CN112028990A - 一种鸽蛋清卵白蛋白的提取方法 - Google Patents

一种鸽蛋清卵白蛋白的提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及鸽蛋加工技术领域，具体公开了一种鸽蛋清卵白蛋白的提取方法。所述的鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，其包含如下步骤：(1)分离鸽蛋蛋清和蛋黄；将蛋清过滤，取蛋清滤液；(2)将蛋清滤液进行稀释，然后分步加入盐析试剂进行盐析反应；(3)调节盐析后的蛋清滤液的pH值，进行二次沉淀；(4)分离沉淀物即得所述的鸽蛋清卵白蛋白。该方法是一种比较温和的提取方法，对卵白蛋白的活力没有损坏，而且提取率比较高，有利于工业化生产。

Description

一种鸽蛋清卵白蛋白的提取方法
技术领域
本发明涉及鸽蛋加工技术领域，具体涉及一种鸽蛋清卵白蛋白的提取方法。
背景技术
卵白蛋白是鸽蛋蛋清中含量较高的有活性成分之一，卵白蛋白在生物学上和人体白蛋白非常接近，是人血白蛋白的有待研发的替代品。卵白蛋白经加工酶水解成具有抗氧化等生物学功能的低分子活性肽。
虽然蛋白质的提取工艺众多，但因选材和提取蛋白的种类而选取不同的工艺，而且提取效果因提取工艺和条件不同而不同。禽蛋中鸡蛋因成本低，产量多，所以在鸡蛋蛋白提取工艺方面已经比较成熟。而早年间，因为肉鸽产业一般集中在气候温暖的地区，鸽蛋产率比较低，产量少，价格昂贵，所以鸽蛋一般作为种蛋，很少食用。随着工厂化封闭养殖技术以及产业化发展，鸽蛋的产量逐年增加，逐渐在一些发达地区食谱出现，这将是一种发展趋势。但现有技术对鸽蛋卵白蛋白的提取和研究鲜少；因此，提供一种鸽蛋蛋清中提取卵白蛋白的方法对鸽蛋的产品开发具有重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术中缺乏从鸽蛋蛋清中提取卵白蛋白的方法，本发明提供了一种鸽蛋清卵白蛋白的提取方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
一种鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，其包含如下步骤：
(1)分离鸽蛋蛋清和蛋黄；将蛋清过滤，取蛋清滤液；
(2)将蛋清滤液进行稀释，然后分步加入盐析试剂进行盐析反应；
(3)调节盐析后的蛋清滤液的pH值，进行二次沉淀；
(4)分离沉淀物即得所述的鸽蛋清卵白蛋白。
采用盐析试剂进行提取卵白蛋白，其成本低、操作方便、对蛋白质活性稳定的，是常规的手段。但是，发明人在具体研究中发现，由于鸽蛋蛋清中成分不同于鸡蛋等常规的禽蛋；采用常规的盐析方法进行盐析虽然能够从鸽蛋中提取得到卵白蛋白，但是卵白蛋白的提取率低。因此，必须针对鸽蛋蛋清优化盐析试剂的提取参数，如盐析试剂的种类选择、盐析试剂的浓度、盐析时间、pH的控制等。发明人在具体研究过程中，通过实验不断地优化上述参数的选择，虽然能够在一定程度上提高卵白蛋白的提取率，但是提升幅度是有限的，提取率很难进一步突破。为了进一步提高卵白蛋白的提取率，发明人在研究中意外的发现，步骤(2)中：在盐析前将蛋清滤液进行稀释，然后再分步加入盐析试剂，这样操作可以进一步大幅提高卵白蛋白的提取率，突破了调整常规盐析方法参数无法进一步提升卵白蛋白提取率的不足。
同时发明人在研究中还发现，采用本发明所述的方法，步骤(2)和步骤(3)不能调换，如先进行步骤(3)调节pH，再进行步骤2的稀释和分步加入盐析试剂，同样无法得到较高的卵白蛋白提取率。
优选地，步骤(1)中将蛋清过滤具体是指用纱布将蛋清过滤。
优选地，步骤(2)中所述的稀释是指将蛋清滤液进行稀释8～12倍。
最优选地，步骤(2)中所述的稀释是指将蛋清滤液进行稀释10倍。
优选地，步骤(2)中所述的分步加入盐析试剂是指分三步加入盐析试剂。
优选地，第一步加入盐析试剂使其在蛋清滤液中的质量分数达42～45％，保持盐析反应15～25min；第二步加入盐析试剂使其在蛋清滤液中的质量分数达55～60％，保持盐析反应30～60min；第三步加入盐析试剂使其在蛋清滤液中的质量分数达65～70％，保持盐析反应40～80min。
