CN112195186B - SlBBX20基因在调控番茄灰霉病抗性方面的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及SlBBX20基因在调控番茄灰霉病抗性方面的应用，通过提高SlBBX20在番茄中的表达来降低番茄的灰霉病抗性，通过降低或消除SlBBX20在番茄中的表达来提高番茄的灰霉病抗性。与现有技术相比，本发明的有益效果在于：(1)利用基因编辑技术获得灰霉病抗性强的植株，较传统的育种方法更经济、有效，是一种创建抗病材料的好方法，大大缩短了育种年限；(2)与传统防治方法相比，本发明的SlBBX20敲除株系对灰霉病的抗性显著增强，可以减少农药的使用量，保护了环境；(3)提供了降低灰霉病抗性的植株及方法，为后续灰霉病的研究及防治提供素材。

Description

SlBBX20基因在调控番茄灰霉病抗性方面的应用

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及SlBBX20基因在调控番茄灰霉病抗性方面的应用。

背景技术

灰霉菌是一种广谱性的病原真菌，其寄主可达二百多种，并且可以入侵植物的花、茎、叶和果实等器官，每年对世界果蔬的产量和品质造成巨大威胁。灰霉菌是一种腐生型病原菌，入侵植物后会分泌一些有毒物质并利用自身防御机制来破坏宿主细胞，获取营养，进行自身繁殖。

灰霉病作为世界第二大真菌性病害，给农业生产造成了很大的损失。国内对灰霉菌的防治大多数还停留在针对灰霉菌的生物学特性研究方面，生产上采用农业防治、生物防治、化学防治的方法。例如，选用无病床育苗、高温闷棚、合理施肥、加强栽培管理，实施轮作换茬和生态防治等防治方法虽然有一定效果，但是受到多方面因素的影响，效果不是太好，生产上则主要以化学防治为主。但化学防治不仅影响我们的食品品质，还会对环境造成危害，因此培育抗病品种尤为重要。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了SlBBX20基因在调控番茄灰霉病抗性方面的应用。

具体技术方案如下：

SlBBX20基因在调控番茄灰霉病抗性中的应用。

与现有技术相比，采用SlBBX20基因调控番茄灰霉病抗性，可制备不同灰霉病抗性的植株。

进一步，通过降低或消除SlBBX20在番茄中的表达来提高番茄的灰霉病抗性；所述SlBBX20基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步，通过在番茄中转入选自所述包含SlBBX20基因ORF的片段提高所述SlBBX20基因的表达水平，所述包含SlBBX20基因ORF的片段序列如SEQ ID NO.2所示。

进一步，通过基因编辑使所述SlBBX20基因发生突变，敲除番茄中的所述SlBBX20基因。

一种番茄抗灰霉病基因，其不同之处在于，所述番茄抗灰霉病基因由上述的SlBBX20基因发生突变制备而得，所述SlBBX20基因如SEQ ID NO.1所示。

进一步，所述SlBBX20基因发生突变的片段包括SlBBX20基因第一靶点片段和/或SlBBX20基因第二靶点片段，所述SlBBX20基因第一靶点片段序列如SEQ ID NO.3所示，所述SlBBX20基因第二靶点片段序列如SEQ ID NO.4所示。

与现有技术相比，本发明提供了可提高番茄灰霉病抗性的SlBBX20突变基因。

一种SlBBX20基因敲除载体，其不同之处在于，所述SlBBX20基因敲除载体包括SlBBX20基因第一靶点片段及SlBBX20基因第二靶点片段，所述SlBBX20基因第一靶点片段序列如SEQ ID NO.3所示，所述SlBBX20基因第二靶点片段序列如SEQ ID NO.4所示。

进一步，利用靶点引物扩增出含有所述SlBBX20基因第一靶点片段及所述SlBBX20基因第二靶点片段的待转入基因片段，将所述待转入基因片段***线性化的转入载体中，进行连接后，转入大肠杆菌，经过抽提后得到所述重组载体。

