CN112402515A

CN112402515A - 一种含虫类药中药提取物及其制剂的制备方法

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Publication number: CN112402515A
Application number: CN202011413789.5A
Authority: CN
Inventors: 郭麦平; 张艳侠; 周静; 朱小虎; 赵丹
Original assignee: Jiangsu Ehai Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Jiangsu Ehai Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2020-12-07
Filing date: 2020-12-07
Publication date: 2021-02-26

Abstract

一种含虫类中药组合物的制备方法：包括按处方称取熟大黄、土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬、干漆、桃仁、苦杏仁、黄芩、地黄、白芍、甘草，对上述药材饮片进行提取、粉碎，所得提取物、细粉混合、制剂；其中，虫类药按照以下步骤提取：（1）将虫类药粉碎为粗粉；（2）向粗粉中加入8～12倍量的水，真空减压使沸腾，温度50～70℃，提取1～3次，每次1～3小时，分离提取液和药渣；（3）向药渣中加入8～12倍量的水，升温至100℃，提取1～3次，每次1～3小时，分离提取液和药渣；（4）合并上这步骤中所得到的提取液，加入吸附剂，搅拌吸附，抽滤，保留滤液；滤液浓缩、干燥得到虫类药提取物。此外，本发明还提供了通过上述方法所得到的中药组合物和虫类提取物。本发明所提供的中药组合物具有活血化瘀，通经消痞的功效。

Description

一种含虫类药中药提取物及其制剂的制备方法

技术领域

本发明涉及一种具有活血破瘀、通经消痞作用的中药组合物、含虫类药提取物及其制备方法。

背景技术

闭经、月经痛、子宫肌瘤等妇科病是现代社会中的妇女常见病。它的危害性很大，发病部位在肝、胆。如果肝失疏泄，气机郁滞所表现的症候是肝所经过部位发生胀闷疼痛以及妇女***，肝气郁结，经气不利，故胸胁、***、小腹胀闷疼痛或窜动作痛，肝气郁结，不得调达疏泄，则情志郁结，久郁不解，失其柔顺舒畅之性。在中医的范畴上都属于血瘀症，气病及血，气滞血瘀，冲任不调，故***或经行腹痛，气聚血结，可酿成徵瘕。临床上的痛经、闭经、***以及肝炎、肝硬化、肝腹水，皆是由肝的疏泄功能减退、气机的疏通和畅达受到阻遏。临床上会出现血流不畅、停滞不前、经闭不行的症状。中医多采用活血化瘀类中成药制剂。大黄蛰虫胶囊就是治疗这类疾病的药物，具有活血化瘀、通经消痞之功效，受到了广大患者的好评。

中药是人们防病治病的特殊商品，不但要具有效性，更要保证用药安全性。近年来，全社会对药品安全关注度日益提升。虫类药在养殖、炮制、制剂、运输、贮存等过程中受到外源性有害物质的污染，也可能对使用者产生潜在的威胁。从毒性角度看，多难以表现出急性毒性，而具有蓄积中毒，隐蔽性强的特点；国际癌症研究机构于1993 年将黄曲霉毒素划定为I 类致癌物，其中黄曲霉毒素B1 被公认为致癌力最强的物质。黄曲霉毒素在体内主要分布在肝脏中，人体长期摄入含有黄曲霉毒素的食物容易患肝癌，并对其它多种组织器官也能造成严重损害。本发明在不改变处方的前提下，减少了服药的剂量，改善了服用口感，保证了成药的质量，提高了疗效，同时降低了虫类药材中重金属、黄曲霉素含量，更加适合病人。为市场上现有的治疗这类疾病的良药。

由于虫类药在开发与应用中存在许多难点，例如，多数活性成分不完全明确、提取精制方法尚不成熟、缺乏对照品等，所以在现有的生产工艺中一般都采用传统的直接粉碎法将虫类药制成药粉入药。但是传统的粉碎工艺存在以下问题：1）不能破坏虫类药的细胞结构，因此，药材中的有效成分难以穿过细跑摸充分释放和溶出； 2）由于机械热能的影响，粉碎过程中物料的温度可达 80℃以上，对虫类药的蛋白质类有效成分的稳定性造成负面影响；3）虫类药材不同部位的粉碎难易程度不同，因颗粒差异而导致混合不均匀，影响产品质量的均一性。4）虫类药材中的重金属，黄曲霉素无法去除，这些问题直接影响到药品药效成分的稳定性和人体的吸收，并且对人体的健康不利，从而使得药品疗效不能充分发挥。