最优选地，第一步加入盐析试剂使其在蛋清滤液中的质量分数达43％，保持盐析反应20min；第二步加入盐析试剂使其在蛋清滤液中的质量分数达55％，保持盐析反应50min；第三步加入盐析试剂使其在蛋清滤液中的质量分数达65％，保持盐析反应60min。
发明人根据上述技术路径，进一步优选了稀释倍数和分步加入盐析试剂的条件，在上述条件下可以得到最高的卵白蛋白提取率。如稀释倍数和分步加入盐析试剂的条件控制不好，同样无法进一步提高卵白蛋白的提取率。
优选地，步骤(2)中所述的盐析试剂为硫酸铵。
优选地，步骤(2)中所述的pH值为4.3～5.0；最优选地，步骤(2)中所述的pH值为4.5。
优选地，步骤(4)所述的分离沉淀物是指采用离心的方法分离沉淀物。
有益效果：本发明提供了一种全新的鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，该方法是一种比较温和的提取方法，对卵白蛋白的活力没有损坏，而且提取率比较高，有利于工业化生产。
附图说明
图1为根据设置不同浓度梯度BSA蛋白标准液在波长595nm处测得的吸光度绘制的标准曲线图。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例并不限定本发明的保护范围。
以下实施例中卵白蛋白提取率通过如下方法计算：取提取得到的卵白蛋白溶解，吸取0.5mL试样稀释液于10mL比色管中，加入0.5mL考马斯亮蓝G250溶液，震荡混匀，静止2min。用1cm比色池加入试剂空白为参比溶液调零，用分光光度计在595nm处测定，根据标准曲线计算出样品中的卵白蛋白含量，进而计算出卵白蛋白的提取量。提取率＝(卵白蛋白的提取量/提取前蛋清滤液的重量)*100％。根据设置不同浓度梯度BSA蛋白标准液在波长595nm处测得的吸光度绘制标准曲线，标准曲线见图1。
实施例1鸽蛋清卵白蛋白的提取方法
(1)分离鸽蛋蛋清和蛋黄；用纱布将蛋清过滤，取蛋清滤液；
(2)将蛋清滤液加水稀释10倍，然后分步加入盐析试剂硫酸铵进行盐析反应；
(3)调节盐析后的蛋清滤液的pH值至4.5，进行二次沉淀20min；
(4)在6000r/min条件下离心20min，去掉上清液，取沉淀物即得所述的鸽蛋清卵白蛋白。
步骤(2)中的分步加入盐析试剂硫酸铵的具体方法为：第一步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达43％，保持盐析反应20min；第二步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达55％，保持盐析反应50min；第三步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达65％，保持盐析反应60min。
经计算，按照实施例1所述方法提取得到的鸽蛋清卵白蛋白的提取率为107.44mg/g。
实施例2鸽蛋清卵白蛋白的提取方法
(1)分离鸽蛋蛋清和蛋黄；用纱布将蛋清过滤，取蛋清滤液；
(2)将蛋清滤液加水稀释8倍，然后分步加入盐析试剂硫酸铵进行盐析反应；
(3)调节盐析后的蛋清滤液的pH值至5.0，进行二次沉淀20min；
(4)在6000r/min条件下离心20min，去掉上清液，取沉淀物即得所述的鸽蛋清卵白蛋白。
步骤(2)中的分步加入盐析试剂硫酸铵的具体方法为：第一步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达42％，保持盐析反应25min；第二步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达60％，保持盐析反应60min；第三步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达70％，保持盐析反应60min。
经计算，按照实施例2所述方法提取得到的鸽蛋清卵白蛋白的提取率为92.18mg/g。
实施例3鸽蛋清卵白蛋白的提取方法
(1)分离鸽蛋蛋清和蛋黄；用纱布将蛋清过滤，取蛋清滤液；
