于治疗可能患有缓慢进展性ALS的受试者的方法，该方法包括(a)基于受试者的生物样品中生物标志物的水平，选择可能患有缓慢进展性ALS的受试者，其中生物标志物是sCD14或LBP；和(b)使受试者暴露于为治疗缓慢进展性ALS而优化的治疗方案。生物样品可以是例如血液、血浆、血清、尿液或CSF。在一些情况下，步骤(a)包括基于受试者的生物样品中的sCD14和LBP的水平选择可能患有缓慢进展性ALS的受试者。在用于治疗可能患有缓慢进展性ALS的受试者的方法的特定实施方案中，该方法包括在选择受试者前，根据以上和本文描述的方法确定受试者是否可能患有缓慢进展性ALS的步骤。
在一些实例中，治疗方案不包括施用抗神经退行性剂，而在其他实施例中，治疗方案包括施用抗神经退行性剂，诸如，例如，利鲁唑、依达拉奉、CD14拮抗剂、GM604、马赛替尼、补体途径抑制剂(例如C5a抑制剂，诸如PMX205或依库珠单抗)，或阻断CD40与CD40配体之间相互作用的剂(例如与CD40和/或CD40配体特异性结合的抗体，诸如AT-1502抗体)。在特定实施方案中，CD14拮抗剂是CD14拮抗性抗体，诸如选自以下的抗体：
(1)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000081
并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000082
(2)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000083
并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000085
和
(3)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000087
并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000091
还考虑了对生物标志物有特异性的抗原结合分子在制备用于确定患有ALS的受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS的试剂盒中的用途，其中生物标志物是sCD14或LBP。在一些实例中，用途是对sCD14有特异性的抗原结合分子和对LBP有特异性的抗原结合分子的组合在制备用于确定患有ALS的受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS的试剂盒中的用途。在另外的实施方案中，对至少一种其他生物标志物(例如CRP、MIF、sTNFRI、sTNFRII、NFL、pNfH、p75NTRECD、miR-206、miR-143-3p或miR-374b-5p)有特异性的抗原结合分子也用于制备试剂盒。
附图简述
图1示出了来自患有ALS(分为快速进展性ALS和缓慢进展性ALS)的受试者和健康志愿者(对照或NC)的外周血单核细胞(PBMC)和分离的泛单核细胞(pan monocyte)的流式细胞术分析结果。细胞用抗人类CD14-V450抗体和抗人类CD16-FITC染色，并且经历流式细胞术以评估单核细胞群体。在以下图解表示中，白色柱是CD14+/CD16-单核细胞；灰色柱是CD14+/CD16+单核细胞；并且黑色柱是CD14低/CD16+单核细胞。(A)PBMC中的单核细胞亚群；(B)分离的泛单核细胞中的单核细胞亚群；(C)PBMC中的单核细胞亚群上的CD14表达；和(D)分离的泛单核细胞中的单核细胞亚群上的CD14表达。
图2提供了示出CD14-/低/CD16+单核细胞百分比与(A)疾病负担或(B)疾病进展之间的相关性的图。
图3示出了来自患有ALS(分为快速进展性ALS和缓慢进展性ALS)的受试者和健康志愿者(NC)的外周PBMC和分离的泛单核细胞的流式细胞术分析结果。细胞用抗人类CD14-V450抗体、抗人类CD16-FITC和抗人类TIM3-PE染色，并且经历流式细胞术以评估单核细胞群体。(A)PBMC中的单核细胞亚群；(B)分离的泛单核细胞中的单核细胞亚群；(C)CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞与疾病进展速度之间的相关性；和(D)CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞与疾病进展速度之间的相关性。
图4提供了通过ELISA测量的来自健康志愿者(健康对照)和患有ALS的受试者的生物样品中的sCD14水平。(A)健康对照和ALS患者中的血清sCD14水平；(B)健康对照和患有缓慢进展性疾病或快速进展性疾病的ALS患者中的血清sCD14水平；(C)健康志愿者和ALS患者的CSF中的sCD14；(D)健康对照和患有缓慢进展性疾病或快速进展性疾病的ALS患者的CSF中的sCD14；(E)血清sCD14水平与CSF sCD14水平之间的相关性；(F)健康对照和ALS患者的尿液中的sCD14；(G)健康对照和患有缓慢进展性疾病或快速进展性疾病的ALS患者的尿液中的sCD14。
图5提供了通过对从健康志愿者(健康对照)和患有ALS的受试者中的PBMC分离的mRNA进行qRT-PCR来测量的sCD14 mRNA水平。(A)健康对照和ALS患者的PBMC中的CD14mRNA；(B)健康对照和患有缓慢进展性疾病或快速进展性疾病的ALS患者的PBMC中的CD14mRNA。
图6示出了通过ELISA测量的来自健康志愿者(健康对照或对照)、患有ALS的受试者和患有其他神经状况的受试者的生物样品中的sCD14水平。(A)健康对照、患有缓慢进展性疾病或快速进展性疾病的患者和患有痴呆的患者中的血清sCD14水平；(B)健康对照、患有轻度阿尔茨海默病(轻度AD；n＝10)的患者、患有晚期阿尔茨海默病(Adv AD)的患者和患有额颞叶痴呆(FTD)的患者中的血清sCD14水平；(C)健康对照和慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)患者中的血清sCD14水平；和(D)健康对照、患有缓慢进展性疾病或快速进展性疾病的ALS患者，和CIDP患者中的血清sCD14水平。
图7示出了ALS患者中的血清sCD14与疾病负担或疾病进展的标志物之间的相关性。(A)ALS患者中的血清sCD14与AALS评分之间的相关性；(B)血清sCD14与ALS Treg阻抑能力之间的相关性；和(C)使用血清sCD14水平预测疾病缓慢进展对比快速进展的ROC曲线。
图8示出了患有ALS的受试者中的血清sCD14水平与临床结果之间的相关性，使用2.73μg/ml血清sCD14的ROC评分截止值。(A)具有高于2.73μg/ml的sCD14水平的ALS患者的死亡或生存的百分比；(B)具有高于或低于2.73μg/ml的sCD14水平的ALS患者从诊断至100分的AALS评分的时间；(C)具有高于或低于2.73μg/ml的sCD14水平的ALS患者从诊断至死亡的时间；(D)个体ALS患者中血清sCD14与从诊断至到达100分的AALS评分的时间之间的相关性；(E)个体ALS患者中血清sCD14与诊断至死亡时间的相关性。
图9示出了健康志愿者(对照)和ALS受试者的血清中脂多糖结合蛋白(LBP)的水平以及与疾病负担的相关性。(A)对照和ALS患者中的血清LBP水平；(B)对照和患有缓慢进展性疾病或快速进展性疾病的ALS患者中的血清LBP水平。(C)血清LBP水平与AALS评分之间的相关性；和(D)血清LBP水平与血清sCD14水平之间的相关性。
图10示出了健康志愿者(健康对照)和ALS受试者的血清中C反应蛋白(CRP)的水平。(A)健康对照和ALS患者中的血清CRP水平；(B)健康对照和患有缓慢进展性疾病或快速进展性疾病的ALS患者中的血清CRP水平。
图11示出了健康志愿者(健康对照)和ALS受试者的血清中的巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的水平。(A)健康对照和ALS患者中的血清MIF水平；(B)健康对照和患有缓慢进展性疾病或快速进展性疾病的ALS患者中的血清MIF水平。
图12示出了健康志愿者(健康对照)和ALS受试者的血清中的可溶性肿瘤坏死因子受体I和II(sTNFRI和sTNFRII)的水平。(A)健康对照和ALS患者中的血清sTNFRI水平；(B)HV和ALS患者中的血清sTNFRII水平；(C)健康对照和患有缓慢进展性疾病或快速进展性疾病的ALS患者中的血清TNFRI水平；(D)健康对照和患有缓慢进展性疾病或快速进展性疾病的ALS患者中的血清TNFRII水平；和(E)ALS患者中血清TNFRI水平与血清TNFRII水平的相关性。
图13提供了来自健康志愿者(健康对照或对照(C))和患有ALS的受试者(第二研究)的血清样品中的sCD14水平。(A)来自第一研究或第二研究的患有ALS的患者或健康对照中的血清sCD14水平。(B)患有缓慢进展性ALS或快速进展性ALS的患者或健康对照中的血清sCD14水平，比较了来自第一研究和第二研究的队列(cohort)。(C)第二研究中的ALS患者中血清sCD14与疾病进展速度之间的相关性。(D)使用血清sCD14水平预测快速(rapid)(快(fast))或缓慢进展对比对照的ROC曲线(根据Mann Whitney检验，P<.0001；灵敏度：0.767；特异性：0.710)。(E)使用血清sCD14水平预测快速(快)对比缓慢进展的ROC曲线(根据MannWhitney检验，P<.0001；灵敏度：0.942；特异性：0.958)。(F)使用血清sCD14水平预测快速(快)进展对比对照的ROC曲线(根据Mann Whitney检验，P<.0001；灵敏度：0.950；特异性：0.958)。(G)使用血清sCD14水平预测缓慢进展对比对照的ROC曲线(根据Mann Whitney检验，P<.0001；灵敏度：0.633；特异性：0.654)。
图14提供了来自健康志愿者(健康对照或对照(C))和患有ALS的受试者(第二研究)的血清样本中的LBP水平。(A)来自第一研究或第二研究的患有ALS的患者或健康对照中的血清LBP水平。(B)患有缓慢进展性ALS或快速进展性ALS的患者或健康对照中的血清LBP水平，比较了来自第一研究和第二研究的队列。(C)第二研究中的ALS患者中血清LBP与疾病进展速度之间的相关性。(D)使用血清LBP水平预测快速(快)或缓慢进展对比对照的ROC曲线(根据Mann Whitney检验，P<.0001；灵敏度：0.817；特异性：0.920)。(E)使用血清LBP水平预测快速(快)对比缓慢进展的ROC曲线(根据Mann Whitney检验，P<.0001；灵敏度：0.923；特异性：0.938)。(F)使用血清LBP水平预测快速(快)进展对比对照的ROC曲线(根据MannWhitney检验，P<.0001；灵敏度：0.967；特异性：1)。(G)使用血清LBP水平预测缓慢进展对比对照的ROC曲线(根据Mann Whitney检验，P<.0001；灵敏度：0.783；特异性：0.865)。
图15示出了缓慢进展性ALS患者和快速进展性ALS患者的血清中sCD14和LBP之间的相关性。
图16示出了使用血清sCD14和血清LBP的组合预测疾病进展的ROC曲线。(A)使用血清sCD14和LBP水平预测快速(快)或缓慢(S)进展对比对照的ROC曲线。(B)使用血清sCD14和LBP水平预测快速(快；F)对比缓慢(S)进展的ROC曲线。(C)使用血清sCD14和LBP水平预测快速(快；F)进展对比对照(C)的ROC曲线。(D)使用血清sCD14和LBP水平预测缓慢(S)进展对比对照(C)的ROC曲线。(E)使用按比例的血清sCD14和按比例的血清LBP水平预测快速(快；F)或缓慢(S)进展对比对照(C)的ROC曲线(根据Mann Whitney检验，P<.0001；灵敏度：0.783；特异性：0.950)。(F)使用按比例的血清sCD14和按比例的血清LBP水平预测快速(快；F)对比缓慢(S)进展的ROC曲线(根据Mann Whitney检验，P<.0001；灵敏度：0.942；特异性：0.958)。(G)使用按比例的血清sCD14和按比例的血清LBP水平预测快速(快；F)进展对比对照(C)的ROC曲线(根据Mann Whitney检验，P<.0001；灵敏度：1；特异性：1)。(H)使用按比例的血清sCD14和按比例的血清LBP水平预测缓慢(S)进展对比对照(C)的ROC曲线(根据MannWhitney检验，P<.0001；灵敏度：0.800；特异性：0.808)。
本公开内容的详述
1.定义
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语具有与本公开内容所属领域普通技术人员通常理解的相同含义。虽然类似于或等同于本文描述的方法和材料的任何方法和材料可以用于实践或测试本公开内容，但描述了优选的方法和材料。出于本公开内容的目的，以下术语在下文定义。
冠词“一(a)”和“一(an)”在本文中用于指一个或多于一个(即至少一个)的该冠词的语法对象。通过实例的方式，“生物标志物(a biomarker)”意指一个生物标志物或多于一个生物标志物。
如本文使用的，“和/或”是指并且涵盖一个或更多个相关的所列项目的任何和所有可能的组合，以及当以可选地(或)解释时没有组合。
术语“ALS”和“Lou Gehrig病”在本文中可以可互换地使用，以指相同的状况。家族性ALS和散发性ALS二者均可以通过本主题的方法治疗，或者其发展或进展可以通过本方法确定。本文考虑了所有形式的ALS。患有ALS的受试者可以患有快速进展性ALS(在本文中与快进展性ALS可互换地使用的术语)或缓慢进展性ALS，这些术语是本领域熟知的。本领域技术人员将理解，缓慢进展性受试者和快速进展性受试者的精确分类取决于用于评估疾病和疾病进展使用的评分***。示例性评分***包括，例如，基于检查的Appel ALS(AALS)评分和基于问卷的ALS功能评定量表(ALS Functional Rating Scale,ALSFRS)评分。ALSFRS评分基于分为四个区域(精细运动、大运动(gross motor)、延髓和呼吸)的十个问题，并且范围为40(正常)至0(最低功能)(Cedarbaum等人J Neurol Sci 1997；152(suppl 1)：S1–9)。AALS评分基于客观测试五个类别(延髓、呼吸功能、手臂和腿部功能以及肌肉力量)，并且范围为30(正常)至164(最大受损)(Appel等人Ann Neurol 1987；22：328–333；Haverkamp等人Brain.1995；118：707-19)。在特定实例中，使用AALS评分***，并且阈值将快速进展性ALS与缓慢进展性ALS区分开。阈值可以是例如约1.0至约2.0AALS分/月，诸如1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2.0AALS分/月，其中患有快速进展性ALS的受试者是以大于或等于阈值的速度进展的受试者，并且患有缓慢进展性ALS的受试者是以小于阈值的速度进展的受试者。在其他实例中，患有快速进展性ALS的受试者是以大于阈值的速度进展的受试者，并且患有缓慢进展性ALS的受试者是以小于或等于阈值的速度进展的受试者。在特定实施方案中，用于区分快速进展性ALS与缓慢进展性ALS的阈值是1.5AALS分/月，其中患有快速进展性ALS的受试者是以大于或等于1.5AALS分/月的速度进展的受试者，并且患有缓慢进展性ALS的受试者是以小于1.5AALS分/月的速度进展的受试者(Henkel等人，EMBOMol Med 2013；5:64-79)。
生物标志物的“量”或“水平”是样品中的可检测水平，并且可以表示绝对量或水平或者相对量或水平。这些可以通过本领域技术人员已知的方法测量，其说明性实例在本文公开。
如本文使用的，“和/或”是指并且涵盖一个或更多个相关的所列项目的任何和所有可能的组合，以及当以可选地(或)解释时没有组合。
“抗原结合分子”意指对靶抗原具有结合亲和力的分子。应当理解，该术语扩展至表现出抗原结合活性的免疫球蛋白、免疫球蛋白片段和非免疫球蛋白来源的蛋白框架。可用于本发明的实践中的代表性抗原结合分子包括抗体及其抗原结合片段。
术语“抗体”在本文以最广泛的意义使用，并且特别涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人类抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和单可变结构域抗体，只要它们表现出期望的生物活性。术语“抗体”包括免疫球蛋白分子以及其多聚体(例如，IgM)，免疫球蛋白分子包括四条多肽链，即通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链。重链各自包含重链可变区(其可以被缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含3个结构域CH1、CH2和CH3。轻链各自包含轻链可变区(其可以被缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。VH和VL区可以被进一步细分为散布着更保守的区域(被称为框架区(FR))的高变区(被称为互补决定区(CDR))。VH和VL各自包含按以下顺序从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本发明的不同实施方案中，抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人类种系序列相同，或者可以是天然或人工修饰的。氨基酸共有序列可以基于两个或更多个CDR的并排分析(side-by-side analysis)来定义。术语“抗体”的范围包括任何类别的抗体，诸如IgG、IgA或IgM(或其亚类)，并且抗体不必是任何特定类别。根据抗体的重链的恒定区的抗体氨基酸序列，免疫球蛋白可以被指定为不同的类别。存在五大类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的几种可以被进一步分成亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定区分别被称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是熟知的。
“抗原结合片段”可以通过在非抗体蛋白支架上排列一个或更多个CDR的手段来提供。如本文使用的“蛋白支架”包括但不限于免疫球蛋白(Ig)支架，例如IgG支架，其可以是四链或双链抗体，或者其可以仅包含抗体的Fc区，或者其可以包含来自抗体的一个或更多个恒定区，该恒定区可以是人类或灵长类动物来源的，或者其可以是人类和灵长类动物恒定区的人工嵌合体。蛋白支架可以是Ig支架，例如IgG或IgA支架。IgG支架可以包含抗体的一些或所有结构域(即CH1、CH2、CH3、VH、VL)。抗原结合蛋白可以包含选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgG4PE的IgG支架。例如，支架可以是IgG1。支架可以由抗体的Fc区组成或包含抗体的Fc区，或者是其一部分。抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；以及(vii)由模拟抗体高变区(例如，分离的互补决定区(CDR)诸如CDR3肽)或受限制的FR3-CDR3-FR4肽的氨基酸残基组成的最小识别单元。其他工程化分子，诸如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR接枝抗体、双抗体(diabody)、三抗体(tribody)、四抗体(tetrabody)、微抗体(minibody)、纳米抗体(nanobody)(如单价纳米抗体、二价纳米抗体等)，小模块免疫药物(small modular immunopharmaceutical)(SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域(shark variable IgNAR domains)，也涵盖在如本文使用的表述“抗原结合片段”内。抗体的抗原结合片段通常包含至少一个可变结构域。可变结构域可以是任何尺寸或可以具有任何氨基酸组成，并且通常包含邻近于具有一个或更多个框架序列的框架或位于具有一个或更多个框架序列的框架中的至少一个CDR。在具有与VL结构域缔合的VH结构域的抗原结合片段中，VH结构域和VL结构域可以以任何合适的排列相对于彼此定位。例如，可变区可以是二聚化的并且包含VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。可选地，抗体的抗原结合片段可以包含单体VH结构域或VL结构域。在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可以包含与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可以存在于本发明的抗体的抗原结合片段内的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性构型包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3和(xiv)VL-CL。在可变结构域和恒定结构域的任何构型中，包括以上列出的任何示例性构型中，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或可以由完整的或部分的铰链区或接头区域连接。铰链区可以由至少2个(例如，5个、10个、15个、20个、40个、60个或更多个)氨基酸组成，所述氨基酸在单个肽分子中在邻近的可变结构域和/或恒定结构域之间形成柔性或半柔性的连接(linkage)。此外，本发明的抗体的抗原结合片段可以包含以上列出的任何可变结构域和恒定结构域构型彼此非共价缔合和/或与一个或更多个单体VH结构域或VL结构域(例如，通过一个或更多个二硫键)缔合的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)。与完整抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性或多特异性的(例如，双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段通常包含至少两个不同的可变结构域，其中每一个可变结构域均能与单独的抗原或同一抗原上的不同表位特异性结合。任何多特异性抗原结合分子形式，包括本文公开的示例性双特异性抗原结合分子形式，可以使用本领域可得的常规技术修改以用于在本发明的抗体的抗原结合片段的背景中使用。