在现有的中药制剂工艺中，对于虫类药材大多采用直接粉碎、水煎（95～ 100℃）、60% 乙醇温提（60℃）、食盐水温提（60℃）等。这些制备方法中，低温提取不能把有效成分提取完全，水煎、（95～100℃）则会破坏部分有效成分。同时，上述提取方法都不能降低虫类药材中的重金属及黄曲霉素的含量。

迄今为止，现有技术中尚未披露更为理想的降低虫类药重金属、黄曲霉素含量的提取技术，尤其是未披露过低温提取和高温提取相结合的虫类药提取技术。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服背景技术的技术缺陷，提供一种低重金属、黄曲霉素虫类药提取物及其制备方法。本发明以熟大黄、土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬、干漆、桃仁、苦杏仁、黄芩、地黄、白芍、甘草为原料，经提取、纯化、脱重金属、黄曲霉素、浓缩、干燥的虫类药提取物制备方法及中药组合物。减少了服药的剂量，改善了服用口感，保证了成药的质量，提高了疗效，同时降低了虫类药材中重金属、黄曲霉素含量，更加适合病人。为市场上现有的治疗这类疾病的良药。本发明工艺简单，易于操作，适合工业化生产。

经过长期的研究和实验，我们发现：对于土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬等虫类药采用低温提取所得到的有效成分是很有限的，远未达到充分和完全的程度；而经低温动态回流提取后（即利用真空***使之处于负压状态可将沸点降低，同时使溶媒在较低的温度下沸腾，避免了因温度过高使药材中的活性成分遭受破坏的弊病，可较快的提取药材中的热敏性成分，降低成本和对环境的污染，使生产周期缩短），再对药渣进行高温提取，所得到的提取物的药效比单纯的低温提取或直接粉碎有很大的提高，而且还可以减少服用量、降低对胃的刺激性。同时，经过该方法提取的虫类药提取物，重金属、黄曲霉素的含量较直接粉碎或单纯的低温提取大大降低。

因此，本发明的目的是在现有技术的基础上提供一种具有活血破瘀、通经消痞功效的中药组合物，低重金属、黄曲霉素虫类药提取物及其制备方法。

本发明所提供的具有活血破瘀血，通经消痞功效的中药组合物的制备方法包括：按照处方量分别称取熟大黄、土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬、干漆、桃仁、苦杏仁、黄芩、地黄、白芍、甘草，对上述原料药进行粉碎、提取，所得细粉混合、制剂；其中，所述土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬的提取包括以下步骤：（1）将虫类药粉碎为粗粉；（2）向粗粉中加入8～12倍量的水，真空减压使沸腾，温度50～70℃，提取1～3次，每次1～3小时，分离提取液和药渣；（3）向药渣中加入8～12倍量的水，升温至100℃，煎煮1～3次，每次1～3小时，分离提取液和药渣；（4）合并上这步骤中所得到的提取液，加入吸附剂，搅拌吸附，抽滤，保留滤液；滤液浓缩、干燥得到虫类药提取物。

本发明还提供了按照上述制备方法所制得的中药组合物产品，该产品所采用的剂型选自：片剂、口崩片、分散片、泡腾片、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、口服液、微丸剂、微囊剂、喷雾剂中的任意一种。

此外，本发明还提供了一种虫类药提取方法，该方法中所述虫类药由土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬组成，并包括以下提取步骤：（1）将虫类药粉碎为粗粉；（2）向粗粉中加入8～12倍量的水，真空减压使沸腾，温度50～70℃，提取1～3次，每次1～3小时，分离提取液和药渣；（3）向药渣中加入8～12倍量的水，升温至100℃，提取1～3次，每次1～3小时，分离提取液和药渣；（4）合并上这步骤中所得到的提取液，加入吸附剂，搅拌吸附，抽滤，保留滤液；滤液浓缩、干燥得到虫类药提取物。

相应地，本发明还提供了按照上述提取方法所制得的虫类药提取物，所述虫类药提取物的颜色为棕黄色至黑黄色，且气腥味咸。

下面对本发明所涉及的内容逐一进行详细说明。本发明所述中药组合物包括：熟大黄90～100克、土鳖虫8～11克、水蛭15～25克、虻虫10～20克、蛴螬10～20克、干漆 5～15克、桃仁30～50克、苦杏仁30～50克、黄芩15～25克、地黄90～100克、白芍30～50克和甘草20～50克。

在本发明所述的虫类药提取步骤中，对于土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬这四味药既可以单独提取，也可以共同提取。所述虫类药的提取步骤详细说明如下：

