CN112409378A - 三环pi3k抑制剂化合物及其使用方法 - Google Patents
三环pi3k抑制剂化合物及其使用方法 Download PDFInfo
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Abstract
本申请描述了具有磷酸肌醇‑3‑激酶(PI3K)调节活性或功能的三环化合物或其立体异构体、互变异构体或药用盐，所述化合物具有式I结构且具有本申请所述的取代基和结构特征。本申请还描述了包含式I化合物的药物组合物和药物及单独使用和与其它治疗剂组合使用此类PI3K调节剂以治疗介导或依赖于PI3K失调的疾病或病症的方法。
Description
本申请是申请号为201680052020.0、申请日为2016年09月07日、发明名称为“三环PI3K抑制剂化合物及其使用方法”的中国专利申请的分案申请。
中国专利申请
对相关申请的交叉引用
依据37CFR§1.53(b)提交的本非临时申请要求依据35USC§119(e)和§365于2015年9月8日提交的国际申请第PCT/CN2015/089121号和于2016年3月11日提交的国际申请第PCT/CN2016/076126号的权益，通过引用将其整体并入本申请。
技术领域
本发明大体上涉及三环PI3K抑制剂化合物，所述化合物具有对抗过度增殖性病症诸如癌症的活性。本发明还涉及使用所述化合物用于体外、原位和体内诊断或治疗哺乳动物细胞或相关病理学病症的方法。
背景技术
磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt信号传导途径的上调是大多数癌症的共同特征(Yuan和Cantley(2008)Oncogene 27:5497-510)。所述途径的遗传变异已在多种人类癌症中检测到(Osaka等(2004)Apoptosis 9:667-76)并主要起刺激细胞增殖、迁移和存活的作用。所述途径的活化发生在活化编码p110αPI3K同工型的PIK3CA基因的点突变或扩增后(Hennessy等(2005)Nat.Rev.Drug Discov.4:988-1004)。肿瘤抑制因子PTEN(一种具有与PI3K相反功能的磷酸酶)中功能突变的遗传缺失或丧失也增加PI3K途径信号传导(Zhang和Yu(2010)Clin.Cancer Res.16:4325-30)。这些畸变通过激酶诸如Akt和mTOR增加下游信号传导且PI3K途径的活性增加已被提出作为对癌症治疗具有抗性的标志(Opel等(2007)Cancer Res.67:735-45；Razis等(2011)Breast Cancer Res.Treat.128:447-56)。
磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)是淋巴瘤关键存活和生长信号的主要信号传导节点且被磷酸酶PTEN的活性所对抗。磷酸肌醇-3依赖性激酶(PI3K)信号途径是激素受体阳性乳腺癌(HR+BC)中失调最严重的途径。PI3K途径在侵袭性形式的淋巴瘤中是失调的(Abubaker(2007)Leukemia 21:2368-2370)。8％的DLBCL(弥漫性大B细胞淋巴瘤)癌症具有PI3CA(磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚基α)错义突变且通过免疫组织化学测试37％为PTEN阴性。
磷脂酰肌醇是在细胞膜中发现的多种磷脂中的一种且参与细胞内信号转导。经由3’-磷酸化磷酸肌醇的细胞信号传导牵涉多种细胞过程例如恶性转化、生长因子信号传导、炎症和免疫(Rameh等(1999)J.Biol Chem.274:8347-8350)。负责生成这些磷酸化信号传导产物的酶即磷脂酰肌醇-3-激酶(也称为PI3激酶或PI3K)最初被鉴定为具有与病毒癌蛋白和生长因子受体酪氨酸激酶相关的活性，其对磷脂酰肌醇(PI)及其在肌醇环的3’-羟基的磷酸化衍生物进行磷酸化(Panayotou等(1992)Trends Cell Biol 2:358-60)。磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)是在肌醇环的3-羟基对脂质进行磷酸化的脂质激酶(Whitman等(1988)Nature,332:664)。通过PI3激酶生成的3-磷酸化磷脂(PIP3)充当第二信使，其募集具有脂质结合域(包括普列克底物蛋白同源(PH)区)的激酶诸如Akt和PDK1(磷酸肌醇依赖性激酶-1)(Vivanco等(2002)Nature Rev.Cancer 2:489；Phillips等(1998)Cancer 83:41)。
PI3激酶家族包括按结构同源性细分的至少15种不同的酶且根据序列同源性和通过酶催化形成的产物而分为三类。I类PI3激酶由2个亚基构成：110kd催化亚基和85kd调节亚基。所述调节亚基含有SH2结构域并结合至通过具有酪氨酸激酶活性的生长因子受体或癌基因产物而磷酸化的酪氨酸残基，从而诱导p110催化亚基的PI3K活性，其对其脂质底物进行磷酸化。I类PI3激酶牵涉细胞因子、整合素、生长因子和免疫受体下游的重要信号转到事件，这表明控制该途径可引起重要的治疗作用诸如调节细胞增殖和癌变。I类PI3K可对磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰肌醇-4-磷酸和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2)进行磷酸化以分别产生磷脂酰肌醇-3-磷酸(PIP)、磷脂酰肌醇-3,4-二磷酸和磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸。II类PI3K对PI和磷脂酰肌醇-4-磷酸进行磷酸化。III类PI3K仅可对PI进行磷酸化。如在p110α中反复出现的癌基因突变所示，癌症中的关键PI3激酶同工型为I类PI3激酶p110α(Samuels等(2004)Science 304:554；US5824492；US5846824；US6274327)。其它同工型在癌症中可为重要的且也牵涉心血管和免疫炎性疾病(Workman P(2004)Biochem Soc Trans 32:393-396；Patel等(2004)Proc.Am.Assoc.of Cancer Res.(Abstract LB-247)95th AnnualMeeting,March 27-31,Orlando,Florida,USA；Ahmadi K和Waterfield MD(2004)“Phosphoinositide 3-Kinase：Function and Mechanisms”Encyclopedia of BiologicalChemistry(Lennarz W J,Lane M D eds)Elsevier/Academic Press)。已在结肠、乳腺、脑、肝、卵巢、胃、肺和头颈实体瘤中非常频繁地发现p110α的癌基因突变。约35-40％的激素受体阳性(HR+)乳腺癌肿瘤具有PIK3CA突变。已在成胶质细胞瘤、黑素瘤、***癌、子宫内膜癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、头颈癌、肝细胞癌和甲状腺癌中发现PTEN异常。
PI3激酶(PI3K)是由p85和p110亚基构成的杂二聚体(Otsu等(1991)Cell 65:91-104；Hiles等(1992)Cell 70:419-29)。已鉴定出四种不同的I类PI3K，其被指定为PI3Kα、β、δ和γ且各自由不同的110kDa催化亚基和调节亚基构成。催化亚基中的三种即p110α、p110β和p110δ各自与相同的调节亚基p85相互作用；而p110γ与不同的调节亚基p101相互作用。这些PI3K各自在人类细胞和组织中的表达模式是不同的。在PI3Kα、β和δ亚型的每个中，p85亚基通过其SH2结构域与靶蛋白中的磷酸化酪氨酸残基(存在于适当的序列背景中)相互作用将PI3激酶定位于质膜(Rameh等(1995)Cell,83:821-30；Volinia等(1992)Oncogene,7:789-93)。
PI3激酶/Akt/PTEN途径是癌症药物开发中有吸引力的靶标，这是因为这样的药物被预期抑制细胞增殖、抑制来自维持癌细胞存活和化学抗性的***的信号、逆转对凋亡的阻抑和克服癌细胞对细胞毒性剂的内在抗性。PI3K通过受体酪氨酸激酶信号传导及活化PI3K的p110催化亚基中的突变、肿瘤抑制剂PTEN的丧失或通过AKT中罕见的活化突变而被活化。
发明内容
本发明大体上涉及在调节PI3K(包括调节PI3Kα同工型的突变形式)中具有活性且具有式I结构的三环化合物或其立体异构体、互变异构体和药用盐：
各种取代基在本申请中定义。
本发明的另一个方面为药物组合物，其包含式I化合物及药用载体、助流剂、稀释剂或赋形剂。
本发明的另一个方面为用于制备所述药物组合物的方法。
本发明的另一个方面为在具有癌症的患者中治疗癌症的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的式I化合物，其中所述癌症选自乳腺癌、肺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌和子宫癌。可向所述患者施用选自以下的治疗剂：5-FU、多西他赛(docetaxel)、艾日布林(eribulin)、吉西他滨(gemcitabine)、考比替尼(cobimetinib)、ipatasertib、紫杉醇(paclitaxel)、他莫昔芬(tamoxifen)、氟维司群(fulvestrant)、GDC-0810、***(dexamethasone)、帕泊昔布(palbociclib)、贝伐珠单抗(bevacizumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、曲妥珠单抗-美坦新偶联物(trastuzumab emtansine)、曲妥珠单抗(trastuzumab)和来曲唑(letrozole)。
本发明的另一个方面为用于治疗性处置乳腺癌的试剂盒，其包含：
a)包含式I化合物的第一药物组合物；和
b)用于治疗性处置乳腺癌的说明书。
具体实施方式
现将详细描述本发明某些实施方案，其实施例在所附结构和式中说明。当结合所列实施方案来描述本发明时，应理解的是，所述实施方案不是意在将本发明限于这些实施方案。相反地，本发明意在包括可包括在如权利要求书所定义的本发明范围内的所有可选形式、修改形式和等价形式。本领域技术人员将认识到与本申请描述的方法和物质类似或等价的可用于实施本发明的多种方法和物质。本发明绝不限于所描述的方法和物质。若一篇或多篇所引入的文献、专利和类似材料与本申请不同或矛盾(包括但不限于所定义的术语、术语用法、所描述的技术等)，则以本申请为准。除非另有定义，否则本申请使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属领域技术人员通常所理解相同的含义。虽然与本申请所述那些方法和材料类似或等同的方法和材料可用于实施或测试本发明，但是以下描述了适当的方法和材料。通过引用的方式将本申请提及的所有出版物、专利申请、专利及其它参考文献全部引入到本申请中。除非另有说明，否则本申请使用的命名法基于IUPAC***命名法。
定义
当说明取代基数目时，术语“一个或多个”是指一个取代基至最大可能数目的取代情况，即用取代基替换一个氢至替换全部氢。术语“取代基”表示对母体分子上的氢原子进行替换的原子或原子团。术语“取代”表示指定基团带有一个或多个取代基。当任何基团可带有多个取代基且提供各种可能取代基时，所述取代基是独立选择的且无需相同。术语“未取代”是指指定基团不带有取代基。术语“任选取代”是指指定基团是未取代的或被一个或多个独立选自可能取代基的取代基取代。当说明取代基数目时，术语“一个或多个”是指一个取代基至最大可能数目的取代情况，即用取代基替换一个氢至替换全部氢。
本申请使用的术语“烷基”是指具有1-12个碳原子(C1-C12)的饱和直链或支链一价烃基，其中所述烷基可任选独立取代有一个或多个下述取代基。在另一个实施方案中，烷基具有1-8个碳原子(C1-C8)或1-6碳原子(C1-C6)。烷基的实例包括但不限于甲基(Me,-CH3)、乙基(Et,-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr,正丙基,-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr,异丙基,-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu,正丁基,-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu,异丁基,-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu,仲丁基,-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu,叔丁基,-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基,-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3、1-庚基、1-辛基等。
术语“碳环”、“碳环基”、“碳环”和“环烷基”是指具有3-12个碳原子(C3-C12)呈单环形式或具有7-12个碳原子呈二环形式的一价的非芳族的饱和或部分不饱和的环。具有7-12个原子的二环碳环可排列为例如二环[4,5]***、二环[5,5]***、二环[5,6]***或二环[6,6]***且具有9或10个环原子的二环碳环可排列为二环[5,6]***或二环[6,6]***或排列为桥连***诸如二环[2.2.1]庚烷、二环[2.2.2]辛烷和二环[3.2.2]壬烷。螺碳环基部分也包括在该定义的范围内。螺碳环基部分的实例包括[2.2]戊基、[2.3]己基和[2.4]庚基。单环碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基等。碳环基任选独立取代有一个或多个本申请描述的取代基。
“芳基”表示具有6-20个碳原子(C6-C20)的一价芳族烃基，其如下得到：由母体芳族环系中的单个碳原子除去一个氢原子。一些芳基在示例性结构中被表示为“Ar”。芳基包括以下二环基团，其含有与饱和环、部分不饱和环或芳族碳环稠合的芳环。典型的芳基包括但不限于由苯(苯基)、取代的苯、萘、蒽、联苯、茚基、茚满基、1,2-二氢萘、1,2,3,4-四氢萘等得到的基团。芳基可任选独立取代有一个或多个本申请描述的取代基。
术语“杂环”、“杂环基”和“杂环”在本申请中可互换使用且是指具有3至约20个环原子的饱和或部分不饱和(即在环中具有一个或多个双键和/或叁键)的碳环基团，其中至少一个环原子为选自氮、氧、磷和硫的杂原子，其余环原子为C，其中一个或多个环原子任选独立取代有一个或多个下述取代基。杂环可为具有3-7个环成员(2-6个碳原子及1-4个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7-10个环成员(4-9个碳原子及1-6个选自N、O、P和S的杂原子)的二环例如二环[4,5]***、二环[5,5]***、二环[5,6]***或二环[6,6]***。杂环参见Paquette,Leo A.；“Principles of Modern Heterocyclic Chemistry”(W.A.Benjamin,New York,1968)(特别是第1、3、4、6、7和9章)；“The Chemistry ofHeterocyclic Compounds,A series of Monographs”(John Wiley&Sons,New York,1950至今)(特别是第13、14、16、19和28卷)；及J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566。“杂环基”还包括以下基团，其中杂环基与饱和环、部分不饱和环、芳族碳环或芳族杂环稠合。杂环的实例包括但不限于吗啉-4-基、哌啶-1-基、哌嗪基、哌嗪-4-基-2-酮、哌嗪-4-基-3-酮、吡咯烷-1-基、硫吗啉-4-基、S,S-二氧代硫吗啉-4-基、氮杂环辛烷-1-基、氮杂环丁烷-1-基、八氢吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮杂环庚烷-1-基、吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶子基、吗啉代、硫吗啉代、硫氧杂环己基、哌嗪基、高哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧氮杂
基、二氮杂
基、硫氮杂
基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二噁烷基、1,3-二氧杂环戊基、吡唑啉基、二硫杂环己基、二硫杂环戊基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、3-氮杂二环[4.1.0]庚基、氮杂二环[2.2.2]己基、3H-吲哚基、喹嗪基和N-吡啶基脲基团。螺杂环基部分也包括在该定义的范围内。螺杂环基部分的实例包括氮杂螺[2.5]辛基和氮杂螺[2.4]庚基。其中2个环原子取代有氧代(＝O)部分的杂环基的实例为嘧啶酮基和1,1-二氧代-硫吗啉基。
术语“杂芳基”是指呈5、6或7元环形式的一价芳族基团且包括具有5-20个原子的稠合环系(其中至少一个环是芳族的)，所述杂芳基含有一个或多个独立选自氮、氧和硫的杂原子。杂芳基的实例为吡啶基(包括例如2-羟基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括例如4-羟基嘧啶基)、吡唑基、***基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、***基、噻二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、二氮杂萘基和呋喃并吡啶基。
术语“治疗”和“处置”是指治疗性处置，其中目的是减缓(减轻)不期望的生理变化或障碍诸如关节炎或癌症的发展或扩散。就本申请目的而言，有益或期望的临床结果包括但不限于减轻症状、降低疾病程度、稳定疾病状态(即没有恶化)、延迟或减缓疾病进程、改善或缓和疾病状态及缓解(不论是部分还是全部)，不论是可检测到的还是不可检测到的。“治疗”还可指与在不接受治疗的情况下预期的存活相比使存活得以延长。需要治疗的那些人包括患有病症或障碍的那些人。
短语“治疗有效量”是指本发明化合物的以下量，其(i)治疗具体疾病、病症或障碍；(ii)减轻、改善或消除具体疾病、病症或障碍的一种或多种症状；或(iii)预防或延迟本申请所述具体疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作。在癌症的情况下，治疗有效量的药物可减少癌细胞的数目；减小肿瘤尺寸；抑制(即在一定程度上减缓且优选停止)癌细胞浸润到周围器官中；抑制(即在一定程度上减缓且优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻与癌症相关的一种或多种症状。药物可在一定程度上防止癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞，其可为抑制细胞生长和/或细胞毒性的。对于癌症疗法，效力可例如通过评价疾病进展时间(TTP)和/或确定应答率(RR)来测定。
术语“癌症”是指或描述哺乳动物中通常以细胞生长失调为特征的生理学状态。“肿瘤”包含一种或多种癌性细胞。癌症的实例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。上述癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)；肺癌，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、肺腺癌和肺鳞状细胞癌；腹膜癌；肝细胞癌；胃部癌症或胃癌，包括胃肠癌；胰腺癌；成胶质细胞瘤；***；卵巢癌；肝癌；膀胱癌；肝瘤；乳腺癌；结肠癌；直肠癌；结肠直肠癌；子宫内膜癌或子宫癌；唾液腺癌；肾部癌症或肾癌；***癌；外阴癌；甲状腺癌；肝癌瘤；***癌；***癌；及头颈癌。
“血液学恶性肿瘤”是影响血液、骨髓和***的癌症类型。由于这三者通过免疫***密切相关，因此影响这三者之一的疾病通常也将影响其它两者：虽然淋巴瘤是一种***疾病，但是它常常扩散到骨髓从而影响血液。血液学恶性肿瘤是恶性肿瘤(“癌症”)且通常由血液学和/或肿瘤学专家治疗。“血液学/肿瘤学”在一些中心是内科医学下的一个亚专科，而在其它中心被认为是单独的部门(其中也有外科和放射肿瘤学家)。不是所有血液学疾病都是恶性(“癌性”)的；这些其它血液疾病也可由血液学家处置。血液学恶性肿瘤可源于两个主要血细胞谱系：骨髓样和淋巴样细胞系。骨髓样细胞系通常产生粒细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞和肥大细胞；淋巴样细胞系产生B细胞、T细胞、NK细胞和浆细胞。淋巴瘤、淋巴细胞性白血病和骨髓瘤来自淋巴样细胞系，而急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征和骨髓增生性疾病源于骨髓样细胞。白血病包括急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性单核细胞性白血病(AMOL)和小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)。淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤(所有四种亚型)和非霍奇金淋巴瘤(NHL,所有亚型)。
“化学治疗剂”为可用于治疗癌症的化合物，无论作用机理如何。化学治疗剂的类别包括但不限于烷化剂、抗代谢物、纺锤体毒性植物生物碱、细胞毒性/抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、抗体、光敏剂和激酶抑制剂。化学治疗剂包括在“靶向疗法”和常规化学疗法中使用的化合物。化学治疗剂的实例包括：依鲁替尼(ibrutinib)(IMBRUVICATM,APCI-32765,Pharmacyclics Inc./Janssen Biotech Inc.；CAS Reg.No.936563-96-1,US7514444)、idelalisib(先前为CAL-101,GS 1101,GS-1101,Gilead Sciences Inc.；CASReg.No.1146702-54-6)、厄洛替尼(erlotinib)(
Genentech/OSI Pharm.)、多西他赛(docetaxel)(
Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧啶,5-氟尿嘧啶,CAS No.51-21-8)、吉西他滨(gemcitabine)(
Lilly)、PD-0325901(CASNo.391210-10-9,Pfizer)、顺铂(cisplatin)(
(SP-4-2)-二胺二氯化铂(II),顺式-二胺二氯化铂(II),CAS No.15663-27-1)、卡铂(carboplatin)(CAS No.41575-94-4)、紫杉醇(paclitaxel)(
Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、曲妥珠单抗(trastuzumab)(
Genentech)、替莫唑胺(temozolomide)(4-甲基-5-氧代-2,3,4,6,8-五氮杂二环[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲酰胺,CAS No.85622-93-1,
Schering Plough)、他莫昔芬(tamoxifen)((Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基乙胺,
)、多柔比星(doxorubicin)(
CAS No.23214-92-8)、Akti-1/2、HPPD和雷帕霉素(rapamycin)。
化学治疗剂包括B细胞受体靶标的抑制剂诸如BTK、Bcl-2和JAK抑制剂。
化学治疗剂的更多实例包括奥沙利铂(oxaliplatin)(
Sanofi)、硼替佐米(bortezomib)(
Millennium Pharm.)、舒尼替尼(sutent)(
SU11248,Pfizer)、来曲唑(letrozole)(
Novartis)、甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)(
Novartis)、XL-518(MEK抑制剂,Exelixis,WO2007/044515)、ARRY-886(Mek抑制剂,AZD6244,Array BioPharma,Astra Zeneca)、SF-1126(PI3K抑制剂,Semafore Pharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制剂,Novartis)、XL-147(PI3K抑制剂,Exelixis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、氟维司群(fulvestrant)(
AstraZeneca)、亚叶酸(leucovorin,folinic acid)、雷帕霉素(西罗莫司(sirolimus),
Wyeth)、拉帕替尼(lapatinib)(
GSK572016,Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(lonafarnib)(SARASARTM,SCH 66336,Schering Plough)、索拉非尼(sorafenib)(
BAY43-9006,Bayer Labs)、吉非替尼(gefitinib)(
AstraZeneca)、伊立替康(irinotecan)(
CPT-11,Pfizer)、替吡法尼(tipifarnib)(ZARNESTRATM,Johnson&Johnson)、ABRAXANETM(不含Cremophor)、紫杉醇的白蛋白工程化纳米粒制剂(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Il)、凡德他尼(vandetanib)(rINN,ZD6474,
AstraZeneca)、苯丁酸氮芥(chloranmbucil)、AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)、坦西莫司(temsirolimus)(
Wyeth)、帕唑帕尼(pazopanib)(GlaxoSmithKline)、canfosfamide(
Telik)、塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclosphosphamide)
烷基磺酸酯，诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类，诸如苯佐替哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替哌(uredopa)；乙撑亚胺(ethylenimine)类和甲基氨基吖啶(methylamelamine)类，包括六甲密胺(altretamine)、三亚胺嗪(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三亚乙基硫化磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylomelamine)；番荔枝内酯类(尤其是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成性类似物托泊替康(topotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成性类似物)；cryptophycin类(特别是cryptophycin 1和cryptophycin 8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成性类似物KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；spongistatin；氮芥类，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷酰胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamineoxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)和乌拉莫司汀(uracil mustard)；硝基脲类，诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫斯汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，诸如烯二炔(enediyne)抗生素(例如刺孢霉素(calicheamicin)，包括刺孢霉素γ1I和刺孢霉素ωI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33:183-186)；dynemicin，包括dynemicin A；二膦酸盐，诸如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；及新抑癌蛋白生色团(neocarzinostatin chromophore)和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团(related chromoprotein enediyne antibiotic chromophore)、aclacinomysin类、放线菌素(actinomycin)、authramycin、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉子基-多柔比星、去氧多柔比星、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、奈莫柔比星(nemorubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycin)类诸如丝裂霉素C(mitomycin C)、麦考酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌罗霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物，诸如甲氨喋呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨喋呤、喋罗呤(pteropterin)和三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)和硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮杂尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、伊诺他滨(enocitabine)和氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，诸如卡普睾酮(calusterone)、丙酸甲雄烷酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)和睾内酯(testolactone)；抗肾上腺素药(anti-adrenal)，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)和曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；伊达曲杀(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃坡霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓(galliumnitrate)；羟基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登醇类，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；mopidanmol；根瘤菌剂(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基肼；丙卡巴肼(procarbazine)；
多糖复合物(JHSNatural Products,Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2’,2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯(trichothecene)(尤其是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A(roridin A)和anguidine)；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；塞替派；6-硫代鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨喋呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春碱(vinblastine)；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)；长春瑞滨(vinorelbine)
诺消灵(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；伊达曲杀(edatrexate)；柔红霉素(daunomycin)；氨基喋呤(aminopterin)；卡培他滨(capecitabine)(
Roche)；伊班膦酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇类，诸如视黄酸；及上述任何物质的药用盐、酸和衍生物。
以下物质也包括在“化学治疗剂”的定义中：(i)用于调节或抑制激素对肿瘤作用的抗激素药，诸如抗***药和选择性***受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括
枸橼酸他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛西芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和
(枸橼酸托米芬(toremifine citrate))和选择性***受体调节剂(SERD)诸如氟维司群(fulvestrant)(
Astra Zeneca)；(ii)抑制芳香酶(芳香酶在肾上腺中调节***的产生)的芳香酶抑制剂，诸如4(5)-咪唑类、氨鲁米特、
(醋酸甲地孕酮(megestrol acetate))、
(依西美坦(exemestane)；Pfizer)、formestanie、法倔唑(fadrozole)、
(伏氯唑(vorozole))、
(来曲唑；Novartis)和
(阿那曲唑(anastrozole)；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素药，诸如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧杂环戊烷核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂，诸如MEK抑制剂，诸如考比替尼(cobimetinib)(WO2007/044515)；(v)脂质激酶抑制剂，诸如taselisib(GDC-0032,Genentech Inc.)；(vi)反义寡核苷酸，特别是抑制异常细胞增殖所涉及的信号传导途径中基因表达的那些反义寡核苷酸，例如PKC-α、Ralf和H-Ras，诸如奥利默森(oblimersen)(
Genta Inc.)；(vii)核酶，诸如VEGF表达抑制剂(例如
)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，诸如基因治疗疫苗，例如
和
rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂，诸如
和
rmRH；(ix)抗血管生成药，诸如贝伐珠单抗(bevacizumab)(
Genentech)；及上述任何物质的药用盐、酸和衍生物。
治疗性抗体也包括在“化学治疗剂”的定义中，诸如阿仑珠单抗(alemtuzumab)(Campath)、贝伐珠单抗(bevacizumab)(
Genentech)；西妥昔单抗(cetuximab)(
Imclone)；帕木单抗(panitumumab)(
Amgen)、利妥昔单抗(rituximab)(
Genentech/Biogen Idec)、培妥珠单抗(pertuzumab)(PERJETATM,2C4,Genentech)、曲妥珠单抗(trastuzumab)(
Genentech)、曲妥珠单抗-美坦新偶联物(trastuzumab emtansine)(
Genentech Inc.)和托西莫单抗(tositumomab)(BEXXAR,Corixia)。
“代谢物”为通过具体化合物或其盐的体内代谢而产生的产物。化合物的代谢物可使用本领域已知的常规技术来鉴定且它们的活性可使用本申请描述的测试来确定。上述产物可源于例如对所施用的化合物进行的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱酯化、酶法裂解等。因此，本发明包括本发明化合物的代谢物，包括通过以下方法而产生的化合物，所述方法包括使本发明的式I化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的一段时间。
术语“包装说明书”是指通常包含在治疗性产品的市售包装中的说明书，其含有涉及使用上述治疗性产品的关于适应症、用法、剂量、施用、禁忌症和/或注意事项的信息。
术语“手性”是指具有镜像配对体不可重叠性的分子，而术语“非手性”是指可与其镜像配对体重叠的分子。
术语“立体异构体”是指具有相同的化学组成但原子或基团的空间排列不同的化合物。
“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心且其分子不互为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质例如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体的混合物可通过高分辨率分析操作诸如电泳和色谱来分离。
“对映异构体”是指化合物的互为不可重叠镜像的两种立体异构体。
本申请使用的立体化学定义和常识大体上符合S.P.Parker,Ed.,McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；和Eliel,E.and Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds”,John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994。本发明化合物可含有不对称中心或手性中心，因此以不同的立体异构形式存在。本发明意在包括本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体及它们的混合物诸如外消旋混合物，这形成本发明的一部分。多种有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有使平面偏振光的平面发生旋转的能力。当描述具有光学活性的化合物时，前缀D和L或R和S用于表示分子就其手性中心而言的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)用于指定化合物使平面偏振光发生旋转的符号，其中(-)或l表示化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物是右旋的。对于所给定的化学结构，这些立体异构体除互为镜像外是相同的。具体的立体异构体也可称为对映异构体且上述异构体的混合物通常称为对映异构体的混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，当化学反应或方法不具有立体选择性或立体特异性时，可出现所述外消旋混合物或外消旋体。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指两种对映异构物质的等摩尔混合物，其不具有光学活性。对映异构体可通过手性分离方法诸如超临界流体色谱(SFC)从外消旋混合物中分离。在分离的对映异构体中的手性中心上的构型分配可能是暂定的且为了说明目的而描绘于表1结构中，而立体化学是诸如由X射线晶体学数据确定性建立的。
术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指具有不同能量的可通过低能垒互相转化的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括通过质子的迁移来进行的互相转化诸如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过一些成键电子的重组来进行的互相转化。
术语“药用盐”是指在生物学上或其它方面不是不期望的盐。药用盐包括酸和碱加成盐。短语“药用”表示物质或组合物必须与制剂包含的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物在化学和/或毒理学上是相容的。
术语“药用酸加成盐”是指与无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸和选自脂族、脂环族、芳族、芳基-脂族、杂环、羧酸和磺酸类有机酸的有机酸诸如甲酸、乙酸、丙酸、羟基乙酸、葡糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、枸橼酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、扑酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸的那些药用盐。
术语“药用碱加成盐”是指与有机或无机碱形成的药用盐。可接受的无机碱的实例包括钠盐、钾盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐和铝盐。衍生自药用有机无毒碱的盐包括以下物质的盐：伯胺、仲胺和叔胺、经取代的胺包括天然存在的经取代的胺、环状胺和碱性离子交换树脂诸如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、三甲胺、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和聚胺树脂。
“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明化合物的缔合物或络合物。形成溶剂化物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。
术语“EC50”是半数最大有效浓度且表示获得最大体内特定效果的50％所需要的特定化合物的血浆浓度。
术语“Ki”是抑制常数且表示特定抑制剂与受体的绝对结合亲和力。若不存在竞争性配体(例如放射性配体)，则使用竞争结合测定法测量且等于特定抑制剂占据50％受体时的浓度。Ki值可对数转换成pKi值(-log Ki)，其中较高的值以指数方式表示较大的效力。
术语“IC50”是半数最大抑制浓度且表示获得体外生物学过程的50％抑制所需要的特定化合物的浓度。可将IC50值对数转换成pIC50值(-log IC50)，其中较高的值以指数方式表示较大的效力。IC50值不是绝对值，而是取决于实验条件例如所使用的浓度且可使用Cheng-Prusoff方程(Biochem.Pharmacol.(1973)22:3099)转化为绝对抑制常数(Ki)。可计算其它百分比抑制参数诸如IC70、IC90等。
术语“本申请化合物”、“本发明化合物”和“式I化合物”包括式I化合物及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、药用盐和前药。
本申请给出的任何式或结构(包括式I化合物)还意在表示上述化合物的水合物、溶剂化物和多晶型物及它们的混合物。
本申请给出的任何式或结构(包括式I化合物)还意在表示所述化合物的未标记的形式及经同位素标记的形式。经同位素标记的化合物具有本申请给出的化学式所描述的结构，除了一个或多个原子被具有所选原子量或质量数的原子代替。可引入到本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素诸如但不限于2H(氘,D)、3H(氚)、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。本发明包括各种经同位素标记的本发明化合物，例如放射性同位素诸如3H、13C和14C被引入到其中的那些本发明化合物。上述经同位素标记的化合物可用于代谢研究、反应动力学研究、检测或成像技术诸如正电子发射断层扫描术(PET)或单光子发射计算机断层扫描术(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定或对患者进行的放射性治疗。经氘标记或代替的本发明治疗性化合物可具有改善的DMPK(药物代谢和药物动力学)性质，包括吸收、分布、代谢和***(ADME)。用较重的同位素诸如氘进行的代替可由于较好的代谢稳定性而得到一些治疗优点(例如体内半衰期的增加或剂量需要的降低)。经18F标记的化合物可用于PET或SPECT研究。经同位素标记的本发明化合物及其前药通常可如下制备：实施下述方案或实施例和制备中公开的操作且用容易得到的经同位素标记的试剂代替未经同位素标记的试剂。另外，用较重的同位素特别是氘(即2H或D)进行的代替可由于较好的代谢稳定性而得到一些治疗优点(例如体内半衰期的增加或剂量需要的降低或治疗指数的改善)。应该理解的是，本申请中的氘被认为是式(I)化合物中的取代基。上述较重的同位素特别是氘的浓度可通过同位素富集因子来定义。在本发明化合物中，未特别指定为具体同位素的任何原子意在表示该原子的任何稳定的同位素。除非另有说明，当某个位置被具体指定为“H”或“氢”时，应该理解的是，所述位置具有浓度为氢的天然丰度同位素组成的氢。因此，在本发明化合物中，具体指定为氘(D)的任何原子意在表示氘。
三环PI3K抑制剂化合物
本发明提供式I三环抑制剂化合物或其立体异构体、互变异构体和药用盐及其药物制剂，其可潜在用于治疗癌症且具有以下结构：
其中
虚线/实线表示单键或双键；
Xa为CRa、N、NRb、O或S；
Xb为C或N；
Xc为C或N；
Xd为CR2或N；
其中Xa、Xb和Xc中的至少一个为N、O或S；
Ra选自H、C1-C6烷基、-CN和F；
Rb选自H和C1-C6烷基；
R1选自Br、Cl、I、C2-C20杂环基、C1-C20杂芳基、-NR3R4和-OR5；
R2选自H、F、Cl、C1-C6烷基和-O(C1-C6烷基)；
R3选自H和C1-C6烷基；
R4选自H、C1-C6烷基、C2-C20杂环基和C1-C20杂芳基；
或R3和R4形成4元、5元或6元杂环基环；
R5选自C1-C6烷基、C2-C20杂环基和C1-C20杂芳基；
R6独立选自H、C1-C4烷基和F；
或两个偕位或邻位R6基团可形成3、4或5元碳环；
p为2、3或4；
A选自C6-C20芳基、-(C6-C20芳基)-(C6-C20芳基)、-(C6-C20芳基)-(C1-C20杂芳基)、-(C6-C20芳基)-(C2-C20杂环基)、-(C1-C20杂芳基)-(C2-C20杂环基)、-(C1-C20杂芳基)-(C1-C20杂芳基)、C2-C20杂环基和C1-C20杂芳基；和
其中烷基、芳基、杂环基和杂芳基任选取代有一个或多个独立选自以下的基团：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、C(CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CH2OP(O)(OH)2、-CH2F、-CHF2、-CH2NH2、-CH2NHSO2CH3、-CH2NHCH3、-CH2N(CH3)2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CONHCH2CH3、-CONHCH(CH3)2、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、-NO2、＝O、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2N(CH3)2、-OP(O)(OH)2、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-S(O)2CH3、-S(O)3H、环丙基、环丁基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、环戊基、四氢呋喃基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基和四氢吡喃基。
本发明的示例性实施方案包括式Ia-If化合物：
本发明的示例性实施方案包括式Ig化合物：
本发明的示例性实施方案包括式Ih-j化合物：
本发明的示例性实施方案包括式Ik-m化合物：
本发明的示例性实施方案包括式In-p化合物：
其中Y为O或NR3；和
R7选自H、环丙基、环丁基和C1-C6烷基，其任选取代有F、Cl、-OCH3或-OH；或R3和R7形成4元、5元或6元杂环基环。
示例性式Ij-l化合物包括其中Y为NH。
示例性式Ij-l化合物包括其中Y为NR3且R3和R7形成吡咯烷基环。
示例性式Ij-l化合物包括其中Y为O。
示例性式I化合物包括其中R1为Br或经取代的吡唑基。
示例性式I化合物包括其中R1选自：
其中波浪线表示连接的位点。
示例性式I化合物包括其中A为经取代的苯并[d]噁唑基或经取代的苯并噻唑基。
示例性式I化合物包括其中A选自以下结构：
其中波浪线表示连接的位点。
式I化合物的示例性实施方案包括表1中的化合物。
本发明式I化合物可含有不对称或手性中心且因此以不同的立体异构形式存在。本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体及其混合物诸如外消旋混合物，构成本发明一部分。在一些情况下，立体化学尚未确定或已暂时归属。
此外，本发明包括所有非对映异构体，包括顺式-反式(几何)和构象异构体。例如，若式I化合物包含双键或稠环，则顺式和反式形式及其混合物包括在本发明范围内。
在本申请所示的结构中，若未指定任何特定手性原子的立体化学，则本发明化合物意在包括所有立体异构体。若立体化学通过表示特定构型的实心楔形线或虚线指定，则该立体异构体如此指定和定义。
本发明化合物可按非溶剂化形式及与药用溶剂诸如水、乙醇等的溶剂化形式存在且本发明意欲包括溶剂化和非溶剂化形式两者。
本发明化合物也可按不同的互变异构形式存在且所有此类形式都包括在本发明范围内。术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指具有不同能量的可通过低能垒相互转化的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括通过质子迁移而进行的互相转化，诸如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过一些成键电子的重组而进行的互相转化。
如本申请所述的发明。
生物学评价
式I化合物作为酶活性(或其它生物活性)的抑制剂的相对效力可如下确定：确定每种化合物将活性抑制至预定程度的浓度，然后比较结果。通常，优选的确定是在生化测定中抑制50％活性的浓度即50％抑制浓度或“IC50”。可使用本领域已知的常规技术确定IC50值。通常，IC50可通过在所研究的一定浓度范围的抑制剂存在下测量给定酶的活性来确定。然后将实验获得的酶活性值相对于所用的抑制剂浓度作图。显示50％酶活性(与不存在任何抑制剂的情况下的活性相比)的抑制剂浓度作为IC50值。类似地，可通过适当的活性确定来定义其它抑制浓度。例如，在一些情况下，可能需要确定90％抑制浓度即IC90等。
使用实施例901的方法确定本发明化合物作为PI3Kα的抑制剂的能力。本发明的代表性化合物表现出针对PI3Kα同工型的强活性。
表1和2中的示例性式I化合物根据本发明的方法制备、表征和测试了与PI3Kα的结合并且具有以下结构、相应的名称(ChemBioDraw,14.0.0版,CambridgeSoft Corp.,Cambridge MA)和生物活性。当多于一个名称与式I化合物或中间体相关时，应以化学结构限定该化合物。
表1.式I化合物
表2.式I化合物
式I化合物的施用
本发明化合物可通过适于待治疗的病状的任何途径来施用。合适的途径包括口服、胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、皮内、鞘内和硬膜外)、经皮、直肠、经鼻、局部(包括含服和舌下)、***、腹膜内、肺内和鼻内。对于局部免疫抑制治疗，所述化合物可通过病灶内施用(包括灌注或在移植前使移植物与抑制剂接触)来施用。应该理解的是，优选的途径可随例如接受者的情况而变化。当所述化合物口服施用时，可将其与药用载体或赋形剂一起配制成丸剂、胶囊剂、片剂等。当所述化合物胃肠外施用时，可如下所述将其与药用胃肠外媒介物一起配制且配制成单位剂量注射形式。
治疗人类患者的剂量可为约1mg至约1000mg式I化合物。典型的剂量可为约10mg至约300mg所述化合物。剂量可每日施用一次(QID)、每日施用两次(BID)或更频繁地施用，这取决于具体化合物的药物动力学性质和药效学性质，包括吸收、分布、代谢和***。另外，毒性因素可影响剂量和施用方案。当口服施用时，丸剂、胶囊剂或片剂可每日或以更低的频率服用所指定的一段时间。方案可重复多个治疗周期。
使用式I化合物的治疗方法
本发明式I化合物可用于治疗患有由于与PI3K相关的异常细胞生长、功能或行为而引起的疾病或病症诸如癌症的人类或动物患者，因此可通过包括对其施用如上定义的本申请化合物的方法来治疗。患有癌症的人类或动物患者也可通过包括对其施用如上定义的本发明化合物的方法来治疗。所述患者的状况可因此得以改善或缓解。
本发明方法还包括治疗癌症，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、***、***癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡癌、未分化癌、***状癌、***瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、胰腺癌、骨髓样病症、淋巴瘤、毛细胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经***癌症、霍奇金癌、白血病、支气管癌、甲状腺癌、肝癌和肝内胆管癌、肝细胞癌、胃癌、胶质瘤/成胶质细胞瘤、子宫内膜癌、黑色素瘤、肾癌和肾盂癌、膀胱癌、子宫体癌、子***、多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、骨髓性白血病、口腔癌和咽癌、非霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤和绒毛结肠腺瘤。
本发明还包括本申请描述的化合物用作治疗活性物质的用途。
本发明还包括本申请描述的化合物用于治疗癌症的用途，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、***、***癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡癌、未分化癌、***状癌、***瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、胰腺癌、骨髓样病症、淋巴瘤、毛细胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经***癌症、霍奇金癌、白血病、支气管癌、甲状腺癌、肝癌和肝内胆管癌、肝细胞癌、胃癌、胶质瘤/成胶质细胞瘤、子宫内膜癌、黑色素瘤、肾癌和肾盂癌、膀胱癌、子宫体癌、子***、多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、骨髓性白血病、口腔癌和咽癌、非霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤和绒毛结肠腺瘤。
本发明还包括本申请描述的化合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、***、***癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡癌、未分化癌、***状癌、***瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、胰腺癌、骨髓样病症、淋巴瘤、毛细胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经***癌症、霍奇金癌、白血病、支气管癌、甲状腺癌、肝癌和肝内胆管癌、肝细胞癌、胃癌、胶质瘤/成胶质细胞瘤、子宫内膜癌、黑色素瘤、肾癌和肾盂癌、膀胱癌、子宫体癌、子***、多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、骨髓性白血病、口腔癌和咽癌、非霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤和绒毛结肠腺瘤。
本发明还包括本申请描述的化合物，其用于治疗癌症，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、***、***癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡癌、未分化癌、***状癌、***瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、胰腺癌、骨髓样病症、淋巴瘤、毛细胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经***癌症、霍奇金癌、白血病、支气管癌、甲状腺癌、肝癌和肝内胆管癌、肝细胞癌、胃癌、胶质瘤/成胶质细胞瘤、子宫内膜癌、黑色素瘤、肾癌和肾盂癌、膀胱癌、子宫体癌、子***、多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、骨髓性白血病、口腔癌和咽癌、非霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤和绒毛结肠腺瘤。
基于表达分析、免疫组织化学分析和细胞系分布，结肠、乳腺、子宫颈、胃、肺的恶性肿瘤和多发性骨髓瘤最有可能对PI3K调节剂或抑制剂具有响应。
药物制剂
为了使用本发明化合物以对哺乳动物(包括人类)进行治疗性处置，通常根据标准药学实践将其配制为药物组合物。本发明该方面提供药物组合物，其包含本发明化合物及药用稀释剂或载体。
典型的制剂通过将本发明化合物与载体、稀释剂或赋形剂混合来制备。合适的载体、稀释剂、添加剂和赋形剂是本领域技术人员已知的且包括诸如碳水化合物、蜡、水溶性和/或溶胀性聚合物、亲水性或疏水性物质、明胶、油、溶剂、水等物质。所使用的具体载体、稀释剂或赋形剂将取决于施用本发明化合物的手段和目的。溶剂通常基于本领域技术人员认为就施用于哺乳动物而言是安全的溶剂(GRAS)来选择。通常，安全的溶剂是无毒水性溶剂诸如水及其它在水中可溶或可混的无毒溶剂。合适的水性溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG 400、PEG 300)及其混合物。制剂还可包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂及其它已知添加剂以使药物(即本申请化合物或其药物组合物)具有优质外观或有助于制造药物产品(即药品)。
制剂可使用常规溶解和混合操作来制备。例如，将散装药物物质(即本发明化合物或所述化合物的稳定化形式(例如与环糊精衍生物或其它已知复合剂的复合物))在一种或多种上述赋形剂存在下溶解在合适的溶剂中。将本发明化合物通常配制成药物剂型以提供可容易控制的药物剂量且使患者能够依从所开具的方案。
用于施用的药物组合物(或制剂)可取决于施用药物的方法而以多种方式包装。通常，用于分配的制品包括其中存放有呈合适形式的药物制剂的容器。合适的容器是本领域技术人员已知的且包括例如瓶(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金属筒等材料。容器还可包括防撬装置以阻止不慎取得包装内含物。另外，在容器上具有描述容器内含物的标签。标签还可包括合适的警告信息。
可制备本申请化合物的药物制剂用于各种施用途径和类型。例如，具有所需纯度的式I化合物可任选与药用稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂混合成冻干制剂、研磨粉末或水溶液形式(Remington’s Pharmaceutical Sciences(1980)第16版,Osol,A.编辑)。配制可如下进行：在环境温度在合适的pH以合适的纯度与生理学上可接受的载体即在所使用的剂量和浓度对接受者是无毒的载体混合。制剂的pH主要取决于具体用途和化合物浓度，但是可为约3至约8。在pH为5的乙酸盐缓冲液中的制剂是合适的实施方案。
所述药物通常可按固体组合物、冻干制剂或水溶液形式贮存。
本发明药物组合物将以与良好医学实践一致的方式(即施用量、浓度、时间安排、疗程、媒介物和途径)来配制、确定剂量和施用。在该背景下需要考虑的因素包括所治疗的具体病症、所治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床情况、病症的原因、递送药物的部位、施用的方法、施用的时间安排和医学实践者已知的其它因素。待施用的化合物的“治疗有效量”将取决于所考虑的上述因素且是改善或治疗过度增殖性病症所需要的最小量。
作为一般性建议，每剂胃肠外施用的初始药物有效量的抑制剂将为每日约0.01-100mg/kg即约0.1-20mg/kg患者体重，其中所使用的化合物的典型初始范围为0.3至15mg/kg/日。
可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在所使用的剂量和浓度对接受者是无毒的且包括缓冲剂，诸如磷酸盐、枸橼酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵、苄索氯胺；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯基吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，诸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。活性药物成分也可包埋在通过例如凝聚技术或界面聚合来制备的微囊中，例如分别为羟基甲基纤维素或明胶微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊，在胶体药物递送***(例如脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米粒和纳米囊)或***液中。上述技术参见Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980)。
可制备式I化合物的持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有式I化合物的固体疏水性聚合物的半渗透性基质，所述基质呈成形物品例如膜或微囊形式。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(甲基丙烯酸2-羟基乙基酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(US3773919)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物、非降解性乙烯-乙酸乙烯酯、降解性乳酸-羟乙酸共聚物例如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-羟乙酸共聚物和乙酸亮丙瑞林构成的注射用微球)和聚D-(-)-3-羟基丁酸。
制剂包括适于本申请所述施用途径的那些制剂。制剂可适宜地以单位剂量形式提供并可通过药学领域已知的任何方法制备。技术和制剂通常参见Remington’sPharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,PA)。上述方法包括使活性成分与作为一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，制剂如下制备：使活性成分与液体载体或微细分散的固体载体或这两者均匀和紧密的结合，然后按需对产品进行成型。
可将适于口服施用的式I化合物的制剂制备为离散的单位例如各自含有预定量的式I化合物的丸剂、胶囊剂、扁囊剂或片剂。压制片可如下制备：在合适的机器中对呈自由流动形式例如粉末或颗粒且任选混合有粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂的活性成分进行压制。模制片可如下制备：在合适的机器中对用惰性液体稀释剂润湿的粉末状活性成分的混合物进行模制。可任选对片剂进行包衣或刻痕并任选进行配制以使活性成分从其中缓慢或受控释放。可制备片剂、含片剂、糖锭剂、水性或油性混悬剂、可分散的粉末剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂例如明胶胶囊剂、糖浆剂或酏剂以供口服。意在口服的式I化合物的制剂可根据制备药物组合物的领域已知的任何方法来制备且上述组合物可含有一种或多种包括甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂在内的物质以提供适口的制剂。含有与适于制备片剂的无毒的生理学上可接受的赋形剂混合的活性成分的片剂是可接受的。这些赋形剂可为例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，诸如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，诸如淀粉、明胶或***胶；及润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可为未包衣的或可通过包括微囊化在内的已知技术来包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收且由此在较长的时段内提供持续的作用。例如，可使用时间延迟物质诸如单独或与蜡组合的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
就治疗眼或其它外部组织例如口和皮肤而言，制剂可优选以局部用软膏剂或乳膏剂形式施用，其含有的活性成分的量为例如0.075至20％w/w。当配制成软膏剂时，活性成分可与石蜡性或水混溶性软膏基质一起使用。可选择地，活性成分可与水包油型乳膏基质一起配制成乳膏剂。若需要，则乳膏基质的水相可包含多元醇即具有两个或更多个羟基的醇例如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。局部用制剂可按需包含使活性成分通过皮肤或其它作用区域的吸收或渗透得以增强的化合物。上述皮肤渗透增强剂的实例包括二甲基亚砜和相关类似物。本申请乳剂的油相可由已知成分以已知方式构成。当所述相可仅包含乳化剂时，其按需包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。优选地，与亲脂性乳化剂一起包含的亲水性乳化剂作为稳定剂。还优选的是包含油和脂肪两者。另外，含有或不含有稳定剂的乳化剂构成所谓的乳化蜡且所述蜡与油和脂肪一起构成所谓的乳化乳膏基质，其形成乳膏剂的油性分散相。适用于本申请制剂的乳化剂和乳化稳定剂包括
鲸蜡硬脂醇、苄醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。
式I化合物的水性混悬剂含有活性物质与适于制备水性混悬剂的赋形剂的混合物。上述赋形剂包括助悬剂，诸如羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素、聚维酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、西黄蓍胶和***胶；及分散剂或润湿剂，诸如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、氧化烯与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七亚乙氧基鲸蜡醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯)。水性混悬剂还可含有一种或多种防腐剂诸如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂诸如蔗糖或糖精。
式I化合物的药物组合物可呈无菌注射剂诸如无菌注射用水性或油性混悬剂形式。该混悬剂可使用上述那些合适的分散剂或润湿剂和助悬剂根据本领域已知方法来配制。无菌注射剂还可为在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射用溶液剂或混悬剂诸如在1,3-丁二醇中的溶液剂或被制备为冻干粉末剂。可使用的可接受的媒介物和溶剂包括水、林格溶液和等张氯化钠溶液。另外，无菌不挥发性油通常可用作溶剂或混悬介质。出于该目的，可使用任何温和不挥发性油，包括合成性甘油一酯或甘油二酯。另外，脂肪酸例如油酸也可用于制备注射剂。
可与载体物质组合以制备单一剂量形式的活性成分的量将取决于所治疗的宿主和具体的施用模式而变化。例如，意在对人类口服施用的定时释放制剂可含有约1至1000mg活性物质化合物及合适和适宜量的可占总组合物的约5至约95％(重量:重量)的载体物质。可制备药物组合物以提供可容易测量的施用量。例如，意在静脉内输注的水性溶液剂可含有约3至500μg活性成分/毫升溶液，从而使合适体积的输注能够以约30mL/hr的速率进行。
适于胃肠外施用的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液剂，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等张的溶质；及水性和非水性无菌混悬剂，其可包含助悬剂和增稠剂。
适于局部施用至眼的制剂还包括滴眼剂，其中将活性成分溶于或混悬于合适的载体(尤其是针对活性成分的水性溶剂)中。活性成分在上述制剂中存在的浓度优选为约0.5至20％w/w，例如约0.5至10％w/w，例如约1.5％w/w。
适于在口中局部施用的制剂包括糖锭剂，其包含于矫味基质(通常是蔗糖和***胶或西黄蓍胶)中的活性成分；锭剂，其包含于惰性基质(诸如明胶和甘油或蔗糖和***胶)中的活性成分；及漱口剂，其包含于合适液体载体中的活性成分。
适于直肠施用的制剂可呈现为栓剂形式，其具有包含例如可可脂或水杨酸酯的合适基质。
适于肺内或经鼻施用的制剂具有例如0.1至500微米的粒度(包括在0.1和500微米之间且增量为诸如0.5、1、30、35微米等的粒度)，其如下施用：快速吸入通过鼻道或吸入通过口以到达肺泡囊。合适的制剂包括活性成分的水性或油性溶液剂。适于气雾或干粉施用的制剂可根据常规方法来制备并可与其它治疗剂例如迄今用于治疗或预防下述病症的化合物一起递送。
适于***施用的制剂可呈现为***栓剂、塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂形式，其除活性成分外还含有本领域已知的合适载体。
制剂可包装在单位剂量或多剂量容器例如密封的安瓿或小瓶中且可储存在冷冻干燥(冻干)状态下，其仅需要在使用前即刻加入无菌液体载体例如水以供注射。即时注射溶液剂和混悬剂由上述种类的无菌粉末、颗粒和片剂制备。优选的单位剂量制剂为含有本申请上述日剂量或单位日亚剂量或其合适分数的活性成分的那些制剂。
本发明还提供兽用组合物，其由此包含上述至少一种活性成分及兽用载体。兽用载体是可用于施用所述组合物目的的物质并可为固体、液体或气体物质，其在兽医领域中是惰性或可接受的且与活性成分相容。这些兽用组合物可胃肠外、口服或经任何其它所需途径施用。
组合疗法
式I化合物可单独或与用于治疗本申请所述疾病或病症例如炎症或过度增殖性病症(例如癌症)的其它治疗剂组合使用。在一些实施方案中，将式I化合物与具有抗炎或抗过度增殖性质或可用于治疗炎症、免疫应答障碍或过度增殖性病症(例如癌症)的额外的第二治疗性化合物组合在药物组合制剂或作为组合疗法的施用方案中。额外的治疗剂可为Bcl-2抑制剂、JAK抑制剂、抗炎剂、免疫调节剂、化学治疗剂、凋亡增强剂、神经营养因子、心血管疾病治疗剂、肝病治疗剂、抗病毒剂、血液病症治疗剂、糖尿病治疗剂和免疫缺陷障碍治疗剂。第二治疗剂可为NSAID抗炎剂。第二治疗剂可为化学治疗剂。药物组合制剂或施用方案中的第二化合物优选具有与式I化合物互补的活性，从而使它们不会相互不利地影响。上述化合物合适地以就所预期的目的而言是有效的量组合存在。在一个实施方案中，本申请组合物包含式I化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物或药用盐或前药与治疗剂诸如NSAID的组合。
组合疗法可按同时或先后方案来施用。当先后施用时，组合可按两次或更多次施用来施用。组合施用包括使用分开的制剂或单一的药物制剂共施用和以任何顺序先后施用，其中优选的是存在两种(或所有)活性剂同时发挥其生物活性的一段时间。
任何上述共施用的药物的合适剂量是目前所使用的那些剂量且可由于新鉴定的药物和其它治疗剂或处置措施的组合作用(协同作用)而降低。
联合疗法可提供“协同作用”且被证实是“协同的”，即当活性成分一起使用时实现的作用大于分别使用所述化合物所实现的作用的总和。当活性成分：(1)在组合单位剂量制剂中共配制且同时施用或递送；(2)以分开的制剂交替或平行递送；或(3)通过一些其它方案来施用时，可实现协同作用。当以交替疗法递送时，当化合物例如通过以不同的注射器分开注射、分开的丸剂或胶囊剂或分开的输注剂而先后施用或递送时，可实现协同作用。通常，在交替疗法期间，将有效剂量的每种活性成分先后即顺次施用，而在组合疗法中，将有效剂量的两种或更多种活性成分一起施用。
在疗法的具体实施方案中，式I化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物或药用盐或前药可与其它治疗剂、激素药物或抗体药物诸如本申请所述那些药物组合及与外科疗法和放射疗法组合。本发明组合疗法由此包括施用至少一种式I化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物或药用盐或前药及使用至少一种其它癌症治疗方法。式I化合物和其它药物活性治疗剂的量及相关的施用时间安排将被选择，从而实现所期望的组合治疗作用。
与式I化合物组合使用的额外治疗剂包括5-FU、多西他赛、艾日布林、吉西他滨、考比替尼、ipatasertib、紫杉醇、他莫昔芬、氟维司群、GDC-0810、***、帕泊昔布、贝伐珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗-美坦新偶联物、曲妥珠单抗和来曲唑。
式I化合物的代谢物
本申请所述式I的体内代谢产物也落入本发明范围内。上述产物可源于例如所施用的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱酯化、酶促裂解等。因此，本发明包括式I化合物的代谢物，包括由以下方法产生的化合物，所述方法包括使本发明化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的一段时间。
代谢产物通常如下鉴定：制备本发明化合物的经放射性标记的(例如14C或3H)同位素，将其以可检测的剂量(例如大于约0.5mg/kg)胃肠外施用至动物诸如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或施用至人类，允许足以发生代谢的时间(通常约30秒至30小时)且将其转化产物与尿、血液或其它生物样品分离。这些产物是容易分离的，这是因为它们是经标记的(其它通过使用能够与在代谢物中存活的抗原表位结合的抗体来分离)。代谢物结构以常规方式例如通过MS、LC/MS或NMR分析来确定。通常，对代谢物的分析以与本领域技术人员已知的常规药物代谢研究相同的方式来进行。代谢产物可用于对本发明化合物的治疗剂量进行诊断性测定，只要它们不是在体内另外存在的。
制品
本发明另一个实施方案提供含有可用于治疗上述疾病和病症的物质的制品或“试剂盒”。在一个实施方案中，试剂盒包含含有式I化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物或药用盐或前药的容器。试剂盒还可包含在容器上或与容器相关的标签或包装说明书。术语“包装说明书”用于指通常包含在治疗产品的市售包装中的说明书，其含有关于使用上述治疗产品所涉及的适应症、用法、剂量、施用、禁忌症和/或注意事项的信息。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。容器可由多种材料诸如玻璃或塑料来形成。容器可容纳可有效治疗病症的式I化合物或其制剂并可具有无菌接口(例如容器可为静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针头刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是式I化合物。标签或包装说明书指示组合物用于治疗所选择的病症例如癌症。另外，标签或包装说明书可指示待治疗的患者是患有病症诸如过度增殖性病症、神经变性、心脏肥大、疼痛、偏头痛或神经创伤性疾病或事件的患者。在一个实施方案中，标签或包装说明书指示包含式I化合物的组合物可用于治疗起因于异常细胞生长的病症。标签或包装说明书还可指示组合物可用于治疗其它病症。可选择或额外地，制品还可包含第二容器，其包含药用缓冲液诸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格溶液和葡萄糖溶液。其还可包含从商业和使用者角度来看所期望的其它物质，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
试剂盒还可包含关于施用式I化合物及第二药物制剂(若存在)的说明。例如，若试剂盒包含含有式I化合物的第一组合物和第二药物制剂，则试剂盒还可包含关于将第一和第二药物组合物同时、先后或分开给予有此需要的患者的说明。
在另一个实施方案中，试剂盒适于递送式I化合物的固体口服形式例如片剂或胶囊剂。上述试剂盒优选包含多个单位剂量。上述试剂盒可包含具有以其所预期的使用顺序而排列的剂量的卡片状物。上述试剂盒的一个实例是“泡罩包装”。泡罩包装在包装工业中是已知的且广泛用于包装药物单位剂量形式。可按需提供记忆辅助装置，其例如呈数字、字母或其它标记形式或具有指出在治疗安排中可进行施用的那些天的日历说明书。