术语“与...结合”、“与...特异性结合”、“对...有特异性”和相关的语法变化形式通常是指发生在这样的成对物质(例如抗体与抗原)之间的结合，其可以通过共价或非共价相互作用或者共价和非共价相互作用的组合来介导。当两种物质的相互作用产生非共价结合的复合物时，发生的结合通常是静电的、氢键合或亲脂性相互作用的结果。因此，“特异性结合”发生在成对物质之间，其中产生具有抗体/抗原或酶/底物相互作用特征的结合复合物的二者之间存在相互作用。特别地，特异性结合的特征在于，一对成员中的一个成员与特定物质结合，而不与结合成员的对应成员所属的化合物家族内的其他物质结合。
如本文使用的，术语“生物标志物”是指与特定疾病、表型、生物活性或功能(例如，ALS的存在、其症状、ALS的严重程度和疾病进展速度)定量或定性相关的分子。合适生物标志物的说明性实例包括蛋白、多肽以及多肽或蛋白的片段；碳水化合物和/或基于糖脂的分子标志物；多核苷酸，诸如基因产物，RNA或RNA片段、多核苷酸拷贝数变异(例如，DNA拷贝数)；多核苷酸或多肽修饰(例如翻译后修饰、磷酸化、DNA甲基化、乙酰化和其他染色质修饰、糖基化等)。在某些实施方案中，“生物标志物”意指在针对另一样品或合适对照/参照中的相同标志物进行测量/比较时差异地存在(即，增加/上调或减少/下调)于样品中的分子/化合物。在其他实施方案中，生物标志物可以在针对相同或另一样品或合适对照/参考中的其他标志物进行测量/比较时差异地存在于样品中。在另外的实施方案中，生物标志物可以在针对相同或另一样品或合适对照/参照中的其他标志物以及针对另一样品或合适对照/参照中的相同标志物进行测量/比较时差异地存在于样品中。在又另一种实施方案中，与来自具有第二表型(例如，没有疾病或状况或者具有不太严重形式的疾病或状况)的受试者或受试者组的样品相比，生物标志物可以差异地存在于来自具有第一表型(例如，患有疾病或状况)的受试者或受试者组的样品中。“ALS进展生物标志物”是指与ALS进展速度相关的分子。
在整个本说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包含/包括(comprise)”、“包含/包括(comprises)”和“包含/包括(comprising)”将被理解为隐含包含陈述的步骤或要素或者步骤或要素的组，但不排除任何其他步骤或要素或者步骤或要素的组。因此，术语“包含/包括”以及类似术语的使用指示列出的要素是必需的或强制的，但其他要素是任选的并且可以存在或可以不存在。“由...组成(consisting of)”意指包括并且限于短语“由...组成”中的任何事物。因此，短语“由...组成(consisting of)”指示列出的要素是必需的或强制的，并且不可以存在其他要素。“基本上由...组成(consisting essentiallyof)”意指包括短语中列出的任何要素，并且限于不干扰或不促成本公开内容中为列出的要素指定的活性或作用的其他要素。因此，短语“基本上由...组成(consisting essentiallyof)”指示列出的要素是必需的或强制的，但其他要素是任选的并且可以存在或可以不存在，取决于它们是否影响列出的要素的活性或作用。
在治疗状况的上下文中，“有效量”意指向需要这样的治疗或预防的个体以单剂量或作为系列的一部分施用一定量的剂或组合物，该量对预防引起该状况的症状、控制(holding in check)该状况的此类症状和/或治疗该状况的现有症状有效。有效量根据待治疗个体的年龄、健康和身体状况以及疾病的症状是否明显，待治疗个体的分类组，组合物的配制，医学情况的评估和其他相关因素而变化。最佳给药时间表可以从受试者体内药物累积的测量结果计算。最佳剂量可以根据个体受试者中的相对效力而变化，并且可以通常基于发现在体外和体内动物模型中有效的EC50值来估计。普通技术人员可以容易地确定最佳剂量、给药方法和重复率。预期该量落入可以通过常规试验确定的相对宽的范围内。
术语“升高的水平”等是指样品中生物标志物相对于合适参考水平增加的水平或量，诸如相对于来自在取样时已知患有ALS的受试者或来自已知没有ALS的健康受试者的样品中相同生物标志物的水平增加的水平或量。
术语“降低的水平”等是指样品中生物标志物相对于合适参考水平减少的水平或量，诸如相对于来源于在取样时已知患有ALS的受试者或来自已知没有ALS的健康受试者的样品中相同生物标志物的水平减少的水平或量。
如本文使用的，提及样品中相对于合适参考水平“相同或相似”的生物标志物的水平意指样品中生物标志物的水平与参考水平之间的任何差异不足以将它们彼此区分，或者不足以区分它们所代表的状况或表型(例如健康、缓慢进展性ALS或快速进展性ALS)。如将理解的，这可以使用数学模型和/或统计分析确定。在特定实例中，“相同或相似”意指不多于5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多的水平差异。
如本文使用的，“说明材料”包括出版物、记录、图表或可以用于传达本公开内容的组合物和方法的有用性的任何其他表达介质。例如，本公开内容的试剂盒的说明材料可以附于包含本公开内容的核酸、肽和/或组合物的容器上，或者与包含核酸、肽和/或组合物的容器一起运输。可选地，说明材料可以与容器单独运输，目的是说明材料和化合物由接受者一起使用。
如本文使用的术语“单核细胞”是指免疫***的白细胞的类型。单核细胞通常以CD14的表达为特征。单核细胞也可以表达一种或更多种以下细胞表面标志物：125I-WVH-1、63D3、Adipophilin、CB12、CD11a、CD11b、CD15、CD54、Cd163、胞苷脱氨酶、Flt-1等。术语“单核细胞”包括但不限于存在于人类血液中的典型单核细胞和非典型促炎性单核细胞二者。“典型单核细胞”意指以高水平的细胞表面CD14表达为特征的单核细胞类型(CD14++单核细胞)，而术语“非典型促炎性单核细胞”通常意指具有低水平细胞表面CD14表达的单核细胞，任选地具有细胞表面CD16受体的另外共表达的单核细胞(CD14+CD16+单核细胞)。
术语“患者”和“受试者”在本文中可互换地使用，并且泛指任何脊椎动物。合适脊椎动物是本领域技术人员熟悉的，其说明性实例包括脊索动物亚门(subphylum Chordata)的成员，包括灵长类动物(例如，人类、猴和猿)。在优选的实施方案中，受试者是人类。在一些实施方案中，受试者患有ALS，诸如快速进展性ALS或缓慢进展性ALS。
术语“多核苷酸”、“遗传物质”、“遗传形式”、“核酸”和“核苷酸序列”包括RNA、cDNA、基因组DNA、合成形式和混合的聚合物、有义链和反义链两者，并且如本领域技术人员容易理解的，可以是化学或生物化学修饰的，或者可以包含非天然或衍生的核苷酸碱基。
术语“预后”及其语法变化形式通常是指提供关于个体中疾病或状况(诸如ALS)的可能进展或严重程度的信息的一种或更多种生物标志物、生物标志物谱或方法。在一些实施方案中，预后还指显示出对用于受试者中的疾病或状况的疗法或其他治疗方案的阳性或阴性应答的能力。在一些实施方案中，预后是指预测疾病/状况相关症状的存在或减轻的能力。预后剂或方法可以包括将受试者或从受试者获得的样品分类为多个类别之一，其中这些类别与受试者经历特定结果的不同可能性相关。例如，类别可以是低风险和高风险，其中低风险类别中的受试者具有比高风险类别中的受试者更低的经历不良结果(例如，在给定时间段内，诸如5年或10年)的可能性。例如，不良结果可以是疾病进展、疾病复发或可归因于疾病的死亡。“可能性”意指基于给定数学模型对具有特定生物标志物水平的受试者实际上是患有快速进展性ALS还是患有缓慢进展性ALS的量度。例如，增加的可能性可以是相对的或绝对的，并且可以定性地或定量地表示。例如，增加的可能性可以单纯地通过确定生物标志物的水平并且基于先前的群体研究将受试者置于“增加的风险”类别来确定。术语“可能性”在本文还与术语“概率”可互换地使用。
如本文使用的，ALS的进展速度是指对疾病严重程度增加所需时间的评估。疾病的严重程度可以通过测量患者出现的疾病症状的数目和/或任何一种或更多种症状的严重程度来评估。多种评分***可以用于评估疾病的严重程度，包括基于检查的Appel ALS(AALS)评分和基于问卷的ALS功能评分量表(ALSFRS)评分(如以上讨论的)。这样的情况下的进展速度可以通过计算评分随时间的变化，例如每月AALS评分的变化来确定。如本文描述的，生物标志物诸如sCD14和/或LBP与疾病进展速度紧密相关，并且因此这样的生物标志物的水平也可以用于评估ALS的进展速度。
如本文使用的术语“样品”包括可以从受试者提取的、未处理的、处理的、稀释的或浓缩的含有如本文描述的生物标志物的任何生物样本。样品可以包含一种生物标志物(例如sCD14)或一组生物标志物。根据本公开内容预期使用的生物样品的说明性实例包括血液、血清、血浆、尿液、脑脊液(CSF)和唾液。
本文公开的方法可以包括这样的步骤，所述步骤包括将样品中生物标志物的值或水平与“参考水平”进行比较，所述“参考水平”可互换地称为“参考”、“合适对照”、“对照”等。“参考水平”是代表表型或状况(诸如健康状况、快速进展性ALS或缓慢进展性ALS)的值、水平或者值或水平的范围。在一些实施方案中，参考值由从一个或更多个患有快速进展性ALS的受试者、一个或更多个患有缓慢进展性ALS的受试者、或一个或更多个没有ALS的受试者(诸如一个或更多个健康个体)获取的一个或更多个生物样品确定。在其他实施方案中，“参考值”是已经被建立为反映例如健康受试者、患有快速进展性ALS的受试者或患有缓慢进展性ALS的受试者的预先确定或预定义的值或水平(例如，与特定生物标志物谱相关的生物标志物水平)。因此，在一些实施方案中，参考水平在进行本文公开的方法前已经被确定。参考水平或值也可以根据用于测量生物样品中生物标志物的水平的特定技术(例如，ELISA、LC-MS、GC-MS、PCR等)来定制，其中生物标志物的水平可能基于所使用的特定技术而不同。在特定实施方案中，参考水平是阈值水平或值，高于该阈值水平或值或者低于该阈值水平或值指示快速进展性ALS或缓慢进展性ALS。
如本文使用的术语“固体支持物”是指可以将分子物质，诸如核酸和/或多肽固定至其的固体惰性表面或主体。固体支持物的非限制性实例包括玻璃表面、塑料表面、乳胶、右旋糖酐、聚苯乙烯表面、聚丙烯表面、聚丙烯酰胺凝胶、金表面以及硅片(siliconwafer)。在一些实施方案中，固体支持物呈膜、载玻片、芯片、颗粒(包括珠)和多孔板的形式。支持物可以包括各自具有不同的附接的分子物质的多于一个颗粒或珠。在一些实施方案中，固体支持物可以包括已经诸如通过应用中间材料的层或涂层被“官能化”的惰性基底或基质，该中间材料包括允许与分子共价附接的反应性基团。分子可以被直接共价附接至中间材料，但中间材料自身可以被非共价附接至基底或基质。
如本文使用的，提及ALS疾病的“症状”是被认为指示ALS疾病的身体或精神特征。非限制性ALS介导的疾病症状包括进行性肌萎缩、麻痹、痉挛、反射亢进和其他症状，诸如吞咽困难、肢体无力、说话含糊不清、步态障碍、面部无力、呼吸变化和肌痉挛。通常，受试者表现一种或若干种症状，取决于疾病严重程度、疾病的临床阶段和个体受试者。确定哪些症状被认为指示ALS疾病完全在本领域技术人员的能力范围内。
如本文使用的，术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”等是指在需要治疗的受试者，即患有ALS或被诊断为患有ALS的受试者或者处于发展ALS的风险的受试者中，获得期望的药理作用和/或生理作用。“治疗”意指：
(a)延迟ALS的发展和/或进展；
(b)改善ALS的症状；
(c)阻抑ALS或其症状；和/或
(d)改善或延长生活质量。
提及“治疗(treatment)”、“治疗(treat)”或“治疗(treating)”并不一定意指治愈受试者或无限期地预防疾病进展。受试者可能最终遭受神经退行性疾病，然而，由于疾病或状况的发展被延迟，生活质量比不治疗延长了更长的时间段。
成功“治疗”的标志，包括任何客观或主观参数，诸如消除(abatement)；缓解(remission)；对患者来说更能忍受的记忆减退(diminishing of memory)或状况；退化(degeneration)或衰退(decline)或疾病恶化(worsening of the illness)的速度减缓；使恶化的终点不那么虚弱(less debilitating)；或者改善受试者的身体或心理健康。症状的治疗或改善可以基于客观或主观参数；包括身体检查、神经检查和/或精神评估的结果。
除非另有特别陈述，否则本文描述的每个实施方案在加以必要的改变后应用于每一种和所有实施方案。
2.用于评估ALS的进展速度的方法
本公开内容至少部分基于确定患有ALS的受试者的生物样品中一种或更多种生物标志物(即ALS进展生物标志物)的水平与受试者中ALS的进展速度相关来进行预测。例如，如本文展示的，与患有缓慢进展性ALS的受试者的生物样品中的相同生物标志物的水平相比，以及与健康受试者相比，患有快速进展性ALS的受试者的生物样品中的一种或更多种生物标志物的水平通常增加(或升高)。相比之下，与患有快速进展性ALS的受试者的生物样品中的相同生物标志物的水平相比，患有缓慢进展性ALS的受试者的生物样品中的一种或更多种生物标志物的水平通常减少(或降低)。根据被评估的生物样品，并且如本文教导的，与健康受试者的生物样品中的相同生物标志物的水平相比，患有缓慢进展性ALS的受试者的一种或更多种生物标志物的水平可以相同或相似或者增加。因此，本公开内容的方法包括通过确定生物样品中一种或更多种ALS进展生物标志物的水平，并基于生物样品中一种或更多种ALS进展生物标志物的水平，诸如相对于参考水平(其中参考水平指示或代表特定的进展速度)，确定进展速度，来评估受试者中ALS的进展速度的方法。本公开内容的方法还包括通过确定生物样品中一种或更多种ALS进展生物标志物的水平并相对于参考水平，基于生物样品中一种或更多种ALS进展生物标志物的水平确定受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS来确定受试者患有快速进展性ALS或缓慢进展性ALS的可能性的方法。通常，受试者已经被诊断为患有ALS或同时被诊断为患有ALS，例如，如本文描述的ALS进展生物标志物的评估可以与其他评估结合进行，以确认ALS的诊断。在另外的实施方案中，受试者正在经历ALS的治疗，并且对ALS的进展速度的评估用于评估治疗的疗效。
在本文描述的任何方法的一些实施方案中，增加或升高的水平是指与参考水平相比，通过标准的本领域已知方法诸如本文描述的那些方法检测到的生物标志物的水平的总体增加至少以下任一项或大约以下任一项：10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更大。在某些实施方案中，增加或升高的水平是指样品中生物标志物的水平/量的增加，其中该增加是参考水平的至少以下任一项或大约以下任一项：1.5×、1.75×、2×、3×、4×、5×、6×、7×、8×、9×、10×、25×、50×、75×或100×。
在本文描述的任何方法的一些实施方案中，减少或降低的水平是指与参考水平相比，通过标准的本领域已知方法诸如本文描述的那些方法检测到的生物标志物的水平总体降低至少以下任一项或大约以下任一项：10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更大。在某些实施方案中，减少或降低的水平是指样品中生物标志物的水平/量的减少，其中该减少是参考水平的至少以下任一项或大约以下任一项：0.9×、0.8×、0.7×、0.6×、0.5×、0.4×、0.3×、0.2×、0.1×、0.05×或0.01×。
生物标志物
预后ALS的进展速度的示例性ALS进展生物标志物是可溶性CD14(sCD14)。CD14是一种糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的膜糖蛋白，是一种髓样分化标志物，主要由单核细胞/巨噬细胞表达(尽管也发现在中性粒细胞上存在低水平)。CD14与Toll样受体4和MD-2一起充当LPS的共受体。单核细胞活化后，膜CD14(mCD14)从细胞表面裂解，并且sCD14被释放。单核细胞活化依赖的mCD14脱落产生绝大多数sCD14。
如本文展示的，来自患有ALS的受试者的生物样品中的sCD14的水平可以用于评估ALS的进展速度，并且可以用于确定该受试者患有快速进展性ALS或缓慢进展性ALS的可能性。sCD14的水平与疾病进展紧密相关，其中较低的sCD14水平与较慢的进展相关，并且较高的sCD14水平与较快的进展相关。因此，与患有缓慢进展性ALS的受试者和健康受试者相比，患有快速进展性ALS的受试者通常具有增加(或升高)的sCD14水平。与患有快速进展性ALS的受试者相比，患有缓慢进展性ALS的受试者通常具有减少(或降低)的sCD14水平。生物样品可以是例如血液、血清、血浆、尿液或CSF。
在生物样品是血液、血清、血浆或CSF的情况下，与健康受试者相比，患有缓慢进展性ALS的受试者可能具有相同或相似的sCD14水平，或者与健康受试者相比可能具有增加的sCD14水平。在生物样品是尿液的情况下，与健康受试者相比，患有缓慢进展性ALS的受试者通常具有增加(或升高)的sCD14水平，尽管在患有快速进展性ALS的受试者中未观察到水平增加(即，患有缓慢进展性ALS的受试者的尿液中sCD14的水平与健康个体相比通常增加，但与患有快速进展性ALS的受试者相比减少)。
因此，对来自患有ALS的受试者的生物样品中的sCD14水平的确定可以用于评估受试者中ALS的进展速度，和/或用于确定该受试者患有快速进展性ALS或缓慢进展性ALS的可能性。
脂多糖结合蛋白(LBP，本文也称为sLBP)是具有与ALS的进展速度相关的预后价值的另一种ALS进展生物标志物。脂多糖结合蛋白是一种结合LPS的可溶性急性期蛋白。CD14是LPS的共受体，但在LBP存在下仅能结合LPS。LBP由肝细胞和肠上皮细胞合成，并且LPS和LBP与CD14的结合复合物对于信号转导是必需的。
LBP的水平也与疾病进展紧密相关，其中较低的LBP水平与较慢的进展相关，并且较高的LBP水平与较快的进展相关。通常，与患有缓慢进展性ALS的受试者或健康受试者相比，患有快速进展性ALS的受试者中的LBP水平通常增加(或升高)。与患有快速进展性ALS的受试者相比，患有缓慢进展性ALS的受试者通常具有减少(或降低)的LBP水平，并且具有与健康受试者相同或相似的LBP水平或与健康受试者相比增加的LBP水平。因此，对来自患有ALS的受试者的生物样品中的LBP水平的确定可以用于评估受试者中ALS的进展速度，和/或用于确定该受试者患有快速进展性ALS或缓慢进展性ALS的可能性。
对ALS进展具有预后价值的另外的示例性生物标志物是C反应蛋白(CRP)。CRP由肝产生，并且在炎症存在时增加。与患有缓慢进展性ALS的受试者和健康受试者相比，患有快速进展性ALS的受试者通常具有增加(或升高)的CRP水平。与患有快速进展性ALS的受试者相比，患有缓慢进展性ALS的受试者通常在生物样品中具有减少(或降低)的CRP水平，并且具有与健康受试者相同或相似的CRP水平。因此，对来自患有ALS的受试者的生物样品中的CRP的水平的确定可以用于确定该受试者患有快速进展性ALS或缓慢进展性ALS的可能性。
根据本公开内容，可溶性肿瘤坏死因子受体I(sTNFR1)和可溶性肿瘤坏死因子受体II(sTNFRII)也可以用作ALS进展的预后生物标志物。TNFRI和TNFRII是结合TNF的细胞表面受体。这两种受体普遍表达，并且显示出结构相似的细胞外结构域，但通过不同的细胞内区域发出信号，其中TNFRI含有TNFRII中不存在的死亡结构域(death domain)。这两种TNFR通过其细胞外结构域在外泌体中的蛋白酶裂解或经由导致跨膜和胞质结构域丢失的mRNA转录物的选择性剪接，以可溶性蛋白的形式释放。
如本文展示的，与患有缓慢进展性ALS的受试者或健康受试者相比，患有快速进展性ALS的受试者中的sTNFRI和sTNFRII的水平通常增加(或升高)。与患有快速进展性ALS的受试者相比，患有缓慢进展性ALS的受试者通常具有减少(或降低)的sTNFRI和sTNFRII的水平，并且具有与健康受试者相同或相似的水平。因此，对来自患有ALS的受试者的生物样品中的TNFRI和/或TNFRII的水平的确定可以用于确定该受试者患有快速进展性ALS或缓慢进展性ALS的可能性。
在特定实施方案中，本公开内容的方法包括确定生物样品中至少sCD14的水平。在其他实施方案中，本公开内容的方法包括确定生物样品中至少LBP的水平。在特定实施方案中，测量sCD14和LBP二者的水平。任选地，这样的方法还可以包括确定至少一种其他生物标志物的水平，诸如CRP、TNFRI和TNFRII中的一种或更多种的水平。在可选的实施方案中，本公开内容的方法包括确定至少TNFRI或TNFRII的水平，任选地sCD14、LBP和CRP中的一种或更多种的水平。
可以在本公开内容的方法中评估的其他生物标志物包括，例如，促炎性细胞因子MIF(如本文展示的，与健康受试者相比，患有快速进展性ALS的受试者和患有缓慢进展性ALS的受试者二者中MIF通常均升高)、神经丝轻链(NFL；Tortelli等人，Eur JNeurol.2012；19(12)：1561-7；Gaiani等人JAMA Neurol.2017，74(5)：525-532)、miR-206、miR-143-3p和/或miR-374b-5p(Waller等人Neurobiol Aging 2017，55:123-131)、磷酸化神经丝重链(pNfH)(Boylan等人，J Neurochem.2009；111(5)：1182-91；Steinacker等人JNeurol Neurosurg Psychiatry.2016，87(1)：12-20)和/或p75神经营养素受体细胞外结构域(p75NTRECD；Shepheard等人Neurology.2017，88(12)：1137-1143)。如本文和先前描述的，这些另外的生物标志物可以提供对疾病负担和/或进展速度的进一步明确。