进一步，所述SlBBX20基因第一靶点片段的引物序列如SEQ ID NO.5所示，所述SlBBX20基因第二靶点片段的引物序列如SEQ ID NO.6所示。

进一步，所述转入载体为PTX041质粒，使用BsaI将PTX041质粒酶切进行线性化处理。

与现有技术相比，本发明提供了可敲除SlBBX20基因的敲除载体，可使用该载体敲除SlBBX20基因，以此提高植株的灰霉病抗性。

一种提高番茄植株的灰霉病抗性的方法，其不同之处在于，所述提高番茄植株的灰霉病抗性的方法包括：

步骤S1:将上述SlBBX20基因敲除载体转入农杆菌；

步骤S2:将转入所述SlBBX20基因敲除载体的农杆菌浸染番茄植株。

与现有技术相比，本发明利用SlBBX20基因敲除载体敲除SlBBX20基因获得灰霉病抗性强的植株，较传统的育种方法更经济、有效，是一种创建抗病材料的好方法，大大缩短了育种年限；SlBBX20敲除株系对灰霉病的抗性显著增强，可以减少农药的使用量，保护了环境。

一种降低番茄植株的灰霉病抗性的方法，其不同之处在于，所述降低番茄植株的灰霉病抗性的方法包括：

步骤A1：将带有包含SlBBX20基因ORF的的载体转入农杆菌；

步骤A2：将转入所述SlBBX20基因敲除载体的农杆菌浸染番茄植株；所述包含SlBBX20基因ORF的，序列如SEQ ID NO.2所示。

进一步，包含SlBBX20基因ORF包含SlBBX20基因ORF的载体制备方法包括：

利用包含SlBBX20基因ORF的引物，以番茄植株基因为模板，扩增出所述包含SlBBX20基因ORF；所述包含SlBBX20基因ORF的前引物如SEQ ID NO.7所示，所述包含SlBBX20基因ORF的后引物如SEQ ID NO.8所示；将所述包含SlBBX20基因ORF转入线性化的pHellsgate8载体，连接后转入至大肠杆菌，提取，即得包含SlBBX20基因ORF包含SlBBX20基因ORF的载体。

进一步，番茄植株基因的制备方法包括：提取番茄中总的RNA，然后利用反转录合成番茄基因，所述番茄基因的序列如SEQ ID NO.9所示。

进一步，采用XhoI和XbaI酶切使所述pHellsgate8载体线性化。

本发明通过转入SlBBX20基因的ORF片段，提供了降低灰霉病抗性的植株及方法，为后续灰霉病的研究及防治提供素材。

附图说明

图1为SlBBX20-OE的T0代株系SlBBX20基因超量表达水平分析；

图2为SlBBX20-CR纯合株系中SlBBX20基因编辑情况的比对分析附图中；

图3为SlBBX20的超量与敲除的番茄植株叶片接种灰霉菌72h的发病情况；

图4为SlBBX20的超量与敲除番茄植株接种灰霉菌72h的病斑统计；

图5抗病材料TS179接种灰霉菌72h的发病情况；

图6感病材料TS100接种灰霉菌72h的发病情况；

图7 SlBBX20在抗病材料TS179中的灰霉菌诱导表达谱；

图8 SlBBX20在感病材料TS100中的灰霉菌诱导表达谱。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1

SlBBX20基因在抗感灰霉病材料中的灰霉菌诱导表达谱

对抗灰霉病材料TS179(品种选自TGRC，美国番茄遗传资源中心)和感灰霉病材料TS100(品种选自TGRC，美国番茄遗传资源中心)进行播种，生长4周大小的苗子进行灰霉菌接种实验。分别拍照观察抗病材料TS179(见图5)和感病材料TS100(见图6)接种灰霉菌72h的发病情况。在抗病材料TS179中病斑较小，而在感病材料TS100接种灰霉菌72h后病斑有很大的扩散。在接种灰霉菌的不同时间点(0h，24h，48h和72h)取样，提取RNA，反转录成cDNA，并进行实时荧光定量PCR实验检测SlBBX20在抗病材料TS179(见图7)和感病材料TS100(见图8)中的灰霉菌诱导表达水平。感病材料TS100中接种灰霉菌72h后SlBBX20基因会被极大地诱导表达，而在抗病材料TS179中诱导表达水平较低。

反转录体系如下：

(1)

RNase free ddH₂O to 16μL

4*gDNAwiperMix 4μL

模板RNA 1μg

用移液器轻轻吹打混匀，42℃2min。

(2)

