CN111909138A - 抑制tdg活性的化合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一类抑制TDG活性的化合物。具体地，本发明提供了一种如式I所示的具有新颖结构的化合物。本发明的小分子抑制剂对TDG具有优异的抑制作用。
Description
技术领域
本发明属于医药化学领域，具体涉及抑制TDG活性的化合物及其制法和应用。
背景技术
人胸腺嘧啶DNA糖基化酶(Human thymine DNA glycosylase，hTDG)属于尿嘧啶DNA糖基化酶(uracil DNA glycosylase，UDG)超家族。该家族中的酶利用碱基翻转机制定位双链DNA(dsDNA)中的受损碱基，通过激活DNA碱基切除修复(DNA base-excisionrepair，BER)途径替代受损碱基来介导DNA修复作用。文献报道，hTDG识别G·U和G·T对中错配的嘧啶尿嘧啶和胸腺嘧啶，随后进行糖基键切割以激活BER通路修复这些错配的DNA。hTDG的另一项重要功能为通过介导5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5mC)的主动去甲基化参与表观遗传调控途径。在真核生物中，胞嘧啶C5位置的甲基化和去甲基化对转录调控和基因组重编程起至关重要的作用。最近研究表明，在哺乳动物中，TET双加氧酶家族成员可将5mC氧化成5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)，并进一步氧化为5-甲酰基胞嘧啶(5fC)和5caC。hTDG识别5caC和5fC后激活BER途径，切除氧化的胞嘧啶并用未氧化的胞嘧啶(C)对切除位点进行修复，最终完成5mC的主动去甲基化过程。hTDG通过这一新发现的主动去甲基化过程，参与转录调控和小鼠胚胎发育过程。除此之外，hTDG还可以通过蛋白-蛋白相互作用与一系列的转录调节因子(如CBP/p300、RXRa、TCF4及TTF-1等)结合，参与细胞的转录调控。
TDG除了参与小鼠胚胎发育之外，在多种转基因致癌小鼠模型中，其表达水平分别在乳腺肿瘤上皮组织、骨肉瘤及淋巴细胞癌中增加。有研究表明，在结直肠癌及胃癌的临床病理切片中发现TDG蛋白的表达上调，而且TDG基因的核苷多态性与多种肿瘤的易感性有密切关系。利用基因干扰技术降低TDG的表达，可以抑制多种肿瘤细胞系如肺癌、结直肠癌、黑色素瘤、乳腺癌、肝癌、胶质瘤、肾癌、胰腺癌、卵巢癌、胃癌、神经母细胞瘤等的存活及生长。
然而目前尚缺乏以TDG为靶点的高效的小分子抑制剂。
综上所述，本领域迫切需要开发一种以TDG为靶点的高效的小分子抑制剂。
发明内容
本发明的目的就是提供一种以TDG为靶点的高效的小分子抑制剂。
在本发明的第一方面，提供了一种如式I所示的化合物，或其立体异构体或互变异构体、或其药学上可接受的盐、或其水合物、或其晶型、或其溶剂化物，
其中，
R1和R2各自独立地选自下组：OH、SH、取代或未取代的C1-6烷氧基(-O-C1-6烷基)、取代或未取代的C1-6烷硫基(-S-C1-6烷基)；或者，R1和R2以及与其相连的碳原子共同形成取代或未取代的五至七元环；且所述五至七元环选自下组：
其中，X和Y各自独立地选自：C(Rc)2(较佳地CH2)、O、S、NRa、C(＝O)、C(＝S)；
R1和R2中，所述取代是指基团中氢被选自下组的一个或多个(较佳地1-3个)取代基所取代：卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、氰基；
R3选自下组：C(Rc)2、C＝O、C＝S、CRc(OH)、CRc(SH)；
n为0、1、2、3或4；
R4为选自下组的二价基团：取代或未取代的C2-C6亚烯基、取代或未取代的C2-C6亚炔基、NRa、取代或未取代的环G基团；其中，所述环G选自下组：4元至18元杂环(较佳地，4元至12元杂环更佳地，4元至6元杂环)、5元至18元杂芳环(较佳地，5元至12元杂芳环)、C6-C14芳环(较佳地，C6-C10芳环；更佳地，苯环)、C3-C18碳环；
R4中，所述取代是指R4基团中一个或多个氢各自独立地被R'和/或R”所取代；附加条件是，当R4为环G基团时，环G还能任选地被氧代和/或硫代；
R5选自下组：H、硝基、卤素(较佳地，F、Cl、Br)、氰基、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未取代的C1-C12烷氧基(C1-C12烷基-O-)(较佳地，C1-C6烷基氧基)、取代或未取代的C1-C12烷基羰基(C1-C12烷基-C(O)-)(较佳地，C1-C6烷基羰基)、-(C(Rc)2)o-OCORb、-(C(Rc)2)o-COORb、-(C(Rc)2)o-NRa-COORb、-(C(Rc)2)o-NRa-OCORb、N(Ra)2、取代或未取代的环E基团；其中，所述环E基团选自下组：4至18元杂环基(较佳地，4元至12元杂环基)、5至18元杂芳基(较佳地，5至12元杂芳基)、C6-C14芳基(较佳地，C6-C10芳基；更佳地，苯基)、C3-C18环烷基；R5中，所述取代是指R5基团中一个或多个氢被R'和/或R”所取代；附加条件是，当R5为环E基团时，环E基团还能任选地被氧代和/或硫代；
o为0、1或2；
R'各自独立地选自下组：羟基、巯基(-SH)、硝基、卤素(较佳地，F、Cl、Br)、氰基、取代或未取代的C1-C10烷基(较佳地，C1-C6烷基，更佳地，C1-C4烷基)、N(Ra)2、取代或未取代的C1-C10烷氧基(较佳地，C1-C6烷氧基，更佳地，C1-C4烷氧基)、取代或未取代的C1-C10烷硫基(较佳地，C1-C6烷硫基，更佳地，C1-C4烷硫基)、取代或未取代的C1-C10烷基羰基(较佳地，C1-C6烷基羰基，更佳地，C1-C4烷基羰基)、-COORb、-OCORb、取代或未取代的4元至12元杂环基、取代或未取代的5元至12元杂芳基、取代或未取代的C6-C14芳基、取代或未取代的C3-C15碳环基；
R”各自独立地选自下组：H、羟基、巯基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；
Ra、Rb和Rc各自独立地选自下组：H、C1-6烷基、C1-C6卤代烷基；
除非特别说明，所述的取代是指基团中一个或多个(较佳地1-3个)氢被选自下组的取代基所取代：氰基、羟基、卤素(F、Cl、Br、I)、C1-6烷基、C1-6卤代烷基。
在另一优选例中，R'各自独立地选自下组：硝基、卤素(较佳地，F、Cl、Br)、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、N(Ra)2(较佳地，NH2)、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、卤代C1-C6烷硫基、C1-C6烷基羰基、卤代C1-C6烷基羰基。
在另一优选例中，R'各自独立地选自下组：硝基、NH2、Br、Cl、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、氰基。
在另一优选例中，R4选自下组：C2-C6亚烯基、NRa、取代或未取代的环G。
在另一优选例中，所述环G为含至少一个N杂原子的杂环或杂芳环；较佳地，环G中的N杂原子与
连接。
在另一优选例中，
为R5-NRa-、
或者
其中，
代表取代或未取代的环G基团。
在另一优选例中，环G基团选自下组：
在另一优选例中，
为未取代的或被1至3个R'和/或R”所取代的选自下组的基团：
在另一优选例中，R5选自下组：H、硝基、卤素(较佳地，F、Cl、Br)、氰基、C1-C12烷基氧基(较佳地，C1-C6烷基氧基)、C1-C12烷基羰基(较佳地，C1-C6烷基羰基)、C1-C12烷基酯基(较佳地，C1-C6烷基酯基)、-(C(Rc)2)o-NRa-COORb、NRa、未取代或被1-3个R'取代的环E基团。
在另一优选例中，环E基团选自：C6-C14芳基(较佳地，苯基)、5元至10元杂芳基(较佳地，含1-3个氮杂原子的5至10元杂芳环)。
在另一优选例中，环E基团选自：
在另一优选例中，环E基团选自：
在另一优选例中，R3为无或C＝O。
在另一优选例中，所述五至七元环为
在另一优选例中，X和Y至少一个为O或S。
在另一优选例中，X为O，Y选自：O、C＝O。
在另一优选例中，所述化合物如式II所示，
其中，R1、R2、R3、R5、Rc、环G和n的定义如上所述。
在另一优选例中，所述化合物如式III所示
其中，R3、R4、R5、Rc、Y、X和n的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的化合物如式IV所示，
其中，n1＝0、1或2；环G、R5、Y和X的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的化合物如式IV-A、式IV-B、式IV-C或式IV-D所示，
其中，p＝0、1或2；n1＝0、1或2；
R5、R'、R”、Y和X的定义如上所述。
在另一优选例中，所述化合物如式V-A或式V-B所示，
其中，n1、R'、R”、Y和X的定义如上所述。
在另一优选例中，所述化合物选自表A中化合物1-54。
本发明的第二方面提供了一种制备如第一方面所述的化合物的方法，所述方法包括步骤：
使式A化合物与式B化合物反应，从而得到式I化合物；
其中，Z为离去基团；
n为1、2或3；
R5-R4'选自下组：
R5-N(Ra)H；
R1、R2、R3、R5和Rc的定义同第一方面中定义。
在另一优选例中，Z选自下组：Cl，Br，I。
本发明的第三方面提供了一种药物组合物，包括(i)如第一方面所述的化合物和(ii)药学上可接受的载体。
本发明的第四方面提供了一种如第一方面所述的化合物，或其盐，或其异构体，或者如第三方面所述的药物组合物的用途，(i)用于制备TDG抑制剂，和/或(ii)用于制备治疗和/或预防与TDG过度表达相关的疾病的药物。
在另一优选例中，所述与TDG过度表达相关为肿瘤。
在另一优选例中，所述肿瘤选自下组：肺癌、结直肠癌、黑色素瘤、乳腺癌、肝癌、胶质瘤、肾癌、胰腺癌、卵巢癌、胃癌、神经母细胞瘤，或其组合。
本发明的第五方面提供了一种抑制TDG活性的方法，所述方法包括步骤：
使对象与有效量的如第一方面所述的化合物，或其立体异构体或互变异构体、或其药学上可接受的盐、或其水合物、或其晶型、或其溶剂化物，或者如第三方面所述的药物组合物接触，从而抑制TDG活性。
在另一优选例中，所述的方法是体外非治疗性的和非诊断性的。
本发明的第六方面提供了一种治疗和/或预防与TDG过度表达相关的疾病的方法，所述方法包括步骤：
向对象施用有效量的如第一方面所述的化合物，或其盐，或其异构体，或者如第三方面所述的药物组合物。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
发明人经过广泛而深入地研究。发现了如式I所示的具有新颖结构的化合物，特别是如式I所示的一系列苯并二氧六环类的化合物，对TDG具有优异的抑制活性。基于此完成了本发明。
术语
如本文所用，术语“环G基团”是指环G失去环上二个氢形成的(二价)基团。类似地，“环E基团”是指环E失去环上的一个氢形成的基团。
除非另有表述，术语“烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指具有指定碳原子数的直链或支链烃基(即，C1-C8表示1-8个碳)。在一个优选例中，烷基一般指C1-C6烷基，较佳地，C1-C4烷基。烷基的例子包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。
除非另有表述，术语“烯基”或“亚烯基”指具有一个或多个双键的不饱和烷基或亚烷基。类似地，术语“炔基”或“亚炔基”指具有一个或多个三键的不饱和烷基或亚烷基。此类不饱和烷基的例子包括乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基和更高级的同系物和异构体。
除非另有表述，术语“环烷基”或“碳”是指具有指定环原子数(例如，C3-C18环烷基或C3-C18碳环)并且完全饱和或不饱和(例如在环顶之间具有不超过一个双键)的烃环。“环烷基”也指双环和多环烃环，例如双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷等。
除非另有表述，术语“杂环基”或“杂环”是指含有一至五个选自N、O和S的杂原子的饱和或不饱和的环烷基，其中氮和硫原子任选被氧化，且氮原子任选被季铵化。杂环基可以是单环、双环或多环体系。杂环基的非限制性例子包括吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑烷酮、乙内酰脲、二氧戊环、苯邻二甲酰亚胺、哌啶、1,4-二噁烷、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-S-氧化物、硫代吗啉-S,S-氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环等。杂环烷基可以经环碳或杂原子连接于分子的其余部分。对于诸如环基烷基和杂环基烷基的术语，是指环烷基或杂环烷基通过烷基或亚烷基连接体连接到分子的其余部分。