生物样品
生物样品可以包括从受试者提取、未处理、处理、稀释或浓缩的样品。用于评估本公开内容的一种或更多种生物标志物的合适生物样品包括但不限于血液、血清、血浆、尿液和CSF。在特定实施方案中，评估血清中一种或更多种ALS进展生物标志物的水平。在其他示例性实施方案中，评估尿液中一种或更多种ALS进展生物标志物的水平。用于获得生物样品的方法是本领域熟知的。
应当理解，在评估两种或更多种生物标志物的情况下，可以在同一生物样品中或在来自同一受试者的不同生物样品中评估这两种或更多种生物标志物。这包括在不同时间获取的相同类型的生物样品(例如，在不同时间获取的两个血清样品，尽管通常彼此在几分钟或几小时内获取)，以及不同类型的生物样品(例如，血清样品和尿液样品)。
生物标志物水平的评估
根据本公开内容确定一种或更多种生物标志物的水平包括诸如从数据库、计算机或者来自技术人员或实验室的通信或报告中获得一种或更多种生物标志物的先前测量的水平。根据本公开内容确定一种或更多种生物标志物的水平还包括测量一种或更多种生物标志物的水平。因此，在本公开内容的特定实施方案中，测量生物样品中一种或更多种生物标志物的水平，以便确定一种或更多种生物标志物的水平。
一种或更多种生物标志物的水平可以使用本领域技术人员已知的任何适当的技术或手段测量或评估。在特定实施方案中，生物标志物的水平，诸如sCD14、LBP、CRP、MIF、sTNFRI和/或sTNFRII的水平使用基于抗体的技术评估，所述基于抗体的技术的非限制性实例包括免疫测定，诸如酶联免疫吸附测定(ELISA)和放射免疫测定(RIA)。使用这样的测定形式的许多免疫测定技术是可得的，参见，例如，美国专利第4,016,043号、第4,424,279号和第4,018,653号。这些包括非竞争性类型的单位点和双位点二者或“夹心”测定，以及传统的竞争性结合测定。这些测定还包括标记的抗体与靶生物标志物的直接结合。用于测量sCD14、LBP、CRP、MIF、sTNFRI和/或sTNFRII的水平的ELISA是商购可得的和/或可以由本领域技术人员容易地使用对sCD14、LBP、CRP、MIF、sTNFRI和/或sTNFRII有特异性的已知抗体开发。
在特定实施方案中，当评估两种或更多种生物标志物的水平时，可以采用多重测定，诸如多重免疫测定(例如多重ELISA)。多重测定包括含有空间上寻址的抗原结合分子的阵列(通常被称为抗体阵列)，其可以促进多种蛋白的广泛并行分析。抗体阵列显示出具有所需的特异性和可接受的背景的特性。用于制备抗体阵列的多种方法已经被报道(参见，例如，Lopez等人，2003J.Chromatogr.B 787：19-27；Cahill，2000Trends in Biotechnology7：47-51；美国专利申请公布2002/0055186；美国专利申请公布2003/0003599；PCT公布WO03/062444；PCT公布WO 03/077851；PCT公布WO 02/59601；PCT公布WO 02/39120；PCT公布WO01/79849；PCT公布WO 99/39210)。
空间上不同的个体蛋白捕获剂通常附接至大体上为平面或弯曲(contoured)的支持物表面。常见的物理支持物包括载玻片、硅、微孔、硝酸纤维素或PVDF膜和磁珠以及其他微珠。
悬液中的颗粒也可以用作多重测定和阵列的基础，只要它们被编码用于鉴定；***包括颜色编码微珠(例如，从Luminex、Bio-Rad和Nanomics Biosystems可得)和半导体纳米晶体(例如，从Quantum Dots可得的QDotsTM)，以及条形码珠(从Smartbeads可得的UltraPlexTM)和多金属微米棒(从Surromed可得的NanobarcodesTM颗粒)。珠还可以被组装为半导体芯片上的平面阵列(例如，从LEAPS technology和BioArray Solutions可得)。当使用颗粒时，个体蛋白捕获剂通常附接至个体颗粒，以提供阵列的空间限定或间隔。然后可以在例如微量滴定板的孔中或在单独的试管中以区室化的方式单独但并行地测定颗粒。
蛋白捕获阵列的一个说明性实例是基于
Figure BDA0002885723820000291
的多重测定，这是一种基于珠的多重测定，其中珠用荧光染料内部染色以产生特定的光谱地址。生物分子(诸如抗体)可以缀合至珠的表面，以捕获感兴趣的生物标志物。然后，本领域技术人员已知的流式细胞术或其他合适成像技术可以用于珠的表征以及生物标志物的检测和定量。
用于检测和定量蛋白生物标志物的其他方法包括但不限于质谱(MS)方法，包括液相色谱-质谱(LC-MS)、实时直接分析质谱(DART MS)、SELDI-TOF和MALDI-TOF。
ALS进展的评估
本公开内容的方法可以用于评估受试者中ALS的可能进展速度，并且可以用于确定患有ALS的受试者是可能患有缓慢进展性ALS还是可能患有快速进展性ALS。这通过确定如以上和本文描述的一种或更多种ALS进展生物标志物的水平并任选地将该水平与合适参考水平进行比较来实现。如将理解的，与参考水平相比，生物标志物水平的增加(或升高)、减少(或降低)或相同或相似是否指示受试者可能患有缓慢进展性ALS或快速进展性ALS，或者指示受试者具有何种进展速度，取决于评估中使用的参考水平。
参考水平可以代表健康受试者、患有缓慢进展性ALS的受试者、患有快速进展性ALS的受试者或具有特定进展速度的受试者(例如，如通过AALS分/月测量的)。因此，与参考水平相比，生物标志物水平的增加、减少或无变化是否指示受试者可能患有缓慢进展性ALS或快速进展性ALS或具有特定进展速度，取决于参考水平是否代表健康受试者、患有缓慢进展性ALS的受试者、患有快速进展性ALS的受试者或具有特定进展速度的受试者。例如，如以上和本文描述的，与患有缓慢进展性ALS的受试者相比以及与健康受试者相比，患有快速进展性ALS的受试者通常在生物样品(例如血液、血清、血浆、CSF或尿液)中具有增加(或升高)的sCD14和/或LBP的水平。同样如本文展示的，sCD14和LBP的水平与ALS的进展速度紧密相关，其中sCD14和/或LBP的低水平与更低的进展速度(例如，如以AALS分/月测量的)相关，而不是sCD14和/或LBP的更高水平与之相关。
在通过测量一种或更多种ALS生物标志物的水平进行进展速度的评估的情况下，可以在生物标志物的水平与代表特定进展速度的参考水平(例如，由具有已知进展速度的ALS患者队列的标准曲线产生)之间进行直接比较，由此如果生物标志物的水平与参考水平相同或相似，受试者中ALS的进展速度被评估为与该参考水平所代表的进展速度相同或相似。
在其他实例中，与代表健康受试者或患有缓慢进展性ALS的受试者的参考水平相比，来自患有ALS的受试者的生物样品中的sCD14水平的增加可以指示患有ALS的受试者可能患有快速进展性ALS。如果参考水平代表患有快速进展性ALS的受试者，则与参考水平相同或相似的sCD14水平指示该受试者患有快速进展性ALS。相比之下，如本文描述的，与患有快速进展性ALS的受试者相比，患有缓慢进展性ALS的受试者通常具有减少(或降低)的sCD14水平。因此，与代表患有快速进展性ALS的受试者的参考水平相比，来自患有ALS的受试者的生物样品中的sCD14水平的减少指示患有ALS的受试者可能患有缓慢进展性ALS。如果参考水平代表健康受试者或患有缓慢进展性ALS的受试者，则生物样品中与参考水平相同或相似的sCD14水平可以指示患有ALS的受试者患有缓慢进展性ALS。
类似地，与代表健康受试者或患有缓慢进展性ALS的受试者的参考水平相比，来自患有ALS的受试者的生物样品中的LBP水平的增加可以指示患有LBP的受试者可能患有快速进展性ALS。如果参考水平代表患有快速进展性ALS的受试者，则与参考水平相同或相似的LBP水平指示该受试者患有快速进展性ALS。相比之下，如本文描述的，与患有快速进展性ALS的受试者相比，患有缓慢进展性ALS的受试者通常具有减少(或降低)的LBP水平。因此，与代表患有快速进展性ALS的受试者的参考水平相比，来自患有ALS的受试者的生物样品中的LBP水平的减少指示患有ALS的受试者可能患有缓慢进展性ALS。如果参考水平代表健康受试者或患有缓慢进展性ALS的受试者，则生物样品中与参考水平相同或相似的LBP水平可以指示患有ALS的受试者患有缓慢进展性ALS。
在特定实施方案中，参考水平是阈值，高于或低于该阈值指示受试者患有快速进展性ALS或缓慢进展性ALS。例如，参考水平可以是阈值，其中样品中等于或高于参考水平的生物标志物的水平指示受试者可能患有快速进展性ALS，并且样品中低于参考水平的生物标志物的水平指示受试者可能患有缓慢进展性ALS。在其他实例中，参考水平可以是阈值，其中样品中高于参考水平的生物标志物水平指示受试者可能患有快速进展性ALS，并且样品中等于或低于参考水平的生物标志物水平指示受试者可能患有缓慢进展性ALS。
可以选择提供预测受试者患有缓慢进展性ALS或快速进展性ALS的可能性的可接受能力的阈值。在说明性实例中，通过绘制变量(例如生物标志物水平)的值对比其在两个群体中的相对频率来计算受试者工作特征(ROC)曲线，例如其中第一群体被认为可能患有快速进展性ALS，而第二群体被认为可能患有缓慢进展性ALS。
对于任何特定生物标志物，具有特定ALS进展速度的受试者、患有或可能患有快速进展性ALS的受试者以及患有或可能患有缓慢进展性ALS的受试者的生物标志物水平的分布可能重叠。在这样的情况下，测试不可能以绝对(即100％)准确度绝对地区分具有特定进展速度的受试者与具有另一进展速度的受试者，或者绝对地区分可能患有快速进展性ALS的受试者与可能患有缓慢进展性ALS的受试者，并且重叠区域指示测试不能区分两个受试者的情况。可以选择阈值，高于该阈值(或低于该阈值，取决于生物标志物随风险如何改变)测试被认为是“阳性”，并且低于该阈值测试被认为是“阴性”。ROC曲线下面积(AUC)提供了C-统计量(C-statistic)，C-统计量是感知测量(perceived measurement)允许正确鉴定状况的概率的度量(参见，例如，Hanley等人，Radiology 143：29-36(1982))。本领域技术人员可以容易地确定适当的参考水平，包括阈值，用于根据本发明公开的方法使用。
3.试剂盒、固体支持物和组合物
本发明还扩展至用于确定一种或更多种生物标志物的水平的试剂盒。因此，这些试剂盒可以用于评估受试者中ALS的进展速度，或确定患有ALS的受试者患有缓慢进展性ALS或快速进展性ALS的可能性。这样的基于蛋白的检测试剂盒可以包含与以上和本文描述的一种或更多种生物标志物特异性结合的一种或更多种抗原结合分子(例如，抗体或其抗原结合片段)，以及任选地可以用作阳性对照的至少一种生物标志物。因此，在一些实施方案中，试剂盒包含对sCD14有特异性的抗原结合分子和对LBP有特异性的抗原结合分子。在另外的实施方案中，试剂盒包含对至少一种其他生物标志物诸如CRP、MIF、sTNFRI、sTNFRII、NFL、pNfH、p75NTRECD、miR-206、miR-143-3p和/或miR-374b-5p有特异性的抗原结合分子。因此，还考虑了使用对sCD14有特异性的抗原结合分子和/或使用对LBP有特异性的抗原结合分子用于制备用于评估受试者中ALS进展速度的试剂盒或者用于确定患有ALS的受试者患有缓慢进展性ALS或快速进展性ALS的可能性的试剂盒。在一些实例中，使用还包括使用对另一种生物标志物诸如CRP、MIF、sTNFRI、sTNFRII、NFL、pNfH、p75NTRECD、miR-206、miR-143-3p和/或miR-374b-5p有特异性的至少一种其他抗原结合分子的使用。对sCD14或其他生物标志物有特异性的抗原结合分子，诸如抗体及其抗原结合片段，是本领域熟知的，并且可以用于本文描述的试剂盒和用途中。
试剂盒还可以包含合适的检测剂，包括例如促进检测的缀合物和底物(例如用链霉抗生物素蛋白、生物素、辣根过氧化物酶等标记的抗体)。试剂盒还可以具有多种装置和另外的试剂和/或缓冲液，和/或用于使用该试剂盒定量一种或更多种生物标志物的水平的印刷说明材料。可以任选地与可检测标记物缔合的本文描述的试剂盒试剂，可以以以下的形式呈现：为了测量样品中生物标志物的水平被修改以用于与本文描述的技术一起使用的多于一个珠、多孔板、微阵列、载玻片、微流体卡(microfluidics card)或芯片。
适于包装试剂盒的组分的材料可以包括晶体、塑料(聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯等)、瓶、小瓶、纸、包装(envelope)等。此外，本公开内容的试剂盒可以包含用于同时、依次或单独使用包含在试剂盒中的不同组分的说明材料。说明材料可以呈印刷材料的形式或呈能够储存说明使得它们能够被受试者阅读的电子支持物的形式，诸如电子储存介质(磁盘、磁带等)、光学介质(CD-ROM、DVD)等。可选地或另外地，介质可以包含提供说明材料的互联网地址。
还提供了固体支持物和组合物，诸如用于在用于评估受试者中ALS的进展速度或用于确定一种或更多种生物标志物的水平的方法中使用，所述固体支持物和组合物包含与以上和本文描述的一种或更多种生物标志物特异性结合的一种或更多种抗原结合分子(例如抗体或其抗原结合片段)。在特定实施方案中，固体支持物和/或组合物包含对sCD14有特异性的抗原结合分子和/或对LBP有特异性的抗原结合分子。固体支持物和组合物还可以任选地包含对至少一种其他生物标志物诸如CRP、MIF、sTNFRI、sTNFRII、NFL、pNfH、p75NTRECD、miR-206、miR-143-3p和/或miR-374b-5p有特异性的抗原结合分子。示例性固体支持物包括但不限于多孔板、载玻片和芯片。在其他实施方案中，固体支持物是多于一个珠。如以上描述的，这些固体支持物可以用于多重免疫测定，以确定生物样品中两种或更多种生物标志物的水平，诸如sCD14和/或LBP的水平，以及任选的CRP、MIF、sTNFRI、sTNFRII、NFL、pNfH、p75NTRECD、miR-206、miR-143-3p和/或miR-374b-5p中的一种或更多种的水平。
4.受试者分层和治疗应用
本公开内容扩展至受试者分层，诸如用于临床试验或疾病管理或疾病治疗，以及还扩展至治疗应用。例如，可以鉴定和选择患有快速进展性ALS的受试者纳入临床试验，评估新疗法的疗效。将这样的受试者纳入临床试验是期望的，因为较短的疾病进展时间段可以产生疗法的疗效的更快速证据。在其他实施方案中，可以基于受试者是被鉴定为可能患有缓慢进展性ALS还是被鉴定为可能患有快速进展性ALS来设计适当或优化的治疗方案。
被描述为可用于治疗ALS的治疗方案包括施用一种或更多种抗神经退行性剂的那些治疗方案。这些剂包括但不限于利鲁唑
Figure BDA0002885723820000341
依达拉奉
Figure BDA0002885723820000342
CD14拮抗剂(例如CD14拮抗性抗体)，抗炎剂，例如补体途径阻断剂，诸如C5a受体激动剂(例如PMX205或依库珠单抗)(Lee J.D.等人，(2017)BritishJournal of Pharmacology,174(8))，阻断CD40与CD40配体之间相互作用的剂(包括与CD40和/或CD40配体特异性结合的抗体(例如AT-1502)，GM604和马赛替尼。
在一种实施方案中，治疗方案包括施用，诸如全身(例如静脉内)施用CD14拮抗性抗体。CD14拮抗性抗体可以与CD14(例如mCD14或sCD14)结合并且阻断DAMP或PAMP与CD14结合，和/或与CD14结合并且抑制或减少CD14激动剂介导的应答，该应答导致促炎性介导物(mediator)的产生，包括促炎性细胞因子的产生。在一些实施方案中，CD14拮抗性抗体抑制CD14激动剂(合适地是DAMP或PAMP)与CD14的结合，由此抑制或减少促炎性细胞因子的产生。在这种类型的说明性实例中，CD14拮抗性抗体选自3C10抗体、MEM-18抗体、4C1抗体(Adachi等人，1999.J.Endotoxin Res.5:139–146；Tasaka等人，2003.Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.；2003.29(2)：252-258)、28C5和23G4抗体和18E12抗体，3C10抗体结合包含在人类CD14的从氨基酸7至氨基酸14的区域的至少一部分中的表位(van Voohris等人,1983.J.Exp.Med.158:126-145；Juan等人，1995.J.Biol.Chem.270(29)：17237-17242)，MEM-18抗体结合包含在CD14的从氨基酸57至氨基酸64的区域的至少一部分中的表位(Bazil等人,1986.Eur.J.Immunol.16(12)：1583-1589；Juan等人，1995.J.Biol.Chem.270(10)：5219-5224)，28C5和23G4抗体抑制LPS的结合和阻抑促炎性细胞因子的产生，18E12抗体部分地抑制LPS的结合和阻抑促炎性细胞因子的产生(美国专利第5,820,858号、第6,444,206号和第7,326,569号)。在一些实施方案中，本公开内容的CD14拮抗性抗体抑制CD14与TLR诸如TLR4的结合，从而阻断CD14激动剂介导的应答，其说明性实例包括国际公布WO2002/42333中公开的F1024抗体。CD14拮抗性抗体可以是全长免疫球蛋白抗体或完整抗体的抗原结合片段，其代表性实例包括Fab片段、F(ab’)2片段、由VH和CH1结构域组成的Fd片段、由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段、由VH结构域组成的单结构域抗体(dAb)片段(Ward等人,1989.Nature 341:544-546)；以及分离的CDR。合适地，CD14拮抗性抗体是嵌合抗体、人源化抗体或人类抗体。
在一些实施方案中，CD14拮抗性抗体选自美国专利第5,820,858号中公开的抗体：
(1)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000351
并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000353
(2)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000354
并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000361
和
(3)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000363
和
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：
Figure BDA0002885723820000364
还考虑了包含以上抗体的VL和VH CDR序列的抗体，其代表性实施方案包括：
(1)抗体，所述抗体包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，所述抗体VL结构域包含L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASESVDSFGNSFMH[SEQ ID NO:7](3C10 L-CDR1)；L-CDR2包含序列RAANLES[SEQ ID NO:8](3C10 L-CDR2)；并且L-CDR3包含序列QQSYEDPWT[SEQ ID NO:9](3C10 L-CDR3)；和b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，所述抗体VH结构域包含H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列SYAMS[SEQ ID NO:10](3C10 H-CDR1)；H-CDR2包含序列SISSGGTTYYPDNVKG[SEQ ID NO:11](3C10 H-CDR2)；并且H-CDR3包含序列GYYDYHY[SEQ ID NO:12](3C10 H-CDR3)；
(2)抗体，所述抗体包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，所述抗体VL结构域包含L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASESVDSYVNSFLH[SEQ ID NO:13](28C5 L-CDR1)；L-CDR2包含序列RASNLQS[SEQ ID NO:14](28C5 L-CDR2)；并且L-CDR3包含序列QQSNEDPTT[SEQ ID NO:15](28C5 L-CDR3)；和b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，所述抗体VH结构域包含H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列SDSAWN[SEQ ID NO:16](28C5 H-CDR1)；H-CDR2包含序列YISYSGSTSYNPSLKS[SEQ ID NO:17](28C5 H-CDR2)；并且H-CDR3包含序列GLRFAY[SEQ ID NO:18](28C5 H-CDR3)；和
(3)抗体，所述抗体包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，所述抗体VL结构域包含L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASQDIKNYLN[SEQ ID NO:19](18E12L-CDR1)；L-CDR2包含序列YTSRLHS[SEQ ID NO:20](18E12 L-CDR2)；并且L-CDR3包含序列QRGDTLPWT[SEQ ID NO:21](18E12 L-CDR3)；和b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，所述抗体VH结构域包含H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列NYDIS[SEQ ID NO:22](18E12 H-CDR1)；H-CDR2包含序列VIWTSGGTNYNSAFMS[SEQ ID NO:23](18E12 H-CDR2)；并且H-CDR3包含序列GDGNFYLYNFDY[SEQ ID NO:24](18E12 H-CDR3)。