步骤1）：将上述虫类药粉碎为 18～40目的粗粉，优选24目的粗粉；

步骤2）：向粗粉中加入 8～12倍量的水，优选10倍量的水，真空减压使沸腾，温度50～70℃；提取 1～3次，优选2次；每次1-3小时，优选3小时；分离提取液和药渣。在具体制备过程中，该步骤采用低温减压水提。当采用低温水提时，提取温度优选60℃。提取过程是在减压条件下完成的，真空度可以为0.05 至 0.15 MPa，使水在低温的条件下沸腾，从而使得提取过程进行得更快、更完全；

步骤3）：向步骤（2）所得药渣中加入8～12倍量的水，优选10倍量的水；温度为100℃；提取1～3次，优选2次；每次1～3小时，优选每次2小时；分离提取液和药渣；

步骤4）：合并上述步骤中所得到的提取液，加入吸附剂，搅拌吸附，抽滤，保留滤液，并通过浓缩、干燥得到虫类药提取物。该步骤中所述吸附剂为活性炭与硅藻土的混合物；所述活性炭与硅藻土的混合物的量为1/20～1/30的步骤（1）所述药材量（m/m）；所述活性炭与所述硅藻土的比例为1:1～2:1（m/m）。所述的浓缩过程最好是在50～80℃下将提取液减压浓缩成密度为1. 05～1.20（70℃）的清膏；所述干燥过程最好是在50～70℃微波真空干燥或喷雾干燥。

在本发明所提供的中药组合物的制备方法中，所述干漆的制备可以是、但不限于如下方法中的任意一种：

取干漆饮片，粉碎成极细粉，过9号筛，备用；

在本发明所提供的中药组合物的制备方法中，所述桃仁、苦杏仁的提取可以是、但不限于如下方法中的任意一种：

-按处方量取桃仁、苦杏仁饮片，加10倍量水，提取2次，每次2小时，浓缩至相对密度为1.15～1.30（70℃）的清膏，微波真空干燥或喷雾干燥，制得桃仁、苦杏仁提取物；

-按处方量取桃仁、苦杏仁饮片，加10倍量80%乙醇回流提取2次，每次2小时，提取温度为90℃，合并提取液，回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.10～1.25（70℃）；药渣加10倍量水，提取2次，每次2小时，浓缩至相对密度为1.15～1.30（70℃），水提液与醇提液合并，微波真空干燥或喷雾干燥，制得桃仁、苦杏仁提取物；

在本发明所提供的中药组合物的制备方法中，所述熟大黄、黄芩、地黄、白芍、甘草的提取可以是、但不限于如下方法中的任意一种：

-按处方量取熟大黄、黄芩、地黄、白芍、甘草饮片，加10倍量水，提取3次，每次小时，合并提取液，浓缩至相对密度为1.15～1.20（70℃）的清膏，微波真空干燥或喷雾干燥，制得熟大黄、黄芩、地黄、白芍、甘草提取物；

按处方量取熟大黄、黄芩、地黄、白芍、甘草饮片，加10倍量水，提取3次，每次2小时，合并提取液，加乙醇使含醇量达70%，静置沉淀24小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.15～1.20（70℃）的清膏，微波真空干燥或喷雾干燥，制得熟大黄、黄芩、地黄、白芍、甘草提取物；

在上述药材的提取过程中，所述熟大黄提取物含芦荟大黄素（C₁₅H_l0O₅）、大黄酸（C₁₅H₈O₆、大黄素（C₁₅H₁₀0₅）、大黄酚（C₁₅H₁₀O₄）和大黄素甲醚（C₁₆H₁₂O₅）的总量计，不得少于0.6%；所述桃仁、苦杏仁提取物所含苦杏仁苷不少于3%；所述黄芩提取物所含黄芩苷（C₂₁H₁₈O₁₁）不得少于5.0%；所述白芍提取物所含芍药苷（C₂₃H₂₈O₁₁）不得少于1.0%；所述甘草提取物所含甘草苷（C₂₁H₂₁O₉）不得少于0.3%。

本发明所提供的中药组合物产品是按照上述方法制备得到的，该产品所采用的剂型可以是片剂、口崩剂等剂型中的任意一种。该产品中所用辅料选自：崩解剂、填充剂、润滑剂、粘合剂、吸附剂、分散剂、表面活性剂、混悬剂、防腐剂、着色剂、抗氧剂、助悬剂、润湿剂、增溶剂、抛射剂、包衣剂中的一种或一种以上的混合物。在本发明所提供的虫类药提取物中，所述虫类药由水蛭、土鳖虫、虻虫、蛴螬组成。对于这四味虫类药既可以单独提取，也可以共同提取。所这虫类药的提取步骤在前这内容中已详细说明，故这里不再重复。