根据一个实施方案，试剂盒可包含(a)在其中含有式I化合物的第一容器；及任选包含(b)在其中含有第二药物制剂的第二容器，其中第二药物制剂包含具有抗过度增殖活性的第二化合物。可选择或额外地，试剂盒还可包含第三容器，其包含药用缓冲液例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格溶液和葡萄糖溶液。其还可包含从商业和使用者角度来看所期望的其它物质，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
在试剂盒包含式I组合物和第二治疗剂的一些其它实施方案中，试剂盒可包含用于容纳分开的组合物的容器例如分开的瓶或分开的箔包装，然而分开的组合物也可包含在单一的未分开的容器中。典型地，试剂盒包含施用分开的组分的指导。当分开的组分优选以不同的剂量形式(例如口服和胃肠外)或以不同的剂量间隔来施用时或当主治医师需要对所组合的各个组分进行滴定时，试剂盒形式是特别有利的。
式I化合物的制备
式I化合物可通过以下合成途径来合成，所述合成途径包括与化学领域已知且尤其是借鉴本申请说明书的那些方法及用于其它杂环的那些方法类似的方法，所述其它方法参见：Comprehensive Heterocyclic Chemistry II,Katritzky和Rees编辑,Elsevier,1997,例如第3卷；Liebigs Annalen der Chemie,(9):1910-16,(1985)；HelveticaChimica Acta,41:1052-60,(1958)；Arzneimittel-Forschung,40(12):1328-31,(1990)，将其各自明确地引入作为参考。原料通常可由商业来源例如Aldrich Chemicals(Milwaukee,WI)得到或使用本领域技术人员已知的方法来容易地制备(例如通过在LouisF.Fieser和Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis,v.1-23,Wiley,N.Y.(1967-2006版)或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin(包括增补)(也可由Beilstein在线数据库得到)中概述的方法来制备)。
可用于合成式I化合物的合成化学转化和保护基方法学(保护和脱保护)及必要的试剂和中间体是本领域已知的并参见例如R.Larock,Comprehensive OrganicTransformations,VCH Publishers(1989)；T.W.Greene和P.G.M.Wuts,Protective Groupsin Organic Synthesis,第3版,John Wiley and Sons(1999)；和L.Paquette编辑,Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)及其后续版本。
实施例提供了制备式I化合物的示例性方法。本领域技术人员将认识到其它合成途径可用于合成式I化合物。虽然在附图和实施例中描述并讨论了具体的原料和试剂，但是可容易地替换为其它原料和试剂以提供多种衍生物和/或反应条件。另外，由所述方法制备的多种示例性化合物可在本公开内容的基础上使用本领域技术人员已知的常规化学方法来进一步修饰。
当制备式I化合物时，可能需要对中间体的远距离官能团(例如伯胺或仲胺)进行保护。对上述保护的需要将随着远距离官能团的性质和制备方法的条件而变化。合适的氨基保护基包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(BOC)、苄基氧基羰基(CBz)和9-芴基亚甲基氧基羰基(Fmoc)。对上述保护的需要由本领域技术人员容易地确定。关于保护基及其使用的一般描述参见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991。
在制备式I化合物的方法中，可能有利的是将反应产物彼此和/或与原料分离。通过本领域常规技术将每步或多步的所需产物分离和/或纯化至所需要的均匀度。通常，上述分离涉及多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱法。色谱法可涉及多种方法，包括例如：反相和正相色谱法；尺寸排阻色谱法；离子交换色谱法；高、中和低压液相色谱法和装置；小规模分析型色谱法；模拟移动床(SMB)和制备型薄层或厚层色谱法及小规模薄层和快速色谱法。
另一类分离方法涉及用所选择的试剂对混合物进行处理以与所需产物、未反应的原料、反应副产物等结合或以其它方式使所需产物、未反应的原料、反应副产物等是可分离的。上述试剂包括吸附剂或吸收剂例如活性炭、分子筛、离子交换介质等。可选择地，所述试剂可为酸(在碱性物质的情况下)、碱(在酸性物质的情况下)、结合剂诸如抗体、结合蛋白、选择性螯合剂例如冠醚、液/液离子萃取试剂(LIX)等。对适当分离方法的选择取决于所涉及的物质的性质例如沸点和分子量(在蒸馏和升华中)、存在或不存在极性官能团(在色谱法中)、物质在酸性和碱性介质中的稳定性(在多相萃取中)等。
非对映异构体混合物可基于其物理化学差异通过本领域技术人员已知的方法诸如色谱法和/或分级结晶被分离成其单独的非对映异构体。对映异构体可如下分离：对映异构体混合物通过与具有适当光学活性的化合物(例如手性助剂诸如手性醇或Mosher’s酰氯)反应而转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构体，然后将单独的非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯的对映异构体。另外，一些本发明化合物可为阻转异构体(例如经取代的联芳基化合物)且被认为是本发明一部分。对映异构体还可通过使用手性HPLC柱来分离。
基本上不含有其立体异构体的单一立体异构体例如对映异构体可通过对外消旋混合物进行拆分来得到，所述拆分所使用的方法为例如使用具有光学活性的拆分剂来形成非对映异构体(Eliel,E.和Wilen,S.“Stereochemistry of Organic Compounds”,JohnWiley&Sons,Inc.,New York,1994；Lochmuller,C.H.,(1975)J.Chromatogr.,113(3):283-302)。本申请手性化合物的外消旋混合物可通过任何合适的方法来分离，所述方法包括：(1)与手性化合物形成离子性非对映异构盐且通过分级结晶或其它方法来分离；(2)与手性衍生试剂形成非对映异构化合物，分离非对映异构体且转化为纯的立体异构体；和(3)在手性条件下直接分离基本上纯的或富集的立体异构体。参见“Drug Stereochemistry,Analytical Methods and Pharmacology”,Irving W.Wainer编辑,Marcel Dekker,Inc.,New York(1993)。
在方法(1)中，非对映异构盐可如下形成：使对映异构体纯的手性碱例如马钱子碱、奎宁、麻黄碱、***、α-甲基-β-苯基乙基胺(***)等与带有酸性官能团例如羧酸和磺酸的不对称化合物反应。可通过分级结晶或离子色谱法使非对映异构盐得以分离。为了分离氨基化合物的光学异构体，手性羧酸或磺酸例如樟脑磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸的添加可导致非对映异构盐的形成。
可选择地，通过方法(2)使待拆分的底物与手性化合物的一种对映异构体反应以形成非对映异构体对(E.and Wilen,S.“Stereochemistry of Organic Compounds”,JohnWiley&Sons,Inc.,1994,第322页)。非对映异构化合物可通过使不对称化合物与对映异构体纯的衍生试剂诸如薄荷基衍生物反应而形成，然后对非对映异构体进行分离和水解以得到纯的或富集的对映异构体。确定光学纯度的方法涉及制备外消旋混合物的手性酯诸如薄荷基酯例如碱存在下的(-)氯甲酸薄荷基酯或Mosher酯、α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基乙酸酯(Jacob III.J.Org.Chem.,(1982)47:4165)并针对两种阻转异构对映异构体或非对映异构体的存在对1H NMR谱进行分析。阻转异构化合物的稳定非对映异构体可如下分离和分开：进行正相和反相色谱法，然后进行用于分离阻转异构萘基-异喹啉的方法(WO96/15111)。在方法(3)中，两种对映异构体的外消旋混合物可通过使用手性固定相的色谱法来分离(“Chiral Liquid Chromatography”(1989)W.J.Lough编辑,Chapman and Hall,NewYork；Okamoto,J.Chromatogr.,(1990)513:375-378)。富集或纯化的对映异构体可通过用于区分具有不对称碳原子的其它手性分子的方法诸如旋光法和圆二色散法来区分。
本发明化合物如通用方案1至10所示进行制备。
方案1
a)溴、乙酸；b)碳酸钾、碘化钾、3-溴-1,1-二甲氧基丙烷、80℃；c)氯化铵、铁粉、甲醇、水、90℃；d)三氟乙酸、三乙基硅烷、DCM、0-20℃；e)A-COCl、三乙胺、THF；f)A-CO2H、DIPEA、HATU、DMF；g)乙酸、90℃；h)Ar-B(OR)2、Pd(dppf)Cl2、碳酸钠、1,4-二噁烷、水、100℃。
如方案1所示，对2-氨基-3-硝基苯酚进行溴化，得到化合物2。烷基化得到化合物3。用铁还原硝基，接着环化，得到化合物5。对化合物5进行酰化，接着在乙酸中环化，得到化合物6。与硼酸酯进行由钯催化的交叉偶联，得到化合物7。
方案2
i)HNR3-CH(R7)-CO2H、碘化亚铜(I)、磷酸钾、DMSO、100-120℃；j)氯化铵、HATU、DIPEA、DMSO或DMF。
如方案2所示，化合物6可通过与氨基酸进行由铜介导的交叉偶联转化为化合物8。通过与氯化铵和HATU反应实现酸8向伯酰胺9的转化。
方案3
k)4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)、Pd(dppf)Cl2、乙酸钾、1,4-二噁烷、80℃；l)乙酸、水、过氧化氢；m)CH3CO2-CH(R)-O-对甲苯磺酰基、碳酸钾、DMSO；n)氢氧化锂、甲醇、水；o)氯化铵、HATU、DIPEA、DMF。
如方案3所示，将芳基溴化物6转化为硼酸频哪醇酯，接着进行氧化，得到化合物10。用活化的α-羟基酯进行烷基化，接着进行酯水解，得到化合物11。通过与氯化铵和HATU反应实现酸11向伯酰胺12的转化。
方案4
p)硫光气、三乙胺、THF、0℃；q)碘甲烷、碳酸钾、丙酮；r)3-氯过氧苯甲酸、DCM；s)HNR2、DIPEA、2-丙醇、照射150℃。
如方案4所示，化合物5的环化可用硫光气进行，得到化合物13。进行S-甲基化，接着氧化成砜，得到化合物14。在微波加热下与胺反应，得到化合物15。
方案5
t)原甲酸三乙酯、对甲苯磺酸、100℃；u)二异丙基氨基锂、N-碘琥珀酰亚胺或N-氯琥珀酰亚胺、THF、-78℃；v)HNR2、照射140℃；w)A-B(OR)2、Pd(dppf)Cl2、乙酸钾、碳酸钠、水、乙腈、加热。
如方案5所示，化合物5可用原甲酸三乙酯环化，接着卤化，得到作为氯化物或碘化物的化合物16。在微波照射下与胺一起加热，得到化合物6。可选择地，与硼酸芳基酯进行由钯催化的Suzuki偶联，得到化合物6。
方案6
a)3,3-二乙氧基丙醇、NaH、DMF；b)1,1,1-三甲基碘化肼、KOtBu、DMSO；c)铁、氯化铵、甲醇、水、90℃；d)TFA、三乙基硅烷、DCM；e)如方案1-5所示的类似步骤。
如方案6所示，经取代的醇可置换17中的氟原子，得到芳基醚18。胺化可在碱存在下使用1,1,1-三甲基碘化肼进行。用铁还原硝基，接着在酸性条件下环化，可得到化合物21。向通用化合物22的转化可使用如方案1-5所示的类似步骤进行。
方案7
f)1,1,1-三甲基碘化肼、KOtBu、DMSO；g)铁、氯化铵、THF、乙醇、水、100℃；h)原甲酸三甲酯、对甲苯磺酸、100℃；i)三溴化硼、DCM、40℃；j)1,4-二溴丁烷、碳酸钾、DMF、100℃；k)如方案1-5所示的类似步骤。
如方案7所示，化合物23的胺化可在碱存在下使用1,1,1-三甲基碘化肼进行，得到化合物24。用铁还原硝基，接着在原甲酸三甲酯中环化，可得到化合物26。使用三溴化硼进行脱甲基化，接着用1,4-二溴丁烷进行二烷基化，可得到化合物28。向通用化合物29的转化可使用如方案1-5所示的类似步骤进行。
方案8
l)1,2-二溴乙烷、KOH、DMF、140℃；m)如方案1-5所示的类似步骤；n)HBr水溶液、亚硝酸钠、溴化铜(II)、0-100℃；o)经取代的醇、三苯基膦、偶氮二甲酸二异丙酯、THF；p)i.HCl、二噁烷、50℃，ii.碳酸钾、DMF、90℃。
如方案8所示，化合物2可在碱存在下用1,2-二溴乙烷环化，得到化合物30。向通用化合物31的转化可使用如方案1-5所示的类似步骤进行。可选择地，可使用Sandmeyer条件将化合物2转化为二溴化合物32。Mitsunobu条件使苯酚得以烷基化，得到具有确定立体化学的化合物33。进行Boc脱保护和环化，可得到化合物34，其可使用如方案1-5所示的类似步骤转化为通用化合物31。
方案9
q)4-溴丁酸甲酯、碘化钾、碳酸钾、丙酮、回流；r)氢氧化锂、甲醇、水、60℃；s)i.亚硫酰氯、DCM，ii.氯化铝、DCM、0℃；t)R-NHNH2、吡啶、60℃；u)来自方案1-5的类似步骤；v)肼、二甘醇二甲醚、120℃；w)ArBr、乙酸铜(II)、吡啶、90℃。
如方案9所示，化合物35可被烷基化且甲酯可被皂化，得到化合物36。得到酰氯，接着用氯化铝处理，可得到化合物37和38的混合物。化合物37可用经取代的肼处理，得到化合物39，其可使用如方案1-5所示的类似步骤转化为通用化合物40。可选择地，化合物37可用肼环化，得到化合物41。与芳基溴化物进行由铜催化的偶联，可得到化合物42和43的混合物；当分离时，可使用如方案1-5所示的类似步骤将化合物43转化为通用化合物44。
方案10
v)2-(3-氯丙基)-1,3-二氧杂环戊烷、碳酸钾、碘化钠、DMF、80℃；w)TFA、三乙基硅烷、DCM、0-25℃；x)铁、氯化铵、甲醇、水；y)原甲酸三甲酯、对甲苯磺酸、100℃；z)二异丙基氨基锂、N-碘琥珀酰亚胺、THF、-78℃；aa)来自方案1-5的类似步骤。
如方案10所示，化合物2可被烷基化，得到化合物45。用TFA和三乙基硅烷处理，可得到化合物46。用铁还原硝基，接着用原甲酸三甲酯环化，可得到化合物48。用二异丙基氨基锂处理，接着用N-碘琥珀酰亚胺处理，可得到化合物49。向通用化合物50的转化可使用如方案1-5所示的类似步骤进行。
实施例
缩写
DCM 二氯甲烷
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
ESI 电喷雾电离
h 小时
HATU 1-[二(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-***并[4,5-b]吡啶鎓
3-氧化物六氟磷酸盐
HPLC 高压液相色谱
LCMS 液相色谱质谱
LDA 二异丙基氨基锂
min 分钟
N 当量浓度
NMR 核磁共振
RT 保留时间
SFC 超临界流体色谱
THF 四氢呋喃
TFA 三氟乙酸
LCMS方法
LCMS方法A：在连接至具有PDA UV检测器的Waters Acquity UPLC***的WatersMicromass ZQ2000四极质谱仪上进行实验。质谱仪具有以正离子和负离子模式运行的电喷雾源。该***使用保持在40℃的Acquity BEH C18 1.7μm 100×2.1mm柱或保持在40℃和0.4mL/分钟流速的Acquity BEH Shield RP18 1.7μm 100×2.1mm柱。最初的溶剂***是前0.4分钟为含有0.1％甲酸的95％水(溶剂A)和含有0.1％甲酸的5％乙腈(溶剂B)，然后梯度在接下来的5.6分钟升至5％溶剂A和95％溶剂B。保持0.8分钟，然后在接下来的0.2分钟返回到95％溶剂A和5％溶剂B。总运行时间为8分钟。
LCMS方法B：在与使用ESI作为电离源的Agilent MSD质谱仪耦合的Agilent1100HPLC上进行实验。LC分离使用流速为0.4mL/分钟的Phenomenex XB-C18,1.7mm,50×2.1mm柱。溶剂A为含有0.1％甲酸的水且溶剂B为含有0.1％甲酸的乙腈。梯度为历经7分钟2-98％溶剂B且在平衡1.5分钟后将97％B保持1.5分钟。LC柱温度为40℃。在220nm和254nm收集UV吸光度并将质谱全扫描应用于所有实验。
LCMS方法C：在与使用ESI作为电离源的SHIMADZU MSD质谱仪耦合的SHIMADZU2020 HPLC上进行实验。LC分离使用流速为1mL/分钟的Shim-Pack XR-ODS-C18,50×3.0mm柱。溶剂A为含有0.05％TFA的水且溶剂B为含有0.05％TFA的乙腈。梯度为历经2.2分钟5-100％溶剂B且将100％B保持1分钟。LC柱温度为40℃。在190nm至400nm收集UV吸光度并将质谱全扫描应用于所有实验。
LCMS方法D：在与使用ESI作为电离源的SHIMADZU MSD质谱仪耦合的SHIMADZU2020 HPLC上进行实验。LC分离使用流速为1.2mL/分钟的Gemini-NX 3μC18 110A,50×3.0mm柱。溶剂A为含有0.4％NH4HCO3的水且溶剂B为乙腈。梯度为历经4分钟10-50％溶剂B且将50％B保持1.2分钟。LC柱温度为40℃。在190nm至400nm收集UV吸光度并将质谱全扫描应用于所有实验。
LCMS方法E：在与使用ESI作为电离源的SHIMADZU MSD质谱仪耦合的SHIMADZUUFLC-MS 2010EV上进行实验。LC分离使用流速为1mL/分钟的Shim-Pack XR-ODS-C18,50×3.0mm柱。溶剂A为含有0.05％TFA的水且溶剂B为含有0.05％TFA的乙腈。梯度为历经2.2分钟5-100％溶剂B且将100％B保持1分钟。LC柱温度为40℃。在190nm至400nm收集UV吸光度并将质谱全扫描应用于所有实验。
LCMS方法F：在与使用ESI作为电离源的SHIMADZU MSD质谱仪耦合的ShimadzuLCMS-2020上进行实验。LC分离使用流速为1mL/分钟的Ascentis Express C18,50×2.1mm柱。溶剂A为含有0.05％TFA的水且溶剂B为含有0.05％TFA的乙腈。梯度为历经2.0分钟5-95％溶剂B且将95％B保持0.7分钟。LC柱温度为40℃。在190nm至400nm收集UV吸光度并将质谱全扫描应用于所有实验。
LCMS方法G：在与使用ESI作为电离源的SHIMADZU MSD质谱仪耦合的ShimadzuLCMS-2020上进行实验。LC分离使用流速为1.2mL/分钟的Gemini-NX 3μC18 110A,50×3.0mm柱。溶剂A为含有0.05％NH4HCO3的水且溶剂B为乙腈。梯度为历经2.2分钟95％溶剂B且将95％B保持1分钟。LC柱温度为45℃。在190nm至400nm收集UV吸光度并将质谱全扫描应用于所有实验。
实施例101 5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺101
步骤1：2-氨基-5-溴-3-硝基苯酚
在25℃将溴(51.9g,324mmol)逐滴添加至2-氨基-3-硝基苯酚(50.0g,324mmol)于乙酸中的溶液并将反应混合物在25℃搅拌过夜。通过过滤收集固体，得到粗标题化合物(84g,80％纯度(LCMS),89.1％)，其为红色固体且未经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝233/235。
步骤2：4-溴-2-(3,3-二甲氧基丙氧基)-6-硝基苯胺
将2-氨基-5-溴-3-硝基苯酚(93g,399mmol)、碳酸钾(110g,797mmol)、碘化钾(13.0g,78.3mmol)和3-溴-1,1-二甲氧基丙烷(87.4g,478mmol)于DMF(600mL)中的混合物在80℃搅拌4h。然后将反应混合物冷却至室温并过滤所得固体。滤液用水稀释并用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用盐水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥且真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到110g(82.7％)标题化合物，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.44(d,J＝2.4Hz,1H),7.24(s,2H),7.21(d,J＝2.0Hz,1H),4.71-4.68(m,1H),4.11-4.08(m,2H),3.27(s,6H),2.08-2.03(m,2H)。
步骤3：5-溴-3-(3,3-二甲氧基丙氧基)苯-1,2-二胺
将4-溴-2-(3,3-二甲氧基丙氧基)-6-硝基苯胺(30.0g,89.6mmol)、氯化铵(43.0g,811mmol)和铁粉(30.0g,436mmol)于甲醇/水(150mL/150mL)中的混合物在90℃搅拌2h。将溶液冷却至室温并过滤所得固体。滤液用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到22g(81.4％)标题化合物，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.40(d,J＝2.0Hz,1H),6.32(d,J＝2.0Hz,1H),4.79(s,2H),4.66-4.63(m,1H),4.13(s,2H),3.92-3.89(m,2H),3.26(s,6H),1.99-1.94(m,2H)。
步骤4：8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺
在0℃将三氟乙酸(20mL)和三乙基硅烷(3.20g,27.6mmol)逐滴添加至5-溴-3-(3,3-二甲氧基丙氧基)苯-1,2-二胺(1.70g,5.57mmol)于DCM(20mL)中的溶液同时保持惰性氮气气氛。将所得溶液在0℃搅拌10min，然后在室温再搅拌2h。真空蒸发反应混合物。用碳酸氢钠水溶液将混合物调节至pH 10，然后用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-20％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到0.6g(44.4％)标题化合物，其为灰白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.46(d,J＝2.4Hz,1H),6.26(d,J＝2.4Hz,1H),5.01(s,2H),4.37(br,1H),3.98-3.94(m,2H),3.09-3.04(m,2H),1.87-1.79(m,2H)。
步骤5：4-羟基-3-硝基苯甲酰氯
将4-羟基-3-硝基苯甲酸(1.83g,9.99mmol)和亚硫酰氯(1.1mL,15.2mmol,)于1,2-二甲氧基乙烷(20mL)中的混合物在80℃搅拌过夜。真空蒸发反应混合物，得到粗标题化合物，其未经进一步纯化即使用。
步骤6：N-(8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)-4-羟基-3-硝基苯甲酰胺
在0℃将于THF(20mL)中的4-羟基-3-硝基苯甲酰氯(2.01g粗品)逐滴添加至8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺(2.42g,9.96mmol)和三乙胺(1.21g,12.0mmol)于THF(100mL)中的溶液。将所得溶液在室温搅拌1h，然后通过添加水淬灭。所得溶液用乙酸乙酯萃取且合并有机层且用无水硫酸镁干燥。滤出固体并真空蒸发滤液。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-30％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到3.0g(73.8％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝408/410。
步骤7：4-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-2-硝基苯酚
将N-(8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)-4-羟基-3-硝基苯甲酰胺(3g,7.35mmol)于乙酸(50mL)中的混合物在90℃搅拌2h。真空蒸发所得混合物，得到2.9g粗标题化合物，其未经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝390/392。
步骤8：2-氨基-4-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯酚
将4-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-2-硝基苯酚(130mg,0.330mmol)和铁粉(93.0mg,1.66mmol)于AcOH(10mL)中的混合物在50℃搅拌2h。通过过滤除去所得固体。真空蒸发滤液，得到250mg粗标题化合物，其为黑色固体且未经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝360/362。
步骤9：5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺
将2-氨基-4-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯酚(250mg,粗品)和溴化氰(147mg,1.39mmol)于甲醇/水(15mL/5mL)中的混合物在室温搅拌2h。反应混合物用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用无水硫酸镁干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-5％甲醇/DCM)纯化，得到98mg(76.5％,历经两步)101，其为黄色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.69,[M+H]+＝385/387,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.59-7.57(m,3H),7.51-7.36(m,3H),6.89(s,1H),4.45-4.42(m,2H),4.33-4.29(m,2H),2.38-2.25(m,2H)。
实施例102 4-溴-1-(2-甲基噁唑并[4,5-b]吡啶-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁102
遵循本申请的操作制备102。[M+H]+＝385.10
实施例103 1-(1-(2-甲基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺103。[M+H]+＝418.18
遵循本申请的操作制备103。[M+H]+＝385
实施例104(S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺104
步骤1：(S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酸
将5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(50.0mg,0.130mmol)、(S)-吡咯烷-2-甲酸(75.0mg,0.651mmol)、碘化亚铜(I)(8.00mg,0.0420mmol)和磷酸钾(193mg,0.909mmol)于DMSO(2mL)中的混合物在微波照射下在120℃加热90min。通过过滤除去固体且棕色滤液未经纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝420。
步骤2：(S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺
将(S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酸(粗品)、氯化铵(135mg,2.52mmol)、HATU(193mg,0.508mmol)和DIPEA(707mg,5.47mmol)于DMSO(2mL)中的混合物在室温搅拌2h。反应溶液用水稀释，然后用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物且真空蒸发。所得残余物经由反相HPLC纯化并冻干，得到9.9mg(18.2％,历经两步)104，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.00,[M+H]+＝419,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.56-7.54(m,3H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.4Hz,1H),7.29(s,1H),7.02(s,1H),6.36(s,1H),6.07(s,1H),4.36-4.34(m,2H),4.25-4.22(m,2H),3.85-3.83(m,1H),3.60-3.57(m,1H),3.25-3.10(m,1H),2.26-2.19(m,3H),2.03-1.92(m,3H)。
实施例105(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺105
步骤1：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酸和(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酸
遵循与实施例104步骤1类似的操作由来自实施例101的5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(300mg,0.779mmol)和(S)-2-氨基丙酸(347mg,3.89mmol)制备标题化合物200mg(粗品)，其为主要(S)和次要(R)立体异构体的混合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝394。
步骤2：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺和(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺
遵循与实施例104步骤2类似的操作由(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酸(200mg粗品)制备标题化合物95mg(31％,历经两步)(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺105和40mg(13.1％,历经两步)(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺107(实施例107)并通过手性HPLC分离两种立体异构体。105：LCMS(ESI):RT(min)＝1.99,[M+H]+＝393,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.55(s,2H),7.51(s,1H),7.45(d,J＝8.1Hz,1H),7.32(d,J＝8.1Hz,1H),7.29(s,1H),6.94(s,1H),6.37(s,1H),6.20(s,1H),5.42(d,J＝7.5Hz,1H),4.33-4.31(m,2H),4.21-4.18(m,2H),3.75-3.70(m,1H),2.17-2.32(m,2H),1.31(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例106(S)-2-((1-苯基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺106
步骤1：(S)-2-(4-氨基-3-(3,3-二甲氧基丙氧基)-5-硝基苯基氨基)丙酸
将4-溴-2-(3,3-二甲氧基丙氧基)-6-硝基苯胺(2g,5.97mmol)、碘化亚铜(I)(340mg,1.79mmol)、磷酸钾(7.59g,35.8mmol)和(S)-2-氨基丙酸(2.66g,29.9mmol)于DMSO(20mL)中的混合物置于管中并将混合物在超声条件下用氮气脱气。将管密封并在90℃搅拌16h。过滤所得固体且棕色滤液未经纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝344。
步骤2：(S)-2-(4-氨基-3-(3,3-二甲氧基丙氧基)-5-硝基苯基氨基)丙酰胺
将(S)-2-(4-氨基-3-(3,3-二甲氧基丙氧基)-5-硝基苯基氨基)丙酸(粗品)、氯化铵(4.62g,86.4mmol)、HATU(4.42g,11.6mmol)和DIPEA(15.0g,116mmol)于DMSO(20mL)中的混合物在室温搅拌1h。反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-5％甲醇/DCM)纯化，得到800mg(39.2％,历经两步)标题化合物，其为红色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.39(s,1H),6.99(s,1H),6.73-6.69(m,3H),6.53(s,1H),5.57-5.55(m,1H),4.69(t,J＝5.6Hz,1H),4.01-3.98(m,2H),3.71-3.68(m,1H),3.28(s,6H),2.09-2.05(m,2H),1.27(d,J＝6.8Hz,3H)。
步骤3：(S)-2-(6-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-8-基氨基)丙酰胺
在0℃将三氟乙酸(5mL,67.3mmol)和三乙基硅烷(676mg,5.81mmol)逐滴添加至(S)-2-(4-氨基-3-(3,3-二甲氧基丙氧基)-5-硝基苯基氨基)丙酰胺(400mg,1.17mmol)于DCM(20mL)中的溶液并将反应混合物在0℃搅拌10min。真空蒸发混合物并用碳酸氢钠水溶液将pH值调节至8且所得溶液用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发，得到140mg粗标题化合物，其为紫色固体且未经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.48-7.46(m,1H),7.39(s,1H),6.99(s,1H),6.78(s,1H),6.65(s,1H),5.74(d,J＝7.2Hz,1H),4.17-4.06(m,2H),3.68-3.52(m,1H),3.49-3.32(m,2H),2.03-1.95(m,2H),1.25(d,J＝6.8Hz,3H)。
步骤4：(S)-2-(6-氨基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-8-基氨基)丙酰胺
将Pd(10mg,10wt％于碳上)添加至(S)-2-(6-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-8-基氨基)丙酰胺(70.0mg,0.250mmol)于乙醇(20mL)中的溶液并将反应混合物在氢气气囊下在室温搅拌16h。过滤反应混合物并真空蒸发滤液，得到62mg粗标题化合物，其未经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝251。
步骤5：(S)-N-(8-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)苯甲酰胺
在0℃将于THF(1mL)中的苯甲酰氯(34.8mg,0.248mmol)逐滴添加至粗(S)-2-(6-氨基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-8-基氨基)丙酰胺(62mg,0.248mmol)和三乙胺(74.8mg,0.739mmol)于THF(20mL)中的溶液。将反应混合物在0℃搅拌10min，然后真空蒸发，得到87mg粗标题化合物，其未经纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝355。
步骤6：(S)-2-((1-苯基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺
将粗(S)-N-(8-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)苯甲酰胺(87mg)和乙酸(5mL)的混合物在90℃搅拌2h。真空蒸发反应混合物。所得残余物经由反相HPLC纯化并冻干，得到13.8mg(16.2％,历经三步)106，其为灰白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.23,[M+H]+＝337,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.76-7.73(m,2H),7.57-7.49(m,3H),7.28(s,1H),6.94(s,1H),6.38(s,1H),6.22(s,1H),5.45(d,J＝7.2Hz,1H),4.33-4.31(m,2H),4.22-4.19(m,2H),3.77-3.68(m,1H),2.30-2.17(m,2H),1.32(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例107(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺107
遵循实施例105的操作制备107。LCMS(ESI):RT(min)＝1.22,[M+H]+＝393,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.55(s,2H),7.51(s,1H),7.45(d,J＝8.1Hz,1H),7.32(d,J＝8.1Hz,1H),7.29(s,1H),6.94(s,1H),6.37(s,1H),6.20(s,1H),5.42(d,J＝7.5Hz,1H),4.33-4.31(m,2H),4.21-4.18(m,2H),3.75-3.70(m,1H),2.17-2.32(m,2H),1.31(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例108(S)-2-((1-(吡啶-3-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺108
遵循实施例125的操作制备108。LCMS(ESI):RT(min)＝1.83,[M+H]+＝338,方法＝G；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.95(s,1H),8.70(d,J＝4.9Hz,1H),8.20-8.16(m,1H),7.59-7.54(m,1H),7.29(s,1H),6.94(s,1H),6.40(d,J＝2.0Hz,1H),6.25(d,J＝2.0Hz,1H),5.49(d,J＝4.5Hz,1H),4.35-4.32(m,2H),4.27-4.24(m,2H),3.78-3.68(m,1H),2.35-2.20(m,2H),1.32(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例109(S)-2-((1-(嘧啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺109
遵循实施例125的操作制备109。LCMS(ESI):RT(min)＝1.79,[M+H]+＝339.1,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.31(s,1H),8.94(d,J＝5.2Hz,1H),8.26(d,J＝6.8Hz,1H),7.34(s,1H),6.96(s,1H),6.40(s,1H),6.36(s,1H,),5.66(d,J＝7.2Hz,1H),4.87-4.76(m,2H),4.44-4.35(m,2H),3.77-3.73(m,1H),2.20-2.40(m,2H),1.32(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例110(S)-2-((1-(5-氰基吡啶-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺110
遵循实施例125的操作制备110。LCMS(ESI):RT(min)＝2.18,[M+H]+＝363.1,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.21(s,1H),8.44-8.39(m,2H),7.33(s,1H),6.96(s,1H),6.44(s,1H),6.40(s,1H),5.64(d,J＝7.2Hz,1H),4.81-4.78(m,2H),4.45-4.36(m,2H),3.78-3.71(m,1H),2.20-2.40(m,2H),1.33(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例111(S)-2-((1-(6-甲氧基吡啶-3-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺111
遵循实施例125的操作制备111。LCMS(ESI):RT(min)＝1.96,[M+H]+＝368,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),8.09(d,J＝10.8Hz,1H),7.28(s,1H),6.99-6.93(m,2H),6.37(s,1H),6.22(s,1H),5.45(d,J＝7.2Hz,1H),4.33-4.31(m,2H),4.27-4.17(m,2H),3.93(s,3H),3.75-3.69(m,1H),2.15-2.35(m,2H),1.31(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例112(S)-2-((1-(吡啶-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺112
遵循实施例125的操作制备112。LCMS(ESI):RT(min)＝1.13,[M+H]+＝338,方法＝E；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.70(d,J＝4.2Hz,1H),8.20(d,J＝7.8Hz,1H),7.99-7.36(m,1H),7.50-7.45(m,1H),7.31(s,1H),6.95(s,1H),6.39(d,J＝2.1Hz,1H),6.26(d,J＝1.8Hz,1H),5.52(d,J＝7.2Hz,1H),4.77-4.73(m,2H),4.35-4.32(m,2H),3.78-3.69(m,1H),2.20-2.40(m,2H),1.31(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例113(S)-2-环丙基-2-((1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺113
遵循实施例125的操作制备113。LCMS(ESI):RT(min)＝2.55,[M+H]+＝443,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.82(s,1H),7.66-7.54(m,2H),7.34(s,1H),6.96(s,1H),6.38(s,1H),6.27(s,1H),5.51(d,J＝7.4Hz,1H),4.34-4.31(m,2H),4.23-4.20(m,2H),3.16-3.12(m,1H),2.15-2.35(m,2H),1.13-1.08(m,1H),0.58-0.42(m,3H),0.36-0.26(m,1H)。
实施例114(S)-2-((1-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺114
遵循实施例125的操作制备114。LCMS(ESI):RT(min)＝2.55,[M+H]+＝407,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.33(s,1H),7.29(s,1H),7.25-7.22(d,J＝9.6Hz,1H),7.07(d,J＝8.0Hz,1H),6.96(s,1H),6.36(s,1H),6.23(s,1H),6.13(s,2H),5.45(d,J＝7.4Hz,1H),4.32-4.30(m,2H),4.20-4.17(m,2H),3.16-3.12(m,1H),2.15-2.30(m,2H),1.13-1.08(m,1H),0.52-0.46(m,3H),0.32-0.29(m,1H)。
实施例115(S)-2-环丙基-2-((1-(3-氧代异吲哚啉-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺115
遵循实施例125的操作制备115。LCMS(ESI):RT(min)＝1.16,[M+H]+＝418,方法＝E；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,1H),8.01-7.97(m,2H),7.77-7.74(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(s,1H),6.97(s,1H),6.41(d,J＝1.8Hz,1H),6.28(d,J＝2.1Hz,1H),5.50(d,J＝7.5Hz,1H),4.49(s,2H),4.37-4.34(m,2H),4.27-4.24(m,2H),3.19-3.15(m,1H),2.15-2.35(m,2H),1.17-1.09(m,1H),0.54-0.45(m,3H),0.36-0.30(m,1H)。
实施例116(S)-2-环丙基-2-((1-(喹唑啉-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺116
步骤1：喹唑啉-7-甲酸甲酯
将一氧化碳通入7-溴喹唑啉(250mg,1.20mmol)、碳酸钠(320mg,2.96mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)(90.0mg,0.120mmol)于甲醇(10ml)中的溶液。将反应混合物在60℃搅拌2.5h，然后真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到180mg(80％)标题化合物，其为灰白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.78(s,1H),9.44(s,1H),8.55(s,1H),8.35-8.32(d,J＝8.4Hz,1H),8.25-8.22(d,J＝8.7Hz,1H),3.98(s,3H)。
步骤2：喹唑啉-7-甲酸
将喹唑啉-7-甲酸甲酯(180mg,0.900mmol)、氢氧化锂(70.0mg,2.70mmol)、水(5mL)和THF(15mL)的混合物在室温搅拌2h。真空蒸发反应混合物。将残余物溶于水(10mL)并用乙酸调节pH至2。通过过滤收集所得析出物，得到150mg(98％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M-H]-＝173。
步骤3：N-(8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)喹唑啉-7-甲酰胺
遵循与实施例125步骤1类似的操作由来自实施例101的8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺(188mg,0.770mmol)和喹唑啉-7-甲酸(150mg,0.860mmol)制备标题化合物(粗品)。LCMS(ESI):[M+H]+＝399/401。
步骤4：4-溴-1-(喹唑啉-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
遵循与实施例125步骤2类似的操作由N-(8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)喹唑啉-7-甲酰胺(粗品)制备标题化合物(160mg,54％产率,历经2步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝381/383。
步骤5：(S)-2-环丙基-2-((1-(喹唑啉-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺
遵循与实施例125步骤3-4类似的操作由4-溴-1-(喹唑啉-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(140mg,0.370mmol)制备标题化合物(50.3mg,36％产率)。116：LCMS(ESI):RT(min)＝1.98,[M+H]+＝415,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.72(s,1H),9.39(s,1H),8.38(s,1H),8.31(d,J＝8.4Hz,1H),8.20(d,J＝8.0Hz,1H),7.37(s,1H),6.98(s,1H),6.43(s,1H),6.33(s,1H),5.57(d,J＝7.2Hz,1H),4.39-4.38(m,4H),3.19-3.15(m,1H),2.40-2.20(m,2H),1.24-1.11(m,1H),0.58-0.43(m,3H),0.37-0.25(m,1H)。
实施例117(S)-2-环丙基-2-((1-(喹喔啉-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺117
遵循实施例125的操作制备117。LCMS(ESI):RT(min)＝2.21,[M+H]+＝415,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.05-9.03(m,2H),8.47(d,J＝1.5Hz,1H),8.30-8.22(m,2H),7.36(s,1H),6.98(s,1H),6.43(d,J＝1.8Hz,1H),6.31(d,J＝2.1Hz,1H),5.55(d,J＝7.2Hz,1H),4.39-4.36(m,4H),3.19-3.19-3.14(m,1H),2.20-2.40(m,2H),1.15-1.08(m,1H),0.54-0.50(m,3H),0.36-0.27(m,1H)。
实施例118(S)-2-((1-(3-氰基苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺118
遵循实施例125的操作制备118。LCMS(ESI):RT(min)＝1.36,[M+H]+＝388,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.12-8.10(m,1H),8.01-7.98(m,1H),7.78-7.74(m,1H),7.35(s,1H),6.97(s,1H),6.39(s,1H),6.29(s,1H),5.54(d,J＝7.6Hz,1H),4.35-4.32(m,2H),4.27-4.23(m,3H),3.17-3.13(m,1H),2.29-2.26(m,2H),1.13-1.10(m,1H),0.52-0.47(m,3H),0.33-0.30(m,1H)。
实施例119(S)-2-环丙基-2-((1-(喹唑啉-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺119
遵循实施例116的操作制备119。LCMS(ESI):RT(min)＝1.95,[M+H]+＝415,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.73(s,1H),9.38(s,1H),8.62(s,1H),8.46-8.43(d,J＝9.0Hz,1H),8.15(d,J＝8.8Hz,1H),7.36(s,1H),6.98(s,1H),6.42(d,J＝2.0Hz,1H),6.30(d,J＝2.0Hz,1H),5.55(d,J＝7.4Hz,1H),4.45-4.30(m,4H),3.18-3.13(m,1H),2.31-2.30(m,2H),1.16-1.09(m,1H),0.60-0.40(m,3H),0.34-0.29(m,1H)。
实施例120(S)-2-环丙基-2-((1-(喹唑啉-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺120
遵循实施例116的操作制备120。LCMS(ESI):RT(min)＝1.11,[M+H]+＝430,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.21(s,1H),8.22(s,1H),8.07(d,J＝8.7Hz,1H),7.51(d,J＝8.8Hz,1H),7.34(s,1H),7.07(s,2H),6.96(s,1H),6.38(s,1H),6.25(s,1H),5.49(d,J＝7.4Hz,1H),4.36-4.30(m,4H),3.17-3.11(m,1H),2.38-2.20(m,2H),1.12-1.10(m,1H),0.53-0.47(m,3H),0.33-0.31(m,1H)。
实施例121(S)-2-环丙基-2-((1-(2-甲氧基-6-甲基嘧啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺121
遵循实施例125的操作制备121。LCMS(ESI):RT(min)＝2.22,[M+H]+＝409,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.80(s,1H),7.36(br,1H),6.97(br,1H),6.38-6.35(m,2H),5.65(d,J＝7.2Hz,1H),4.86-4.82(m,2H),4.39-4.30(m,2H),3.97(s,3H),3.15-3.10(m,1H),2.49(s,3H),2.34-2.30(m,2H),1.16-1.08(m,1H),0.58-0.41(m,3H),0.37-0.24(m,1H)。
实施例122(S)-2-环丙基-2-((1-(4-甲基吡啶-3-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺122
遵循实施例125的操作制备122。LCMS(ESI):RT(min)＝1.15,[M+H]+＝378,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.58-8.56(m,2H),7.44(d,J＝5.1Hz,1H),7.34(s,1H),6.96(s,1H),6.38(d,J＝1.9Hz,1H),6.28(d,J＝1.9Hz,1H),5.51(d,J＝7.4Hz,1H),4.34-4.25(m,2H),3.92-3.82(m,2H),3.14-3.11(m,1H),2.35-2.15(m,5H),1.15-1.07(m,1H),0.59-0.40(m,3H),0.33-0.26(m,1H)。
实施例123(S)-2-环丙基-2-((1-(2-(羟基甲基)-6-甲基嘧啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺123
步骤1：2-(甲氧基甲基)-6-甲基嘧啶-4(3H)-酮
在惰性氮气气氛下搅拌钠(1.84g,80.0mmol)于乙醇(80mL)中的混合物直至钠消失。向所得混合物中添加3-氧代丁酸乙酯(5.20g,40.0mmol)和2-甲氧基乙脒盐酸盐(5.00g,40.1mmol)。将所得溶液在80℃搅拌18h，然后真空浓缩。残余物用水稀释并用浓盐酸(37％,12M)调节pH至5且用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用无水硫酸钠干燥并真空蒸发，得到2.8g(45％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝155。
步骤2：4-氯-2-(甲氧基甲基)-6-甲基嘧啶
将2-(甲氧基甲基)-6-甲基嘧啶-4(3H)-酮(2.80g,18.1mmol)于磷酰三氯(25mL)中的混合物在80℃搅拌1h。真空蒸发反应混合物，然后用冷氨水淬灭。混合物用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发，得到1.9g(粗品)标题化合物，其为红色油状物且未经纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝173。
步骤3：2-(甲氧基甲基)-6-甲基嘧啶-4-甲酸
将4-氯-2-(甲氧基甲基)-6-甲基嘧啶(500mg,3.15mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(211mg,0.288mmol)和碳酸钠(766mg,7.23mmol)于乙醇(20mL)中的混合物在80℃搅拌14h同时保持一氧化碳气氛。滤出固体并真空蒸发滤液，得到180mg(粗品)标题化合物，其为红色固体且未经纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝183。
步骤4：N-(8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)-2-(甲氧基甲基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
遵循与实施例125步骤1类似的操作由来自实施例101的8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺(232mg,0.954mmol)和2-(甲氧基甲基)-6-甲基嘧啶-4-甲酸(350mg,粗品)制备标题化合物(粗品)。粗产物未经纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝407/409。
步骤5：4-溴-1-(2-(甲氧基甲基)-6-甲基嘧啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
遵循与实施例125步骤2类似的操作由N-(8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)-2-(甲氧基甲基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺(450mg,1.11mmol)制备标题化合物(350mg,81％)。LCMS(ESI):[M+H]+＝389/391。
步骤6：(4-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-6-甲基嘧啶-2-基)甲醇
将4-溴-1-(2-(甲氧基甲基)-6-甲基嘧啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(350mg,0.899mmol)于氢溴酸(48wt％于水中,9mL)中的混合物在油浴中在90℃搅拌3h。用碳酸氢钠水溶液调节pH至8。所得溶液用DCM萃取且有机萃取物用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到269mg(79.8％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝375/377。
步骤7：(S)-2-环丙基-2-((1-(2-(羟基甲基)-6-甲基嘧啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酸
遵循与实施例125步骤3类似的操作由(4-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-6-甲基嘧啶-2-基)甲醇(260mg,0.693mmol)和(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(399mg,3.47mmol)制备标题化合物(60mg,21％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝410。
步骤8：(S)-2-环丙基-2-((1-(2-(羟基甲基)-6-甲基嘧啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺
遵循与实施例125步骤4类似的操作由(S)-2-环丙基-2-((1-(2-(羟基甲基)-6-甲基嘧啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酸(60mg,0.147mmol)制备标题化合物(16mg,27％产率)。123：LCMS(ESI):RT(min)＝1.83,[M+H]+＝409,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.00(s,1H),7.36(s,1H),6.97(s,1H),6.38-6.35(m,2H),5.65(d,J＝7.2Hz,1H),5.33(br,1H),4.90-4.86(m,2H),4.64(s,2H),4.35-4.32(m,2H),3.15-3.10(m,1H),2.55(s,3H),2.31-2.30(m,2H),1.14-1.08(m,1H),0.54-0.48(m,3H),0.30-0.20(m,1H)。
实施例124 2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酰胺124
步骤1：2-甲基-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑-1-基)丙酸甲酯
将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑(1.00g,5.15mmol)、2-溴-2-甲基丙酸甲酯(1.12g,6.19mmol)和碳酸钾(2.14g,15.5mmol)于DMF(10mL)中的混合物在90℃搅拌过夜。所得溶液用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-20％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到标题化合物0.77g(51％)，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝295。
步骤2：2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸甲酯
将来自实施例101的5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(270mg,0.701mmol)、2-甲基-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑-1-基)丙酸甲酯(247mg,0.841mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)(51.3mg,0.07mmol)、碳酸钠(223mg,2.10mmol)、水(2mL)和1,4-二噁烷(6mL)的混合物在密封管中在微波照射下在100℃加热1h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-3％甲醇/DCM)纯化，得到240mg(72％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS:[M+H]+＝473。
步骤3：2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酰胺
将2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸甲酯(200mg,0.423mmol)、甲酰胺(0.500mL,11.1mmol)和甲醇钠(68.6mg,1.27mmol)于DMF(2mL)中的混合物在微波照射下在80℃加热30min。滤出固体且滤液经由反相HPLC纯化并冻干，得到89.7mg(46％)124，其为灰白色固体。LCMS:RT(min)＝1.25,[M+H]+＝458,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),7.96(s,1H),7.58-7.55(m,4H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),7.39(d,J＝8.4Hz,1H),7.18(s,1H),7.09(s,1H),6.78(s,1H),4.43-4.40(m,2H),4.31-4.28(m,2H),2.40-2.22(m,2H),1.74(s,6H)。
实施例125(S)-2-环丙基-2-((1-(哒嗪-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺125
步骤1：N-(8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)哒嗪-4-甲酰胺
将来自实施例101的8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺(200mg,0.823mmol)、哒嗪-4-甲酸(103mg,0.830mmol)、DIPEA(540mg,4.178mmol)和HATU(628mg,1.65mmol)于DMF(20mL)中的混合物在室温搅拌1h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发，得到520mg粗标题化合物，其未经纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝349/351。
步骤2：4-溴-1-(哒嗪-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
将粗N-(8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)哒嗪-4-甲酰胺(520mg)和乙酸(10mL)的混合物在80℃加热0.5h。真空蒸发反应混合物。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到150mg(55％,历经2步)标题化合物，其为浅棕色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝331/333。
步骤3：(S)-2-环丙基-2-((1-(哒嗪-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酸
将4-溴-1-(哒嗪-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(130mg,0.393mmol)、(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(240mg,2.09mmol)、碘化亚铜(I)(40mg,0.210mmol)和磷酸钾(430mg,2.03mmol)于DMSO(10mL)中的混合物在密封管中用微波照射在120℃照射1.5h。通过过滤除去固体且棕色滤液未经纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝366。
步骤4：(S)-2-环丙基-2-((1-(哒嗪-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺
将(S)-2-环丙基-2-((1-(哒嗪-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酸(粗品)、DIPEA(1.20g,9.29mmol)、氯化铵(390mg,7.29mmol)和HATU(276mg,0.726mmol)于DMSO(10mL)中的混合物在室温搅拌1h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空蒸发。残余物经由反相HPLC纯化并冻干，得到14.0mg(9.7％,历经2步)125，其为黄色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.64,[M+H]+＝365,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.66(s,1H),9.40(d,J＝5.2Hz,1H),8.11-8.09(m,1H),7.37(s,1H),6.98(s,1H),6.41(s,1H),6.36(s,1H),5.64(d,J＝7.6Hz,1H),4.41-4.37(m,4H),3.18-3.14(m,1H),2.31-2.30(m,2H),1.15-1.08(m,1H),0.54-0.48(m,3H),0.35-0.25(m,1H)。
实施例126(S)-2-环丙基-2-[1-(4-羟基甲基哌啶-1-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]乙酰胺126
步骤1：4-溴-8,9-二氢-2H,7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-硫酮
在0℃历经15分钟将硫光气(0.74mL,20.1mmol)于THF(5.0mL)中的溶液添加至来自实施例101的8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺(1.97g,8.09mmol)和三乙胺(2.8mL,20.1mmol)于THF(40mL)中的溶液。将反应混合物在0℃搅拌15min，然后在室温搅拌30min，然后真空蒸发。残余固体用水洗涤，然后在真空烘箱中在40℃干燥，得到2.35g(定量)标题化合物，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.96(br s,1H),6.91(d,J＝1.8Hz,1H),6.86(d,J＝1.8Hz,1H),4.39-4.37(m,2H),4.12-4.09(m,2H),2.34-2.28(m,2H)。
步骤2：4-溴-1-甲基硫基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
将碘甲烷(1.0mL,16.2mmol)添加至4-溴-8,9-二氢-2H,7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-硫酮(2.35g,8.09mmol)和碳酸钾(3.35g,24.3mmol)于丙酮(35mL)中的混悬液。将反应混合物在室温搅拌16h，然后通过硅藻土
过滤并真空蒸发滤液。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：20-40％乙酸乙酯/甲苯)纯化，得到1.83g(76％)标题化合物，其为米黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(d,J＝1.7Hz,1H),6.90(d,J＝1.7Hz,1H),4.35-4.33(m,2H),4.05-4.02(m,2H),2.79(s,3H),2.43-2.37(m,2H)。
步骤3：4-溴-1-甲烷磺酰基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
历经10min将3-氯过氧苯甲酸(3.39g,约77wt％,约15.1mmol)于DCM(20mL)中的溶液添加至用冰冷却的4-溴-1-甲基硫基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(1.81g,6.05mmol)于DCM(50mL)中的溶液。在室温继续搅拌16h。反应混合物用DCM稀释并用焦亚硫酸钠水溶液洗涤。水相再用DCM萃取且合并的有机萃取物用碳酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-25％乙酸乙酯/甲苯)纯化，得到1.49g(74％)标题化合物，其为无色泡沫状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,J＝1.7Hz,1H),7.13(d,J＝1.7Hz,1H),4.69-4.66(m,2H),4.42-4.40(m,2H),3.57(s,3H),2.49-2.44(m,2H)。
步骤4：[1-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)哌啶-4-基]甲醇
将4-溴-1-甲烷磺酰基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(0.35g,1.06mmol)、4-(羟基甲基)哌啶(0.30g,2.64mmol)和DIPEA(0.37mL,2.11mmol)于丙-2-醇(2.0mL)中的混合物在密封小瓶中在微波照射下在150℃加热17h。将反应混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液之间分配。水相再用乙酸乙酯萃取且合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：25-100％乙酸乙酯/甲苯，然后50-100％乙酸甲酯/乙酸乙酯)纯化，得到0.15g(39％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝366/368。
步骤5：(S)-环丙基-[1-(4-羟基甲基哌啶-1-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]乙酸
将[1-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)哌啶-4-基]甲醇(40mg,0.11mmol)、L-环丙基甘氨酸(31.5mg,0.27mmol)、碘化亚铜(4.2mg,0.022mmol)和磷酸钾(92.5mg,0.436mmol)于DMSO(0.7mL)中的混合物在密封小瓶中在100℃加热16h。冷却的反应混合物用DCM(20mL)稀释并经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-50％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化，得到28.6mg(66％)标题化合物，其为米黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝401。
步骤6：(S)-2-环丙基-2-[1-(4-羟基甲基哌啶-1-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]乙酰胺
历经5分钟向(S)-环丙基-[1-(4-羟基甲基哌啶-1-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]乙酸(28.6mg,0.071mmol)、氯化铵(7.6mg,0.142mmol)和DIPEA(50μL,0.285mmol)于DMF(0.5mL)中的混合物中逐份添加HATU(54.3mg,0.142mmol)并将反应混合物在室温搅拌10min。所得混合物用DCM(10mL)稀释并经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：2-12％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化，得到11.8mg(41％)126，其为无色泡沫状物。LCMS(ESI):RT(min)＝2.17,[M+H]+＝400.2,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ尤其是7.27(brs,1H),6.91(br s,1H),6.21(d,J＝2.0Hz,1H),6.02(d,J＝2.0Hz,1H),5.24(d,J＝7.4Hz,1H),4.49(t,J＝5.3Hz,1H),4.25-4.23(m,2H),3.89-3.86(m,2H),3.46-3.42(m,2H),3.07(t,J＝7.7Hz,1H),2.82-2.75(m,2H),2.20-2.15(m,2H),1.76-1.72(m,2H),1.59-1.49(m,1H),1.36-1.26(m,2H),1.12-1.04(m,1H),0.50-0.42(m,3H),0.30-0.25(m,1H)。
实施例127(S)-2-环丙基-2-(1-哌啶-1-基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基)乙酰胺127
步骤1：4-溴-1-哌啶-1-基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
将4-溴-1-甲烷磺酰基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(0.35g,1.06mmol)和哌啶(5.0mL)的混合物在密封小瓶中在微波照射下在150℃加热5h。真空蒸发反应混合物且将残余物在乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液之间分配。水相再用乙酸乙酯萃取且合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：10-40％乙酸乙酯/甲苯)纯化，得到0.27g(77％)标题化合物，其为无色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝336/338。
遵循实施例126的操作制备127。LCMS(ESI):RT(min)＝2.50,[M+H]+＝370.1,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ尤其是7.27(br s,1H),6.91(br s,1H),6.21(d,J＝2.0Hz,1H),6.02(d,J＝2.0Hz,1H),5.24(d,J＝7.5Hz,1H),4.25-4.23(m,2H),3.89-3.87(m,2H),3.10-3.07(m,4H),2.20-2.15(m,2H),1.67-1.62(m,4H),1.59-1.53(m,2H),1.12-1.04(m,1H),0.50-0.42(m,3H),0.30-0.25(m,1H)。