除非另有表述，术语“亚烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指衍生自烷烃的二价基团，例如-CH2CH2CH2CH2-。烷基(或亚烷基)通常具有1-24个碳原子，其中本发明优选具有10个或更少碳原子的那些基团。“低级烷基”或“低级亚烷基”是较短链烷基或亚烷基，通常具有4个或更少的碳原子。类似地，“亚烯基”或“亚炔基”分别指具有双键或三键的不饱和形式的“亚烷基”。
类似地，除非另有说明，术语“杂烯基”和“杂炔基”其本身或与另一个术语的组合分别指烯基或炔基，其分别含有指定数目的碳和1至3个选自O，N，Si和S的杂原子，且其中氮和硫原子可选地被氧化，氮杂原子可任选地被季铵化。杂原子O，N和S可以位于杂烷基的任何内部位置。
除非另有表述，术语"烷氧基"或“烷基氧基”、"烷氨基""或“烷基氨基”和"烷硫基"或“烷基硫基”(或硫代烷氧基)以其常规意义使用，指代分别经氧原子、氨基或硫原子连接于分子的其余部分的那些烷基。此外，对于二烷基氨基，烷基部分可以相同或不同，也可和与各烷基相连的氮原子组合形成3-7元环。因此，-NRaRb所示基团表示包括哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、氮杂环丁烷基(azetidinyl)等。
除非另有表述，术语“卤代”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分是指氟、氯、溴、或碘原子。此外，诸如“卤代烷基”等术语表示包括单卤代烷基或多卤代烷基。例如，术语“C1-4卤代烷基”表示包括三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
除非另有表述，术语“芳基”表示多不饱和的(通常芳香性)的烃基，其可以是单环或稠合在一起或共价连接的多环(最多三环)。术语“杂芳基”或“杂芳环”是指含有1至5个选自N、O、和S的杂原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选被氧化，氮原子任选被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接于分子的其余部分。芳基的非限制性例子包括苯基、萘基和联苯基，而杂芳基的非限制性例子包括吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、苯并三嗪基(benzotriazinyl)、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并***基、苯并异噁唑基、异苯并呋喃基(isobenzofuryl)、异吲哚基、中氮茚基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、***基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基等等。以上芳基和杂芳基环***各自的取代基选自下述可接受的取代基的组。
为简洁起见，当术语“芳基”与其它术语(例如芳氧基，芳硫基，芳烷基)组合使用时，包括如上所定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”是指包括其中芳基连接到与分子的其余部分连接的烷基的那些基团(例如苄基，苯乙基，吡啶基甲基等)。
在一些实施例中，上述术语(如“烷基”，“芳基”和“杂芳基”)将包括指定基团的取代和未取代形式。下面提供了每种类型基团的优选取代基。为简洁起见，术语芳基和杂芳基将指代如下文所提供的取代或未取代的形式，而术语“烷基”和相关的脂肪族基团是指未取代的形式，除非指明被取代。
烷基(包括通常称为亚烷基，烯基，炔基和环烷基的那些基团)的取代基可以是选自下组的各种基团：-卤素、-OR'、-NR'R”、-SR'、-SiR'R”R”'、-OC(O)R'、-C(O)R'、-CO2R'、-CONR'R”、-OC(O)NR'R”、-NR”C(O)R'、-NR'-C(O)NR”R”'、-NR”C(O)2R'、-NH-C(NH2)＝NH、-NR'C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR'、-S(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)2NR'R”、-NR'S(O)2R”、-CN和-NO2，数量从零到(2m'+1)，其中m'是这种基团中的碳原子总数。R'、R”和R”'各自独立地表示氢，未取代的C1-8烷基，未取代的杂烷基，未取代的芳基，被1-3个卤素取代的芳基，未取代的C1-8烷基，C1-8烷氧基或C1-8硫代烷氧基，或未取代的芳基-C1-4烷基。当R'和R”连接到相同的氮原子时，它们可以与氮原子结合形成3-，4-，5-，6-或7-元环。例如，-NR'R”是指包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。术语“酰基”，单独或作为另一基团的一部分使用，是指其中在最接近该基团的连接点的碳上两个取代基的被取代基＝O取代(例如-C(O)CH3,-C(O)CH2CH2OR'等)。
如本文所用，术语“杂原子”意在包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。
对于本文提供的化合物，从取代基(通常为R基团)到环(例如环G、环E等)的中心的键将被理解为是指在环(或衍生自环的基团)的任何可用顶点提供连接的键。
除非特别说明，本发明中，所有出现的化合物均意在包括所有可能的光学异构体，如单一手性的化合物，或各种不同手性化合物的混合物(即外消旋体)。本发明的所有化合物之中，各手性碳原子可以任选地为R构型或S构型，或R构型和S构型的混合物。
本发明的某些化合物拥有不对称碳原子(光学中心)或双键；消旋体、非对映体、几何异构体、区域异构体和单独的异构体(例如，分离的对映体)均应包括在本发明范围内。当本文提供的化合物具有确定的立体化学(表示为R或S，或具有虚线或楔形键指明)时，被本领域技术人员将理解那些化合物为基本上不含其他异构体(例如至少80％，90％，95％，98％，99％和至多100％不含其他异构体)。
在本文中，除特别说明之处，术语“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：氰基、羟基、卤素(F、Cl、Br、I)、C1-6烷基、C1-6卤代烷基。
如本文所用，“1至3个”或“1-3个”是指1、2或3个。
如本文所用，术语“含有”、“包含”或“包括”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”、“由...组成”包含在术语“含有”中。
如本文所用，术语“药学上可接受的”成分是指适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和***反应)，即有合理的效益/风险比的物质。
如本文所用，术语“治疗有效剂量”或“有效量”是指药物的任何如下所述的量，当单独使用或与另一种治疗剂组合使用该量的药物时，可促进疾病消退，疾病消退表现为疾病症状的严重度降低、无疾病症状期的频率和持续时间增加、或者防止由患病导致的障碍或失能。本发明药物的“治疗有效剂量”或“有效量”也包括“预防有效剂量”，“预防有效剂量”是药物的任何如下所述的量，当将该量的药物单独施用或者与另一种治疗剂组合施用于具有发生疾病的风险或者遭受疾病复发的受试者时，可抑制疾病的发生或复发。
本发明化合物
本发明提供了用于高效抑制TDG的化合物。
如本文所用，术语“本发明化合物”或者“活性化合物”指具有式I结构的化合物、药学上可接受的盐、前药、光学异构体、外消旋体、溶剂化物、多聚体，
式中，各基团定义如第一方面中所述。
在一个具体实施例中，本发明化合物为表A中的化合物(即化合物1-化合物54)。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。
除盐形式外，本发明还提供了前药形式的化合物。本文所述的化合物的前药是在生理条件下很容易经历化学变化以提供本发明化合物的那些化合物。另外，前药可以在离体环境中通过化学或生物化学方法转变为本发明化合物。例如，当置于含合适的酶或化学试剂的经皮贴片贮器中时，前药可缓慢转变为本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在，包括水化形式。溶剂化形式通常与非溶剂化形式等价，应包括在本发明范围内。本发明的某些化合物可以多晶型或无定形形式存在。通常，就本发明所考虑的应用而言，所有物理形式是等价的，应包括在本发明范围内。
本发明化合物还可在构成此类化合物的一个或多个同位素原子处含有非天然比例的原子同位素。某同位素的非天然比例可以定义为从所讨论原子的天然发现的量到100％该原子的量。例如，化合物可以掺入放射性同位素，例如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)，或非放射性同位素，例如氘(2H)或碳-13(13C)。除了本申请所述的那些用途，此类同位素变体可提供额外的用途。例如，本发明化合物的同位素变体可以有额外的用途，包括但不限于作为诊断的和/或成像试剂，或作为细胞毒性/放射毒性治疗剂。另外，本发明化合物的同位素变体可具有改变的药代动力学和药效学特征，从而有助于增加治疗期间的安全性、耐受性或疗效。无论是否有放射性，本发明化合物的所有同位素变体均应包括在本发明范围内。
本发明“药物组合物”可以制成片剂、胶囊、粉剂、颗粒、锭剂、栓剂、口服液或无菌胃肠外悬液等液体制剂形式，以及大或小容量注射剂、冻干粉剂等针剂形式。上述剂型的药物均可按照药学领域的常规方法制备。
本发明所述的“药学上可接受的载体”包括药学领域常规的稀释剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
如对本领域所属技术人员显而易见地，有效的体内给药剂量及具体的给药方式会根据所治疗的哺乳动物种类、体重和年龄，所使用的具体化合物及使用这些化合物的具体目的而变化。本领域所属技术人员根据常规的药理学方法可确定有效剂量水平(即达到所需效果所必需的剂量水平)。通常，产物的人体临床应用从较低的剂量水平开始，随后不断提高剂量水平直到达到所需的效果。可选择地，可通过现有的药理学方法采用可接受的体外研究来建立本方法鉴定的组合物的有用剂量和给药途径。
本发明化合物、其异构体、其药学上可接受的盐、或包含所述化合物的药物组合物的施用方式没有特别限制。代表性的施用(给药)方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)等。本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。本发明的化合物可参照其他小分子抑制剂的给药或施用方式，例如可选用的给药或施用方式包括(但并不限于)：口服、经皮、静脉内、肌內、局部给药等。
制备方法
本发明的化合物物可采用本领域的通用方法和/或参照具体实施例的方法制备得到，
在一个具体实施例中，本发明提供了一种式I化合物的方法，包括步骤：
使式A化合物与式B化合物反应，从而得到式I化合物；
其中，Z为离去基团，R4'含有可进行亲核取代反应的胺基，n为1、2或3，式中其他基团的定义同前。
较佳地，R5-R4'选自下组：
R5-N(Ra)H。
较佳地，Z包括：Cl，Br，I。
药物组合物和施用方法
由于本发明化合物具有优异的TDG抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物，溶剂合物，多聚体，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解由突变型TDG介导的疾病。
优选地，本发明化合物可用于治疗与肿瘤细胞系相关的疾病。代表性的肿瘤细胞系相关的疾病包括(但并不限于)：肺癌、结直肠癌、黑色素瘤、乳腺癌、肝癌、胶质瘤、肾癌、胰腺癌、卵巢癌、胃癌、神经母细胞瘤，或其组合。
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-500mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温
)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和***胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明的主要优点包括
(a)本发明的化合物对TDG具有优异的抑制作用；
(b)本发明的化合物可有效的抑制肿瘤和/或癌症细胞。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
实施例1
路线1.合成化合物1～8.
1.化合物1～化合物8的通用制备方法.
