CN112293602A - 一种组合物及其在制备饲料添加剂和治疗家禽疾病的药物中的用途 - Google Patents

一种组合物及其在制备饲料添加剂和治疗家禽疾病的药物中的用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种组合物及其在制备饲料添加剂和治疗家禽疾病的药物中的用途。所述组合物是由以下重量份数的原料制得的：绿原酸0.1～20.0份，桃叶珊瑚苷0.5～1.5份，京尼平苷酸0.5～1.5份。实验结果表明，该组合物能够有效抑制AIV或NDV的体外增殖；该组合物作为家禽饲料添加剂，能够有效预防家禽疾病；对于感染了AIV或NDV的家禽，该组合物能够有效改善家禽的感染症状，降低家禽死亡率，对患有禽流感或新城疫的家禽具有明显的治疗效果。同时，该组合物还有效解决了传统抗病毒药物和抗生素治疗存在的副作用大、残留严重的问题。因此，本发明的组合物在制备抗病毒的药物或饲料添加剂、以及预防和/或治疗病毒引起的家禽疾病的药物或饲料添加剂中具有很好的应用前景。

Description

一种组合物及其在制备饲料添加剂和治疗家禽疾病的药物中 的用途
技术领域
本发明属于制药领域，具体涉及一种组合物及其在制备饲料添加剂和治疗家禽疾病的药物中的用途。
背景技术
随着经济的快速发展和和谐社会的构建，家禽养殖业得到了飞速的发展，但近年来，受各种因素的影响，家禽疾病的发生率越来越大，并且病毒在发展过程中，不断进行变异，这极大的增加了家禽疾病的治疗难度，对家禽养殖业的稳定发展造成很大的影响。家禽疾病的主要特点是传染性疾病比较流行，病毒变异快，多种疾病混合感染严重，病毒的耐药性增强，病毒的传染途径增多。常见的家禽疾病包括禽流感(AI)、新城疫(Newcas-tledisease，ND)等。
禽流感的病原为A型流感病毒，该病毒属正粘病毒科流感病毒属。其病程稍长则边纤维突然发病且无明显临床症状，病程稍长则表现明显的神经、消化、呼吸和生殖等综合病例，伴随食量减少、产蛋率下降，且易并发感染其他疾病，造成严重的经济损失。禽流感的禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)由8个独立节段构成的单股负链RNA组成。
新城疫俗称亚洲鸡瘟，是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的一种禽类急性烈性传染病，具有高度接触性和败血性等特征。鸡群感染NDV常出现高热、黏膜出血、呼吸困难及下痢等症状，发病急，病情重，且引起较高的死亡率。NDV基因组由一条不分节段的单股负链RNA组成。
我国作为最大的禽蛋生产国之一，根据不完全统计，在对养禽业有威胁的疾病中，传染病占75％，传染病中又以病毒性的传染病更为严重，危害更大。目前，因NDV和AIV引起的疾病给我国养禽业带来极大经济损失，威胁与制约着我国家禽养殖业的发展，如果防护、治疗不当就会引起巨大的损失。目前对于病毒性感染引发的疾病，主要是传统抗病毒西药治疗，但是由于很多传统抗病毒西药会在动物源性食品中以药物残留的形式通过食物链进入人体，一旦经常、大量摄入，就会产生神经毒性，增强流感病毒的耐药性，诱导其发生变异，影响身体健康。因此自2005年起，包括金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林阿昔洛韦、吗啉(双)胍(病毒灵)、利巴韦林等及其盐、酯的单、复方制剂等在内的西药已经全面禁用于食用动物，因此用于治疗家禽病毒性传染病的药物更多了一片空白。
目前，亟需开发出更多新的安全无毒、且能够有效的治疗家禽疾病的药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种安全无毒的组合物，及其在制备家禽饲料添加剂、以及预防和/或治疗家禽疾病(例如禽流感、新城疫等)的药物中的用途。