在第一步的反应管中直接加入5*HiScript II Qrt SuperMix II 4μL,用移液器轻轻吹打混匀，50℃15min,85℃5s。该程序结束后可获得cDNA，产物可直接用于qPCR反应。

实施例2

SlBBX20基因敲除载体的制备

在SGN(https://www.sgn.cornell.edu/search/locus)网站上搜索SlBBX20基因的DNA序列，将该基因的DNA序列输入到CRISPR设计网站中(http://crispr.hzau.edu.cn/cgi-bin/CRISPR2/CRISPR)，根据脱靶率等选择两个合适的靶点：包括SlBBX20基因第一靶点片段及SlBBX20基因第二靶点片段，所述SlBBX20基因第一靶点片段序列如SEQ ID NO.3所示，所述SlBBX20基因第二靶点片段序列如SEQ ID NO.4所示。

基因合成含有两个靶点的引物，所述SlBBX20基因第一靶点片段的引物序列如SEQID NO.5所示，所述SlBBX20基因第二靶点片段的引物序列如SEQ ID NO.6所示。

用人工合成的包含靶点序列的引物，以pCBC_DT1T2_SlU6p质粒为模板(来自中国农科院蔬菜花卉研究所崔霞课题组，Song J,Zhang S,Wang X,et al.Variations in BothFTL1 and SP5G,Two Tomato FT Paralogs,Control Day-Neutral Flowering[J].Molecular Plant,2020,13(7))扩增含有两个靶点的PCR片段。

扩增体系如下：

扩增条件如下：

扩增程序2～4，扩增34个循环，其余均为1个循环。

以BsaI单酶切pTX041载体(由中国科学院遗传与发育生物研究所李传友所在课题组提供，Deng,L.,Wang,H.,Sun,C.,Li,Q.,Jiang,H.,Du,M.,Li,C.-B.and Li,C.(2018)Efficient generation of pink-fruited tomatoes using CRISPR/Cas9system.Journal ofGenetics and Genomics,45,51-54)，37℃酶切3个小时，1.0％琼脂糖胶检测，回收扩增的基因片段608bp及pTX041的载体大片段。回收后的扩增产物与酶切后的pTX041载体以1:5的体积比例混合，加入5×CE II Buffer 2μL和Exnase II 1μL，无菌水补充体积至10μL，37℃反应30min后，迅速转移到冰水中放置5min，42度热激转化该同源重组产物进入到大肠杆菌DH5α菌株中，Kan抗性平板筛选阳性克隆，菌液PCR检测后送测序公司测序，将测序结果与已知序列比较，确定含有两个靶点的大肠杆菌菌液再摇菌提取其质粒。

实施例3

带有SlBBX20的ORF基因片段的载体制备

用Trizol(Vazyme,中国)试剂提取番茄中总的RNA，然后利用反转录试剂盒(Vazyme,中国)反转录合成番茄基因的cDNA(序列如SEQ ID NO.9所示)，利用设计的引物，前引物序列如SEQ ID NO.7所示，后引物序列如SEQ ID NO.8所示，通过PCR扩增得到SlBBX20基因的ORF(开放阅读框)，序列如SEQ ID NO.2所示，经1.0％琼脂糖凝胶检测，用回收试剂盒(OMEGA，美国)回收目的片段。

反转录体系如下：

(1)

RNase free ddH₂O to 16μL

4*gDNAwiperMix 4μL

模板RNA 1μg

用移液器轻轻吹打混匀，42℃2min。

(2)

在第一步的反应管中直接加入5*HiScript II Qrt SuperMix II 4μL,用移液器轻轻吹打混匀，50℃15min,85℃5s。该程序结束后可获得cDNA，产物可直接用于qPCR反应。同时以XhoⅠ和XbaI来双酶切pHellsgate8载体，37度酶切3个小时，1.0％琼脂糖胶检测，扩增片段与酶切后的pHellsgate8载体以试剂盒(Vazyme，中国)要求配置最佳体积比例混合，加入5×CE II Buffer 2μL和Exnase II 1μL，无菌水补充体积至10μL，37℃反应30min后，迅速转移到冰水中放置5min，42度热激转化该同源重组产物进入到大肠杆菌DH5α菌株中，Spec抗性平板筛选阳性克隆，菌液PCR检测后送测序公司测序，将测序结果与已知序列比较，确定正确的大肠杆菌菌液再摇菌提取其质粒。