1.1.1 3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙-1-酮的合成(1i)
2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英2g(14.7mmol)，DCM5ml混合于50ml小瓶中。混合物冷却到10℃。加入3-溴丙基氯3.15g(18.4mmol)。然后将AlCl3 3.15g分批加入其中。混合物在室温下搅拌2小时。用冰浴冷却至10℃，反应停止。盐酸四毫升慢慢滴入其中。然后将20ml冷水加入反应混合物中搅拌10min，收集有机物，用DCM 20ml×2萃取水层。复合有机物用饱和NaHCO35ml×3洗涤，盐水10ml，真空浓缩，得到粗产物1i。
1.1.2. 1,2-双溴甲基苯的合成(1b)
在1,2-二甲基苯(14mmol)溶液中，加入15ml CCl4中的NBS(35mmol)AIBN(3.5mmol)，在70℃下搅拌2小时。将有机溶剂在真空条件下浓缩得到粗品，用80g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，EA/PE梯度洗脱(0-10％)得到1b。
1.1.3. 2-(甲苯-4-磺酰基)-2,3-二氢-1H-异吲哚的合成(1c)
取DMF 15ml中NaH(0.5g,20.1mmol)溶液，滴注DMF 2.5ml中Tos–NH2(1.1g,6.7mmol)，60℃搅拌30min。30min后，滴加DMF 2.5ml中的1b(6.7mmol)到混合反应中。然后在60摄氏度下搅拌1小时。将10毫升冰水滴入冰浴中。静置分层后，用EA 20ml×3萃取水层。然后有机层合并，NaHCO3饱和溶液10毫升×2和盐水10毫升清洗。真空除去溶剂得到粗品1c，由一个闪纯化柱层析40克硅胶柱和梯度洗脱的EA/PE(80-100％)。
1.1.4. 5-取代-2,3-二氢-1H-异吲哚的合成(1ii)
HBr/THF 12ml中1c(2.60mmol)的混合物在室温下搅拌或加热过夜。溶剂在真空下浓缩得到粗产物1ii
1.1. 3-(5-取代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-1-(2,3-二氢-苯并[1,4]二恶英-6-基)-丙-1-酮的合成(1)
将1ii(2.6mmol)、Et3N(788mg,7.8mmol)、DMAP(61mg,0.5mmol)加入THF 20ml溶液中，加入1i(589mg,2.6mmol)。然后在室温下搅拌2小时。反应混合物中加入10ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA 10ml×3萃取水层。然后有机层合并,NaHCO3 5毫升×2和盐水5毫升洗涤。真空除去溶剂得到粗品,由一个闪纯化柱层析40克硅胶柱和梯度洗脱的EA/PE(80-100％)获得400毫克的白色固体(50％的收率)。
LC-MS:RT＝1.29min；纯度97.3％；ESI m/z[M+1]+＝311.14.
1HNMR(500MHz,CDCl3):δ7.79-7.68(m,1H),7.50-7.45(m,1H),7.27-7.21(m,4H),7.14-7.03(m,1H),4.50-4.43(m,2H),4.15-4.10(m,4H),3.33(t,J＝4.5Hz,4H),3.19-3,14(m,2H).
1.2. 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(5-硝基异吲哚-2-基)丙-1-酮的合成(2)
5-硝基异吲哚啉150毫克(0.91mmol),Et3N 276毫克(2.73mmol),DMAP 22毫克(0.18mmol)和四氢呋喃10毫升20毫升瓶混合,搅拌15分钟。3-氯-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙-1-酮247毫克(0.91mmol)被添加到它,在室温下搅拌4h。反应被稀释了EA 20毫升,用水洗(2×10毫升)然后盐水,干过硫酸钠。滤液在真空下浓缩得到粗品，经80g硅胶柱的闪柱色谱和EA(乙酸乙酯)/PE(石油)(0-80％)梯度洗脱得到20mg棕色固体(6.1％收率)。
LC-MS:RT＝1.19min；纯度92.0％；ESI m/z[M+1]+＝355.40
1.3. 1-(3,4-二甲氧基苯基)-3-(异吲哚啉-2-基)丙-1-酮的合成(3)
在THF 15ml中加入5-溴-2,3-二氢-1H-异吲哚(100mg,0.5mmol)、Et3N(150mg,1.5mmol)、DMAP(12mg,0.1mmol)的溶液中加入3-氯-1-(2,3-二氢-苯并[1,4]二苯基)-丙基-1-酮(114mg,0.5mmol)，室温搅拌2小时。反应混合物中加入10ml水，搅拌10min，静分层后，用EA 10ml萃取水层一次。然后将有机层与饱和NaHCO3 5ml×2和盐水5ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，EA/PE梯度洗脱(50-80％)。最后，得到了85毫克的棕油。收率49.7％。
LC-MS:RT＝1.31min；纯度95.1％；ESI m/z[M+H]+＝388 FA流动***.
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.54-7.52(m,2H),7.33(d,J＝8.0Hz,2H),7.07(d,J＝8.0Hz,1H),6.92(d,J＝9.0Hz,1H),4.34-4.28(m,4H),4.00(d,J＝17.0Hz,2H),3.23(t,J＝3.5Hz,1H).
1.4. 3-(5-氯-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-1-(2,3-二氢-苯并[1,4]二恶英-6-基)-丙-1-酮的合成(4)
向THF 20ml中5-氯-2,3-二氢-1H-异吲哚(400mg,2.6mmol)、Et3N(788mg,7.8mmol)、DMAP(61mg,0.5mmol)的溶液中加入3-氯-1-(2,3-二氢-苯并[1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮(589mg,2.6mmol)。然后在室温下搅拌2小时。反应混合物中加入10ml水，搅拌10min，静分层后，用EA 10ml萃取水层一次。然后将有机层与饱和NaHCO3 5ml×2和食盐水5ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱闪柱色谱进行纯化，EA/PE梯度洗脱(80-100％)。最后，得到了120毫克的棕油。分析结果:收率49.7％。
LC-MS:RT＝1.25min；纯度95.1％，ESI m/z[M+H]+＝344 FA流动***.
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.55-7.53(m,2H),7.19-7.14(m,2H),7.08(d,J＝6.0Hz,1H),6.93-6.92(m,1H),4.34-4.28(m,4H),4.12(d,J＝7.0Hz,4H),3.26(t,J＝4.5Hz,1H).
1.5.1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(5-甲氧基异吲哚-2-基)丙-1-酮的合成(5)
将5-甲氧基异吲哚林100mg(0.67mmol)、Et3N 203mg(2.01mmol)、DMAP 16mg(0.134mmol)、THF 2ml混合于20ml小瓶中搅拌15min，加入3-氯-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二甲苯-6-酰基)-丙基-1-酮152mg(0.67mmol)，室温搅拌过夜。停止反应，在真空条件下浓缩得到粗品，用25g硅胶柱的闪柱柱层析和MeOH(甲醇)/DCM(二氯甲烷)(0-5％)梯度洗脱得到60mg黄油。分析结果:收率26.4％。
LC-MS:RT＝1.22min；纯度99.0％；ESI m/z[M+1]+＝340.26
1.6. 3-(5-氟-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-1-(2,3-二氢-苯并[1,4]二恶--6-基)-丙-1-酮的合成(6)
向THF 20ml中5-氟-2,3-二氢-1H-异吲哚(540mg,4.0mmol)、Et3N(1200mg,12.0mmol)、DMAP(96mg,0.4mmol)溶液中加入3-氯-1-(2,3-二氢-苯并[1,4]二恶英-6-基)-丙基-1-酮(891mg,4.0mmol)。然后在室温下搅拌2小时。反应混合物中加入20ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA 20ml萃取水层一次。然后将有机层与饱和NaHCO3 10ml×2和盐水10ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，DCM/MeOH梯度洗脱(0-10％)。最后，得到了350mg的棕油。分析结果:收率27.2％。
LC-MS:RT＝1.21min；>95％纯度ESI m/z[M+H]+＝328 FA流动***.
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.55-7.53(m,2H),7.16-7.14(m,1H),6.93-6.91(m,3H),4.34-4.28(m,4H),4.10(d,J＝13.0Hz,4H),3.31(t,J＝4.5Hz,4H).
1.7. 3-(5-乙酰基异吲哚啉-2-基)-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烷-6-基)丙-1-酮的合成(7)
2-异吲哚啉-5-基2-氧代乙-1-基50毫克(0.32mmol),Et3N 98毫克(0.96mmol),DMAP8毫克(0.066mmol)和四氢呋喃10毫升在20毫升瓶中混合,搅拌30分钟。3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙-1-酮86毫克(0.32mmol)被添加到它,在室温下搅拌3h。反应是停下来,集中在粗品真空给下,采用80g硅胶柱闪柱色谱，甲醇/二氯甲烷(0-5％)梯度洗脱，得到20mg黄油。分析结果:收率18.4％。
LC-MS:RT＝1.17min；纯度99.0％；ESI m/z[M+1]+＝352.22.
1.8. 2-(3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-氧代丙基)异亮氨酸-5-腈的合成(8)
以异吲哚-5-碳腈(320mg,2.22mmol)、Et3N(673mg,6.66mmol)、DMAP(54mg,0.44mmol)为溶剂，在THF 15ml中加入3-氯-1-(2,3-二氢苯并[1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮(503mg,2.22mmol)。然后在室温下搅拌4小时。反应混合物中加入20ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA 20ml萃取水层一次。然后将有机层与饱和NaHCO3 10ml×2和盐水10ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，DCM/MeOH梯度洗脱(0-10％)。最终得到黄油230mg。分析结果:产率31.4％。
LC-MS:RT＝1.15min；>95％纯度；ESI m/z[M+H]+＝335 FA流动***.
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.70(s,1H),7.66(d,J＝7.5Hz,1H),7.53(d,J＝13.5Hz,1H),7.49(s,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),6.97(d,J＝8.5Hz,1H),4.34-4.28(m,4H),3.92(d,J＝15.5Hz,4H),3.18(t,J＝14.5Hz,2H),3.02(t,J＝7.0Hz,2H).
实施例2
2. 3-(5-氨基异吲哚啉-2-基)-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙-1-酮的合成(9)
路线2.合成化合物9.
1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(5-硝基异吲哚啉-2-基)丙-1-酮1.8g(5.1mmol)和甲醇20毫升在100毫升瓶中混合,搅拌5分钟。NH4Cl 1.6克(30.6mmol)和铁0.85克(15.2mmol)添加进去,混合物加热回流4h,反应溶液冷却至室温,用甲醇洗净,滤液蒸发减少压力下获得粗品产品。采用C18柱闪柱色谱和ACN(乙腈)/H2O梯度洗脱(5-60％)对粗品进行纯化，得到15mg黄色固体。
LC-MS:RT＝1.18min；纯度91.0％；ESI m/z[M+1]+＝325.29
实施例3
3. 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(异吲哚啉-2-基)丙-1-醇的合成(10)
路线3.合成化合物10.
将1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)-3-(异吲哚林-2-酰基)丙-1(1)50mg(0.162mmol)和MeOH 5ml混合于20ml小瓶中搅拌5min，加入NaBH4 12mg(0.324mmol)室温搅拌4h，停止反应，真空浓缩得到粗品。采用25g硅胶柱的闪柱色谱和甲醇/二氯甲烷(0-5％)梯度洗脱法对粗品进行纯化，得到20mg棕色固体。分析结果:收率39.8％。LC-MS:RT＝1.12min；纯度99.0％；ESI m/z[M+1]+＝312.21
实施例4
4.制备化合物11～28的通用步骤.
路线4.合成化合物11～28.