在一些实施方案中，CD14拮抗性抗体是人源化的。在这种类型的说明性实例中，人源化CD14拮抗性抗体合适地包含对应于CD14拮抗性抗体(例如，以上描述的CD14拮抗性抗体中的一种)的供体CDR集合和人类受体框架。人类受体框架可以在选自由以下组成的组的关键残基处包含相对于人类种系接受者框架的至少一个氨基酸取代：邻近CDR的残基；糖基化位点残基；罕见残基；典型残基；重链可变区和轻链可变区之间的接触残基；Vernier区内的残基；以及在Chothia定义的VH CDR1和Kabat定义的第一重链框架之间重叠的区域中的残基。用于产生人源化mAb的技术是本领域熟知的(参见，例如，Jones等人,1986.Nature321:522-525；Riechmann等人1988.Nature 332：323-329；Verhoeyen等人，1988.Science239：1534-1536；Carter等人，1992.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：4285-4289；Sandhu，JS.，1992.Crit.Rev.Biotech.12:437-462，和Singer等人，1993.J.Immunol.150:2844-2857)。可以通过将小鼠CDR从小鼠免疫球蛋白的重可变链和轻可变链转移至人类抗体的相应可变结构域中使嵌合单克隆抗体或小鼠单克隆抗体人源化。嵌合单克隆抗体中的小鼠框架区(FR)也被人类FR序列替代。由于单纯将小鼠CDR转移至人类FR中常常导致抗体亲和力的降低或甚至丧失，因此可能需要另外的修饰以便恢复鼠抗体的原始亲和力。这可以通过用其鼠对应物替代FR区中的一个或更多个人类残基，以获得对其表位具有良好结合亲和力的抗体来实现。参见，例如，Tempest等人(1991.Biotechnology 9:266-271)和Verhoeyen等人(1988同上)。通常，与其鼠对应物不同并且位于一个或更多个CDR氨基酸残基附近或与之接触的那些人类FR氨基酸残基是用于取代的候选物。
在一种实施方案中，CD14拮抗性抗体是IC14抗体(Axtelle等人,2001.J.Endotoxin Res.7:310-314；和美国专利申请第2006/0121574号，所述文献通过引用以其整体并入本文)或其抗原结合片段。IC14抗体是与人类CD14特异性结合的嵌合(鼠/人类)单克隆抗体。该抗体的鼠亲本是以上提到的28C5(参见，Leturcq等人的美国专利第5,820,858号、第6,444,206号和第7,326,569号，以及Leturcq等人,1996.J.Clin.Invest.98:1533-1538)。IC14抗体包含VL结构域和VH结构域，其中：
VL结构域包含氨基酸序列：
Figure BDA0002885723820000381
Figure BDA0002885723820000382
和
VH结构域包含氨基酸序列：
Figure BDA0002885723820000383
为了其加性活性，并且在某些情况下，为了其协同作用，两种或更多种抗神经退行性剂可以联合使用。当期望联合疗法时，可以单独、同时或依次施用剂。在一些实施方案中，这可以通过施用包含每种剂的单一组合物或药物制剂来实现，或者通过同时施用两种或更多种单独的组合物或制剂(每种包含一种或更多种剂)来实现。在其他实施方案中，用一种剂治疗可以在用其他剂的治疗前或后，间隔范围为从数分钟至数天。
在两种或更多种剂“联合”或“同时”施用至受试者的情况下，它们可以以单一组合物同时施用，或者以单独的组合物同时施用，或者以单独的组合物在单独的时间施用。
治疗方案也可以或可选地包括其他干预。这些包括药物和/或营养干预，诸如经由食物、片剂、口服溶液、贴剂或静脉内注射或其他肠胃外施用方式提供。在其他实例中，干预可以是机械的，诸如用于缓解呼吸困难的非侵入性通气。非侵入性通气可以包括，例如，负压通气(NPV)和/或非侵入性正压通气(NIPPV)，后者的实例是持续气道正压(CPAP)、双相气道正压(BiPAP)和平均容积保证压力支持(AVAPS)。本主题的方法还可以与其他疗法联合来实施，所述其他疗法包括但不限于物理疗法、言语疗法(speech therapy)、心理疗法和作业疗法(occupational therapy)。
抗神经退行性剂可以以一种或更多种“有效量”施用，以在受试者中实现预期目的，诸如减轻与ALS相关的症状。施用至患者的一种或更多种剂的剂量应足以在受试者中随时间获得有益的应答，诸如降低与神经退行性疾病相关的至少一种症状。在一些实施方案中，存在选自以下中的至少一种症状的降低：进行性肌萎缩、麻痹、痉挛、反射亢进、呼吸功能，以及其他症状诸如吞咽困难、四肢无力、构音障碍、说话含糊不清、步态障碍、面部无力和肌痉挛。
待被施用的一种或更多种剂的量或剂量频率可以取决于待治疗的受试者，包括年龄、性别、重量以及一般健康状况、疾病负担及疾病进展速度。在这方面，用于施用的一种或更多种剂的精确量取决于从业者的判断。本领域技术人员能够通过常规实验确定包含在药物组合物中以达到期望的治疗结果的本文描述的抗神经退行性剂的有效量。
在特定实施方案中，受试者暴露的治疗方案不包括施用一种或更多种抗神经退行性剂。这样的治疗方案可以替代地包括施用营养补充剂和/或开发适当的饮食、非侵入性通气、物理疗法、言语疗法、心理疗法和/或作业疗法。例如，在确定受试者可能患有缓慢进展性ALS的情况下，实施不包括施用一种或更多种神经退行性剂的治疗方案，或者不包括施用一种或更多种神经退行性剂持续至少特定时间段，诸如6个、12个、18个、24个、30个、36个月或更长时间的治疗方案。在其他实例中，当确定受试者可能患有快速进展性ALS时，受试者可以比患有缓慢进展性ALS的受试者更早地接受非侵入性通气。
为了可以容易地理解并实践本发明，现在将通过以下非限制性实施例的方式描述特定的优选实施方案。
实施例
实施例1
研究对象
标准方案批准、注册和患者同意。这是一项前瞻性队列研究，其中在休斯顿卫理公会医院(the Houston Methodist Hospital)的MDA/ALSA ALS诊所从患有ALS的患者和健康志愿者(HV；也称为健康对照、对照或NC)收集血清样品。经休斯顿卫理公会医院机构审查委员会(IRB)伦理批准后，从所有参与者获得书面知情同意。患有ALS的患者(2011年1月与2016年11月之间招募)由有经验的ALS神经病学家(neurologist)(SHA)根据修订的ElEscorial标准和Appel ALS(AALS)评分(范围：30–164，Haverkamp等人，1995Brain 118：707–719；Voustianiouk等人，2008Muscle Nerve.37(5)：668-72)进行诊断。患有ALS的患者中没有一个患有持续的感染性疾病(infectious diseases)。HV(2008年6月与2015年2月之间招募)通常是患者的配偶和朋友，并且排除标准包括任何神经状况、自身免疫性疾病或感染性疾病。由研究者收集从症状发作和诊断至基线评估和样品收集的临床信息。ALS患者与志愿者之间的人口统计学特征相似。
生物标志物的定量
通过ELISA对sCD14、LBP、CRP、MIF、sTNFRI和sTNFRII进行定量。
单核细胞分离
从ALS患者和正常对照的外周血中新鲜分离人类单核细胞。根据制造商的说明，使用人类泛单核细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec,San Diego,CA,USA)通过负选择获得高纯度的泛单核细胞。
流式细胞术
将分离的泛单核细胞用Fc阻断剂染色以避免非特异性结合。然后将分离的单核细胞和新鲜血液样品与抗人类CD14-V450抗体(eBioscience,San Diego,CA,USA)、抗人类CD16-FITC(eBioscience,San Diego,CA,USA)、抗人类HLA-DR-PerCP Cy5.5(eBioscience,San Diego,CA,USA)、抗人类TIM3-PE(eBioscience,San Diego,CA,USA)一起孵育。对外周血样品进行另一裂解步骤以去除红细胞。使用LIVE/
Figure BDA0002885723820000411
Fixable Blue Dead CellStain Kit(LIVE/
Figure BDA0002885723820000412
可固定蓝色死细胞染色试剂盒，Molecular Probes,Eugene,OR,USA)对死细胞进行染色。立即使用配置有355、488、405、561和633激光器的LSR IITM 13色流式细胞仪分析细胞。
统计学
使用ANOVA对多于2组进行比较，或使用学生t检验对两组进行比较。相关性使用SigmaStat软件中的Spearman等级顺序(Spearman Rank Order)完成。使用R统计软件包(Vienna,Austria；V.3.0.2)进行ROC曲线分析。数据表示为平均值±SE，并且小于0.05的p值被认为是显著的。
结果
来自患有ALS的患者和HV的PBMC和分离的泛单核细胞上的CD14和CD16表面标志物。
CD14和CD16主要由单核细胞/巨噬细胞表达。根据人类单核细胞的细胞表面表达，人类单核细胞可以分为三个不同的亚群：CD14+/CD16-、CD14+/CD16+和CD14-/低/CD16+单核细胞。使用流式细胞术，对来自患有ALS的患者和年龄匹配的HV的队列的PBMC上的CD14和CD16单核细胞表面标志物进行定量(图1A)。与HV相比，在所有患有ALS的患者的总PBMC样品中，CD14-/低/CD16+单核细胞的频率减少(p＝0.04)。然后将患有ALS的患者分为快速进展性患者以及缓慢进展性患者，快速进展性患者被定义为以大于或等于1.5Appel ALS(AALS评分***；Haverkamp等人，Brain 1995；118:707–719)分/月的速度进展的那些患者，缓慢进展性患者被定义为以小于1.5AALS分/月的速度进展(Henkel等人，EMBO Mol Med 2013；5:64-79)。快速进展性患者在其PBMC中具有降低的CD14-/低/CD16+单核细胞数(p＝0.016)。观察到CD14+/CD16-和CD14+/CD16+群体的频率没有差异。
在患有ALS的患者和年龄匹配的HV的第二队列中，使用负选择方案从PBMC分离和纯化泛单核细胞以避免可能的单核细胞活化，并且然后同样经历流式细胞分析；正选择或漫长的梯度分离可能活化单核细胞。与缓慢进展性患者(p<0.001)和HV(p<0.001)相比，快速进展性患者中纯化的单核细胞的CD14-/低/CD16+亚群的频率同样减少(图1B)。正如在PBMC样品中观察到的，注意到CD14+/CD16-和CD14+/CD16+群体的频率没有差异。
为了证实膜结合CD14(mCD14)的细胞表面表达确实减少，测量了PBMC样品上的CD14中值荧光强度(MFI)。结果展示，与HV相比，患有快速(p<0.01)进展性ALS和缓慢进展性(p<0.01)ALS的患者具有降低的在其CD14+/CD16-单核细胞表面上的CD14蛋白信号(图1C)。当分析分离和纯化的泛单核细胞数据时，与患有ALS的缓慢进展性患者(p<0.01)和HV(p<0.01)相比，来自患有快速进展性ALS的患者的CD14+/CD16-和CD14+/CD16+单核细胞上的细胞表面CD14 MFI减少(图1D)。这些数据表明，来自患者的单核细胞上的CD14-/低/CD16+单核细胞的频率和CD14的细胞表面表达通过从细胞表面主动脱落CD14或通过降低单核细胞表面上CD14的产生和随后的表达而降低。
CD14-/低/CD16+单核细胞与ALS疾病负担或进展速度之间的相关性
由于CD14-/低/CD16+单核细胞的频率已被展示在快速进展性患者中降低，进行斯皮尔曼相关系数分析以确定该单核细胞亚群的频率是否与患有ALS的患者中的疾病负担或疾病进展速度相关。基于AALS评分***，在患有ALS的患者中，CD14-/低/CD16+单核细胞的百分比与疾病负担呈负相关(p<0.0001，R＝0.584)(图2A)；随着疾病负担更大，这些单核细胞的频率降低。此外，基于AALS评分***，CD14-/低/CD16+单核细胞的百分比与疾病进展速度呈负相关(p<0.0001，R＝0.638)(图2B)；疾病进展速度越快，这些单核细胞的降低越大。
来自患有ALS的患者和HV的PBMC和分离的单核细胞中的CD14-/低/CD16+细胞中的CD14-/低/CD16+/TIM-3+亚群。
因为外周免疫活化现在是ALS病理学的公认的组成部分，并且因为TIM-3已经被显示当由先天性免疫细胞表达时促进促炎性应答(Anderson等人，Science 2007；318(5853):1141-1143；Han等人，Front Immunol 2013；4:449))，TIM-3表达被用作来源于患有ALS的患者的单核细胞促炎性能力的生物标志物。与来自缓慢进展性患者(p<0.001)和HV(p<0.001)的CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞的频率相比，患有ALS的快速进展性患者的PBMC中CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞的频率增加(图3A)。当分析分离和纯化的泛单核细胞的TIM-3在CD14-/低/CD16+上的表达时，与来自缓慢进展性患者(p<0.001)和HV(p<0.001)的CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞的频率相比，快速进展性患者中的CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞的频率同样增加(图3B)。在PBMC和泛单核细胞样品二者中，CD14+CD16-或CD14+CD16+单核细胞上TIM-3表达的频率在缓慢进展性或迅速进展性患者或HV中没有变化。CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞的百分比也与患有ALS的患者中的疾病进展速度和疾病负担呈正相关(分别地p＝0.005，R＝0.385；p＝0.009，R＝0.442)(图3C和图3D)。
血清可溶性CD14
在单核细胞活化后，mCD14从细胞表面裂解，并且可溶性CD14(sCD14)被释放；增加的血清sCD14水平被认为是单核细胞活化的生物标志物(Shive CL等人，AIDS.201；29(10):1263-1265)。因为CD14-/低/CD16+单核细胞的频率和CD14的单核细胞表面表达降低，所以检查了血清的sCD14水平。与来自HV的血清相比，患者血清sCD14水平升高(p＝0.0001)(图4A)。当进一步分为快速进展性和缓慢进展性患者(n＝37)时，与缓慢进展性患者(p<0.001)或HV(p<0.001)相比，仅来自快速进展性患者的血清中的sCD14升高(图4B)。缓慢进展性患者与HV之间的血清sCD14水平不存在差异(p＝0.948)。
还评估了这些患者的亚群中脑脊液(CSF)和尿液中的sCD14水平。CSF sCD14的绝对水平比这些患者的血清中测量的水平小10倍。与从HV获得的CSF相比，在患有ALS的患者的CSF中sCD14升高(p＝0.021)(图4C)。然而，当将患者分为快速进展性患者和缓慢进展性患者时，与缓慢进展性患者(p＝0.033)和HV患者(p＝0.002)相比，仅来自快速进展性患者的CSF样品具有增加的sCD14水平；患有ALS的缓慢进展性患者与HV之间不存在差异(p＝0.154)(图4D)。此外，CSF sCD14水平与血清sCD14水平呈正相关(p＝0.004，R＝0.619)(图4E)。
关于尿液中的sCD14水平，与HV相比，在患有ALS的患者中sCD14升高(p＝0.000003)(图4F)。当患者分为快速进展性患者和缓慢进展性患者时，与HV患者相比，来自快速进展性患者的尿液样品具有增加的sCD14水平(p＝0.0000006)，并且与缓慢进展性患者相比，快速进展性患者的尿液中也存在朝向增加的sCD14水平的趋势(p＝0.077)(图4G)。与HV相比，患有ALS的缓慢进展性患者的尿液sCD14水平也存在统计上显著的增加，尽管这种增加不如对快速进展性患者观察的明显(p＝0.022)(图4G)。
sCD14可以通过从细胞表面裂解或从细胞内的池(intracellular pool)中释放产生。为了确定CD14 mRNA是否也减少，对从患者的PBMC分离的mRNA进行qRT-PCR测定，并且与从HV分离的mRNA进行比较。在来自患者的PBMC中CD14 mRNA降低(p＝0.003)(图5A)。当mRNA样品也分为快速进展性患者和缓慢进展性患者时，与缓慢进展性患者(p<0.001)或HV(p<0.001)相比，仅快速进展性患者中的CD14 mRNA降低(图5B)。患有ALS的缓慢进展性患者与HV之间的CD14 mRNA不存在差异(p＝0.691)。
为了确定来自患有ALS的患者的增加的血清sCD14水平是否对这种神经退行性疾病是特异性的，测定了来自患有痴呆(阿尔茨海默病和额颞叶痴呆)、其他神经退行性疾病的患者的血清的sCD14浓度，并且与适当的年龄匹配的HV(n＝13)进行比较。与HV相比，来自患有痴呆的患者的血清sCD14水平不存在差异(p＝0.177)(图6A)。当患有痴呆的患者分为患有轻度阿尔茨海默病(轻度AD；n＝10)的患者、患有晚期阿尔茨海默病(AD；n＝13)的患者和患有额颞叶痴呆(FTD；n＝4)的患者时，不同组患者之间不存在差异(轻度AD对比AD，p＝0.689；轻度AD对比FTD，p＝0.894；并且AD对比FTD，p＝0.742)，并且在每组患有痴呆的患者与HV之间不存在差异(轻度AD对比HV，p＝0.569；AD对比HV，p＝0.118；并且FTD对比HV，p＝0.369)(图6B)。患有痴呆的患者及其年龄匹配的HV没有直接与患有ALS的患者及其年龄匹配的HV进行比较，因为患有痴呆的患者/HV比患有ALS的患者/HV年龄更大(数据未示出)。
为了确定来自患有ALS的患者的增加的血清sCD14水平是否不同于另外的神经***疾病，测定了来自患有慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP，n＝14)(一种自身免疫性神经***紊乱)的患者的血清的sCD14水平，并且与适当的年龄匹配的HV进行比较。患有CIDP的患者与HV之间的血清sCD14水平没有差异(p＝0.387)(图6C)。在该分析中，患有CIDP的患者及其年龄匹配的HV与患有ALS的患者及其相应的年龄匹配的对照的年龄没有差异，因此将患有CIDP的患者与患有ALS的患者进行比较(图6D)。此外，由于两组HV之间的年龄没有差异(p＝0.751)，因此比较了两组之间的血清sCD14水平，并且由于不存在差异(p＝0.555)，因此将两组HV合并(n＝34)。来自所有患有ALS的患者的血清sCD14水平与来自患有CIDP的患者的血清sCD14水平相比增加(p＝0.043)。然而，当患有ALS的患者分为快速进展性患者(n＝20)和缓慢进展性患者(n＝20)并且然后与患有CIDP的患者比较时，仅患有ALS的快速进展性患者与患有CIDP的患者有差异(p＝0.0002)；未发现患有ALS的缓慢进展性患者与患有CIDP的患者之间的差异(p＝0.637)。此外，患有CIDP的患者与合并的HV组之间不存在差异(p＝0.174)。
血清sCD14与ALS疾病负担之间的相关性
基于AALS评分***，血清sCD14水平与患有ALS的患者(n＝28)中的疾病负担增加相关。血清sCD14水平与患者抽血时的AALS评分呈正相关(p<0.0001，R＝0.684)(图7A)。此外，由于ALS Treg最近被显示是功能失调的(Henkel等人，EMBO Mol Med 2013；5:64-79；Beers等人，JCI Insight.2017；2(5):e89530)，测定了血清sCD14水平与功能失调的ALSTreg阻抑能力的相关性，并且发现与患者受损的Treg阻抑功能正相关(p＝0.009，R＝0.613)(图7B)。
sCD14预测目前进展速度
sCD14与疾病进展速度之间的相关性促进将sCD14血清水平评估为患者目前临床评估的疾病进展速度的潜在指示物。受试者工作特征(ROC)分析(图7C)用于评估来自这些患者的血清水平的准确度，以反映血清收集时快速疾病进展速度对比缓慢疾病进展速度(使用先前描述的两种进展，Henkel等人，EMBO Mol Med 2013；5：64-79)。血清sCD14水平是疾病进展速度的准确指示物。使用超过2.73μg/ml对照的ROC截止值作为阳性，血清sCD14水平在区分快速进展性患者与缓慢进展性患者方面具有90.9％的准确度、88％的灵敏度和90％的特异性。
早期研究评估了低FOXP3 mRNA水平的0.66倍截止值的ROC评分是否预示更糟糕的临床结果，并且报道了具有低于该截止值的FOXP3水平的患者中的35％依靠呼吸机或死亡，而具有高于截止值的FOXP3水平的患者中的仅13％依靠呼吸机或死亡。使用2.73μg/ml血清sCD14的ROC评分截止值，具有高于截止值的sCD14值的患有ALS的患者中的72％(21/29)死亡，而具有高于截止值的sCD14值的患者中仅28％(8/29)仍然存活(图8A)。ALS疾病负担的临床评分***揭示了，具有高于阈值的ROC评分的患者比具有低于阈值的评分的那些患者更快达到100AALS分(图8C)。作为疾病进展的度量，具有高于截止值的ROC评分的患者比具有低于截止值的评分的那些患者从诊断直至死亡生活了更短的时间段。使用斯皮尔曼相关系数分析使疾病负担和疾病进展(图8B和图8C)与患者血清sCD14水平相关。分析展示，血清sCD14的水平越高，患者达到100AALS分越快(图8D)，并且患者从诊断开始的生存时间越短(图8E)。
血清可溶性LBP浓度
进行测定以检测患者和HV的血清中可溶性脂多糖结合蛋白(LBP，也称为sLBP)的水平。与HV相比，所有患者的血清中的LBP增加(p<0.0001)(图9A)。当血清样品分为快速进展性患者和缓慢进展性患者时，与缓慢进展性患者(p<0.0001)或HV(p<0.0001)相比，仅快速进展性患者中的LBP升高(图9B)。患有ALS的缓慢进展性患者与HV之间的血清LBP不存在差异(p＝0.208)。有趣的是，虽然在患有ALS的患者中血清LPS/内毒素呈上升趋势，但该水平在与来自HV的血清中的水平相比时未达到显著性(数据未示出)。
