CN112098181A - 一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明适用于医学检验技术领域，提供了一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液及其应用，该瑞姬氏染色液包括：细胞固定剂；初染剂，为伊红Y和磷酸二氢钾的水溶液；复染剂，为美蓝、天青II、磷酸二氢钾的水溶液；以及缓冲洗涤剂。本发明提供的瑞姬氏染色染液，通过选择天青II、美蓝作为复染色素，将酸性染色液伊红和碱性染色液天青II、美蓝分别制成独立的染色剂，缓冲和冲洗步骤合并，染色时固定、初染、复染、缓冲洗涤作为独立步骤，仪器染色时可将待测标本直接烘干，取出标本即可镜检，其染色过程快，且可避免人为因素导致的误差，利于在临床实验室推广。
Description
技术领域
本发明属于医学检验技术领域，尤其涉及一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液及其应用。
背景技术
瑞氏染色法是詹姆斯·霍默·赖特在1902年发明的一种血液染色方法，经典瑞氏染料由酸性伊红和碱性美蓝染料组成，酸性伊红和碱性美蓝混合经化学作用后，变成中性的伊红化美蓝，久置氧化后含有天青。此三种染料分别和细胞核及浆中的NH3+和COO-等结合，使细胞核及胞浆着色。由于不同细胞系细胞核、细胞浆中NH3+和COO-含量不同，细胞着色情况不同，故法能很容易地区分不同的血细胞。瑞氏染色法主要用于染色外周血涂片、尿样和骨髓，在光学显微镜下进行检查，可辅助诊断白血病、疟疾等临床疾病。但是该法自发明以来本身就存在3大缺陷：(1)配制必须研磨；(2)是配制后无法立即使用，须放置半年以上始可染色；(3)对细胞质和中性颗粒染色效果较好，但对细胞核染色效当染果较差。
姬姆萨色法以德国化学家和细菌学家Gustav Giemsa的发明的，是一种核酸染色剂，染液由伊红和天青组成，染色原理同瑞氏染色法，可用于细胞遗传学和疟疾和其他寄生虫的组织病理学诊断。然而该法对细胞核染色效果较好、但对细胞浆染色效果较差。
瑞姬氏染色法是借鉴瑞氏染色法和姬姆萨染色法的优势，使细胞核和细胞浆均能达到满意染色效果的的一种方法，该法可适用于瑞氏染色法和姬姆萨染色法。目前瑞姬氏染色法发展迅速，已出现多种瑞姬氏染色法的配方及操作方法，《全国临床检验操作规程(第4版)》中即列出了瑞氏吉姆萨复合染色法、30秒快速单一染色法和快速染色法等三种方法，其缺陷是染液配制需储备一段时间后方可使用，新配制的染液染色效果欠佳。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，旨在解决背景技术中提出的问题。
本发明实施例是这样实现的，一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其包括：
细胞固定剂；
初染剂，为伊红Y和磷酸二氢钾的水溶液；
复染剂，为美蓝、天青II、磷酸二氢钾的水溶液；以及
缓冲洗涤剂。
作为本发明实施例的一个优选方案，所述细胞固定剂为甲醇。
作为本发明实施例的另一个优选方案，每500mL所述初染剂包括以下组分：伊红Y0.5～0.9g、磷酸二氢钾4～6g，余量为蒸馏水。
作为本发明实施例的另一个优选方案，每500mL所述复染剂包括以下组分：美蓝0.7～1g、天青II 0.7～1g、磷酸二氢钾2～4g，余量为蒸馏水。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述缓冲洗涤剂为磷酸盐的水溶液。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述磷酸盐为磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾中的至少一种。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述磷酸盐为磷酸氢二钠和磷酸二氢钾。
作为本发明实施例的另一个优选方案，每500mL所述缓冲洗涤剂包括以下组分：磷酸氢二钠0.2～0.4g、磷酸二氢钾0.1～0.5g，余量为蒸馏水。
本发明实施例的另一目的在于提供一种上述瑞姬氏染色液在细胞染色中的应用。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述应用包括以下步骤：
用细胞固定剂对待染色样品进行固定处理；
依次用初染剂和复染剂对固定处理后的待染色样品进行染色处理；
用缓冲洗涤剂对染色处理后的待染色样品进行冲洗。
本发明实施例提供的一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其目的是解决传统手工瑞氏染色法、姬姆萨染色法、瑞氏-姬姆萨染色法中存在的配制时间较长等方法本身固有的缺陷及人为因素对染色质量产生的干扰问题。具体的，本发明通过采用酸性伊红和碱性美蓝、天青II分别配制成溶液，做到染色液即配即用，且仪器染色后的玻片即可镜下识别细胞形态，整个玻片染色过程约3分钟，且可避免人为因素导致的误差，利于在临床实验室推广。
附图说明
图1为本发明实施例1提供的瑞姬氏染色液对临床血涂片的染色效果图。
图2为本发明实施例1提供的瑞姬氏染色液对另一组临床血涂片的染色效果图。
图3为本发明实施例1提供的瑞姬氏染色液对另一组临床血涂片的染色效果图。
图4为本发明实施例1提供的瑞姬氏染色液对另一组临床血涂片的染色效果图。
图5为本发明实施例1提供的瑞姬氏染色液对另一组临床血涂片的染色效果图。
图6为本发明实施例1提供的瑞姬氏染色液对另一组临床血涂片的染色效果图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
该实施例提供了一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其包括细胞固定剂、初染剂、复染剂和缓冲洗涤剂。