与现有技术相比，由于本发明采用了低温提取与高温提取相结合的方法对虫类药进行充分提取，所得到的提取物的药效比单纯的低温提取有很大的提高，因而可显著减少虫类药的用量，同时通过该方法提取的虫类药提取物所含重金属黄曲霉素含量大大降低。本发明所提供的中药组合物产品，具有工艺先进、疗效确切、服用量小、低重金属、黄曲霉素的特点。通过药效学对比实验可以看出：本发明所提供的中药组合物产品具有更为理想的活血破瘀，通经消痞的功效，同时重金属、黄曲霉素的含量大大降低。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明所提供的方法及其产品予以进一步的说明，但并不因此而使本发明受到任何限制。

实施例 l

该实施例说明：按照原有制备方法制备的中药组合物的胶囊剂。

按处方量分别取熟大黄90.9g、土鳖虫9.1、水蛭18.2、虻虫13.6g、蛴螬13.6g、干漆9.1g、桃仁36.4g、苦杏仁36.4 g、黄芩 18.2g、地黄 90.9g、白芍36.4g、甘草27.3g，粉碎成细粉，过筛，混匀，制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。

实施例 2

该实施例说明：按照本发明所提供的方法制备的虫类药提取物及中药组合物的胶囊剂。

按处方量分别取熟大黄90.9g、土鳖虫9.1、水蛭18.2、虻虫13.6g、蛴螬13.6g、干漆9.1g、桃仁36.4g、苦杏仁36.4 g、黄芩18.2g、地黄90.9g、白芍36.4g、甘草27.3g。将土鳖虫、水蛭、虻虫粉碎成20目的粗粉，加10倍量的水，真空减压使沸腾，温度60℃，提取2次，每次 2小时，分离提取液和药渣；向药渣中加入10倍量的水，升温至100℃，提取3次，每次2小时，分离提取液和药渣；合并上述步骤中所得到的提取液，加入吸附剂，搅拌吸附，抽滤，保留滤液，在60℃下将滤液减压浓缩成密度为1.05～1.20（70℃）的清膏，喷雾干燥。将干漆粉碎成极细粉，过9号筛，备用；取桃仁、苦杏仁饮片，加10倍量80%乙醇回流提取2次，每次2小时，温度90℃，合并提取液，回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.10～1.25（70℃）；药渣加10倍量水，提取2次，每次1.5小时，浓缩至相对密度为1.15～1.30（70℃），水提液与醇提液合并，喷雾干燥；取熟大黄、黄芩、地黄、白芍、甘草饮片，加10倍水，提取3次，每次2小时，合并提取液，加乙醇使含醇量达70%，静置沉淀24小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.15～1.20（70℃）的清膏，喷雾干燥；将上述提取物及细粉混合均匀，制粒，干燥，装入胶囊，压成1000片，即得。

实施例3

该实施例说明：按照本发明所提供的方法制备的虫类药提取物及中药组合物的片剂。

按处方量分别取熟大黄90.9g、土鳖虫9.1、水蛭18.2、虻虫13.6g、蛴螬13.6g、干漆9.1g、桃仁36.4g、苦杏仁36.4 g、黄芩18.2g、地黄90.9g、白芍36.4g、甘草27.3g。将土鳖虫、水蛭、虻虫粉碎为30目的粗粉，加入8倍量的水；真空减压使沸腾，温度55℃，提取2次，每次2小时，分离提取液和药渣；向药渣中加入8倍量的水，升温至100℃，提取2次，每次2小时，分离提取液和药渣；合并上述步骤中所得到的提取液，加入吸附剂，搅拌吸附，抽滤，保留滤液，在60℃下将滤液减压浓缩成密度为1.05～1.20（70℃）的清膏，喷雾干燥；将干漆粉碎成极细粉，过9号筛，备用；取桃仁、苦杏仁饮片，加12倍80%乙醇回流提取2次，每次2小时，温度90℃，合并提取液，回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.10～1.25（70℃）；药渣加8倍量水，提取2次，每次2小时，浓缩至相对密度为1.15～1.30（70℃），水提液与醇提液合并，喷雾干燥；取熟大黄、黄芩、地黄、白芍、甘草饮片，加10倍水，提取2次，每次2小时，合并提取液，加乙醇使含醇量达70%，静置沉淀24小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.15～1.20（70℃）的清膏，喷雾干燥；将上述提取物及细粉混合均匀，制粒，干燥，压成1000片，即得。