实施例128(S)-2-环丙基-2-((1-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺128
遵循实施例125的操作制备128。LCMS(ESI):RT(min)＝2.55,[M+H]+＝395,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.00(s,1H),7.33(s,1H),6.95(s,1H),6.38(d,J＝2.0Hz,1H),6.28(d,J＝1.9Hz,1H),5.51(d,J＝7.4Hz,1H),4.39-4.30(m,2H),4.30-4.20(m,2H),4.01(s,2H),3.15(t,J＝7.7Hz,1H),2.31-2.22(m,2H),1.18-1.04(m,1H),0.57-0.41(m,3H),0.35-0.25(m,1H)。
实施例129(S)-2-环丙基-2-((1-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺129
遵循实施例125的操作制备129。LCMS(ESI):RT(min)＝2.89,[M+H]+＝395,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15(d,J＝10.0Hz,1H),7.34(s,1H),7.06(d,J＝9.8Hz,1H),6.95(s,1H),6.34(dd,J＝21.7,2.1Hz,2H),5.59(d,J＝7.2Hz,1H),4.59(t,J＝5.7Hz,2H),4.34(t,J＝4.6Hz,2H),3.76(s,3H),3.13(t,J＝7.7Hz,1H),2.34-2.25(m,2H),1.18-1.04(m,1H),0.57-0.43(m,3H),0.40-0.25(m,1H)。
实施例130(S)-2-((1-(5-氯-6-甲氧基吡啶-3-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺130
遵循实施例125的操作制备130。LCMS(ESI):RT(min)＝3.15,[M+H]+＝428,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝2.1Hz,1H),8.29(d,J＝2.4Hz,1H),7.33(s,1H),6.95(s,1H),6.37(d,J＝2.0Hz,1H),6.27(d,J＝1.9Hz,1H),5.50(d,J＝7.4Hz,1H),4.32(t,J＝4.7Hz,2H),4.29-4.17(m,2H),4.03(s,2H),3.28(s,1H),3.14(t,J＝7.7Hz,1H),2.30-2.22(m,2H),1.18-1.04(m,1H),0.57-0.42(m,3H),0.35-0.25(m,1H)。
实施例131(S)-2-环丙基-2-((1-(3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺131
步骤1：4-溴-1-(2-(氯甲基)苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
将2-氯-1,1,1-三乙氧基乙烷(0.53g,2.71mmol)添加至2-氨基-4-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯酚(0.800g,2.22mmol)于乙酸(10mL)中的溶液。将反应混合物在120℃加热3h。滤出固体并真空蒸发滤液。将残余物溶于乙酸乙酯，然后用石油醚稀释。通过过滤收集析出的固体，得到粗标题化合物，其未经纯化即使用。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.00(d,J＝8.3Hz,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,1H),7.50(s,1H),6.95(s,1H),5.15(s,2H),4.50-4.44(m,2H),4.40-4.33(m,2H),2.40-2.30(m,2H)。
步骤2：6-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮
将氢氧化锂(0.040g,0.950mmol)添加至4-溴-1-(2-(氯甲基)苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(200mg,0.480mmol)于THF(10mL)和水(2mL)中的溶液。将所得混合物在25℃搅拌16h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到80mg(42％)标题化合物，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.89(s,1H),7.43(s,1H),7.38-7.33(m,2H),7.11(d,J＝8.1Hz,1H),6.90(s,1H),4.68(s,2H),4.45-4.42(m,2H),4.31-4.27(m,2H),2.31-2.20(m,2H)。
步骤3：(S)-2-环丙基-2-((1-(3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺131
将6-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮(150mg,0.380mmol)、(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(216mg,1.88mmol)、碘化亚铜(I)(36.0mg,0.190mmol)和磷酸钾(477mg,2.25mmol)于DMSO(6mL)中的混合物在超声条件下用氮气脱气。将反应混合物在100℃加热2小时，然后冷却至室温。通过过滤除去固体并用DMSO(2mL)稀释滤液。添加氯化铵(370mg,6.92mmol)、HATU(263mg,0.690mmol)和DIPEA(1.12g,8.63mmol)并将混合物在室温搅拌30min。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。粗产物经由反相HPLC纯化并冻干，得到11.9mg(8％)131，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.23,[M+H]+＝434,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.84(s,1H),7.37-7.26(m,3H),7.12-7.03(m,1H),6.95(d,J＝2.3Hz,1H),6.35(d,J＝2.0Hz,1H),6.23(d,J＝2.0Hz,1H),5.47(d,J＝7.4Hz,1H),4.66(s,2H),4.37-4.27(m,2H),4.20-4.16(m,2H),3.16-3.10(m,1H),2.23-2.12(m,2H),1.11-1.09(m,1H),0.58-0.39(m,3H),0.31-0.28(m,1H)。
实施例132(S)-2-((1-([1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺132
遵循实施例116的操作制备132。LCMS(ESI):RT(min)＝1.25,[M+H]+＝404,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.09-9.07(d,J＝7.2Hz,1H),8.62(s,1H),8.24(s,1H),7.61(d,J＝6.9Hz,1H),7.35(s,1H),6.96(s,1H),6.41(d,J＝2.8Hz,1H),6.32(d,J＝2.8Hz,1H),5.57(d,J＝7.5Hz,1H),4.40-4.35(m,4H),3.19-3.14(m,1H),2.40-2.20(m,2H),1.19-1.02(m,1H),0.52-0.47(m,3H),0.31-0.30(m,1H)。
实施例133(S)-2-((1-(1H-吲唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺133
遵循实施例125的操作制备133。LCMS(ESI):RT(min)＝1.39,[M+H]+＝403,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.33(s,1H),8.20(d,J＝8.4Hz,2H),7.76-7.67(m,2H),7.36(s,1H),6.98(s,1H),6.38(s,1H),6.27(s,1H),5.59(br,1H),4.45-4.30(m,2H),4.29-4.15(m,2H),3.17-3.12(m,1H),2.35-2.18(m,2H),1.14-1.08(m,1H),0.51-0.44(m,3H),0.35-0.25(m,1H)。
实施例134(S)-2-环丙基-2-((1-(嘧啶-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺134
遵循实施例125的操作制备134。LCMS(ESI):RT(min)＝1.59,[M+H]+＝365,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.31(s,1H),9.21(s,2H),7.35(s,1H),6.97(s,1H),6.39(d,J＝2.0Hz,1H),6.31(d,J＝2.0Hz,1H),5.58(d,J＝7.4Hz,1H),4.33-4.32(m,4H),3.16-3.11(m,1H),2.35-2.15(m,2H),1.13-1.07(m,1H),0.52-0.44(m,3H),0.38-0.25(m,1H)。
实施例135(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺135
遵循实施例104的操作制备135。LCMS(ESI):RT(min)＝2.04,[M+H]+＝419,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.55(s,2H),7.51(s,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H),7.34-7.30(m,2H),6.96(s,1H),6.36(d,J＝1.8Hz,1H),6.22(d,J＝1.8Hz,1H),5.44(d,J＝7.2Hz,1H),4.33-4.30(m,2H),4.20-4.10(m,2H),3.16-3.11(m,1H),2.35-2.15(m,2H),1.13-1.08(m,1H),0.52-0.46(m,3H),0.40-0.25(m,1H)。
实施例136(S)-2-环丙基-2-((1-(噻唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺136
遵循实施例125的操作制备136。LCMS(ESI):RT(min)＝1.83,[M+H]+＝370.0,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),8.45(s,1H),7.36(s,1H),6.97(s,1H),6.35(s,1H),6.28(s,1H),5.63(br s,1H),4.45-4.43(m,2H),4.37-4.34(m,2H),3.20-3.11(m,1H),2.40-2.30(m,2H),1.18-1.05(m,1H),0.58-0.43(m,3H),0.33-0.28(m,1H)。
实施例137(S)-2-环丙基-2-((1-(4-(甲基磺酰基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺137
步骤1：4-溴-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
向来自实施例101的8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺(176.7mg,0.7269mmol)、4-甲基磺酰基苯甲酸(151.8mg,0.7582mmol)、DIPEA(0.35mL,2.0mmol)和DMF(3.0mL,39mmol)的混合物中添加HATU(374.1mg,0.964mmol)。将反应混合物在室温搅拌45min。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水(3×)和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。将所得残余物溶于乙酸(2.0mL,35mmol)并在90℃加热1h。将反应混合物冷却至室温并在真空下除去乙酸。所得残余物用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发，得到243.6mg(82％)标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝406.95；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ尤其是8.19-8.04(m,4H),7.51(d,J＝1.8Hz,1H),6.96(d,J＝1.8Hz,1H),4.53-4.42(m,2H),4.40-4.32(m,2H),2.39-2.28(m,2H)。
步骤2：(S)-2-环丙基-2-((1-(4-(甲基磺酰基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺
向4-溴-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(242.6mg,0.5956mmol)、(2S)-2-氨基-2-环丙基-乙酸(141mg,1.22mmol)、磷酸钾(398mg,1.8375mmol)和DMSO(2.0mL,28mmol)的混合物中添加碘化亚铜(I)(67.9mg,0.357mmol)。将反应混合物在微波照射下在120℃加热2h。向粗反应混合物中添加三乙胺(0.35mL,2.5mmol)、氯化铵(130.3mg,2.44mmol)和HATU(933mg,2.40mmol)。将该混合物在室温搅拌1h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水(2×)和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(12g硅胶，溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化并经由制备型HPLC进一步纯化且冻干，得到17.1mg(6.5％)137。LCMS(ESI):RT(min)＝2.74,[M+H]+＝441.2,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.13-7.98(m,4H),7.34(d,J＝2.5Hz,1H),6.95(d,J＝2.4Hz,1H),6.40(d,J＝2.0Hz,1H),6.30(d,J＝2.0Hz,1H),5.54(d,J＝7.4Hz,1H),4.35(t,J＝4.7Hz,2H),4.31-4.21(m,2H),3.30(s,3H),3.15(t,J＝7.8Hz,1H),2.31-2.19(m,2H),1.16-1.05(m,1H),0.56-0.41(m,3H),0.35-0.24(m,1H)。
实施例138(S)-2-环丙基-2-((1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺138
步骤1：4-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
向8-溴-2,3,4,5-四氢-1,5-苯并氧杂氮杂
-6-胺(120.4mg,0.495mmol)、2,3-二氢-1,4-苯并二氧杂环己烯-6-甲酸(80.0mg,0.431mmol)、DIPEA(111.3mg,0.861mmol)于DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(334.2mg,0.861mmol)。在氮气下将反应物密封于小瓶中并在室温搅拌1.5h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机部分用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。所得残余物经由快速色谱(溶剂梯度：0-80％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到120mg(72％)标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝387。
步骤2：(S)-2-环丙基-2-((1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺
向4-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(42mg,0.109mmol)、磷酸钾(118mg,0.54mmol)和(2S)-2-氨基-2-环丙基-乙酸(49.95mg,0.434mmol)于DMSO(1.00mL)中的混悬液中添加碘化亚铜(12.4mg,0.065mmol)。在氮气下将反应物密封于小瓶中并在微波照射下在120℃加热2h。所得混合物先后用5mL DMSO、三乙胺(110mg,1.09mmol)和氯化铵(58.0mg,1.09mmol)及HATU(421mg,1.09mmol)处理。在室温搅拌1h后，反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机部分先后用水和盐水洗涤，然后用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。所得粗残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到9.2mg(20％)138。LCMS(ESI):RT(min)＝2.98,[M+H]+＝421.2,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.31(s,1H),7.25-7.17(m,2H),6.99(d,J＝8.2Hz,1H),6.94(s,1H),6.34(d,J＝2.0Hz,1H),6.22(d,J＝1.9Hz,1H),5.43(d,J＝7.3Hz,1H),4.36-4.26(m,6H),4.24-4.12(m,2H),3.13(t,J＝7.7Hz,1H),2.28-2.18(m,2H),1.17-1.04(m,1H),0.56-0.41(m,3H),0.35-0.24(m,1H)。
实施例139(S)-2-[1-((R)-3-羟基甲基哌啶-1-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]丙酰胺139
步骤1：[(R)-1-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)哌啶-3-基]甲醇
将4-溴-1-甲烷磺酰基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(0.305g,0.92mmol)、(R)-1-哌啶-3-基甲醇(0.212g,1.84mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.319mL,1.84mmol)于丙-2-醇(2.0mL)中的混合物在密封小瓶中在微波照射下在150℃加热17小时。将反应混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液之间分配。水相再用乙酸乙酯萃取且合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：25-100％乙酸乙酯/甲苯，然后50-100％乙酸甲酯/乙酸乙酯)纯化，得到71mg(21％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝366/368。
步骤2：(S)-2-[1-((R)-3-羟基甲基哌啶-1-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]丙酸
将[(R)-1-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)哌啶-3-基]甲醇(51mg,0.139mmol)、L-丙氨酸(31.1mg,0.349mmol)、碘化亚铜(5.4mg,0.028mmol)和磷酸钾(118mg,0.556mmol)于二甲基亚砜(0.5mL)中的混合物在密封小瓶中在100℃加热3小时。冷却的反应混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-50％(2N氨/甲醇)/二氯甲烷)纯化，得到标题化合物(定量)，其为米黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝375。
步骤3：(S)-2-[1-((R)-3-羟基甲基哌啶-1-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]丙酰胺
历经5分钟向(S)-2-[1-((R)-3-羟基甲基哌啶-1-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]丙酸(0.139mmol)、氯化铵(14.9mg,0.278mmol)和N,N-二异丙基乙胺(96.4μL,0.556mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.75mL)中的混合物中逐份添加1-[二(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-***并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(105.6mg,0.278mmol)并将反应混合物在室温搅拌10分钟。反应混合物用二氯甲烷(15mL)稀释并经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：2-12％(2N氨/甲醇)/二氯甲烷)纯化，得到39mg(75％,2步)无色泡沫状物。该部分差向异构化的物质通过SFC(Amylose-C和甲醇/CO2作为洗脱剂)分离成纯的非对映异构体。较晚洗脱的非对映异构体为139(24.6mg)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.01,[M+H]+＝374.2,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.22(br s,1H),6.89(br s,1H),6.21(d,J＝2.0Hz,1H),6.00(d,J＝2.0Hz,1H),5.23(d,J＝7.4Hz,1H),4.53(t,J＝5.3Hz,1H),4.26-4.24(m,2H),3.94-3.84(m,2H),3.65(pent,J＝7.1Hz,1H),3.46-3.42(m,1H),3.39-3.29(m,2H),2.82-2.76(m,1H),2.64-2.59(m,1H),2.21-2.16(m,2H),1.83-1.58(m,4H),1.28(d,J＝6.9Hz,3H),1.18-1.08(m,1H)。
实施例140(S)-2-[1-(4-羟基甲基哌啶-1-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]丙酰胺140
遵循实施例139的操作制备140。LCMS(ESI):RT(min)＝1.94,[M+H]+＝374.2,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ尤其是7.21(br s,1H),6.89(br s,1H),6.21(d,J＝2.0Hz,1H),6.00(d,J＝2.0Hz,1H),5.23(d,J＝7.4Hz,1H),4.49(t,J＝5.3Hz,1H),4.26-4.24(m,2H),3.90-3.87(m,2H),3.65(pent,J＝7.1Hz,1H),3.47-3.42(m,2H),2.83-2.75(m,2H),2.21-2.16(m,2H),1.76-1.71(m,2H),1.60-1.50(m,1H),1.36-1.27(m,1H),1.28(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例141(S)-2-环丙基-2-((1-吗啉代-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺141
步骤1：4-溴-1-吗啉代-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
将4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(500mg,1.32mmol)和吗啉(2.30g,26.39mmol)于DMF(15mL)中的混合物在密封管中在微波照射下在140℃加热2h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发滤液。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到110mg(25％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝338/340。
步骤2：(S)-2-环丙基-2-((1-吗啉代-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酸
遵循与实施例125步骤3类似的操作由4-溴-1-吗啉代-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(200mg,0.590mmol)制备标题化合物(110mg,50％)。LCMS(ESI):[M+H]+＝373。
步骤3：(S)-2-环丙基-2-((1-吗啉代-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺
遵循与实施例125步骤4类似的操作由(S)-2-环丙基-2-((1-吗啉代-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酸(100mg,0.27mmol)制备标题化合物(21.9mg,22％)。141：LCMS(ESI):RT(min)＝1.61,[M+H]+＝372,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.29(s,1H),6.93(s,1H),6.23(d,J＝1.8Hz,1H),6.05(d,J＝1.8Hz,1H),5.29(d,J＝7.2Hz,1H),4.27-4.24(m,2H),3.95-3.91(m,2H),3.75-3.72(m,4H),3.14-3.05(m,5H),2.22-2.10(m,2H),1.11-1.05(m,1H),0.51-0.44(m,3H),0.39-0.19(m,1H)。
实施例142(S)-2-环丙基-2-((1-(噁唑-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺142
遵循实施例125的操作制备142。LCMS(ESI):RT(min)＝2.16,[M+H]+＝354,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.36(s,1H),7.54(s,1H),7.36(s,1H),6.98(s,1H),6.38-6.35(m,2H),5.65(d,J＝7.2Hz,1H),4.72-4.68(m,2H),4.35-4.32(m,2H),3.16-3.11(m,1H),2.33-2.27(m,2H),1.14-1.11(m,1H),0.53-0.50(m,3H),0.35-0.24(m,1H)。
实施例143(S)-2-环丙基-2-((1-(3-(二氟甲氧基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺143
遵循实施例125的操作制备143。LCMS(ESI):RT(min)＝1.54,[M+H]+＝429,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.65-7.10(m,6H),6.95(s,1H),6.38(d,J＝1.8Hz,1H),6.27(d,J＝1.8Hz,1H),5.50(d,J＝7.5Hz,1H),4.34-4.31(m,2H),4.30-4.15(m,2H),3.17-3.12(m,1H),2.35-2.15(m,2H),1.14-1.08(m,1H),0.53-0.47(m,3H),0.35-0.25(m,1H)。
实施例144(S)-2-环丙基-2-((1-(2-氟-4-甲氧基苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺144
遵循实施例125的操作制备144。LCMS(ESI):RT(min)＝1.46,[M+H]+＝411,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.54-7.52(m,1H),7.34(s,1H),7.06-7.02(m,1H),6.97-6.95(m,2H),6.38(d,J＝2.0Hz,1H),6.27(d,J＝2.0Hz,1H),5.49(d,J＝7.5Hz,1H),4.35-4.28(m,2H),4.01-3.93(m,2H),3.86(s,3H),3.17-3.13(m,1H),2.23-2.22(m,2H),1.15-1.09(m,1H),0.53-0.45(m,3H),0.34-0.30(m,1H)。
实施例145(S)-2-环丙基-2-((1-(2,4-二氟苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺145
遵循实施例125的操作制备145。LCMS(ESI):RT(min)＝2.78,[M+H]+＝399,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.72-7.66(m,1H),7.54-7.46(m,1H),7.34-7.26(m,2H),6.96(s,1H),6.38(d,J＝1.8Hz,1H),6.29(d,J＝2.1Hz,1H),5.52(d,J＝7.5Hz,1H),4.33-4.30(m,2H),3.99-3.95(m,2H),3.17-3.12(m,1H),2.35-2.15(m,2H),1.14-1.17(m,1H),0.53-0.49(m,3H),0.33-0.29(m,1H)。
实施例146(S)-3-(4-((2-氨基-1-环丙基-2-氧代乙基)氨基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯甲酰胺146
遵循实施例125的操作制备146。LCMS(ESI):RT(min)＝0.713,[M+H]+＝406,方法＝F；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.13(s,1H),8.04-8.01(m,1H),7.93-7.90(m,1H),7.66-7.61(m,1H),7.50(s,1H),7.35(s,1H),6.97(s,1H),6.40(s,1H),6.28(s,1H),5.50(d,J＝7.5Hz,1H),4.36-4.34(m,2H),4.29-4.24(m,2H),3.19-3.14(m,1H),2.27-2.25(m,2H),1.16-1.07(m,1H),0.55-0.45(m,3H),0.33-0.31(m,1H)。
实施例147(S)-2-环丙基-2-((1-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺147
遵循实施例125的操作制备147。LCMS(ESI):RT(min)＝2.45,[M+H]+＝394,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.67(s,1H),7.32(s,1H),6.95(s,1H),6.37(s,1H),6.26(s,1H),5.50(s,1H),4.52-4.45(m,2H),4.36-4.26(m,4H),4.26-4.15(m,2H),3.14(t,J＝7.7Hz,1H),2.30-2.20(m,2H),1.18-1.04(m,1H),0.57-0.41(m,3H),0.35-0.25(m,1H)。
实施例148(S)-2-环丙基-2-((1-(2,3-二氢-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-b]吡啶-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺148
遵循实施例125的操作制备148。LCMS(ESI):RT(min)＝2.65,[M+H]+＝422,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.67(s,1H),7.32(s,1H),6.95(s,1H),6.37(s,1H),6.26(s,1H),5.50(s,1H),4.52-4.45(m,2H),4.36-4.26(m,4H),4.26-4.15(m,2H),3.14(t,J＝7.7Hz,1H),2.30-2.20(m,2H),1.18-1.04(m,1H),0.57-0.41(m,3H),0.35-0.25(m,1H)。
实施例149(S)-2-((1-(2-氨基-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6(7H)-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺149
遵循实施例161的操作制备149。LCMS(ESI):RT(min)＝1.89,[M+H]+＝421,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),7.27(s,1H),6.91(s,1H),6.66(s,2H),6.18(s,1H),5.96(s,1H),5.23-5.21(d,J＝7.2Hz,1H),4.75(s,2H),4.67(s,2H),4.28-4.25(m,2H),4.15-4.05(m,2H),3.10-3.05(m,1H),2.35-2.15(m,2H),1.14-1.04(m,1H),0.50-0.46(m,3H),0.44-0.42(m,1H)。
实施例150(S)-2-环丙基-2-((1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺150
步骤1：4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
将4-甲基苯磺酸(354mg,2.06mmol)添加至来自实施例101的8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺(5.00g,20.6mmol)于原甲酸三乙酯(60mL)中的溶液并将反应混合物在100℃加热16h。真空蒸发反应混合物且所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到4.20g(81％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝253/255；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),7.43(d,J＝1.8Hz,1H),6.89(d,J＝1.8Hz,1H),4.40-4.31(m,4H),2.35-2.28(m,2H)。
步骤2：4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
在-78℃将于无水THF中的二异丙基氨基锂(LDA)(2M,16mL,32mmol)逐滴添加至4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(4.00g,15.8mmol)于无水THF中的溶液并将反应混合物在-78℃搅拌1h。在-78℃向该混合物中添加N-碘琥珀酰亚胺(5.33g,23.7mmol)并将所得混合物在-78℃搅拌1h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发滤液。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-25％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到3.68g(62％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝379/381；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.38-7.37(d,J＝1.8Hz,1H),6.89(d,J＝1.8Hz,1H),4.40-4.37(m,2H),4.22-4.18(m,2H),2.40-2.34(m,2H)。
步骤3：4-溴-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
将4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(500mg,1.3mmol)、4-(二氟甲氧基)苯基硼酸(250mg,1.33mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)(100mg,0.13mmol)、乙酸钾(2M水溶液,2.50mL,5.00mmol)和碳酸钠(2M水溶液,2.5mL,5.00mmol)于乙腈(10mL)中的混合物在微波照射下在80℃加热20min。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到160mg(31％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝395/397。
步骤4：(S)-2-环丙基-2-((1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺
遵循与实施例125步骤3-4类似的操作由4-溴-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(150mg,0.380mmol)制备标题化合物(25.5mg,16％)。150：LCMS(ESI):RT(min)＝1.65,[M+H]+＝429,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.84-7.81(m,2H),7.56-7.19(m,4H),6.96(s,1H),6.38(d,J＝2.0Hz,1H),6.26(d,J＝2.0Hz,1H),5.49(d,J＝7.4Hz,1H),4.37-4.30(m,2H),4.23-4.19(m,2H),3.33-3.13(m,1H),2.27-2.24(m,2H),1.18-1.05(m,1H),0.58-0.43(m,3H),0.36-0.26(m,1H)。
实施例151(S)-4-(4-((2-氨基-1-环丙基-2-氧代乙基)氨基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)吡啶-2-甲酰胺151
遵循实施例125的操作制备151。LCMS(ESI):RT(min)＝1.12,[M+H]+＝407,方法＝E；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(d,J＝5.2Hz,1H),8.40(s,1H),8.23(s,1H),8.01-7.99(d,J＝5.2Hz,1H),7.78(s,1H),7.35(s,1H),6.96(s,1H),6.42(d,J＝2.0Hz,1H),6.33(d,J＝2.0Hz,1H),5.58(d,J＝7.2Hz,1H),4.45-4.25(m,4H),3.19-3.15(m,1H),2.34-2.30(m,2H),1.15-1.10(m,1H),0.54-0.50(m,3H),0.35-0.25(m,1H)。
实施例152 2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)乙醇152
遵循实施例124的操作制备152。LCMS(ESI):RT(min)＝2.41,[M+H]+＝417,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.14(s,1H),7.88(s,1H),7.58(表观s3H),7.51-7.47(m,2H),7.40-7.37(m,1H),7.00(s,1H),4.93(br,1H),4.50-4.35(m,2H),4.31-4.28(m,2H),4.17-4.13(m,2H),3.79-3.76(m,2H),2.40-2.25(m,2H)。
实施例153 5-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺153
遵循实施例124的操作制备153。LCMS(ESI):RT(min)＝2.38,[M+H]+＝387,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.85(s,1H),7.57(表观s,3H),7.50-7.45(m,2H),7.39-7.37(d,J＝8.1Hz,1H),6.99(s,1H),4.42-4.39(m,2H),4.30-4.27(m,2H),3.85(s,3H),2.37-2.24(m,2H)。
实施例154 2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-N,2-二甲基丙酰胺154
遵循实施例124的操作制备154。LCMS(ESI):RT(min)＝1.34,[M+H]+＝472,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),7.96(s,1H),7.58-7.55(m,4H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.1Hz,1H),7.29-7.28(m,1H),7.09(s,1H),4.46-4.37(m,2H),4.32-4.28(m,2H),2.57(d,J＝4.5Hz,3H),2.40-2.20(m,2H),1.73(s,6H)。
实施例155(S)-2-环丙基-2-((1-(2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噁唑-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺155
遵循实施例125的操作制备155。LCMS(ESI):RT(min)＝1.74,[M+H]+＝420,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.76(br,1H),7.59(s,1H),7.50-7.48(m,1H),7.35(s,1H),7.16(d,J＝8.1Hz,1H),6.94(s,1H),6.36(d,J＝2.0Hz,1H),6.23(d,J＝2.0Hz,1H),5.44(d,J＝7.4Hz,1H),4.33-4.31(m,2H),4.25-4.18(m,2H),3.17-3.13(m,1H),2.34-2.25(m,2H),1.14-1.09(m,1H),0.57-0.42(m,3H),0.35-0.25(m,1H)。
实施例157(S)-5-(4-((2-氨基-1-环丙基-2-氧代乙基)氨基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-2-氟苯甲酰胺157
遵循实施例164的操作制备157。LCMS(ESI):RT(min)＝1.24,[M+H]+＝424,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.00-7.98(m,1H),7.90-7.86(m,2H),7.74(s,1H),7.48-7.42(m,1H),7.33(s,1H),6.96(s,1H),6.38(d,J＝1.8Hz,1H),6.26(d,J＝2.1Hz,1H),5.49(d,J＝7.2Hz,1H),4.34-4.33(m,2H),4.22-4.20(m,2H),3.19-3.10(m,1H),2.35-2.15(m,2H),1.14-1.08(m,1H),0.53-0.47(m,3H),0.31-0.29(m,1H)。
实施例158(S)-5-(4-((2-氨基-1-环丙基-2-氧代乙基)氨基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯158
步骤1：5-溴-2-甲氧基苯甲酸甲酯
在0℃将三甲基硅烷基重氮甲烷(2M于己烷中的溶液,40mL,80.0mmol)添加至5-溴-2-甲氧基苯甲酸(5.00g,21.6mmol)于甲醇(100mL)中的溶液且将所得溶液在室温搅拌4h。真空蒸发反应混合物且残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-20％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到5.26g(99％)标题化合物，其为白色固体。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.91(s,1H),7.58-7.54(d,J＝9.0Hz,1H),6.87(d,J＝9.0Hz,1H),3.90(s,6H)。
步骤2：2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯甲酸甲酯
将5-溴-2-甲氧基苯甲酸甲酯(2.09g,8.53mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(3.10g,12.2mmol)、乙酸钾(2.59g,26.4mmol)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(600mg,0.820mmol)于1,4-二噁烷(40mL)中的混合物在80℃在氮气气氛下搅拌2.5h。过滤反应混合物并真空蒸发滤液。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到2.20g(88.3％)标题化合物，其为黄色固体。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.23(s,1H),7.91(d,J＝8.4Hz,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),3.94(s,3H),3.89(s,3H),1.35(s,12H)。
步骤3：5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯
遵循与实施例150步骤3类似的操作由4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(450mg,1.19mmol)和2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯甲酸甲酯(418mg,1.43mmol)制备标题化合物(241mg,49％)。LCMS(ESI):[M+H]+＝417/419。
步骤4：(S)-2-环丙基-2-((1-(4-甲氧基-3-(甲氧基羰基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酸
将5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯(340mg,0.815mmol)、(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(460mg,3.99mmol)、碘化亚铜(I)(193mg,1.01mmol)、磷酸钾(1.02g,4.81mmol)于DMSO(10ml)中的混合物在密封管中在微波照射下在110℃在氮气气氛下加热2h。过滤反应混合物且滤液经由反相快速色谱(溶剂梯度：0-100％甲醇/水)纯化，得到310mg(84.2％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝452。
步骤5：(S)-5-(4-((2-氨基-1-环丙基-2-氧代乙基)氨基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯
将氯化铵(729mg,13.6mmol)添加至(S)-2-环丙基-2-((1-(4-甲氧基-3-(甲氧基羰基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酸(310mg,0.687mmol)、DIPEA(2.22g,17.2mmol)和HATU(522mg,1.373mmol)于DMF(15mL)中的溶液并将所得混合物在室温搅拌0.5h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发滤液。残余物经由反相HPLC纯化并冻干，得到9.0mg(3％)158，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.378,[M+H]+＝451,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.02(s,1H),7.93(d,J＝8.4Hz,1H),7.37-7.29(m,2H),6.95(s,1H),6.38(d,J＝2.0Hz,1H),6.25(d,J＝2.0Hz,1H),5.48(d,J＝7.4Hz,1H),4.35-4.33(m,2H),4.22-4.21(m,2H),3.93(s,3H),3.84(s,3H),3.17-3.13(m,1H),2.27-2.26(m,2H),1.14-1.09(m,1H),0.53-0.45(m,3H),0.34-0.29(m,1H)。
实施例159(S)-2-环丙基-2-((1-(2-(甲基磺酰基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺159
遵循实施例125的操作制备159。LCMS(ESI):RT(min)＝1.32,[M+H]+＝442,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.95(d,J＝6.8Hz,1H),8.41(s,1H),8.17(d,J＝5.1Hz,1H),7.37(s,1H),6.98(s,1H),6.43(d,J＝1.8Hz,1H),6.36(d,J＝2.1Hz,1H),5.63(d,J＝9.6Hz,1H),4.43-4.37(m,4H),3.37(s,3H),3.20-3.15(m,1H),2.40-2.25(m,2H),1.16-1.10(m,1H),0.55-0.46(m,3H),0.33-0.32(m,1H)。
实施例160(S)-2-环丙基-2-[1-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]乙酰胺160
步骤1：(6-氨基-8-溴-3,4-二氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-5(2H)-基)(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)甲酮和N-(8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺
在氮气下在0℃向1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酸(231mg,1.65mmol)和DIPEA(0.32mL,1.82mmol)于DCM(6.0mL)中的混合物中添加甲烷磺酰氯(0.14mL,1.82mmol)并将所得混合物在0℃搅拌15min。在0℃添加另一份DIPEA(0.32mL,1.82mmol)，然后在0℃在氮气下将所得混合物添加至来自实施例101的8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺(365mg,1.50mmol)于DCM(6.0mL)中的溶液。将反应混合物在0℃搅拌30min，然后用水稀释。有机萃取物用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。粗残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-5％甲醇/DCM)纯化，得到458mg(84％,异构体的约2:1混合物)标题化合物，其为米色泡沫状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝365/367。
步骤2：4-溴-1-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
将(6-氨基-8-溴-3,4-二氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-5(2H)-基)(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)甲酮和N-(8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(348mg,0.95mmol)于乙酸(3.0mL)中的混合物在微波照射下在120℃加热15min。真空蒸发反应混合物且粗残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-8％甲醇/DCM)纯化，得到237mg(72％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝347/349。
步骤3：(S)-2-环丙基-2-[1-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]乙酰胺
将4-溴-1-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(100mg,0.58mmol)、L-环丙基甘氨酸(66mg,0.58mmol)、碘化亚铜(11mg,0.06mmol)和磷酸钾(123mg,0.58mmol)于DMSO(1.0mL)中的混合物在超声条件下用氩气脱气。将反应混合物在100℃加热18h，然后冷却至室温。向所得混合物中添加氯化铵(93mg,1.16mmol)和三乙胺(404μL,2.90mmol)，接着逐份添加HATU(441mg,1.16mmol)并将反应混合物在室温搅拌1h。所得混合物用氢氧化铵水溶液稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-15％甲醇/DCM)纯化，得到20mg(18％)160，其为灰白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.29,[M+H]+＝381.2,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.32(s,1H),6.94(s,1H),6.33(d,J＝2.0Hz,1H),6.19(d,J＝2.3Hz,1H),5.40(br s,1H),4.31(t,J＝4.5Hz,2H),4.16(t,J＝5.4Hz,2H),3.84(s,3H),3.13(t,J＝7.7Hz,1H),2.34(s,3H),2.29-2.21(m,2H),1.13-1.07(m,1H),0.53-0.44(m,3H),0.33-0.26(m,1H)。
实施例161(S)-2-环丙基-2-((1-(5,6-二氢-[1,2,4]***并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺161
步骤1：4-溴-1-氯-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
在-78℃将LDA(2M于THF中,0.75mL,1.5mmol)逐滴添加至来自实施例150的4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(200mg,0.790mmol)于无水THF(6mL)中的溶液并将混合物在-78℃搅拌1h。在-78℃逐滴添加N-氯琥珀酰亚胺(211mg,1.58mmol)于THF中的溶液。使反应混合物温热至20℃并再搅拌1h。然后通过添加氯化铵水溶液淬灭反应物。所得溶液用DCM萃取且合并有机萃取物并用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-5％甲醇/DCM)纯化，得到100mg(44％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝287/289。
步骤2：4-溴-1-(5,6-二氢-[1,2,4]***并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
将4-溴-1-氯-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(200mg,0.696mmol)和5,6,7,7a-四氢-4H-咪唑并[4,5-c]吡啶(867mg,6.99mmol)于DMSO(4mL)中的混合物在微波照射下在140℃加热2h。反应混合物通过反相快速色谱(溶剂梯度：0-95％甲醇/水)纯化，得到220mg(84％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝375/377。
步骤3：(S)-2-环丙基-2-((1-(5,6-二氢-[1,2,4]***并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酸
遵循与实施例125步骤3类似的操作由4-溴-1-(5,6-二氢-[1,2,4]***并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(320mg,0.853mmol)制备标题化合物(240mg,69％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝410。
步骤4：(S)-2-环丙基-2-((1-(5,6-二氢-[1,2,4]***并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺
遵循与实施例125步骤4类似的操作由(S)-2-环丙基-2-((1-(5,6-二氢-[1,2,4]***并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酸(230mg,0.562mmol)制备标题化合物(130mg,57％产率)。161：LCMS(ESI):RT(min)＝2.10,[M+H]+＝409,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.98(s,1H),7.29(s,1H),6.92(s,1H),6.24(d,J＝2.0Hz,1H),6.10(d,J＝2.0Hz,1H),5.33(d,J＝7.2Hz,1H),4.55(s,2H),4.39-4.22(m,4H),4.12-3.92(m,2H),3.82-3.64(m,2H),3.17-3.01(m,1H),2.23-2.15(m,2H),1.13-1.04(m,1H),0.52-0.40(m,3H),0.32-0.21(m,1H)。
实施例162(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酰胺162
步骤1：5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺
将来自实施例101的5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(1.5g,3.89mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(1.98g,7.80mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯二氯甲烷复合物(1.59g,1.95mmol)、乙酸钾(1.53g,15.6mmol)和1,4-二噁烷(20mL)的混合物在超声条件下用氮气脱气。将所得溶液在80℃搅拌15h。滤出固体并真空蒸发滤液。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-100％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到750mg(45％)标题化合物，其为黑色固体。LCMS:[M+H]+＝433。
步骤2：1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-醇
将5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(800mg,1.85mmol)、乙酸(3mL)、水(3mL)和过氧化氢(1.5mL)的混合物在25℃搅拌1h。通过添加亚硫酸氢钠水溶液淬灭反应物。通过过滤收集析出物，得到420mg(70％)标题化合物，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(br,1H),7.69(s,2H),7.63(s,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.43(d,J＝8.0Hz,1H),6.66(s,1H),6.41(s,1H),4.46-4.40(m,2H),4.36-4.30(m,2H),2.40-2.25(m,2H)。
步骤3：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酸甲酯
将1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-醇(450mg,1.40mmol)、(R)-2-(甲苯磺酰基氧基)丙酸甲酯(540mg,2.09mmol)和碳酸钾(771mg,5.58mmol)于DMSO(8mL)中的混合物在35℃搅拌24h。通过过滤除去固体且滤液经由反相快速色谱(溶剂梯度：0-100％甲醇/水)纯化，得到500mg(88％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS:[M+H]+＝409。
步骤4：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酸
将于水(2mL)中的氢氧化锂(53.0mg,2.21mmol)添加至(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酸甲酯(600mg,1.47mmol)于甲醇(8mL)中的溶液并将所得溶液在25℃搅拌3h。用乙酸调节pH至5并真空蒸发。残余物经由反相快速色谱(溶剂梯度：0-95％甲醇/水)纯化，得到350mg(60％)标题化合物，其为白色固体。LCMS:[M+H]+＝395。
步骤5：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酰胺
将(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酸(330mg,0.837mmol)、DIPEA(3mL,38.765mmol)、氯化铵(452mg,8.45mmol)和HATU(636mg,1.67mmol)于DMF(3mL)中的混合物在室温搅拌20min。滤出固体且滤液经由反相HPLC纯化并冻干，得到160mg(49％)162，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.41,[M+H]+＝394,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.62-7.52(m,3H),7.50-7.42(m,2H),7.38-7.30(m,1H),7.19(s,1H),6.76(s,1H),6.41(s,1H),4.68-4.54(m,1H),4.45-4.30(m,2H),4.30-4.17(m,2H),2.15-2.25(m,2H),1.42(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例163(S)-2-环丙基-2-((1-(3-(二氟甲氧基)-4-甲氧基苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺163
遵循实施例125的操作制备163。LCMS(ESI):RT(min)＝1.57,[M+H]+＝459,方法＝G；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(d,J＝2.0Hz,1H),7.40-7.00(m,3H),6.96(s,1H),6.37(d,J＝2.0Hz,1H),6.24(d,J＝2.0Hz,1H),5.47(d,J＝7.4Hz,1H),4.34-4.32(m,2H),4.25-4.21(m,2H),3.92(s,3H),3.16-3.12(m,1H),2.35-2.20(m,2H),1.12-1.09(m,1H),0.58-0.42(m,3H),0.36-0.26(m,1H)。
实施例164(S)-5-(4-((2-氨基-1-环丙基-2-氧代乙基)氨基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-2-甲氧基苯甲酰胺164
将来自实施例158的(S)-5-(4-((2-氨基-1-环丙基-2-氧代乙基)氨基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯(120mg,0.266mmol)和氨于甲醇(10mL)中的饱和溶液的混合物在密封管中在室温搅拌24h。真空蒸发反应混合物。残余物经由反相HPLC纯化并冻干，得到15.6mg(13％)164，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.614,[M+H]+＝436,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.18(s,1H),7.89(d,J＝8.6Hz,1H),7.74-7.68(m,2H),7.37(m,2H),6.99(s,1H),6.33(m,2H),5.76(br,1H),4.50-4.35(m,2H),4.32-4.15(m,2H),3.98(s,3H),3.19-3.15(m,1H),2.29-2.27(m,2H),1.13-1.11(m,1H),0.52-0.48(m,3H),0.35-0.27(m,1H)。
实施例165(S)-2-环丙基-2-((1-(吡啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺165
遵循实施例150的操作制备165。LCMS(ESI):RT(min)＝1.17,[M+H]+＝364,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.74(d,J＝4.5Hz,2H),7.78(d,J＝4.5Hz,2H),7.34(s,1H),6.96(s,1H),6.39(d,J＝2.0Hz,1H),6.30(d,J＝2.0Hz,1H),5.55(d,J＝7.4Hz,1H),4.39-4.23(m,4H),3.17-3.12(m,1H),2.34-2.22(m,2H),1.20-1.02(m,1H),0.59-0.40(m,3H),0.35-0.20(m,1H)。
实施例166(S)-2-环丙基-2-[1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]乙酰胺166
遵循实施例160的操作制备166。LCMS(ESI):RT(min)＝2.22,[M+H]+＝380.2,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.16(s,0.6H),7.94(d,J＝0.8Hz,1H),7.33(d,J＝2.2Hz,1H),6.93(d,J＝2.0Hz,1H),6.31(d,J＝2.0Hz,1H),6.16(d,J＝2.0Hz,1H),5.39(br s,1H),4.34-4.24(m,4H),3.92(s,3H),3.11(d,J＝8.2Hz,1H),2.34-2.25(m,2H),1.14-1.04(m,1H),0.53-0.41(m,3H),0.33-0.22(m,1H)。
实施例167(S)-2-环丙基-2-((1-(2,3-二氢-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-b]吡啶-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺167
遵循实施例125的操作制备167。LCMS(ESI):RT(min)＝2.87,[M+H]+＝421,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.3Hz,1H),7.33(br s,1H),6.95(br s,1H),6.35(d,J＝2.0Hz,1H),6.26(d,J＝2.0Hz,1H),5.50(d,J＝7.3Hz,1H),4.67(t,J＝5.6Hz,2H),4.51-4.44(m,2H),4.37-4.27(m,4H),3.13(t,J＝7.7Hz,1H),2.30-2.24(m,2H),1.19-1.03(m,1H),0.56-0.45(m,3H),0.30(dt,J＝9.8,4.2Hz,1H)。
实施例168(5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-基)甲醇168
步骤1：乙酸(5-溴苯并[d]噁唑-2-基)甲酯
将5-溴-2-(氯甲基)苯并[d]噁唑(1.40g,5.71mmol)、乙酸铯(2.20g,11.52mmol)于DMF(30mL)中的混合物在室温搅拌10小时，反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到1.2g(78％)标题化合物，其为灰白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91(s,1H),7.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.45(d,J＝8.7Hz,1H),5.36(s,2H),2.24(s,3H)。
步骤2：乙酸(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-基)甲酯
将乙酸(5-溴苯并[d]噁唑-2-基)甲酯(600mg,2.23mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(678mg,2.66mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)(100mg,0.130mmol)和乙酸钾(652mg,6.66mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在密封管中在微波照射下在80℃加热30min。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到600mg(85％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝318。
步骤3：乙酸(5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-基)甲酯
将4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(900mg,2.37mmol)、乙酸(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-基)甲酯(600mg,1.89mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)(138mg,0.190mmol)、乙酸钾(2N水溶液,1.8mL,3.60mmol)和碳酸钠(2N水溶液,1.8mL,3.60mmol)于乙腈(7.2mL)中的混合物在微波照射下在80℃加热20min。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到201mg(24％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝442/444；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.23-8.15(m,1H),8.02-7.87(m,1H),7.87-7.72(m,1H),7.48(d,J＝1.8Hz,1H),6.93(d,J＝1.8Hz,1H),5.43(d,J＝2.8Hz,2H),4.49-4.40(m,2H),4.38-4.28(m,2H),2.38-2.28(m,2H),2.17(s,3H)。
步骤4：(5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-基)甲醇
将乙酸(5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-基)甲酯(150mg,0.340mmol)和碳酸钾(11.8mg,0.090mmol)于甲醇(2mL)中的混合物在室温搅拌2h。真空蒸发混合物且残余物经由反相HPLC纯化并冻干，得到25.8mg(19％)168，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.49,[M+H]+＝400/402,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.15(s,1H),7.93-7.90(d,J＝8.4Hz,1H),7.83-7.80(d,J＝8.4Hz,1H),7.47(d,J＝1.8Hz,1H),6.92(d,J＝1.8Hz,1H),5.97-5.92(m,1H),4.76(d,J＝6.3Hz,2H),4.46-4.32(m,2H),4.39-4.28(m,2H),2.33-2.07(m,2H)。
实施例169(S)-2-((1-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺169
遵循实施例164的操作制备169。LCMS(ESI):RT(min)＝1.65,[M+H]+＝404,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.89(br,1H),8.69(d,J＝4.8Hz,1H),8.32(s,1H),7.55(d,J＝4.8Hz,1H),7.39(s,1H),6.99(s,1H),6.48(d,J＝1.9Hz,1H),6.37(d,J＝2.0Hz,1H),5.61(d,J＝7.4Hz,1H),4.44-4.29(m,4H),3.21-3.16(m,1H),2.35-2.20(m,2H),1.13-1.09(m,1H),0.54-0.48(m,3H),0.39-0.29(m,1H)。
实施例170(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺170
遵循实施例164的操作制备170。LCMS(ESI):RT(min)＝1.25,[M+H]+＝435,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.07(s,1H),7.69(s,2H),7.60(d,J＝8.2,1H),7.44(d,J＝8.3Hz,1H),7.34(s,1H),6.96(s,1H),6.37(d,J＝2.0Hz,1H),6.23(d,J＝2.0Hz,1H),5.45(d,J＝7.3Hz,1H),4.37-4.29(m,2H),4.24-4.15(m,2H),3.16-3.12(m,1H),2.26-2.25(m,2H),1.13-1.09(m,1H),0.51-0.45(m,3H),0.35-0.25(m,1H)。
实施例173(S)-2-环丙基-2-((1-(2-甲氧基喹喔啉-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺173
遵循实施例164的操作制备173。LCMS(ESI):RT(min)＝2.47,[M+H]+＝445,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),8.37(s,1H),8.17-8.14(d,J＝8.4Hz,1H),7.98(d,J＝8.7Hz,1H),7.36(s,1H),6.98(s,1H),6.42(s,1H),6.28(s,1H),5.52(d,J＝7.2Hz,1H),4.45-4.25(m,4H),4.09(s,3H),3.19-3.14(m,1H),2.29-2.28(m,2H),1.15-1.09(m,1H),0.52-0.44(m,3H),0.38-0.25(m,1H)。
实施例174(S)-2-[1-(3-氰基哌啶-1-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]-2-环丙基乙酰胺174
步骤1：1-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)哌啶-3-甲酸
将4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(0.20g,0.53mmol)、哌啶-3-甲酸(88mg,0.68mmol)、碘化亚铜(20mg,0.11mmol)和磷酸钾(0.28g,1.32mmol)于DMSO(2.0mL)中的混合物在密封小瓶中在100℃加热16h。将反应混合物冷却并用DCM(40mL)稀释，然后经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-35％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化，得到0.17g(86％)标题化合物，其为奶油色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝380/382。