其中，细胞固定剂为甲醇。
初染剂的配制方法如下：将0.8g的伊红Y、5g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到初染剂。
复染剂的配制方法如下：将1g的美蓝、1g的天青II、2.5g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到复染剂。
缓冲洗涤剂的配制方法如下：将0.3g的磷酸氢二钠、0.2g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到缓冲洗涤剂。
实施例2
该实施例提供了一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其包括细胞固定剂、初染剂、复染剂和缓冲洗涤剂。
其中，细胞固定剂为甲醇。
初染剂的配制方法如下：将0.5g的伊红Y、4g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到初染剂。
复染剂的配制方法如下：将0.7g的美蓝、0.7g的天青II、2g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到复染剂。
缓冲洗涤剂的配制方法如下：将0.2g的磷酸氢二钠、0.1g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到缓冲洗涤剂。
实施例3
该实施例提供了一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其包括细胞固定剂、初染剂、复染剂和缓冲洗涤剂。
其中，细胞固定剂为甲醇。
初染剂的配制方法如下：将0.9g的伊红Y、6g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到初染剂。
复染剂的配制方法如下：将1g的美蓝、1g的天青II、4g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到复染剂。
缓冲洗涤剂的配制方法如下：将0.4g的磷酸氢二钠、0.5g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到缓冲洗涤剂。
实施例4
该实施例提供了一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其包括细胞固定剂、初染剂、复染剂和缓冲洗涤剂。
其中，细胞固定剂为甲醇。
初染剂的配制方法如下：将0.6g的伊红Y、4.5g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到初染剂。
复染剂的配制方法如下：将0.8g的美蓝、0.8g的天青II、2.5g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到复染剂。
缓冲洗涤剂的配制方法如下：将0.3g的磷酸氢二钾、0.3g的磷酸二氢钠与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到缓冲洗涤剂。
实施例5
该实施例提供了一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其包括细胞固定剂、初染剂、复染剂和缓冲洗涤剂。
其中，细胞固定剂为甲醇。
初染剂的配制方法如下：将0.8g的伊红Y、5.5g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到初染剂。
复染剂的配制方法如下：将0.9g的美蓝、0.9g的天青II、3.5g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到复染剂。
缓冲洗涤剂的配制方法如下：将0.1g的磷酸氢二钠、0.2g的磷酸二氢钾、0.1g磷酸氢二钾、0.2g磷酸二氢钠与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到缓冲洗涤剂。
实施例6
该实施例提供了一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其包括细胞固定剂、初染剂、复染剂和缓冲洗涤剂。
其中，细胞固定剂为甲醇。
初染剂的配制方法如下：将0.7g的伊红Y、5g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到初染剂。
复染剂的配制方法如下：将0.85g的美蓝、0.85g的天青II、3g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到复染剂。
缓冲洗涤剂的配制方法如下：将0.8g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到缓冲洗涤剂。
实施例7
该实施例提供了一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其包括细胞固定剂、初染剂、复染剂和缓冲洗涤剂。
其中，细胞固定剂为甲醇。
初染剂的配制方法如下：将0.8g的伊红Y、4.2g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到初染剂。
复染剂的配制方法如下：将0.75g的美蓝、0.95g的天青II、3g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到复染剂。
缓冲洗涤剂的配制方法如下：将0.6g的磷酸氢二钠与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到缓冲洗涤剂。
实施例8
该实施例提供了一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其包括细胞固定剂、初染剂、复染剂和缓冲洗涤剂。