实施例4

该实施例说明：按照本发明所提供的方法制备的虫类药提取物及中药组合物的滴丸剂。

按处方量分别取熟大黄90.9g、土鳖虫9.1、水蛭18.2、虻虫13.6g、蛴螬13.6g、干漆9.1g、桃仁36.4g、苦杏仁36.4 g、黄芩18.2g、地黄90.9g、白芍36.4g、甘草27.3g。将土鳖虫、水蛭、虻虫粉碎为20目的粗粉，加12倍量的水；真空减压使沸腾，温度65℃，提取2次，每次 2小时，分离提取液和药渣；向药渣中加入12倍量的水，升温至100℃，提取2次，每次2小时，分离提取液和药渣；合并上述步骤中所得到的提取液，加入吸附剂，搅拌吸附，抽滤，保留滤液，在70℃下将滤液减压浓缩成密度为1.05～1.20（70℃）的清膏，喷雾干燥。将干漆粉碎成极细粉，过9号筛，备用；取桃仁、苦杏仁饮片，加12倍量80%乙醇回流提取 2 次，每次 2小时，温度90℃，合并提取液，回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.10～1.25（70℃）；药渣加12倍量水，提取2次，每次2小时，浓缩至相对密度为1.15～1.30（70℃），水提液与醇提液合并，喷雾干燥；取熟大黄、黄芩、地黄、白芍、甘草饮片，加10倍水，提取2次，每次2小时，合并提取液，加乙醇使含醇量达70%，静置沉淀24小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.15～1.20（70℃）的清膏，喷雾干燥；取聚乙二醇6000适量，加热使熔化，与上述细粉混匀，滴制成1000丸，除去表面油迹，即得。

一、药理实验部分：

实验目的：通过不同的制备方法所得到的中药组合物对血小板聚集的抑制作用

1 材料与方法

1.1、试验药物采用实施例1所制备的胶囊剂S1，其给药剂量为0.6g生药/kg；采用实施例2所制备的胶囊剂S2，其给药剂量为0.3g生药/kg；采用实施例3所制备的片剂S3，其给药剂量为0.3g生药/kg，采用实施例4所制备的滴丸剂S4，其给药剂量为0.3g生药/kg，临用时用蒸馏水配成所需浓度的混悬液。 1.2、动物 SD大鼠，体重（240±22）g，雄性，SPF级，购于广东省医用实验动物场。 1.3、试剂与仪器盐酸肾上腺素注射液，北京永康药业有限公司，批号：19100241。 MDK 100血液流变仪，重庆麦迪克科技开发有限公司；BFM 6型贝利超微粉碎机，济南倍力粉技术工程有限公司。 1.4、方法大鼠60只随机分为 5组。以临床用量的9倍确定大鼠的给药剂量，实施例1的用量为900mg/kg·d，实施例2的量500mg /kg·d。实施例3的用量500mg /kg·d；实施例3的用为量500mg /kg·d。各给药组按上述剂量灌胃给药，空白对照组、模型对照组给予等容积的蒸馏水，容积为10ml/ kg，每天1次，连续7d。于第6天给药后1h，除空白对照组外, 其余各组均皮下注射盐酸肾上腺素 0. 8mg /kg，共2次，两次间隔4h，在第一次注射肾上腺素后2 h，将大鼠放入冰水中（2℃）游泳5 min，取出大鼠后擦干毛发的水, 复制大鼠血瘀证模型。次晨药后 2 h，用10%水合氯醛 300mg / kg腹腔注射麻醉，腹主动脉采血。

2.结果

2.1对全血黏度、血浆黏度的影响

取血3. 5ml 肝素抗凝，MDK 100血液流变仪测定全血黏度（包括高切 200/s、中切 30/s、低切 3/s）。模型组高、中、低切变率下的全血黏度均明显升高。实施例1～4的全血粘度都有不同程度的下降，其中实施例2～4在高、中、低切变率下的全血黏度下降幅度均比较大，与实施例1比较有非常显著性差异；实施例1在高、中、低切变率下的全血黏度仅有下降趋势。模型组血浆黏度明显升高。与模型组比较，实施例2～4的血浆黏度明显下降，有非常显著性差异；实施例1的血浆黏度仅有下降趋势。结果见表1。

表1 不同制备方法胶囊剂对全血黏度的影响（x±s,mPa·s）

与模型组比较 * P < 0. 05, * * P < 0. 01

2.2对血小板聚集的抑制作用

取血4ml，置含枸橼酸钠溶液（血液与枸橼酸钠溶液比例为 9:1）的硅胶离心管中，将血与抗凝剂轻轻混匀，800 r/min离心4min，吸出上层米黄色悬液即为富血小板血浆（PRP）。然后用3000 r/min再离心 8min，吸取上清液，制得贫血小板血浆（PPP）。以二磷酸腺苷（ADP，终浓度为 8μmol/L）为诱聚剂，采用比浊法测定各组血小板最大聚集百分率，并计算血小板聚集抑制率。血小板聚集抑制率（%）=（对照管血小板聚集率-给药管血小板聚集率）/对照管血小板聚集率×100%