步骤2：1-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)哌啶-3-甲酰胺
历经5分钟向1-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)哌啶-3-甲酸(77.5mg,0.204mmol)、氯化铵(21.8mg,0.407mmol)和DIPEA(0.14mL,0.82mmol)于DMF(0.7mL)中的混合物中逐份添加HATU(155mg,0.41mmol)并将反应混合物在室温搅拌10min。所得混合物用DCM(20mL)稀释并经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：2-10％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化，得到标题化合物(定量)，其为奶油色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝379/381。
步骤3：1-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)哌啶-3-甲腈
历经3分钟将三氟乙酸酐(34μL,0.246mmol)添加至1-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)哌啶-3-甲酰胺(推定为0.204mmol)和吡啶(33μL,0.403mmol)于THF(1.5mL)中的混合物。将反应混合物在室温搅拌30min，然后真空蒸发。将残余物在DCM和饱和碳酸钾水溶液之间分配。水相再用DCM萃取且合并的有机萃取物用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：50-100％乙酸乙酯/甲苯)纯化，得到44mg(60％,历经2步)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝361/363。
步骤4：遵循实施例126的操作制备174。LCMS(ESI):RT(min)＝2.31,2.33,[M+H]+＝395.2,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ尤其是7.27(br s,1H),6.91(br s,1H),6.23(d,J＝2.0Hz,1H),6.06(d,J＝2.0Hz,1H),5.29(d,J＝7.4Hz,1H),4.27-4.24(m,2H),4.01-3.87(m,2H),3.10-3.01(m,2H),2.23-2.18(m,2H),1.90-1.66(m,4H),1.12-1.04(m,1H),0.50-0.42(m,3H),0.30-0.25(m,1H)。
实施例175(S)-2-环丙基-2-((1-(5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺175
遵循实施例125的操作制备175。LCMS(ESI):RT(min)＝2.75,[M+H]+＝442,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(d,J＝2.0Hz,1H),9.18(d,J＝1.8Hz,1H),8.67(t,J＝2.1Hz,1H),7.35(br s,1H),6.96(br s,1H),6.41(d,J＝2.0Hz,1H),6.32(d,J＝1.9Hz,1H),5.57(d,J＝7.2Hz,1H),4.39-4.30(m,4H),3.43(s,3H),3.16(t,J＝7.7Hz,1H),2.32-2.27(m,2H),1.15-1.07(m,1H),0.57-0.42(m,3H),0.33-0.28(m,1H)。
实施例176(S)-2-((1-(3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺176
遵循实施例125的操作制备176。LCMS(ESI):RT(min)＝1.08,[M+H]+＝404,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.40(s,0.6H),12.74(s,0.4H),8.57-8.54(m,1H),8.48-8.46(m,1H),7.59-7.50(m,1H),7.34(s,1H),6.96(s,1H),6.43(d,J＝10.2Hz,1H),6.34(d,J＝11.4Hz,1H),5.61-5.53(m,1H),4.37-4.22(m,4H),3.19-3.14(m,1H),2.27-2.24(m,2H),1.13(m,1H),0.51(m,3H),0.32(m,1H)。
实施例177(S)-2-环丙基-2-((1-(噻吩并[2,3-b]吡啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺177
遵循实施例158的操作制备177。LCMS(ESI):RT(min)＝2.10,[M+H]+＝420,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.73(d,J＝4.8Hz,1H),7.99(d,J＝6.0Hz,1H),7.72(d,J＝4.8Hz,1H),7.58(d,J＝6.0Hz,1H),7.37(s,1H),6.98(s,1H),6.44(d,J＝1.8Hz,1H),6.35(d,J＝1.8Hz,1H),5.59(d,J＝7.2Hz,1H),4.36-4.33(m,2H),4.18-4.14(m,2H),3.19-3.14(m,1H),2.27(m,2H),1.14-1.11(m,1H),0.52-0.48(m,3H),0.31(m,1H)。
实施例178(S)-2-((1-(苯并[d]噻唑-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺178
遵循实施例158的操作制备178。LCMS(ESI):RT(min)＝1.18,[M+H]+＝420,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.52(s,1H),8.61(s,1H),8.22(d,J＝8.2Hz,1H),7.94(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(s,1H),6.97(s,1H),6.41(d,J＝1.6Hz,1H),6.28(d,J＝1.6Hz,1H),5.50(d,J＝7.6Hz,1H),4.36-4.34(m,2H),4.32-4.28(m,2H),3.18-3.14(m,1H),2.28-2.27(m,2H),1.14-1.11(m,1H),0.52-0.46(m,3H),0.33-0.31(m,1H)。
实施例179(S)-2-环丙基-2-((1-(7,8-二氢吡啶并[3,4-b]吡嗪-6(5H)-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺179
遵循实施例161的操作制备179。LCMS(ESI):RT(min)＝1.18,[M+H]+＝420,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.49-8.46(m,2H),7.27(s,1H),6.90(s,1H),6.23(s,1H),6.07(s,1H),5.29(d,J＝7.5Hz,1H),4.48(s,2H),4.29-4.28(m,2H),4.03-4.00(m,2H),3.62-3.58(m,2H),3.13-3.05(m,3H),2.26-2.22(m,2H),1.09-1.06(m,1H),0.48-0.43(m,3H),0.28-0.27(m,1H)。
实施例180(S)-2-((1-(1,4-氧杂氮杂环庚-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺180
遵循实施例161的操作制备180。LCMS(ESI):RT(min)＝1.71,[M+H]+＝386,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.26(s,1H),6.90(s,1H),6.17(d,J＝2.0Hz,1H),5.98(d,J＝2.0Hz,1H),5.22(d,J＝7.4Hz,1H),4.29-4.19(m,2H),3.91-3.87(m,2H),3.82-3.70(m,4H),3.55-3.40(m,4H),3.08-3.03(m,1H),2.25-2.12(m,2H),1.98-1.90(m,2H),1.08-1.04(m,1H),0.53-0.37(m,3H),0.30-0.20(m,1H)。
实施例181 2-(4-{4-[((S)-氨甲酰基环丙基甲基)氨基]-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基}吡唑-1-基)异丁酰胺甲酸盐181
步骤1：4-(1-氨基-3-溴-7,8-二氢-6H-5-氧杂-9-氮杂苯并环庚烯-9-羰基)吡唑-1-甲酸叔丁酯和4-(3-溴-6,7,8,9-四氢-5-氧杂-9-氮杂苯并环庚烯-1-基氨甲酰基)吡唑-1-甲酸叔丁酯
在氮气下在0℃向吡唑-1,4-二甲酸1-叔丁酯(865mg,4.07mmol)和DIPEA(0.78mL,4.50mmol)于DCM(10.0mL)中的混合物中添加甲烷磺酰氯(0.34mL,4.44mmol)并将所得混合物在0℃搅拌15min。在0℃添加另一份DIPEA(0.32mL,1.82mmol)，然后在0℃在氮气下将所得混合物添加至来自实施例101的8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺(900mg,3.70mmol)于DCM(10.0mL)中的溶液。将反应混合物在0℃搅拌30min，然后温热至室温并在环境温度搅拌18h。所得混合物用水稀释。有机萃取物用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。粗残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-5％甲醇/DCM)纯化，得到1.06g(67％,异构体的约1:1混合物)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝435/437。
步骤2：4-溴-1-(1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
将4-(1-氨基-3-溴-7,8-二氢-6H-5-氧杂-9-氮杂苯并环庚烯-9-羰基)吡唑-1-甲酸叔丁酯和4-(3-溴-6,7,8,9-四氢-5-氧杂-9-氮杂苯并环庚烯-1-基氨甲酰基)吡唑-1-甲酸叔丁酯(1.08g,2.47mmol)于乙酸(20mL)中的混合物在90℃加热2h。真空蒸发反应混合物且粗残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-8％甲醇/DCM)纯化，得到490mg(63％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝319/321。
步骤3：2-[4-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)吡唑-1-基]-2-甲基丙酸乙酯
向4-溴-1-(1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(253mg,0.79mmol)和碳酸铯(388mg,1.19mmol)于DMF(8.0mL)中的混悬液中添加2-溴-2-甲基丙酸乙酯(240mg,1.19mmol)并将反应混合物在90℃加热3h。将所得混合物真空浓缩，然后在乙酸乙酯和水之间分配。有机层再先后用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发，得到300mg(87％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝433/435。
步骤4：2-(4-{4-[((S)-羧基环丙基甲基)氨基]-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基}吡唑-1-基)-2-甲基丙酸
将2-[4-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)吡唑-1-基]-2-甲基丙酸乙酯(300mg,0.69mmol)、L-环丙基甘氨酸(203mg,1.73mmol)、碘化亚铜(27mg,0.138mmol)和磷酸钾(591mg,2.76mmol)于DMSO(3.0mL)中的混合物在超声条件下用氩气脱气。将反应混合物在100℃加热18h，然后冷却至室温。添加DCM(60mL)并将所得灰色固体真空干燥，得到(>100％,推定为0.69mmol)粗标题化合物，其未经进一步纯化即用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝440。
步骤5：2-(4-{4-[((S)-氨甲酰基环丙基甲基)氨基]-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基}吡唑-1-基)异丁酰胺甲酸盐
向粗2-(4-{4-[((S)-羧基环丙基甲基)氨基]-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基}吡唑-1-基)-2-甲基丙酸(推定为0.69mmol)、氯化铵(230mg,4.10mmol)和三乙胺(1.0mL,6.84mmol)于DMF(5.0mL)中的混合物中逐份添加HATU(1.60g,4.10mmol)并将反应混合物在室温搅拌1h。真空蒸发所得混合物且粗残余物经由硅胶快速色谱[溶剂梯度：0-20％甲醇(2N氨)/DCM]纯化，接着经由反相HPLC进一步纯化，得到17mg(6％)181的甲酸盐，其为灰白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.34,[M+H]+＝438.2,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34(d,J＝0.6Hz,1H),8.21(s,0.6H),8.02(d,J＝0.6Hz,1H),7.33(d,J＝2.2Hz,1H),7.23(br s,1H),6.94(s,2H),6.32(d,J＝1.9Hz,1H),6.16(d,J＝2.1Hz,1H),5.41(br s,1H),4.37-4.28(m,4H),3.10(d,J＝7.8Hz,1H),2.34-2.26(m,2H),1.77(s,6H),1.15-1.05(m,1H),0.54-0.44(m,3H),0.32-0.26(m,1H)。
实施例182(S)-2-环丙基-2-[1-(3-羟基哌啶-1-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基氨基]乙酰胺182
步骤1：1-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)哌啶-3-醇
将4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(50mg,0.132mmol)、3-羟基哌啶(20.1mg,0.20mmol)、3,4,7,8-四甲基-1,10-菲咯啉(6.2mg,0.026mmol)、Cu(OTf).PhMe(6.9mg,0.013mmol)、磷酸钾(56mg,0.26mmol)和2-甲基丁-2-醇(0.75ml)的混合物在密封小瓶中在100℃加热16h。将冷却的反应混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液之间分配。水相再用乙酸乙酯萃取且合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-100％乙酸甲酯/乙酸乙酯)纯化，得到14.3mg(31％)标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝352/354。
步骤2：遵循实施例126的操作制备182。LCMS(ESI):RT(min)＝2.20,[M+H]+＝386.2,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ尤其是7.28(br s,1H),6.91(br s,1H),6.21(d,J＝2.0Hz,1H),6.02(d,J＝2.0Hz,1H),5.26(d,J＝7.4Hz,1H),4.95-4.93(m,1H),4.26-4.23(m,2H),3.90-3.87(m,2H),3.73-3.65(m,1H),3.07(t,J＝7.7Hz,1H)2.85-2.79(m,1H),2.71-2.65(m,1H),2.20-2.15(m,2H),1.91-1.85(m,1H),1.79-1.72(m,1H),1.62-1.52(m,1H),1.38-1.29(m,1H),1.12-1.04(m,1H),0.50-0.42(m,3H),0.30-0.24(m,1H)。
实施例183(S)-2-环丙基-2-((1-(1-甲基-1H-1,2,4-***-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺183
遵循实施例137的操作制备183。LCMS(ESI):RT(min)＝3.10,[M+H]+＝386.2,方法＝B；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.13(s,1H),7.24(s,1H),6.84(s,1H),6.44(d,J＝2.0Hz,1H),6.37(d,J＝2.0Hz,1H),5.50(d,J＝7.3Hz,1H),4.66-4.58(m,2H),4.39-4.31(m,2H),4.23(s,3H),2.37-2.23(m,2H),1.29-1.22(m,1H),1.18-1.06(m,1H),0.59-0.43(m,3H),0.36-0.24(m,1H)。
实施例184(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺184
遵循实施例158的操作制备184。LCMS(ESI):RT(min)＝1.27,[M+H]+＝435,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.81(d,J＝8.1Hz,1H),7.71-7.61(m,3H),7.41-7.31(m,2H),6.96(s,1H),6.38(d,J＝2.0Hz,1H),6.25(d,J＝2.0Hz,1H),5.46(d,J＝7.3Hz,1H),4.34-4.33(m,2H),4.28-4.23(m,2H),3.17-3.13(m,1H),2.25-2.24(m,2H),1.14-1.07(m,1H),0.58-0.43(m,3H),0.37-0.26(m,1H)。
实施例185(S)-2-((1-(2-(甲基氨基)苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)丙酰胺185
遵循实施例186的操作制备185。LCMS(ESI):RT(min)＝1.18,[M+H]+＝407,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.97-7.96(m,1H),7.56(s,1H),7.47(d,J＝8.2Hz,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.28(s,1H),6.93(s,1H),6.37(d,J＝2.0Hz,1H),6.20(d,J＝2.0Hz,1H),5.42(d,J＝7.3Hz,1H),4.34-4.31(m,2H),4.20-4.18(m,2H),3.73-3.71(m,1H),2.93(d,J＝4.7Hz,3H),2.27-2.24(m,2H),1.32-1.29(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例187(S)-2-((1-(2-氨基喹喔啉-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺187
遵循实施例158的操作制备187。LCMS(ESI):RT(min)＝1.75,[M+H]+＝430,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.36(s,1H),8.11(s,1H),7.93(d,J＝8.4Hz,1H),7.59(d,J＝8.7Hz,1H),7.33(s,1H),7.19(s,2H),6.96(s,1H),6.39(d,J＝1.8Hz,1H),6.25(d,J＝1.8Hz,1H),5.47(d,J＝7.5Hz,1H),4.35-4.29(m,4H),3.18-3.13(m,1H),2.32-2.21(m,2H),1.17-1.05(m,1H),0.53-0.47(m,3H),0.33-0.32(m,1H)。
实施例188(S)-4-(4-((2-氨基-1-环丙基-2-氧代乙基)氨基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-2-氟苯甲酰胺188
遵循实施例150的操作制备188。LCMS(ESI):RT(min)＝1.14,[M+H]+＝424,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.82-7.65(m,5H),7.33(s,1H),6.96(s,1H),6.38(s,1H),6.28(s,1H),5.52(d,J＝7.2Hz,1H),4.34-4.32(m,2H),4.28-4.17(m,2H),3.17-3.12(m,1H),2.27-2.26(m,2H),1.14-1.08(m,1H),0.53-0.46(m,3H),0.35-2.22(m,1H)。
实施例189(S)-2-环丙基-2-((1-(3-羟基喹啉-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺189
遵循实施例158的操作制备189。LCMS(ESI):RT(min)＝0.83,[M+H]+＝430,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.48(br s,1H),8.66(d,J＝2.8Hz,1H),8.24(d,J＝1.8Hz,1H),8.03(d,J＝8.7Hz,1H),7.87(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(s,1H),7.37(s,1H),6.99(s,1H),6.42(d,J＝2.0Hz,1H),6.29(d,J＝2.0Hz,1H),5.53(d,J＝7.3Hz,1H),4.42-4.26(m,4H),3.20-3.08(m,1H),2.35-2.24(m,2H),1.15-1.02(m,1H),0.60-0.43(m,3H),0.35-0.25(m,1H)。
实施例190(S)-2-((1-(4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺190
遵循实施例158的操作制备190。LCMS(ESI):RT(min)＝1.15,[M+H]+＝430,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.65(s,0.2H)14.23(s,0.8H),8.69(s,1H),8.19-8.17(m,2H),7.89-7.87(m,2H),7.36(s,1H),6.98(s,1H),6.39(s,1H),6.30(s,1H),5.65(br s,1H),4.49-4.18(m,4H),3.18-3.08(m,1H),2.33-2.18(m,2H),1.21-1.06(m,1H),0.52-0.48(m,3H),0.32-0.30(m,1H)。
实施例191(S)-5-(4-((2-氨基-1-环丙基-2-氧代乙基)氨基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)吡啶-2-甲酰胺191
遵循实施例150的操作制备191。LCMS(ESI):RT(min)＝1.08,[M+H]+＝407,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.01(s,1H),8.39-8.36(d,J＝8.1Hz,1H),8.23(s,1H),8.16(d,J＝8.4Hz,1H),7.76(s,1H),7.35(s,1H),6.97(s,1H),6.40(d,J＝1.5Hz,1H),6.31(d,J＝2.1Hz,1H),5.56(d,J＝7.5Hz,1H),4.36-4.30(m,4H),3.17-3.12(m,1H),2.35-2.20(m,2H),1.14-1.08(m,1H),0.51-0.4(m,3H),0.34-0.29(m,1H)。
实施例192 1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-N-(3,3-二氟环丁基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-胺192
将5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(实施例101,200mg,0.519mmol)、3,3-二氟环丁胺盐酸盐(157mg,1.09mmol)、二叔丁基(2’,4’,6’-三异丙基联苯-2-基)膦(45.0mg,0.106mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(93.0mg,0.117mmol)和二(三甲基硅烷基)氨基锂(1M于THF中的溶液,2.00mL,2.00mmol)于THF(10.0mL)中的混合物用氮气脱气。将反应混合物在微波照射下在100℃加热2h。反应混合物用甲醇稀释，然后过滤。真空蒸发滤液。所得残余物经由反相HPLC纯化并冻干，得到17.5mg(8％)192，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.58,[M+H]+＝412,方法＝C；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.56-7.46(m,4H),7.35-7.32(m,1H),6.35(d,J＝1.8Hz,1H),6.14(d,J＝1.8Hz,1H),5.81(d,J＝6.6Hz,1H),4.35-4.32(m,2H),4.23-4.20(m,2H),3.81-3.74(m,1H),3.14-2.93(m,2H),2.49-2.30(m,2H),2.27-2.20(m,2H)。
实施例193 5-(4-溴-3-氟-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺193
步骤1：1-溴-5-(3,3-二乙氧基丙氧基)-2-氟-4-硝基苯
历经10min向1-溴-2,5-二氟-4-硝基苯(6.1g,25.6mmol)和3,3-二乙氧基-1-丙醇(3.8g,25.6mmol)于DMF(30mL)中的溶液中逐份添加氢化钠(60％于矿物油中,1.14g,28.1mmol)。将反应混合物在0℃搅拌30min，然后温热至室温并再搅拌30min。将混合物在乙酸乙酯和1N盐酸之间分配并分离各相。水层用乙酸乙酯萃取，合并有机萃取物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-20％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到7.71g(82％)标题化合物，其为黄色油状物。LCMS(ESI):[M+Na]+＝388/390。
步骤2：3-溴-5-(3,3-二乙氧基丙氧基)-2-氟-6-硝基苯胺
在10℃向1-溴-5-(3,3-二乙氧基丙氧基)-2-氟-4-硝基苯(3.50g,9.56mmol)和1,1,1-三甲基碘化肼(2.12g,10.5mmol)于DMSO(35mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(2.57g,22.9mmol)。使混合物温热至室温并搅拌1h。将所得混合物在乙酸乙酯和水之间分配并分离各相。水层用1N盐酸(约20mL)调节至约pH 3，然后用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。重复该过程且合并两个批次，然后残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：2-15％乙酸乙酯/甲苯)纯化，得到3.24g(45％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+Na]+＝403/405。
步骤3：4-溴-6-(3,3-二乙氧基丙氧基)-3-氟苯-1,2-二胺
向3-溴-5-(3,3-二乙氧基丙氧基)-2-氟-6-硝基苯胺(3.73g,9.77mmol)于甲醇(30mL)中的混悬液中添加氯化铵(4.72g,87.9mmol)于水(20mL)中的溶液，接着添加铁粉(3.29g,58.6mmol)。将混合物在90℃搅拌30min。使混合物温热至室温并在乙酸乙酯和水之间分配，然后通过硅藻土垫过滤。收集滤液并分离各相。水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：10-60％乙酸乙酯/甲苯)纯化，得到3.32g(97％)标题化合物，其为浅棕色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.50(d,J＝5.4Hz,1H),4.74(t,J＝6.3Hz,1H),4.03(t,J＝6.3Hz,2H),3.72-3.64(m,2H),3.58-3.42(m,6H),2.10(q,J＝6.3Hz,2H),1.22(t,J＝6.9Hz,6H)。
步骤4：8-溴-7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺
在0℃历经5min向4-溴-6-(3,3-二乙氧基丙氧基)-3-氟苯-1,2-二胺(3.32g,9.43mmol)于DCM(33mL)中的溶液中先后逐滴添加TFA(33mL)和三乙基硅烷(7.4mL,47mmol)。将反应混合物在0℃搅拌10min，然后温热至室温并再搅拌10min。与甲苯共沸除去溶剂。将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配并分离各相。水层再用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-30％乙酸乙酯/甲苯)纯化，得到2.31g(94％)标题化合物和5-溴-6-氟色满-7,8-二胺的1:1混合物，其为淡棕色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝261/263。
步骤5：4-溴-3-氟-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
将8-溴-7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺和5-溴-6-氟色满-7,8-二胺(2.31g,8.86mmol)及对甲苯磺酸(150mg,0.87mmol)于原甲酸三甲酯(30mL)中的混合物在105℃搅拌16h。与甲苯共沸除去溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：2-10％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化，得到1.14g(47％)标题化合物，其为奶油色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝271/273。
步骤6：4-溴-3-氟-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
在氮气下在-40℃向二异丙胺(0.58mL,4.10mmol)于THF(20mL)中的溶液中逐滴添加正丁基锂(2.5N于己烷中,1.5mL,3.75mmol)。历经10min使混合物温热至-20℃，然后冷却至-78℃。历经5min逐滴添加4-溴-3-氟-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(926mg,3.42mmol)于THF(8.0mL)中的溶液。将混合物再搅拌15min，然后历经5min逐滴添加碘(1.13g,4.45mmol)于THF(5.0mL)中的溶液。将混合物再搅拌1h，然后用饱和氯化铵水溶液淬灭。将混合物在乙酸乙酯和饱和硫代硫酸钠水溶液之间分配并分离各相。水层再用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥并蒸发至干。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：1-3％甲醇/DCM)纯化，得到1.04g(77％)标题化合物，其为奶油色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝397/399。
步骤7：向4-溴-3-氟-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(103mg,0.26mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)-苯并噁唑-2-基胺(74mg,0.28mmol)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(21mg,0.026mmol)于1,2-二甲氧基乙烷(2.0mL)中的混悬液中添加2N碳酸钠水溶液(0.52mL,1.04mmol)。将反应混合物在100℃在氮气下在密封小瓶中搅拌5h。使所得混合物温热至室温并在乙酸乙酯和水之间分配且水层再用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发。粗残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：2-10％甲醇/DCM)纯化，得到78mg(75％)193，其为米黄色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝4.02,[M+H]+＝403/405,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(s,2H),7.60(d,J＝1.3Hz,1H),7.52(d,J＝8.1Hz,1H),7.41(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),6.95(d,J＝5.2Hz,1H),4.44-4.39(m,2H),4.33(t,J＝5.2Hz,2H),2.36-2.29(m,2H)。
实施例194(S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-3-氟-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺194
步骤1：(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-3-氟-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-L-脯氨酸
将5-(4-溴-3-氟-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(86mg,0.21mmol)、L-脯氨酸(99mg,0.84mmol)、碘化亚铜(I)(41mg,0.21mmol)和磷酸钾(274mg,1.26mmol)混悬于DMSO(3.0mL)并在微波照射下在120℃加热3.5h。粗反应混合物用DCM(60mL)稀释并经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-60％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化，得到50mg(53％)标题化合物，其为灰色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝438。
步骤2：向(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-3-氟-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-L-脯氨酸(107mg,0.24mmol)于DMF(1.2mL)中的溶液中添加氯化铵(26mg,0.49mmol|)和DIPEA(169μL,0.98mmol)，接着历经5min逐份添加HATU(185mg,0.49mmol)并将反应混合物在室温搅拌10min。所得混合物直接经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：2-14％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化。所得残余物用甲醇研磨，得到53mg(50％)194，其为灰白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.57,[M+H]+＝437,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.58(s,2H),7.56(d,J＝1.3Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),7.37(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),7.23(d,J＝1.8Hz,1H),6.93(d,J＝1.8Hz,1H),6.22(d,J＝6.7Hz,1H),4.35-4.31(m,2H),4.27-4.21(m,2H),4.10-4.04(m,1H),3.76-3.69(m,1H),3.31-3.24(m,1H),2.30-2.15(m,3H),1.96-1.84(m,3H)。
实施例195：(S)-2-((1-([1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-b]吡啶-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺195
步骤1：[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-b]吡啶-7-甲酸乙酯
向微波小瓶中添加7-溴-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-b]吡啶(200mg,0.99mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(73mg,0.099mmol)、碳酸钾(205mg,1.49mmol)、乙醇(3mL)和DMF(7.5mL)。除去烧瓶中的空气并用一氧化碳回填三次。然后将反应物加热至70℃并在含有一氧化碳气体的气囊下搅拌。16h后，将反应物冷却至室温并通过硅藻土过滤。滤液用水稀释并用乙酸异丙酯萃取。有机层用盐水洗涤并用硫酸镁干燥。粗产物通过硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-80％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到111mg(58％)标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝195.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.64(d,J＝5.7Hz,1H),7.14(d,J＝6.0Hz,1H),6.25(s,2H),4.33(q,J＝7.1Hz,2H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H)。
步骤2：[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-b]吡啶-7-甲酸
遵循与实施例116步骤2类似的操作由[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-b]吡啶-7-甲酸乙酯制备标题化合物(143mg,88％)。LCMS(ESI):[M+H]+＝168；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.43(d,J＝5.3Hz,1H),7.00(d,J＝5.4Hz,1H),6.02(s,2H)。
步骤3：1-([1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-b]吡啶-7-基)-4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
遵循与实施例125步骤1-2类似的操作由4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁和[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-b]吡啶-7-甲酸制备标题化合物(0.238g,51％)。LCMS(ESI):[M+H]+＝374。
步骤4：(S)-2-((1-([1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-b]吡啶-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酸
遵循与实施例125步骤3类似的操作由1-([1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-b]吡啶-7-基)-4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁和(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸制备标题化合物(0.153g,99％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝409。
步骤5：遵循与实施例125步骤4类似的操作由(S)-2-((1-([1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-b]吡啶-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酸制备195(18.5mg,12％)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.69,[M+H]+＝409.1,方法＝B；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.71(d,J＝5.6Hz,1H),7.34(d,J＝2.7Hz,1H),7.12(d,J＝5.5Hz,1H),6.95(d,J＝2.6Hz,1H),6.38(d,J＝1.9Hz,1H),6.30(d,J＝1.9Hz,1H),6.25(d,J＝2.8Hz,2H),5.56(d,J＝7.3Hz,1H),4.36-4.29(m,2H),4.23-4.09(m,2H),3.14(t,J＝7.8Hz,1H),2.30-2.20(m,2H),1.18-1.04(m,1H),0.57-0.41(m,3H),0.35-0.25(m,1H)。
实施例196(S)-2-环丙基-2-((1-(2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺196
步骤1：5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2(3H)-酮
向2-氨基-4-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯酚(实施例101步骤8)(1.00g,2.77mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加1,1’-羰基二咪唑(500mg,3.08mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h，然后真空蒸发。所得残余物用乙酸乙酯洗涤，得到700mg(粗品)标题化合物，其为棕色固体。固体未经进一步纯化即用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝386/388。
步骤2：5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-3-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噁唑-2(3H)-酮
在0℃向5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2(3H)-酮(600mg,1.55mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加氢化钠(72.0mg,3.08mmol)。将反应混合物搅拌30min，然后添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(312mg,1.87mmol)。将反应混合物在室温搅拌2.5h，然后用水淬灭。通过过滤收集固体并真空干燥，得到680mg(85％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝516/518。
步骤3：(S)-2-环丙基-2-((1-(2-氧代-3-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酸
遵循与实施例104步骤1类似的操作由5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-3-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噁唑-2(3H)-酮(600mg,1.16mmol)和(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(700mg,6.00mmol)制备标题化合物(100mg,16％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝551。
步骤4：(S)-2-环丙基-2-((1-(2-氧代-3-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺
遵循与实施例104步骤2类似的操作由(S)-2-环丙基-2-((1-(2-氧代-3-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酸(100mg,1.18mmol)和氯化铵(193mg,3.61mmol|)制备标题化合物(45mg,45％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝550。
步骤5：将(S)-2-环丙基-2-((1-(2-氧代-3-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺(45mg,0.082mmol)于TFA(2.0mL)中的溶液在室温搅拌1h。真空除去溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：10％甲醇/二氯甲烷)纯化，然后经由手性SFC纯化并冻干，得到6.20mg(18％)196，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.11,[M+H]+＝420,方法＝D；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.86(s,1H),7.50-7.29(m,4H),6.96(s,1H),6.36(d,J＝2.0Hz,1H),6.24(d,J＝2.0Hz,1H),5.47(d,J＝7.4Hz,1H),4.37-4.27(m,2H),4.21-4.19(m,2H),3.14-3.11(m,1H),2.26-2.23(m,2H),1.17-1.03(m,1H),0.53-0.48(m,3H),0.50-0.47(m,1H)。
实施例197(S)-2-((1-(2-氯-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺197
步骤1：6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-2-胺
将6-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-2-胺(2g,9.39mmol)、二(频哪醇合)二硼(2.82g,11.1mmol)、乙酸钾(2.77g,28.2mmol)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(768mg,1.05mmol)于1,4-二噁烷(50mL)中的混合物在120℃在氮气气氛下搅拌16h。将所得混合物冷却至室温并真空蒸发溶剂。残余物用水洗涤，然后用甲醇洗涤，得到1.2g(49％)标题化合物，其为棕色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝261。
步骤2：6-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-2-胺
遵循与实施例150步骤3类似的操作由4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(实施例150步骤2)(900mg,2.38mmol)和6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-2-胺(750mg,2.88mmol)制备标题化合物(660mg,72％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝385/387。
步骤3：4-溴-1-(2-氯-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
在氮气气氛下将6-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-2-胺(130mg,0.337mmol)、氯化铜(II)(90.0mg,0.669mmol)和亚硝酸叔丁酯(70.0mg,0.679mmol)混悬于乙腈(5.0mL)并将反应混合物在70℃搅拌3h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到60mg(44％)标题化合物，其为棕色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝404/406。
步骤4：(S)-2-((1-(2-氯-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酸
遵循与实施例104步骤1类似的操作由4-溴-1-(2-氯-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(60.0mg,0.148mmol)和(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(86.0mg,0.747mmol)制备标题化合物(30mg,46％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝439。
步骤5：遵循与实施例104步骤2类似的操作由(S)-2-((1-(2-氯-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酸(60mg,0.137mmol)和氯化铵(145mg,2.71mmol)制备197(10.3mg,17％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.12,[M+H]+＝438,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)9.38(d,J＝0.6Hz,1H),8.15-8.11(m,1H),7.98-7.95(m,1H),7.36(s,1H),6.98(s,1H),6.39(d,J＝1.8Hz,1H),6.30(d,J＝2.1Hz,1H),5.57(d,J＝7.5Hz,1H),4.34-4.32(m,4H),3.17-3.12(m,1H),2.28-2.27(m,2H),1.14-1.08(m,1H),0.53-0.44(m,3H),0.35-0.28(m,1H)。
实施例198(6-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)喹喔啉-2-基)甲醇198
步骤1：6-溴-2-乙烯基喹喔啉
将6-溴-2-氯喹喔啉(5.00g,20.5mmol)、三甲基(乙烯基)硼酸钾(2.50g,18.7mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(1.60g,2.19mmol)和三乙胺(7.50mL,54.0mmol)于1,4-二噁烷(100mL)中的混合物用氮气脱气。将反应混合物在80℃搅拌4h，然后过滤。真空蒸发滤液。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到2.00g(41％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝235/237。
步骤2：6-溴喹喔啉-2-甲酸
向6-溴-2-乙烯基喹喔啉(2.00g,8.51mmol)于THF(60mL)和水(20mL)中的溶液中添加锇酸钾(1.60g,4.34mmol)和高碘酸钠(4.75g,22.2mmol)。将所得混合物在室温搅拌16h，然后用水稀释。所得混合物用DCM萃取并弃去有机相。水层用乙酸调节至约pH 5并通过过滤收集所得固体，得到3g粗标题化合物，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝253/255。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.96(s,1H),9.43(s,1H),8.44(d,J＝2.3Hz,1H),8.22-8.04(m,2H)。
步骤3：6-溴喹喔啉-2-甲酸甲酯
在室温伴随搅拌向6-溴喹喔啉-2-甲酸(3.00g,11.8mmol)于甲醇(60.0mL)中的溶液中逐滴添加(重氮基甲基)三甲基硅烷(40.0mL,2mol/L于己烷中的溶液)。将反应混合物在室温搅拌4h，然后真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-20％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到1.6g(53％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝267/269。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.25-8.08(m,2H),4.00(s,3H)。
步骤4：(6-溴喹喔啉-2-基)甲醇
在10℃向6-溴喹喔啉-2-甲酸甲酯(1.60g,5.99mmol)于DCM(10.0mL)和甲醇(20.0mL)中的溶液中逐份添加NaBH4(737mg,19.5mmol)。将反应混合物在10℃搅拌1h，然后用水淬灭。所得混合物用DCM萃取，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到600mg(42％)标题化合物，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝239/241。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.07(s,1H),8.34(d,J＝1.3Hz,1H),8.05-7.93(m,2H),5.81-5.77(m,1H),4.80(d,J＝5.9Hz,2H)。
步骤5：(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)喹喔啉-2-基)甲醇
将(6-溴喹喔啉-2-基)甲醇(207mg,0.864mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(483mg,1.90mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(85.5mg,0.117mmol)和乙酸钾(315mg,3.21mmol)于1,4-二噁烷(12mL)中的混合物用氮气脱气。将反应混合物在90℃加热4h。过滤反应混合物并真空蒸发滤液。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-60％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到88mg(36％)标题化合物，其为棕色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝287。
步骤6：遵循与实施例150步骤3类似的操作由4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(实施例150步骤2)(220mg,0.580mmol)和(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)喹喔啉-2-基)甲醇(160mg,0.559mmol)制备198(50mg,21％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.510,[M+H]+＝411,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,1H),8.54(d,J＝1.6Hz,1H),8.29-8.27(m,1H),8.22(d,J＝8.4Hz,1H),7.55(d,J＝1.6Hz,1H),6.98(d,J＝1.6Hz,1H),5.88-5.85(m,1H),4.88(d,J＝5.6Hz,2H),4.53-4.45(m,4H),2.43-2.33(m,2H)。
实施例199(S)-1-(1-(1H-苯并[d]咪唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺199
遵循与实施例150类似的操作制备199。LCMS(ESI):RT(min)＝1.75,[M+H]+＝403,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.68(s,1H),8.34(s,1H),8.02(d,J＝9.3Hz,1H),7.75-7.69(m,2H),7.28(s,1H),7.01(s,1H),6.36(s,1H),6.07(s,1H),4.39-4.27(m,4H),3.90-3.85(m,1H),3.69-3.59(m,1H),3.25-3.16(m,1H),2.27-2.26(m,3H),1.96(br s,3H)。
实施例200(S)-1-(1-(1H-苯并[d][1,2,3]***-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺200
遵循与实施例125类似的操作制备200。LCMS(ESI):RT(min)＝1.19,[M+H]+＝404,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.03(d,J＝8.7Hz,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H),7.30(s,1H),7.02(s,1H),6.38(d,J＝2.1Hz,1H),6.10(d,J＝2.1Hz,1H),4.39-4.27(m,4H),3.85(d,J＝7.5Hz,1H),3.70-3.30(m,1H),3.21-3.18(m,1H),2.40-2.15(m,3H),2.10-1.85(m,3H)。
实施例201(S)-2-((1-(2-氨基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺201
遵循与实施例197类似的操作制备201。LCMS(ESI):RT(min)＝1.06,[M+H]+＝419,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(d,J＝0.6Hz,1H),7.81-7.78(m,1H),7.49-7.46(m,1H),7.35(d,J＝2.0Hz,1H),6.97(d,J＝2.0Hz,1H),6.38(d,J＝2.0Hz,1H),6.27(d,J＝2.0Hz,1H),6.20(s,1H),5.52(d,J＝7.6Hz 1H),4.35-4.28(m,4H),3.17-3.12(m,1H),2.28-2.27(m,2H),1.14-1.08(m,1H),0.52-0.48(m,3H),0.35-0.26(m,1H)。
实施例202和203 1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-N-((1r,3r)-3-氟环丁基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-胺202和1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-N-((1s,3s)-3-氟环丁基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-胺203
遵循与实施例192类似的操作且接着进行手性HPLC分离制备标题化合物，其为单一的未知的立体异构体。
202(7.5mg)：LCMS:RT(min)＝3.5min,[M+H]+＝394,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.56-7.51(m,3H),7.48-7.34(m,1H),7.34-7.31(m,1H),6.26(d,J＝1.8Hz,1H),6.11(d,J＝1.8Hz,1H),5.65(d,J＝5.7Hz,1H),5.35-5.18(m,1H),4.34-4.31(m,2H),4.22-4.18(m,2H),3.98-3.95(m,1H),2.50-2.49(m,2H),2.30-2.23(m,4H)。
203(22mg)：LCMS:RT(min)＝3.5min,[M+H]+＝394,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.56-7.51(m,2H),7.48-7.45(m,2H),7.34-7.31(m,1H),6.34(d,J＝1.8Hz,1H),6.13(d,J＝1.8Hz,1H),5.62(d,J＝7.5Hz,1H),4.99-4.80(m,1H),4.33-4.31(m,2H),4.22-4.18(m,2H),3.39(d,J＝6.9Hz,1H),2.89-2.83(m,2H),2.24(s,2H),2.09-1.98(m,2H)。
实施例204(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺204
步骤1：2-氨基-5-溴-3-硝基苯酚氢溴酸盐
在10℃向2-氨基-3-硝基苯酚(192g,1.25mol)于二噁烷(4L)中的混悬液中逐滴添加溴(239g,1.50mol)。将反应混合物在10℃搅拌15min，然后在25℃搅拌3h。过滤混合物且滤饼用二噁烷洗涤，得到408.4g(粗品)标题化合物，其为黄色固体。该物质未经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝233/235。
步骤2：2-(3-(1,3-二氧杂环戊-2-基)丙氧基)-4-溴-6-硝基苯胺
将2-氨基-5-溴-3-硝基苯酚氢溴酸盐(300g,0.955mol)、2-(3-氯丙基)-1,3-二氧杂环戊烷(143g,0.955mol)、碳酸钾(396g,2.87mol)和碘化钠(43.0g,0.287mol)于DMF(3.5L)中的混合物在80℃搅拌16h。反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发，得到288g(粗品)标题化合物，其为棕色固体。该物质未经进一步纯化即使用。LCMC(ESI):[M+H]+＝347/349。
步骤3：9-溴-7-硝基-3,4,5,6-四氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂氮杂环辛烯
在0℃向2-(3-(1,3-二氧杂环戊-2-基)丙氧基)-4-溴-6-硝基苯胺(390g,1.12mol)于DCM(2L)中的溶液中逐滴添加TFA(1L,13.5mol)。将反应混合物在0℃搅拌15min，然后逐滴添加三乙基硅烷(372g,3.20mol)并将反应混合物在0℃搅拌15min，然后在25℃搅拌16h。反应混合物用水稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至8且用DCM萃取。有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发，得到433g(粗品)标题化合物，其为红色固体。该物质未经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝287/289。
步骤4：9-溴-3,4,5,6-四氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂氮杂环辛烯-7-胺
在55℃向9-溴-7-硝基-3,4,5,6-四氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂氮杂环辛烯(433g,1.51mol)和氯化铵(410g,7.67mol)于甲醇(2.5L)和水(2.5L)中的混悬液中逐份添加铁粉(280g,5.01mol)并将反应混合物在70℃在密封容器中搅拌2h。过滤所得混合物且固体用乙酸乙酯充分洗涤。滤液用乙酸乙酯萃取且合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发，得到242g(粗品)标题化合物，其为棕色油状物。该物质未经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝257/259。
步骤5：4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚
将9-溴-3,4,5,6-四氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂氮杂环辛烯-7-胺(180g,700mmol)和4-甲基苯磺酸(18g,105mmol)溶于原甲酸三甲酯(2L)并将反应混合物在100℃搅拌16h。真空蒸发所得混合物且产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到126g(67％)标题化合物，其为棕色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝267/269。
步骤6：4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚
在-78℃向4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(12g,44.9mmol)于THF(1.5L)中的溶液中逐滴添加LDA(2N于THF中的溶液,45mL,90.0mmol)并将反应混合物在-78℃搅拌1h。在-78℃逐滴添加1-碘吡咯烷-2,5-二酮(20.2g,89.8mmol)于THF(200mL)中的溶液并将反应混合物在-78℃搅拌2h。所得混合物用水淬灭并用DCM萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到8.8g(50％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝393/395；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.59(d,J＝1.8Hz,1H),7.05(d,J＝1.5Hz,1H),4.45-4.41(m,2H),4.27-4.23(m,2H),1.99-1.92(m,2H),1.54-1.48(m,2H)。
步骤7：5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺
将5-溴苯并[d]噁唑-2-胺(20.0g,93.9mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(28.6g,113mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(6.87g,9.39mmol)和乙酸钾(27.6g,282mmol)于DMF(200mL)中的混合物在80℃在氮气下搅拌6h。所得溶液用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并有机层并用无水硫酸钠干燥且真空浓缩。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到10.5g(43％)标题化合物，其为棕色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝261。
步骤8：5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺
将4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(1.20g,3.05mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(790mg,3.04mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(220mg,0.301mmol)和碳酸钠(2M水溶液,3mL,6mmol)于DMF(15mL)中的混合物在微波照射下在80℃加热45min。所得溶液用水稀释并用DCM萃取。合并有机层并用无水硫酸钠干燥且真空浓缩。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到660mg(54％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝399/401。
步骤9：5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例162步骤1类似的操作由5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(700mg,1.75mmol)和4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(891mg,3.51mmol)制备标题化合物(400mg,41％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝447。
步骤10：1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇
遵循与实施例162步骤2类似的操作由5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(380mg,0.851mmol)制备标题化合物(281mg,98％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝337。
步骤11：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酸甲酯
遵循与实施例162步骤3类似的操作由1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇(1.00g,2.97mmol)和(R)-2-(甲苯磺酰基氧基)丙酸甲酯(1.15g,4.45mmol)制备标题化合物(700mg,56％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝423。
步骤12：反应容器装有(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酸甲酯(600mg,1.42mmol)和7N氨/甲醇(6mL)。将反应混合物在室温搅拌16h。真空浓缩所得混合物。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-10％甲醇/DCM)纯化，然后通过手性SFC纯化并冻干，得到309mg(55％)204，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.47,[M+H]+＝408,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.61-7.44(m,5H),7.29-7.26(m,2H),6.92(d,J＝2.1Hz,1H),6.59(d,J＝2.1Hz,1H),4.66-4.59(m,1H),4.39-4.35(m,2H),4.26-4.23(m,2H),2.11(表观s,2H),1.69(表观s,2H),1.45(d,J＝8.8Hz,3H)。
实施例205(S)-2-((1-(2-氨基-7-甲基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺205
步骤1：5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-7-甲基苯并[d]噁唑-2-胺
反应容器装有5-溴-7-甲基苯并[d]噁唑-2-胺(200mg,0.88mmol)、二(频哪醇合)二硼(268mg,1.06mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯二氯甲烷复合物(71.9mg,0.09mmol)、乙酸钾(259mg,2.64mmol)并溶于1,4-二噁烷(2.6mL)。将反应混合物在氩气下脱气，然后在110℃搅拌2h。使所得混合物冷却至室温，然后添加4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(334mg,0.88mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯二氯甲烷复合物(71.9mg,0.088mmol)和2N碳酸钠水溶液(1.75mL,3.52mmol)。将反应混合物在氩气下脱气并在100℃搅拌24h。使所得混合物冷却至室温并在DCM和蒸馏水之间分配。分离有机层，用硫酸镁干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-5％甲醇/乙酸乙酯)纯化，得到128mg(36％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝399/401。
步骤2：(S)-2-((1-(2-氨基-7-甲基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酸
遵循与实施例125步骤3类似的操作由5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-7-甲基苯并[d]噁唑-2-胺(235mg,0.59mmol)和(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(135mg,1.17mmol)制备标题化合物(148mg,58％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝434。
步骤3：遵循与实施例125步骤4类似的操作由(S)-2-((1-(2-氨基-7-甲基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酸(148mg,0.34mmol)制备205(24.3mg,16％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.52,[M+H]+＝433,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.51(br s,2H),7.33-7.32(m,2H),7.18-7.17(m,1H),6.96-6.95(m,1H),6.36(d,J＝2.0Hz,1H),6.22(d,J＝2.0Hz,1H),5.44(d,J＝7.4Hz,1H),4.32-4.14(m,4H),3.14(t,J＝7.4Hz,1H),2.42(s,3H),2.26-2.20(m,2H),1.15-1.06(m,1H),0.54-0.44(m,3H),0.34-0.28(m,1H)。
实施例206(S)-1-(1-(3H-[1,2,3]***并[4,5-b]吡啶-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺206
步骤1：7-氯-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-b]吡啶
将7-氯-3H-[1,2,3]***并[4,5-b]吡啶(1.00g,6.47mmol)、碳酸铯(4.22g,12.9mmol)、1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(1.22g,7.79mmol)于DMF(15mL)中的混合物在25℃搅拌3h。所得混合物用水稀释并用DCM萃取。有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到900mg(51％)标题化合物，其为白色固体。LCMS:[M+H]+＝275。