其中，细胞固定剂为甲醇。
初染剂的配制方法如下：将0.7g的伊红Y、5.3g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到初染剂。
复染剂的配制方法如下：将0.9g的美蓝、0.8g的天青II、3.3g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到复染剂。
缓冲洗涤剂的配制方法如下：将0.3g的磷酸氢二钠、0.1g的磷酸二氢钾、0.1g的磷酸氢二钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到缓冲洗涤剂。
实施例9
该实施例提供了一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其包括细胞固定剂、初染剂、复染剂和缓冲洗涤剂。
其中，细胞固定剂为甲醇。
初染剂的配制方法如下：将0.7g的伊红Y、5g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到初染剂。
复染剂的配制方法如下：将0.8g的美蓝、0.8g的天青II、2.4g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到复染剂。
缓冲洗涤剂的配制方法如下：将0.3g的磷酸氢二钠、0.2g的磷酸氢二钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到缓冲洗涤剂。
实施例10
该实施例提供了一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其包括细胞固定剂、初染剂、复染剂和缓冲洗涤剂。
其中，细胞固定剂为甲醇。
初染剂的配制方法如下：将0.6g的伊红Y、5g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到初染剂。
复染剂的配制方法如下：将0.8g的美蓝、0.8g的天青II、3.4g的磷酸二氢钾与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到复染剂。
缓冲洗涤剂的配制方法如下：将0.3g的磷酸二氢钾、0.3g的磷酸二氢钠与400mL的蒸馏水进行混匀后，再用蒸馏水定容至500mL，即可得到缓冲洗涤剂。
实验例：
选取临床赠送的10份血常规检测标本，制片后染色镜检，图像采集***进行采图。其中，染色步骤包括以下：血涂片自然干燥后，置于皓信染片机中，按血液染色模式，并采用上述实施例1提供的瑞姬氏染色液进行染色，具体的，先用细胞固定剂固定1.5分钟，接着，依次用初染剂染色15秒钟，复染剂染色15秒钟，然后，用缓冲洗涤剂处理1分钟(整个染色过程只需要3分钟左右)，仪器停止后，即可取出玻片镜检。其中的6份临床血涂片的镜检染色效果图分别附图1～6所示。从图中可以看出，利用本发明实施例提供的瑞姬氏染色液染色临床血涂片后，镜检均可见符合染色要求的淋巴细胞、中性粒细胞、红细胞、血小板等。
其中，利用本发明提供的瑞姬氏染色液对细胞进行染色，可获得明确细胞染色结果：染色后细胞核呈***，淋巴细胞浆呈灰蓝色，中性粒细胞颗粒呈浅紫色，嗜酸粒细胞颗粒呈红至红棕色，嗜碱性颗粒呈紫黑色至黑色，血小板呈紫色，红细胞呈红色，即可证明该瑞姬氏染色液具有可行性。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其特征在于，包括：
细胞固定剂；
初染剂，为伊红Y和磷酸二氢钾的水溶液；
复染剂，为美蓝、天青II、磷酸二氢钾的水溶液；以及
缓冲洗涤剂。
2.根据权利要求1所述的一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其特征在于，所述细胞固定剂为甲醇。
3.根据权利要求1所述的一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其特征在于，每500mL所述初染剂包括以下组分：伊红Y 0.5～0.9g、磷酸二氢钾4～6g，余量为蒸馏水。
4.根据权利要求1所述的一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其特征在于，每500mL所述复染剂包括以下组分：美蓝0.7～1g、天青II 0.7～1g、磷酸二氢钾2～4g，余量为蒸馏水。
5.根据权利要求1所述的一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其特征在于，所述缓冲洗涤剂为磷酸盐的水溶液。
6.根据权利要求5所述的一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其特征在于，所述磷酸盐为磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾中的至少一种。
7.根据权利要求5或6所述的一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其特征在于，所述磷酸盐为磷酸氢二钠和磷酸二氢钾。
8.根据权利要求7所述的一种基于仪器法使用的瑞姬氏染色液，其特征在于，每500mL所述缓冲洗涤剂包括以下组分：磷酸氢二钠0.2～0.4g、磷酸二氢钾0.1～0.5g，余量为蒸馏水。
9.一种如权利要求1～8中任一项所述瑞姬氏染色液在细胞染色中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
用细胞固定剂对待染色样品进行固定处理；
依次用初染剂和复染剂对固定处理后的待染色样品进行染色处理；
用缓冲洗涤剂对染色处理后的待染色样品进行冲洗。
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