本发明提供了一种组合物，所述组合物是由以下重量份数的原料制得的：绿原酸0.1～20.0份，桃叶珊瑚苷0.5～1.5份，京尼平苷酸0.5～1.5份。
进一步地，所述组合物是由以下重量份数的原料制得的：绿原酸0.2～18.0份，桃叶珊瑚苷0.8～1.0份，京尼平苷酸1.0份。
进一步地，所述组合物是由以下重量份数的原料制得的：绿原酸18.0份，桃叶珊瑚苷1.0份，京尼平苷酸1.0份。
本发明还提供了一种药物或饲料添加剂，它是以上述组合物为活性成分，加上药学领域或饲料领域可接受的辅料制得的制剂。
进一步地，所述药物或饲料添加剂中，上述组合物的含量为0.05wt.％～5.00wt.％，优选0.10wt.％～5.00wt.％，更优选为0.10wt.％～1.00wt.％。
本发明还提供了上述组合物在制备预防和/或治疗家禽疾病的药物或饲料添加剂中的用途。
进一步地，所述家禽疾病为禽流感、新城疫中的一种或多种；或，所述饲料添加剂为家禽饲料添加剂。
进一步地，所述家禽为鸡或鸭。
本发明还提供了上述组合物在制备抗病毒的药物或饲料添加剂中的用途。
进一步地，所述病毒为禽流感病毒、新城疫病毒中的一种或多种；或，所述饲料添加剂为家禽饲料添加剂；
优选的，所述家禽为鸡或鸭。
实验结果表明，本发明组合物能够有效抑制感染AIV或NDV的鸡胚成纤维细胞的细胞病变，有效抑制AIV或NDV的体外增殖。本发明组合物作为家禽饲料添加剂，还能够明显改善家禽生病情况，有效预防家禽疾病；而且，对于感染了AIV或NDV的家禽，本发明组合物能够有效改善家禽的感染症状，降低家禽死亡率，对患有禽流感或新城疫的家禽具有明显的治疗效果。同时，本发明组合物还有效解决了传统抗病毒药物和抗生素治疗存在的副作用大、残留严重的问题。因此，本发明的组合物在制备抗病毒的药物或饲料添加剂、以及预防和/或治疗病毒引起的家禽疾病的药物或饲料添加剂中具有很好的应用前景。
本发明的组合物原料易得，制备方法简单，适合工业化生产。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
实施例1 本发明组合物1
处方：绿原酸90g，桃叶珊瑚苷5g，京尼平苷酸5g。
制法：按照处方称取绿原酸、桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸，混合均匀后，分装成散剂。
实施例2 本发明组合物2
处方：绿原酸10g，桃叶珊瑚苷40g，京尼平苷酸50g。
制法：按照处方称取绿原酸、桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸，混合均匀后，分装成散剂。
实施例3 本发明组合物3
处方：绿原酸55g，桃叶珊瑚苷20g，京尼平苷酸25g。
制法：按照处方称取绿原酸、桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸，混合均匀后，分装成散剂。
实施例4 添加了本发明组合物的饲料
将实施例1制得的组合物1添加到饲料中，使组合物1占饲料总质量的0.05％，混合均匀，即得。
实施例5 添加了本发明组合物的饲料
将实施例1制得的组合物1添加到饲料中，使组合物1占饲料总质量的0.1％，混合均匀，即得。
实施例6 添加了本发明组合物的饲料
将实施例1制得的组合物1添加到饲料中，使组合物1占饲料总质量的1％，混合均匀，即得。
实施例7 添加了本发明组合物的饲料
将实施例1制得的组合物1添加到饲料中，使组合物1占饲料总质量的5％，混合均匀，即得。