实施例4

基因编辑植株的制备

4.1

将实施例2及实施例3制备的重组载体分别转入农杆菌，操作方法如下：

利用电转化仪将检测正确的重组质粒转化农杆菌C58，用含Rif50 mg/L重组载体的LB固体平板筛选，挑选阳性克隆，28℃温度200r/min振荡培养过夜，取1μL上清液作为模板，以基因特异引物进行PCR检测。

4.2

将转入实施例2SlBBX20基因敲除载体的农杆菌及转入实施例3带有SlBBX20的ORF基因片段载体的农杆菌分别浸染番茄植株，操作方法如下：

番茄种子Alisa Craig(品种选自TGRC，美国番茄遗传资源中心)经75％酒精清洗种子1min，次氯酸钠消毒15min，播种于1/2MS培养基上(pH＝5.8)，于25±2℃，长至两片子叶完全展开。选取子叶，将子叶切成2～3片大小的外植体，放至KCMS培养基上，暗培养1d。经过预培养的外植体放至悬浮液中，将重悬至OD600≈0.5的农杆菌液浸染3-5min，用灭菌滤纸吸干多余菌液，重新放回KCMS培养基上，黑暗条件下共培养2d，转入到筛选培养基2Z上进行抗性筛选，每两周继代一次，抗性芽出现后将外植体转入0.2Z培养基中。于20d后切下抗性芽，***到生根培养基中诱导生根，根系发达的植株移栽营养钵中，各培养基营养体系如下：

KCMS培养基：

PH＝5.8

2Z与0.2Z培养基，即在MS培养基中加入不同的抗生素，具体如下：

转入实施例2 SlBBX20基因敲除载体的农杆菌为SlBBX20敲除植株，后续标记为SlBBX20-CR-n或CR-n(n为数字，代表同一系列的不同编号)植株，转入实施例3带有SlBBX20的ORF基因片段载体的农杆菌为SlBBX20超量植株，后续标记为SlBBX20-OE-n或OE-n(n为数字，代表同一系列的不同编号)植株。

实施例5

SlBBX20超量植株的表达量检测，检测方法如下：

遗传转化得到SlBBX20超量表达植株T0代，用CTAB法提取其叶片的基因组DNA。然后用CaMV35S前引物和基因特异后引物，以T0代植株gDNA为模板，以超量表达的质粒为阳性对照，野生型背景材料为阴性对照进行PCR检测。

引物序列为：

CaMV35S:ACGCACAATCCCACTATCCTTC；

SlBBX20-OE-RV:GGAAAAAACTACACATCTGGTCG。

将PCR检测阳性的T0代植株设计引物，进行实时荧光定量实验检测SlBBX20基因超量表达的水平(见图1)，引物序列为：

SlBBX20-Qpcr-FW:AAATTCAATATCCCCAGCTGGA；

SlBBX20-Opcr-RV:TGTGTCGATTCTGTAGTACTCG；

其中有14个SlBBX20-OE株系的SlBBX20基因的表达量大于野生型中该基因的表达量的100倍，WT为未经过基因编辑的野生植株，下同。

实施例6

对SlBBX20敲除植株进行测序

SlBBX20敲除植株T0代，用CTAB法提取其叶片的基因组DNA。测试时，先用载体的正反向引物，进行PCR反应检测T0代植株中是否有载体pTX041的***，引物序列为：

pTX041-Fw：AGCGGATAACAATTTCACACAGGA；

pTX041-Rv：GCAGGCATGCAAGCTTATTGG。

以有载体pTX041的***的CRISPR/Cas9基因编辑的SlBBX20植株T0代的gDNA为模板进行PCR扩增SlBBX20基因，测序后统计测序结果(见表1)，对测序结果进行比对(见图2)，检测该基因是否发生编辑。

SlBBX20-CR在T0代共有35株，检测了载体，均有载体的***，测序23株，其中有6株未被编辑，四株纯合，13株双峰，后期灰霉菌抗性实验选用CR13，CR18，CR19三个敲除系。

