CN1120236C - 抗疫霉病的pr3菌剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抗疫霉病的PR₃菌剂，是由干旱沙生植物骆驼蓬根际土壤中分离筛选的菌剂。经鉴定应属多粘芽孢杆菌。该菌剂通过拌种、沾根、灌根等措施，使PR₃菌群进入作物根区并在根际定殖大量繁殖；在根系和土壤提供足够的养分、空气和水分的环境中，PR₃菌将不断地生长繁殖，分泌毒蛋白，抑制疫霉病原菌的发生及对根基的侵染，从而达到防治疫霉病的目的。该菌剂对辣椒等茄科的疫霉病有显著的抑制作用。用盆栽辣椒作抑菌试验PR₃菌剂抑菌率达到93.8%，田间作抑菌试验PR₃抑菌率达到69.8%。

Description

抗疫霉病的PR3菌剂及其制备方法

                        技术领域

本发明涉及一种抗疫霉病的PR₃菌剂及其制备方法。

                        背景技术

疫霉病在我国蔬菜产区分布很广泛，并且是危害性很大的土壤传播的病害之一。该病传播速度很快，一旦发现疫霉病病情，再进行治理已为时过晚。早期预防事在必行，采用生物防治应是最佳选择。

目前，利用根际微生物进行生物防治已成为研究开发的热点。拮抗微生物对土传病的生物调控作用及其机理已有诸多报道。若在作物根际具有拮抗病原菌的微生物菌群占主导地位，那么作物在代谢过程中产生拮抗蛋白或者抗生素等物质，形成抵抗土传病病原菌侵害的屏障，就能有效的抑制土壤中的病原菌的发展与传播，达到早期预防之目的。

                        发明内容

本发明目的在于，研制的抗疫霉病的PR₃菌剂是由干旱沙生植物骆驼蓬根际土壤中分离筛选的菌剂。经鉴定应属多粘芽孢杆菌。PR₃菌经发酵制的PR₃菌剂，通过拌种、沾根、灌根等措施，使PR₃菌群进入作物根区并在根际定殖大量繁殖，在根的区系中占有主要位点。在根系和土壤提供足够的养分、空气和水分的环境中，PR₃菌将不断地生长繁殖，分泌毒蛋白，抑制疫酶病原菌的发生及对根基的侵染，从而达到防治疫霉病的目的。该菌剂对辣椒等茄科的疫霉病有显著的抑制作用。用盆栽辣椒作抑菌试验PR₃菌剂抑菌率达到93.8％，田间作抑菌试验PR₃抑菌率达到69.8％。

本发明所述的抗疫霉病的PR₃菌剂，它是由干旱区沙生植物骆驼蓬根际土壤中分离筛选的细菌，为多粘芽孢杆菌，均在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏(CGMCC)，N0.0524。

抗疫霉病的PR₃菌剂的制备方法，按下列步骤进行：

原菌种培养方法：PR₃菌剂用的培养基为常用的多粘芽孢杆菌属培养基(1000毫升为基数)，牛肉膏2-8克、蛋白胨2-8克，用7°麦芽汁定容1000毫升，固体培养时加1.0-2.0％的琼脂粉，用氢氧化钠调pH7，好氧培养，培养温度28-32℃。

液体发酵：将菌种进行斜面菌种培养，再接入三角瓶液体培养接入种子罐通气培养，气压为0.01-0.05μPa，时间18小时，进入发酵罐，时间24小时，发酵温度28-30℃，即可放罐、分装、包装。

本发明所述的抗疫霉病的PR₃菌剂，其中PR₃菌特征为细菌，短杆状，2.2×1.2mm，周生鞭毛，由芽胞、中生；革兰氏染色阳性；接触酶反应阳性；葡萄糖利用产酸、产气；V·P反应阳性；淀粉水解阴性；柠檬酸利用阴性；酪素水解阳性；酪氨酸水解阴性。根据PR₃菌剂的特征，按伯杰细菌手册(八版)索引核对，应定名为多粘芽孢杆菌(Bacilluspolymyxa)。

PR₃菌剂标准：以菌剂中的活菌数为主要指标，达到20-25亿/ml，不得有杂菌。检测方法：以平板稀释方法测得结果为主要依据。在制作过程中主要以显微镜血球计数方法为依据。

田间应用效果：PR₃菌剂抑制辣椒疫霉病，早期达到82％，后期疫霉病发展较严重时，抑病率为53％；抗西红柿抑霉病平均达到57.6％。使用方法：

沾根或灌根：PR₃菌剂稀释15倍，时每毫升菌液中活菌数达到0.8-1亿个。菜苗移植时用量平均5ml/株；沾根10分钟后可栽种；灌根时稀释40倍，菌种生长30厘米时可灌根，灌根用量10ml/株。

喷施：在抑霉病发生前10天，菌剂稀释100倍，每亩地用10公斤(稀释)，喷施时最好向茎部位喷用。

拌种：在播种前用300ml菌剂直接拌种30分钟后播种即可。

                        具体实施方式

实施例1

(1)首先制备PR₃菌剂

原菌种培养：PR₃菌剂用的培养基为常用的多粘芽孢杆菌属培养基(1000毫升为基数)，牛肉膏2克、蛋白胨8克，用7°麦芽汁定容1000毫升，固体培养时加1.0-2.0％的琼脂粉，用氢氧化钠调pH 7，好氧培养，培养温度28-32℃。