4.1. 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(二氢吲哚-1-基)丙-1-酮的合成(11)
向11ii(1mmol)、Et3N(3mmol)、DMAP(24mg,0.2mmol)于THF 10ml的溶液中加入1i(1mmol)。然后在室温下搅拌2小时。反应混合物中加入5ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA10ml×3萃取水层。然后将有机层与饱和NaHCO3 5ml×2和食盐水5ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱闪柱色谱进行纯化，EA/PE梯度洗脱(80-100％)。
4.2. 2-(3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-氧代丙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成(12)
向12ii(1mmol)、Et3N(3mmol)、DMAP(24mg,0.2mmol)于THF 10ml的溶液中加入1i(1mmol)。然后在室温下搅拌2小时。反应混合物中加入5ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA10ml×3萃取水层。然后将有机层与饱和NaHCO3 5ml×2和盐水5ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，EA/PE梯度洗脱(80-100％)。
4.3. 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)丙-1-酮的合成(13)
向13ii(1mmol)、Et3N(3mmol)、DMAP(24mg,0.2mmol)于THF 10ml的溶液中加入1i(1mmol)。然后在室温下搅拌2小时。反应混合物中加入5ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA10ml×3萃取水层。然后将有机层与饱和NaHCO3 5ml×2和盐水5ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，EA/PE梯度洗脱(80-100％)。
4.4. 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)丙-1-酮的合成(14)
将1、2、3、4-四氢喹啉98mg(0.738mmol)、Et3N 120mg(1.18mmol)、DMAP 18mg(0.148mmol)、THF 8ml混合于20ml小瓶中。加入3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮200mg(0.738mmol)室温搅拌3h，停止反应，与上批反应进行。反应混合物在真空下浓缩得到粗品，经40g硅胶柱的闪柱色谱和EA(乙酸乙酯)/PE(石油)(0-30％)梯度洗脱得到180mg白色固体。分析结果:收率75.5％。LC-MS:RT＝1.84min；97％纯度；ESI m/z[M+1]+＝324.39
4.5 3-(2,3-二氢-4H-苯并[b][1,4]恶嗪-4-基)-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)的合成)丙-1-酮(15)
将15ii(1mmol)、Et3N(3mmol)、DMAP(24mg,0.2mmol)加入THF 10ml溶液中，加入1i(1mmol)。然后在室温下搅拌2小时。反应混合物中加入5ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA10ml×3萃取水层。然后将有机层与饱和NaHCO3 5ml×2和食盐水5ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱闪柱色谱进行纯化，EA/PE梯度洗脱(80-100％)。
4.6 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(吡咯烷-1-基)丙-1-酮的合成(16)
将吡咯烷酮31.4mg(0.442mmol)、Et3N 134.1mg(1.326mmol)、DMAP 11mg(0.084mmol)、THF 4ml混合于20ml小瓶中。加入3-氯-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-yl)-丙基-1-酮100mg(0.442mmol)。然后将混合物在室温下搅拌2小时。反应停止了，浓缩得到粗品。采用25g硅胶柱的闪柱色谱法对粗品进行纯化，MeOH(甲醇)/DCM(二氯甲烷)梯度洗脱(0-3％)。
得到40mg黄色固体。
分析结果:收率34.7％。
LC-MS:RT＝1.26min；纯度:99.5％；ESI m/z[M+1]+＝262.32
4.7. 1-(3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英--6-基)-3-氧代丙基)吡咯烷-3-酮的合成(17)
吡咯烷-3-酮盐酸盐116毫克(0.738mmol),Et3N 224毫克(2.214mmol),DMAP18毫克(0.148mmol)和四氢呋喃8毫升20毫升瓶混合,搅拌15分钟。3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)丙基-1-酮200毫克(0.738mmol)被添加到它,在室温下搅拌4h。反应是停下来,浓缩得粗品,采用120g硅胶柱的闪柱色谱和MeOH(甲醇)/DCM(二氯甲烷)(0-10％)梯度洗脱纯化得到60mg白色固体。分析结果:收率29.6％。LC-MS:RT＝0.95min；90.0％纯度；ESI m/z[M+1]+＝276.30
4.8. 1-(3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-氧代丙基)-5-(4-氟苯基)吡啶-2(1H)-酮的合成(18)
在THF 10ml溶液中加入5-(4-氟苯基)-1H-吡啶-2-1(163mg,0.9mmol)，Et3N(270mg,2.7mmol)，DMAP(24mg,0.2mmol)-氯-1-(2,3-二氢-苯并[1,4]二恶英-6-基)-丙基-1-酮(204mg,0.9mmol)。然后在室温下搅拌4小时。反应混合物中加入20ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA 20ml萃取水层一次。然后有机层合并。NaHCO3 10毫升×2和盐水10毫升洗涤。真空除去溶剂得到粗品,由一个闪纯化柱层析40克硅胶柱和梯度洗脱甲醇/DCM(0-10％)。最后，得到了60mg的无色油。分析结果:收率18.4％。
LC-MS:RT＝1.59min；>95％纯度；ESI m/z[M+Na]+＝402 FA流动***.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79(d,J＝2.4Hz,1H),7.56-7.53(m,1H),7.49-7.45(m,2H),7.37-7.36(m,2H),7.11-7.07(m,2H),6.86(d,J＝8.4Hz,1H),6.62(d,J＝9.6Hz,1H),4.38(t,J＝5.6Hz,4H),4.37-4.27(m,2H),4.25-4.23(m,2H),3.50-3.43(m,2H).
4.9. 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(嘧啶-2-基)哌啶-1-基)吡咯烷-1-酮的合成(19)
在THF 15ml中加入2-(哌拉嗪-1-基)嘧啶(180mg,1.10mmol)、Et3N(333mg,3.30mmol)、DMAP(27mg,0.22mmol)溶液，加入3-氯-1-(2,3-二氢苯并[1,4]二恶英-6-基)-丙基-1-酮(249mg,1.10mmol)。然后在室温下搅拌4小时。反应混合物中加入20ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA 20ml萃取水层一次。然后将有机层与饱和NaHCO3 10ml×2和盐水10ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，DCM/MeOH梯度洗脱(0-10％)。最后，得到了240mg的黄色油脂。分析结果:收率61.9％。
LC-MS:RT＝1.01min；>95％纯度；ESI m/z[M+H]+＝355 FA流动***.
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.31(d,J＝4.5Hz,2H),7.52-7.51(m,2H),6.92-6.91(m,1H),6.49(t,J＝4.5Hz,1H),4.33-4.28(m,4H),3.87(s,4H),3.19(t,J＝7.5Hz,2H),2.91(t,J＝7.5Hz,2H),2.62(t,J＝4.5Hz,4H).
4.10. 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(异喹啉-6-基氨基)丙-1-酮的合成(20)
将3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮281mg(1.04mmol)、异喹啉-6-胺、100mg(0.69mmol)、NaI 104mg(0.69mmol)K2CO3 200mg(1.38mmol)、DMF/H2O混合于20ml小瓶中。在室温下搅拌2小时。薄层色谱法检测无反应，反应混合物加热至70℃，搅拌过夜。停止反应，浓缩得到粗品，用40g硅胶柱的闪柱色谱进行纯化，MeOH(甲醇)/DCM(二氯甲烷)(0-3％)梯度洗脱，得到20mg黄色固体。
LC-MS:RT＝1.22min；纯度:95.0％；ESI m/z[M+1]+＝335.22
1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.86(s,1H),8.17(d,J＝5.5Hz,1H),7.74(d,J＝9.0Hz,1H),7.53-7.45(m,3H),7.07-7.05(m,1H),6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.69-6.62(m,2H),4.33-4.28(m,5H),3.51-3.48(m,3H).
4.11. 1-(2,3-二氢-苯并[1,4]二恶--6-基)-3-(3-苯基-哌啶-1-基)-丙-1-酮的合成(21)
在THF 15ml的3-苯基哌啶(400mg,2.5mmol)、Et3N(750mg,7.5mmol)、DMAP(61mg,0.5mmol)溶液中加入3-氯-1-(2,3-二氢-苯并[1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮(561mg,2.5mmol)。然后在室温下搅拌2小时。反应混合物中加入20ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA 20ml萃取水层一次。然后将有机层与饱和NaHCO3 10ml×2和食盐水10ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，MeOH/DCM梯度洗脱(0-10％)。最后得到280mg的棕油。分析结果:收率34.7％。
LC-MS:RT＝1.31min；>95％纯度；ESI m/z[M+H]+＝352 FA流动***.
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.51-7.49(m,2H),7.32-7.29(m,2H),7.24-7.22(m,3H),6.91-6.89(m,1H),4.32-4.26(m,4H),3.23(s,2H),3.11(t,J＝14.5Hz,2H),2.94(s,3H),2.20(s,2H),1.96(d,J＝13.0Hz,1H),1.84(s,2H),1.19-1.17(m,1H).
4.12. 3-(3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-氧代丙基)-2-硫代噻唑烷-4-酮的合成(22)
将2-噻吩噻唑烷酮-4-1,61mg(0.42mmol)和1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙-2-烯-1-酮80mg(0.42mmol)混合于20ml小瓶中，110℃搅拌1小时。反应停止后，用60gC18柱的闪柱色谱和ACN(乙腈)/H2O(5-95％)梯度洗脱的方法对标题化合物进行纯化。最终得到20mg黄色固体。分析结果:收率12.4％。
LC-MS:RT＝1.57min；纯度91.0％；ESI m/z[M-1]+＝321.93
4.13.((1-(3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-氧代丙基)-3-羟基氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成(23)
向THF 10ml中叔丁基((3-羟基氮杂丁基-3-酰基)甲基)氨基甲酸酯(202mg,1.0mmol)、Et3N(303mg,3.0mmol)、DMAP(25mg,0.2mmol)溶液中加入3-溴-1-(2,3-二氢苯并[1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮(271mg,1.0mmol)。然后在室温下搅拌2小时。反应混合物中加入10ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA 20ml萃取水层一次。然后有机层合并。NaHCO310毫升×2和盐水10毫升洗涤。真空除去溶剂得到粗品,由一个闪纯化柱层析40克硅胶柱和梯度洗脱甲醇/DCM(0-10％)。最后，得到白色固体260毫克。分析结果:收率66.3％。
LC-MS:RT＝1.22min；>95％纯度ESI m/z[M+H]+＝393 FA流动***.
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.50-7.48(m,2H),6.91(d,J＝7.2Hz,1H),4.33-4.29(m,6H),3.87-3.82(m,4H),3.65-3.55(m,2H),3.50-3.47(m,2H).
4.14. 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(6-甲氧基-2H-吲唑-2-基)丙-1-酮的合成(24)
((2h-吲哚-5-酰基)氧)甲基127mg(0.67mmol)和1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙-2-烯-1-酮127mg(0.67mmol)混合于20ml小瓶中，110℃搅拌1小时。用60g C18柱的闪柱色谱和ACN(乙腈)/H2O(5-95％)梯度洗脱，纯化化合物。最终得到30mg黄色固体。分析结果:收率19.6％。
LC-MS:RT＝1.54min；纯度99.0％；ESI m/z[M+1]+＝339.26
4.15. 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)丙-1-酮的合成(25)
将1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)prop-2-en-1-1 160mg(0.84mmol)，1h-吡唑啉[3,4-c]100mg(0.84mmol)吡啶混合于20ml小瓶中。然后在110℃下搅拌2小时。反应混合物经40g硅胶柱的闪柱色谱和DCM/MeOH(0-5％)梯度洗脱纯化，得到白色固体20mg。分析结果:收率7.69％。
LC-MS:RT＝1.11min；纯度:97.0％；ESI m/z[M+1]+＝310.25.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.43(s,1H),7.28(d,J＝6.0Hz,1H),6.80(d,J＝5.6Hz,1H),6.62-6.60(m,2H),6.40(s,1H),6.03(d,J＝9.2Hz,1H),4.13(t,J＝6Hz,2H),2.86(t,J＝6Hz,2H),0.469-0.389(m,4H).