(2)将蛋清滤液加水稀释12倍，然后分步加入盐析试剂硫酸铵进行盐析反应；
(3)调节盐析后的蛋清滤液的pH值至4.3，进行二次沉淀20min；
(4)在6000r/min条件下离心20min，去掉上清液，取沉淀物即得所述的鸽蛋清卵白蛋白。
步骤(2)中的分步加入盐析试剂硫酸铵的具体方法为：第一步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达45％，保持盐析反应15min；第二步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达55％，保持盐析反应30min；第三步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达65％，保持盐析反应80min。
经计算，按照实施例3所述方法提取得到的鸽蛋清卵白蛋白的提取率为94.23mg/g。
由实施例1～3所述的鸽蛋清卵白蛋白的提取方法可知，在本发明所述的提取条件下得到的鸽蛋清卵白蛋白的提取率为90mg/g以上；采用本发明所述的方法对鸽蛋清的卵白蛋白具有优异的提取率。
对比例1鸽蛋清卵白蛋白的提取方法
(1)分离鸽蛋蛋清和蛋黄；用纱布将蛋清过滤，取蛋清滤液；
(2)将蛋清滤液加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达65％，保持盐析反应130min；
(3)调节盐析后的蛋清滤液的pH值至4.5，进行二次沉淀20min；
(4)在6000r/min条件下离心20min，去掉上清液，取沉淀物即得所述的鸽蛋清卵白蛋白。
对比例1与实施例1的区别在于，实施例1的步骤(2)先将蛋清滤液进行稀释，然后再分步加入盐析试剂硫酸铵进行盐析反应；对比例1所述的方法对蛋清滤液不进行稀释也并不分步加入盐析试剂硫酸铵。
经计算，按照对比例1所述方法提取得到的鸽蛋清卵白蛋白的提取率为41.28mg/g。
对比例2鸽蛋清卵白蛋白的提取方法
(1)分离鸽蛋蛋清和蛋黄；用纱布将蛋清过滤，取蛋清滤液；
(2)将蛋清滤液稀释10倍后，加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达65％，保持盐析反应130min；
(3)调节盐析后的蛋清滤液的pH值至4.5，进行二次沉淀20min；
(4)在6000r/min条件下离心20min，去掉上清液，取沉淀物即得所述的鸽蛋清卵白蛋白。
对比例1与实施例1的区别在于，实施例1的步骤(2)先将蛋清滤液进行稀释，然后再分步加入盐析试剂硫酸铵进行盐析反应；对比例2所述的方法对蛋清滤液稀释后，并不分步加入盐析试剂硫酸铵。
经计算，按照对比例2所述方法提取得到的鸽蛋清卵白蛋白的提取率为48.33mg/g。
对比例1～2方法提取得到的鸽蛋清卵白蛋白的提取率为50mg/g，远远低于实施例1～3；这说采用本发明所述的方法将蛋清滤液先进行稀释再进行分步盐析试剂沉淀的方法，与不经稀释和分步盐析试剂沉淀的方法相比，可以大幅提高鸽蛋清卵白蛋白的提取率。
对比例3鸽蛋清卵白蛋白的提取方法
(1)分离鸽蛋蛋清和蛋黄；用纱布将蛋清过滤，取蛋清滤液；
(2)将蛋清滤液加水稀释10倍，然后分步加入盐析试剂硫酸铵进行盐析反应；
(3)调节盐析后的蛋清滤液的pH值至4.5，进行二次沉淀20min；
(4)在6000r/min条件下离心20min，去掉上清液，取沉淀物即得所述的鸽蛋清卵白蛋白。
步骤(2)中的分步加入盐析试剂硫酸铵的具体方法为：第一步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达35％，保持盐析反应30min；第二步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达50％，保持盐析反应70min；第三步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达70％，保持盐析反应30min。
对比例3与实施例1的区别在于，步骤(2)中的分步加入盐析试剂硫酸铵的具体方法不同。