与空白对照组相比，模型组血小板最大聚集率上升了33.04%，有显著性差异（P<0.01）。表明肾上腺素及冰水浴能使大鼠血小板最大聚集率大幅上升。实施例1抑制率18.53%，与模型组比较有显著性差异（P<0.05）。结果表明，实施例2～4对血小板聚集的抑制作用有优于实施例1的趋势。实施例2～4与实施例1有显著性差异, 表明实施例2～4优于实施例1（P<0.05），见表2。

表2 不同制备方法胶囊剂对血小板最大聚集的抑制作用（x±s）

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

二、效果实施例：

1、重金属及有害元素含量检测方法及结果：

1.1铅的测定（石墨炉法）

测定条件波长 283. 3nm，干燥温度 100～120℃，持续 20秒；灰化温度400～ 750℃，持续20～25秒；原子化温度 1700～2100℃，持续4～5秒。铅标准贮备液的制备精密量取铅单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制成每1ml含铅（Pb）1µg的溶液，即得（0～5℃贮存）。标准曲线的制备分别精密量取铅标准贮备液适量，用2%硝酸溶液制成每1ml分别含铅0ng、5ng、20ng、40ng、60ng、80ng的溶液。分别精密量取1ml，精密加含1%磷酸二氢铵和 0.2%硝酸镁的溶液0. 5ml，混匀，精密吸取20µ1注入石墨炉原子化器，测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备取供试品粗粉0. 5g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸3～5ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解炉内，进行消解。消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续缓缓浓缩至2～3ml，放冷，用水转入25ml 量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。同法同时制备试剂空白溶液。

测定法精密量取空白溶液与供试品溶液各1ml，精密加含1%磷酸二氢铵和0. 2%硝酸镁的溶液0.5ml，混匀，精密吸取10～20µ1，照标准曲线的制备项下方法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中铅（Pb）的含量，计算，即得。1.2. 镉的测定（石墨炉法）测定条件波长 228. 8nm，干燥温度100～120℃，持续20秒；灰化温度300～500℃，持续20～25秒；原子化温度1500～1900℃，持续4～5秒。镉标准贮备液的制备精密量取镉单元素标准溶液适，用2%硝酸溶液稀释，制成每1ml含镉（Cd）1µg的溶液，即得（0～5℃贮存）。标准曲线的制备分别精密量取镉标准贮备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml分别含镉0ng、0. 8ng、2.0ng、4. 0ng、6. 0ng、8.0ng的溶液。分别精密吸取10µ1，注入石墨炉原子化器，测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备取供试品粗粉0.5g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸 3～5ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解炉内，进行消解。消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续缓缓浓缩至2～3ml，放冷，用水转入25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。同法同时制备试剂空白溶液。测定法精密吸取空白溶液与供试品溶液各10～20µl，照标准曲线的制备项下方法测定吸光度（若供试品有干扰，可分别精密量取标准溶液、空白溶液和供试品溶液各1ml，精密加含1%磷酸二氢铵和 0. 2%硝酸镁的溶液0. 5ml，混匀，依法测定），从标准曲线上读出供试品溶液中镉（Cd）的含量，计算，即得。1.3砷的测定（氢化物法）测定条件采用适宜的氢化物发生装置，以含 1%硼氢化纳和0. 3%氢氧化纳溶液（临用前配制）作为还原剂，盐酸溶液（l →100）为载液，氮气为载气，检测波长为193. 7nm。砷标准贮备液的制备精密量取砷单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制成每1ml含砷（As）lµg的溶液，即得（0～5℃贮存）。标准曲线的制备分别精密量取碑标准贮备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml分别含砷0ng、5ng、l0ng、20ng、30ng、40ng的溶液。分别精密量取10ml，置25ml量瓶中，加25%碘化钾溶液（临用前配制）1ml，摇匀，加10%抗坏血酸溶液（临用前配制）1ml，摇匀，用盐酸溶液（20→100）稀释至刻度，摇匀，密塞，置80℃水浴中加热3分钟，取出，放冷。取适量，吸入氢化物发生装置，测定吸收值，以峰面积（或吸光度）为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备取供试品粗粉0. 5g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸 3～5ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解炉内，进行消解。消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续缓缓浓缩至 2～3ml，放冷，用水转入25ml 量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。同法同时制备试剂空白溶液。测定法精密吸取空白溶液与供试品溶液各10ml，照标准曲线的制备项下，自“加 25%碘化钾溶液（临用前配制）1ml”起，依法测定。从标准曲线上读出供试品溶液中砷（As）的含量，计算，即得。