4.16. 3-((1H-异吲哚-3-基)氨基)-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)丙-1-酮的合成(26)
1H-异吲哚-3-胺。盐酸盐150毫克(0.885mmol),Et3N 270毫克(2.655mmol),DMAP21毫克(0.177mmol)和四氢呋喃2毫升20毫升瓶混合,搅拌30分钟。3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)丙-1-酮240毫克(0.885mmol)被添加到它,在室温下搅拌4h。浓缩得粗品,由一个闪纯化柱层析40g C18柱和梯度洗脱ACN(乙腈)/H2O(0-40％)获得100毫克棕色固体。分析结果:产率26.2％。
LC-MS:RT＝1.23min；纯度90.0％；ESI m/z[M+1]+＝323.25
4.17. 1-(3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-氧代丙基)-2,3-二氢喹啉-4(1H)-酮的合成(27)
2,3-二氢喹啉-4(1H)-酮100mg(0.68mmol)和1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙-2-烯-1-酮129mg(0.68mmol)混合于20ml小瓶中，110℃搅拌1h。反应停止后，用60gC18柱的闪柱色谱和ACN(乙腈)/H2O梯度洗脱(5-95％)，最终得到40mg黄色固体。分析结果:收率26.0％。
LC-MS:RT＝1.59min；纯度95.0％；ESI m/z[M+1]+＝338.34
4.18. 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(4-苯基-1H-吡唑-1-基)丙-1-酮的合成(28)
4-苯基-1H-吡唑61毫克(0.42mmol),1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙-2-烯-1-酮80毫克(0.42mmol)在20毫升瓶混合和搅拌在140 oC 30分钟。反应是停了下来,送到净化标题化合物的闪柱层析60g C18柱和梯度洗脱ACN(乙腈)/H2O(0-5％)。最终得到30mg白色粉末。分析结果:收率21.2％。
LC-MS:EPN18027-081-A RT＝1.65min；纯度95.0％；ESI m/z[M+1]+＝335.22
实施例5
5.2-(3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙基)异吲哚啉的合成(29)
路线5.合成化合物29.
将化合物1100mg(0.323mmol)、TFA 1ml混合于10ml小瓶中。混合物冷却到10℃。滴入三乙基硅烷150mg(1.3mmol)。混合物在室温下搅拌了一夜。反应停止了。混合物在真空下浓缩以得到粗品。采用40g C18柱闪柱色谱和ACN(乙腈)/H2O(0-40％)梯度洗脱法对粗品进行纯化。最后，得到了20毫克的黄油。分析结果:收率21.0％
LC-MS:RT＝1.87min；纯度95.0％；ESI m/z[M+1]+＝296.20
实施例6
6.化合物30～38的制备的通用方法.
路线6.合成化合物30～38.
6.1. 3-(异吲哚啉-2-基)-1-(1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)丙-1-酮的合成(30)
将异吲哚啉盐酸盐700mg(4.5mmol)、Cs2CO3 400mg(13.5mmol)和ACN(10ml)+H2O(0.5ML)混合搅拌在50ml的小瓶中。15分钟后，加入30i(4.5mmol)，在50℃下搅拌过夜。停止反应，倒入水中，提取到CH2Cl2 25ml×3中，用25ml×2水洗净。将有机层在Na2SO4上进行干燥。过滤后除去溶剂，得到黄色固体，用硅胶柱层析法纯化，MeOH/DCM＝0-5％洗脱得到700mg 3-(异吲哚林-2-基)-1-(1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)-丙-1-酮。
LC-MS:RT＝1.22min；ESI m/z[M+1]+＝307.25.
6.2. 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-4-(异吲哚啉-2-基)丁-1-酮的合成(31)
将异吲哚啉盐酸盐97.3mg(0.625mmol)、Cs2CO3 611mg(1.875mmol)、NaI 93.75mg(0.625mmol)、ACN(6ml)在20ml的小瓶中混合搅拌。15min后，加入4-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)丁烷-1-酮,178mg(0.625mmol)，在80℃下搅拌过夜。停止反应，倒入水中，用CH2Cl2 25ml×3萃取，用25ml×2水洗净，用Na2SO4烘干。过滤后，将溶剂浓缩成白色固体，用硅胶柱层析法纯化，MeOH/DCM＝0-5％洗脱得到120mg白色固体。
LC-MS:RT＝1.23min；96.1％纯度；ESI m/z[M+1]+＝324.25.
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.53-7.51(m,4H),6.92-6.90(m,2H),4.33-4.27(m,5H),3.74-3.72(m,4H),3.07-3.04(m,4H),2.02-1.97(m,4H).
6.3.1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-2-(异吲哚啉-2-基)乙-1-酮的合成(32)
将异吲哚啉盐酸盐78mg(0.5mmol)、Et3N 151mg(1.5mmol)、DMAP 12mg(0.1mmol)、THF 10ml混合于20ml小瓶中搅拌15min，加入3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮128mg(0.5mmol)，室温搅拌过夜。反应停止，真空浓缩得到粗品，用40g硅胶柱的闪柱色谱和EA(乙酸乙酯)/PE(石油)梯度洗脱(0-30％)纯化得到粗品。最终得到20mg棕色半固态)。分析结果:收率13.6％。
LC-MS:RT＝1.18min；纯度91.0％；ESI m/z[M+1]+＝296.38
6.4.(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)(异吲哚啉-2-基)甲酮的合成(33)
将2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-羧酸(200mg,1.11mmol)、三乙胺(336.3mg3.33mmol)溶于CH2Cl2(3ml)中，搅拌30min加入HATU(505.4mg 1.33mmol)。然后加入异吲哚啉。盐酸盐(206mg,1.33mmol)。2小时后加入饱和水NaCl 10ml，用CH2Cl2 10ml×3萃取产物。有机层与5％NaHCO3混合洗涤，饱和水NaCl 10ml，有机层浓缩得到粗品，硅胶柱层析洗脱得到粗品
LCMS:RT＝1.53min；纯度:97.3％；ESI m/z[M+1]+＝282.20.
1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ7.39-7.38(m,1H),7.30-7.28(m,3H),7.14-7.11(m,2H),6.94-6.93(m,1H),4.82(d,J＝13.0Hz,4H),4.31-4.28(m,4H).
6.5. 1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-3-(异吲哚啉-2-基)丙-1-酮的合成(34)
将异吲哚啉.盐酸盐700mg(4.5mmol)、Cs2CO3 400mg(13.5mmol)和ACN(10ml)+H2O(0.5ML)混合搅拌在50ml的小瓶中。15分钟后，加入34i(4.5mmol)，在50℃下搅拌过夜。停止反应，倒入水中，提取到CH2Cl2 25ml×3中，用25ml×2水洗净。将有机层在Na2SO4上进行干燥。过滤后除去溶剂，得到黄色固体，用硅胶柱层析法纯化，MeOH/DCM＝0-5％洗脱得到700mg 3-(异吲哚林-2-基)-1-(1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)丙基-1-酮。
6.6.合成1-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-3-(异吲哚啉-2-基)丙-1-酮的合成(35)
在THF 10ml中加入异吲哚盐酸(146mg,0.94mmol)、Et3N(285mg,2.82mmol)、DMAP(23mg,0.19mmol)1-(苯并[d][1,3]二氧嘧啶-5-酰基-3-氯丙基-1-酮(200mg,0.94mmol)，室温搅拌2小时。反应混合物为棕色溶液，LCMS检测结果如下:反应混合物中加入5ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA 10ml萃取水层一次。然后将有机层与饱和NaHCO3 5ml×2和食盐水5ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用硅胶柱25g的闪柱柱层析进行纯化，EA/PE梯度洗脱(50-80％)。最后，获得了一个黑暗固体130毫克。分析结果:收率46.7％。
LC-MS:RT＝1.73min；99％纯度；ESI m/z[M+H]+＝296 BASE流动***.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59(d,J＝8.0Hz,1H),7.45(s,1H),7.18(s,4H),6.85(d,J＝8.0Hz,1H),6.03(s,2H),4.00(s,4H),3.21-3.19(m,4H).
6.7. 6-(3-(异吲哚啉-2-基)丙酰基)苯并二氢吡喃-4-酮的合成(36)
异吲哚林盐酸盐.260.5mg(1.68mmol)，Et3N 510mg(5.04mmol)，DMAP 41mg(0.34mmol)和THF(6ml)混合在一个20ml的小瓶中。搅拌15min，加入3-氯-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮400mg(1.68mmol)。然后在室温下搅拌2小时，反应停止。反应混合物在真空下浓缩得到粗品。用dcm/MeOH＝0-5％洗脱的硅胶柱层析法纯化残渣，得到6-(3-(异吲哚啉-2-基)丙酰基)苯并二氢吡喃-4-酮155mg
LCMS:RT＝1.16min；纯度98.0％；ESI m/z[M+1]+＝322.17.
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ8.53(d,J＝2.5Hz,1H),8.17-8,15(m,1H),7.20(s,4H),7.06(d,J＝9.0Hz,1H),4.62(t,J＝6.5Hz,2H),4.05(s,4H),3.32-3.22(m,4H),2.88(t,J＝6.5Hz,2H).
6.8. 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]氧硫杂环己烯-6-基)-3-(异吲哚啉-2-基)丙-1-酮的合成(37)
将异吲哚啉.盐酸盐77.17mg(0.50mmol)、Et3N 125mg(1.24mmol)、KI 82mg(0.5mmol)、丙酮(6ml)混合于20ml小瓶中搅拌15min，加入3-氯-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]恶沙星-6-酰基)-丙基-1-酮100mg(0.41mmol)反应混合物，室温下连续搅拌过夜。反应停止了。反应混合物在真空下浓缩得到粗品，用DCM/MeOH＝0-5％洗脱的硅胶柱层析纯化得到40mg粉色固体。
LC-MS:RT＝1.27min；纯度95.0％；ESI m/z[M+1]+＝326.25.
1HNMR(500MHz,CDCl3):δ7.75-7.65(m,1H),7.50-7.45(m,1H),7.23-7.20(m,4H),7.14-7.13(m,0.5H),6.89-6.87(m,0.5H),4.50-4.43(m,2H),4.15(d,J＝9.0Hz,4H),3.33(t,J＝4.5Hz,4H),3.19-3,14(m,2H).
6.9. 1-(3,4-二甲氧基苯基)-3-(异吲哚啉-2-基)丙-1-酮的合成(38)
在THF 10ml中加入盐酸盐(135mg,0.87mmol)、Et3N(264mg,2.61mmol)、DMAP(21mg,0.17mmol)3-氯-1-(2,3-dihy drobenzo[b][1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮(200mg,0.5mmol)，室温搅拌2小时。反应混合物为棕色溶液，LC-MS检测如下。反应混合物中加入5ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA 10ml萃取水层一次。然后将有机层与饱和NaHCO35ml×2和食盐水5ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用硅胶柱25g的闪柱柱层析进行纯化，EA/PE梯度洗脱(50-80％)。最终得到了135mg的棕色固体。分析结果:收率47.8％。
LC-MS:RT＝1.44min；纯度99％；ESI m/z[M+H]+＝312 BASE流动***.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(d,J＝10.2Hz,1H),7.54(d,J＝2.0Hz,1H),7.18(s,4H),6.89(d,J＝8.4Hz,1H),4.01(s,4H),3.93(d,J＝10.2Hz,5.6H),3.26-3.20(m,4H).
实施例7
7.化合物39的合成.
路线7.合成化合物39.