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
实验例1 本发明药物对NDV和AIV的体外增殖抑制试验
1试验材料
1.1药物
分别称取实施例1、2、3制得的组合物1、2、3和绿原酸原料药，用无菌生理盐水配制成1mg/ml药物溶液，作为药物溶液1、2、3、4，分别过滤除菌，2～4℃保存备用。
1.2细胞与病毒
(1)鸡胚成纤维细胞(CEF)单层制备：无菌取出9—11日龄鸡胚，剪去胚头、爪、翅和内脏，用含有双抗(青霉素100IU/ml、链霉素100IU/ml)的Hank’s液反复冲洗2～3次，剪成1mm2大小碎块，在37℃条件下用0.25％胰蛋白酶消化组织块20min，然后倾去上层胰酶并用Hank's液洗涤2～3次，用含5％新生牛血清DMEM培养液终止消化，8层无菌纱布过滤，制成1×106/ml的CEF细胞悬液，加至96孔细胞培养板中，0.2ml/孔，37℃5％二氧化碳细胞培养箱中培养至细胞长成致密单层，备用。
(2)病毒：禽流感病毒(H9N2)亚型AIV株，由山东省农业科学院家禽研究所禽病研究室提供；新城疫病毒NDV-D90株来自于中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。
2试验方法
2.1病毒滴定
待CEF长成致密单层后，弃去细胞培养上清液，分别加入已经在SPF鸡胚尿囊增殖的病毒DNV、AIV，用细胞维持液(含2％心声小牛血清的MEM)连续10倍稀释，依次稀释8个稀释度，每一稀释度设4个复孔，并设细胞对照，37℃5％二氧化碳培养3天，观察细胞病变(CPE)。
2.2药物对CEF的毒性测定
用细胞维持液分别将药物做连续梯度系列稀释后(1000μg/ml，500μg/ml，250μg/ml，125μg/ml，62.5μg/ml，31.25μg/ml，15.625μg/ml)接种于已形成单层的CEF中，每孔100微升，每一稀释度重复4孔，以正常细胞维持液代替药物作为正常细胞对照，37℃5％二氧化碳孵育。动态观察结果，记录药物产生的CPE。
2.3药物对DNV、AIV体外增殖的抑制作用
待CEF长成致密单层后，弃去细胞培养上清液，分别加入100TCID50病毒液，每孔100微升，37℃吸附2小时，吸去病毒，用磷酸盐缓冲液洗2次，洗去游离病毒，加入最大无毒浓度的药液，37℃5％二氧化碳培养3天，观察结果并记录CPE。试验设实验组(分别加药物溶液1、2、3)，病毒对照组(只加病毒)，细胞空白对照组(只加细胞维持液)。
3结果
3.1病毒滴定
按Reed-Muene小时法测定NDV、AIV对CEF的半数组织培养感染剂量(TCID50)，分别为1×10-5/0.1ml，1×10-5/0.1ml，各分装0.5ml/瓶作为种毒，零下70℃保存。
3.2药物对CEF的毒性测定
按Reed-Muene小时法计算CPE不再进展时(72小时)，组合物1的最大无毒浓度(TD0)为500μg/ml；组合物2的最大无毒浓度(TD0)为500μg/ml；组合物3的最大无毒浓度(TD0)为500μg/ml；绿原酸原料药的最大无毒浓度(TD0)为500μg/ml。
3.3药物对NDV、AIV体外增殖的抑制作用
表1组合物1、组合物2、组合物3、绿原酸原料药对感染NDV的CEF的细胞病变的影响
Figure BDA0002753161660000041
Figure BDA0002753161660000051
注：出现75％以上细胞病变记为+++，50％以上细胞病变记为++，25％以上细胞病变记为+，无病变记为-。
表2组合物1、组合物2、组合物3、绿原酸原料药对感染AIV的CEF的细胞病变的影响
Figure BDA0002753161660000052