1.4汞的测定（冷蒸气吸收法）

测定条件采用适宜的氢化物发生装置，以含0.5%硼氢化钠和 0.1%氢氧化钠的溶液（临用前配制）作为还原剂，盐酸溶液（1→100）为载液，氮气为载气，检测波长为253. 6nm。

汞标准贮备液的制备精密量取汞单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制成每1ml 含汞（Hg）1µg的溶液，即得（0～5℃贮存）。

标准曲线的制备别精密量取汞标准贮备液0ml、0. 1ml、0. 3ml、0. 5ml、0.7ml、0.9ml，置50ml量瓶中，20% 硫酸溶液10ml、5%高猛酸钾溶液0.5ml，摇匀，滴加5 %盐酸羟铵溶液至***恰消失，用水稀释至刻度，摇匀。取适量，吸入氢化物发生装置，测定吸收值，以峰面积（或吸光度）为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备取供试品粗粉0. 5g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸3～5ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解炉内进行消解。消解完全后，取消解内罐置电热板上，于120℃缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续浓缩至 2～3ml，放冷，加20%硫酸溶液2ml、5%高猛酸钾溶液0. 5ml，摇匀，滴加 5%盐酸羟铵溶液至***恰消失，转入10ml量瓶中，用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，必要时离心，取上清液，即得。同法同时制备试剂空白溶被。

测定法精密吸取空白溶液与供试品溶液适量，照标准曲线制备项下的方法测定。从标准曲线上读出供试品溶液中汞（Hg）的含量，计算，即得。

表3 实施例及对比例重金属含量结果汇总表

产品	铅（µg/g）	镉（µg/g）	砷（µg/g）	汞（µg/g）
					实施例1	7	0.4	4	0.3
实施例2	4	0.2	2	0.1
					实施例3	3	0.3	2	0.2
实施例4	4	0.3	1.5	0.2

2、黄曲霉素含量检测方法及结果：

色谱条件与***适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18 : 42）为流动相；采用柱后衍生法检测，①腆衍生法：衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟 0. 3ml，衍生化温度 70℃；②光化学衍生法：光化学衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发波长λex =360nm（或365nm），发射波长λex=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应于1. 5。混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1和黄曲霉毒素 G2标示浓度分别为 1.0µg/ ml、0. 3µg/ml、1.0µg/ml、0. 3µg /ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液。精密量取贮备溶液1ml，置 25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。供试品溶液的制备取供试品粉末约1g，精密称定，置于均质瓶中，加入氯化纳3g，精密加入70% 甲醇溶液 75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000r/min），离心5分钟（离心速度 4000r/ min），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，离心 10分钟（离心速度4000r/min），精密量取上清液 20ml，通过免疫亲合柱流速每分钟3ml，用水20ml 洗脱（必要时可以先用淋洗缓冲液10ml洗脱，再用水10ml洗脱），弃去洗脱液，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，2ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0. 22µm）滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取上述混合对照品溶液5µ1、10µ1、15µ1、20µ1、25µ1，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液 20～50µ1，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1和黄曲霉毒素 G2 的量，计算，即得。实施例1及实施例2黄曲霉素含量结果见表4。

表4 实施例及对比例黄曲霉素含量结果表

产品	黄曲霉毒素 B1（µg/kg）	黄曲霉毒素B2（µg/kg）	黄曲霉毒素G1（µg/kg）	黄曲霉毒素 G2（µg/kg）	总计（µg/kg）
						实施例1	3	3	1	2	9
实施例2	1	1	0	1	3
						实施例3	1	2	0	1	4
实施例4	2	1	1	1	5

Claims

1.一种中药组合物的制备方法，包括按处方量称取熟大黄、土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬、干漆、桃仁、苦杏仁、黄芩、地黄、白芍、甘草，对上述原料进行提取，所得提取物混合、制剂；其特征在于，所述土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬的提取包括以下步骤：（1）将虫类药粉碎为粗粉；（2）向粗粉中加入8～12倍量的水，真空减压使沸腾，温度50～70℃，提取1～3次，每次1～3小时，分离提取液和药渣；（3）向药渣中加入8～12倍量的水，升温至100℃，提取1～3次，每次1～3小时，分离提取液和药渣；（4）合并上这步骤中所得到的提取液，加入吸附剂，搅拌吸附，抽滤，保留滤液；滤液浓缩、干燥得到虫类药提取物。