在DCM 10ml中加入1-(3,4-二甲氧基苯基)-3-(异吲哚-2-基)-丙基-1-酮(80mg,0.14mmol)，滴加BBr3(195mg,0.78mmol)，室温搅拌过夜。反应混合物为棕色溶液，LC-MS检测如下。结合EPN18034-008-1处理该反应。通过滴加甲醇对该混合物进行了淬火。将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用25g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，EA/PE梯度洗脱(50-80％)。最后，得到了40毫克的黑暗固体。分析结果:收率35.4％。
LC-MS:RT＝1.93min；95％纯度；ESI m/z[M+H]+＝284 BASE流动***.
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.53(dd,J＝2.0,8.5Hz,1H),7.49(d,J＝2.0Hz,1H),7.41(d,J＝2.0Hz,4H),6.88(d,J＝8.5Hz,1H),4.96(d,J＝13.5Hz,2H),4.67(d,J＝13.5Hz,2H),3.85(t,J＝6.5Hz,2H),3.61(t,J＝6.5Hz,2H).
实施例8
8.制备化合物40和41的方法.
路线8.合成化合物40,41.
8.1.1 5-溴异吲哚啉-1,3-二酮的合成(40a)
在dmf2ml的5-溴异苯并呋喃-1,3-二酮溶液中加入尿素(53mg，0.88mmol)。然后在130℃下搅拌3小时。反应混合物为无色溶液，加入10ml水停止反应，静置分层后，用EA 6ml×2萃取水层。然后将有机层与饱和NaHCO3 5ml×2和食盐水5ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩，粗品100mg为淡黄色固体，不需进一步纯化。
LC-MS:RT＝1.35min；纯度90％；ESI m/z[M-H]+＝224 FA流动***.
8.1.2 5-溴异吲哚啉的合成(40b)
在BH3/THF 120ml中加入5-溴异吲哚-1,3-二酮(4g,17.7mmol)，在70℃下过夜，滴加MeOH 10ml停止。将混合溶液在真空条件下浓缩，并加入共混物。盐酸盐40ml,70℃搅拌4小时。然后加入1M NaOH aq将pH值调整为14。静态分层后，用DCM 100ml×3萃取水层。然后将有机层与盐水50ml×2、水50ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩，得到粗品2.0g。
LC-MS:RT＝0.95min；ESI m/z[M+H]+＝198 FA流动***.
8.1.3 5-溴异吲哚啉的合成(40c)
在5-溴-2,3-二氢-1H-异吲哚(1.8g,9.0mmol)溶液中加入THF 40ml中的Boc2O(4.0mg,18.0mmol)Na2CO3 aq 10ml。然后在室温下搅拌4小时。然后将30ml水加入反应混合物中搅拌10min，静置分层后，用EA 30ml×3萃取水层。然后将有机层与饱和NaHCO3 20ml×2和盐水20ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，PE/EA梯度洗脱(10-30％)。最终得到了一种黄色固体(1.6g，收率59.2％)。
LC-MS:RT＝1.87min；ESI m/z[M+H]+＝299 FA流动***.
8.1.4 5-(4-氟苯基)异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯的合成(40e)
将叔丁基5-溴异吲哚-2-羧酸酯(300mg,1.00mmol)、K3PO4(535mg,2.52mmol)、Pd(dppf)Cl2(146mg,0.20mmol)和2-(4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二恶硼烷(444mg,2.00mmol)在1,4-二恶硼烷/H2O 9.6ml中搅拌2小时。停止反应，在真空下浓缩得到粗产物，用40g硅胶柱的闪柱色谱和MeOH/DCM梯度洗脱(0-10％)纯化得到粗产物。最终得到白固体(275mg，收率68.2％)。LC-MS:RT＝1.95min；ESI m/z[M+H]+＝314 FA流动***.
8.1 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(5-(4-氟苯基)异吲哚啉-2-基)丙-1-酮的合成(40)
在THF 15ml中加入5-(4-氟苯基)异吲哚林(187mg,0.88mmol)、Et3N(267mg,2.64mmol)、DMAP(22mg,0.18mmol)溶液中加入3-氯-1-(2,3-二氢苯并[1,4]二恶英-6-基)-丙基-1-酮(200mg,0.88mmol)。然后在室温下搅拌4小时。反应混合物中加入20ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA 20ml萃取水层一次。然后将有机层与饱和NaHCO3 10ml×2和食盐水10ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，MeOH/DCM梯度洗脱(0-10％)。最后，得到了230mg的红色固体。分析结果:收率69.3％。
LC-MS:RT＝1.43min；>95％纯度；ESI m/z[M+H]+＝404 FA流动***.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.55-7.52(m,2H),7.50-7.46(m,2H),7.38-7.35(m,2H),7.26-7.24(m,1H),7.11-7.07(m,2H),6.90(d,J＝8.8Hz,1H),4.32-4.26(m,4H),4.13(d,J＝4.0Hz,4H),3.30(s,4H).
8.2.1 5-(吡啶-4-基)异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯的合成(41e)
将叔丁基5-溴异吲哚-2-羧酸酯(250mg,0.84mmol)、K3PO4(535mg,2.52mmol)、Pd(dppf)Cl2(146mg,0.20mmol)和4-(4,4,5,5-四乙酸-1,3,2-二恶硼烷-2-酰基)吡啶(345mg,1.68mmol)在1,4-二恶烷/H2O 9.6ml中，在80℃下搅拌2小时。反应混合物在真空条件下浓缩得到粗产物，用40g硅胶柱的闪柱色谱和MeOH/DCM(0-10％)梯度洗脱纯化。最后，得到白色固体270mg。分析结果:铃木耦合是成功的。
LC-MS:RT＝1.30min；ESI m/z[M+H]+＝297 FA流动***.
8.2 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(5-(吡啶-4-基)异吲哚啉-2-基)丙-1-酮的合成(41)
在THF 15ml中加入5-(吡啶-4-酰基)异吲哚啉(270mg,1.37mmol)、Et3N(418mg,4.14mmol)、DMAP(34mg,0.28mmol)的溶液中加入3-氯-1-(2,3-二氢苯并[1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮(313mg,1.38mmol)。然后在室温下搅拌4小时。反应混合物中加入20ml水，搅拌10min，静置分层后，用EA 20ml萃取水层一次。然后将有机层与饱和NaHCO3 10ml×2和盐水10ml混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用40g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，DCM/MeOH梯度洗脱(0-10％)。最后，得到了80毫克的黄色油脂。分析结果:收率15.1％。
LC-MS:RT＝1.01min；>95％纯度；ESI m/z[M+H]+＝387 FA流动***.
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.61(d,J＝4.0Hz,2H),7.69-7.66(m,2H),7.62(d,J＝7.5Hz,1H),7.55(d,J＝10.5Hz,1H),7.50(s,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),6.98(d,J＝8.0Hz,1H),4.33-4.29(s,4H),3.95-3.93(m,4H),3.20(t,J＝7.0Hz,2H),3.06(t,J＝7.0Hz,2H).
实施例9
1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙-2-烯-1-酮的合成(42)
路线9.合成化合物42.
将3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮(100mg,0.369mmol)，DCM 5ml混合于20ml小瓶中。混合物冷却到10。加入149mg,1.48mmol的茶叶。混合物在室温下搅拌了一夜。停止反应，在真空条件下浓缩得到粗品，用25g硅胶柱的闪柱柱层析和MeOH(甲醇)/DCM(二氯甲烷)(0-5％)梯度洗脱得到白色固体(80mg)。分析结果:收率57.1％。
LC-MS:EPN18027-060-A Rt＝1.45min；纯度99.0％；ESI m/z[M+1]+＝191.20
实施例10制备化合物43,44的方法.
路线10.合成化合物43,44.
10.1 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(3-(4-氟苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)丙-1-酮的合成(43)
将化合物43a 1.3ml(1.3mmol)的溶液滴加到THF 3ml中17(297mg,1.08mmol)的溶液中，置于50ml烧瓶中，在0℃下加热1小时。将反应混合物倒入氯化铵水溶液中，用EA 10ml×3萃取。有机层结合，用盐水5ml冲洗，无水硫酸镁干燥4小时。除去溶剂后，用25g硅胶柱的闪柱柱层析和MeOH(甲醇)/DCM(二氯甲烷)(0-5％)梯度洗脱得到白色固体(20mg)。
10.2 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(3-羟基-3-苯基吡咯烷-1-基)丙-1-酮的合成(44)
将1-(3-(2,3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)-3-氧丙基)吡咯烷酮-3-1,200mg(0.728mmol)，THF 5ml混合于20ml小瓶中，用干冰置于丙酮中冷却至-40。将苯溴化镁0.728ml(0.728mmol)滴入混合物中，-40搅拌1小时。然后滴加sat.NH4Cl 2ml停止反应。反应混合物中加入5ml冷水，搅拌10min，静置分层后，用EA 20ml×2萃取水层。然后将有机层与sat5ml盐水混合洗涤，将有机溶剂在真空下浓缩得到粗品，用80g硅胶柱的闪柱柱层析进行纯化，MeOH(甲醇)/DCM(二氯甲烷)(0-5％)梯度洗脱。最终得到20mg的白色固体。分析结果:收率7.8％。
LC-MS:EPN18027-031-A RT＝1.21min；90.5％纯度；ESI m/z[M+1]+＝354.42
实施例11
11.化合物45～50的制备的通用方法.
路线11.合成化合物45～50.
11.1.1 3-羟基-3-(4-(三氟甲基)苯基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成(45b)
在THF(30mL)中加入45a(6.67mmol)溶液，在-78℃滴加n-BuLi(2.5M己烷中,3.5mL,8.67mmol)。加入后，在-78℃下搅拌1小时。滴加THF(5mL)中叔丁基3-氧吡咯烷酮-1-羧酸酯(1.85g,9.99mmol)溶液。加入后的混合物在-78℃下搅拌3小时。然后用NH4Cl(sat.，50ml)对混合物进行猝灭，用EtOAc(50ml 2)萃取，将混合后的有机溶液在Na2SO4上干燥，过滤。滤液浓缩后，用硅胶柱层析(石油醚:EtOAc＝4:1)纯化残渣，得到所需产物45b(1.0g，收率45％)为白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.66-7.60(m,4H),3.78-3.57(m,4H),2.38-2.14(m,2H),2.13-2.04(m,1H),1.48(s,9H).
11.1.2 3-(4-(三氟甲基)苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯2,2,2-三氟乙酸酯的合成(45c)
在TFA(5ml)中加入叔丁基3-羟基-3-(4-(三氟甲基)苯基)吡咯烷酮-1-羧酸酯(45b)(700mg,2.10mmol)溶液中加入三乙基硅烷(2ml)。混合物在105℃下搅拌12小时。将混合物浓缩，得到产品45c(1.0g粗品)作为黄色粗品，直接用于下一步。
LCMS[流动相:从自95％水(0.02％NH4OAc)和5％CH3CN至5％水(0.02％NH4OAc)和95％CH3CN，3min内],Rt＝1.355min；MS计算值：213；MS实测值：214[M+H]+.
11.1.3 3-(4-(三氟甲基)苯基)吡咯烷2,2,2-三氟乙酸酯的合成(45d)
将3-(4-(三氟甲基)苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯2,2,2-三氟乙酸酯(45c)(1.0g粗品，2.10mmol)加入MeOH(20ml)中，Pd/C(100mg)。混合物在40℃下，H2(50psi)下搅拌过夜。然后将混合物过滤，滤液浓缩，得到粗品45d(691粗品)为黄色固体，直接用于下一步。
LCMS[流动相：从95％水(0.02％NH4OAc)和5％CH3CN至5％水(0.02％NH4OAc)和95％CH3CN in 3min],Rt＝1.363min；MS计算值：215；MS实测值：216[M+H]+.