在这些患者的亚组(n＝28)中，血清LBP与患者的疾病负担呈正相关(p＝0.001，R＝0.587)(图9C)；随着LBP增加，患者的健康状况存在恶化，如由增加的AALS评分确定的。由于血清sCD14与疾病负担呈正相关，因此这些患者中的LBP与sCD14之间存在正相关性(p＝0.001，R＝0.584)(图9D)；因此，随着LBP增加，也存在sCD14的伴随增加。
C反应蛋白
测量患者和HV的血清中的CRP。与HV相比，所有患者的血清中的CRP升高(p＝0.003)(图10A)，但与缓慢进展性患者(p<0.048)或HV(p＝0.0008)相比，仅在快速进展性患者中升高(图10B)。患有ALS的缓慢进展性患者与HV之间的血清CRP不存在差异(p＝0.072)。
血清MIF
测量了患者的血清中的巨噬细胞移动抑制因子(MIF)。与HV相比，所有患者的血清中的MIF升高(p<0.0001)(图11A)。当将血清样品分为快速进展性患者和缓慢进展性患者时，与HV相比，快速进展性患者(p<0.0001)和缓慢进展性患者(p<0.0001)二者中的MIF均升高(图11B)；患有ALS的快速进展性患者与患有ALS的缓慢进展性患者中不存在差异(p<0.102)。
血清可溶性TNFR1和TNFR2
肿瘤坏死因子(TNF)由单核细胞/巨噬细胞以及其他细胞产生，并且是一种促炎性细胞因子，经由两种细胞表面受体TNFRI和TNFRII介导其多效性活性，TNFRI和TNFRII通常与细胞表面结合。测量了患者的血清中的可溶性TNFRII和TNFRII。与HV相比，患者中的这些受体的血清水平增加(TNFRI，p＝0.008；TNFRII，p＝0.003)(图12A和图12B)。当分为快速进展性患者和缓慢进展性患者时，与缓慢进展性患者(TNFRI，p<0.0001；TNFRII，p<0.0001)或HV(TNFRI，p<0.0001；TNFRII，p<0.0001)相比，仅快速进展性患者中的可溶性TNFRI和TNFRII水平升高(图12C和图12D)。缓慢进展性患者与HV之间的血清可溶性TNFRI和TNFRII水平不存在差异(TNFRI，p＝0.373；TNFRII，p＝0.668)。
由于可溶性TNFRI和TNFRII水平二者在患者的血清中均升高，并且由于可溶性TNFRI和TNFRII水平仅在快速进展性ALS患者中升高，因此使用斯皮尔曼相关系数分析来确定这两种受体的血清水平之间是否存在相关性。该分析展示，在这些患者中，血清可溶性TNFRI与TNFRII之间存在正相关性(p<0.0001，R＝0.851)。因此，随着可溶性TNFRI水平增加，可溶性TNFRII水平也增加。然而，在HV的血清中，TNFRI与TNFRII水平之间不存在正相关性(p＝0.98，R＝0.01)。
讨论
现在公认炎症在ALS的病理生物学中起着重要作用(Appel等人，TrendsImmunol.2010；31(1):7-17；Appel等人，Acta Myol.2011；30(1):4-8)。适应性免疫***和先天性免疫***二者的应答在调控疾病进展和生存率方面起着关键且相互依赖的作用。Henkel等人(EMBO Mol Med 2013；5：64-79)报道了Treg对患有ALS的患者具有保护作用，这是一种适应性免疫应答。降低的Treg数和FOXP3表达与更快速的疾病进展相关。Treg和FOXP3表达的低循环水平与增加的3.5年后死亡率相关，而Treg和FOXP3表达的较高水平与相同时间段内较低的死亡率相关。另一项使用深度RNA测序和qRT-PCR技术的研究展示，从患有ALS的患者分离的单核细胞表达与促炎性免疫应答(一种先天性免疫应答)相关的独特基因谱(Zhao等人，Neurol.2017；74(6)：677-685)。前10个上调的差异表达基因中有9个参与炎症。研究显示，患有ALS的患者中的CD14-/低/CD16+单核细胞减少，并且单核细胞上的CD14的细胞表面表达减少。与这些观察一致，发现快速进展性患者中的血清sCD14水平增加，并且准确预测该组患者中生存时间减少。这是展示血清sCD14水平可以用作疾病进展的生物标志物的首次报道。患者的血清中可溶性LBP、MIF、CRP以及TNFRI和TNFRII也升高。这些因素的共同谱(collective profile)对于ALS是不同的，并且进一步区分疾病的进展速度。此外，共同谱更有可能增加ALS的特异性和灵敏度。因此，本研究为患有ALS的患者中的促炎性先天性免疫应答提供了确认的证据以及另外的证据；这种应答与增加的疾病负担和快速疾病发展相关。这种促炎性环境进一步导致患者的临床状态恶化。
CD14是一种糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的膜糖蛋白，是一种髓样分化标志物，主要由单核细胞/巨噬细胞表达(尽管发现在中性粒细胞中存在低水平)，并且与Toll样受体4和MD-2一起充当LPS的共受体。CD16也由单核细胞/巨噬细胞表达，并且被鉴定为Fc受体。基于CD14和CD16细胞表面表达，人类单核细胞可以分为三个不同的亚群：典型的CD14+/CD16-单核细胞、中间CD14+/CD16+单核细胞和非典型CD14-/低/CD16+单核细胞。三者中最主要的是CD14+/CD16-单核细胞，并且它们占总单核细胞群体的约80％，而后两个亚群占总单核细胞的剩余群体。该报道展示，来自患有ALS的患者的总PBMC中的非典型单核细胞CD14-/低/CD16+单核细胞减少；来自快速进展性患者的PBMC和分离的泛单核细胞二者中的该亚群均减少。此外，如由MFI示出的，CD14+/CD16-和CD14+/CD16+单核细胞亚群上的CD14的细胞表面表达也减少。减少的CD14的细胞表面表达与单核细胞活化相关；CD14在单核细胞活化时作为sCD14脱落。因此，减少的CD14-/低/CD16+单核细胞数以及CD14+/CD16-和CD14+/CD16+单核细胞上减少的mCD14的细胞表面表达，为这些患者中的促炎性先天性免疫应答提供了另外的证据。
免疫应答期间TIM-3的调控表明了不同的适应性和先天性免疫功能(Han等人，Front Immunol 2013；4：449)。在一方面，已经将TIM-3鉴定为通过诱导凋亡对T细胞应答进行负调控的负调控因子；TIM-3终止适应性免疫应答中的Th1免疫(Hastings，等人，Eur JImmunol 2009；39(9)：2492–2501)。在另一方面，研究显示，这种相同的TIM-3分子也在先天性免疫细胞上表达，并且与TLR信号传导途径协同作用，以促进促炎性应答；TIM3被认为是单核细胞和巨噬细胞上的促炎性标志物(Anderson等人，Science 2007；318(5853)：1141-1143)。与来自患有ALS的患者的非典型CD14-/低/CD16+单核细胞数的减少相比，在来自快速进展性患者的PBMC和分离的泛单核细胞二者中CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞的频率增加。这是这些患者中促炎性外周免疫环境的另一个指示物。
单核细胞活化依赖的mCD14脱落产生绝大多数sCD14。此外，增加的mCD14表达或绕过GPI连接的直接CD14分泌可能导致sCD14变化。LPS是一种有效的单核细胞活化剂，与CD14结合并且诱导细胞释放sCD14，但其他TLR配体，诸如鞭毛蛋白和CpG寡脱氧核苷酸，也诱导sCD14的释放(Marcos等人，Respir Res.2010；11：32；Shive等人，AIDS.201；29(10)：1263-1265)。近年来，许多以sCD14为重点的临床研究揭示了，在感染性疾病诸如脓毒症和HIV中，sCD14水平升高并且与疾病严重程度或更差的预后相关(Shive等人，AIDS.201；29(10)：1263-1265)。另一项研究报道了患有冠状动脉疾病(CAD)的患者尿液中sCD14升高，并且这些水平与CAD的严重程度相关(Lee等人，PLoS One.2015；10(2)：e0117169)。本研究显示，患有ALS的患者的血清中的sCD14水平增加，但当分为快速进展性患者和缓慢进展性患者时，仅快速进展性患者的血清中的sCD14水平升高。此外，在患者的CSF中sCD14水平也升高，但同样，当分为具有不同进展速度的患者时，仅快速进展性患者的CSF中的sCD14水平升高。因此，考虑到存在减少的CD14-/低/CD16+单核细胞数以及CD14+/CD16-和CD14+/CD16+单核细胞上减少的mCD14的细胞表面表达的证据，升高的血清sCD14水平最有可能是由于mCD14从单核细胞的活化依赖性裂解和脱落。由于已知实质小胶质细胞也表达mCD14，升高的CSFsCD14水平的可能来源除了该区室(compartment)中mCD14从活化的单核细胞/巨噬细胞脱落之外可能是由于mCD14从活化的小胶质细胞的脱落。因此，这些数据同样支持患有ALS的患者并且特别是患有快速进展性疾病的患者中的促炎性单核细胞应答的概念。
如先前提及的，早期的研究显示单核细胞通过蛋白酶裂解mCD14产生sCD14。然而，也已知人类单核细胞通过蛋白酶非依赖性机制产生sCD14；sCD14从CD14的细胞内池中释放。为了确定CD14是否在PBMC中活跃地产生并因此增加CD14的细胞内池及其可能作为sCD14从这些细胞中释放，通过qRT-PCR测定PBMC的CD14 mRNA水平。来自患者的PBMC中的CD14 mRNA降低，但当分为快速进展性患者和缓慢进展性患者时，仅快速进展性患者中的CD14 mRNA降低。因此，当快速进展性患者的血清中的sCD14增加时，来自这些患者的PBMC的CD14 mRNA减少，表明增加的血清sCD14水平是由于从单核细胞表面裂解，而不是由于从CD14的细胞内池中释放sCD14。这些数据，在与先前的证据一起考虑时，同样表明升高的血清sCD14水平由单核细胞的活化介导。
这是显示神经退行性疾病中的血清sCD14升高的首次报道。同样，也分别在其他神经***疾病诸如患有痴呆(阿尔茨海默病和额颞叶痴呆)或CIDP(另一种神经退行性疾病和自身免疫性神经***疾病)的患者中评估了血清sCD14水平。最近已经展示，增加的炎症与AD症状的恶化相关。髓样细胞2(TREM2)上表达的触发受体是在单核吞噬细胞诸如小胶质细胞、破骨细胞和巨噬细胞上表达的含V型免疫球蛋白(Ig)结构域的跨膜蛋白(Colonna和Wang,Nat Rev Neurosci.2016Apr；17(4)：201-7)。最近的若干项研究描述了淀粉样变性的小鼠模型中依赖于TREM2的表型，表明TREM2在调控AD病理中的先天性免疫应答中起重要作用。此外，可溶性TREM2片段的CSF水平升高，隐含TREM2参与与神经元损伤和临床痴呆发作一致的炎性途径。CIDP由破坏神经髓鞘并且通常参与运动神经功能失调和感觉神经功能失调两者的炎症引起。CIPD有时被认为是急性炎性脱髓鞘多发性神经病吉兰-巴雷综合征的慢性形式。这种外周神经炎性应答的主要细胞组分是神经外膜和神经内膜T淋巴细胞和巨噬细胞，其中巨噬细胞介导髓鞘脱离(myelin stripping)。因此，这两种神经疾病均涉及单核细胞/巨噬细胞/小胶质细胞，其中mCD14可能在这些细胞活化时脱落。评估这些另外的患者的血清sCD14水平，以便可能将ALS与这些其他的神经疾病区分开。未发现来自患有痴呆或CIPD的患者的血清sCD14水平的差异。此外，当患有痴呆的患者分为患有轻度AD、AD或FTD的患者时，未发现三组不同的患者中血清sCD14的差异。因此，对于ALS，升高的血清sCD14水平是不同的，并且将ALS与其他两种神经疾病区分开。这些数据进一步表明，与其他神经***疾病相比，ALS中先天性外周免疫应答与增强的单核细胞活化相关，其中mCD14随后脱落。
先前的研究显示，在患有ALS的患者和ALS的动物模型二者中，随着疾病进展和疾病负担增加，存在先天性免疫促炎性响应的伴随增加(Beers等人，Proc Natl Acad Sci US A.2008；105(40)：15558-63，Beers等人Brain 2011；134：1293–1314，Beers等人BrainBehav Immun.2011；25(5)：1025-35；Henkel等人，EMBO Mol Med 2013；5：64-79；Beers等人，JCI Insight.2017；2(5)：e89530)。几十年来已经熟知，患有ALS的患者和动物二者的CNS中均存在促炎性先天性小胶质细胞应答。然而，先天性免疫在外周神经***(PNS)中的作用尚未被充分确定。早期的研究表征了突变体转基因ALS小鼠中整个PNS中CD169/CD68/Iba1+巨噬细胞的活化(Chiu等人，Proc Natl Acad Sci U S A.2009；106(49)：20960-5)。巨噬细胞活化发生在症状发生前，并且在症状发作后从神经束内的局灶性阵列(focalarray)扩展至整个组织分布。这项研究揭示了在这些小鼠中，外周神经中的进行性先天性免疫应答与脊髓免疫活化分开且不同。更近的研究展示，在ALS转基因小鼠中，退化的外周神经纤维周围存在单核细胞/巨噬细胞，这是进展为运动无力的临床迹象发作的早期事件(Lincecum等人，Nat Genet.2010；42(5)：392-9，Kano等人，Neurology.2012；78(11)：833-5)。此外，在症状发生前ALS小鼠的外周神经中观察到CD68+巨噬细胞，并且这些炎性细胞仅在明显的去神经(denervation)后才浸润。这项新近的研究还展示，随着CD68+巨噬细胞的出现，CCL2的表达增加，表明CCL2可能由施万细胞(Schwann cells)分泌，可以调控这些细胞在这些周围神经中的浸润。对于本研究更为重要的是Murdock等人(JAMA Neurol.2017；74(12)：1446-1454)最近评估了患有ALS的快速进展性患者中的外周炎性应答，并且报道了总白细胞、中性粒细胞、CD16+和CD16-单核细胞以及自然杀伤细胞的数目增加。还观察到CD11b+髓样细胞的急性瞬时增加，并且免疫细胞数的这些早期变化与疾病进展速度呈正相关。虽然本研究没有计算单核细胞的绝对数，但它确实展示了来自快速进展性患者的PBMC和分离的泛单核细胞二者中的CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞均增加，并且这种CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞的增加百分比与疾病进展速度呈正相关；CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞的百分比越大，疾病进展越快。此外，本研究还显示了CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞的百分比与AALS评分之间的正相关性；CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞的百分比越大，疾病负担的增加越大。因此，在ALS疾病进展期间，除了CNS和该区室中的免疫***之间的串扰(cross-talk)之外，PNS和整个PNS中的先天性免疫***之间也发生串扰(Henkel等人，JNeuroimmune Pharmacol.2009；4(4)：389-98；Appel等人，Acta Myol.2011；30(1)：4-8；Zhao等人，Neurol.2017；74(6)：677-685；Hooten等人，Neurotherapeutics.2015；12(2)：364-75)。
在ALS转基因小鼠模型中，Treg的缺乏加剧炎性过程，导致加速的运动神经元死亡、更快速的疾病进展和缩短的生存期(Beers等人，Brain 2011；134：1293–1314)。在患有ALS的患者中，快速进展性患者中的Treg数和FOXP3 mRNA表达减少，并且ALS Treg在阻抑Tresp增殖方面不太有效；尽管快速进展性患者和缓慢进展性患者二者均具有功能失调的Treg，但临床评估的疾病负担越大或患者进展越快速，Treg功能失调越大(Henkel等人，EMBO Mol Med 2013；5：64-79；Beers等人，JCI Insight.2017；2(5)：e89530)。此外，并且如已经提及的，早期的研究报道了，0.66倍截止值的ROC评分准确预测低FOXP3 mRNA水平与更糟糕的临床结果相关，并且具有低于该截止值的FOXP3水平的患者中的35％依靠呼吸机或死亡，而具有高于截止值的FOXP3水平的患者中的仅13％依靠呼吸机或死亡。使用相同的ROC分析来区分血清收集时具有快速疾病进展速度或缓慢疾病进展速度的患者，血清sCD14水平是疾病进展速度的准确指示物；使用2.73μg/ml对照的ROC截止值作为阳性，血清sCD14水平以90.9％的准确度、88％的灵敏度和90％的特异性准确区分患有快速进展性疾病的患者和缓慢进展性患者。此外，并且与早期的报道(Henkel等人，EMBO Mol Med 2013；5：64-79)相比之下，这些ROC分析确定了，具有高于截止值的sCD14值的患者中的72％死亡，而具有高于截止值的sCD14值的患者中的仅28％在该4年研究结束时仍然存活。此外，具有高于ROC截止值的血清sCD14值的患者中的70％死亡，而具有低于截止值的sCD14值的患者中的仅30％死亡。这些数据展示，血清中sCD14的量越大，患者达到100分的AALS评分越快，并且从诊断进展至死亡越快。因此，这些数据不仅表明增加的CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞的百分比与增加的疾病进展速度和增加的疾病负担相关，而且增加的血清sCD14水平也是增加的疾病进展速度和增加的疾病负担的直接生物标志物。同样，这表明增加的血清mCD14水平指示单核细胞活化的mCD14脱落，是增强的先天性免疫应答的直接量度。
CD14在生理和病理情况中的精确作用未被充分确定(Bas等人，J Immunol.2004；172(7)：4470-9)。血清sCD14是由于mCD14从单核细胞裂解和脱落。在单核细胞表面，mCD14和LBP(一种急性期蛋白(APP))以逐步的方式与LPS相互作用，形成允许单核细胞检测LPS的存在的高亲和力三分子复合物。该复合物继而与Toll样受体4(TLR4)和MD-2相互作用，用于下游信号传导(Zhou等人，2016)。相比之下，描述了sCD14的两种相反的功能。它可以通过与mCD14竞争LPS结合来降低内毒素诱导的活性，或者它可以介导LPS诱导的不表达CD14的内皮细胞、上皮细胞和平滑肌细胞的活化。sCD14也可能是APP，因为除了蛋白酶介导的从单核细胞脱落之外，sCD14由肝细胞产生，肝细胞代表APP的主要来源(Pan等人，J BiolChem.2000；275(46)：36430-5；Bas等人，J Immunol.2004；172(7)：4470-9)。有趣的是，肝细胞也是LBP的主要来源。因此，还评估了患有ALS的患者的血清中的LBP水平。所有患者的血清中的LBP均增加，但当样品分为快速进展性患者和缓慢进展性患者时，仅快速进展性患者的血清中的LBP升高，如关于sCD14所示出的那样。此外，正如关于sCD14同样示出的那样，血清LBP与患者的疾病负担呈正相关。更有趣的是，这些患者中的LBP与sCD14之间存在正相关性；随着sCD14增加，也存在LBP的伴随增加。与先前的报道(Zhang等人，2009)相比之下，患有ALS的患者的血清中游离内毒素/LPS没有增加的一个可能原因是LPS结合在sCD14/LBP复合物中，然后该复合物可能与不表达mCD14的细胞(诸如内皮细胞或上皮细胞)的表面上的TLR4相互作用，并且因此加剧促炎性应答。
CRP是由促炎性细胞因子调控并且由肝细胞分泌的典型APP。CRP对若干类型的肿瘤、心血管疾病和风湿性疾病具有预后价值。早期的报道确定，在患有ALS的患者中，宽范围的CRP水平与临床评估的障碍之间存在正相关性(Keizman等人，Acta Neurol Scand.2009；119(6)：383-9)。最近一项针对患有ALS的患者的更大队列的研究也发现，这些患者中的血清CRP升高，并且具有高CRP水平的患者比具有低CRP水平的患者更快速地进展(Lunetta等人，JAMA Neurol.2017；74(6)：660-667)。由于sCD14和LBP(二者都是APP)升高，并且由于在先前研究中CRP升高，因此在本研究中评估了CRP。所有患者的血清中的CRP均升高，但当患者分为快速进展性患者和缓慢进展性患者时，仅快速进展性患者中的CRP升高。因此，这些数据确认了早期的两项报道，并且可能表明肝不是这种疾病中的促炎性应答的公认参与者和调节者。
促炎性细胞因子MIF是先天性和适应性免疫应答的基础；MIF是全身炎性应答的关键介导物。MIF被表征为是糖皮质激素抗炎性活性的生理反调控物。在对多种刺激物的应答中，MIF从预先形成的细胞内池中释放。MIF促进产生许多促炎性部分，并且是正常白细胞流入发炎组织所必需的。在许多感染性疾病和炎性疾病中检测到升高的血清MIF水平，并且如关于sCD14示出的那样，在脓毒症中MIF水平升高。发现在所有患有ALS的患者的血清中MIF均升高，但与sCD14、LBP和CRP不同，在快速进展性患者和缓慢进展性患者二者中MIF均升高。因此，这些数据表明MIF可能是ALS中发生促炎性应答的早期指示物，并且MIF水平随着进展速度的增加而增加。