表1 SlBBX20-CR植株测序结果

实施例7

SlBBX20超量植株与纯合SlBBX20敲除植株的灰霉病抗性检测，检测方法如下：

对筛选得到的3个纯合的敲除株系，3个SlBBX20-OE株系和背景材料AC进行播种，生长4周大小的苗子取其从上向下第三，四片叶子进行灰霉菌接种实验。选用B05.10菌株以105的孢子悬浮液的浓度在每一片单叶上接种左右各1滴孢子悬浮液，每滴孢子悬浮液的体积为10μL。接种灰霉菌后，用保鲜膜密封进行保湿处理，同时将其放在22±2℃的培养箱中观察其发病情况。接种灰霉菌三天后，对叶片的发病情况进行拍照(见图3)，并统计其病斑面积(见图4)。SlBBX20-OE-23,-29,-40的病斑面积极显著地大于野生型叶片的病斑面积，SlBBX20-CR-13，-18，-19三个纯合株系的病斑面积均极显著地小于野生型背景材料。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 华中农业大学

<120> SlBBX20基因在调控番茄灰霉病抗性方面的应用

<160> 9

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1471

<212> DNA

<213> 番茄(Tomato)

<400> 1

atattaaaaa gaaaaataaa atgaagattc aatgtgatgt ttgtgataaa gaagaggcat 60

cagtttattg ttcagcagat gaagccacac tttgccaaag ctgtgattat caagtgcatc 120

atgccaacaa gcttgcaagc aaacatcttc gtttttctct aattcatcct tcgttcaaag 180

attctcctct ttgtgacatt tgccaggtac taataatatt cgagtttggt ttcacagatg 240

atcactcaat ttaaaattat tacgtcaaaa tgtcacttga tctgatgaag aaaattgaat 300

taaggaaggt aatttttcga gataacaaat tattaacaac atctgagaaa tatattgcag 360

tgtaaaattt ttgcacaatc aacaattact actgaaaaat attttaattg aatcagtgag 420

aaaaaaatgt tatcatatga aaaaattagg aagttcccga ctaatatagt gataatttat 480

ttataccatg catttcctcc ggtgagctaa ttcagtagaa catgagagga aaaatcatga 540

tctattaaca catatactag cgatgagcat aaaatatggg ctgatagtag aacttattta 600

attttatggt gtataatgta gaaaattaac atttatttct tattgtattt tattttcagg 660

aaagacgtgc attgctattt tgtaaagaag atagagcaat actttgcaaa gaatgtgact 720

tgcctataca caaagcaaat gaacacacaa agaaacacaa cagatttctt ctaagtggag 780

tgcagctatc ttctgatata cttgcttcta attataataa taaccaaaat tcaatatccc 840

cagctggatc tgctgcaagt aatgctggta caaataattt taaagcactt agtggaaatt 900

ttgggatgaa gagtaattcg atttcgagta ctacagaatc gacacataac tattttcatg 960

ttgattatgt acaagagggt tctgtttcaa ctagtagcat atcagaatat ttgactgaga 1020

ctcttcctgg ttggcatgtt gaagattttc ttgaatatcc ctcttcttct tcctatggta 1080

actgtttctt ttttacggat ttaaaaatgt cattaactcg aaatatgggc atttttggat 1140

caaattattg acaaaaagga gcattttaga ccaatattat taactgatga catatttgac 1200

catttttgaa tataataaaa ttttcagaac ttgcaactaa atgatgctgt ttgattgcag 1260

aattttgatc aggtacgacc agatgtgtag ttttttcccc cactaaagtg gggatacctc 1320

ataatatcaa atggagtacc tgttccacag atcaactctc catcaaccta gcaacttata 1380

ggacagactt ggtaataagg gcataatatc ttttaagata ttaagaaaag agttatataa 1440

actgccatct gaccttttct tttggttact a 1471

<210> 2

<211> 612

<212> DNA

<213> 番茄(Tomato)

