CN112142866A - 一种具有降血糖效果的海蓬子多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有降血糖效果的海蓬子多糖的提取方法，属于食品加工技术领域。该提取方法是采用木瓜蛋白酶、果胶酶以及纤维素酶组成的复配酶，对海蓬子进行酶解，之后将酶解液用85%乙醇沉淀5h，真空旋转蒸发浓缩，即可得到海蓬子多糖。本发明一方面采用纤维素酶、果胶酶及木瓜蛋白酶三种复合酶对海蓬子细胞酶解，加速了细胞壁的破裂，同时降低了植物细胞壁内果胶、蛋白质、纤维素等生物大分子对多糖的束缚效果；另一方面本发明提取的多糖对α‑淀粉酶活性有良好的抑制效果，可应用于降血糖食品、药品及保健品。
Description
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种具有降血糖效果的海蓬子多糖的提取方法。
背景技术
海蓬子含有大量氨基酸和多种海洋矿物质。其中锌、硒，远高于一般的蔬菜，即后者的2～6倍；海蓬子中含有极高的钙，远高于牡蛎，即后者的3倍，同时也远高于牛奶，即后者5倍，海蓬子中还存在着大量有机态的碘，从品质角度来讲远优于食盐中所含有的无机碘。其所拥有的两种绿原酸衍生物也具有抗炎等多种作用，多糖在免疫调节等方面都发挥着巨大的作用，患有糖尿病等疾病的人群，可以选用海篷子进行治疗。
目前多糖的提取方法有超声波辅助提取（一种平卧菊三七叶粗多糖提取方法，CN109503728A），超滤膜过滤法（一种香菇多糖提取方法，CN109232763A），但是以上方法存在着提取效率低或者提取流程复杂，提取费用贵的特点。目前还没有酶解法对海蓬子多糖提取的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有降血糖效果的海蓬子多糖的提取方法，以海篷子为原料，通过两种方法提取海篷子多糖，确定不同单因素变量对多糖提取的影响，并进一步研究海篷子多糖对α-淀粉酶活性的抑制效果，研究海篷子提取物降血糖的应用领域。
为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
一种具有降血糖效果的海蓬子多糖的提取方法，包括以下步骤：
步骤1，粉碎海蓬子；
步骤2，采用木瓜蛋白酶、果胶酶以及纤维素酶组成的复配酶，对海蓬子进行酶解；
步骤3，对酶解液用85%乙醇沉淀5h，真空旋转蒸发浓缩，得到海蓬子多糖。
进一步地，步骤2中酶解的条件为pH 4～6，料液比1:30。
进一步地，步骤2中酶解温度为35℃～55℃。
进一步地，步骤2中酶解时采用的复配酶量为30mg～70mg。
进一步地，步骤2的复配酶中木瓜蛋白酶、果胶酶和纤维素酶的用量比为1:1:1～1:3:3。
有益效果：本发明的提取方法采用纤维素酶、果胶酶及木瓜蛋白酶三种复合酶对海蓬子酶解，加速了细胞壁的破裂，同时降低了植物细胞壁内果胶、蛋白质、纤维素等生物大分子对多糖的束缚效果；提高了提取率。同时，提取得到海篷子多糖对α-淀粉酶活性的抑制效果，拓宽了海篷子提取物的应用领域。
附图说明
图1 为本发明中酶解pH对多糖提取的影响结果。
图2 为本发明中酶解温度对多糖提取的影响结果。
图3 为本发明中酶总量对多糖提取的影响结果。
图4 为本发明中不同体积的海篷子多糖溶液对α-淀粉酶活性的抑制能力结果。
图5 为本发明中不同浓度的阿卡波糖溶液对α-淀粉酶活性的抑制能力结果。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步详细说明。所用试剂或者仪器设备未注明生产厂商的，均视为可以通过市场购买的常规产品。
实施例1
（1）粉碎海蓬子；
（2）在pH值4和酶解温度35℃条件下，以料液比1:30，以复配比1：1:1加入30mg木瓜蛋白酶、果胶酶以及纤维素酶的复配酶，对海蓬子水解反应；
（3）对酶解液用85%乙醇沉淀5h，真空旋转蒸发浓缩，得到海蓬子对α-淀粉酶有抑制效果的多糖。
实施例2
（1）粉碎海蓬子；
（2）在pH值6和酶解温度55℃条件下，以料液比1:30，以复配比1：2:1加入70mg木瓜蛋白酶、果胶酶以及纤维素酶的复配酶，对海蓬子水解反应；
（3）对酶解液用85%乙醇沉淀5h，真空旋转蒸发浓缩，得到海蓬子对α-淀粉酶有抑制效果的多糖。
实施例3
（1）粉碎海蓬子；
（2）在pH值4.5和酶解温度40℃条件下，以料液比1:30，以复配比1：2:2加入40mg木瓜蛋白酶、果胶酶以及纤维素酶的复配酶，对海蓬子水解反应；
（3）对酶解液用85%乙醇沉淀5h，真空旋转蒸发浓缩，得到海蓬子对α-淀粉酶有抑制效果的多糖。
实施例4
（1）粉碎海蓬子；