11.1 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(3-(4-(三氟甲基)苯基)吡咯烷-1-基)丙-1-酮的合成(45)
将3-(4-(三氟甲基)苯基)吡咯烷2,2,2-三氟乙酸酯(45d)(400mg,1.22mmol)和DIPEA(315mg,2.44mmol)在DCM(15ml)中混合，加入3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-丙基-1-酮(i,397mg,1.46mmol)。所得混合物在室温下搅拌3小时。然后将反应混合物浓缩，用C18柱(CH3CN/水,40％-70％，40min)纯化残渣，得到标题化合物45(50mg，产率10％)为白色固体。
LC-MS[流动相：从60％水(0.02％NH4OAc)和40％CH3CN至30％水(0.02％NH4OAc)和70％CH3CN，6.5min内],纯度:98.89％(214nm),96.25％(254nm)；Rt＝3.273min；MS计算值：405；MS实测值：406[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.61(d,J＝8.0Hz,2H),7.53-7.47(m,4H),6.96(d,J＝8.0Hz,1H),4.33-4.27(m,4H),3.42-3.35(m,1H),3.17-3.07(m,2H),2.91-2.70(m,4H),2.67-2.61(m,1H),2.58-2.51(m,1H),2.32-2.19(m,1H),1.75-1.64(m,1H).
11.2 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(3-(4-硝基苯基)吡咯烷-1-基)丙-1-酮盐酸盐的合成(46)
在DCM(2mL)中加入3-(4-硝基苯基)盐酸吡咯烷酮(40mg,0.17mmol)混合物DIEA(88mg,0.68mmol)。搅拌5分钟后，将混合物冷却至5℃。然后在DCM(1ml)中加入3-溴-1-(2,3-二氢-苯并[1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮(55mg,0.20mmol)溶液。所得混合物在5-15℃下搅拌2小时。将反应溶液倒入水中(10ml)，用DCM(10ml 3)萃取，用盐水(10ml)冲洗组合有机相，在Na2SO4上干燥，过滤。滤液浓缩后，用C18柱层析(20-50％MeCN水溶液，15min)对残渣进行纯化，得到粗品(45mg)为黄色固体。然后用C18[10-50％MeCN在水中(0.1％盐酸盐)，10min]柱层析进一步纯化，得到所需产物46(35mg，产率48％)为黄色固体。
LC-MS[流动相：从95％水(0.02％NH4OAc)和5％CH3CN至5％水(0.02％NH4OAc)和95％CH3CN，6.5min内],纯度:95.82％(214nm),95.00％(254nm)；Rt＝3.870min；MS计算值：382；MS实测值：383[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.43-11.25(m,1H),8.30-8.16(m,2H),7.75-7.68(m,2H),7.56-7.51(m,2H),7.02(d,J＝8.8Hz,1H),4.36-4.29(m,4H),4.02-3.88(m,1H),3.84-3.74(m,6H),3.42-3.37(m,1H),3.30-3.19(m,1H),2.48-2.42(m,1H),2.20-1.98(m,1H).
11.3 3-(3-(4-溴苯基)吡咯烷-1-基)-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)丙-1-酮(47)的合成
在DCM(5mL)中加入3-(4-溴苯基)吡咯烷2,2,2-三氟乙酸盐(49mg,0.14mmol)和3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-丙基-1-酮(45mg,0.18mmol)，DIEA(54mg,0.42mmol)。所得混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物浓缩，用C18柱(CH3CN/水,45％-75％，40min)纯化残渣，得到标题化合物47(20mg，收率34％)为黄色固体。
LC-MS[流动相：从95％水(0.02％NH4OAc)和5％CH3CN至5％水(0.02％NH4OAc)和95％CH3CN，6.5min内],纯度:96.48％(214nm),91.25％(254nm)；Rt＝4.081min；MS计算值：415；MS实测值：416[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.52-7.50(m,2H),7.40-7.38(m,2H),7.13(d,J＝6.8Hz,1H),6.92-6.90(m,1H),4.35-4.26(m,4H),3.38-3.26(m,1H),3.17-3.14(m,2H),3.09-3.06(m,2H),2.97-2.89(m,1H),2.87-2.73(m,2H),2.62-2.53(m,1H),2.38-2.27(m,1H),1.88-1.76(m,1H).
11.4 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(3-(对甲苯基)吡咯烷-1-基)丙-1-酮盐酸盐的合成(48)
将DCM(2ml)中3-(对甲苯基)吡咯烷(30mg,0.19mmol)与DIEA(48mg,0.37mmol)的混合物中加入3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮(56mg,0.20mmol)。混合物在室温下搅拌2小时。将反应溶液倒入10ml的水中，用DCM(20ml2)萃取，在Na2SO4上干燥，过滤浓缩。将残渣溶解于DMSO(1ml)和conc中。盐酸(1)下降。用C18[10-40％MeCN在水中(0.1％盐酸盐)，10min]柱层析纯化，得到所需产物48(30mg，产率41％)为黄色固体。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％TFA)和20％CH3CN至30％水(0.1％TFA)和70％CH3CN，6.5min内],纯度:99.36％(214nm),98.43％(254nm)；Rt＝3.011min；MS计算值：351；MS实测值：352[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.47-11.28(m,1H),7.55-7.51(m,2H),7.30-7.24(m,2H),7.18-7.15(m,2H),7.01(d,J＝8.4Hz,1H),4.35-4.30(m,4H),3.91-3.74(m,1H),3.70-3.52(m,6H),3.39-3.32(m,1H),3.21-3.08(m,1H),2.41-2.35(m,1H),2.28(m,3H),2.13-1.94(m,1H).
11.5 3-(3-(4-氯苯基)吡咯烷-1-基)-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙-1-酮盐酸盐的合成(49)
将3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮(107mg,0.396mmol)加入到二氯甲烷(2mL)中3-(4-氯苯基)吡咯烷(50mg,0.330mmol)和DIEA(85mg,0.660mmol)的混合物中。混合物在室温下搅拌2小时。将反应溶液倒入10ml水中，用二氯甲烷(20ml 2)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩。用N,N-二甲基甲酰胺(1ml)和conc溶解。加入盐酸盐(1drop)。用C18[10-40％MeCN在水中(0.1％盐酸盐)]柱层析纯化，得到所需产物49(30mg，产率41％)为黄色固体。
LC-MS[流动相：从95％水(0.1％TFA)和5％CH3CN至5％水(0.1％TFA)和95％CH3CN，6.5min内],Rt＝3.325min；纯度:98.12％(214nm),97.14％(254nm)；MS计算值：371.1；MS实测值：371.9[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ13.10(s,0.4H),12.92(s,0.6H),7.54-7.52(m,2H),7.40-7.38(m,1H),7.33-7.31(m,2H),7.18-7.16(m,1H),6.92-6.90(m,1H),4.32-4.31(m,2H),4.28-3.26(m,2H),3.94-3.61(m,7H),3.40-3.89(m,0.4H),3.19-3.16(m,0.6H),3.00-2.88(m,0.4H),2.86-2.81(m,0.6H),2.63-2.61(m,0.4H),2.47-2.38(m,1H),2.18-2.11(m,0.6H).
11.6 4-(1-(3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-氧代丙基)吡咯烷-3-基)苯甲腈的合成(50)
将4-(吡咯烷酮-3-基)苯腈2,2,2-三氟乙酸盐(75mg,0.26mmol)和3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-丙基-1-酮(85mg,0.31mmol)在DCM(8mL)中加入DIPEA(101mg,0.78mmol)。所得混合物在室温下搅拌2小时。然后将反应混合物浓缩，用C18柱(CH3CN/水,45％-78％，40min)纯化残渣，得到标题化合物50(20mg，产率21％)为黄色固体。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％TFA)和10％CH3CN至30％水(0.1％TFA)和70％CH3CN，6.5min内],纯度:99.20％(214nm),85.27％(254nm)；Rt＝3.162min；MS计算值：362；MS实测值：363[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.57-7.50(m,4H),7.36(d,J＝8.0Hz,2H),6.91(d,J＝9.2Hz,1H),4.33-4.28(m,4H),3.45-3.31(m,1H),3.21-3.09(m,2H),3.04-2.91(m,3H),2.89-2.73(m,2H),2.69-2.59(m,1H),2.41-2.28(m,1H),1.89-1.75(m,1H).
实施例12
12.制备化合物51,52的通用方法.
12.1.1 1-溴-4-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯的合成(51a)
在DCM(50mL)中加入2-溴-5-氟苯酚(1)(4.50g,23.6mmol)溶液中加入DIEA(6.09g,47.2mmol)。然后在0℃下加入溴(甲氧基)甲烷(3.25g,26.0mmol)。混合物在0℃下搅拌1小时。然后用水(50毫升)和盐水(50毫升)清洗混合物，在Na2SO4上干燥并浓缩。采用硅胶柱层析法(石油醚:EtOAc＝50:1)对产物进行纯化，得到标题化合物(5.0g，收率90％)为无色油。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47(dd,J＝8.4,6.4Hz,1H),6.93(dd,J＝10.4,2.8Hz,1H),6.66-6.62(m,1H),5.23(s,2H),3.52(s,3H).
12.1.2 3-(4-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸苄酯的合成(51b)
在THF(30ml)中加入1-溴-4-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯(5.00g,21.3mmol)溶液N1,N1,N2,N2-四甲基乙烷-1,2-二胺(3.71g,32.0mmol)。加入n-BuLi(2.5M in hexane,12.8mL,32.0mmol)，滴入-70℃。加入后，在-70℃下搅拌1小时。然后在-70℃滴加3-氧吡咯烷酮-1-羧酸苄酯溶液(4.66g,21.3mmol)。加入后，在-70℃下搅拌1小时。加水(20毫升)使反应降温。然后将混合物加热至室温，用EtOAc(30mL 2)萃取，用盐水(30mL)冲洗组合有机相，在Na2SO4上干燥浓缩。采用硅胶柱层析法(石油醚:EtOAc,10:1～5:1)对残渣进行纯化，得到标题化合物51b(2.4g，收率30％)为黄色油。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41-7.31(m,5H),7.23-7.19(m,1H),6.95(dd,J＝17.6,8.4Hz,1H),6.77-6.72(m,1H),5.30-5.25(m,2H),5.17-5.16(m,2H),4.31-4.18(m,1H),3.74-3.65(m,3H),3.51-3.43(m,3H),2.58-2.37(m,2H).
12.1.3 3-(4-氟-2-羟基苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸苄酯的合成(51c)
在甲苯(20ml)中加入苄基3-(4-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷酮-1-羧酸酯(51b)(1.40g,3.73mmol)，TsOH(64mg,0.37mmol)。将混合物加热至100℃，搅拌30min，反应溶液冷却浓缩。采用硅胶柱层析法(石油醚:EtOAc,10:1～2:1)对残渣进行纯化，得到所需产物5(700mg，收率60％)为白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.25-10.23(m,1H),7.40-7.32(m,5H),7.16-7.10(m,1H),6.74-6.72(m,1H),6.68-6.63(m,1H),6.26-6.24(m,1H),5.13(s,2H),4.52-4.48(m,2H),4.30-4.25(m,2H).
12.1.4 3-(4-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸苄酯的合成(51d)
在DCM(20ml)中加入苄基3-(4-氟-2-羟基苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸酯(51c)(700mg,2.24mmol)，DIEA(578mg,4.48mmol)。然后在0℃下加入溴代甲氧基甲烷(280mg,2.24mmol)。加入后，在0℃下搅拌20min，然后用水(15mL)和盐水(20mL)冲洗，在Na2SO4上干燥浓缩。采用硅胶柱层析法(石油醚:EtOAc＝10:1)对残留进行纯化，得到标题化合物51d(340mg，收率43％)为无色油。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42-7.30(m,5H),7.21-7.15(m,1H),6.93(d,J＝9.2Hz,1H),6.79-6.73(m,1H),6.10(d,J＝21.2Hz,1H),5.20-5.18(m,4H),4.60-4.56(m,2H),4.40-4.38(m,2H),3.47-3.45(m,3H).