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)由单核细胞/巨噬细胞以及其他细胞产生，并且是经由两种细胞表面受体TNFRI和TNFRII介导其多效性活性的促炎性细胞因子。这两种受体普遍表达，并且显示出结构相似的细胞外结构域，但通过不同的细胞内区域发出信号，其中TNFRI含有TNFRII中不存在的死亡结构域。这两种TNFR通过其细胞外结构域在外泌体中的蛋白酶裂解或经由导致跨膜和胞质结构域丢失的mRNA转录物的选择性剪接，以可溶性蛋白的形式释放。可溶性TNFR可以充当TNF拮抗剂，并且可以抑制TNF介导的促炎性作用。然而，可溶性受体可以稳定和保存循环的可溶性TNF，并且因此发挥作为TNF激动剂的功能。因此，可溶性TNFR可能作为TNF-α的生物活性调节物发挥作用。TNFRI主要促进炎性信号传导途径，而TNFRII介导免疫调节功能并促进组织稳态和再生。在多发性硬化(MS)中，存在与易感性相关的TNFRI多态性(Gregory等人，Nature 2012，488，508–511)。这种多态性的功能是产生新的分泌型的并结合TNF-α的TNFRI变体。在MS患者中，在疾病早期，发现血液中过多的TNF受体脱落，表明TNF的生物利用度较低。若干项研究报道，TNFRII优先在人类和小鼠Treg的最大阻抑亚群上表达，并且TNFRII的活化对于Treg的增殖和功能是重要的(Chen等人，J.Immunol.2007，179，154–161；Chen等人J.Immunol.2008，180，6467–6471、Chen等人，Curr.Dir.Autoimmun.2010，11，119–134、Chen等人J.Immunol.2013，190,1076–1084；Heinrich等人，Antibodies 2015；4：34-47)。在本研究中，所有患有ALS的患者的血清中的两种TNFR均升高，但正如在整个本研究中发现的，当患者分为快速进展性患者和缓慢进展性患者时，仅快速进展性患者中的受体升高。Poloni等人(Neurosci Lett.2000；287(3)：211-4)报道了患有ALS的患者血清中的TNF-α和可溶性受体水平升高。有趣的是，患者与HV之间的TNF-α的生物活性形式(对应于未结合的三聚体分子)是相似的。新近的一项研究还发现，患有ALS的患者的较小队列的血清中的TNF-α水平升高(Babu等人，Neurochem Res2008；33：1145-1149)。关于这两项早期研究和本研究，这些数据表明患者中的双重免疫应答。首先，由于已知的炎性应答与ALS的病理生物学相关，这两种受体脱落、充当TNF拮抗剂，并且抑制TNF-α的促炎性作用。考虑到这些数据和最近的报道，即从快速进展性患者中分离的Treg是高度功能失调的，并且来自缓慢进展性患者中的Treg的功能失调程度较小，从Treg表面脱落TNFRII，因此通过TNFRII阻断TNF-α信号传导，可以抑制这些细胞的阻抑功能(Beers等人，JCI Insight.2017；2(5)：e89530)。其次，升高的血清TNFR可能结合TNF-α，并且充当未来TNF-α释放及其随后进行促炎性应答的储库。
已很好地记载了在患有ALS的患者的CNS组织中存在小胶质细胞指导的促炎性应答(Turner等人，Neurobiol Dis 2004；5：601–609；Appel等人，Acta Myol.2011；30(1)：4-8；Corcia等人，PLoS One 2012；7：e52941；Brites和Vaz，Front Cell Neurosci.2014；8:117)。因此，本报道中展示的数据支持以下概念：在这些患者(特别是患有快速进展性疾病的那些患者)的外周循环中存在持续的单核细胞指导的促炎性环境(Zhao等人，Neurol.2017；74(6)：677-685)。这些患者中减少的CD14-/低/CD16+单核细胞数、CD14+/CD16-和CD14+/CD16+单核细胞上减少的mCD14细胞表面表达以及增加的CD14-/低/CD16+/TIM-3+单核细胞百分比符合这一概念。更重要的是，发现快速进展性患者中的血清sCD14水平增加，并且准确预测生存时间减少。包括了患者血清中的可溶性LBP、MIF、CRP以及TNFRI和TNFRII也升高的另外的证据，这些因子和sCD14构成了对ALS而言不同的共同免疫生物标志物谱，并且可能增加该疾病的生物标志物特异性和灵敏度。
实施例2
第二项研究使用更大的患者队列来进行，以确认以上关于sCD14和LBP充当ALS进展速度的生物标志物的能力的发现。在本研究中，对100名ALS患者和60名健康志愿者(HV)进行基本如以上描述的评估，以确定血清中sCD14和LBP的水平。
患有ALS的患者的进展速度由Appel ALS(AALS)评分***计算(Haverkamp等人，1995Brain 118：707–719；Voustianiouk等人，2008Muscle Nerve.37(5)：668-72)。AALS评分范围为30分(HV)至164分(严重ALS)。为了确定进展速度，将患者最后一次到医院就诊时的AALS评分从他们第一次到医院就诊时的评分中减去，并且然后将该数值除以两次就诊之间的月份数。等于或大于1.5AALS分/月的评分代表快速(或快)进展性患者，并且小于1.5AALS分/月的评分代表缓慢进展性患者。
血清sCD14
对该队列中患有ALS的患者的血清中sCD14水平的分析基本上确认第一项研究(实施例1)中的发现，即与HV相比ALS患者中的sCD14水平显著增加(图13A)。令人感兴趣的是，正如第一项研究中显示的那样，虽然第二项研究也鉴定了快速进展性患者对比缓慢进展性患者中的sCD14水平之间的明显差异，它也展示了，与HV相比，缓慢进展性患者中的sCD14水平在统计上显著的增加(图13B)。总体上，ALS患者中的血清中sCD14水平与疾病进展速度之间存在明显相关性(图13C)。
使用受试者工作特征(ROC)曲线分析评估来自该患者队列的sCD14血清水平，用于反映血清收集时快速疾病进展速度与缓慢疾病进展速度的准确度(图13D-图13G)。如图13E中示出的，血清sCD14水平是疾病进展速度的明显指示物，能够非常准确地区分快速进展性患者对比缓慢进展性患者(3.16μg/ml的ROC截止值；AUC＝0.982；灵敏度：0.942；特异性：0.958)。在较小程度上，血清sCD14水平也可以将进展缓慢性患者与HV区分开(图13G)，(2.74μg/ml的ROC截止值；AUC＝0.686；灵敏度：0.633；特异性：0.654)。
血清LBP
对该队列中患有ALS的患者的血清中LBP水平的分析也基本上确认了先前研究中的发现，即与HV相比ALS患者中的LBP水平显著增加(图14A)。与sCD14一样，虽然第二项研究也鉴定了快速进展性患者与缓慢进展性患者相比的LBP水平之间的差异(正如第一项研究中显示的那样)，它也展示了，与HV相比，缓慢进展性患者中的LBP水平在统计上显著的增加(图14B)。总体上，在第一项研究中观察到的ALS患者中的血清中LBP水平与疾病进展速度之间的明显相关性也在该第二项研究中被观察到(图14C)。
使用ROC分析来评估来自该患者队列的血清LBP水平，用于反映快速疾病进展速度对比缓慢疾病进展速度的准确度，很明显，与sCD14一样，LBP也可以用作生物标志物来准确区分多种进展速度(图14D-G)。如图14E中示出的，血清LBP水平是疾病进展速度的良好指示物，与缓慢进展性患者相比，能够非常准确区分快速进展性患者(40.8μg/ml的ROC截止值；AUC＝0.966；灵敏度：0.923；特异性：0.938)。在本研究中，血清LBP水平也可以将进展缓慢性患者与HV区分开(图13G)，(26.1μg/ml的ROC截止值；AUC＝0.880；灵敏度：0.783；特异性：0.865)。
血清sCD14和LBP
正如在第一项研究中观察到的，患有快速进展性ALS的患者中的sCD14与LBP水平之间存在明显相关性，而在患有缓慢进展性ALS的患者中未观察到相关性(图15A)。
为了确定血清sCD14和血清LBP水平的组合是否可以用于与单独的任一生物标志物相比更有效地区分缓慢进展性ALS与快速进展性ALS，进行了ROC分析(图16)。已经展示，血清sCD14和血清LBP水平的组合在预测患有ALS的患者是患有缓慢进展性疾病还是患有快速进展性疾病方面特别有效。在分析中使用绝对血清sCD14和LBP水平展示了这一点(图16B；AUC＝0.9944)，并且使用了按比例的血清sCD14加LBP水平(图16F；AUC＝0.994)。在后一种分析中，由于sCD14和LBP的水平相差一个数量级，每种蛋白的水平首先被标准化，并且然后被添加以产生新的测量——按比例的(sCD14)+按比例的(LBP)。
本文引用的每篇专利、专利申请和公布的公开内容在此通过引用以其整体并入本文。
本文中任何参考文献的引用不应被解释为承认这样的参考文献作为本申请的“现有技术”可用。
在整个说明书中，目的是描述本公开内容的优选的实施方案，而不将本公开内容限制于任何一种实施方案或特定的特征集合。因此，本领域技术人员将理解，根据本公开内容，可以在所例示的特定实施方案中进行各种修改和改变，而不偏离本公开内容的范围。所有这样的修改和改变意在包括于所附权利要求书的范围内。
序列表
<110> 卫理公会医院
<120> 用于疾病的预后和管理的方法
<130> 35524033/VPA/TKU
<150> 62/669915
<151> 2018-05-10
<160> 26
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 1
Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile
1 5 10 15
Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Phe Gly Asn Ser Phe Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Pro Pro Lys Ser Ser Ile Tyr
35 40 45
Arg Ala Ala Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp
65 70 75 80
Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Glu Asp Pro Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Gly Asn Gln
100 105
<210> 2
<211> 105
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 2
Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly
1 5 10 15
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu
20 25 30
Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr
35 40 45
Tyr Pro Asp Asn Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
50 55 60
Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
65 70 75 80
Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Tyr Asp Tyr His Tyr Trp Gly
85 90 95
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
100 105
<210> 3
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 3
Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile
1 5 10 15
Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Val Asn Ser Phe Leu
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Arg Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp
65 70 75 80
Asp Val Ala Thr Tyr Cys Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Thr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 4
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 4
Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser
1 5 10 15
Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Ser Ala Trp
20 25 30
Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Arg Leu Glu Trp Met Gly Tyr
35 40 45
Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg
50 55 60
Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Arg Gly
85 90 95
Leu Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
100 105 110
<210> 5
<211> 101
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 5
Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile
1 5 10 15
Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Lys Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln
20 25 30
Gln Pro Gly Gly Thr Val Lys Val Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu
35 40 45
His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
50 55 60
Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
65 70 75 80
Phe Cys Gln Arg Gly Asp Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr
85 90 95
Lys Leu Glu Ile Lys
100
<210> 6
<211> 116
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 6
Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile
1 5 10 15
Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr Asp Ile Ser Trp
20 25 30
Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp
35 40 45
Thr Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Phe Met Ser Arg Leu Ser
50 55 60
Ile Thr Lys Asp Asn Ser Glu Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Gly
65 70 75 80
Leu Gln Thr Asp Asp Thr Gly Ile Tyr Tyr Cys Val Arg Gly Asp Gly
85 90 95
Asn Phe Tyr Leu Tyr Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 7
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 7
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Phe Gly Asn Ser Phe Met His
1 5 10 15
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 8
Arg Ala Ala Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 9
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 9
Gln Gln Ser Tyr Glu Asp Pro Trp Thr
1 5
<210> 10
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 10
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 11
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 11
Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 12
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 12
Gly Tyr Tyr Asp Tyr His Tyr
1 5
<210> 13
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 13
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Val Asn Ser Phe Leu His
1 5 10 15
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 14
Arg Ala Ser Asn Leu Gln Ser
1 5
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 15
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Thr Thr
1 5
<210> 16
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 16
Ser Asp Ser Ala Trp Asn
1 5
<210> 17
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 17
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 18
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 18
Gly Leu Arg Phe Ala Tyr
1 5
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 19
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Lys Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 20
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 20
Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 21
Gln Arg Gly Asp Thr Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 22
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 22
Asn Tyr Asp Ile Ser
1 5
<210> 23
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 23
Val Ile Trp Thr Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Phe Met Ser
1 5 10 15
<210> 24
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 24
Gly Asp Gly Asn Phe Tyr Leu Tyr Asn Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 25
<211> 238
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> IC14 VL结构域
<400> 25
Met Glu Thr Asp Thr Ile Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala
20 25 30
Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser
35 40 45
Val Asp Ser Tyr Val Asn Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Gln Ser
65 70 75 80
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
115 120 125
Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
130 135 140
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
145 150 155 160
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
165 170 175