注：出现75％以上细胞病变记为+++，50％以上细胞病变记为++，25％以上细胞病变记为+，无病变记为-。
由表1可知，绿原酸原料药对感染NDV的鸡胚成纤维细胞的细胞病变抑制作用很弱，而组合物1、组合物2、组合物3均能有效抑制感染NDV的鸡胚成纤维细胞的细胞病变。与病毒对照组相比，加入组合物1、组合物2、组合物3的实验组均能有效抑制NDV的体外增殖，特别是组合物1，其对NDV的体外增殖的抑制效果最佳。
由表2可知，绿原酸原料药对感染AIV的鸡胚成纤维细胞的细胞病变抑制作用很弱，而组合物1、组合物2、组合物3均能有效抑制感染AIV的鸡胚成纤维细胞的细胞病变。与病毒对照组相比，加入组合物1、组合物2、组合物3的实验组均能有效抑制AIV的体外增殖，特别是组合物1，其对AIV的体外增殖的抑制效果最佳。
因此，本发明的组合物1、2、3，特别是组合物1可以用来制备家禽饲料添加剂和抗NDV、AIV病毒的药物。
实验例2 本发明组合物作为饲料添加剂对预防家禽疾病的效果
1实验方法
雏鸡、雏鸭分成5组，每组鸡鸭各100只，1～4组分别以混入了0.05％、0.1％、1％、5％重量比例的组合物1的饲料连续30日饲喂，未采用其它防疫措施；另设空白对照组采取正常日常饲料(即添加组合物1前的饲料)喂养，同时不采取其他防疫措施，其他饲养环境一致。
观察各组鸡鸭情况：无异常计0；有异常状态，生病或死亡计1例，累计经观察30日。
2实验结果
表3鸡预防饲养30天试验结果
Figure BDA0002753161660000061
表4鸭预防饲养30天试验结果
Figure BDA0002753161660000062
结果如表3、表4所示。经30日观察累计统计，0.1％、1％、5％比例组鸡群、鸭群均无疫病发生，家禽精神良好、饮食饮水正常，行动迅捷无异样，无黄、绿稀粪便。0.05％比例组，鸡群第20天有2只白稀粪便，鸭群第15天出现3只白稀粪便，后面自然转好。空白对照组，鸡群第10天出现2只精神萎靡，第15天出现6只拉白稀粪便与3只精神萎靡，第20天出现2只厌食，7只拉白稀粪便与3只精神萎靡，第30天出现3只厌食，3只拉绿稀便，10只拉白稀粪便与4只精神萎靡；鸭群第10天出现1只拉白稀便，第15天出现3只拉白稀粪便与2只精神萎靡，第20天出现2只厌食，5只拉白稀粪便与4只精神萎靡，第30天出现3只厌食，2只拉绿稀便，6只拉白稀粪便与5只精神萎靡。
结果表明以本发明的组合物1作为饲料添加剂加入饲料喂养，能够明显改善家禽生病情况，有效预防家禽疾病。并且，本发明组合物1在饲料中的添加量以0.1wt.％～5wt.％为宜。
实验例3 本发明组合物作为饲料添加剂对NDV人工感染家禽的治疗效果
1实验方法
通过点眼、滴鼻的方式对16日龄的鸡、鸭进行攻毒接种，建立新城疫病毒(NDV)人工感染16日龄鸡、鸭模型。
然后将NDV人工感染16日龄鸡、鸭模型分成5组，每组鸡鸭各10只，其中1组不采取治疗措施，正常饮食饮水；2、3、4、5组分别以混入了0.05％、0.1％、1％、5％重量比例的组合物1的饲料喂养，其他条件正常，每日观察两次，观察各组鸡、鸭是否出现精神萎顿、行动缓慢、厌食、白色下痢、羽毛松乱等感染症状。
2实验结果
接种后前两天，各试验组均表现正常。详细结果如表5、表6所示。
表5本发明组合物1作为饲料添加剂对NDV人工感染鸡群的治疗效果
Figure BDA0002753161660000071
表6本发明组合物1作为饲料添加剂对NDV人工感染鸭群的治疗效果
Figure BDA0002753161660000072