<400> 2

atgaagattc aatgtgatgt ttgtgataaa gaagaggcat cagtttattg ttcagcagat 60

gaagccacac tttgccaaag ctgtgattat caagtgcatc atgccaacaa gcttgcaagc 120

aaacatcttc gtttttctct aattcatcct tcgttcaaag attctcctct ttgtgacatt 180

tgccaggaaa gacgtgcatt gctattttgt aaagaagata gagcaatact ttgcaaagaa 240

tgtgacttgc ctatacacaa agcaaatgaa cacacaaaga aacacaacag atttcttcta 300

agtggagtgc agctatcttc tgatatactt gcttctaatt ataataataa ccaaaattca 360

atatccccag ctggatctgc tgcaagtaat gctggtacaa ataattttaa agcacttagt 420

ggaaattttg ggatgaagag taattcgatt tcgagtacta cagaatcgac acataactat 480

tttcatgttg attatgtaca agagggttct gtttcaacta gtagcatatc agaatatttg 540

actgagactc ttcctggttg gcatgttgaa gattttcttg aatatccctc ttcttcttcc 600

tatgaatttt ga 612

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 番茄(Tomato)

<400> 3

gatgtttgtg ataaagaag 19

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 番茄(Tomato)

<400> 4

tcgttcaaag attctcctc 19

<210> 5

<211> 59

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gaatctaaca gtgtagtttg gatgtttgtg ataaagaagg ttttagagct agaaatagc 59

<210> 6

<211> 59

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

gctatttcta gctctaaaac tcgttcaaag attctcctcc aaactacact gttagattc 59

<210> 7

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

cagagacttt aggtgtgagc cc 22

<210> 8

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

ggaaaaaact acacatctgg tcg 23

<210> 9

<211> 1012

<212> DNA

<213> 番茄(Tomato)

<400> 9

attcagtcat tgaaagagaa attttaatat attttctgaa actcttcaga gactttaggt 60

gtgagcccac aacgaacaca actccctttg tgcccataat attttgtctt tttcccaaat 120

ttactctctt ctattctaag tttctaacta tatatacatc tctttaggga aacagtacaa 180

atattaaaaa gaaaaataaa atgaagattc aatgtgatgt ttgtgataaa gaagaggcat 240

cagtttattg ttcagcagat gaagccacac tttgccaaag ctgtgattat caagtgcatc 300

atgccaacaa gcttgcaagc aaacatcttc gtttttctct aattcatcct tcgttcaaag 360

attctcctct ttgtgacatt tgccaggaaa gacgtgcatt gctattttgt aaagaagata 420

gagcaatact ttgcaaagaa tgtgacttgc ctatacacaa agcaaatgaa cacacaaaga 480

aacacaacag atttcttcta agtggagtgc agctatcttc tgatatactt gcttctaatt 540

ataataataa ccaaaattca atatccccag ctggatctgc tgcaagtaat gctggtacaa 600

ataattttaa agcacttagt ggaaattttg ggatgaagag taattcgatt tcgagtacta 660

cagaatcgac acataactat tttcatgttg attatgtaca agagggttct gtttcaacta 720

gtagcatatc agaatatttg actgagactc ttcctggttg gcatgttgaa gattttcttg 780

aatatccctc ttcttcttcc tatgaatttt gatcaggtac gaccagatgt gtagtttttt 840

cccccactaa agtggggata cctcataata tcaaatggag tacctgttcc acagatcaac 900

tctccatcaa cctagcaact tataggacag acttggtaat aagggcataa tatcttttaa 960

gatattaaga aaagagttat ataaactgcc atctgacctt ttcttttggt ta 1012

Claims (4)

1.SlBBX20基因在调控番茄灰霉病抗性中的应用, 所述SlBBX20基因如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的SlBBX20基因在调控番茄灰霉病抗性的应用，通过降低或消除SlBBX20在番茄中的表达来提高番茄的灰霉病抗性。

3.一种提高番茄植株的灰霉病抗性的方法，其特征在于，所述提高番茄植株的灰霉病抗性的方法包括：

步骤S1:将权利要求1所述的SlBBX20基因的敲除载体转入农杆菌；

步骤S2:将转入所述SlBBX20基因的敲除载体的农杆菌浸染番茄植株。

4.一种降低番茄植株的灰霉病抗性的方法，其特征在于，所述降低番茄植株的灰霉病抗性的方法包括：

步骤A1：将带有包含SlBBX20基因的ORF的载体转入农杆菌；

步骤A2：将转入所述包含SlBBX20基因的ORF的载体的农杆菌浸染番茄植株；所述SlBBX20基因的ORF，序列如SEQ ID NO.2所示。

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