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
180 185 190
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
195 200 205
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
210 215 220
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 26
<211> 460
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> IC14 VH结构域
<400> 26
Met Lys Val Leu Ser Leu Leu Tyr Leu Leu Thr Ala Ile Pro Gly Ile
1 5 10 15
Leu Ser Asp Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro
20 25 30
Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr
35 40 45
Ser Asp Ser Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro
65 70 75 80
Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln
85 90 95
Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
100 105 110
Tyr Cys Val Arg Gly Leu Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
130 135 140
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
145 150 155 160
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
165 170 175
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
180 185 190
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
195 200 205
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
210 215 220
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
245 250 255
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
260 265 270
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
275 280 285
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
290 295 300
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
305 310 315 320
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
325 330 335
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
340 345 350
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
355 360 365
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
370 375 380
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
385 390 395 400
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
405 410 415
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
420 425 430
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
435 440 445
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
450 455 460

Claims (53)

1.一种用于确定患有肌萎缩侧索硬化(ALS)的受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS的方法，所述方法包括：
(a)确定从患有ALS的受试者获得的生物样品中生物标志物的水平，其中所述生物标志物是可溶性CD14(sCD14)或脂多糖结合蛋白(LBP)；和
(b)相对于合适的参考水平，基于所述生物样品中所述生物标志物的水平，确定所述受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述参考水平代表健康受试者和/或已知患有缓慢进展性ALS的受试者，并且其中所述生物标志物的水平相对于所述参考水平的增加指示所述受试者可能患有快速进展性ALS。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述参考水平代表已知患有快速进展性ALS的受试者，并且其中相对于所述参考水平，所述生物标志物的相似水平指示所述受试者可能患有快速进展性ALS。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述参考水平代表健康受试者和/或已知患有缓慢进展性ALS的受试者，并且其中相对于所述参考水平，所述生物标志物的相似水平指示所述受试者可能患有缓慢进展性ALS。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述参考水平代表已知患有快速进展性ALS的受试者，并且所述生物标志物的水平相对于所述参考水平的减少指示所述受试者可能患有缓慢进展性ALS。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述参考水平是阈值水平，高于所述阈值水平的所述受试者可能患有快速进展性ALS，并且低于所述阈值水平的所述受试者可能患有缓慢进展性ALS。
7.一种用于评估受试者中ALS的进展速度的方法，所述方法包括：
(a)确定从患有ALS的受试者获得的生物样品中生物标志物的水平，其中所述生物标志物是可溶性CD14(sCD14)或脂多糖结合蛋白(LBP)；和
(b)基于所述生物样品中所述生物标志物的水平确定所述受试者中ALS的进展速度。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述方法包括确定sCD14和LBP的水平。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述生物样品选自由以下组成的组：血液、血浆、血清、尿液和脑脊液(CSF)。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，所述方法还包括测量所述生物样品中至少一种其他生物标志物的水平。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述至少一种其他生物标志物选自由以下组成的组：LBP、CRP、MIF、sTNFRI和/或sTNFRII。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，所述方法还包括在测量所述生物标志物的水平前获得所述生物样品。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，所述方法还包括使所述受试者暴露于用于治疗ALS的治疗方案。
14.一种用于确定患有ALS的受试者中生物标志物的水平的试剂盒，其中所述试剂盒包含对所述生物标志物有特异性的抗原结合分子，所述抗原结合分子允许测量生物样品中所述生物标志物的水平，其中所述生物标志物是sCD14或LBP。
15.根据权利要求14所述的试剂盒，所述试剂盒包含允许测量生物样品中sCD14和LBP的水平的对sCD14有特异性的抗原结合分子和对LBP有特异性的抗原结合分子。
16.根据权利要求14或15所述的试剂盒，所述试剂盒还包含对选自CRP、MIF、sTNFRI、sTNFRII、NFL、pNfH、p75NTRECD、miR-206、miR-143-3p和miR-374b-5p中的至少一种其他生物标志物有特异性的抗原结合分子。
17.一种固体支持物，所述固体支持物包含对生物标志物有特异性的抗原结合分子，其中所述生物标志物是sCD14或LBP。
18.根据权利要求17所述的固体支持物，所述固体支持物包含对sCD14有特异性的抗原结合分子和对LBP有特异性的抗原结合分子。
19.根据权利要求17或18所述的固体支持物，所述固体支持物还包含对选自CRP、MIF、sTNFRI、sTNFRII、NFL、pNfH、p75NTRECD、miR-206、miR-143-3p和/或miR-374b-5p中的至少一种其他生物标志物有特异性的抗原结合分子。
20.根据权利要求17至19中任一项所述的固体支持物，其中所述固体支持物选自多孔板、载玻片、芯片或多于一个珠。
21.一种对受试者分层以治疗ALS的方法，所述方法包括：
(a)根据权利要求1至12中任一项所述的方法，确定受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS，或者评估受试者中ALS的进展速度；和
(b)基于所述受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS或者基于所述受试者中ALS的进展速度，确定适于所述受试者的优化治疗方案。
22.根据权利要求21所述的方法，所述方法还包括使所述受试者暴露于所述优化治疗方案。
23.一种用于治疗可能患有快速进展性ALS的受试者的方法，所述方法包括：
(a)基于所述受试者的生物样品中生物标志物的水平，选择可能患有快速进展性ALS的受试者，其中所述生物标志物是sCD14或LBP；和
(b)使所述受试者暴露于为治疗快速进展性ALS而优化的治疗方案。
24.根据权利要求23所述的方法，其中(a)包括基于所述受试者的生物样品中的sCD14和LBP的水平选择可能患有快速进展性ALS的受试者。
25.根据权利要求23或24所述的方法，所述方法还包括，在选择所述受试者前，根据权利要求1-12中任一项所述的方法，确定所述受试者是否可能患有快速进展性ALS。
26.根据权利要求23至25中任一项所述的方法，其中所述治疗方案包括施用抗神经退行性剂。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述抗神经退行性剂选自利鲁唑、依达拉奉、CD14拮抗剂、GM604、马赛替尼、补体途径抑制剂和阻断CD40与CD40配体之间相互作用的剂。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述CD14拮抗剂是CD14拮抗性抗体。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述CD14拮抗性抗体选自：
(1)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：QSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSFGNSFMHWYQQKAGQPPKSSIYRAANLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYFCQQSYEDPWTFGGGTKLGNQ[SEQ ID NO：1](3C10 VL)；并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：LVKPGGSLKLSCVASGFTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGTTYYPDNVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARGYYDYHYWGQGTTLTVSS[SEQ ID NO：2](3C10 VH)；
(2)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：QSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYVNSFLHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLQSGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYCCQQSNEDPTTFGGGTKLEIK[SEQ ID NO：3](28C5 VL)；并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：LQQSGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDSAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGSTSYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCVRGLRFAYWGQGTLVTVSA[SEQ ID NO：4](28C5 VH)；和
(3)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：QTPSSLSASLGDRVTISCRASQDIKNYLNWYQQPGGTVKVLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDFATYFCQRGDTLPWTFGGGTKLEIK[SEQ ID NO：5](18E12 VL)；并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：LESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTNYDISWIRQPPGKGLEWLGVIWTSGGTNYNSAFMSRLSITKDNSESQVFLKMNGLQTDDTGIYYCVRGDGNFYLYNFDYWGQGTTLTVSS[SEQ ID NO：6](18E12 VH)。
30.根据权利要求27所述的方法，其中所述补体途径抑制剂是C5a抑制剂。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述C5a抑制剂是PMX205或依库珠单抗。
32.根据权利要求27所述的方法，其中阻断CD40与CD40配体之间相互作用的剂是与CD40和/或CD40配体特异性结合的抗体。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述抗体是AT-1502。
34.根据权利要求23至33中任一项所述的方法，其中所述治疗方案包括使所述受试者暴露于非侵入性通气。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述非侵入性通气包括平均容积保证压力支持(AVAPS)、持续气道正压(CPAP)和/或双相气道正压(BiPAP)。
36.根据权利要求34或35所述的方法，其中所述受试者暴露于非侵入性通气早于如果所述受试者可能患有缓慢进展性ALS的情况。
37.一种用于治疗可能患有缓慢进展性ALS的受试者的方法，所述方法包括：
(a)基于所述受试者的生物样品中生物标志物的水平，选择可能患有缓慢进展性ALS的受试者，其中所述生物标志物是sCD14或LBP；和
(b)使所述受试者暴露于为治疗缓慢进展性ALS而优化的治疗方案。
38.根据权利要求37所述的方法，其中(a)包括基于所述受试者的生物样品中的sCD14和LBP的水平选择可能患有缓慢进展性ALS的受试者。
39.根据权利要求37或38所述的方法，所述方法还包括，在选择所述受试者前，根据权利要求1-12中任一项所述的方法，确定所述受试者是否可能患有缓慢进展性ALS。
40.根据权利要求37至39中任一项所述的方法，其中所述治疗方案不包括施用抗神经退行性剂。
41.根据权利要求37至40中任一项所述的方法，其中所述治疗方案包括施用抗神经退行性剂。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述抗神经退行性剂选自利鲁唑、依达拉奉、CD14拮抗剂、GM604、马赛替尼、补体途径抑制剂和阻断CD40与CD40配体之间相互作用的剂。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述CD14拮抗剂是CD14拮抗性抗体。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述CD14拮抗性抗体选自：
(1)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：QSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSFGNSFMHWYQQKAGQPPKSSIYRAANLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYFCQQSYEDPWTFGGGTKLGNQ[SEQ ID NO：1](3C10 VL)；并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：LVKPGGSLKLSCVASGFTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGTTYYPDNVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARGYYDYHYWGQGTTLTVSS[SEQ ID NO：2](3C10 VH)；
(2)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：QSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYVNSFLHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLQSGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYCCQQSNEDPTTFGGGTKLEIK[SEQ ID NO：3](28C5 VL)；并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：LQQSGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDSAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGSTSYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCVRGLRFAYWGQGTLVTVSA[SEQ ID NO：4](28C5 VH)；和
(3)一种抗体，所述抗体包含VL结构域和VH结构域：
所述VL结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：QTPSSLSASLGDRVTISCRASQDIKNYLNWYQQPGGTVKVLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDFATYFCQRGDTLPWTFGGGTKLEIK[SEQ ID NO：5](18E12 VL)；并且
所述VH结构域包含以下序列、由以下序列组成或基本上由以下序列组成：LESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTNYDISWIRQPPGKGLEWLGVIWTSGGTNYNSAFMSRLSITKDNSESQVFLKMNGLQTDDTGIYYCVRGDGNFYLYNFDYWGQGTTLTVSS[SEQ ID NO：6](18E12 VH)。
45.根据权利要求42所述的方法，其中所述补体途径抑制剂是C5a抑制剂。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述C5a抑制剂是PMX205或依库珠单抗。
47.根据权利要求42所述的方法，其中阻断CD40与CD40配体之间相互作用的剂是与CD40和/或CD40配体特异性结合的抗体。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述抗体是AT-1502。
49.根据权利要求23至48中任一项所述的方法，其中所述生物样品选自由以下组成的组：血液、血浆、血清、尿液和CSF。
50.对生物标志物有特异性的抗原结合分子在制备用于确定患有ALS的受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS或者用于评估受试者中ALS的进展速度的试剂盒中的用途，其中所述生物标志物是sCD14或LBP。
51.根据权利要求50所述的用途，其中所述用途是对sCD14有特异性的抗原结合分子和对LBP有特异性的抗原结合分子的组合在制备用于确定患有ALS的受试者是可能患有快速进展性ALS还是可能患有缓慢进展性ALS或者用于评估受试者中ALS的进展速度的试剂盒中的用途。