步骤2：3-(4-甲氧基苄基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-b]吡啶
将7-氯-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-b]吡啶(1.50g,5.46mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(400mg,0.547mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(1.66g,6.54mmol)和乙酸钾(1.07g,10.9mmol)于1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在100℃搅拌16h。将所得混合物冷却至室温。滤出固体并真空蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到1.00g(50％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(53):[M+H]+＝367。
步骤3：4-溴-1-(3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-b]吡啶-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
遵循与实施例150步骤3类似的操作由4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(实施例150步骤2)(1.03g,2.72mmol)和3-(4-甲氧基苄基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-b]吡啶(1.00g,2.73mmol)制备标题化合物(300mg,22％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝491/493。
步骤4：(S)-1-(1-(3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-b]吡啶-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺
遵循与实施例104步骤1-2类似的操作由4-溴-1-(3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-b]吡啶-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(350mg,3.04mmol)制备标题化合物(150mg,40％产率,历经两步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝525。
步骤5：将(S)-1-(1-(3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-b]吡啶-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺于TFA中的混合物在80℃搅拌4h。所得混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到13.1mg(11％)206，其为黄色固体。LCMS:RT(min)＝4.5,[M+H]+＝405,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ16.44(s,1H),8.84(d,J＝4.8Hz,1H),7.85(d,J＝4.5Hz,1H),7.36(s,1H),7.05(s,1H),6.47(d,J＝2.1Hz,1H),6.22(d,J＝2.1Hz,1H),4.42(d,J＝3.9Hz,4H),3.90-3.87(m,1H),3.64-3.59(m,1H),3.26-3.21(m,1H),2.33-2.28(m,3H),2.27-2.21(m,3H)。
实施例207(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺207
步骤1：6-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例204步骤8类似的操作由6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(1.50g,5.77mmol)和4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(实施例150步骤2)(2.70g,7.12mmol)制备标题化合物(720mg,32％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝385/387。
步骤2：遵循与实施例104步骤1-2类似的操作由6-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(220mg,0.571mmol)和(2S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(330mg,2.87mmol)制备207(40.3mg,11.2％产率,历经两步)。LCMS(ESI):RT(min)＝1.16,[M+H]+＝419,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.71-7.76(m,3H),7.51-7.48(m,1H),7.35-7.29(m,2H),6.98(s,1H),6.36(d,J＝2.1Hz,1H),6.28(d,J＝2.1Hz,1H),5.46(d,J＝7.2Hz,1H),4.34-4.23(m,4H),3.16-3.11(m,1H),2.24(d,J＝3.9Hz,2H),1.14-1.08(m,1H),0.51-0.47(m,3H),0.31-0.29(m,1H)。
实施例208(S)-2-((2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺208
步骤1：7-溴-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪
向2-氨基-5-溴-3-硝基苯酚(7.5g,32.2mmol)和1,2-二溴乙烷(16.6mL,193mmol)于DMF(40mL)中的溶液中添加氢氧化钾(3.61g,64.4mmol)并将反应混合物在140℃搅拌10h。反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。残余物用甲醇研磨，得到第一批产物，其为红色固体。母液经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-70％乙酸乙酯/环己烷)纯化。将所得产物与第一批合并，得到4.24g(51％)标题化合物，其为红色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(br s,1H),7.75(d,J＝2.3Hz,1H),7.19(dd,J＝2.3,0.8Hz,1H),4.21(t,J＝9.2Hz,2H),3.57-3.51(m,2H)。
步骤2：7-溴-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-5-胺
向7-溴-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪(4.24g,16.4mmol)和氯化铵(7.88g,147mmol)于甲醇(75mL)和水(75mL)中的混悬液中添加铁粉(5.48g,98.2mmol)并将反应混合物在55℃加热2h。反应混合物通过硅藻土过滤并真空浓缩以除去甲醇。水性残余物用乙酸乙酯萃取。合并的有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩，得到3.69g(75％)粗标题化合物，其为棕色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.52(d,J＝2.3Hz,1H),6.46(d,J＝2.3Hz,1H),4.17-4.14(m,2H),3.41-3.36(m,2H)。
步骤3：7-溴-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯
将7-溴-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-5-胺(3.20g,13.9mmol)和对甲苯磺酸(0.04g,0.2mmol)于原甲酸三甲酯(10mL,91.4mmol)中的溶液加热回流1h。将反应混合物干法加载到硅藻土上并经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-5％甲醇/DCM)纯化，得到2.70g(81％)标题化合物，其为米色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝239/241。
步骤4：7-溴-2-碘-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯
在-40℃向二异丙胺(2.5mL,18.1mmol)于THF(30mL)中的溶液中逐滴添加正丁基锂(6.32mL,2.5N于己烷中,15.8mmol)并使反应混合物温热至-20℃。将反应混合物冷却至-78℃并添加7-溴-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯(2.70g,11.3mmol)于THF(20mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃搅拌2h。逐滴添加碘(4.01g,15.8mmol)于THF(12mL)中的溶液并将反应混合物在-78℃搅拌2h。所得混合物用饱和氯化铵水溶液稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-100％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到2.55g(62％)标题化合物，其为棕色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝365/367。
步骤5：5-(7-溴-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺
将7-溴-2-碘-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯(200mg,0.55mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)-苯并噁唑-2-基胺(214mg,0.83mmol)、碳酸铯(303mg,0.93mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(63mg,0.05mmol)于1,4-二噁烷(5.0mL)和水(0.5mL)中的混合物用氩气脱气。将反应混合物在100℃加热16h。反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-100％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到80mg(40％)标题化合物，其为米色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝371/373。
步骤6：(S)-2-((2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氨基)-2-环丙基乙酸
将5-(7-溴-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(80mg,0.22mmol)、(S)-氨基环丙基乙酸(50mg,0.43mmol)、碘化亚铜(I)(8mg,0.04mmol)和磷酸钾(91mg,0.43mmol)的混合物溶于DMSO(1.2mL)并将混合物用氩气脱气。将反应混合物在100℃加热16h。反应混合物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化，得到63mg(72％)标题化合物，其为棕色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝406。
步骤7：向(S)-2-((2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氨基)-2-环丙基乙酸(63mg,0.16mmol)、氯化铵(17mg,0.31mmol)和三乙胺(65μL,0.47mmol)于DMF(2.0mL)中的溶液中添加HATU(89mg,0.23mmol)并将反应物在室温搅拌1.5h。反应混合物在硅胶(溶剂梯度：0-15％氨甲醇/DCM)上纯化，然后经由反相HPLC纯化，得到16mg(25％)208，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.28,[M+H]+＝405,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.68(d,J＝1.6Hz,1H),7.56(br,s,2H),7.53(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),7.46(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(d,J＝2.1Hz,1H),6.97(d,J＝2.1Hz,1H),6.28(d,J＝1.6Hz,1H),6.23(d,J＝1.6Hz,1H),5.49(d,J＝7.3Hz,1H),4.59-4.49(m,2H),4.44-4.36(m,2H),3.13(t,J＝7.8Hz,1H),1.17-1.05(m,1H),0.56-0.44(m,3H),0.36-0.27(m,1H)。
实施例209(S)-2-((1-(2-氨基-7-氯苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺209
步骤1：5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-7-氯苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例205步骤1类似的操作由5-溴-7-氯苯并[d]噁唑-2-胺(370mg,1.50mmol)制备标题化合物(180mg,28％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝418/420。
步骤2：(S)-2-((1-(2-氨基-7-氯苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酸
遵循与实施例125步骤3类似的操作由5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-7-氯苯并[d]噁唑-2-胺(180mg,0.428mmol)和(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(98.6mg,0.856mmol)制备标题化合物(72.9mg,37％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝454。
步骤3：遵循与实施例125步骤4类似的操作由(S)-2-((1-(2-氨基-7-氯苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酸(72.9mg,0.161mmol)制备209(4.1mg,6％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.62,[M+H]+＝453,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.88(br s,2H),7.45(d,J＝1.4Hz,1H),7.40(d,J＝1.4Hz,1H),7.33(d,J＝2.0Hz,1H),6.96(d,J＝2.0Hz,1H),6.36(d,J＝2.0Hz,1H),6.25(d,J＝2.0Hz,1H),5.47(d,J＝6.0Hz,1H),4.32-4.17(m,4H),3.14(t,J＝6.0Hz,1H),2.27-2.22(m,2H),1.15-1.06(m,1H),0.54-0.43(m,3H),0.33-0.27(m,1H)。
实施例210(S)-2-环丙基-2-((1-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺210
步骤1：4-溴-1-(1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
遵循与实施例160步骤1和2类似的操作由8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺(900mg,3.70mmol)和吡唑-1,4-二甲酸1-叔丁酯(865mg,4.07mmol)制备标题化合物(490mg,42％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝319/321。
步骤2：4-溴-1-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
向4-溴-1-(1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(270mg,0.85mmol)于DMF(11mL)中的溶液中先后添加碳酸铯(414mg,1.27mmol)和3-溴氧杂环丁烷(105μL,1.27mmol)并将反应混合物在90℃搅拌3h。使所得混合物冷却至室温并过滤。收集固体，用水洗涤并干燥，得到190mg(60％)标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝375/377。
步骤3：将4-溴-1-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(190mg,0.51mmol)、(S)-氨基环丙基乙酸(152mg,1.28mmol)、碘化亚铜(I)(21mg,0.10mmol)和磷酸钾(435mg,2.04mmol)混悬于DMSO(2.0mL)并用氮气脱气。将反应混合物在100℃加热16h，然后冷却至室温。向该混合物中先后逐份添加氯化铵(172mg,3.06mmol)、三乙胺(0.761mL,5.1mmol)和HATU(1.2g,3.06mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h。所得混合物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-30％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化，然后在HPLC(溶剂梯度：10-40％乙腈/水(含有0.1％甲酸))上进一步纯化，得到70mg(34％)210。LCMS(ESI):RT(min)＝2.26,[M+H]+＝409,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(s,1H),8.12(s,1H),7.32(br s,1H),6.95(br s,1H),6.32(d,J＝1.9Hz,1H),6.17(d,J＝1.9Hz,1H),5.67(quint,J＝6.4Hz,1H),5.42(br s,1H),4.96(d,J＝7.0Hz,4H),4.34-4.28(m,4H),3.13-3.08(m,1H),2.33-2.27(m,2H),1.15-1.05(m,1H),0.53-0.45(m,3H),0.32-0.26(m,1H)。
实施例211(S)-2-环丙基-2-((1-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺211
步骤1：4-溴-1-(1-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
遵循与实施例210步骤2类似的操作由4-溴-1-(1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(250mg,0.78mmol)和2-(2-溴-乙氧基)-四氢吡喃(177μL,1.17mmol)制备标题化合物(350mg,100％)。LCMS(ESI):[M+H]+＝447/449。
步骤2：(2S)-2-环丙基-2-((1-(1-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺
遵循与实施例210步骤3类似的操作由4-溴-1-(1-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(350mg,0.78mmol)制备标题化合物(380mg,100％)。LCMS(ESI):[M+H]+＝482。
步骤3：(S)-2-环丙基-2-((1-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺
向(2S)-2-环丙基-2-((1-(1-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺(376mg,0.78mmol)于DCM(8.0mL)中的溶液中逐滴添加三氟乙酸(2mL)并将反应混合物在室温搅拌30min。将所得混合物倾倒在10g SCX-2柱上。柱先后用乙腈和甲醇洗涤，然后用2N氨/甲醇洗脱。收集洗脱液并蒸发溶剂。残余物经由反相HPLC纯化，得到34mg(11％)211。LCMS(ESI):RT(min)＝2.14,[M+H]+＝397,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),7.97(s,1H),7.32(brs,1H),6.94(br s,1H),6.31(d,J＝1.9Hz,1H),6.16(d,J＝1.9Hz,1H),5.42(br s,1H),4.95(t,J＝5.0Hz,1H),4.34-4.27(m,4H),4.23(t,J＝5.3Hz,2H),3.79(q,J＝5.3Hz,2H),3.11(d,J＝7.6Hz,1H),2.33-2.27(m,2H),1.15-1.05(m,1H),0.54-0.43(m,3H),0.32-0.26(m,1H)。
实施例212(S)-2-((1-(1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺212
步骤1：4-溴-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
向4-溴-1-(1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(250mg,0.78mmol)于甲苯(5.0mL)中的混悬液中添加三氟乙酸(10μL)，接着添加二氢吡喃(107μL,1.18mmol)并将混合物在80℃搅拌16h。使反应混合物冷却至室温并减压除去溶剂。将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配且水层再用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂，得到310mg(98％)标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝403/405。
步骤2：(2S)-2-环丙基-2-((1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺
遵循与实施例210步骤3类似的操作由4-溴-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(300mg,0.74mmol)制备标题化合物(320mg,100％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝438。
步骤3：遵循与实施例211步骤3类似的操作由(2S)-2-环丙基-2-((1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺(320mg,0.74mmol)制备212(70mg,27％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.16,[M+H]+＝353,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.3(br s,1H),8.27(br s,1H),8.07(br s,1H),7.32(s,1H),6.95(s,1H),6.32(d,J＝1.9Hz,1H),6.17(d,J＝1.9Hz,1H),5.45(br s,1H),4.35-4.27(m,4H),3.11(d,J＝7.6Hz,1H),2.34-2.25(m,2H),1.15-1.05(m,1H),0.54-0.43(m,3H),0.32-0.26(m,1H)。
实施例213(S)-2-环丙基-2-((1-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1,7,8,9-四氢氧杂
并[4,3,2-cd]吲唑-4-基)氨基)乙酰胺213
步骤1：4-(3-溴-5-氟苯氧基)丁酸甲酯
向3-溴-5-氟-苯酚(5.24mmol,1.0g)于丙酮(20mL)中的溶液中添加碘化钾(0.26mmol,43mg)、碳酸钾(5.76mmol,800mg)和4-溴丁酸甲酯(5.76mmol,0.73mL)。将反应物加热回流过夜。将混合物在乙酸乙酯和水之间分配并分离各相。水层用乙酸乙酯萃取，合并有机萃取物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱(溶剂梯度：0-30％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到1370mg(90％)标题化合物。
步骤2：4-(3-溴-5-氟苯氧基)丁酸
向4-(3-溴-5-氟苯氧基)丁酸甲酯(4.71mmol,1370mg)于甲醇(10mL)和水(1mL)中的溶液中添加氢氧化锂(9.41mmol,225mg)并将反应混合物在60℃加热过夜。过夜后，真空除去甲醇。将混合物在DCM和水之间分配并分离各相。水层用DCM萃取，合并有机萃取物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂，得到标题化合物(1300mg,99％产率)，其直接用于下一步。
步骤3：8-溴-6-氟-3,4-二氢苯并[b]氧杂
-5(2H)-酮和6-溴-8-氟-3,4-二氢苯并[b]氧杂
-5(2H)-酮
向4-(3-溴-5-氟苯氧基)丁酸(1.80mmol,500mg)于DCM(10mL)中的溶液中逐滴添加亚硫酰氯(3.61mmol,0.263mL)。将反应物在50℃搅拌4小时。4小时后，除去溶剂。在0℃向所得残余物中先后添加DCM(10mL)和氯化铝(2.71mmol,361mg)。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后小心用水淬灭。将混合物在DCM和水之间分配且分离各相。水层用DCM萃取，合并有机萃取物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱(溶剂梯度：0-30％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到标题化合物(220mg,47％合并的产率)，其为两种区域异构体的1:1混合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝259/261。
步骤4：4-溴-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1,7,8,9-四氢氧杂
并[4,3,2-cd]吲唑
向8-溴-6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并氧杂
-5-酮(0.386mmol,100mg)和6-溴-8-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并氧杂
-5-酮(100mg)的混合物于吡啶(5mL)中的溶液中添加(6-甲氧基-3-吡啶基)肼二盐酸盐(0.772mmol,164mg)。将反应混合物在60℃加热。将混合物在DCM和水之间分配且分离各相。水层用DCM萃取，合并有机萃取物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱(溶剂梯度：0-80％(乙酸异丙酯/甲醇(3:1))/庚烷)纯化，得到8-溴-6-[2-(6-甲氧基-3-吡啶基)肼基]-3,4-二氢-2H-1-苯并氧杂
-5-酮(100mg)。向该残余物中添加甲醇(1mL)，然后添加锌(0.529mmol,35mg)和氯化铵(0.793mmol,42mg)。将反应混合物在室温搅拌20min。所得浆液用水稀释并过滤。然后滤液用DCM萃取并用硫酸镁干燥。然后减压蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱(溶剂梯度：0-40％(乙酸异丙酯/甲醇(3:1))/庚烷)纯化，得到所需产物(60mg)。LCMS(ESI):[M+H]+＝360。
步骤5：遵循与实施例125步骤3类似的操作由4-溴-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1,7,8,9-四氢氧杂
并[4,3,2-cd]吲唑(45mg,0.125mmol)和(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸制备(S)-2-环丙基-2-((1-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1,7,8,9-四氢氧杂
并[4,3,2-cd]吲唑-4-基)氨基)乙酸。LCMS(ESI):[M+H]+＝395。粗品直接用于下一步且遵循与实施例125步骤4类似的操作制备213(5.9mg)。LCMS(ESI):RT(min)＝4.17,[M+H]+＝394.1,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(dd,J＝2.8,0.7Hz,1H),7.92(dd,J＝8.9,2.8Hz,1H),7.36(d,J＝2.3Hz,1H),6.99(d,J＝0.6Hz,1H),6.97(d,J＝0.6Hz,1H),6.20(d,J＝1.6Hz,1H),6.16(d,J＝7.0Hz,1H),6.09(d,J＝1.6Hz,1H),4.31-4.33(m,2H),3.92(s,3H),3.21-3.12(m,1H),3.00(t,J＝6.2Hz,2H),2.17-2.11(m,2H),1.16-1.03(m,1H),0.57-0.41(m,3H),0.33-0.23(m,1H)。
实施例214(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺214
步骤1：6-溴苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酸叔丁酯
将6-溴苯并[d]噻唑-2-胺(14.7g,64.2mmol)、一缩二碳酸二叔丁酯(14.0g,64.1mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(40.0mg,0.327mmol)于DCM(200mL)中的混合物在室温搅拌24h，然后过滤。真空蒸发滤液。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到7.26g(34％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝329/331。
步骤2：6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酸叔丁酯
将6-溴苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酸叔丁酯(2.00g,6.07mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(2.32g,9.12mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(444mg,0.607mmol)和乙酸钾(1.78g,18.2mmol)于1,4-二噁烷(60.0mL)中的混合物用氩气脱气。将反应混合物在100℃加热16h。过滤反应混合物并真空蒸发滤液。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到1.17g(51％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝377。
步骤3：(6-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
遵循与实施例204步骤8类似的操作由6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酸叔丁酯(1.17g,3.12mmol)和4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(实施例204步骤6)(1.47g,3.75mmol)制备标题化合物(768mg,48％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝515/517。
步骤4：(S)-(6-(4-((2-氨基-1-环丙基-2-氧代乙基)氨基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
遵循与实施例104步骤1-2类似的操作由(6-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(380mg,0.737mmol)和(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(420mg,3.64mmol)制备标题化合物(380mg,粗品)。LCMS(ESI):[M+H]+＝549。
步骤5：在室温向(S)-(6-(4-((2-氨基-1-环丙基-2-氧代乙基)氨基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(380mg粗品)于DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(10mL)。将反应混合物在室温搅拌30min。用碳酸氢钠(1mol/L水溶液)调节反应混合物的pH值至7，然后用DCM萃取。有机部分用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％甲醇/DCM)纯化，然后经由反相HPLC纯化并冻干，得到42.5mg(14％)214，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.22,[M+H]+＝449,方法＝E；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.96(d,J＝1.2Hz,1H),7.70(s,2H),7.60-7.45(m,3H),7.00(s,1H),6.43(d,J＝1.8Hz,1H),6.37(d,J＝1.8Hz,1H),5.58(d,J＝7.2Hz,1H),4.38-4.28(m,2H),4.23-4.15(m,2H),3.17-3.07(m,1H),2.14-2.08(m,2H),1.71-1.65(m,2H),1.17-1.05(m,1H),0.55-0.42(m,3H),0.37-0.27(m,1H)。
实施例215(S)-2-环丙基-2-((1-(8-氟喹喔啉-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺215
遵循实施例158的操作制备215。LCMS:RT(min)＝4.50,[M+H]+＝433,方法＝D；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.10(m,2H),8.33(m,1H),8.14(m,1H),7.37(d,J＝2.7Hz,1H),6.99(d,J＝2.3Hz,1H),6.41(d,J＝1.9Hz,1H),6.32(d,J＝2.0Hz,1H),5.59(d,J＝7.3Hz,1H),4.48-4.32(m,4H),3.20-3.05(m,1H),2.40-2.15(m,2H),1.20-1.00(m,1H),0.60-0.40(m,3H),0.35-0.20(m,1H)。
实施例216和217(R)-2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)丁酰胺216和(S)-2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)丁酰胺217
遵循与实施例230和231类似的操作制备216和217，其各自为单一的未知的异构体。
216(31.0mg)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.53,[M+H]+＝458,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),7.91(s,1H),7.58(br s,3H),7.53(br s,1H),7.51(d,J＝1.5Hz,1H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),7.40(dd,J＝8.1,1,5Hz,1H),7.27(br s,1H),7.04(d,J＝1.5Hz,1H),4.75(t,J＝7.8Hz,1H),4.44-4.40(m,2H),4.30(t,J＝5.2Hz,2H),2.35-2.29(m,2H),2.08(表观五重峰,J＝7.3Hz,2H),0.85(t,J＝7.8Hz,3H)。
217(34.6mg)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.53,[M+H]+＝458,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),7.91(s,1H),7.58(br s,3H),7.53(br s,1H),7.51(d,J＝1.5Hz,1H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),7.40(dd,J＝8.1,1,5Hz,1H),7.27(br s,1H),7.04(d,J＝1.5Hz,1H),4.75(t,J＝7.8Hz,1H),4.44-4.40(m,2H),4.30(t,J＝5.2Hz,2H),2.35-2.29(m,2H),2.08(表观五重峰,J＝7.3Hz,2H),0.85(t,J＝7.8Hz,3H)。
实施例218和219(R)-2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)丙酰胺218和(S)-2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)丙酰胺219
遵循与实施例230和231类似的操作制备标题化合物，其各自为单一的未知的异构体。
218(45.2mg)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.35,[M+H]+＝444,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),7.91(s,1H),7.58(br s,3H),7.52(d,J＝1.5Hz,1H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),7.46(br s,1H),7.39(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.24(br s,1H),7.05(d,J＝1.5Hz,1H),4.96(q,J＝7.4Hz,1H),4.44-4.40(m,2H),4.30(t,J＝5.2Hz,2H),2.35-2.29(m,2H),1.65(d,J＝7.4Hz,3H)。
219(42.5mg)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.35,[M+H]+＝444,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),7.91(s,1H),7.58(br s,3H),7.52(d,J＝1.5Hz,1H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),7.46(br s,1H),7.39(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.24(br s,1H),7.05(d,J＝1.5Hz,1H),4.96(q,J＝7.4Hz,1H),4.44-4.40(m,2H),4.30(t,J＝5.2Hz,2H),2.35-2.29(m,2H),1.65(d,J＝7.4Hz,3H)。
实施例220(S)-1-(1-(2-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[4,5]噁唑并[3,2-a]嘧啶-7-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺220
将来自实施例104的(S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺(150mg,0.358mmol)、3-溴丙酸(83.4mg,0.545mmol)、HATU(307mg,0.808mmol)和DIPEA(0.400mL)于DMF(12.0mL)中的混合物在60℃加热6h。以相同规模另外重复该反应。将两批反应混合物合并，用水稀释，用DCM萃取，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-13％甲醇/DCM)纯化，得到粗产物。粗产物用DMF和DMSO研磨。收集固体，得到58.9mg(35％)220，其为灰白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.34min,[M+H]+＝473,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.86(s,1H),7.73(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.32(s,1H),7.03(s,1H),6.35(d,J＝1.5Hz,1H),6.10(d,J＝1.2Hz,1H),4.37-4.23(m,6H),3.86-3.83(m,1H),3.60-3.58(m,1H),3.20-3.10(m,1H),2.76-2.70(m,2H),2.28-2.19(m,3H),2.08-1.97(m,3H)。
实施例221(S)-1-(1-(4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺221
使用商购的3-(4-溴苯基)-1H-1,2,4-***并遵循与实施例158类似的操作制备221。LCMS:RT(min)＝3.00,[M+H]+＝430,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.22(s,1H),8.68(s,1H),8.17(d,J＝8.1Hz,2H),7.90(d,J＝7.8Hz,2H),7.31(d,J＝2.3Hz,1H),7.03(s,1H),6.37(d,J＝2.1Hz,1H),6.09(d,J＝2.1Hz,1H),4.37-4.29(m,4H),3.90-3.80(m,1H),3.70-3.60(m,1H),3.30-3.08(m,1H),2.35-2.15(m,3H),2.09-1.87(m,3H)。
实施例222(S)-1-(1-(3-氯-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺222
步骤1：4-溴-2-氯苯甲酰胺
在0℃历经10min向4-溴-2-氯苯甲酸(10.0g,42.5mmol)于DCM(100mL)中的溶液中逐份添加草酰氯(21.5g,0.169mol)，接着添加DMF(1mL)。将反应混合物在室温搅拌60min，然后真空除去溶剂。将残余物溶于THF(400mL)，然后在0℃逐滴添加氢氧化铵(312mL 25-28％水溶液)。使反应混合物温热至室温并再搅拌60min。真空除去THF并过滤残余物。收集固体，用水洗涤并干燥，得到8.66g(87％)标题化合物.LCMS(ESI):[M+H]+＝234/236。
步骤2：3-(4-溴-2-氯苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***
4-溴-2-氯苯甲酰胺(8.00g,34.1mmol)被N,N-二甲基甲酰胺缩二甲醇(50mL)溶解。将所得混合物在130℃搅拌120min，然后真空除去溶剂。将残余物溶于乙酸(100mL)，然后添加(4-甲氧基苄基)肼(7.10g,0.046mol)。将反应混合物在100℃搅拌60min。真空除去溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到3.5g(27％)标题化合物，其为黄色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝378/380。
步骤3：3-(2-氯-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***
遵循与实施例158步骤2类似的操作由3-(4-溴-2-氯苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***(2.00g,5.28mmol)和4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(1.6g,6.30mmol)制备标题化合物(2.2g,98％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝426。
步骤4：4-溴-1-(3-氯-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
遵循与实施例150步骤3类似的操作由4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(2.00g,5.28mmol)和3-(2-氯-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***(2.69g,6.32mmol)制备标题化合物(700mg,24％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝550/552。
步骤5：(S)-1-(1-(3-氯-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺
遵循与实施例104步骤1-2类似的操作由4-溴-1-(3-氯-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(600mg,1.09mmol)制备标题化合物(200mg,36％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝584。
步骤6：将(S)-1-(1-(3-氯-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺(200mg,0.341mmol)于TFA(5.00mL)中的混合物在80℃搅拌2h。真空除去溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：10％甲醇/二氯甲烷)纯化，然后通过手性SFC纯化并冻干，得到47.6mg(30％产率)222，其为黄色固体。LCMS:RT(min)＝0.92,[M+H]+＝464,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ14.47-14.37(m,1H),8.75(s,1H),8.18-7.87(m,3H),7.35(s,1H),7.05(s,1H),6.39(d,J＝2.1Hz,1H),6.13(d,J＝2.2Hz,1H),4.40-4.35(m,4H),3.88-3.85(m,1H),3.61-3.58(m,1H),3.23-3.17(m,1H),2.36-2.16(m,3H),2.11-1.90(m,3H)。
实施例223(S)-1-(1-(6-(1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺223
步骤1：6-(1H-吡唑-4-基)吡啶-3-甲酸甲酯
将6-溴吡啶-3-甲酸甲酯(4.80g,22.2mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯(7.20g,24.4mmol)、碳酸钾(10mL,2N水溶液)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(1.63g,2.23mmol)于1.4-二噁烷中的混合物在氮气气氛下在100℃搅拌16h。使所得混合物冷却至室温并用水稀释。经由过滤收集所得固体并真空干燥，得到3.1g(粗品)标题化合物，其为棕色固体。固体未经进一步纯化即直接用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝204。
步骤2：6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-甲酸甲酯
向6-(1H-吡唑-4-基)吡啶-3-甲酸甲酯(3.00g,14.8mmol)和碳酸铯(10.5g,32.2mmol)于DMF(35mL)中的溶液中添加1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(2.50g,15.9mmol)。将反应混合物在25℃搅拌2h，然后用水稀释。经由过滤收集所得固体并真空干燥，得到4.05g(粗品)标题化合物，其为棕色固体。固体未经进一步纯化即直接用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝324。
步骤3：6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-甲酸
将6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-甲酸甲酯(4.00g,12.4mmol)和氢氧化钾(2.40g,42.8mmol)于THF(35mL)和水(35mL)中的混合物在25℃搅拌12h。真空除去THF并用1N氯化氢水溶液调节混合物至pH 6。经由过滤收集所得固体并真空干燥，得到3.5g(91％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝309。
步骤4：(S)-1-(1-(6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺
遵循与实施例125类似的操作由6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-甲酸(770mg,2.49mmol)制备标题化合物(550mg,40％产率,历经四步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝550。
步骤5：将(S)-1-(1-(6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺(500mg,0.910mmol)于TFA(4mL)中的溶液在80℃搅拌4h。真空蒸发溶剂且粗产物经由制备型HPLC纯化，然后冻干，得到32.8mg(8％)223，其为黄色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.18,[M+H]+＝430,方法＝D；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.18(m,1H),8.92-8.91(m,1H),8.45-8.39(m,1H),8.19-8.16(m,2H),7.87-7.84(m,1H),7.32(s,1H),7.03(s,1H),6.38(m,1H),6.10-6.09(m,1H),4.38-4.31(m,4H),3.87-3.84(m,1H),3.61-3.56(m,1H),3.23-3.15(m,1H),2.30-2.20(m,3H),2.08-2.01(m,3H)。
实施例224(S)-1-(1-(2-氨基-7-乙基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺224
步骤1：(1-(2-氨基-7-乙基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-L-脯氨酸
遵循与实施例104步骤1类似的操作由5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-7-乙基苯并噁唑-2-基胺(275mg,0.666mmol)和(S)-吡咯烷-2-甲酸(153mg,1.33mmol)制备标题化合物(116mg,39％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝448。
步骤2：(S)-1-(1-(2-氨基-7-乙基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺
遵循与实施例104步骤2类似的操作由(1-(2-氨基-7-乙基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-L-脯氨酸(116.5mg,0.260mmol)制备224(10.0mg,9％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.76,[M+H]+＝447,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.52(br s,2H),7.38(d,J＝1.6Hz,1H),7.29(d,J＝2.1Hz,1H),7.23(d,J＝1.6Hz,1H),7.01(d,J＝2.1Hz,1H),6.35(d,J＝2.0Hz,1H),6.06(d,J＝2.0Hz,1H),4.35(t,J＝4.6Hz,2H),4.24(t,J＝5.2Hz,2H),3.84-3.82(m,1H),3.60-3.56(m,1H),3.21-3.15(m,1H),2.81(q,J＝7.7Hz,2H),2.30-2.17(m,3H),2.05-1.91(m,3H),1.29(t,J＝7.7Hz,3H)。
实施例225(S)-2-((1-(2-氨基-7-乙基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺225
步骤1：5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-7-乙基苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例205步骤1类似的操作由5-溴-7-乙基苯并[d]噁唑-2-胺(232mg,0.962mmol)制备标题化合物(139mg,35％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝413/415。
步骤2：(S)-2-((1-(2-氨基-7-乙基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酸
遵循与实施例125步骤3类似的操作由5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-7-乙基苯并[d]噁唑-2-胺(139mg,0.336mmol)和(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(77.3mg,0.67mmol)制备标题化合物(148mg,58％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝448。
步骤3：(S)-2-((1-(2-氨基-7-乙基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺
遵循与实施例125步骤4类似的操作由(S)-2-((1-(2-氨基-7-乙基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酸(97.5mg,0.218mmol)制备225(26.6mg,27％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.71,[M+H]+＝447,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.51(br s,2H),7.35(d,J＝1.5Hz,1H),7.33(d,J＝2.1Hz,1H),7.19(d,J＝1.5Hz,1H),6.96(d,J＝2.1Hz,1H),6.36(d,J＝2.0Hz,1H),6.22(d,J＝2.0Hz,1H),5.44(d,J＝7.2Hz,1H),4.33-4.15(m,4H),3.14(t,J＝7.2Hz,1H),2.81(q,J＝7.5Hz,2H),2.26-2.21(m,2H),1.29(t,J＝7.5Hz,3H),1.15-1.06(m,1H),0.54-0.44(m,3H),0.34-0.28(m,1H)。
实施例227(S)-1-(1-(5-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺227
步骤1：3-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***
将3-溴-1H-1,2,4-***(10.0g,67.6mmol)、1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(10.6g,67.6mmol)、DIPEA(17.5g,135mmol)和碘化钾(5.61g,33.8mmol)于乙腈(300mL)中的混合物在65℃搅拌120min。真空蒸发溶剂且残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-30％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到12.9g(71％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝268/270。
步骤2：5-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-2-甲酸
将3-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***(500mg,1.86mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吡啶-2-甲酸甲酯(520mg,1.98mmol)、四(三苯基膦)钯(220mg,0.190mmol)和碳酸钠(590mg,5.57mmol)于水(1mL)和二噁烷(9mL)中的混合物在微波照射下在140℃加热30min。另外重复该操作十次。将十批反应混合物合并，用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯萃取。用0.5N氯化氢水溶液调节水层的pH至pH 6且经由过滤收集所得固体并真空干燥，得到636mg(11％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝311。
步骤3：(S)-1-(1-(5-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺
遵循与实施例125类似的操作由5-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-2-甲酸(600mg,1.94mmol)制备标题化合物(287mg,27％产率,历经4步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝551。
步骤4：将(S)-1-(1-(5-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺(140mg,0.254mmol)于TFA(6mL)中的溶液在80℃搅拌6h。真空蒸发溶剂且粗品通过制备型反相HPLC纯化，然后冻干，得到2.4mg(2％)226，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.21,[M+H]+＝431,方法＝E；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.65(s,1H),8.51-8.48(m,1H),8.37-8.34(m,1H),7.35(s,1H),7.03(s,1H),6.39(s,1H),6.14(s,1H),4.85-4.81(m,2H),4.40-4.30(m,2H),3.87-3.84(m,1H),3.61-3.58(m,1H),3.24-3.16(m,1H),2.26-2.19(m,3H),2.03-1.97(m,3H)。
实施例227(S)-1-(1-(4-(1,2,4-噻二唑-3-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺227
步骤1：5-(4-溴苯基)-1,3,4-噁噻唑-2-酮
向4-溴苯甲酰胺(11.0g,55.0mmol)于甲苯(150mL)中的溶液中添加氯羰基硫基氯(carbonochloridic hypochlorous thioanhydride)(14.3g,110mmol)。将反应混合物在100℃搅拌180min且真空蒸发溶剂，得到12.8g(90％)标题化合物，其为棕色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝258/260。
步骤2：3-(4-溴苯基)-1,2,4-噻二唑-5-甲酸乙酯
向5-(4-溴苯基)-1,3,4-噁噻唑-2-酮(9.00g,34.9mmol)于十二烷(100mL)中的溶液中添加氰基甲酸乙酯(13.8g,140mmol).将反应混合物在160℃搅拌180min且真空蒸发溶剂，得到8.1g(74％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝313/315。
步骤3：3-(4-溴苯基)-1,2,4-噻二唑
向3-(4-溴苯基)-1,2,4-噻二唑-5-甲酸乙酯(8.00g,25.5mmol)于乙醇(100mL)和水(60mL)中的溶液中添加氢氧化钠(1.13g,28.2mmol)。将反应混合物在100℃搅拌120min，然后冷却至室温并添加浓氯化氢水溶液(7mL)。将反应混合物在100℃搅拌180min。用2N碳酸氢钠调节反应混合物至约pH 3，然后用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空除去溶剂，得到6.1g(99％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝241/243。
步骤4：遵循与实施例158步骤2-5类似的操作由4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(实施例150步骤2)(400mg,0.971mmol)制备227(41.3mg,9.5％产率)。LCMS:RT(min)＝2.15,[M+H]+＝447,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),8.40(d,J＝8.4,2H),7.98(d,J＝8.4,2H),7.32(s,1H),7.03(s,1H),6.38(d,J＝2.1Hz,1H),6.10(d,J＝2.1Hz,1H),4.38-4.31(m,4H),3.90-3.80(m,1H),3.59(d,J＝7.8Hz,1H),3.19(d,J＝8.2Hz,1H),2.33-2.25(m,3H),2.10-1.87(m,3H)。
实施例228(S)-2-环丙基-2-((1-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)乙酰胺228
遵循与实施例125类似的操作制备228。LCMS(ESI):RT(min)＝1.05,[M+H]+＝404,方法＝D；。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.17(d,J＝7.2Hz,1H),8.29(s,1H),7.82(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(s,1H),6.99(s,1H),6.84(s,1H),6.40-6.37(m,2H),5.68(d,J＝7.2Hz,1H),4.91-4.88(m,2H),4.37-4.35(m,2H),3.17-3.12(m,1H),2.40-2.20(m,2H),1.13-1.11(m,1H),0.54-0.48(m,3H),0.32-0.30(m,1H)。
实施例229(S)-1-(1-(4-(1H-吡唑-3-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺229
步骤1：4-溴-1-(4-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
将4-溴-1-(4-碘苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(实施例235步骤1)(1.00g,2.20mmol)、1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑(610mg,2.19mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(160mg,0.219mmol)和碳酸钠(2M水溶液,10mL)于DMF(20mL)中的混合物在60℃搅拌3h。反应混合物通过水淬灭，用DCM萃取，合并有机层且用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：10％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到737mg(70％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝479/481。
步骤2：(2S)-1-(1-(4-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺
遵循与实施例104类似的操作由4-溴-1-(4-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(680mg,1.42mmol)制备标题化合物(320mg,44％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝513。
步骤3：(S)-1-(1-(4-(1H-吡唑-3-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺
将(2S)-1-(1-(4-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺(270mg,0.527mmol)于TFA(3mL)和DCM(6mL)中的溶液在20℃搅拌30min。真空蒸发溶剂且粗产物通过制备型反相HPLC纯化并冻干，得到18.5mg(8％)229，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝0.97,[M+H]+＝429,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.02(br,1H),7.98-7.95(m,2H),7.84-7.77(m,3H),7.30(s,1H),7.02(s,1H),6.82(d,J＝2.4Hz,1H),6.36(s,1H),6.08(s,1H),4.37-4.28(m,4H),3.85-3.82(m,1H),3.75-3.45(m,1H),3.20-3.17(m,1H),2.40-2.10(m,3H),2.05-1.85(m,3H)。
实施例230和231(S)-2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-2-环丙基乙酰胺230和(R)-2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-2-环丙基乙酰胺231
步骤1：2-环丙基-2-(1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯
将吡唑(110mg,1.61mmol)、2-溴-2-环丙基乙酸乙酯(0.33g,1.61mmol)和碳酸铯(576mg,1.77mmol)于DMF(3.0mL)中的混合物在60℃搅拌16h。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配并分离各相。水层再用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：10-50％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到186mg(60％)标题化合物，其为无色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝195。
步骤2：2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-环丙基乙酸乙酯
向2-环丙基-2-(1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯(186mg,0.96mmol)于THF(3.0mL)中的溶液中添加N-溴琥珀酰亚胺(188mg,1.06mmol)并将反应混合物在室温搅拌2.5h。与甲苯共沸蒸发溶剂且残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-20％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到253mg(97％)标题化合物，其为无色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝273/275。
步骤3：2-环丙基-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯
在氮气气氛下将2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-环丙基乙酸乙酯(253mg,0.93mmol)、二(频哪醇合)二硼(283mg,1.11mmol)、乙酸钾(270mg,2.8mmol)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(75mg,0.093mmol)混悬于1,4-二噁烷(2.0mL)并将反应混合物在110℃搅拌6.5h。使所得混合物温热至室温并与甲苯共沸蒸发溶剂。粗残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：2-25％乙酸乙酯/甲苯)纯化，得到169mg(57％)标题化合物，其为无色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝321。
步骤4：2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-2-环丙基乙酸
将来自实施例101的5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(84mg,0.218mmol)、2-环丙基-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯(168mg,0.436mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)(18mg,0.022mmol)、2N碳酸钠水溶液(0.4mL,0.80mmol)和1,2-二甲氧基乙烷(1.5mL)在密封小瓶中在氮气下在100℃加热16h。将反应混合物冷却至45℃并将甲醇(1.0mL)和氢氧化锂(37mg,0.872mmol)于水(1.0mL)中的溶液添加至所得混合物且再搅拌1.5h。使反应混合物温热至室温并添加1N HCl(5mL)且将混合物倾倒在10g SCX-2柱上。柱用甲醇洗涤，然后用2N氨/甲醇洗脱。收集洗脱液并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-50％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化，得到97mg(95％)标题化合物，其为灰色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝471。
步骤5：历经5min向2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-2-环丙基乙酸(97mg,0.21mmol)、氯化铵(22mg,0.42mmol)和DIPEA(143μl,0.84mmol)于DMF(1.0mL)中的混合物中逐份添加HATU(157mg,0.42mmol)并再搅拌10min。混合物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：2-14％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化且将所得残余物溶于甲醇并加载到2g SCX-2柱上。柱用甲醇洗涤，然后用2N氨/甲醇洗脱。收集洗脱液并除去溶剂，得到外消旋混合物74mg(76％)标题化合物，其为灰白色固体。通过手性SFC分离两种立体异构体，得到呈灰白色固体形式的230和231，其各自为单一的未知的立体异构体。
实施例230(30mg,31％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.54min,[M+H]+＝470,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.35(s,1H),7.90(s,1H),7.58(br s,3H),7.53(d,J＝1.3Hz,1H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),7.39(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),7.28(br s,1H),7.06(d,J＝1.3Hz,1H),4.46-4.40(m,2H),4.20(t,J＝5.1Hz,2H),4.11(d,J＝10.2Hz,1H),2.36-2.29(m,2H),1.68-1.58(m,1H),0.75-0.62(m,3H),0.37-0.29(m,1H)。
实施例231(31mg,32％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.54min,[M+H]+＝470,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.35(s,1H),7.90(s,1H),7.58(br s,3H),7.53(d,J＝1.3Hz,1H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),7.39(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),7.28(br s,1H),7.06(d,J＝1.3Hz,1H),4.46-4.40(m,2H),4.20(t,J＝5.1Hz,2H),4.11(d,J＝10.2Hz,1H),2.36-2.29(m,2H),1.68-1.58(m,1H),0.75-0.62(m,3H),0.37-0.29(m,1H)。
实施例232和233(R)-2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺232和(S)-2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺233
步骤1：2-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丙二酸二乙酯
将吡唑(1.34g,19.75mmol)、2-溴-2-甲基丙二酸二乙酯(5.0g,19.75mmol)和碳酸铯(7.08g,21.73mmol)于DMF(35mL)中的混合物在60℃搅拌2h。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配并分离各相。水层再用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-25％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到4.06g(86％)标题化合物，其为无色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝241。
步骤2：3-羟基-2-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯
历经2min向2-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丙二酸二乙酯(480mg,2.0mmol)于THF(5.0mL)中的溶液中逐滴添加三叔丁氧基氢化锂铝(1N于THF中,4.5mL,4.5mmol)。然后将反应混合物回流30min。将所得混合物冷却至0℃并用10％硫酸氢钠水溶液(30mL)淬灭，然后用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：30-60％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到235mg(59％)标题化合物，其为无色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝199。
步骤3：3-甲氧基-2-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯
向3-羟基-2-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯(235mg,1.19mmol)于THF(5.0mL)中的溶液中添加碘甲烷(148μL,2.37mmol)，然后历经3min逐份添加氢化钠(60％于矿物油中,57mg,1.42mmol)。将反应混合物在室温搅拌45min。所得混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭，然后用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：10-40％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到168mg(67％)标题化合物，其为无色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝213。
步骤4：2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸乙酯
向3-甲氧基-2-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯(168mg,0.79mmol)于THF(3.0mL)中的溶液中添加N-溴琥珀酰亚胺(155mg,0.87mmol)并将反应混合物在室温搅拌1h。与甲苯共沸蒸发溶剂且残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-20％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到219mg(95％)标题化合物，其为无色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝291/293。
步骤5：3-甲氧基-2-甲基-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯
在氮气气氛下将2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸乙酯(219mg,0.75mmol)、二(频哪醇合)二硼(230mg,0.90mmol)、乙酸钾(219mg,2.25mmol)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(75mg,0.075mmol)混悬于1,4-二噁烷(1.75mL)并在110℃搅拌5h，然后温热至室温。与甲苯共沸减压除去溶剂且残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-30％乙酸乙酯/甲苯)纯化，得到125mg(49％)标题化合物，其为无色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝339。
步骤6：2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸
将来自实施例101的5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(99mg,0.257mmol)、3-甲氧基-2-甲基-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯(124mg,0.257mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)(21mg,0.026mmol)、2N碳酸钠水溶液(0.5mL,1.0mmol)和1,2-二甲氧基乙烷(1.8mL)在密封小瓶中在氮气下在100℃加热3h。将反应混合物冷却至45℃并将甲醇(3mL)和氢氧化锂(42mg,1.0mmol)于水(2mL)中的溶液添加至所得混合物，将其再搅拌1.5h。使所得混合物温热至室温且添加1N HCl(5mL)并将混合物倾倒在10g SCX-2柱上。柱用甲醇洗涤，然后用2N氨/甲醇洗脱。收集洗脱液并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：10-60％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化，得到84mg(67％)标题化合物，其为灰色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝489。
步骤7：历经5min向外消旋2-(4-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(84mg,0.17mmol)、氯化铵(18mg,0.35mmol)和DIPEA(120μL,0.69mmol)于DMF(1.0mL)中的混合物中逐份添加HATU(132mg,0.35mmol)并再搅拌10min。反应混合物直接经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：2-14％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化并将所得残余物溶于甲醇并加载到2g SCX-2柱上。柱用甲醇洗涤，然后用2N氨/甲醇洗脱。收集洗脱液并蒸发溶剂，得到外消旋混合物73mg(86％)标题化合物，其为灰白色固体。通过手性SFC分离两种立体异构体，得到呈灰白色固体形式的232和233，其各自为单一的未知的立体异构体。
实施例232(20mg,24％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.63min,[M+H]+＝470,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.25(s,1H),7.97(s,1H),7.58(br s,3H),7.55(d,J＝1.3Hz,1H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),7.39(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),7.29(br s,1H),7.08(d,J＝1.5Hz,1H),6.86(br s,1H),4.44-4.40(m,2H),4.30(t,J＝5.3Hz,2H),4.00(d,J＝10.0Hz,1H),3.86(d,J＝10.0Hz,1H),3.25(s,3H),2.36-2.28(m,2H),1.77(s,3H)。
实施例233(23mg,27％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.63min,[M+H]+＝470,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.25(s,1H),7.97(s,1H),7.58(br s,3H),7.55(d,J＝1.3Hz,1H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),7.39(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),7.29(br s,1H),7.08(d,J＝1.5Hz,1H),6.86(br s,1H),4.44-4.40(m,2H),4.30(t,J＝5.3Hz,2H),4.00(d,J＝10.0Hz,1H),3.86(d,J＝10.0Hz,1H),3.25(s,3H),2.36-2.28(m,2H),1.77(s,3H)。
实施例234(S)-1-(1-(4-(2-氧代咪唑烷-1-基)苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺234
步骤1：4-溴-1-(4-碘苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁
遵循与实施例125步骤1-2类似的操作由8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺(9.8g,40.3mmol)制备标题化合物(5.8g,31％产率,历经两步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝455/457。
步骤2：1-(4-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯基)咪唑烷-2-酮
将4-溴-1-(4-碘苯基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(500mg,1.10mmol)、咪唑烷-2-酮(760mg,8.83mmol)、碘化亚铜(I)(40mg,0.210mmol)、N1,N2-二甲基乙-1,2-二胺(60mg,0.681mmol)和磷酸钾(700mg,3.30mmol)于DMF(11mL)中的混合物在微波照射下在130℃加热1h。粗反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并有机层且用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：10％甲醇/DCM)纯化，得到330mg(73％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝413/415。
步骤3：遵循与实施例104步骤1-2类似的操作由1-(4-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯基)咪唑烷-2-酮(500mg,1.21mmol)制备234(33.4mg,6.1％产率,历经两步)。LCMS(ESI):RT(min)＝1.24,[M+H]+＝447,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.72(s,4H),7.30(s,1H),7.11(s,1H),7.02(s,1H),6.34(d,J＝1.8Hz,1H),6.05(d,J＝1.8Hz,1H),4.35-4.27(m,2H),4.25-4.23(m,2H),3.94-3.81(m,3H),3.65-3.50(m,1H),3.47-3.41(m,2H),3.25-3.05(m,1H),2.35-2.10(m,3H),2.08-1.85(m,3H)。
实施例235(S)-2-((1-(2-氨基-7-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺235
步骤1：5-溴-7-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-胺
反应容器装有2-氨基-4-溴-6-(三氟甲基)苯酚(0.37g,1.44mmol)、溴化氰(184mg,1.74mmol)和甲醇(10mL)并将反应混合物在35℃搅拌16h。将所得混合物冷却至室温并再添加溴化氰(62mg,0.59mmol)。将反应混合物在35℃搅拌2h。所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(10mL)淬灭并真空浓缩溶剂。将混合物在乙酸乙酯和水之间分配并分离各相。水相再用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发，得到350mg(86％)标题化合物。残余物未经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+282。
步骤2：5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-7-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例205类似的操作由4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁(472mg,1.25mmol)和5-溴-7-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-胺(350mg,1.25mmol)获得标题化合物(105mg,19％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝453。
步骤3：(S)-2-((1-(2-氨基-7-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酸
遵循与实施例125步骤3类似的操作由5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-7-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-胺(105mg,0.23mmol)和(S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(66.7mg,0.58mmol)制备标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝488。
步骤4：遵循与实施例125步骤4类似的操作由(S)-2-((1-(2-氨基-7-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氨基)-2-环丙基乙酸(129mg,0.265mmol)制备235(3.0mg,2.3％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.89min,[M+H]+＝487,方法＝A；1H NMR(400MHz,MeOD-d4):δ7.75(s,1H),7.61(s,1H),6.50(d,J＝2.0Hz,1H),6.34(d,J＝2.0Hz,1H),4.42-4.36(m,2H),4.26(t,J＝2.0Hz,2H),3.14(d,J＝8.6Hz,1H),2.37-2.30(m,2H),1.23-1.13(m,1H),0.69-0.57(m,3H),0.45-0.37(m,1H)。
实施例236(S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-N-(4-甲氧基苄基)吡咯烷-2-甲酰胺236
遵循与实施例104步骤2类似的操作使用4-甲氧基苄基胺由(S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酸制备236。LCMS(ESI):RT(min)＝3.539,[M+H]+＝539.3,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(t,J＝6.2Hz,1H),7.60-7.51(m,3H),7.48(d,J＝8.2Hz,1H),7.36(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),7.17-7.09(m,2H),6.85-6.76(m,2H),6.40(d,J＝2.1Hz,1H),6.09(d,J＝2.1Hz,1H),4.41-4.32(m,2H),4.29-4.23(m,2H),4.20(d,J＝6.2Hz,2H),3.97(dd,J＝9.3,2.3Hz,1H),3.69(s,3H),3.66-3.58(m,1H),3.25-3.15(m,1H),2.34-2.18(m,3H),2.06-1.88(m,3H)。
实施例237(S)-1-(1-(3-氧代-2,3-二氢苯并[d]异噁唑-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺237
遵循与实施例158类似的操作制备237。LCMS(ESI):RT(min)＝1.22,[M+H]+＝420,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.89-11.80(m,1H),7.70-7.69(m,1H),7.58-7.55(m,1H),7.30(s,1H),7.24-7.21(m,1H),7.03(s,1H),6.35-6.34(m,1H),6.07(d,J＝2.1Hz,1H),4.46-4.34(m,2H),4.26-4.18(m,2H),3.84-3.82(m,1H),3.68-3.57(m,1H),3.19-3.16(m,1H),2.26-2.15(m,3H),2.08-1.96(m,3H)。
实施例238(S)-2-(((R)-2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺238
步骤1：2,5-二溴-3-硝基苯酚
在0℃向2-氨基-5-溴-3-硝基苯酚(10.0g,42.9mmol)于48％氢溴酸水溶液(20mL)中的混悬液中逐滴添加亚硝酸钠(3.15g,45.1mmol)于水(20mL)中的溶液。将反应混合物在0℃搅拌15min。然后逐滴添加于48％氢溴酸水溶液(20mL)中的溴化铜(II)(4.79g,21.5mmol)并将反应混合物在0℃搅拌15min，然后在100℃搅拌2h。所得混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-100％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到6.28g(49％)标题化合物，其为橙色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.62(d,J＝2.2Hz,1H),7.42(d,J＝2.2Hz,1H),6.17(brs,1H)。
步骤2：(R)-(2-(2,5-二溴-3-硝基苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯
在室温向2,5-二溴-3-硝基苯酚(1.0g,3.40mmol)、N-Boc-(S)-1-氨基-2-丙醇(708mg,4.0mmol)和三苯基膦(1.24g,4.70mmol)于THF(6.0mL)中的溶液中逐滴添加偶氮二甲酸二异丙酯(0.86mL,4.4mmol)并将反应混合物在室温搅拌1h。真空浓缩所得混合物且残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到1.61g(>100％)标题化合物，其为黄色油状物。LCMS(ESI):[M+H-100]+＝353/355/357。
步骤3：(R)-7-溴-2-甲基-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪
将(R)-(2-(2,5-二溴-3-硝基苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(1.61g,3.60mmol)溶于盐酸(4N于1,4-二噁烷中,12mL,48mmol)并将反应混合物在50℃搅拌1h。真空浓缩所得混合物并将残余物溶于DMF(7.0mL)。添加碳酸钾(1.23g,8.9.mmol)并将反应混合物在90℃搅拌2h。所得混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发，得到1.19g(>100％)标题产物，其为亮红色固体。该物质未经纯化即使用。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.90(d,J＝2.0Hz,1H),7.88(br s,1H),7.09(dd,J＝2.3,0.6Hz,1H),4.23-4.14(m,1H),3.60(ddd,J＝12.5,4.4,2.7Hz,1H),3.29(ddd,J＝12.6,8.3,1.3Hz,1H),1.42(d,J＝6.1Hz,3H)。
步骤4：(R)-7-溴-2-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-5-胺
向(R)-7-溴-2-甲基-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪(968mg,3.50mmol)于甲醇(10mL)和水(10mL)中的混悬液中添加铁粉(1.12g,21.3mmol)和氯化铵(1.7g,31.9mmol)并将反应混合物在80℃搅拌30min。过滤所得混合物且固体用乙酸乙酯充分洗涤。滤液用乙酸乙酯萃取且合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩，得到860mg(99％)标题化合物，其为棕色油状物。该物质未经纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.52(d,J＝2.1Hz,1H),6.45(d,J＝2.1Hz,1H),4.13-4.05(m,1H),3.37(dd,J＝12.4,2.2Hz,1H),2.99(dd,J＝12.4,8.1Hz,1H),1.34(d,J＝6.2Hz,3H)。
步骤5：(R)-7-溴-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯
将(R)-7-溴-2-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-5-胺(861mg,3.54mmol)溶于原甲酸三甲酯(5.0mL,45.7mmol)并将反应混合物在100℃加热30min。将所得混合物直接加载到硅藻土上且产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-5％甲醇/DCM)纯化，得到735mg(82％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝253/255。
步骤6：(R)-7-溴-2-碘-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯
在-40℃向二异丙胺(0.65mL,4.65mmol)于THF(3.0mL)中的溶液中逐滴添加正丁基锂(0.58mL,2.5N于己烷中,1.46mmol)。使反应混合物温热至-20℃，然后冷却至-78℃。逐滴添加(R)-7-溴-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯(735mg,2.9mmol)于THF(6.0mL)中的溶液并将反应混合物在-78℃搅拌2h。添加碘(1.03g,4.1mmol)于THF(6.0mL)中的溶液并将反应混合物在-78℃搅拌3h。所得混合物用水淬灭并用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-100％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到378mg(34％)标题化合物，其为米色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46(d,J＝1.2Hz,1H),6.87(d,J＝1.2Hz,1H),4.51-4.41(m,1H),4.19(dd,J＝12.7,2.9Hz,1H),3.83(dd,J＝12.7,9.2Hz,1H),1.61(d,J＝6.4Hz,3H)。
步骤7：(R)-5-(7-溴-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺
将四(三苯基膦)钯(0)(32mg,0.03mmol)、碳酸铯(180mg,0.55mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1,3-苯并噁唑-2-胺(154mg,0.60mmol)和(R)-7-溴-2-碘-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯(150mg,0.40mmol)于1,4-二噁烷(2.5mL)和水(0.5mL)中的混合物密封于小瓶中并用氩气脱气且将反应混合物在100℃加热16h。所得混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-7％甲醇/DCM)纯化，得到50mg(30％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝385/387。
步骤8：(S)-2-(((R)-2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氨基)-2-环丙基乙酸
将(R)-5-(7-溴-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(145mg,0.38mmol)、(2S)-2-氨基-2-环丙基乙酸(87mg,0.75mmol)、碘化亚铜(I)(14mg,0.08mmol)和磷酸钾(160mg,0.75mmol)于DMSO(2.0mL)中的混合物用氩气脱气并将反应混合物在110℃加热16h。所得混合物用DCM(40mL)稀释并经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％(2N氨/甲醇)/DCM)直接纯化，得到168mg(106％)标题化合物，其为黄色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝420。
步骤9：向(S)-2-(((R)-2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氨基)-2-环丙基乙酸(164mg,0.39mmol)、氯化铵(42mg,0.78mmol)和三乙胺(0.16mL,1.17mmol)于DMF(3.0mL)中的混合物中添加HATU(223mg,0.59mmol)并将反应混合物在室温搅拌30min。反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。残余物经由反相HPLC纯化，得到9mg(6％)238，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.50min,[M+H]+＝419,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.17(s,1H),7.68(d,J＝1.2Hz,1H),7.56(br s,2H),7.53(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H),7.46(d,J＝8.1Hz,1H),7.36(d,J＝1.8Hz,1H),6.97(d,J＝1.7Hz,1H),6.27(d,J＝1.4Hz,1H),6.21(d,J＝1.4Hz,1H),4.64(dd,J＝12.6,2.8Hz,1H),4.42-4.33(m,1H),4.19(dd,J＝12.7,9.2Hz,1H),3.13(d,J＝8.3Hz,1H),1.47(d,J＝6.2Hz,3H)。
实施例239(S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺239
遵循与实施例214类似的操作制备239。LCMS(ESI):RT(min)＝4.5,[M+H]+＝449,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.00(d,J＝1.6Hz,1H),7.74(s,2H),7.62-7.43(m,2H),7.43-7.32(m,1H),7.21-7.01(m,1H),6.46(d,J＝1.9Hz,1H),6.23(d,J＝2.0Hz,1H),4.39(d,J＝6.2Hz,2H),4.23-4.20(m,2H),4.00-3.76(m,1H),3.69-3.52(m,1H),3.19(d,J＝9.0Hz,1H),2.25-2.11(m,3H),2.03-1.88(m,3H),1.70(s,2H)。
实施例240(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-3-氟-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酰胺240
步骤1：5-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺
在氮气气氛下将5-(4-溴-3-氟-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(530mg,1.30mmol)、二(频哪醇合)二硼(495mg,1.95mmol)、乙酸钾(382mg,3.90mmol)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(106mg,0.13mmol)混悬于1,4-二噁烷(10mL)并将反应物在110℃搅拌6h。使所得混合物温热至室温，蒸发溶剂并将残余物在乙酸乙酯和水之间分配，通过硅藻土过滤。有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物未经进一步纯化即直接用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝450/451/452。
步骤2：1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-3-氟-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-醇
向5-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(粗品,推定为1.30mmol)于乙醇(15mL)中的溶液中添加盐酸羟胺(271mg,3.90mmol)和氢氧化钠(208mg,5.20mmol)并将反应混合物在室温搅拌18h。所得混合物用稀释甲醇，用1N盐酸酸化，然后加载到10g SCX-2柱上。柱用甲醇充分洗涤，然后用2N氨/甲醇洗脱。收集洗脱液并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-10％(2N氨/甲醇)/DCM)纯化，得到152mg(34％,历经2步)标题化合物，其为浅棕色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝341。
步骤3：向1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-3-氟-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-醇(159mg,0.47mmol)于DMF(5.0mL)中的溶液中添加碳酸钾(105mg,0.75mmol)和甲苯-4-磺酸(R)-1-氨甲酰基乙基酯(135mg,0.55mmol)并将反应混合物在80℃搅拌6h。再添加碳酸钾(42mg,0.3mmol)和甲苯-4-磺酸(R)-1-氨甲酰基乙基酯(34mg,0.14mmol)并将反应物在80℃再搅拌18h。使所得混合物温热至室温并在乙酸乙酯和水之间分配。水层再用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发。残余物经由反相HPLC纯化，然后通过手性SFC纯化并冻干，得到38mg(25％产率)240，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.56,[M+H]+＝412,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(s,2H),7.57(d,J＝1.3Hz,1H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(s,1H),7.38(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),7.27(s,1H),6.57(d,J＝6.3Hz,1H),4.57(q,J＝6.8Hz,1H),4.39-4.34(m,2H),4.28(t,J＝5.5Hz,2H),2.32-2.25(m,2H),1.44(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例241(S)-2-((1-(2-氨基-4-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺241
遵循与实施例249类似的操作制备241。LCMS(ESI):RT(min)＝1.17,[M+H]+＝426,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.81(s,2H),7.54(s,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(s,1H),7.17-7.12(m,1H),6.94(d,J＝2.1Hz,1H),6.63(d,J＝2.1Hz,1H),4.66-4.60(m,1H),4.22-4.21(m,4H),2.05-1.85(m,2H),1.70-1.55(m,2H),1.45(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例242(S)-2-((1-(2-氨基-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺242
步骤1：6-溴-4-氟苯并[d]噻唑-2-胺
将4-溴-2-氟苯胺(144g,758mmol)、乙酸(1000mL)和硫氰酸钾(243g,2.50mol)的混合物在室温搅拌15min。然后将溴(243g,1.52mol)于乙酸(200mL)中的溶液逐滴添加至混合物中。将反应混合物在室温搅拌16h，然后用水稀释。混合物用氢氧化钠水溶液调节至约pH 7。混合物用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-20％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到46.7g(25％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝247/249。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.87(s,2H),7.78(d,J＝2.0Hz,1H),7.38-7.34(m,1H)。
步骤2：6-溴-4-氟-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-2-胺
将6-溴-4-氟苯并[d]噻唑-2-胺(16.2g,65.5mmol)、碳酸钾(33.8g,244mmol)和1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(33.0g,210mmol)于DMF(350mL)中的混合物在60℃加热16h。反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到20.2g(51％)标题化合物，其为浅黄色固体。
LCMS(ESI):[M+H]+＝487/489。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.87-7.84(m,1H),7.46-7.41(m,1H),7.26-7.22(m,4H),6.94-6.84(m,4H),4.69(s,4H),3.73(s,6H)。
步骤3：4-氟-N,N-二(4-甲氧基苄基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噻唑-2-胺
遵循与实施例204步骤7类似的操作由6-溴-4-氟-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-2-胺(20.2g,41.4mmol)制备标题化合物(14.2g,64％产率)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝535。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.86(s,1H),7.33-7.20(m,5H),6.91(d,J＝8.5Hz,4H),4.70(s,4H),3.73(s,6H),1.29(s,12H)。
步骤4：6-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-4-氟-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-2-胺
将4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(实施例204步骤6)(320mg,0.814mmol)、4-氟-N,N-二(4-甲氧基苄基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噻唑-2-胺(430mg,0.805mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(116mg,0.159mmol)和碳酸铯(767mg,2.35mmol)于1,4-二噁烷(10mL)和水(2mL)中的混合物用氮气脱气。将反应混合物在微波照射下在100℃加热1h。另外重复该操作29次。将各次反应混合物合并，用水稀释，用DCM萃取，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-30％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到11.5g(69.9％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝673/675。
步骤5：(S)-2-((1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺
遵循与实施例204步骤9-12类似的操作由6-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-4-氟-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-2-胺(3g,4.45mmol)制备标题化合物(1.3g,历经四步43.3％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝682。
步骤6：将(S)-2-((1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺(1.30g,1.91mmol)于TFA(20mL)中的溶液在90℃加热2h。真空蒸发反应混合物。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，接着进行手性HPLC，得到177.8mg(21％产率)242，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.26,[M+H]+＝442,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.94(s,2H),7.84(s,1H),7.50(s,1H),7.39(d,J＝11.4Hz,1H),7.22(s,1H),6.92(d,J＝1.2Hz,1H),6.59(d,J＝1.2Hz,1H),4.66-4.59(m,1H),4.47-4.36(m,2H),4.29-4.20(m,2H),2.19-2.06(m,2H),1.75-1.60(m,2H),1.45(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例243(S)-2-((1-(4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺243
使用商购的3-(4-溴苯基)-1H-1,2,4-***并遵循与实施例242类似的操作制备243。LCMS(ESI):RT(min)＝1.02,[M+H]+＝419,方法＝F；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.28(br,1H),8.53(s,1H),8.20(d,J＝8.4Hz,2H),7.82(d,J＝8.4Hz,2H),7.55(s,1H),7.25(s,1H),6.94(d,J＝2.1Hz,1H),6.62(d,J＝2.1Hz,1H),4.67-4.60(m,1H),4.44-4.40(m,2H),4.27-4.24(m,2H),2.20-2.00(m,2H),1.80-1.55(m,2H),1.45(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例244(S)-2-((1-(2-氨基喹喔啉-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺244
遵循与实施例204类似的操作制备244。LCMS(ESI):RT(min)＝1.79,[M+H]+＝419,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),8.01(d,J＝2.1Hz,1H),7.89-7.86(m,1H),7.65-7.62(m,1H),7.54(s,1H),7.25(s,3H),6.95-6.94(m,1H),6.61-6.60(m,1H),4.66-4.60(m,1H),4.47-4.43(m,2H),4.42-4.27(m,2H),2.17(s,2H),1.72-1.71(m,2H),1.45(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例245(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺245
通过手性SFC将245分离成实施例204的次要差向异构体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.47,[M+H]+＝408,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.61-7.44(m,5H),7.29-7.26(m,2H),6.92(d,J＝2.1Hz,1H),6.59(d,J＝2.1Hz,1H),4.66-4.59(m,1H),4.39-4.35(m,2H),4.26-4.23(m,2H),2.11(表观s,2H),1.69(表观s,2H),1.45(d,J＝8.8Hz,3H)。
实施例246(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氨基)-2-环丙基乙酰胺246
遵循与实施例214类似的操作制备246。LCMS(ESI):RT(min)＝1.24,[M+H]+＝449,方法＝E；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.81(d,J＝8.1Hz,1H),7.66(s,2H),7.54(d,J＝1.2Hz,1H),7.41(d,J＝1.8Hz,1H),7.29-7.25(m,1H),7.01(s,1H),6.46-6.39(m,2H),5.59(d,J＝7.2Hz,1H),4.37-4.27(m,2H),4.23-4.14(m,2H),3.15-3.09(m,1H),2.15-2.05(m,2H),1.75-1.63(m,2H),1.15-1.08(m,1H),0.58-0.42(m,3H),0.40-0.28(m,1H)。
实施例247(S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-3-氟-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺247
步骤1：3-溴-2-氟-5-甲氧基-6-硝基苯胺
历经15min将1-溴-2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯(10.0g,40mmol)和1,1,1-三甲基碘化肼(8.89g,44mmol)于DMSO(50mL)中的溶液逐滴添加至在冰水浴中冷却的叔丁醇钾(10.77g,96.0mmol)于DMSO(150mL)中的溶液。完成添加后，移开水浴并将反应混合物在室温搅拌2h。将反应混合物倾倒在1N盐酸(200mL)和30g冰的混合物上，然后用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机萃取物用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-20％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到1.73g(16％)标题化合物，其为亮黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.43(d,J＝5.4Hz,1H),5.31(br s,2H),3.87(s,3H)。
步骤2：4-溴-3-氟-6-甲氧基苯-1,2-二胺
向3-溴-2-氟-5-甲氧基-6-硝基苯胺(1.73g,6.53mmol)于乙醇(21mL)和THF(7.0mL)中的混悬液中先后添加氯化铵(3.14g,58.8mmol)于水(14mL)中的溶液和铁粉(2.19g,39.2mmol)。将反应物在100℃搅拌1h，然后温热至室温。反应混合物用乙酸乙酯和水稀释，然后通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯洗脱。收集滤液，分离各相且有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：30％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到1.34g(88％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝235/237。
步骤3：5-溴-4-氟-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑
向4-溴-3-氟-6-甲氧基苯-1,2-二胺(1.34g,5.70mmol)于原甲酸三甲酯(40mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸(49mg,0.29mmol)。将反应混合物在100℃搅拌1h并冷却至室温。蒸发溶剂且残余物用DCM/甲醇研磨，过滤并干燥，得到1.18g(84％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝245/247。
步骤4：5-溴-4-氟-1H-苯并[d]咪唑-7-醇
在20℃向5-溴-4-氟-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑(2.00g,8.16mmol)于DCM(75mL)中的溶液中添加三溴化硼(1N于DCM中)(32.6mL,32.6mmol)并将反应混合物在40℃搅拌。16h后，再添加三溴化硼(8.20mmol)且40h后，再添加三溴化硼(8.20mmol)。64h后，将混合物在冰浴中冷却，然后小心用甲醇淬灭。所得混合物用盐水洗涤两次。合并的水性萃取物用1N氢氧化钠(50ml)处理以达到约pH 5，然后用饱和碳酸氢钠水溶液处理。形成析出物且过滤混合物并收集固体。水层再用DCM萃取两次且合并有机萃取物并除去溶剂。合并来自萃取的残余物与所过滤的析出物并干燥，得到1.22g(65％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝231/233。
步骤5：4-溴-3-氟-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚
在氮气下向5-溴-4-氟-1H-苯并[d]咪唑-7-醇(1.22g,5.28mmol)于DMF(50mL)中的溶液中先后添加碳酸钾(1.85g,13.2mmol)和1,4-二溴丁烷(0.69mL,5.81mmol)并将混合物在100℃搅拌16h。使所得混合物冷却至室温，蒸发溶剂并将残余物在乙酸乙酯和水之间分配。水相再用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：60-70％乙酸乙酯/环己烷)纯化，得到728mg(48％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝285/287。
步骤6：4-溴-3-氟-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚
在-20℃在氮气下向二异丙基乙基胺(0.56mL,4.03mmol)于THF(4.0mL)中的溶液中添加正丁基锂(1.6N于己烷中,2.52mL,4.03mmol)并将反应混合物在-20℃搅拌30min，然后冷却至-50℃。向该溶液中逐滴添加4-溴-3-氟-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(718mg,2.52mmol)于THF(16mL)中的溶液。将混合物在-50℃搅拌1h并温热至-25℃，然后在-25℃陈化3h。将反应混合物冷却至-50℃且逐滴添加碘(1.11g,4.41mmol)于THF(8.0mL)中的溶液并将反应混合物在-50℃搅拌30min，然后温热至室温并搅拌1h。所得混合物用硫代硫酸钠水溶液淬灭并用乙酸乙酯稀释。有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：20-50％乙酸乙酯/环己烷)纯化。残余物用环己烷研磨，得到378mg(37％)标题化合物，其为米色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝411/413。
步骤7：5-(4-溴-3-氟-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺
将4-溴-3-氟-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(324mg,0.79mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(246mg,0.95mmol)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(96.8mg,0.12mmol)溶于DMF(5.0mL)。将烧瓶抽空并用氮气冲洗，然后添加2N碳酸钠水溶液(1.18mL,2.36mmol)并将反应混合物在70℃搅拌4h。然后再添加1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(96.8mg,0.12mmol)并将反应混合物在70℃再搅拌1.5h，然后冷却至室温。将所得混合物在乙酸乙酯和水之间分配且水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：4％甲醇/DCM)纯化，得到159mg(43％)标题化合物，其为浅棕色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝417/419。
步骤8：在微波小瓶中将5-(4-溴-3-氟-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(155mg,0.37mmol)、(2S)-吡咯烷-2-甲酸(171mg,1.49mmol)、碘化亚铜(I)(71mg,0.37mmol)和磷酸钾(473mg,2.23mmol)混悬于DMSO(4.0mL)。将小瓶密封，抽空并用氮气冲洗两次。将反应混合物在微波反应器中在120℃加热2h。使粗反应混合物冷却至环境温度并用DMSO(2.0mL)稀释。添加三乙胺(0.52mL,3.71mmol)、氯化铵(79mg,1.48mmol)和HATU(846mg,2.23mmol)并将反应混合物在20℃搅拌3h。将所得混合物在乙酸乙酯和水之间分配。形成析出物，因此过滤混合物并收集固体。同样收集滤液且水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。合并所得残余物和上述析出物并经由硅胶快速色谱纯化(溶剂梯度：6-8％(2N氨/甲醇)/DCM)，然后经由硅胶快速色谱(溶剂：7％(2N氨/甲醇)/DCM)再次纯化，得到36mg(22％)247，其为米色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.58,[M+H]+＝451,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(s,2H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),7.44(d,J＝1.3Hz,1H),7.29(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),7.26(br s,1H),6.96(br s,1H),6.44(d,J＝6.5Hz,1H),4.35(t,J＝5.5Hz,2H),4.20(t,J＝5.5Hz,2H),4.13-4.08(m,1H),3.75-3.68(m,1H),3.31-3.24(m,1H),2.25-2.16(m,1H),2.13-2.06(m,2H),1.95-1.86(m,3H),1.72-1.65(m,2H)。
实施例248(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺248
步骤1：(S)-(6-(4-((1-氨基-1-氧代丙-2-基)氧基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
遵循与实施例204步骤9-12类似的操作由(6-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例214步骤3)(826mg,1.60mmol)制备标题化合物(42mg,5％产率,历经四步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝524。
步骤2：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺
将(S)-(6-(4-((1-氨基-1-氧代丙-2-基)氧基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(45.0mg,0.086mmol)和TFA(0.3mL)于DCM中的混合物在室温搅拌30min。真空蒸发所得混合物。粗产物通过手性HPLC纯化，得到11.5mg(32％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝3.50,[M+H]+＝424,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.02(d,J＝1.6Hz,1H),7.76(s,2H),7.63-7.39(m,3H),7.28(s,1H),6.92(d,J＝2.2Hz,1H),6.60(d,J＝2.1Hz,1H),4.63(d,J＝6.7Hz,1H),4.41(m,2H),4.33-4.17(m,2H),2.15(d,J＝7.2Hz,2H),1.68(d,J＝9.4Hz,2H),1.46(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例249(S)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺249
步骤1：5-溴-7-氟苯并[d]噁唑-2-胺
向2-氨基-4-溴-6-氟苯酚(18.0g,87.4mmol)于甲醇(180mL)中的溶液中添加溴化氰(18.4g,174mmol)。将反应混合物在35℃加热16h，然后冷却至室温。所得混合物用碳酸钠水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：20-70％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到18g(89％)标题化合物，其为棕色固体。
LCMS(ESI):[M+H]+＝231/233。
步骤2：7-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺
在氮气气氛下将5-溴-7-氟苯并[d]噁唑-2-胺(5.85g,25.3mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(7.84g,30.9mmol)、乙酸钾(7.80g,79.5mmol)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(1.92g,2.62mmol)混悬于DMF(100mL)中并将反应混合物在100℃搅拌3h。将所得混合物在乙酸乙酯和蒸馏水之间分配。有机层用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：30-70％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到3.5g(50％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝279。
步骤3：5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-7-氟苯并[d]噁唑-2-胺
向4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(实施例204步骤6)(320mg,0.814mmol)、7-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(279mg,1.00mmol)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(124mg,0.169mmol)于四氢呋喃(9.00mL)中的溶液中添加2N碳酸钠水溶液(1.60mL,3.20mmol)。将反应混合物在80℃搅拌5h。将所得混合物在DCM和水之间分配且水层再用DCM萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空蒸发。粗残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：2-10％甲醇/DCM)纯化，得到150mg(44.3％产率)标题化合物，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝417/419。
步骤4：7-氟-5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺
在氮气气氛下将5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-7-氟苯并[d]噁唑-2-胺(300mg,0.719mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(389mg,1.53mmol)、乙酸钾(253mg,2.58mmol)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(107mg,0.146mmol)混悬于1,4-二噁烷(12mL)并将反应混合物在100℃搅拌16h。使所得混合物冷却至室温并在DCM和蒸馏水之间分配。有机层用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：2-10％甲醇/DCM)纯化，得到490mg(73.5％产率)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝465。
步骤5：1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇
反应容器装有7-氟-5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺、乙酸(4.00mL)和水(4.00mL)。添加过氧化氢(30％,2mL)并将反应混合物在室温搅拌1h。所得混合物用亚硫酸氢钠水溶液淬灭并真空蒸发溶剂。残余物经由反相硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-100％甲醇/水)纯化，得到345mg(63.0％)标题化合物，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝355。
步骤6：(S)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酸甲酯
遵循与实施例204步骤11类似的操作由1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇(1.00g,2.82mmol)和(R)-2-(甲苯磺酰基氧基)丙酸甲酯(1.09g,4.22mmol)制备标题化合物(900mg,72.0％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝441。
步骤7：遵循与实施例204步骤12类似的操作由(S)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酸甲酯制备249(322mg,37.0％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝1.03,[M+H]+＝426,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.89(s,2H),7.55(s,1H),7.29-7.19(m,3H),6.93(d,J＝2.1Hz,1H),6.60(d,J＝2.1Hz,1H),4.68-4.55(s,1H),4.40-4.36(m,2H),4.26-4.23(m,2H),2.10(s,2H),1.68(s,2H),1.45(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例250(S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺250
遵循与实施例104和204类似的操作制备250。LCMS(ESI):RT(min)＝1.23,[M+H]+＝433,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(s,2H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.43(d,J＝1.2Hz,1H),7.38(s,1H),7.28-7.26(m,1H),7.07(s,1H),6.45(d,J＝2.0Hz,1H),6.23(d,J＝1.6Hz,1H),4.36-4.33(m,2H),4.24-4.21(m,2H),3.87-3.84(m,1H),3.62-3.58(m,1H),3.31-3.19(m,1H),2.24-2.20(m,1H),2.14-2.06(m,2H),2.03-1.95(m,3H),1.71-1.69(m,2H)。
实施例251和252(R)-2-(((R)-2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氧基)丙酰胺251和(S)-2-(((R)-2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氧基)丙酰胺252
步骤1：(R)-5-(4-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例162步骤1类似的操作由(R)-5-(7-溴-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(251mg,0.65mmol)制备标题化合物(282mg,100％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝433。
步骤2：(R)-2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-醇
反应容器装有(R)-5-(4-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(282mg,0.65mmol)和THF(5.0mL)。添加过氧化氢(30％,222μL)并将反应混合物在室温搅拌6.5h。将混合物直接加载到SCX-2柱上，用甲醇洗涤，用2N氨/甲醇洗脱。真空蒸发含有标题化合物的级分。残余物经由快速色谱(溶剂梯度：0-5％甲醇/乙酸乙酯)进一步纯化，得到96mg(46％)标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝323。
步骤3：(S)-2-(((R)-2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氧基)丙酸甲酯
反应容器装有(R)-2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-醇(96mg,0.30mmol)、(R)-2-甲烷磺酰基氧基丙酸甲酯(65.1mg,1.20mmol)、碳酸钾(53.5mg,0.39mmol)和DMSO(2.0mL)。将反应混合物在35℃加热24h。然后将所得混合物冷却至室温并再添加(R)-2-甲烷磺酰基氧基丙酸甲酯(65.1mg,1.20mmol)和碳酸钾(53.5mg,0.39mmol)。将反应混合物在35℃再加热24h。使所得混合物冷却至室温并在乙酸乙酯和蒸馏水之间分配。有机层用硫酸镁干燥并真空浓缩，得到122mg标题化合物(未确定ee)。LCMS(ESI):[M+H]+＝409。
步骤4：(R)-2-(((R)-2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氧基)丙酰胺和(S)-2-(((R)-2-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氧基)丙酰胺
反应容器装有(S)-2-[(R)-2-(2-氨基苯并噁唑-5-基)-4-甲基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基氧基]丙酸甲酯(122mg,0.3mmol)和7N氨/甲醇(10mL)。将反应混合物在室温搅拌24h。真空浓缩所得混合物并用DCM研磨。过滤固体，得到标题化合物的混合物40mg(34％,31％de)。真空浓缩滤液且残余物经由快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/乙酸乙酯)纯化，得到标题化合物的混合物30mg(26％,88％de)。将上述所过滤的固体和由快速色谱回收的物质合并且通过手性SFC拆分，得到标题化合物。
251(次要的立体异构体)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.37,[M+H]+＝394,方法＝A；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.71(d,J＝1.5Hz,1H),7.59(br s,2H),7.56(dd,J＝8.2Hz,1H),7.49(d,J＝8.2Hz,1H),7.48(br s,1H),7.22(br s,1H),6.75(d,J＝1.8Hz,1H),6.43(d,J＝1.8Hz,1H),4.69(dd,J＝12.7,2.6Hz,1H),4.61(q,J＝6.5Hz,1H),4.48-4.39(m,1H),4.28(dd,J＝12.7,9.2Hz,1H),1.50(d,J＝6.3Hz,3H),1.44(d,J＝6.5Hz,3H)。
252(主要的立体异构体)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.32,[M+H]+＝394,方法＝A；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.71(d,J＝1.5Hz,1H),7.59(br s,2H),7.56(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),7.48(s,1H),7.22(s,1H),6.75(d,J＝1.7Hz,1H),6.42(d,J＝1.7Hz,1H),4.70(dd,J＝12.5,3.0Hz,1H),4.60(q,J＝6.0Hz,1H),4.49-4.40(m,1H),4.27(dd,J＝12.5,9.0Hz,1H),1.50(d,J＝6.0Hz,3H),1.44(d,J＝6.0Hz,3H)。
实施例253 5-(4-溴-8,9-二氢氧杂
并[4,3,2-cd]吲唑-1(7H)-基)苯并[d]噁唑-2-胺253
步骤1：5-溴-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例242步骤2类似的操作由5-溴苯并[d]噁唑-2-胺(3.10g,14.5mmol)制备标题化合物(3.07g,47％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝453/455。
步骤2：N,N-二(4-甲氧基苄基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例204步骤7类似的操作由5-溴-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噁唑-2-胺(1.02g,2.25mmol)制备标题化合物(1.06g,94％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝501。
步骤3：4-溴-2,7,8,9-四氢氧杂
并[4,3,2-cd]吲唑
将8-溴-6-氟-3,4-二氢苯并[b]氧杂
-5(2H)-酮和6-溴-8-氟-3,4-二氢苯并[b]氧杂
-5(2H)-酮(实施例213步骤3)(500mg,1.93mmol)和肼(8mL,80％)于乙二醇二甲醚(7.00mL,72.3mmol)中的混合物在微波照射下在120℃加热90min。另外重复该反应五次。将五批反应混合物合并，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到1.40g(55％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝253/255。
步骤4：5-(4-溴-8,9-二氢氧杂
并[4,3,2-cd]吲唑-1(7H)-基)-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噁唑-2-胺和5-(4-溴-8,9-二氢氧杂
并[4,3,2-cd]吲唑-2(7H)-基)-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噁唑-2-胺
将4-溴-2,7,8,9-四氢氧杂
并[4,3,2-cd]吲唑(312mg,1.23mmol)、N,N-二(4-甲氧基苄基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(720mg,1.43mmol)、乙酸铜(II)(152mg,0.840mmol)和
分子筛(100mg)于吡啶(15.0mL)中的混合物用氧气脱气。将反应混合物在90℃加热16h。将混合物冷却至室温，然后过滤。真空蒸发滤液。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到两种标题化合物的混合物(620mg)，其为黄色固体且未经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):[M+H]+＝625/627。
步骤8：将5-(4-溴-8,9-二氢氧杂
并[4,3,2-cd]吲唑-1(7H)-基)-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噁唑-2-胺和5-(4-溴-8,9-二氢氧杂
并[4,3,2-cd]吲唑-2(7H)-基)-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噁唑-2-胺(620mg,0.990mmol)于TFA(20mL)中的混合物在80℃加热24h。反应混合物用水稀释。水层用碳酸氢钠水溶液调节至约pH 8。混合物用DCM萃取，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。所得残余物经由反相HPLC纯化并冻干，得到253，其为次要的区域异构体(2.5mg,1％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝1.83,[M+H]+＝385/387,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.69(s,2H),7.52(d,J＝8.4Hz,1H),7.46(d,J＝2.1Hz,1H),7.39(d,J＝1.2Hz,1H),7.25-7.21(m,1H),6.51(d,J＝1.5Hz,1H),4.44-4.41(m,2H),3.14-3.09(m,2H),2.30-2.10(m,2H)。
实施例254(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)(甲基)氨基)丙酰胺254
遵循与实施例104类似的操作制备254。LCMS(ESI):RT(min)＝1.21,[M+H]+＝421,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.59(s,2H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.43(d,J＝1.5Hz,1H),7.36(s,1H),7.28-7.25(m,1H),7.08(s,1H),6.78(d,J＝1.8Hz,1H),6.57(d,J＝2.1Hz,1H),4.37-4.21(m,5H),2.80(s,3H)2.18-2.02(m,2H),1.76-1.64(m,2H),1.22(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例255(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)(甲基)氨基)丙酰胺255
遵循与实施例214类似的操作制备255。LCMS(ESI):RT(min)＝3.50,[M+H]+＝437,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.00(s,1H),7.74(s,2H),7.52-7.44(m,2H),7.38(s,1H),7.09(s,1H),6.76(s,1H),6.56(s,1H),4.37-4.23(m,5H),2.79(s,3H),2.23-2.15(m,2H),1.80-1.60(m,2H),1.22(d,J＝6.7Hz,3H)。
实施例256和257：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丁酰胺256和(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丁酰胺257。
向1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-醇(实施例162步骤2)(178mg,0.552mmol)和碳酸钾(305mg,2.21mmol)于丙酮(2.7mL)中的混悬液中添加2-溴丁酰胺(145mg,0.828mmol)。在氮气下将反应物密封于小瓶中并加热至60℃。搅拌1h后，将温度升高至70℃并将反应物搅拌过夜。18h后，反应物用甲醇稀释并过滤。真空蒸发滤液且粗产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-20％甲醇/DCM)纯化，接着进行手性SFC分离，得到两种标题化合物，其各自为单一的未知的立体异构体。
256(8.5mg)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.82,[M+H]+＝408.1,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59-7.52(m,3H),7.53-7.42(m,2H),7.36(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),7.22(d,J＝2.1Hz,1H),6.78(d,J＝2.2Hz,1H),6.44(d,J＝2.2Hz,1H),4.45-4.35(m,3H),4.26(t,J＝5.5Hz,2H),2.33-2.26(m,2H),1.88-1.76(m,2H),0.98(t,J＝7.3Hz,3H)。
257(7.2mg)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.83,[M+H]+＝408.1,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59-7.52(m,3H),7.52-7.42(m,2H),7.36(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),7.22(d,J＝2.1Hz,1H),6.79(d,J＝2.3Hz,1H),6.44(d,J＝2.1Hz,1H),4.45-4.35(m,3H),4.26(t,J＝5.6Hz,2H),2.33-2.24(m,2H),1.88-1.76(m,2H),0.98(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例258(S)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酰胺258
步骤1：5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-7-氟苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例205步骤1类似的操作由5-溴-7-氟苯并噁唑-2-基胺(1.38g,5.97mmol)制备标题化合物(456mg,19％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝404/406。