液体发酵：将菌种进行斜面菌种培养，再接入三角瓶液体培养接入种子罐通气培养，气压为0.01-0.05μPa，时间18小时；进入发酵罐，时间24小时，发酵温度28-30℃，即可放罐、分装、包装。

(2)使用方法：

首先对辣椒疫霉病发病区，选其中发病较轻的地块分为区1、区2，两次重复；每小区面积140m²。辣椒栽培时用已稀释好的菌液沾根，用量5ml/株。待辣椒苗生长30cm高时灌根，用量10ml/株。然后将区1、区2分成对照1、对照2、对照3分别进行处理；对照1以同量清水沾根；对照2用病原菌菌液+清水沾根；对照3用病原菌菌液+PR₃菌液；进行灌根后，疫霉病发病期，对照2和对照3接种病原菌，每株0.2克剂量；接病原菌10天后进行观察，区1中对照1因没有接种病原菌，无发病株。对照2调查700株中有361株发病，发病率占51.7％；对照3用PR₃菌剂处理，又接种病原菌调查700株中有102株发病，发病率占14.6％；PR₃菌剂抑病率为69.8％。在区2中对照1病株为0；对照2疫霉病原菌感染发病的有297株，占调查700株的42.4％；对照3用PR₃菌液沾过根的700株中有病株107株，发病率15.3％；结果表明PR₃菌剂抑病率达到61.3％。

实施例2

(1)首先制备PR₃菌剂

原菌种培养：PR₃菌剂用的培养基为常用的多粘芽孢杆菌属培养基(1000毫升为基数)，牛肉膏8克、蛋白胨2克，用7°麦芽汁定容1000毫升，固体培养时加1.0-2.0％的琼脂粉，用氢氧化钠调pH 7，好氧培养，培养温度28-32℃。

液体发酵：将菌种进行斜面菌种培养，再接入三角瓶液体培养接入种子罐通气培养，气压为0.01-0.05μPa，时间18小时；进入发酵罐，时间24小时，发酵温度28-30℃，即可放罐、分装、包装。

(2)使用方法：

首先对塑料大棚辣椒进行试验，该大棚为多年种辣椒疫霉病发病较为严重，大棚面积0.5亩，分为区1、区2，两次重复；辣椒苗移栽时用5ml/株PR₃菌液沾根，待辣椒苗生长30cm高时用10ml/株的PR₃菌液灌根；然后将区1、区2分成对照1、对照2分别进行处理；对照1以同量清水沾根；对照2用病原菌菌液+PR₃菌液；到疫霉病发病期进行观察，区1中对照1中300株中病株156棵，占发病率52％；对照2用PR₃菌剂处理的300株中有49株发病，发病率占16.5％；PR₃菌剂抑制辣椒疫霉的抑病率为68.2％。

实施例3

(1)首先制备PR₃菌剂

原菌种培养：PR₃菌剂用的培养基为常用的多粘芽孢杆菌属培养基(1000毫升为基数)，牛肉膏6克、蛋白胨4克，用7°麦芽汁定容1000毫升，固体培养时加1.0-2.0％的琼脂粉，用氢氧化钠调pH7，好氧培养，培养温度28-32℃。

液体发酵：将菌种进行斜面菌种培养，再接入三角瓶液体培养接入种子罐通气培养，气压为0.01-0.05μPa，时间18小时；进入发酵罐，时间24小时，发酵温度28-30℃，即可放罐、分装、包装。

(2)使用方法：

首先对辣椒基地进行试验，面积2.5亩，分为1亩地作PR₃菌剂处理，另1.5亩作对照；辣椒苗移栽时用5ml/株PR₃菌液沾根，待辣椒苗生长30cm高时用10ml/株的PR₃菌液灌根；到疫霉病发病期进行观察，对照和用PR₃处理的分别随机选10个点，每点100株，合计共1000株；在对照的1000株中有59株发病，占发病率5.9％；用PR₃菌剂处理的1000株中有11株发病，发病率占1.1％；PR₃菌剂抑病率达81.3％。

Claims (2)

1、一种抗疫霉病的PR₃菌剂，其特征在于它是由干旱区沙生植物骆驼蓬根际土壤中分离筛选的细菌，为多粘芽孢杆菌(Bacilluspolymyxa)，均在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏CGMCC，NO.0524。

2、一种抗疫霉病的PR₃菌剂的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：

原菌种培养方法：PR₃菌剂用的培养基为常用的多粘芽孢杆菌属培养基，以1000毫升为基数，牛肉膏2-8克、蛋白胨2-8克，用7°麦芽汁定容1000毫升，固体培养时加1.0-2.0％的琼脂粉，用氢氧化钠调pH7，好氧培养，培养温度28-32℃；

液体发酵：将菌种进行斜面菌种培养，再接入三角瓶液体培养接入种子罐通气培养，气压为0.01-0.05μPa，时间18小时，进入发酵罐，时间24小时，发酵温度28-30℃，即可放罐、分装、包装。