52.根据权利要求50或51所述的用途，所述用途还包括对至少一种其他生物标志物有特异性的抗原结合分子在制备试剂盒中的用途。
53.根据权利要求52所述的用途，其中所述至少一种其他生物标志物选自CRP、MIF、sTNFRI、sTNFRII、NFL、pNfH、p75NTRECD、miR-206、miR-143-3p和miR-374b-5p。
CN201980045566.7A 2018-05-10 2019-05-10 用于疾病的预后和管理的方法 Pending CN112424608A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862669915P 2018-05-10 2018-05-10
US62/669,915 2018-05-10
PCT/US2019/031858 WO2019217916A1 (en) 2018-05-10 2019-05-10 Methods for prognosis and management of disease

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112424608A true CN112424608A (zh) 2021-02-26

Family

ID=66655475

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201980045566.7A Pending CN112424608A (zh) 2018-05-10 2019-05-10 用于疾病的预后和管理的方法

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20210231686A1 (zh)
EP (1) EP3791188A1 (zh)
JP (2) JP7371019B2 (zh)
KR (1) KR20210014109A (zh)
CN (1) CN112424608A (zh)
AU (1) AU2019264996A1 (zh)
WO (1) WO2019217916A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113842449A (zh) * 2021-09-08 2021-12-28 乐卫东 枸杞糖肽在制备预防和/或治疗肌萎缩侧索硬化的药物中的应用

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110831975A (zh) * 2017-04-21 2020-02-21 因普利西特生物科学私人有限公司 用于治疗神经退行性疾病的cd14拮抗剂抗体

Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0559795A1 (en) * 1990-11-30 1993-09-15 Monoclonetics Int DIAGNOSTIC METHODS FOR CERVICAL AND LOWER BACK PAIN OF CHRONIC TYPE.
CA2467333A1 (en) * 2001-11-16 2003-06-12 Tennore M. Ramesh Methods for monitoring amyotrophic lateral sclerosis
US20070105105A1 (en) * 2003-05-23 2007-05-10 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Surrogate cell gene expression signatures for evaluating the physical state of a subject
CN1968962A (zh) * 2004-05-11 2007-05-23 持田制药株式会社 新型可溶性cd14抗原
CN102573500A (zh) * 2009-08-06 2012-07-11 纽拉尔图斯制药公司 巨噬细胞相关疾病的治疗
US20120276114A1 (en) * 2009-11-18 2012-11-01 Universite D'aix-Marseille Ifn-gamma inhibitors in the treatment of motoneuron diseases
US20130230499A1 (en) * 2010-03-10 2013-09-05 Michal Eisenbach-Schwartz Cellular blood markers for early diagnosis of als and for als progression
CN103733068A (zh) * 2011-08-12 2014-04-16 三菱化学美迪恩斯株式会社 术后感染症的诊断方法
CN104011210A (zh) * 2011-10-11 2014-08-27 布里格姆及妇女医院股份有限公司 神经退行性病症中的microRNA
CN105102984A (zh) * 2012-12-28 2015-11-25 美迪恩斯生命科技株式会社 sCD14或它的片段或衍生物用于风险分级、诊断和预后的用途
CN106413721A (zh) * 2014-05-16 2017-02-15 纽拉尔图斯制药公司 用于治疗巨噬细胞相关病症的方法和组合物
WO2017103001A2 (en) * 2015-12-16 2017-06-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Diagnostic markers of immunosenescence and methods for determining the susceptibility to nosocomial infections
CN107003320A (zh) * 2014-11-25 2017-08-01 豪夫迈·罗氏有限公司 慢性肾脏疾病的快速进展的生物标志物
CN107683142A (zh) * 2015-04-02 2018-02-09 卫理公会医院 基于多孔硅微粒的癌症疫苗和增强抗肿瘤免疫性的方法

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4018653A (en) 1971-10-29 1977-04-19 U.S. Packaging Corporation Instrument for the detection of Neisseria gonorrhoeae without culture
US4016043A (en) 1975-09-04 1977-04-05 Akzona Incorporated Enzymatic immunological method for the determination of antigens and antibodies
US4424279A (en) 1982-08-12 1984-01-03 Quidel Rapid plunger immunoassay method and apparatus
JPH08510909A (ja) 1993-05-28 1996-11-19 ザ スクリップス リサーチ インスティチュート Ｃｄ１４媒介細胞活性化を抑制するための方法および組成物
AU740830B2 (en) 1998-01-29 2001-11-15 Glaucus Proteomics B.V. High density arrays for proteome analysis and methods and compositions therefor
US6406921B1 (en) 1998-07-14 2002-06-18 Zyomyx, Incorporated Protein arrays for high-throughput screening
AU2001255436A1 (en) 2000-04-17 2001-10-30 Transtech Pharma Protein expression system arrays and use in biological screening
GB0022978D0 (en) 2000-09-19 2000-11-01 Oxford Glycosciences Uk Ltd Detection of peptides
AU2002220236A1 (en) 2000-11-09 2002-05-21 Bionova Pharmaceutials, Inc. A method for identifying the proteome of cells using an antibody library microarray
US7264967B2 (en) 2000-11-22 2007-09-04 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Anti-CD14 monoclonal antibody having effect of inhibiting CD14/TLR binding
ATE538380T1 (de) 2001-01-23 2012-01-15 Harvard College Nukleinsäure-programmierbare protein-arrays
US20050003360A1 (en) 2001-11-13 2005-01-06 Ruo-Pang Huang Array systems and methods
ATE421088T1 (de) 2002-03-11 2009-01-15 Caprotec Bioanalytics Gmbh Verbindungen und verfahren für die analyse des proteoms
CN102414563B (zh) 2009-03-11 2014-12-03 奥古雷克斯生命科学公司 用于表征关节炎疾患的组合物和方法
US8465727B2 (en) 2009-10-06 2013-06-18 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Biomarkers for the diagnosis of ALS
WO2012004276A2 (en) * 2010-07-06 2012-01-12 Fondazione Telethon Multiprotein biomarkers of amyotrophic lateral sclerosis in peripheral blood mononuclear cells, diagnostic methods and kits
CN110831975A (zh) 2017-04-21 2020-02-21 因普利西特生物科学私人有限公司 用于治疗神经退行性疾病的cd14拮抗剂抗体

Patent Citations (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0559795A1 (en) * 1990-11-30 1993-09-15 Monoclonetics Int DIAGNOSTIC METHODS FOR CERVICAL AND LOWER BACK PAIN OF CHRONIC TYPE.
CA2467333A1 (en) * 2001-11-16 2003-06-12 Tennore M. Ramesh Methods for monitoring amyotrophic lateral sclerosis
CN1606694A (zh) * 2001-11-16 2005-04-13 Slil生物医学股份有限公司 监测和治疗肌萎缩性侧索硬化症的方法
US20070105105A1 (en) * 2003-05-23 2007-05-10 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Surrogate cell gene expression signatures for evaluating the physical state of a subject
CN1968962A (zh) * 2004-05-11 2007-05-23 持田制药株式会社 新型可溶性cd14抗原
CN102573500A (zh) * 2009-08-06 2012-07-11 纽拉尔图斯制药公司 巨噬细胞相关疾病的治疗
US20120276114A1 (en) * 2009-11-18 2012-11-01 Universite D'aix-Marseille Ifn-gamma inhibitors in the treatment of motoneuron diseases
US20130230499A1 (en) * 2010-03-10 2013-09-05 Michal Eisenbach-Schwartz Cellular blood markers for early diagnosis of als and for als progression
CN103733068A (zh) * 2011-08-12 2014-04-16 三菱化学美迪恩斯株式会社 术后感染症的诊断方法
CN104011210A (zh) * 2011-10-11 2014-08-27 布里格姆及妇女医院股份有限公司 神经退行性病症中的microRNA
CN105102984A (zh) * 2012-12-28 2015-11-25 美迪恩斯生命科技株式会社 sCD14或它的片段或衍生物用于风险分级、诊断和预后的用途
CN106413721A (zh) * 2014-05-16 2017-02-15 纽拉尔图斯制药公司 用于治疗巨噬细胞相关病症的方法和组合物
CN107003320A (zh) * 2014-11-25 2017-08-01 豪夫迈·罗氏有限公司 慢性肾脏疾病的快速进展的生物标志物
CN107683142A (zh) * 2015-04-02 2018-02-09 卫理公会医院 基于多孔硅微粒的癌症疫苗和增强抗肿瘤免疫性的方法
WO2017103001A2 (en) * 2015-12-16 2017-06-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Diagnostic markers of immunosenescence and methods for determining the susceptibility to nosocomial infections

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHRISTIAN LUNETTA, MD等: ""Serum C-Reactive Protein as a Prognostic Biomarker in Amyotrophic Lateral Sclerosis"", 《JAMA NEUROLOGY》, vol. 74, no. 6, pages 1 *
S.D. SUSSMUTH, MD等: ""CSF glial markers correlate with survival in amyotrophic lateral sclerosis"", 《NEUROLOGY》, vol. 74, no. 12, pages 982 - 988 *
VALENTE, T 等: "C/EBPβ expression in activated microglia in amyotrophic lateral sclerosis", NEUROBIOLOGY OF AGING, vol. 33, no. 9, pages 2186 - 2199 *
叶学义 等: "基于张量的2D-PCA人脸识别算法", 计算机工程与应用, vol. 53, no. 06, pages 1 - 6 *
拱忠影;臧大维;: "肌萎缩侧索硬化生物标记物研究的新进展", 中华老年心脑血管病杂志, no. 03, pages 330 - 333 *
方鑫;吴艳;王芳;孙圣刚;: "CD14 mRNA、TLR4 mRNA在急性和亚急性MPTP帕金森病小鼠模型中的表达", 华中科技大学学报(医学版), no. 06, pages 775 - 779 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113842449A (zh) * 2021-09-08 2021-12-28 乐卫东 枸杞糖肽在制备预防和/或治疗肌萎缩侧索硬化的药物中的应用
CN113842449B (zh) * 2021-09-08 2024-02-23 乐卫东 枸杞糖肽在制备预防和/或治疗肌萎缩侧索硬化的药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20210231686A1 (en) 2021-07-29
AU2019264996A1 (en) 2020-11-26
EP3791188A1 (en) 2021-03-17
JP2021523375A (ja) 2021-09-02
WO2019217916A1 (en) 2019-11-14
JP7371019B2 (ja) 2023-10-30
JP2023181255A (ja) 2023-12-21
KR20210014109A (ko) 2021-02-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10877049B2 (en) Biomarkers for diagnosis and management of neuro-immunological diseases
JP2023181255A (ja) 疾病の予後と管理のための方法
JP6868655B2 (ja) Ｃｄ６結合パートナーの使用およびそれに基づく方法
US11262358B2 (en) Infiltrating immune cell proportions predict anti-TNF response in colon biopsies
RU2636032C2 (ru) Применение антитела i-3859 для выявления и диагностики рака
JP2009526020A (ja) 分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質４（ＳＦＲＰ−４）タンパク質結合剤
US7709215B2 (en) Method for diagnosing and treating acute joint injury
WO2015073682A1 (en) Methods of detecting cells latently infected with hiv
JP2022528238A (ja) がん療法で使用するためのセマフォリン－４ｄアンタゴニスト
WO2020165437A1 (en) Type i interferon-mediated disorders
WO2013050998A1 (en) Cd247 as a biomarker for assessing the effect of chemotherapeutic and biological drugs
Almizraq et al. Modulation of neutrophil function by recombinant human IgG1 Fc hexamer in the endogenous K/BxN mouse model of rheumatoid arthritis
US11761963B2 (en) Biomarker signature for predicting tumor response to anti-CD200 therapy
EP2795337B1 (en) Screening methods to identify compounds useful in the prevention and/or treatment of inflammatory conditions
WO2023232826A1 (en) Biomarkers of il7r modulator activity
WO2023198648A1 (en) Methods for the diagnosis and treatment of t-cell malignancies
AU2015265578B2 (en) Risk-stratification of B-precursor acute lymphoblastic leukemia patients
CN115104029A (zh) 用于检测和监测全身性炎症的非侵入性测定法
WO2024023283A1 (en) Lrrc33 as a biomarker and biotarget in cutaneous t-cell lymphomas
CN116997663A (zh) 类风湿性关节炎发作的标志物和细胞前因
Tarabayeva et al. MODERN APPROACHES IN PERSONALIZED MEDICINE. NEW STAGE OF DEVELOPMENT OF IMMUNOGENETICS
Class et al. Patent application title: SCREENING METHODS TO IDENTIFY COMPOUNDS USEFUL IN THE PREVENTION AND/OR TREATMENT OF INFLAMMATORY CONDITIONS Inventors: Reginald Christophe Xavier Brys (Mechelen, BE) Reginald Christophe Xavier Brys (Mechelen, BE) Sonia Dupont (Romainville, FR) Assignees: GALAPAGOS NV

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination