CN112014507A - 顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法 - Google Patents

顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2‑氨基乙酰苯含量的方法，包括如下步骤：配制含有2‑氨基乙酰苯的标准溶液，使用顶空气相色谱法对标准溶液的2‑氨基乙酰苯进行色谱检测，分析检测得到的2‑氨基乙酰苯色谱柱的柱峰面积与标准溶液中2‑氨基乙酰苯的浓度之间的相关性，得到两者相关的标准曲线；采用与前步骤相同的顶空气相色谱法对待测的果葡糖浆中2‑氨基乙酰苯进行色谱检测，得到其中含有的2‑氨基乙酰苯的色谱柱的柱峰面积，并根据得到的标准曲线，计算出果葡糖浆中2‑氨基乙酰苯的含量。本发明的方法环保、灵敏度好、准确度高。

Description

顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法
技术领域
本发明属于2-氨基乙酰苯含量测定技术领域，特别涉及一种顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法。
背景技术
果葡糖浆是一种重要的甜味剂，是一种完全可以替代蔗糖的产品，并与蔗糖一样可广泛应用在食品及饮料行业，特别是在饮料行业中的应用，其风味与口感要优于蔗糖。
果葡糖浆在生产过程中可能会产生一些微量物质，从而影响产品的风味和口感。2-氨基乙酰苯(2-AP)已被确认为果葡糖浆中经常出现的一种重要的、具有芳香活性的微量物质。
国际饮料科技协会(ISBT)中介绍了果葡糖浆中2-AP含量的测定方法：
1)原理：样品中的2-AP经C18反相色谱柱分离，用液相色谱仪紫外检测器在227nm波长下检测、用外标法定量。
2)具体操作步骤如下：
流动相配制：以0.1％磷酸溶液稀释配制30％的乙腈溶液，用0.45μm微孔滤膜过滤，超声脱气后备用。
标准溶液配制：用已经和水配制200ppm的2-AP标准储备液，用水经过二次稀释后得到0.5ppb的标准溶液。
样品处理：用2％的磷酸溶液配置样品，水浴处理，放冷过滤备用。
将0.5ppb的2-AP标准溶液和待测样品溶液分别进样检测，利用标准溶液与样品的峰面积数据，计算待测样品中2-AP的浓度。
但是，由于样品中2-AP含量较低，方法灵敏度不够，导致检测数据准确性和稳定性不高。此外，该方法需要使用大量的有机试剂乙腈，污染环境，不利于可持续发展。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于，提供一种环保、灵敏度好、准确度高的顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法。
本发明是这样实现的，提供一种顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法，包括如下步骤：
步骤一、配制含有2-氨基乙酰苯的标准溶液，使用顶空气相色谱法对标准溶液的2-氨基乙酰苯进行色谱检测，分析检测得到的2-氨基乙酰苯色谱柱的柱峰面积与标准溶液中2-氨基乙酰苯的浓度之间的相关性，得到两者相关的标准曲线；
步骤二、采用与步骤一相同的顶空气相色谱法对待测的果葡糖浆中2-氨基乙酰苯进行色谱检测，得到其中含有的2-氨基乙酰苯的色谱柱的柱峰面积，并根据步骤一的标准曲线计算出果葡糖浆中2-氨基乙酰苯的含量。
进一步地，所述含有2-氨基乙酰苯的标准溶液的配制方法包括如下步骤：
步骤11、准确称取0.25g的2-氨基乙酰苯(2-AP)，用乙腈溶解后转移至250mL容量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，得到1000mg/L的标准储备液；准确移取上述标准储备液1mL到100mL容量瓶中用水稀释定容至刻度，得到10mg/L的中间标准溶液；再准确移取上述中间标准溶液1mL到100mL容量瓶中用水稀释定容至刻度，得到100μg/L的标准使用液；再将标准使用液(100μg/L)用水精密稀释，配制成含0.1mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.5mg/mL的2-氨基乙酰苯(2-AP)系列标准溶液；