经计算，按照对比例3所述方法提取得到的鸽蛋清卵白蛋白的提取率为68.41mg/g。
对比例4鸽蛋清卵白蛋白的提取方法
(1)分离鸽蛋蛋清和蛋黄；用纱布将蛋清过滤，取蛋清滤液；
(2)将蛋清滤液加水稀释10倍，然后分步加入盐析试剂硫酸铵进行盐析反应；
(3)调节盐析后的蛋清滤液的pH值至4.5，进行二次沉淀20min；
(4)在6000r/min条件下离心20min，去掉上清液，取沉淀物即得所述的鸽蛋清卵白蛋白。
步骤(2)中的分步加入盐析试剂硫酸铵的具体方法为：第一步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达55％，保持盐析反应50min；第二步加入盐析试剂硫酸铵使其在蛋清滤液中的质量分数达65％，保持盐析反应80min。
对比例4与实施例1的区别在于，步骤(2)中的分步加入盐析试剂硫酸铵的具体方法不同。
经计算，按照对比例4所述方法提取得到的鸽蛋清卵白蛋白的提取率为54.94mg/g。
对比例3～4方法提取得到的鸽蛋清卵白蛋白的提取率远远低于实施例1～2；这说明步骤(2)中的分步加入盐析试剂的具体方法对于鸽蛋清卵白蛋白的提取率有着重要的影响，只有在本发明分步加入盐析试剂的具体方法下才能得到较高的提取率。

Claims (10)

1.一种鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，其特征在于，包含如下步骤：
(1)分离鸽蛋蛋清和蛋黄；将蛋清过滤，取蛋清滤液；
(2)将蛋清滤液进行稀释，然后分步加入盐析试剂进行盐析反应；
(3)调节盐析后的蛋清滤液的pH值，进行二次沉淀；
(4)分离沉淀物即得所述的鸽蛋清卵白蛋白。
2.根据权利要求1所述的鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，其特征在于，步骤(1)中将蛋清过滤具体是指用纱布将蛋清过滤。
3.根据权利要求1所述的鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述的稀释是指将蛋清滤液进行稀释8～12倍。
4.根据权利要求1所述的鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述的稀释是指将蛋清滤液进行稀释10倍。
5.根据权利要求1所述的鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述的分步加入盐析试剂是指分三步加入盐析试剂。
6.根据权利要求5所述的鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，其特征在于，第一步加入盐析试剂使其在蛋清滤液中的质量分数达42～45％，保持盐析反应15～25min；第二步加入盐析试剂使其在蛋清滤液中的质量分数达55～60％，保持盐析反应30～60min；第三步加入盐析试剂使其在蛋清滤液中的质量分数达65～70％，保持盐析反应40～80min。
7.根据权利要求6所述的鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，其特征在于，第一步加入盐析试剂使其在蛋清滤液中的质量分数达43％，保持盐析反应20min；第二步加入盐析试剂使其在蛋清滤液中的质量分数达55％，保持盐析反应50min；第三步加入盐析试剂使其在蛋清滤液中的质量分数达65％，保持盐析反应60min。
8.根据权利要求1所述的鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述的盐析试剂为硫酸铵。
9.根据权利要求1所述的鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述的pH值为4.3～5.0；最优选地，步骤(2)中所述的pH值为4.5。
10.根据权利要求1所述的鸽蛋清卵白蛋白的提取方法，其特征在于，步骤(4)所述的分离沉淀物是指采用离心的方法分离沉淀物。
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