鸡群：第三天第1组有3只表现出精神萎顿、行动缓慢、厌食、白色下痢、羽毛松乱等感染症状；第2组也有2只鸡也出现第一组类似感染症状；第3、4、5组全部鸡正常。第四天第1组表现出精神萎顿、行动缓慢、厌食、白色下痢、羽毛松乱等感染症状的鸡增加到5只，其中有3只鸡同时出现严重的神经症状和呼吸道症状，表现为头颈扭曲、转圈、呼吸困难、有罗音等症状；第2组表现出精神萎顿、行动缓慢、厌食、白色下痢、羽毛松乱等症状的鸡增增加到3只；第3、4、5组全部鸡正常。第5天第1组开始有鸡死亡，有2只鸡死亡，出现精神萎顿、行动缓慢、厌食、白色下痢、羽毛松乱等症状的鸡增加到7只；第2组表现出精神萎顿、行动缓慢、厌食、白色下痢、羽毛松乱等症状的鸡增加到4只；第3、4、5组分别有1只鸡开始出现轻微症状，精神萎靡，拉绿稀便的症状。第6天第1组死亡4只鸡，存活的鸡中出现精神萎顿、行动缓慢、厌食、白色下痢、羽毛松乱等症状的为5只；第2组表现出精神萎顿、行动缓慢、厌食、白色下痢、羽毛松乱等症状的鸡有5只，其中一只较为严重，其余4只较轻；第3、4、5组出现精神萎顿、行动缓慢、厌食、白色下痢、羽毛松乱等症状的鸡还是1只，且有所好转。第7天第1组死亡鸡数量为5只，存活的鸡中出现精神萎顿、行动缓慢、厌食、白色下痢、羽毛松乱等症状的为5只；第2、3、4、5组出现感染症状的鸡数量未增加。到ll天，第1组鸡全部死亡。到12天，第2组鸡死亡1只，其余均好转为正常无症状。
鸭群：第五天第1组有2只表现出精神萎顿、行动缓慢、厌食、白色下痢、羽毛松乱等症状；第2、3、4、5组正常。第六天第1组有3只鸭出现感染症状，第2组有1只鸭出现轻微症状，第3、4、5组鸭群正常。第7天第1组有4只鸭出现感染症状，第2组还是1只有感染症状，未增加。第9天第1组有1只鸭症状加剧严重，另外有3只症状有好转。到12天时，第1组1只鸭死亡，其余3只症状有好转，第2组有症状的1只鸭好转为正常，第3、4、5组均正常无症状。
结果显示，以本发明组合物1作为饲料添加剂加入饲料中喂养，能够有效改善感染了新城疫病毒的家禽的感染症状，降低家禽死亡率，对患有新城疫病的家禽具有明显的治疗效果。并且，本发明组合物1在饲料中的添加量以0.1wt.％～5wt.％为宜。
实验例4本发明组合物作为饲料添加剂对AIV人工感染家禽的治疗效果
1实验方法
通过点眼、滴鼻的方式对16日龄的鸡、鸭进行攻毒接种，建立禽流感病毒(AIV)人工感染16日龄鸡、鸭模型。
然后将AIV人工感染16日龄鸡、鸭模型分成5组，每组鸡鸭各10只，其中1组不采取治疗措施，正常饮食饮水；2、3、4、5组分别以混入了0.05％、0.1％、1％、5％重量比例的组合物1的饲料喂养，其他条件正常，每日观察两次，观察各组鸡、鸭是否出现感染症状。
2实验结果
接种后前两天，各试验组均表现正常。详细结果如表7、表8所示。
表7本发明组合物1作为饲料添加剂对AIV人工感染鸡群的治疗效果
Figure BDA0002753161660000081
表8本发明组合物1作为饲料添加剂对AIV人工感染鸭群的治疗效果
Figure BDA0002753161660000082
Figure BDA0002753161660000091
鸡群：第四天第1组有3只表现出黄白稀绿散状粪便，站着闭眼(发烧)，鸡冠发紫，蛋壳颜色变淡或成白色，笼位采食量下降，剩料的情况；第2组也有2只鸡也出现第一组类似情况，第3、4、5组全部鸡正常。第五天第1组开始前述症状的鸡增多至6只，其中有4只鸡出现严重的症状：神经症状和呼吸道症状，表现为头颈扭曲、转圈、呼吸困难、有罗音等症状，采食量严重下降，有的接近绝食、绝产；第2组3只出现症状，第3、4、5组全部鸡正常。第6天第1组开始有鸡死亡，有2只鸡死亡，出现症状的鸡增加到7只；第2组还是3只鸡出现症状，其中1只症状加剧；第3、4、5组均正常。第7天第1组死亡4只，有症状的为6只；第2组还是3只有症状，其中1只症状严重，其余2只症状较轻，第3、4、5组全部鸡正常。到ll天时，第1组鸡死亡7只，剩余3只鸡有轻微症状且渐渐好转，第2组鸡死亡1只，其余均好转为正常无症状，第3、4、5组全部鸡正常。