（2）在pH值5和酶解温度45℃条件下，以料液比1:30，以复配比1：2:3加入50mg木瓜蛋白酶、果胶酶以及纤维素酶的复配酶，对海蓬子水解反应；
（3）对酶解液用85%乙醇沉淀5h，真空旋转蒸发浓缩，得到海蓬子对α-淀粉酶有抑制效果的多糖。
实施例5
（1）粉碎海蓬子；
（2）在pH值6和酶解温度50℃条件下，以料液比1:30，以复配比1：3:3加入60mg木瓜蛋白酶、果胶酶以及纤维素酶的复配酶，对海蓬子水解反应；
（3）对酶解液用85%乙醇沉淀5h，真空旋转蒸发浓缩，得到海蓬子对α-淀粉酶有抑制效果的多糖。
性能评价
A.影响海蓬子多糖提取效果的单因素试验
实验方法
（1）标准曲线的绘制
采用苯酚-硫酸法，用紫外分光光度计在490nm下测量不同浓度的葡萄糖标准溶液的吸光度，得到标准曲线为y=0.0957x+0.0878，R2=0.9616，其中，y为吸光度，x为多糖含量。
（2）样品的测定
吸取2mL样品（若测量值较大，进行适当稀释调整），然后加入1mL6%苯酚及5mL浓硫酸，摇匀冷却，室温放置30分钟以后于490nm测光密度。以2mL水按同样显色操作为空白对照，以标准曲线计算多糖含量。
计算公式：
X=A×B/2
式中：X—样品的总糖含量，µg；A—由标准曲线得出的样品多糖质量，µg；
B—样品的总体积，mL； 2—所取样品体积，mL。
B. α-淀粉酶的活性
采用碘-淀粉比色法测定α-淀粉酶的活性，测定150µL、250µL、350µL、450µL、550µL浓度为100mg/mL的五个梯度的海篷子多糖溶液对α-淀粉酶活性的抑制能力。
图1比较了不同的酶解pH（4、4.5、5、5.5、6）对海蓬子多糖提取率的影响，对图1分析可知，酶解法提取海篷子多糖随着酶解pH的增大提取的多糖含量逐渐减少，查询资料知木瓜蛋白酶的最适作用pH范围为5.0～7.0，果胶酶的最适作用pH为3.0，果纤维素酶的最适作用pH范围为4.0～5.5，故最佳酶解pH为4.0左右。
图2比较了不同的酶解温度（35℃、40℃、45℃、50℃、55℃）对对海蓬子多糖提取率的影响，对图2分析可知，在一定温度范围内，随着酶解温度的升高，提取的海篷子多糖含量也随之增加。但是，当酶解温度超过50℃时，提取的多糖含量却降低，查询资料知木瓜蛋白酶的最适作用温度范围为50℃～60℃，果胶酶的最适作用温度为50℃，果纤维素酶的最适作用温度范围为45℃～65℃，由此可见，酶解法提取海篷子多糖最佳酶解温度为50℃左右。
图3比较了不同酶总量（30mg、40mg、50mg、60mg、70mg）对对海蓬子多糖提取率的影响，对图3分析可知，用酶解法提取海篷子多糖，当木瓜蛋白酶、果胶酶、纤维素酶的复配比为1:2:1时，提取海篷子多糖的含量随着酶总量的增加而增加。
根据公式计算出其不同浓度浓度梯度的海蓬子多糖溶液对α-淀粉酶活性的抑制率分别为25%、35%、44%、69%、87%，见图4；另外测定作为阳性对照的0.5mL的浓度为1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL的五个梯度的阿卡波糖溶液对α-淀粉酶活性的抑制能力，根据公式计算出其对α-淀粉酶活性的抑制率分别为35%、37%、43%、55%、67%，见图5。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求为保护范围。
Claims (5)
1.一种具有降血糖效果的海蓬子多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1，粉碎海蓬子；
步骤2，采用木瓜蛋白酶、果胶酶以及纤维素酶组成的复配酶，对海蓬子进行酶解；
步骤3，对酶解液用85%乙醇沉淀5h，真空旋转蒸发浓缩，得到海蓬子多糖。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤2中酶解的条件为pH 4～6，料液比1:30。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤2中酶解温度为35℃～55℃。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤2中酶解时采用的复配酶量为30mg～70mg。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤2的复配酶中木瓜蛋白酶、果胶酶和纤维素酶的用量比为1:1:1～1:3:3。
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