步骤2：7-氟-5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例162步骤1类似的操作由5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)-7-氟苯并[d]噁唑-2-胺(456mg,1.13mmol)制备标题化合物(509mg,定量产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝451。
步骤3：1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-醇
遵循与实施例251和252步骤2类似的操作由7-氟-5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺(509mg,1.13mmol)制备标题化合物(161mg,41％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝451。
步骤4：(S)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酸甲酯
遵循与实施例251和252步骤3类似的操作由1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-醇(161mg,0.47mmol)制备标题化合物(202mg,100％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝427。
步骤5：遵循与实施例251和252步骤4类似的操作由(S)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酸甲酯(202mg,0.47mmol)制备258(31.8mg,27％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.45,[M+H]+＝412,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.86(br s,2H),7.47(s,1H),7.43(d,J＝1.4,1H),7.32(dd,J＝10.7,1.4Hz,1H),7.21(s,1H),6.78(d,J＝2.1Hz,1H),6.44(d,J＝2.1Hz,1H),4.60(q,J＝6.5Hz,1H),4.42-4.36(m,2H),4.32-4.26(m,2H),2.34-2.25(m,2H),1.44(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例259和260(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺259和(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺260
步骤1：2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)-2-环丙基乙酸甲酯
向1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-醇(0.5895mmol,190mg)和碳酸钾(3.537mmol,488.9mg)于丙酮(3mL)中混悬液中添加2-溴-2-环丙基乙酸乙酯(0.728mmol,157mg)。在氮气下将反应物密封于小瓶中并加热至70℃。2h后，再添加3当量碳酸钾和0.5当量2-溴-2-环丙基乙酸乙酯并将反应混合物在40℃加热过夜。然后向反应物中添加3.0mL DMF和70mg 2-溴-2-环丙基乙酸乙酯并将反应混合物在35℃加热3天。将反应混合物在硅藻土上蒸发且粗产物经由硅胶快速色谱(12g硅胶，溶剂梯度：0-5％甲醇/DCM)纯化，得到42.4mg(17％)标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝435；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.56(s,1H),7.54(d,J＝1.7Hz,1H),7.48(d,J＝8.2Hz,1H),7.35(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),6.67(d,J＝2.3Hz,1H),6.38(d,J＝2.3Hz,1H),4.45-4.35(m,2H),4.31-4.22(m,3H),3.67(s,3H),2.28(t,J＝6.0Hz,2H),1.35-1.26(m,1H),0.68-0.50(m,4H)。
步骤2：(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺和(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺
将2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)-2-环丙基乙酸甲酯(42mg,0.10mmol)和氨(7M于甲醇中的溶液,3.0mL,21mmol)的混合物在密封管中在50℃加热48h。然后真空蒸发反应混合物并通过反相HPLC纯化并通过手性SFC拆分，得到标题化合物，其各自为单一的未知的立体异构体。
259(9.7mg)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.839,[M+H]+＝420.1,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.56(s,2H),7.54(d,J＝1.7Hz,1H),7.50-7.44(m,2H),7.35(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),7.17(s,1H),6.73(d,J＝2.3Hz,1H),6.41(d,J＝2.3Hz,1H),4.44-4.34(m,2H),4.31-4.21(m,2H),3.93(d,J＝8.0Hz,1H),2.36-2.19(m,2H),1.33-1.20(m,1H),0.62-0.52(m,3H),0.48-0.38(m,1H)。
260(9.5mg)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.849,[M+H]+＝420.1,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.56(s,2H),7.54(d,J＝1.7,1H),7.50-7.45(m,2H),7.35(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),7.17(d,J＝2.0Hz,1H),6.73(d,J＝2.3Hz,1H),6.41(d,J＝2.3Hz,1H),4.44-4.34(m,2H),4.30-4.19(m,2H),3.93(d,J＝8.0Hz,1H),2.33-2.22(m,2H),1.32-1.20(m,1H),0.63-0.52(m,3H),0.49-0.39(m,1H)。
实施例261(S)-2-((1-(2-氨基-4,7-二氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺261
步骤1：4-溴-3,6-二氟-2-硝基苯酚
将4-溴-2,5-二氟-苯酚(21.09g,100.9mmol)于乙酸(50.0mL,872mmol)中的溶液在冰浴中冷却。添加硝酸(6.00mL,120mmol)并将反应混合物在室温搅拌。3h后，将反应混合物转移至具有500mL EtOAc和250mL水的分液漏斗。分离有机相，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(330g硅胶，溶剂梯度：0-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到11.43g(44％)标题化合物。LCMS(ESI):[M-H]-＝252；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.03(dd,J＝10.4,6.6Hz,1H)。
步骤2：2-氨基-4-溴-3,6-二氟苯酚
将4-溴-3,6-二氟-2-硝基苯酚(11.43g,45.00mmol)、铁粉(325目)(13.03g,226.3mmol)、氯化铵(9.68g,181mmol)、乙醇(25mL)和水(25mL)的混合物在60℃加热1h。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(300mL)和水(200mL)稀释并通过硅藻土过滤。添加盐水(100mL)并分离各层。有机层用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(125g硅胶，溶剂梯度：0-40％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到5.92g(59％)标题化合物，其为桃色固体。
LCMS(ESI):[M+H]+＝224；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.71(s,1H),6.72(dd,J＝9.9,6.2Hz,1H),5.12(s,2H)。
步骤3：5-溴-4,7-二氟苯并[d]噁唑-2-胺
将2-氨基-4-溴-3,6-二氟苯酚(5.92g,26.4mmol)、甲醇(30.0mL,)和溴化氰(8.40g,79.3mmol)的混合物在35℃加热15h。减压蒸发反应混合物以除去大部分溶剂，然后在200mL DCM和150mL饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。水层再用3×150mL DCM萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(80g硅胶，溶剂梯度：0-20％乙酸乙酯/DCM)纯化，得到4.43g(67％)标题化合物，其为桃色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝249；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06(s,2H),7.34(dd,J＝9.3,4.9Hz,1H)。
步骤4：4,7-二氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺
200mL烧瓶装有5-溴-4,7-二氟苯并[d]噁唑-2-胺(4.43g,17.8mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(163mg,0.178mmol)、2-(二环己基膦基)-2’,4’,6’-三异丙基联苯(342mg,0.703mmol)、二(频哪醇合)二硼(9.30g,36.6mmol)和乙酸钾(5.48g,55.8mmol)。将烧瓶抽空并用氮气回填两次。然后通过注射器添加1,4-二噁烷(75mL)。将混合物在100℃在氮气气氛下加热2h。将反应混合物在硅藻土上蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(80g硅胶，溶剂梯度：20-60％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到4.31g(82％)标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝297.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.89(s,2H),6.99(dd,J＝9.8,3.3Hz,1H),1.17(s,12H)。
步骤5：5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-4,7-二氟苯并[d]噁唑-2-胺
将装有4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(1.046g,2.66mmol)、4,7-二氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(887mg,3.00mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)二氯甲烷复合物(1:1)(444mg,0.54mmol)和碳酸钠(592mg,5.53mmol)的100mL烧瓶抽空并用氮气回填。添加DMF(10mL)和水(1mL)，然后将烧瓶在氮气气囊下在90℃加热7h。向反应物中添加4,7-二氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(309mg)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)二氯甲烷复合物(1:1)(201mg,1.04mmol)和2M碳酸钠水溶液(1.5mL,3.0mmol)并将反应混合物在80℃加热过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土过滤，用水和盐水洗涤并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(40g硅胶，溶剂梯度：0-100％乙酸乙酯/DCM)纯化，得到0.44g(38％)标题化合物。
LCMS(ESI):[M+H]+＝434.9；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10(s,2H),7.70(d,J＝1.7Hz,1H),7.19(dd,J＝9.8,4.7Hz,1H),7.14(d,J＝1.7Hz,1H),4.28(t,J＝5.5Hz,4H),2.03-1.94(m,2H),1.69-1.58(m,2H)。
步骤6：4,7-二氟-5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例162步骤1类似的操作由5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-4,7-二氟苯并[d]噁唑-2-胺制备标题化合物(256mg,52％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝483.1。
步骤7：1-(2-氨基-4,7-二氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇
遵循实施例162步骤2类似的操作由4,7-二氟-5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噁唑-2-胺制备标题化合物(47.9mg,58％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝372.95；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.17(s,1H),8.06(s,2H),7.13(dd,J＝9.8,4.7Hz,1H),6.77(d,J＝2.1Hz,1H),6.44(d,J＝2.1Hz,1H),4.20(t,J＝5.6Hz,4H),2.00-1.90(m,2H),1.67-1.57(m,2H)。
步骤8：(S)-2-((1-(2-氨基-4,7-二氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酸甲酯
遵循与实施例162步骤3类似的操作由1-(2-氨基-4,7-二氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇制备标题化合物(36.1mg,22％)。LCMS(ESI):[M+H]+＝459.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.08(s,2H),7.15(dd,J＝9.8,4.6Hz,1H),6.90(d,J＝2.2Hz,1H),6.61(d,J＝2.2Hz,1H),5.00(q,J＝6.7Hz,1H),4.28-4.20(m,4H),3.70(s,3H),2.01-1.94(m,2H),1.68-1.61(m,2H),1.53(d,J＝6.7Hz,3H)。
步骤9：将(S)-2-((1-(2-氨基-4,7-二氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酸甲酯(36mg,0.07853mmol)和氨(7M于甲醇中的溶液)(3.0mL,21mmol)的混合物在密封管中在室温搅拌21h。真空蒸发反应混合物且粗产物经由反相HPLC纯化，接着通过手性SFC纯化以除去次要的差向异构体，得到20.7mg(58％)261。LCMS(ESI):RT(min)＝3.22,[M+H]+＝444.1,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.08(s,2H),7.53(s,1H),7.23(s,1H),7.15(dd,J＝9.8,4.7Hz,1H),6.94(d,J＝2.2Hz,1H),6.64(d,J＝2.1Hz,1H),4.63(q,J＝6.6Hz,1H),4.30-4.15(m,4H),2.03-1.90(m,2H),1.71-1.59(m,2H),1.45(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例262(S)-4-(1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)吗啉-3-甲酰胺262
步骤1：(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
将装有2-氨基-6-溴苯并噻唑(2.52g,10.77mmol)、二(频哪醇合)二硼(5.45g,21.24mmol)、乙酸钾(3.28g,33.09mmol)、2-(二环己基膦基)-2’,4’,6’-三异丙基联苯(212.2mg,0.436mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯氯仿复合物(117.9mg,0.110mmol)的100mL烧瓶抽空并用氮气回填。添加1,4-二噁烷(20.0mL,233mmol)并将反应混合物在氮气气囊下在100℃搅拌1h。然后向反应物中添加[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)DCM复合物(1:1)(285.9mg,0.350mmol)。再过17h后，将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯淋洗，然后在硅藻土上蒸发至干。粗产物经由硅胶快速色谱(80g硅胶，溶剂梯度：0-100％乙酸异丙酯/庚烷)纯化，得到2.85g。将2.64g该物质与一缩二碳酸二叔丁酯(2.58g,11.45mmol)、4-二甲基氨基吡啶(79.9mg,0.654mmol)和DCM(20.0mL,312mmol)合并且在室温搅拌2h。真空蒸发混合物且粗产物经由硅胶快速色谱(40g硅胶，溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到2.24g标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝377。
步骤2：(6-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
将4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(1.0323g,2.6266mmol)、(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.031g,3.239mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)DCM复合物(1:1)(324.8mg,0.3977mmol)、碳酸钠(847.5mg,7.92mmol)、水(3.0mL,170mmol)和THF(9.0mL,110mmol)的混合物在密封容器中在氮气下在80℃加热20h。通过鼓泡经过氮气10分钟将反应混合物脱气，再添加[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)DCM复合物(1:1)(523mg)并将混合物在80℃加热6h。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，过滤，用水和盐水洗涤并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(40g硅胶，溶剂梯度：0-100％乙酸乙酯/二氯甲烷)纯化，得到0.4242g(31％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝514.95；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.94(s,1H),8.32(d,J＝1.2Hz,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(dd,J＝8.3,1.7Hz,1H),7.69-7.64(m,1H),7.12-7.06(m,1H),4.52-4.41(m,2H),4.36-4.26(m,2H),2.24-2.11(m,2H),1.78-1.63(m,2H),1.53(s,9H)。
步骤3：(S)-(6-(4-(3-氨甲酰基吗啉代)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
遵循与实施例104步骤1-2类似的操作由(6-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝565.1。
步骤4：向(S)-(6-(4-(3-氨甲酰基吗啉代)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.2072mmol,0.2072mmol)于DCM(3.0mL,47mmol)中的溶液中添加氯化氢(4.0mol/L于二噁烷中,0.50mL,2.0mmol)和甲醇(0.5mL)。将反应混合物在室温搅拌3h，然后在35℃加热过夜，接着在50℃再加热4h。真空蒸发反应混合物且粗产物通过反相HPLC和非手性SFC纯化，得到6.3mg(6％)262。LCMS(ESI):RT(min)＝2.74,[M+H]+＝465.1,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.98(d,J＝1.7Hz,1H),7.70(s,2H),7.51(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H),7.45(d,J＝8.3Hz,1H),7.19(d,J＝1.9Hz,1H),7.02(s,1H),6.84(d,J＝2.1Hz,1H),6.60(d,J＝2.1Hz,1H),4.37(t,J＝6.1Hz,2H),4.22(t,J＝5.4Hz,2H),4.11-3.98(m,2H),3.92-3.79(m,2H),3.70-3.53(m,2H),3.21-3.15(m,1H),2.19-2.08(m,2H),1.75-1.65(m,2H)。
实施例263(R)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酰胺263
经由手性SFC将263分离成在制备实施例258的过程中生成的次要差向异构体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.44,[M+H]+＝412,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.86(br s,2H),7.47(s,1H),7.43(d,J＝1.4,1H),7.32(dd,J＝10.7,1.4Hz,1H),7.21(s,1H),6.78(d,J＝2.1Hz,1H),6.44(d,J＝2.1Hz,1H),4.60(q,J＝6.5Hz,1H),4.42-4.36(m,2H),4.32-4.26(m,2H),2.34-2.25(m,2H),1.44(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例264(S)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)(甲基)氨基)丙酰胺264
遵循与实施例104类似的操作由5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-7-氟苯并[d]噁唑-2-胺(实施例249步骤3)(1.00g,2.40mmol)制备264(99.5mg,9.4％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝3.50,[M+H]+＝439,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.86(s,2H),7.36(s,1H),7.29(s,1H),7.19(d,J＝10.8Hz,1H),7.06(s,1H),6.83(s,1H),6.59(s,1H),4.36-4.23(m,5H),2.79(s,3H),2.20-2.02(m,2H),1.80-1.55(m,2H),1.22(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例265(S)-2-((1-(2-氨基噻唑并[5,4-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺265
步骤1：5-溴噻唑并[5,4-b]吡啶-2-胺
在室温向6-溴吡啶-3-胺(20.0g,115mmol)和硫氰酸钾(56.0g,576mmol)于乙酸(250mL)中的混悬液中逐滴添加溴(23.88g,149mmol)于乙酸(100mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌15h。滤出固体，然后所得溶液用乙酸乙酯萃取且合并有机层且用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发滤液。粗产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到18g(68％)标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝230/232。
步骤2：5-溴噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯
向5-溴噻唑并[5,4-b]吡啶-2-胺(15.0g,65.1mmol)于DCM(300mL)中的混悬液中添加一缩二碳酸二叔丁酯(21.0g,96.2mmol)和4-二甲基氨基吡啶(8g,65.5mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到13g(60％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝330/332。
步骤3：2-(叔丁氧基羰基氨基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸甲酯
将5-溴噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯(14.0g,42.4mmol)、碳酸钾(17g,123mmol)、乙酸钯(II)(2.80g,12.5mmol)和[3-(二苯基膦基)丙基]二苯基膦(4.2g,10.1mmol)于甲醇(300mL)和DMF(150mL)中的混合物用一氧化碳气体饱和并在60℃搅拌6h。将所得混合物冷却至室温并真空蒸发。将残余物在乙酸乙酯和水之间分配，然后通过硅藻土过滤。水层用乙酸乙酯萃取且合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-5％甲醇/DCM)纯化，得到8g(61％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝310。
步骤4：2-(叔丁氧基羰基氨基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸
向2-(叔丁氧基羰基氨基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸甲酯(8.00g,25.8mmol)于THF(100mL)中的混悬液中添加氢氧化锂(1N水溶液,140mL,133mmol)并将混合物在室温搅拌4h。用氯化氢调节溶液的pH值至6。蒸发溶剂且粗产物未经进一步纯化即直接用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝296。
步骤5：(5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
遵循与实施例125步骤1-2类似的操作由9-溴-3,4,5,6-四氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂氮杂环辛烯-7-胺(实施例204步骤4)(2.3g,8.94mmol)和2-(叔丁氧基羰基氨基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸(3.40g,11.5mmol)制备标题化合物(3.1g,67.4％产率,历经两步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝516/518。
步骤6：(5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在氮气气氛下将(5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(3.00g,5.81mmol,)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(1.80g,7.09mmol)、乙酸钾(1.80g,18.3mmol)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(700mg,0.957mmol)混悬于DMF(100mL)并将反应物在90℃加热16h。将所得混合物冷却至室温并用水稀释。混合物用DCM萃取，用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到1.3g(40％)标题化合物，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝564。
步骤7：(5-(4-羟基-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向(5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.30g,2.31mmol)于乙酸(10mL)和水(10mL)中的溶液中添加过氧化氢(5mL,30％水溶液)并将反应混合物在室温搅拌2h。所得混合物通过添加亚硫酸氢钠淬灭。通过过滤收集固体并真空干燥，得到粗产物，其未经进一步纯化即直接用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝454。
步骤8：1-(2-氨基噻唑并[5,4-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇
将(5-(4-羟基-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(900mg,1.99mmol)溶于盐酸(20mL,4M于二噁烷中的溶液)并在室温搅拌2h，然后真空蒸发溶剂。收集固体且未经进一步纯化即直接用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝354。
步骤9：(S)-2-((1-(2-氨基噻唑并[5,4-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酸甲酯
反应容器装有1-(2-氨基噻唑并[5,4-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇(900mg,2.55mmol)、(S)-2-(甲苯磺酰基氧基)丙酸甲酯(1.00g,3.88mmol l)、碳酸钾(1.20g,8.68mmol)和DMSO(15mL)。将反应混合物在40℃加热20h。使所得混合物冷却至室温并在DCM和水之间分配。有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到150mg(13％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝440。
步骤10：反应容器装有(S)-2-((1-(2-氨基噻唑并[5,4-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酸甲酯(180mg,0.410mmol)和7N氨/甲醇(10mL)。将反应混合物在室温搅拌6h。真空浓缩所得混合物。粗产物经由手性SFC纯化，得到34.2mg(20％)265，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.20,[M+H]+＝425,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11-8.06(m,3H),7.76-7.73(m,1H),7.54(s,1H),7.25(s,1H),6.92-6.91(m,1H),6.59-6.58(m,1H),4.95-4.91(m,2H),4.65-4.58(m,1H),4.26-4.22(m,2H),2.14-2.12(m,2H),1.59(s,2H),1.45-1.43(m,3H)。
实施例266(S)-2-((1-(2-氨基噁唑并[4,5-b]吡啶-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酰胺266
步骤1：5-溴噁唑并[4,5-b]吡啶-2-胺
遵循与实施例235步骤1类似的操作由2-氨基-6-溴吡啶-3-醇(2.0g,10.6mmol)制备标题化合物(1.45g,64％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝214/216。
步骤2：(5-溴噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向5-溴噁唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(1.10g,5.12mmol)于DCM(20mL)中的混悬液中添加三乙胺(2.14mL,15.4mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(2.46g,11.3mmol)，接着添加催化用4-二甲基氨基吡啶并将反应混合物在室温搅拌16h。所得混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发，得到2.24g(66％)标题化合物，其为黄色固体。粗残余物未经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):[M+Na]+＝336/338。
步骤3：2-((叔丁氧基羰基)氨基)噁唑并[4,5-b]吡啶-5-甲酸甲酯
将(5-溴噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.00g,6.37mmol)、三乙胺(30mL,23.4mmol)、乙酸钯(II)(71.4mg,0.32mmol)和Xantphos(195mg,0.34mmol)于甲醇(10mL)中的混合物用氩气充分脱气。该所得混合物在搅拌下用一氧化碳气体饱和10min并将反应混合物在65℃加热24h。将所得混合物冷却至室温并真空蒸发。将残余物在乙酸乙酯和水之间分配，然后通过硅藻土过滤。水层用乙酸乙酯洗涤且合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-5％甲醇/DCM)纯化，得到650mg(35％)标题化合物，其为淡红色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝294。
步骤4：2-((叔丁氧基羰基)氨基)噁唑并[4,5-b]吡啶-5-甲酸
向2-((叔丁氧基羰基)氨基)噁唑并[4,5-b]吡啶-5-甲酸甲酯(650mg,2.22mmol)于THF(10mL)中的混悬液中添加氢氧化锂(1N水溶液,2.5mL,2.50mmol)并将混合物在室温搅拌16h。再添加氢氧化锂(1N水溶液,1.7mL,1.70mmol)并将反应混合物再搅拌30min。蒸发溶剂且粗产物未经进一步纯化即直接用于下一步。LCMS(ESI):[M+Na]+＝302。
步骤5：(5-((8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)氨甲酰基)噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向2-((叔丁氧基羰基)氨基)噁唑并[4,5-b]吡啶-5-甲酸(614mg,2.22mmol)于DMF(10mL)中的溶液中先后添加DIPEA(0.77mL,4.40mmol)和HATU(1.25g,3.30mmol)。将所得混合物在室温搅拌5min，然后添加8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-胺(534mg,2.20mmol)并将反应混合物在室温搅拌1.5h。将所得混合物在乙酸乙酯和水之间分配且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。粗残余物未经进一步纯化即直接用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝504/506。
步骤6：5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)噁唑并[4,5-b]吡啶-2-胺
将(5-((8-溴-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂
-6-基)氨甲酰基)噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(粗品,推定为2.22mmol)溶于乙酸(10mL)并在90℃搅拌2h，然后冷却至室温。减压除去溶剂，将残余物混悬于DCM，然后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。过滤所得析出物并收集固体。滤液的有机相用盐水洗涤并真空除去溶剂。合并所得残余物与所过滤的固体并用DCM研磨，过滤并真空干燥固体，得到622mg(73％,历经3步)标题化合物，其为米色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝386/388。
步骤7：1-(2-氨基噁唑并[4,5-b]吡啶-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-醇
遵循与实施例240步骤1-2类似的操作由5-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)噁唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(282mg,0.73mmol)制备标题化合物(128mg,54％产率,历经2步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝324。
步骤8：遵循与实施例251和252步骤3-4类似的操作由1-(2-氨基噁唑并[4,5-b]吡啶-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-醇(125mg,0.39mmol)制备266(16mg,10％产率,历经2步)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.24,[M+H]+＝395,方法＝A；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(s,2H),7.83(d,J＝8.1Hz,1H),7.80(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(s,1H),7.21(s,1H),6.79(d,J＝2.2Hz,1H),6.45(d,J＝2.2Hz,1H),4.75(t,J＝5.5Hz,2H),4.61(q,J＝6.5Hz,1H),4.42-4.37(m,2H),2.37-2.30(m,2H),1.44(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例267和268(R)-2-((1-(4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酰胺267和(S)-2-((1-(4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酰胺268
步骤1：3-(4-溴苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***
将3-(4-溴苯基)-1H-1,2,4-***(5g,22.3mmol)、1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(4.19g,26.8mmol)和碳酸铯(14.6g,44.9mmol)于DMF(100mL)中的混合物在室温搅拌16h。所得溶液用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并有机层且真空浓缩。粗产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-5％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到6g(78％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝344/346。
步骤2：4-溴-1-(4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚
遵循与实施例158步骤2-3类似的操作由4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(实施例204步骤6)(3.46g,8.80mmol)和3-(4-溴苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***(3.64g,9.30mmol)制备标题化合物(2.2g,47％产率,历经两步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝530/532。
步骤3：1-(4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇
在氮气气氛下将4-溴-1-(4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(1.3g,3.31mmol)、2-二叔丁基膦基-2’,4’,6’-三异丙基-1,1’-联苯(150mg,0.353mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(170mg,0.186mmol)和氢氧化钾(270mg,4.81mmol)混悬于1,4-二噁烷(15mL)和水(1.5mL)并将混合物在100℃加热7h。反应***用水稀释并用DCM萃取。有机相用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到760mg(67％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝468。
步骤4：2-((1-(4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酸甲酯
反应容器装有1-(4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇(700mg,1.50mmol)、2-溴丁酸甲酯(400mg,2.21mmol)、碳酸钾(1.20g,8.68mmol)和DMSO(15.0mL)。将反应混合物在室温搅拌1h。将所得混合物在DCM和水之间分配。有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到620mg(73％)标题化合物，其为灰色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝568。
步骤5：2-((1-(4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酰胺
将2-((1-(4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酸甲酯(650mg,1.15mmol)和氨(20mL,7M于甲醇中的溶液)的混合物在室温搅拌48h。真空蒸发所得混合物，得到600mg(粗品)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝553。
步骤6：将2-((1-(4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酰胺(600mg,1.08mmol)于TFA(20mL)中的溶液在90℃加热4h。真空蒸发反应混合物。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到267和268的350mg外消旋混合物，其为黄色固体。通过手性SFC分离两种立体异构体，得到标题化合物，其各自为单一的未知的立体异构体。
267(102.4mg,21％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝1.99,[M+H]+＝433,方法＝C；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.23(s,1H),8.69(s,1H),8.22-8.11(m,2H),7.91-7.80(m,1H),7.53(s,1H),7.27(s,1H),6.96(d,J＝1.8Hz,1H),6.64(d,J＝2.8Hz,1H),4.47-4.41(m,3H),4.28-4.25(m,2H),2.17(s,2H),1.89-1.79(m,2H),1.71(s,2H),1.07-0.98(m,3H)。
268(90.2mg,19％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝1.99,[M+H]+＝433,方法＝C；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.23(s,1H),8.69(s,1H),8.22-8.11(m,2H),7.91-7.80(m,1H),7.53(s,1H),7.27(s,1H),6.96(d,J＝1.8Hz,1H),6.64(d,J＝2.8Hz,1H),4.47-4.41(m,3H),4.28-4.25(m,2H),2.17(s,2H),1.89-1.79(m,2H),1.71(s,2H),1.07-0.98(m,3H)。
实施例269(S)-2-((1-(3-氟-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺269
步骤1：(S)-2-((1-(3-氟-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酸甲酯
遵循与实施例162步骤3类似的操作由1-(3-氟-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇(实施例305步骤7)(1.00g,2.06mmol)制备标题化合物(1.00g,85％产率)。LCMS:[M+H]+＝572。
步骤2：(S)-2-((1-(3-氟-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺
遵循与实施例267步骤5类似的操作由(S)-2-((1-(3-氟-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酸甲酯(800mg,1.40mmol)制备标题化合物(0.5g,64％产率)。LCMS:[M+H]+＝557。
步骤4：遵循与实施例267步骤6类似的操作由(S)-2-((1-(3-氟-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺(900mg,1.61mmol)制备269(165mg,23％产率)。LCMS:RT(min)＝3.50,[M+H]+＝437,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.38(s,1H),8.67-8.43(m,1H),8.31-8.19(m,1H),7.69-7.64(m,3H),7.32-7.26(s,1H),6.96-6.91(m,1H),6.64-6.63(m,1H),4.67-4.61(m,1H),4.45(d,J＝6.3Hz,2H),4.27-4.25(m,2H),2.15-2.14(m,2H),1.69-1.65(m,2H),1.47-1.23(m,3H)。
实施例270(S)-2-((1-(2-氨基-4-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)(甲基)氨基)丙酰胺270
步骤1：1-溴-2-氟-4-甲氧基-3-硝基苯
伴随搅拌向1-氟-3-甲氧基-2-硝基苯(45.0g,0.263mol)于乙酸(300mL)中的溶液中逐滴添加溴(54.0g,0.338mol)。将反应混合物在55℃搅拌17h。真空蒸发所得混合物，得到63.8g(97％)标题化合物，其为黄色固体。
步骤2：3-溴-2-氟-6-甲氧基苯胺
在室温向1-溴-2-氟-4-甲氧基-3-硝基苯(65.5g,0.262mol)和氯化铵(56.7g,1.06mol)于甲醇(720mL)和水(720mL)中的溶液中添加铁粉(44.1g,0.790mol)。将混合物在60℃搅拌2h，然后过滤。真空蒸发溶剂，得到54.1g(94％)标题化合物，其为橙色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝220/222。
步骤3：2-氨基-4-溴-3-氟苯酚
伴随搅拌在0℃向3-溴-2-氟-6-甲氧基苯胺(30.0g,0.136mmol)于DCM(950mL)中的混悬液中逐滴添加三溴化硼(330mL,1M于DCM中的溶液)。将所得溶液在室温搅拌16h，然后通过添加碳酸氢钠水溶液淬灭。水层用DCM萃取且有机部分用硫酸钠干燥并真空蒸发，得到27.5g(98％)标题化合物，其为橙色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝206/208。
步骤4：5-溴-4-氟苯并[d]噁唑-2-胺
向2-氨基-4-溴-3-氟苯酚(22.0g,0.107mol)于甲醇(120mL)中的溶液中添加溴化氰(22.0g,208mol)。将反应混合物在35℃搅拌16h。然后反应物通过添加饱和碳酸氢钠水溶液淬灭。减压除去甲醇。将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配并分离各相。水层再用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：5-33％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到22.3g(90％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝231/233。
步骤5：5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-4-氟苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例204步骤7-8类似的操作由4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(实施例204步骤6)(2.80g,7.12mmol)制备标题化合物(870mg,29％产率,历经两步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝206/208。
步骤6：(S)-2-((1-(2-氨基-4-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)(甲基)氨基)丙酰胺
遵循与实施例264类似的操作由5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-4-氟苯并[d]噁唑-2-胺(500mg,1.20mmol)制备270(75.9mg,14.4％产率,历经两步)。LCMS(ESI):RT(min)＝1.18,[M+H]+＝439,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.81(s,2H),7.40-7.35(m,2H),7.16-7.07(m,2H),6.79(d,J＝2.0Hz,1H),6.20(d,J＝2.0Hz,1H),4.33-4.27(m,1H),4.23-4.17(m,4H),2.81(s,3H),2.00-1.94(m,2H),1.68-1.63(m,2H),1.23(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例271：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酰胺271
步骤1：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酸甲酯
遵循与实施例204类似的操作由1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇和(2R)-2-(对甲苯磺酰基氧基)丁酸甲酯制备标题化合物(27mg,35％)。LCMS(ESI)[M+H]+＝437。
步骤2：遵循与实施例261步骤9类似的操作由(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酸甲酯制备271(12.9mg,12％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝3.03,[M+H]+＝422.2,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.58(s,2H),7.54-7.47(m,2H),7.44(d,J＝1.7Hz,1H),7.31-7.22(m,2H),6.93(d,J＝2.2Hz,1H),6.59(d,J＝2.2Hz,1H),4.43(t,J＝6.1Hz,1H),4.37(t,J＝6.2Hz,2H),4.24(t,J＝5.3Hz,2H),2.16-2.05(m,2H),1.90-1.77(m,2H),1.75-1.65(m,2H),0.99(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例272(S)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酰胺272
遵循与实施例249类似的操作制备272。LCMS(ESI):RT(min)＝1.12,[M+H]+＝440,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.88(s,2H),7.53(s,1H),7.29-7.19(m,3H),6.93(d,J＝1.8Hz,1H),6.61(d,J＝2.1Hz,1H),4.46-4.38(m,3H),4.26-4.23(m,2H),2.10(s,2H),1.88-1.79(m,2H),1.68(s,2H),1.02-0.97(m,3H)。
实施例273(S)-2-((1-(2-氨基-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酰胺273
遵循与实施例242类似的操作制备273。LCMS(ESI):RT(min)＝1.11,[M+H]+＝456,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.97(s,2H),7.84(d,J＝1.5Hz,1H),7.53(s,1H),7.41-7.36(m,1H),7.27(s,1H),6.92(d,J＝2.1Hz,1H),6.60(d,J＝2.1Hz,1H),4.45-4.39(m,3H),4.26-4.23(m,2H),2.20-2.09(m,2H),1.88-1.79(m,2H),1.74-1.61(m,2H),1.01-0.96(m,3H)。
实施例274(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酰胺274
步骤1：(6-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
遵循与实施例261步骤5类似的操作由4-溴-1-碘-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁制备标题化合物(883.9mg,44％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝500.9；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.94(s,1H),8.40(s,1H),7.85-7.80(m,2H),7.46(d,J＝1.8Hz,1H),6.92(d,J＝1.8Hz,1H),4.53-4.42(m,2H),4.42-4.33(m,2H),2.39-2.27(m,2H),1.53(s,9H)。
步骤2：(6-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
遵循与实施例162步骤1类似的操作由(6-(4-溴-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物(491.9mg,51％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝549；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.93(s,1H),8.40(s,1H),7.82(s,2H),7.58(d,J＝0.9Hz,1H),7.03(d,J＝0.9Hz,1H),4.46-4.33(m,4H),2.39-2.29(m,2H),1.31(s,9H),1.07(s,12H)。
步骤3：(6-(4-羟基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
遵循与实施例162步骤2类似的操作由(6-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物(205.5mg,47％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝439。
步骤4：1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-醇
向(6-(4-羟基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(205.5mg,0.42mmol)于DCM(4.0mL,62mmol)中的混悬液中添加甲醇(1.0mL,20mmol)和氯化氢(4.0mol/L于二噁烷中,2.0mL,8.0mmol)。将所得混合物在室温搅拌18h。减压除去溶剂并将所得残余物混悬于含有氯化氢(4.0mol/L于二噁烷中,4.0mL,16.0mmol)的DCM(4.0mL)。将反应混合物在室温搅拌2h，然后真空蒸发且未经纯化即使用，为HCl盐。LCMS(ESI):[M+H]+＝338.95。
步骤5：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酸甲酯
遵循与实施例162步骤3类似的操作由1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-醇制备标题化合物(37.7mg,26％)。LCMS(ESI):[M+H]+＝425.0。
步骤6：遵循与实施例261步骤9类似的操作由(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)氧基)丙酸甲酯制备274(9.8mg,27.5％)。LCMS(ESI):RT(min)＝2.77,[M+H]+＝410.1,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(d,J＝1.7Hz,1H),7.71(s,2H),7.62(dd,J＝8.4,1.8Hz,1H),7.50-7.42(m,2H),7.20(s,1H),6.77(d,J＝2.2Hz,1H),6.42(d,J＝2.2Hz,1H),4.60(q,J＝6.7Hz,1H),4.43-4.35(m,2H),4.30(t,J＝5.3Hz,2H),2.35-2.25(m,2H),1.44(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例275和276(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺275和(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺276
步骤1：5-溴苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酸叔丁酯
遵循与实施例214步骤1类似的操作由5-溴苯并[d]噻唑-2-胺(18.4g,80.3mmol)制备标题化合物(25.1g,94％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝329/331。
步骤2：5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酸叔丁酯
遵循与实施例214步骤2类似的操作由5-溴苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酸叔丁酯(11g,33.4mmol)制备标题化合物(7.1g,56％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝377。
步骤3：(5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
将5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酸叔丁酯(6.00g,15.9mmol)、4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(6.00g,15.2mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(360mg,0.492mmol)、乙酸钾(2M水溶液,35mL,70.0mmol)和碳酸钠(2M水溶液,35mL,70.0mmol)于乙腈(140mL)中的混合物在90℃在氮气气氛下搅拌3h。所得混合物用水稀释并用DCM萃取。有机相用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到6g(73％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝515/517。
步骤4：遵循与实施例265步骤6-10类似的操作且接着进行手性HPLC分离由(5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(3g,5.83mmol)制备275和276，其各自为单一的未知的立体异构体。
275(13.0mg,5.3％产率,历经五步)：LCMS(ESI):RT(min)＝1.95min,[M+H]+＝424,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.85-7.83(m,1H),7.68(s,2H),7.58-7.54(m,2H),7.31-7.25(m,2H),6.93(d,J＝1.5Hz,1H),6.59(d,J＝1.2Hz,1H),4.65-4.60(m,1H),4.41-4.36(m,2H),4.26-4.23(m,2H),2.12-2.11(m,2H),1.69(s,2H),1.46-1.44(m,3H)。
276(16.2mg,6.5％产率,历经五步)：LCMS(ESI):RT(min)＝1.95min,[M+H]+＝424,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.85-7.83(m,1H),7.68(s,2H),7.58-7.54(m,2H),7.31-7.25(m,2H),6.93(d,J＝1.5Hz,1H),6.59(d,J＝1.2Hz,1H),4.65-4.60(m,1H),4.41-4.36(m,2H),4.26-4.23(m,2H),2.12-2.11(m,2H),1.69(s,2H),1.46-1.44(m,3H)。
实施例277和278(S)-2-((1-(2-氨基-5-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺277和(R)-2-((1-(2-氨基-5-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺278
遵循与实施例265类似的操作且接着进行手性SFC分离制备标题化合物，其各自为单一的未知的立体异构体。
277(45.3mg)：LCMS(ESI):RT(min)＝1.14,[M+H]+＝442,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.91-7.87(m,3H),7.54(s,1H),7.34-7.30(d,J＝12Hz,1H),7.25(s,1H),6.93-6.92(m,1H),6.62-6.61(m,1H),4.66-4.64(m,1H),4.22(br s,4H),1.98(s,2H),1.63(s,2H),1.46-1.44(m,3H)。
278(21.7mg)：LCMS(ESI):RT(min)＝1.14,[M+H]+＝442,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.91-7.87(m,3H),7.54(s,1H),7.32(d,J＝12Hz,1H),7.25(s,1H),6.93-6.92(m,1H),6.62-6.61(m,1H),4.66-4.64(m,1H),4.22(br s,4H),1.98(s,2H),1.63(s,2H),1.46-1.44(m,3H)。
实施例279和280(R)-2-((1-(2-氨基-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺279和(S)-2-((1-(2-氨基-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺280
步骤1：2-((1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酸乙酯
将1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇(实施例242步骤4)(800mg,1.31mmol)、2-溴-2-环丙基乙酸乙酯(410mg,1.98mmol)和碳酸钾(730mg,5.28mmol)于DMSO(15mL)中的混合物在35℃搅拌16h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。所得混合物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到600mg(62％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝737。
步骤2：2-((1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺
将2-((1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酸乙酯(520mg,0.706mmol)和氨(7M于甲醇中的溶液,20mL)的混合物在密封管中在55℃搅拌48h。真空蒸发反应混合物，得到480mg(96％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝708。
步骤3：将2-((1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺的外消旋混合物(420mg,0.593mmol)在TFA(10mL)中在80℃搅拌2.5h。反应混合物用水稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液处理以达到约pH 8，然后用DCM萃取。有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。所得混合物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化并通过手性SFC分离两种立体异构体，得到呈灰白色固体形式的279和280，其各自为单一的未知的立体异构体。
279(62mg,22％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝1.11,[M+H]+＝468,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.97(s,2H),7.84(d,J＝1.5Hz,1H),7.54(s,1H),7.40-7.36(m,1H),7.23(s,1H),6.86(d,J＝2.1Hz,1H),6.57(d,J＝2.1Hz,1H),4.42-4.35(m,2H),4.26-4.22(m,2H),3.93(d,J＝8.1Hz,1H),2.22-2.05(m,2H),1.73-1.62(m,2H),1.33-1.28(m,1H),0.59-0.57(m,3H),0.48-0.39(m,1H)。
280(20.7mg,7％产率)LCMS(ESI):RT(min)＝2.07,[M+H]+＝468,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.97(s,2H),7.84(d,J＝1.5Hz,1H),7.54(s,1H),7.40-7.36(m,1H),7.23(s,1H),6.86(d,J＝2.1Hz,1H),6.57(d,J＝2.1Hz,1H),4.50(br,2H),4.24(br,2H),3.95(d,J＝7.8Hz,1H),2.14(br,2H),1.67(br,2H),1.35(br,1H),0.59-0.57(m,3H),0.45-0.44(m,1H)。
实施例281和282：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺281和(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺282
步骤1：1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇
遵循与实施例265步骤6-8类似的操作由(6-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例214步骤3)制备标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝353。
步骤2：2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酸乙酯
遵循与实施例279步骤1类似的操作由1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇和2-溴-2-环丙基乙酸乙酯制备标题化合物(117,43％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝479。
步骤3：(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺和(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺
遵循与实施例261步骤9类似的操作且接着进行手性SFC分离由2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酸乙酯制备标题化合物，其各自为单一的未知的立体异构体。
281(28.3mg,25％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝3.20,[M+H]+＝450,方法＝B；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),8.13(d,J＝8.8Hz,1H),7.74-7.67(m,1H),7.49-7.31(m,4H),6.94(d,J＝2.5Hz,1H),6.66(d,J＝5.0Hz,1H),6.03(d,J＝5.1Hz,1H),3.10(d,J＝16.4Hz,1H),2.99(d,J＝16.6Hz,1H),2.49-2.44(m,4H),1.56(t,J＝6.1Hz,4H),1.38(d,J＝6.5Hz,2H)。
282(28.3mg,25％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝3.19,[M+H]+＝450,方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,1H),8.13(d,J＝8.8Hz,1H),7.74-7.67(m,1H),7.49-7.31(m,4H),6.94(d,J＝2.5Hz,1H),6.66(d,J＝5.1Hz,1H),6.03(d,J＝5.0Hz,1H),3.10(d,J＝16.4Hz,1H),2.99(d,J＝16.5Hz,1H),2.49-2.44(m,4H),1.56(t,J＝6.1Hz,4H),1.38(d,J＝6.2Hz,2H)。
实施例283和284：(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺283和(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺284
步骤1：2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酸甲酯
向1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇(实施例204步骤10)(250mg)于DMSO(1.5mL)中的混悬液中先后添加碳酸钾(321mg,2.3mmol)和2-溴-2-环丙基乙酸甲酯(201mg,0.93mmol)。小瓶用氮气吹扫，密封并在室温搅拌16h。反应混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。粗产物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-15％甲醇/DCM)纯化，得到0.243g(70％)标题化合物。LCMS(ESI):[M+H]+＝449。
步骤2：遵循与实施例261步骤9类似的操作且接着进行手性SFC分离由2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酸甲酯制备283和284，其各自为单一的未知的立体异构体。
283(67.2mg,28％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝3.10,[M+H]+＝434.2,方法＝B；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61-7.46(m,4H),7.43(d,J＝1.7Hz,1H),7.26(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),7.21(d,J＝2.0Hz,1H),6.87(d,J＝2.2Hz,1H),6.56(d,J＝2.1Hz,1H),4.36(t,J＝6.2Hz,2H),4.24(t,J＝5.2Hz,2H),3.95(d,J＝8.0Hz,1H),2.16-2.05(m,2H),1.76-1.59(m,2H),1.34-1.21(m,1H),0.65-0.51(m,3H),0.50-0.40(m,1H)。
284(67.6mg,28％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝3.09,[M+H]+＝434.2,方法＝B；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61-7.46(m,4H),7.43(d,J＝1.8Hz,1H),7.26(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),7.21(d,J＝2.0Hz,1H),6.87(d,J＝2.2Hz,1H),6.56(d,J＝2.1Hz,1H),4.36(t,J＝6.1Hz,2H),4.24(t,J＝5.4Hz,2H),3.95(d,J＝8.0Hz,1H),2.16-2.04(m,2H),1.74-1.63(m,2H),1.34-1.21(m,1H),0.65-0.51(m,3H),0.50-0.40(m,1H)。