鸭群：第五天第1组有3只表现出黄白稀绿散状粪便，站着闭眼(发烧)，鸡冠发紫，蛋壳颜色变淡或成白色，笼位采食量下降，剩料的情况；第2组也有1只鸭也出现第一组类似情况，第3、4、5组正常。第六天第1组有5只鸭出现症状，其中1只较为严重；第2组有2只鸭出现症状，第3、4、5组鸭群正常。第7天第1组死亡一只，有9只鸭有症状；第2组有3只鸭出现症状，第3、4、5组鸭群正常。第12天第1组有8只死亡，2只症状慢慢好转；第2组死亡1只，另外有症状的2只也好转，第3、4、5组均正常无症状。
结果显示，以本发明组合物1作为饲料添加剂加入饲料中喂养，能够有效改善感染了禽流感病毒的家禽的感染症状，降低家禽死亡率，对患有禽流感的家禽具有明显的治疗效果。并且，本发明组合物1在饲料中的添加量以0.1wt.％～5wt.％为宜。
综上，本发明提供了一种组合物及其在制备饲料添加剂和治疗家禽疾病的药物中的用途。实验结果表明，本发明组合物能够有效抑制感染AIV或NDV的鸡胚成纤维细胞的细胞病变，有效抑制AIV或NDV的体外增殖。本发明组合物作为家禽饲料添加剂，还能够明显改善家禽生病情况，有效预防家禽疾病；而且，对于感染了AIV或NDV的家禽，本发明组合物能够有效改善家禽的感染症状，降低家禽死亡率，对患有禽流感或新城疫的家禽具有明显的治疗效果。同时，本发明组合物还有效解决了传统抗病毒药物和抗生素治疗存在的副作用大、残留严重的问题。因此，本发明的组合物在制备抗病毒的药物或饲料添加剂、以及预防和/或治疗病毒引起的家禽疾病的药物或饲料添加剂中具有很好的应用前景。

Claims (10)

1.一种组合物，其特征在于：所述组合物是由以下重量份数的原料制得的：绿原酸0.1～20.0份，桃叶珊瑚苷0.5～1.5份，京尼平苷酸0.5～1.5份。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物是由以下重量份数的原料制得的：绿原酸0.2～18.0份，桃叶珊瑚苷0.8～1.0份，京尼平苷酸1.0份。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于：所述组合物是由以下重量份数的原料制得的：绿原酸18.0份，桃叶珊瑚苷1.0份，京尼平苷酸1.0份。
4.一种药物或饲料添加剂，其特征在于：它是以权利要求1～3任一项所述组合物为活性成分，加上药学领域或饲料领域可接受的辅料制得的制剂。
5.根据权利要求4所述的药物或饲料添加剂，其特征在于：所述药物或饲料添加剂中，权利要求1～3任一项所述组合物的含量为0.05wt.％～5.00wt.％，优选0.10wt.％～5.00wt.％，更优选为0.10wt.％～1.00wt.％。
6.权利要求1～3任一项所述组合物在制备预防和/或治疗家禽疾病的药物或饲料添加剂中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述家禽疾病为禽流感、新城疫中的一种或多种；或，所述饲料添加剂为家禽饲料添加剂。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述家禽为鸡或鸭。
9.权利要求1～3任一项所述组合物在制备抗病毒的药物或饲料添加剂中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述病毒为禽流感病毒、新城疫病毒中的一种或多种；或，所述饲料添加剂为家禽饲料添加剂；
优选的，所述家禽为鸡或鸭。
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