步骤12、将上述系列标准溶液依次装入20.0mL顶空进样瓶中，准备待测。
进一步地，所述顶空气相色谱法是指采用顶空进样，气相色谱GC分析检测；顶空进样条件：加热炉温度80℃，进样针温度85℃，样品平衡时间30min，进样体积1mL，清洗气氮气，清洗压力0.5bar；气相色谱条件：采用HP-INNOWAX毛细管柱(30m x 0.25mm ID)，进样口温度220℃，FID检测器温度250℃，柱温40℃保持5min以10℃/min升至100℃再以30℃/min升至210℃保持10min，载气为氮气/空气，柱流量1.80mL/min，分流比10:1。
本发明采用的顶空气相色谱法是常用的顶空气相色谱法。顶空气相色谱法(HS-GC)又称液上气相色谱分析，是一种联合操作技术。通常采用进样针在一定条件下一定温度下对固体、液体、气体等进行萃取吸附，然后在气相色谱分析仪上进行脱附注射。
使用顶空色谱进样器以及与其相连接的气相色谱仪，顶空色谱进样器是将液体或固体样品中的挥发性组分直接导入气相色谱仪进行分离和检测的进样装置。
顶空色谱进样器采用气体进样，可专一性收集样品中的易挥发性成分，与液-液萃取和固相萃取相比既可避免在除去溶剂时引起挥发物的损失，又可降低共提物引起的噪音，具有更高灵敏度和分析速度，对分析人员和环境危害小，操作简便，是一种符合“绿色分析化学”要求的分析手段。
进一步地，在步骤一中，得到两者相关的标准曲线为：y＝1061x+40.67，
式中，x为待测溶液中2-氨基乙酰苯的浓度，单位μg/kg，y为使用顶空气相色谱法在待测溶液中检测得到的2-氨基乙酰苯色谱柱的柱峰面积。
进一步地，所述待测的果葡糖浆还经过以下方法处理：精确称取果葡糖浆50g，加入50mL的2％磷酸溶液，充分混合后，水浴10min，冷却后备用。
与现有技术相比，本发明的顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法具有以下特点：
1、采用本发明方法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯的含量，在ISBT中流动相使用的乙腈试剂可以省去不用，既节省试剂消耗，又可减少环境污染；
2、通过标准曲线的绘制可知，标准溶液具有良好的线性关系，相关系数达到0.997以上；
3、由精密度实验结果可知，目标组分保留时间与柱峰面积的相对标准偏差(RSD％)均小于3.0，精密度高；
4、由准确度实验结果可知，目标组分的平均回收率(％)为96.14％，回收率的相对标准偏差(RSD％)小于2.0，准确率高。
附图说明
图1为本发明的实施例1的标准样品中2-氨基乙酰苯的色谱检测图谱的示意图；
图2为实施例1的准确度试验中果葡糖浆与标准溶液样品混合后的色谱检测图谱的示意图；
图3为实施例1中待检测的果葡糖浆样品的色谱检测图谱的示意图。
具体实施方式
为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法的较佳实施例，包括如下步骤：
步骤一、配制含有2-氨基乙酰苯的标准溶液，使用顶空气相色谱法对标准溶液的2-氨基乙酰苯进行色谱检测，分析检测得到的2-氨基乙酰苯色谱柱的柱峰面积与标准溶液中2-氨基乙酰苯的浓度之间的相关性，得到两者相关的标准曲线。
步骤二、采用与步骤一相同的顶空气相色谱法对待测的果葡糖浆中2-氨基乙酰苯进行色谱检测，得到其中含有的2-氨基乙酰苯的色谱柱的柱峰面积，并根据步骤一的标准曲线计算出果葡糖浆中2-氨基乙酰苯的含量。
下面通过具体实施例来进一步说明本发明的方法。
实施例1
本发明的第一种顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法的实施例，包括如下步骤：
步骤1、配制含有2-氨基乙酰苯的标准溶液，采用如下步骤配制含有2-氨基乙酰苯的标准溶液：
步骤11、准确称取0.25g的2-氨基乙酰苯(2-AP)，精确至0.0001g，用乙腈溶解后转移至250mL容量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，得到1000mg/L的标准储备液；准确移取上述标准储备液1mL(1000mg/L)到100mL容量瓶中用水稀释定容至刻度，得到10mg/L的中间标准溶液；再准确移取上述中间标准溶液1mL(10mg/L)到100mL容量瓶中用水稀释定容至刻度，得到100μg/L的标准使用液；再将标准使用液(100μg/L)用水精密稀释，配制成含0.1mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.5mg/mL的2-氨基乙酰苯(2-AP)系列标准溶液。
步骤12、将上述系列标准溶液依次装入20.0mL顶空进样瓶中，准备待测。
步骤2、使用顶空气相色谱法对标准溶液的2-氨基乙酰苯进行色谱检测，得到如图1所示的色谱图。其中，所述顶空气相色谱法是指采用顶空进样，气相色谱GC分析检测，顶空进样条件：加热炉温度80℃，进样针温度85℃，样品平衡时间30min，进样体积1mL，清洗气氮气，清洗压力0.5bar；气相色谱条件：采用HP-INNOWAX毛细管柱(30m x 0.25mm ID)，进样口温度220℃，FID检测器温度250℃，柱温40℃保持5min以10℃/min升至100℃再以30℃/min升至210℃保持10min，载气为氮气/空气，柱流量1.80mL/min，分流比10:1。
步骤3、将检测得到的2-氨基乙酰苯色谱柱的柱峰面积与标准溶液中2-氨基乙酰苯的浓度之间的相关性进行分析，得到两者相关的标准曲线为：y＝1061x+40.67，
式中，x为待测溶液中2-氨基乙酰苯的浓度(即含量)，单位μg/kg，y为使用顶空气相色谱法在待测溶液中检测得到的2-氨基乙酰苯色谱柱的柱峰面积。
步骤4、选取待测的果葡糖浆，所述待测的果葡糖浆还经过以下方法处理：精确称取果葡糖浆50g，3批次，加入50mL的2％磷酸溶液，充分混合后，水浴10min，冷却后备用。
步骤5、采用与步骤2相同的顶空气相色谱法对待测的果葡糖浆中含有的2-氨基乙酰苯进行色谱检测，得到2-氨基乙酰苯的色谱柱的柱峰面积，得到如图3所示的色谱图。并根据步骤3得到的标准曲线，计算出果葡糖浆中2-氨基乙酰苯的含量。
对步骤3得到的标准曲线进行精密度试验：取标准曲线项下浓度为0.5mg/mL的标准溶液进样分析，连续进样5次，根据每次实验记录的保留时间与柱峰面积，记录2-AP组分的保留时间与柱峰面积的RSD％，结果分别为0.06％(n＝5)和2.85％(n＝5)。一般待测样品组分浓度在10μg/kg以内，重复性精密度要求RSD＜15％，符合要求。
对步骤3得到的标准曲线进行准确度试验：为检测该分析方法的准确性，向实际果葡糖浆样品中加入一定量的标准样品，并用上述方法进行气相色谱分析，测定柱峰面积，计算回收率。取50g果葡糖浆样品分为A、B两组，A组加入50mL的2％磷酸溶液，在步骤2的色谱条件下进行分析，根据各标准曲线图计算样品中目标组分含量；B组加入0.2mL浓度为100μg/L的2-AP标准溶液，平行测定3次，再加入50mL的2％磷酸溶液，充分混合后，在步骤2的色谱条件下进行分析，根据各标准曲线图计算样品中目标组分含量，分析色谱图见附图2。根据上述实验数据计算回收率，结果见表1。
表1目标组分的准确度实验数据
Figure BDA0002661402430000051
结果显示，加标回收率介于94％～98％，三次平行测定RSD为1.12％。一般待测样品组分浓度在10μg/kg以内的样品，加标回收率要求在70％～125％，重复性要求RSD＜15％，符合要求。