实施例285(S)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噻唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺285
步骤1：4-溴-2-氟-6-硝基苯胺
将5-溴-1,2-二氟-3-硝基苯(20.0g,84.0mmol)、碳酸铵(8.40g,87.4mmol)和三乙胺(25.6g,0.252mol)于DMF(200mL)中的混合物在室温搅拌16小时。反应混合物用水稀释。通过过滤收集固体，用水洗涤并真空干燥，得到16.7g(85％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+1]+＝235/237。
步骤2：5-溴-1-氟-3-硝基-2-氰硫基苯
将4-溴-2-氟-6-硝基苯胺(10.0g,42.0mmol)混悬于硫酸(100mL)和水(100mL)。将反应混合物在60℃搅拌1h，然后冷却至-5℃，然后逐滴添加亚硝酸钠(3.2g,46.0mmol)于水(10mL)中的溶液。将反应***在-5℃搅拌1h，然后将溶液添加至硫氰酸铜(12.7g,104mmol)和硫氰酸钾(1.00g,10.0mmol)于水(50mL)中的混合物。将反应混合物在室温搅拌0.5h，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发，得到10.1g标题化合物，其为棕色固体且未经纯化即直接用于下一步。
步骤3：5-溴-7-氟苯并[d]噻唑-2-胺
将5-溴-1-氟-3-硝基-2-氰硫基苯(10.0g,36.0mmol)、氯化铵(9.60g,179mmol)和铁粉(16.1g,0.310mol)于乙醇(50.0mL)和水(50.0mL)中的混合物在90℃搅拌1h。过滤反应混合物且用乙酸乙酯洗涤滤饼。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发，得到5.5g(62％)标题化合物，其为棕色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝247/249。
步骤4：5-溴-7-氟-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-2-胺
向5-溴-7-氟苯并[d]噻唑-2-胺(5.50g,22.2mmol)和碳酸钾(9.10g,66.0mmol)于DMF(100mL)中的溶液中添加1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(10.3g,66.0mmol)。将反应混合物在60℃搅拌6h，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：20％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到5.00g(46％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝487/489。
步骤5：7-氟-N,N-二(4-甲氧基苄基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噻唑-2-胺
将5-溴-7-氟-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-2-胺(5.0g,10.0mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(0.730g,20.0mmol)、乙酸钾(2.94g,30.0mmol)和1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(730mg,1mmol)于DMF(100mL)中的混合物在90℃在氮气气氛下搅拌2h。使所得混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂：20％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到2.84g(52％)标题化合物，其为灰白色固体。
LCMS(ESI):[M+H]+＝535。
步骤6：5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-7-氟-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-2-胺
遵循与实施例242步骤4类似的操作由4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(实施例204步骤6)(2.0g,5.10mmol)获得标题化合物(2.0g,58％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝673/675。
步骤7：(S)-2-((1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)-7-氟苯并[d]噻唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺
遵循与实施例242步骤5类似的操作由5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-7-氟-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-2-胺(1.9g,2.8mmol)获得标题化合物(1.1g,57％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝682。
步骤8：将(S)-2-((1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)-7-氟苯并[d]噻唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺(1.1g,1.61mmol)于TFA(10.0mL)中的溶液在90℃搅拌4h。真空除去溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：10％甲醇/二氯甲烷)纯化，然后通过手性SFC纯化，得到191.7mg(26.9％产率)285，其为灰白色固体。LCMS:RT(min)＝1.33,[M+H]+＝442,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.96(s,2H),7.54(d,J＝2.2Hz,1H),7.45(d,J＝1.3Hz,1H),7.29-7.15(m,2H),6.95(d,J＝2.1Hz,1H),6.62(d,J＝2.1Hz,1H),4.66-4.60(m,1H),4.48-4.41(m,2H),4.25-4.23(m,2H),2.15-2.05(m,2H),1.72-1.62(m,2H),1.46(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例286和287(S)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺286和(R)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺287
遵循与实施例285类似的操作制备标题化合物，其各自为单一的未知的立体异构体。
286(96.6mg)：LCMS:RT(min)＝1.28,[M+H]+＝442,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.01(s,2H),7.54(d,J＝1.9Hz,1H),7.44-7.40(m,1H),7.35-7.33(m,1H),7.25(d,J＝2.0Hz,1H),6.94(d,J＝2.2Hz,1H),6.63(d,J＝2.2Hz,1H),4.66-4.61(m,1H),4.28-4.18(m,4H),2.01-1.97(m,2H),1.68-1.62(m,2H),1.46(d,J＝6.6Hz,3H)。
287(49.9mg)：LCMS:RT(min)＝1.28,[M+H]+＝442,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.01(s,2H),7.54(d,J＝1.9Hz,1H),7.44-7.40(m,1H),7.35-7.33(m,1H),7.25(d,J＝2.0Hz,1H),6.94(d,J＝2.2Hz,1H),6.63(d,J＝2.2Hz,1H),4.66-4.61(m,1H),4.28-4.18(m,4H),2.01-1.97(m,2H),1.68-1.62(m,2H),1.46(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例288和289(R)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺288和(S)-2-((1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺289
由1-(2-氨基-7-氟苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇(实施例249步骤5)(900mg,2.54mmol)且遵循与实施例279和280步骤1-2类似的操作制备标题化合物，其各自为单一的未知的立体异构体。
288(246mg,21％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.12,[M+H]+＝452,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.87(s,2H),7.53(s,1H),7.28-7.15(m,3H),6.87(d,J＝1.8Hz,1H),6.58(d,J＝2.1Hz,1H),4.44-4.34(m,2H),4.30-4.18(s,2H),3.95(d,J＝8.1Hz,1H),2.09(s,2H),1.68(s,2H),1.31-1.24(m,1H),0.59-0.57(m,3H),0.53-0.44(m,1H)。
289(231mg,20％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.12,[M+H]+＝452,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.87(s,2H),7.53(s,1H),7.28-7.15(m,3H),6.87(d,J＝1.8Hz,1H),6.58(d,J＝2.1Hz,1H),4.44-4.34(m,2H),4.30-4.18(s,2H),3.95(d,J＝8.1Hz,1H),2.09(s,2H),1.68(s,2H),1.31-1.24(m,1H),0.59-0.57(m,3H),0.53-0.44(m,1H)。
实施例290和291(S)-2-((2-(2-氨基-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺290和(R)-2-((2-(2-氨基-4-氟苯并[d]噻唑-6-基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-基)氧基)-2-环丙基乙酰胺291
遵循与实施例208、279和280类似的操作制备标题化合物，其各自为单一的未知的立体异构体。
290：LCMS:RT(min)＝4.5,[M+H]+＝440,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.97(s,2H),7.68-7.64(m,1H),7.49(s,1H),7.20(s,1H),6.69(s,1H),6.42(s,1H),4.64-4.60(m,2H),4.49-4.48(m,2H),3.92(d,J＝8.1Hz,1H),1.29-1.23(m,1H),0.58-0.52(m,3H),0.45-0.42(m,1H)。
291：LCMS:RT(min)＝4.5,[M+H]+＝440,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.97(s,2H),7.68-7.64(m,1H),7.49(s,1H),7.20(s,1H),6.69(s,1H),6.42(s,1H),4.64-4.60(m,2H),4.49-4.48(m,2H),3.92(d,J＝8.1Hz,1H),1.29-1.23(m,1H),0.58-0.52(m,3H),0.45-0.42(m,1H)。
实施例292(S)-2-((1-(3-氨基苯并[e][1,2,4]三嗪-7-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺292
遵循与实施例265类似的操作制备292。LCMS:RT(min)＝1.91,[M+H]+＝420,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.41(s,1H),8.14(d,J＝9Hz,1H),7.91(br s,2H),7.68(d,J＝8.7Hz,1H),7.55(s,1H),7.26(s,1H),6.97(s,1H),6.64(s,2H),4.68-4.61(m,1H),4.52-4.48(m,2H),4.29-4.26(m,2H),2.30-2.12(m,2H),1.80-1.65(m,2H),1.46(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例293(S)-2-((1-(2-氟-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺293
遵循与实施例269类似的操作制备293。LCMS(ESI):RT(min)＝0.63,[M+H]+＝437,方法＝F；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ14.36(s,1H),8.56(s,1H),8.05-8.03(m,1H),7.97-7.94(m,1H),7.76-7.72(m,1H),7.57-7.56(m,1H),7.27-7.26(m,1H),6.97(d,J＝2.0Hz,1H),6.66(d,J＝2.0Hz,1H),4.68-4.63(m,1H),4.31-4.25(m,4H),2.04-1.98(m,2H),1.67-1.63(m,2H),1.46(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例294(2R,3S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-3-氟吡咯烷-2-甲酰胺294
步骤1：5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噁唑-2-胺
遵循与实施例242步骤2-4类似的操作由4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(实施例204步骤6)(5.26g,13.4mmol)和N,N-二(4-甲氧基苄基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(实施例253步骤2)(6.80g,13.6mmol)制备标题化合物(3.5g,41％产率)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝639/641。
步骤2：(2S,3R)-1-(1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-3-羟基吡咯烷-2-甲酸甲酯
将5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)-N,N-二(4-甲氧基苄基)苯并[d]噁唑-2-胺(348mg,0.544mmol)、(2S,3R)-3-羟基吡咯烷-2-甲酸(234mg,1.78mmol)、碘化亚铜(I)(101mg,0.534mmol)和磷酸钾(509mg,2.40mmol)于DMSO(12.0mL)中的混合物用氮气脱气。将反应混合物在微波照射下在100℃加热2h。过滤反应混合物。滤液用乙酸乙酯(15.0mL)稀释并在室温伴随搅拌用(重氮基甲基)三甲基硅烷(40.0mL,2mol/L于己烷中的溶液)逐滴处理。将反应混合物在室温搅拌6h并用水稀释，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-100％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到160mg(52％)标题化合物，其为黄色固体。
LCMS(ESI):[M+H]+＝704。
步骤3：(2R,3S)-1-(1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-3-氟吡咯烷-2-甲酸甲酯
在-40℃伴随搅拌向(2S,3R)-1-(1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-3-羟基吡咯烷-2-甲酸甲酯(405mg,0.575mmol)于DCM(10.0mL)中的溶液中逐滴添加二乙基氨基三氟化硫(DAST)(1.00mL)。使反应混合物温热至15℃并搅拌8h，然后通过碳酸氢钠水溶液淬灭，用水稀释，用DCM萃取，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-30％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到230mg(57％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝706。
步骤4：(2R,3S)-1-(1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-3-氟吡咯烷-2-甲酰胺
将(2R,3S)-1-(1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-3-氟吡咯烷-2-甲酸甲酯(110mg,0.156mmol)和氨(7M于甲醇中的溶液,20mL)的混合物在25℃搅拌48h。真空蒸发反应混合物。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-100％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到69mg(64％)标题化合物，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝691。
步骤6：将(2R,3S)-1-(1-(2-(二(4-甲氧基苄基)氨基)苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-3-氟吡咯烷-2-甲酰胺(40.0mg,0.058mmol)于TFA(8.00mL)中的溶液在80℃加热24h。反应混合物用水稀释。用碳酸氢钠水溶液调节混合物的pH值至7-8并用DCM萃取。有机部分用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。所得残余物经由制备型HPLC纯化并冻干，得到11.9mg(46％)294，其为灰白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝2.36,[M+H]+＝451,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.74(s,1H),7.58(s,2H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),7.43(d,J＝1.5Hz,1H),7.37(s,1H),7.29-7.25(m,1H),6.50(d,J＝2.1Hz,1H),6.25(d,J＝1.8Hz,1H),5.35-5.17(m,1H),4.37-4.30(m,2H),4.25-4.20(m,2H),4.09(d,J＝26.4Hz,1H),3.72-3.65(m,1H),3.41-3.32(m,1H),2.30-2.07(m,4H),1.80-1.65(m,2H)。
实施例295(S)-2-((1-(2,5-二氟-4-(1H-1,2,4-***-5-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酰胺295
遵循与实施例269类似的操作制备295。LCMS(ESI):RT(min)＝1.19min,[M+H]+＝469,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ14.14(s,1H),8.78(s,1H),8.21-7.97(m,1H),7.82-7.64(m,1H),7.54-7.53(m,1H),7.27-7.26(m,1H),6.97(d,J＝2.0Hz,1H),6.67(d,J＝2.0Hz,1H),4.48-4.45(m,1H),4.30-4.23(m,4H),2.04-1.99(m,2H),1.88-1.81(m,2H),1.68-1.63(m,2H),1.02-0.98(m,3H)。
实施例296(S)-2-((1-(5-(1H-1,2,4-***-5-基)吡啶-2-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺296
步骤1：6-氯吡啶-3-甲酰胺
在室温向6-溴吡啶-3-甲酸(50g,247mmol)于DCM(1L)和DMF(3mL)中的溶液中逐滴添加草酰氯(80mL)。将混合物在室温搅拌30min。减压除去溶剂并逐滴添加氨(1L,25-28％水溶液)。将所得混合物在室温再搅拌1h。真空蒸发溶剂，得到43g粗产物，其未经进一步纯化即直接用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝157/159。
步骤2：(Z)-6-氯-N-((二甲基氨基)亚甲基)吡啶-3-甲酰胺
将6-氯吡啶-3-甲酰胺(43g,274mmol)溶于二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(1L)并在100℃搅拌3h。真空蒸发溶剂并用己烷研磨残余物且通过过滤收集固体。粗产物(40g,69％产率)未经进一步纯化即直接用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝212。
步骤3：2-氯-5-(2H-1,2,4-***-3-基)吡啶
向(Z)-6-氯-N-((二甲基氨基)亚甲基)吡啶-3-甲酰胺(40g,188mmol)于乙酸(1L)中的溶液中添加乙酸肼(40g,434mmol)。将所得混合物在90℃搅拌3h。真空蒸发溶剂。用碳酸氢钠调节溶液的pH值至8。通过过滤收集固体，得到38g(69％)粗产物，其未经进一步纯化即直接用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝181。
步骤4：2-氯-5-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶
向2-氯-5-(2H-1,2,4-***-3-基)吡啶(20g,110mmol)和碳酸铯(72g,220mmol)于DMF(1L)中的溶液中添加1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(20.3g,129mmol)。将反应混合物在25℃搅拌16h并用水稀释，过滤并收集固体且干燥，得到20g(60％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝301。
步骤5：5-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-2-甲酸
向2-氯-5-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶(20g,67mmol)、碳酸钠(22g,207mmol)和二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(7.3g,9.98mmol)于甲醇(300mL)和水(18mL)中的混合物中充入一氧化碳并在60℃加热18h。将所得混合物冷却至室温并真空蒸发。将残余物在DCM和水之间分配。用氯化氢调节水层的pH至6。蒸发溶剂且粗产物10g(48％)未经进一步纯化即直接用于下一步。LCMS(ESI):[M+H]+＝311。
步骤6：4-溴-1-(5-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-2-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚
遵循与实施例125步骤1-2类似的操作由9-溴-3,4,5,6-四氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂氮杂环辛烯-7-胺(实施例204步骤4)(6.5g,25.3mmol)制备标题化合物(8.5g,63％产率,历经两步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝531/533。
步骤7：遵循与实施例269类似的操作由4-溴-1-(5-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-2-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(2g,3.77mmol)制备296(251mg,16％产率,历经五步)。LCMS(ESI):RT(min)＝1.07,[M+H]+＝420,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.38(s,1H),9.31-9.30(m,1H),8.75(s,1H),8.53-8.50(m,1H),8.37(d,J＝6Hz,1H),7.59-7.52(m,1H),7.25(s,1H),6.96(d,J＝3Hz,1H),6.65(d,J＝3Hz,1H),5.08-5.04(m,2H),4.68-4.61(m,1H),4.31-4.21(m,2H),2.16-2.14(m,2H),1.60-1.58(m,2H),1.47-1.45(m,3H)。
实施例297(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酸297
在室温向(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酸甲酯(实施例204步骤11)(521mg,1.23mmol)于THF(10mL)和水(5mL)中的溶液中添加氢氧化锂水合物(148mg,3.53mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，然后真空蒸发。所得残余物经由反相快速色谱(溶剂梯度：0-60％甲醇/水)纯化，然后通过手性SFC纯化，得到48.4mg(10％)297，其为白色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.27,[M+H]+＝409,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.11(s,1H),7.59(s,2H),7.50(d,J＝8.4Hz,1H),7.43(d,J＝1.5Hz,1H),7.28-7.25(m,1H),6.84(d,J＝2.1Hz,1H),6.53(d,J＝2.1Hz,1H),4.78-4.73(m,1H),4.39-4.34(m,2H),4.25-4.22(m,2H),2.15-2.06(m,2H),1.75-1.65(m,2H),1.50(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例298和299(S)-2-(4-(1-(2-氨基噻唑并[5,4-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-1H-吡唑-1-基)丁酰胺298和(R)-2-(4-(1-(2-氨基噻唑并[5,4-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-1H-吡唑-1-基)丁酰胺299
步骤1：2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑-1-基)丁酸甲酯
将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑(22g,113mmol)、2-溴丁酸甲酯(24.5g,135mmol)和碳酸铯(55.3g,170mmol)于乙腈(650mL)中的混合物在60℃搅拌16h。所得溶液用DCM稀释。滤出固体。真空蒸发滤液并经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到32.5g(97％)标题化合物，其为黄色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝295。
步骤2：2-(4-(1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-1H-吡唑-1-基)丁酸甲酯
将(5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例265步骤5)(1g,1.94mmol)、2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑-1-基)丁酸甲酯(860mg,2.92mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(280mg,0.383mmol)和碳酸钠(620mg,5.850mmol)于二噁烷(10mL)和水(1mL)中的混合物在80℃搅拌1h。反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。所得混合物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到1.2g(87％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝604。
步骤3：(5-(4-(1-(1-氨基-1-氧代丁-2-基)-1H-吡唑-4-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
将2-(4-(1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-1H-吡唑-1-基)丁酸甲酯(1.2g,1.69mmol)和氨(7M于甲醇中的溶液,15mL)的混合物在25℃搅拌20h。真空蒸发反应混合物，得到1g(85％)标题化合物，其为棕色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝589。
步骤4：将(5-(4-(1-(1-氨基-1-氧代丁-2-基)-1H-吡唑-4-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1g,2.04mmol)和TFA(10mL)于DCM(30mL)中的混合物在20℃搅拌3h。反应混合物用水稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液处理以达到pH 8，用DCM萃取并真空蒸发。所得混合物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化并通过手性SFC分离两种立体异构体，得到298和299，其各自为单一的未知的立体异构体。
298(143.2mg,14％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝1.23,[M+H]+＝489,方法＝D；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)：8.26(s,1H),8.15-8.08(m,3H),7.94(s,1H),7.79-7.76(m,1H),7.69(s,1H),7.53(s,1H),7.28(s,1H),7.20(s,1H),5.11-4.92(m,2H),4.84-4.70(m,1H),4.36-4.19(m,2H),2.18-2.06(m,4H),1.70-1.55(m,2H),0.88-0.83(m,3H)。
299(68.6mg,7％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝1.23,[M+H]+＝489,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)：8.26(s,1H),8.15-8.08(m,3H),7.94(s,1H),7.79-7.76(m,1H),7.69(s,1H),7.53(s,1H),7.28(s,1H),7.20(s,1H),5.11-4.92(m,2H),4.84-4.70(m,1H),4.36-4.19(m,2H),2.18-2.06(m,4H),1.70-1.55(m,2H),0.88-0.83(m,3H)。
实施例300(2S,3R)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-3-甲氧基吡咯烷-2-甲酰胺300
步骤1：(2S,3R)-3-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯
在室温伴随搅拌向(2S,3R)-1-(叔丁氧基羰基)-3-羟基吡咯烷-2-甲酸(5.00g,21.6mmol)于甲醇(50.0mL)中的溶液中逐滴添加(重氮基甲基)三甲基硅烷(50.0mL,2mol/L于己烷中)。将反应混合物在室温搅拌1h，然后真空蒸发，得到5.30g粗标题化合物，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝246。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ5.44(d,J＝4.9Hz,1H),4.48-4.42(m,1H),4.20(d,J＝7.0Hz,1H),3.63和3.60(旋转异构体,两个表观s,共计3H),3.47-3.39(m,1H),3.31-3.21(m,1H),1.98-1.91(m,1H),1.83-1.74(m,1H),1.39和1.32(旋转异构体,两个表观s,共计9H)。
步骤2：(2S,3R)-3-甲氧基吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯
将(2S,3R)-3-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(5.30g,21.6mmol)、氧化银(I)(17.0g,73.4mmol)和碘甲烷(11.0mL,176mmol)于丙酮(100mL)中的混合物在室温搅拌84h。过滤混合物并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到4.78g(85％)标题化合物，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI):[M+H]+＝260。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ4.42-4.38(m,1H),4.19-4.13(m,1H),3.63和3.61(旋转异构体,两个表观s,共计3H),3.44-3.36(m,1H),3.32-3.19(m,4H),2.12-1.95(m,1H),1.91-1.82(m,1H),1.38和1.32(旋转异构体,两个表观s,共计9H)。
步骤3：(2S,3R)-1-(叔丁氧基羰基)-3-甲氧基吡咯烷-2-甲酸
将(2S,3R)-3-甲氧基吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(4.78g,18.4mmol)、氢氧化锂水合物(4.20g,100mmol)于THF(40.0mL)和水(20.0mL)中的混合物在50℃加热24h。真空蒸发溶剂。所得残余物用水稀释。用1M氯化氢水溶液调节pH值至3。混合物用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发，得到3.76g(83％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝246。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.45(s,1H),4.29-4.27(m,1H),4.15-4.03(m,1H),3.47-3.33(m,1H),3.33-3.17(m,4H),2.13-1.94(m,1H),1.94-1.80(m,1H),1.36和1.34(旋转异构体,两个表观s,9H)。
步骤4：(2S,3R)-3-甲氧基吡咯烷-2-甲酸三氟乙酸盐
将(2S,3R)-1-(叔丁氧基羰基)-3-甲氧基吡咯烷-2-甲酸(3.50g,14.3mmol)和三氟乙酸(5.00mL)于DCM(20.0mL)中的混合物在室温搅拌3h。真空蒸发反应混合物，得到3.30g(粗品)标题化合物，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝146。
步骤5：(6-(4-((2S,3R)-2-氨甲酰基-3-甲氧基吡咯烷-1-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
遵循与实施例104步骤1-2类似的操作由(6-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例214步骤3)(332mg,0.645mmol)制备标题化合物(176mg,47％产率,历经两步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝579。
步骤6：将(6-(4-((2S,3R)-2-氨甲酰基-3-甲氧基吡咯烷-1-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(530mg,0.916mmol)、三氟乙酸(3.00mL)于DCM(10.0mL)中的混合物在室温搅拌2h。反应混合物用水稀释。用碳酸氢钠溶液调节混合物的pH值至8并用DCM萃取，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空蒸发。所得残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，然后通过手性HPLC纯化，得到123.4mg(28％)300，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):RT(min)＝1.83,[M+H]+＝479,方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.99(s,1H),7.72(s,2H),7.53-7.43(m,3H),7.05(s,1H),6.47(s,1H),6.24(s,1H),4.37-4.30(m,2H),4.26-4.09(m,4H),3.60-3.56(m,1H),3.39(s,3H),3.24-3.17(m,1H),2.33-2.08(m,4H),1.75-1.65(m,2H)。
实施例301和302(S)-2-(4-(1-(2-氨基噁唑并[4,5-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-1H-吡唑-1-基)丁酰胺301和(R)-2-(4-(1-(2-氨基噁唑并[4,5-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-1H-吡唑-1-基)丁酰胺302
步骤1：5-溴噁唑并[4,5-b]吡啶-2-胺
将2-氨基-6-溴吡啶-3-醇(20.0g,105mmol)和溴化氰(89.6g,846mmol)于水(400mL)中的混合物在100℃搅拌20min。所得混合物用碳酸钠淬灭。将溶液的pH值调节至9并用DCM稀释。合并有机萃取物，用硫酸钠干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-5％甲醇/DCM)纯化，得到10g(44％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝214/216。
步骤2：5-溴噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯
将5-溴噁唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(10.0g,46.7mmol)、一缩二碳酸二叔丁酯(22.4g,102mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(1.14g,9.33mmol)和三乙胺(14.1g,140mmol)于DCM(300mL)中的混合物在25℃搅拌16小时。真空蒸发所得混合物。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-1％甲醇/DCM)纯化，得到7.80g(53％)标题化合物，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝314/316。
步骤3：2-(叔丁氧基羰基氨基)噁唑并[4,5-b]吡啶-5-甲酸甲酯
将5-溴噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯(7.80g,24.8mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(2.73g,3.73mmol)和碳酸钠(7.90g,74.5mmol)于甲醇(260mL)中的混合物在60℃搅拌16h。真空浓缩所得混合物。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-60％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到7g(96％)标题化合物，其为浅黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝294。
步骤4：2-(叔丁氧基羰基氨基)噁唑并[4,5-b]吡啶-5-甲酸
将2-(叔丁氧基羰基氨基)噁唑并[4,5-b]吡啶-5-甲酸甲酯(7.00g,23.8mmol)和氢氧化锂(2.00g,47.6mmol)于THF(70.0mL)和水(20mL)中的混合物在25℃搅拌1h。反应混合物用乙酸乙酯萃取。用1M氯化氢水溶液调节水相的pH值至3。通过过滤收集固体，得到5g(75％)标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝280。
步骤5：(5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
遵循与实施例125步骤1-2类似的操作由9-溴-3,4,5,6-四氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂氮杂环辛烯-7-胺(2.00g,7.78mmol)和2-(叔丁氧基羰基氨基)噁唑并[4,5-b]吡啶-5-甲酸(2.61g,9.34mmol)制备标题化合物(2g,51％产率,历经2步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝500/502。
步骤6：遵循与实施例298和299类似的操作由(5-(4-溴-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-1-基)噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g,1.99mmol)制备301和302，其各自为单一的未知的立体异构体。
301(74.5mg,23％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝3.00,[M+H]+＝473,方法＝D；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.08(s,2H),7.94(s,1H),7.87-7.85(m,2H),7.69-7.63(m,1H),7.52(s,1H),7.27-7.20(m,2H),5.03-5.01(m,2H),4.78-4.73(m,1H),4.35-4.25(m,2H),2.18-2.08(m,4H),1.64-1.61(m,2H),0.88-0.85(m,3H)。
302(128.9mg,39％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝3.00,[M+H]+＝473,方法＝D；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.07(s,2H),7.93-7.82(m,3H),7.68(d,J＝1.4Hz,1H),7.50(s,1H),7.25-7.19(m,2H),5.04-5.01(m,2H),4.78-4.73(m,1H),4.30-4.27(m,2H),2.18-2.08(m,4H),1.63-1.61(m,2H),0.88-0.85(m,3H)。
实施例303和304(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-3-甲氧基丙酰胺303和(R)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噻唑-6-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-3-甲氧基丙酰胺304
遵循与实施例275和276类似的操作制备303和304，其各自为单一的未知的立体异构体。
303：LCMS(ESI):RT(min)＝1.09,[M+H]+＝454,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.00(d,J＝1.6Hz,1H),7.73(s,2H),7.61-7.60(m,1H),7.54-7.51(m,1H),7.48-7.46(m,1H),7.40-7.39(m,1H),6.96(d,J＝2.4Hz,1H),6.62(d,J＝2.0Hz,1H),4.72-4.70(m,1H),4.41-4.39(m,2H),4.27-4.24(m,2H),3.77-3.67(m,2H),3.33(s,3H),2.18-2.12(m,2H),1.72-1.67(m,2H)。
304：LCMS(ESI):RT(min)＝1.09min,[M+H]+＝454,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.01(d,J＝1.6Hz,1H),7.75(s,2H),7.61-7.60(m,1H),7.54-7.52(m,1H),7.48-7.46(m,1H),7.40-7.39(m,1H),6.96(d,J＝2.0Hz,1H),6.63(d,J＝2.4Hz,1H),4.73-4.70(m,1H),4.42-4.39(m,2H),4.27-4.25(m,2H),3.77-3.68(m,2H),3.33(s,3H),2.18-2.12(m,2H),1.72-1.67(m,2H)。
实施例305和306(S)-2-环丙基-2-((1-(3-氟-4-(1H-1,2,4-***-5-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)乙酰胺305和(R)-2-环丙基-2-((1-(3-氟-4-(1H-1,2,4-***-5-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)乙酰胺306
步骤1：4-溴-2-氟苯甲酰胺
将4-溴-2-氟苯甲腈(50.0g,249mmol)和氧化铝(76.5g,750mmol)于甲烷磺酸(650mL)中的混合物在120℃搅拌1h。所得混合物用水淬灭并用DCM萃取。有机萃取物用硫酸钠干燥并真空蒸发。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到40g(73％)标题化合物，其为灰色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝218/220。
步骤2：(Z)-4-溴-N-((二甲基氨基)亚甲基)-2-氟苯甲酰胺
将4-溴-2-氟苯甲酰胺(20.0g,91.7mmol)于二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(150mL)中的混合物在100℃搅拌3h。将所得混合物冷却至室温并用己烷稀释。通过过滤收集固体，得到23g(92％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝273/275。
步骤3：3-(4-溴-2-氟苯基)-1H-1,2,4-***
将(Z)-4-溴-N-((二甲基氨基)亚甲基)-2-氟苯甲酰胺(20.0g,73.2mmol)和水合肼(100mL,80％于水中,2.06mol)于乙酸(500mL)中的混合物在20℃搅拌1h。残余物用水淬灭并通过过滤收集固体，得到16.0g(90％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝242/244。
步骤4：3-(4-溴-2-氟苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***
遵循与实施例267步骤1类似的操作由3-(4-溴-2-氟苯基)-1H-1,2,4-***(17.0g,70.2mmol)制备标题化合物(12.0g,47％产率)。LCMS(ESI):[M+H]+＝362/364。
步骤5：3-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***
将3-(4-溴-2-氟苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***(11.0g,30.3mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(2.22g,3.03mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(9.25g,36.4mmol)和乙酸钾(5.96g,60.7mmol)于DMSO(300mL)中的混合物在90℃搅拌2h。所得混合物用水淬灭并用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到8.50g(68％)标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝410。
步骤6：4-溴-1-(3-氟-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚
将4-溴-1-碘-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(实施例204步骤6)(5.00g,12.7mmol)、3-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***(6.25g,15.2mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(1.40g,1.91mmol)和碳酸钠(2M于水中,2mL,4.00mmol)于DMF(100mL)的混合物在90℃搅拌2h。所得混合物用水淬灭并用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空蒸发溶剂。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-70％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到3.10g(44％)标题化合物，其为灰白色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝548/550。
步骤7：1-(3-氟-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇
将4-溴-1-(3-氟-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(3.00g,5.47mmol)、二叔丁基(2’,4’,6’-三异丙基-[1,1’-联苯]-2-基)膦(1.16g,2.73mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(2.50g,2.73mmol)和氢氧化钾(770mg,13.7mmol)于二噁烷(90mL)和水(18mL)中的混合物在100℃搅拌4h。真空蒸发所得混合物。残余物经由硅胶快速色谱(溶剂梯度：0-10％甲醇/DCM)纯化，得到1.20g(45％)标题化合物，其为灰色固体。LCMS:[M+H]+＝486。
步骤8：遵循与实施例279步骤1-3类似的操作由1-(3-氟-4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-醇(3.00g,5.47mmol)制备305和306，其各自为单一的未知的立体异构体。
305(124mg,4.3％产率,历经3步)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.46,[M+H]+＝463,方法＝E；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.36(s,1H),8.74(s,1H),8.33-8.19(m,1H),7.66-7.56(m,3H),7.24(s,1H),6.91(d,J＝2.1Hz,1H),6.22(d,J＝1.8Hz,1H),4.49-4.57(m,2H),4.15-4.32(m,2H),3.98-3.92(m,1H),2.27-2.08(m,2H),1.69-1.58(m,2H),1.38-1.23(m,1H),0.60-0.54(m,3H),0.48-0.43(m,1H)。
306(110mg,3.9％产率,历经3步)：LCMS(ESI):RT(min)＝2.45,[M+H]+＝463,方法＝E；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.36(s,1H),8.74(s,1H),8.33-8.19(m,1H),7.66-7.56(m,3H),7.24(s,1H),6.91(d,J＝2.1Hz,1H),6.22(d,J＝1.8Hz,1H),4.57-4.49(m,2H),4.32-4.15(m,2H),3.98-3.92(m,1H),2.27-2.08(m,2H),1.69-1.58(m,2H),1.38-1.23(m,1H),0.60-0.54(m,3H),0.48-0.43(m,1H)。
实施例307(S)-2-((1-(5-氟-6-(1H-1,2,4-***-5-基)吡啶-3-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺307
步骤1：4-溴-1-(5-氟-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚
遵循与实施例305步骤1-6类似的操作由3-氟-2-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吡啶(6.26g,15.2mmol)制备标题化合物(1.60g,9％产率,历经六步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝549/551。
步骤2：(S)-2-((1-(5-氟-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺
遵循与实施例204步骤9-12类似的操作由4-溴-1-(5-氟-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚(2.00g,3.64mmol)制备标题化合物(0.80g,39.4％产率,历经四步)。LCMS(ESI):[M+H]+＝558。
步骤3：遵循与实施例267步骤6类似的操作由(S)-2-((1-(5-氟-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丙酰胺(800mg,1.44mmol)制备307(181mg,29％产率)。LCMS(ESI):RT(min)＝5.00,[M+H]+＝438,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.67(s,1H),8.87(s,1H),8.52(s,1H),8.18(d,J＝10.9Hz,1H),7.56(s,1H),7.26(s,1H),6.99(d,J＝2.1Hz,1H),6.66(d,J＝2.0Hz,1H),4.68-4.64(m,1H),4.52-4.46(m,2H),4.28-4.25(m,2H),2.17-2.14(m,2H),1.79-1.61(m,2H),1.47-1.45(m,3H)。
实施例308(2S,3S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-3-甲基吡咯烷-2-甲酰胺308
遵循与实施例104类似的操作制备308。LCMS(ESI):RT(min)＝3.60,[M+H]+＝433,方法＝E；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.57-7.53(m,3H),7.47(d,J＝8.2Hz,1H),7.36-7.32(m,2H),6.99(d,J＝2.6Hz,1H),6.32(d,J＝2.1Hz,1H),6.05(d,J＝2.1Hz,1H),4.37-4.32(m,2H),4.26-4.18(m,2H),3.58-3.55(m,1H),3.44(d,J＝4.1Hz,1H),2.37-2.12(m,5H),1.59-1.52(m,1H),1.09(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例309(2S,3S)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-3-甲基吡咯烷-2-甲酰胺309
遵循与实施例250类似的操作制备309。LCMS(ESI):RT(min)＝0.83,[M+H]+＝447,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.58(s,2H),7.48(d,J＝8.1Hz,1H),7.43(s,1H),7.39(s,1H),7.26(d,J＝8.1Hz,1H),7.03(s,1H),6.44(s,1H),6.22(s,1H),4.45-4.29(m,2H),4.28-4.15(m,2H),3.58(s,1H),3.47(s,1H),3.41-3.38(m,1H),2.33(s,1H),2.19-2.11(m,3H),1.70-1.59(m,3H),1.12-1.09(m,3H)。
实施例310(2S,3R)-1-(1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)-3-甲氧基吡咯烷-2-甲酰胺310
遵循与实施例300类似的操作制备310。LCMS(ESI):RT(min)＝1.24,[M+H]+＝463,方法＝C；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.57(表观s,3H),7.48(d,J＝8.1Hz,1H),7.42(d,J＝1.5Hz,1H),7.28-7.00(m,2H),6.47-6.45(m,1H),6.24-6.22(m,1H),4.42-4.27(m,2H),4.27-4.17(m,2H),4.13-3.85(m,2H),3.65-3.55(m,1H),3.38和3.29(旋转异构体,两个表观s,共计3H),3.28-3.25(m,1H),2.17-2.03(m,4H),1.77-1.60(m,2H)。
实施例311和312(S)-2-(4-(1-(2-氨基噁唑并[4,5-b]吡啶-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)丁酰胺311和(R)-2-(4-(1-(2-氨基噁唑并[4,5-b]吡啶-5-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-基)-1H-吡唑-1-基)丁酰胺312
遵循与实施例301和302类似的操作制备311和312，其各自为单一的未知的立体异构体。
311(38.8mg,12％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝3.60,[M+H]+＝459,方法＝E；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(s,2H),7.92(d,J＝2.1Hz,1H),7.84(d,J＝2.1Hz,2H),7.55-7.41(m,2H),7.27(s,1H),7.08-7.05(m,1H),4.78-4.72(m,3H),4.45-4.41(m,2H),2.37(d,J＝7.5Hz,2H),2.10-2.05(m,2H),0.87-0.82(m,3H)。
312(108.8mg,33％产率)：LCMS(ESI):RT(min)＝3.00,[M+H]+＝459,方法＝D；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.11(s,2H),7.93(d,J＝1.8Hz,1H),7.84(d,J＝1.8Hz,2H),7.54(d,J＝2.7Hz,2H),7.28(s,1H),7.08-7.06(m,1H),4.78-4.72(m,3H),4.45-4.41(m,2H),2.37(s,2H),2.11-2.03(m,2H),0.87-0.83(m,3H)。
实施例313(S)-2-((1-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)丁酸313
遵循与实施例297类似的操作制备313。LCMS(ESI):RT(min)＝0.90,[M+H]+＝423,方法＝D；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.56(s,2H),7.51-7.49(m,1H),7.44(d,J＝1.6Hz,1H),7.28-7.26(m,1H),6.83(d,J＝2.4Hz,1H),6.53(d,J＝2.0Hz,1H),4.60-4.56(m,1H),4.38-4.35(m,2H),4.26-4.23(m,2H),2.14-2.08(m,2H),1.92-1.82(m,2H),1.72-1.66(m,2H),1.03-1.00(m,3H)。
实施例314和315(R)-2-((1-(2-氨基噻唑并[5,4-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-3-甲氧基丙酰胺314和(S)-2-((1-(2-氨基噻唑并[5,4-b]吡啶-5-基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛并[cd]茚-4-基)氧基)-3-甲氧基丙酰胺315
遵循与实施例303和304类似的操作制备314和315，其各自为单一的未知的立体异构体。
314：LCMS(ESI):RT(min)＝1.13,[M+H]+＝455,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.12-8.07(m,3H),7.77-7.75(m,1H),7.63(s,1H),7.41(s,1H),6.97(s,1H),6.63(s,1H),5.11-4.88(m,2H),4.74-4.66(m,1H),4.35-4.18(m,2H),3.81-3.63(m,2H),3.32(s,3H),2.21-2.05(m,2H),1.71-1.56(m,2H)。
315：LCMS(ESI):RT(min)＝1.13,[M+H]+＝455,方法＝D；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.12-8.07(m,3H),7.77-7.75(m,1H),7.63(s,1H),7.41(s,1H),6.97(s,1H),6.63(s,1H),5.11-4.88(m,2H),4.74-4.66(m,1H),4.35-4.18(m,2H),3.81-3.63(m,2H),3.32(s,3H),2.21-2.05(m,2H),1.71-1.56(m,2H)。
实施例901 p110αPI3K结合测定
PI3K结合测定意在确定小分子PI3K抑制剂的生化效力。PI3K脂质激酶反应在PIP2:3PS脂质底物(Promega#V1792)和ATP存在下进行。终止激酶反应后，使用PromegaADP-GloTM(Promega#V1792)测定法检测ATP通过脂质底物的磷酸化向ADP的转化。使用以下条件进行反应：
反应120分钟后，终止激酶反应。反应后剩余的任何ATP都耗尽，只留下ADP。然后添加激酶检测试剂以将ADP转化为ATP，所述ATP用于偶联的荧光素/荧光素酶反应。测量发光输出并与激酶活性关联。
所有反应均在室温进行。将酶/脂质底物溶液的3μl混合物(1:1)添加到含有50nl测试化合物或仅DMSO(用作未处理的对照)的384孔白色测定板(Perkin Elmer#6007299)中。反应通过添加2μl ATP/MgCl2开始。激酶反应缓冲液含有50mM HEPES、50mM NaCl、3mMMgCl2、0.01％BSA、1％DMSO及浓度如上表所示的酶和底物。反应通过添加10μL ADP-Glo试剂停止。在Perkin Elmer Envision***中使用发光模式对板进行读取。针对每种测试化合物绘制10点剂量响应曲线。每种化合物的Ki值使用Morrison方程确定。
结合测定：初始偏振实验在Analyst HT 96-384(Molecular Devices Corp,Sunnyvale,CA.)上进行。用于荧光偏振亲和力测量的样品如下制备：将p110αPI3K(UpstateCell Signaling Solutions,Charlottesville,VA)的1:3连续稀释液(始于在偏振缓冲液(10mM Tris pH 7.5、50mM NaCl、4mM MgCl2、0.05％Chaps和1mM DTT)中20μg/mL的最终浓度)加到最终浓度为10mM的PIP2(Echelon-Inc.,Salt Lake City,UT.)中。在室温温育30分钟后，通过添加最终浓度分别为100nM和5nM的GRP-1和PIP3-TAMRA探针(Echelon-Inc.,Salt Lake City,UT.)使反应停止。在384孔黑色低容量
(PerkinElmer,Wellesley,MA.)中用标准截止滤波器对罗丹明荧光团进行读取(λ激发＝530nm；λ发射＝590nm)。将荧光偏振值绘制成蛋白质浓度的函数。EC50值如下得到：使用
软件(Synergy software,Reading,PA)将数据拟合成四参数方程。该实验还确定了适用于后续抑制剂竞争实验的蛋白质浓度。
抑制剂IC50值如下确定：将0.04mg/mL p110αPI3K(最终浓度)与PIP2(10mM最终浓度)一起加到以下孔中，所述孔含有拮抗剂在最终浓度为25mM的ATP(Cell SignalingTechnology,Inc.,Danvers,MA)/偏振缓冲液中的1:3连续稀释液。在室温温育30分钟后，通过添加最终浓度分别为100nM和5nM的GRP-1和PIP3-TAMRA探针(Echelon-Inc.,Salt LakeCity,UT.)使反应停止。在384孔黑色低容量
(PerkinElmer,Wellesley,MA.)中用标准截止滤波器对罗丹明荧光团进行读取(λ激发＝530nm；λ发射＝590nm)。将荧光偏振值绘制成拮抗剂浓度的函数且IC50值如下得到：在Assay Explorer软件(MDL,San Ramon,CA.)中将数据拟合成四参数方程。
可选择地，在放射性测定中使用纯化重组酶和浓度为1μM(微摩尔浓度)的ATP来确定对PI3K的抑制。将化合物在100％DMSO中连续稀释。将激酶反应混合物在室温温育1h且通过添加PBS使反应终止。然后使用S形剂量-应答曲线拟合(可变斜率)来确定IC50值。
虽然出于理解清晰的目的已经通过示例说明和实施例在一定程度上详细描述了上述发明，但是所述描述和实施例不应该被理解为限制本发明范围。本申请引用的所有专利和科学文献的全部公开内容都通过引用的方式明确地并入本申请。
Claims (37)
1.选自式I的化合物或其立体异构体、互变异构体和药用盐：
其中
虚线/实线表示单键或双键；
Xa为CRa、N、NRb、O或S；
Xb为C或N；
Xc为C或N；
Xd为CR2或N；
其中Xa、Xb和Xc中的至少一个为N、O或S；
Ra选自H、C1-C6烷基、-CN和F；
Rb选自H和C1-C6烷基；
R1选自Br、Cl、I、C2-C20杂环基、C1-C20杂芳基、-NR3R4和-OR5；
R2选自H、F、Cl、C1-C6烷基和-O(C1-C6烷基)；
R3选自H和C1-C6烷基；
R4选自H、C1-C6烷基、C2-C20杂环基和C1-C20杂芳基；
或R3和R4形成4元、5元或6元杂环基环；
R5选自C1-C6烷基、C2-C20杂环基和C1-C20杂芳基；
R6独立选自H、C1-C4烷基和F；
或两个偕位或邻位R6基团可形成3、4或5元碳环；
p为2、3或4；
A选自C6-C20芳基、-(C6-C20芳基)-(C6-C20芳基)、-(C6-C20芳基)-(C1-C20杂芳基)、-(C6-C20芳基)-(C2-C20杂环基)、-(C1-C20杂芳基)-(C2-C20杂环基)、-(C1-C20杂芳基)-(C1-C20杂芳基)、C2-C20杂环基和C1-C20杂芳基；和
其中烷基、芳基、杂环基和杂芳基任选取代有一个或多个独立选自以下的基团：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、C(CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CH2OP(O)(OH)2、-CH2F、-CHF2、-CH2NH2、-CH2NHSO2CH3、-CH2NHCH3、-CH2N(CH3)2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CONHCH2CH3、-CONHCH(CH3)2、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、-NO2、＝O、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2N(CH3)2、-OP(O)(OH)2、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-S(O)2CH3、-S(O)3H、环丙基、环丁基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、环戊基、四氢呋喃基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基和四氢吡喃基。
2.权利要求1的化合物，其中p为2。
3.权利要求1的化合物，其中p为3。
4.权利要求1的化合物，其中p为4。
5.权利要求1-4中任一项的化合物，其中每个R6为H。
6.权利要求1-5中任一项的化合物，其选自式Ia-If：
7.权利要求1-6中任一项的化合物，其选自式Ig：
8.权利要求7的化合物，其选自式Ih-j：
9.权利要求6的化合物，其选自式Ik-m：
10.权利要求8的化合物，其选自式In-p：
其中Y为O或NR3；和
R7选自H、环丙基、环丁基和C1-C6烷基，其任选取代有F、Cl、-OCH3或-OH；或R3和R7形成4元、5元或6元杂环基环。
11.权利要求10的化合物，其中Y为NH。
12.权利要求10的化合物，其中Y为NR3且R3和R7形成吡咯烷基环。
13.权利要求10的化合物，其中Y为O。
14.权利要求1-13中任一项的化合物，其中R1为Br或经取代的吡唑基。
15.权利要求1-13中任一项的化合物，其中R1选自：
其中波浪线表示连接的位点。
16.权利要求1-15中任一项的化合物，其中A为经取代的苯并[d]噁唑基或经取代的苯并噻唑基。
17.权利要求1-15中任一项的化合物，其中A选自以下结构：
其中波浪线表示连接的位点。
18.权利要求1-17中任一项的化合物，其选自表1。
19.权利要求1-17中任一项的化合物，其选自表2。
20.一种药物组合物，其包含权利要求1-19中任一项的化合物和药用载体、助流剂、稀释剂或赋形剂。
21.权利要求20的药物组合物，其中所述药用载体、助流剂、稀释剂或赋形剂选自二氧化硅、粉状纤维素、微晶纤维素、硬脂酸金属盐、铝硅酸钠、苯甲酸钠、碳酸钙、硅酸钙、玉米淀粉、碳酸镁、不含石棉的滑石、stearowet C、淀粉、淀粉1500、月桂基硫酸镁、氧化镁及其组合。
22.制备药物组合物的方法，其包括使权利要求1-19中任一项的化合物与药用载体、助流剂、稀释剂或赋形剂组合。
23.权利要求20的药物组合物，其进一步包含选自以下的治疗剂：化学治疗剂、抗炎剂、免疫调节剂、神经营养因子、心血管疾病治疗剂、肝病治疗剂、抗病毒剂、血液病症治疗剂、糖尿病治疗剂和免疫缺陷障碍治疗剂。
24.在具有癌症的患者中治疗癌症的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的权利要求20的药物组合物的化合物，其中所述癌症选自乳腺癌、肺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌和子宫癌。
25.权利要求24的方法，其进一步包括向所述患者施用选自以下的治疗剂：5-FU、多西他赛、艾日布林、吉西他滨、考比替尼、ipatasertib、紫杉醇、他莫昔芬、氟维司群、GDC-0810、***、帕泊昔布、贝伐珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗-美坦新偶联物、曲妥珠单抗和来曲唑。
26.权利要求24的方法，其中所述癌症为乳腺癌。
27.权利要求26的方法，其中所述乳腺癌为***受体阳性(ER+)乳腺癌。
28.权利要求24的方法，其中所述乳腺癌亚型为基底型或腺管型。
29.权利要求24的方法，其中所述癌症表达选自以下的PIK3CA突变体：E542K、E545K、Q546R、H1047L和H1047R。
30.权利要求24的方法，其中所述癌症表达PTEN突变体。
31.权利要求24的方法，其中所述癌症为激素受体阳性的(HR+)。
32.权利要求24的方法，其中所述患者为HER2阴性、ER(***受体)阴性和PR(孕酮受体)阴性的。
33.用于治疗性处置乳腺癌的试剂盒，其包含：
a)权利要求20的药物组合物；和
b)用于治疗性处置乳腺癌的说明书。
34.权利要求1-19中任一项的化合物用作治疗活性物质的用途。
35.权利要求1-19中任一项的化合物用于治疗癌症的用途，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、***、***癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡癌、未分化癌、***状癌、***瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、胰腺癌、骨髓样病症、淋巴瘤、毛细胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经***癌症、霍奇金癌、白血病、支气管癌、甲状腺癌、肝癌和肝内胆管癌、肝细胞癌、胃癌、胶质瘤/成胶质细胞瘤、子宫内膜癌、黑色素瘤、肾癌和肾盂癌、膀胱癌、子宫体癌、子***、多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、骨髓性白血病、口腔癌和咽癌、非霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤和绒毛结肠腺瘤。
36.权利要求1-19中任一项的化合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、***、***癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡癌、未分化癌、***状癌、***瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、胰腺癌、骨髓样病症、淋巴瘤、毛细胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经***癌症、霍奇金癌、白血病、支气管癌、甲状腺癌、肝癌和肝内胆管癌、肝细胞癌、胃癌、胶质瘤/成胶质细胞瘤、子宫内膜癌、黑色素瘤、肾癌和肾盂癌、膀胱癌、子宫体癌、子***、多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、骨髓性白血病、口腔癌和咽癌、非霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤和绒毛结肠腺瘤。
37.权利要求1-19中任一项的化合物，其用于治疗癌症，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、***、***癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡癌、未分化癌、***状癌、***瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、胰腺癌、骨髓样病症、淋巴瘤、毛细胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经***癌症、霍奇金癌、白血病、支气管癌、甲状腺癌、肝癌和肝内胆管癌、肝细胞癌、胃癌、胶质瘤/成胶质细胞瘤、子宫内膜癌、黑色素瘤、肾癌和肾盂癌、膀胱癌、子宫体癌、子***、多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、骨髓性白血病、口腔癌和咽癌、非霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤和绒毛结肠腺瘤。
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