2.按照权利要求1所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬单独提取或共同提取，且提取步骤如下：

步骤（1）：将上述虫类药粉碎为20～40目的粗粉；

步骤（2）：向粗粉中加入8～10倍量的水；真空减压使沸腾，温度50～70℃，提取2～3次，每次 1～2小时，分离提取液和药渣；该步骤在减压条件下水提；

步骤（3）：向步骤（2）所得药渣中加入8～10倍量的水，升温至100℃，提取2～3次，每次1～2小时，分离提取液和药渣；

步骤（4）：合并上述步骤中所得到的提取液，加入吸附剂，搅拌吸附，抽滤，保留滤液，在50～80℃下将滤液减压浓缩成密度为1.05～1.20（70℃）的清膏，喷雾干燥或微波真空干燥。

3.按照权利要求2所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述提取过程在减压条件下进行，真空度为-0.05至0.15Mpa；步骤（3）中所述提取过程在常压条件下进行；步骤（4）中所述吸附剂为活性炭与硅藻土的混合物；所述活性炭与硅藻土的混合物的量为1/20～1/30的步骤（1）所述药材量（m/m）；所述活性炭与所述硅藻土的比例为1:1～2:1（m/m）。

4.按照权利要求3 所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述熟大黄、干漆、桃仁、苦杏仁、黄芩、地黄、白芍、甘草的制备步骤如下：

（1）按处方量取干漆饮片，粉碎成极细粉，过九号筛；

（2）按处方量取桃仁、苦杏仁饮片，加10倍量80%乙醇回流提取 2 次，每次2小时，温度为90℃，合并提取液，回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.10～1.25（70℃）；药渣加8～10倍量水，提取2次，每次1～2小时，浓缩至相对密度为1.15～1.30（70℃），水提液与醇提液合并，微波真空干燥或喷雾干燥，制得桃仁、苦杏仁提取物；

（3）按处方量取熟大黄、黄芩、地黄、白芍、甘草饮片，加10倍量水，提取3次，每次2小时，合并提取液，加乙醇使含醇量达70%，静置沉淀24小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.15～1.20（70℃）的清膏，微波真空干燥或喷雾干燥，制得熟大黄、黄芩、地黄、白芍、甘草提取物。

5.一种按照权利要求1～4中任意一项所述方法制备的中药组合物产品，该产品所采用的剂型选自：片剂、口崩片、分散片、泡腾片、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、口服液、微丸剂、微囊剂、喷雾剂中的任意一种。

6.一种虫类药提取物的制备方法，其特征在于，所述虫类药由土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬组成，并包括以下提取步骤：（1）将虫类药粉碎为粗粉；（2）向粗粉中加入8～12倍量的水，真空减压使沸腾，温度50～70℃，提取1～3次，每次1～3小时，分离提取液和药渣；（3）向药渣中加入8～12倍量的水，升温至100℃，提取1～3次，每次1～3小时，分离提取液和药渣；（4）合并上这步骤中所得到的提取液，加入吸附剂，搅拌吸附，抽滤，保留滤液；滤液浓缩、干燥得到虫类药提取物。

7.按照权利要求6 所述的虫类药提取物的制备方法，其特征在于，所述土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬单独提取或共同提取；且提取步骤如下：

步骤（1）：将上述虫类药粉碎为20～40目的粗粉；

步骤（2）：向粗粉中加入8～12倍量的水；真空减压使沸腾，温度50～70℃，提取1～3次，每次 1～3小时，分离提取液和药渣；该步骤在减压条件下水提；

步骤（3）：向步骤（2）所得药渣中加入8～12倍量的水，升温至100℃，提取1-3次，每次 1～3小时，分离提取液和药渣；

步骤（4）：合并上述步骤中所得到的提取液，加入吸附剂，搅拌吸附，抽滤，保留滤液，在50～80℃下将滤液减压浓缩至相对密度为1.05～1.20（70℃）的清膏，喷雾干燥或微波真空干燥。

8.按照权利要求7所述的虫类药提取物的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所这提取过程是在真空度为 0.05至0.15MPa 的减压条件下进行的。

9.按照权利要求7 所述的虫类药提取物的制备方法，其特征在于，步骤（4）中所述吸附剂为活性炭与硅藻土的混合物；所述活性炭与硅藻土的混合物的量为1/20～1/30的步骤（1）所述药材量（m/m）；所述活性炭与所述硅藻土的比例为1:1～2:1（m/m）。

10.按照权利要求6～9 中任意一项所述的方法制备的虫类药提取物，其特征在于，所述虫类药提取物的颜色为棕色至棕褐色，且气腥味咸。