在步骤5中，根据得到2-氨基乙酰苯的色谱柱峰面积依照步骤3得到的标准曲线公式，计算出果葡糖浆中2-氨基乙酰苯的含量，如下表所示：
表2果葡糖浆中2-AP分析检测结果
项目 峰面积 浓度(μg/kg)
样品1 209 0.159
样品2 183 0.134
样品3 147 0.100
另外，将上述样品1～样品3采用ISBT方法测定，并与采用本发明的方法测定的结果进行对比，得到两者之间的偏差，具体如下表所示：
样品1 样品2 样品3
本发明方法测定结果 0.159 0.134 0.100
ISBT方法测定结果 0.156 0.132 0.105
两者偏差 0.003 0.002 -0.005
从上表看出，采用本发明的方法测定得到的结果与ISBT方法结果基本一致，两者偏差不超过0.1，因此，本发明的方法是可靠的、可信的。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、配制含有2-氨基乙酰苯的标准溶液，使用顶空气相色谱法对标准溶液的2-氨基乙酰苯进行色谱检测，分析检测得到的2-氨基乙酰苯色谱柱的柱峰面积与标准溶液中2-氨基乙酰苯的浓度之间的相关性，得到两者相关的标准曲线；
步骤二、采用与步骤一相同的顶空气相色谱法对待测的果葡糖浆中2-氨基乙酰苯进行色谱检测，得到其中含有的2-氨基乙酰苯的色谱柱的柱峰面积，并根据步骤一的标准曲线计算出果葡糖浆中2-氨基乙酰苯的含量。
2.如权利要求1所述的顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法，其特征在于，所述含有2-氨基乙酰苯的标准溶液的配制方法包括如下步骤：
步骤11、准确称取0.25g的2-氨基乙酰苯，用乙腈溶解后转移至250mL容量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，得到1000mg/L的标准储备液；准确移取上述标准储备液1mL到100mL容量瓶中用水稀释定容至刻度，得到10mg/L的中间标准溶液；再准确移取上述中间标准溶液1mL到100mL容量瓶中用水稀释定容至刻度，得到100μg/L的标准使用液；再将标准使用液(100μg/L)用水精密稀释，配制成含0.1mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.5mg/mL的2-氨基乙酰苯系列标准溶液；
步骤12、将上述系列标准溶液依次装入20.0mL顶空进样瓶中，准备待测。
3.如权利要求1所述的顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法，其特征在于，所述顶空气相色谱法是指采用顶空进样，气相色谱GC分析检测；顶空进样条件：加热炉温度80℃，进样针温度85℃，样品平衡时间30min，进样体积1mL，清洗气氮气，清洗压力0.5bar；气相色谱条件：采用HP-INNOWAX毛细管柱(30m x 0.25mm ID)，进样口温度220℃，FID检测器温度250℃，柱温40℃保持5min以10℃/min升至100℃再以30℃/min升至210℃保持10min，载气为氮气/空气，柱流量1.80mL/min，分流比10:1。
4.如权利要求1所述的顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法，其特征在于，在步骤一中，得到两者相关的标准曲线为：y＝1061x+40.67，
式中，x为待测溶液中2-氨基乙酰苯的浓度，单位μg/kg，y为使用顶空气相色谱法在待测溶液中检测得到的2-氨基乙酰苯色谱柱的柱峰面积。
5.如权利要求1所述的顶空气相色谱法测定果葡糖浆中2-氨基乙酰苯含量的方法，其特征在于，所述待测的果葡糖浆还经过以下方法处理：精确称取果葡糖浆50g，加入50mL的2％磷酸溶液，充分混合后，水浴10min，冷却后备用。
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