12.1.5 3-(4-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)吡咯烷的合成(51e)
在CH3OH(5ml)中加入苄基3-(4-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸酯(51d)(240mg,0.672mmol)，Pd/C(10％，50mg)和CH3COOH(4滴)溶液。混合料在室温下H2气氛(1atm)下搅拌1小时。然后将混合物过滤，滤液浓缩。残渣溶解在EtOAc(10mL)中。用NaHCO3溶液(sat.，10ml)和盐水(10ml)清洗混合物，在Na2SO4上干燥并浓缩。采用C18柱层析法(5-70％MeCN在水中，30min)对残渣进行纯化，得到所需产物51e(50mg，产率33％)为黄色油。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.12-7.06(m,1H),6.87(d,J＝8.4Hz,1H),6.73-6.69(m,1H),5.19(s,2H),3.74-3.68(m,1H),3.48(s,3H),3.24-3.15(m,2H),3.08-2.96(m,2H),2.11-2.04(m,1H),2.00-1.93(m,1H).
12.1.6 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(3-(4-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)吡咯烷-1-基)丙烷-1-酮的合成(51f)
在DCM(3ml)中加入3-(4-氟-2-(甲氧基甲氧基苯基)吡咯烷(51e)(50mg,0.22mmol)和3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙-1-酮(1ii)(70mg,0.26mmol)溶液。混合物在室温下搅拌2小时。然后将混合物浓缩，用C18[5-70％MeCN水中,40min]柱层析纯化残渣，得到所需产物51f(60mg，收率66％)为黄色油。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.53-7.50(m,2H),7.12-7.07(m,1H),6.91(d,J＝9.2Hz,1H),6.86(d,J＝8.4Hz,1H),6.73-6.68(m,1H),5.18(s,2H),4.33-4.27(m,4H),4.02-3.93(m,1H),3.48(s,3H),3.18-3.15(m,2H),3.13-3.09(m,2H),3.03-2.93(m,2H),2.66-2.56(m,2H),2.25-2.16(m,1H),2.11-2.06(m,1H).
12.1 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(3-(4-氟-2-羟基苯基)吡咯烷-1-基)丙-1-酮盐酸盐的合成(51)
在EtOAc(1ml)溶液中加入1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(3-(4-氟-2-(甲氧基)苯基)吡咯烷酮-1-1(51f)(50mg,0.12mmol)盐酸盐/EtOAc(4m,2ml)。混合物在室温下搅拌2小时。将混合物浓缩，用EtOAc(2mL)对残渣进行三次蒸馏，得到粗品(30mg)。采用柱层析C18[10-40％MeCN in水(0.1％盐酸盐)，15min]对粗品进行纯化，得到所需产物51(14mg，收率31％)为白色固体。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％TFA)和10％CH3CN至30％水(0.1％TFA)和70％CH3CN，6.5min内],纯度:99.05％(214nm),97.52％(254nm)；Rt＝3.253min；MS计算值：371；MS实测值：372[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.96(s,1H),10.46-10.40(m,1H),7.55-7.52(m,2H),7.15-7.09(m,1H),7.02(d,J＝8.4Hz,1H),6.77-6.75(m,1H),6.65(t,J＝9.6Hz,1H),4.35-4.30(m,4H),4.04-3.86(m,1H),3.79-3.71(m,2H),3.60-3.48(m,4H),3.28-3.25(m,2H),2.33-2.24(m,2H).
12.2 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(3-(4-氟-3-羟基苯基)吡咯烷-1-基)丙-1-酮的合成(52)
在DCM(3ml)中加入3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮(1ii)(81mg,0.30mmol)和DIPEA(52mg,0.40mmol)溶液中的3-(4-氟-3-(甲氧基)苯基)吡咯烷酮(52f)(45mg,0.20mmol)。混合物在室温下搅拌1小时。将混合物浓缩，残渣溶解在EtOAc(15ml)中。用水(10ml)和盐水(10ml)冲洗溶液，在Na2SO4上干燥浓缩。将残渣溶解于EtOAc(1ml)中，加入盐酸盐/EtOAc(4m,2ml)。室温下搅拌30min，浓缩后用EtOAc(3ml)对残渣进行研磨。混合物经过过滤。收集固体，在C18[10-40％MeCN，水中0.1％盐酸盐,15min]柱层析进一步纯化，得到所需产物52(16mg，产率20％)为白色固体。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％TFA)和20％CH3CN至30％水(0.1％TFA)和70％CH3CN，6.5min内],纯度:92.79％(214nm),93.01％(254nm)；Rt＝2.522min；MS计算值：371；MS实测值：372[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.96-10.81(m,1H),9.92(s,1H),7.55-7.51(m,2H),7.15-7.09(m,1H),7.02(d,J＝8.4Hz,1H),6.95-6.92(m,1H),6.82-6.77(m,1H),4.35-4.29(m,4H),3.91-3.73(m,1H),3.67-3.51(m,6H),3.39-3.33(m,1H),3.20-3.05(m,1H),2.41-2.31(m,1H),2.10-1.88(m,1H).
实施例13
13.化合物53,54的制备的通用方法.
路线13.合成化合物53,54.
13.1.1 2-(2-碘苯基)乙胺盐酸盐的合成(53a)
在THF(12ml)中加入2-(2-碘苯基)乙腈溶液(4.00g,16.5mmol)，室温下滴加硼烷/THF(1m,40ml,40mmol)。然后将混合物回流10小时。将混合物冷却至0℃，加入10ml乙醇和盐酸盐/乙醇(1m,20ml,20mmol)。所得到的悬浮液浓缩成粗品，分散在丙酮中(20毫升)。然后将混合物过滤并收集固体，得到标题化合物53a(3.1g粗品)为白色固体，用于下一步不进一步纯化。
LCMS[流动相：从95％水(0.02％NH4OAc)和5％CH3CN至5％水(0.02％NH4OAc)和95％CH3CN 2.5min内],Rt＝1.25min；MS计算值：247；MS实测值：248[M+H]+.
13.1.2 N-苄基-2-(2-碘苯基)乙胺的合成(53b)
将2-(2-碘苯基)盐酸乙胺(1.00g,3.53mmol)与苯甲醛(374mg,3.53mmol)在乙醇(18mL)中室温搅拌1小时。然后加入***(556mg,8.83mmol)，室温搅拌过夜。与水混合就熄了(30毫升),用乙酸乙酯提取(2)30毫升。合并后的有机层集中和柱层析法纯化C18(乙腈:水(0.1％碳酸氢铵)从65％到70％)给标题化合物53 b(560毫克,收率51％)白色的油。
LC-MS[流动相：从95％水(0.02％NH4OAc)和5％CH3CN至5％水(0.02％NH4OAc)和95％CH3CN 2.5min内],Rt＝1.78min；MS计算值：337；MS实测值：338[M+H]+.
13.1.3 2-(苄基(2-碘苯乙基)氨基)-1-(4-氟苯基)乙酮的合成(53c)
在DMF(7ml)中加入N-苄基-2-(2-碘苯)乙醇胺(53b)(460mg,1.37mmol)和三乙胺(145mg,1.43mmol)溶液，在0℃下加入2-溴-1-(4-氟苯)乙醇(309mg,1.43mmol)。混合物在室温下搅拌5小时。然后加入水(30毫升)和乙酸乙酯(30毫升×2)，以提取所需的化合物。采用柱层析法在C18(乙腈:95％～100％为水)上对有机层进行浓缩纯化，得到标题化合物53c(542mg，产率84％)为白油。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.95-7.90(m,2H),7.75(d,J＝9.2Hz,1H),7.33-7.26(m,4.5H),7.25-7.18(m,1.5H),7.14-7.11(m,1H),7.07-7.02(m,2H),6.87-6.83(m,1H),3.90(s,2H),3.84(s,2H),2.98-2.93(m,2H),2.89-2.84(m,2H).
13.1.4 3-苄基-1-(4-氟苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[d]氮杂-1-醇的合成(53d)
在四氢呋喃(10ml)溶液中加入N1、N1、N2、N2-四甲基-1,2-二胺(240mg,2.07mmol)和正丁基锂(2.5M甲苯，0.83mL,2.07mmol)溶液，在-78℃氮气气氛下滴加2-(苄基(2-碘苯乙基)-1-(4-氟苯乙基)乙醇(53c)(560mg,1.18mmol)THF(13mL)溶液。加入后的混合物在室温下搅拌一夜。将混合物用水淬灭(10ml)，乙酸乙酯萃取(15ml 2)，用柱层析法在C18(乙腈:60％～65％为水)上浓缩纯化，得到标题化合物53d(100mg，收率24％)为黄色油。
LCMS[流动相：从95％水(0.02％NH4OAc)和5％CH3CN至5％水(0.02％NH4OAc)和95％CH3CN，2.5min内],Rt＝1.93min；MS计算值：347；MS实测值：348[M+H]+.
13.1.5 1-(4-氟苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[d]氮杂-1-醇的合成(53e)
将3-苄基-1-(4-氟苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[d]偶氮平-1-醇(53d)(100mg,0.288mmol)加入乙醇(15ml)中，室温下Pd/C(10％，50mg)。然后将混合物在50℃的氢气气氛(50psi)下搅拌一夜。反应混合物经过过滤，滤液在减压下浓缩，得到标题化合物53e(65mg，产率88％)为白色固体。
LCMS[流动相：从95％水(0.02％NH4OAc)和5％CH3CN至5％水(0.02％NH4OAc)和95％CH3CN 2.5min内],Rt＝1.47min；MS计算值：257；MS实测值：258[M+H]+.
13.1 1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-3-(1-(4-氟苯基)-1-羟基-4,5-二氢-1H-苯并[]的合成d]氮杂-3(2H)-基)丙-1-酮(53)
将3-溴-1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-酰基)-丙基-1-酮(1i,102mg,0.379mmol)在室温下加入到二氯甲烷(3ml)中1-(4-氟苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[d]偶氮平-1-ol(53e)(65mg,0.25mmol)和DIPEA(65mg,0.51mmol)的溶液中。混合物在室温下搅拌2小时。然后加入水(10ml)和二氯甲烷(10ml)提取所需的化合物。在C18(乙腈:30％～65％的水)上用柱层析法对有机层进行浓缩纯化，得到标题化合物53(20.7mg，产率18％)为白色固体。
LC-MS[流动相：从98％水(0.1％TFA)和2％CH3CN至40％水(0.1％TFA)和60％CH3CN，6.5min内],纯度:92.27％(214nm),93.90％(254nm)；Rt＝4.398min；MS计算值：447；MS实测值：448[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.52-7.49(m,2H),7.45(d,J＝2.0Hz,1H),7.24-7.14(m,4H),7.09-7.07(m,1H),7.01-6.95(m,3H),5.61(s,1H),4.33-4.28(m,4H),3.47-3.44(m,1H),3.10(t,J＝6.8Hz,2H),2.90-2.84(m,3H),2.71-2.61(m,3H),2.47-2.41(m,1H).
13.2合成6-(3-(1-(4-氟苯基)-1-羟基-1,2,4,5-四氢-3H-苯并[d]氮杂卓-3-基)丙酰基)苯并二氢吡喃-4-酮(54)
将1-(4-氟苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并(d)偶氮平-1-醇(65mg,0.253mmol)和N,N-二异丙基乙胺(65mg,0.506mmol)在室温下加入1-(4-氟苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并(102mg,0.379mmol)，室温搅拌2小时。然后用水淬灭(10ml)，用二氯甲烷(10ml)萃取。采用40g硅胶柱的闪柱色谱和EA/PE梯度洗脱(40-60％)对粗品进行纯化。得到了12mg的白色固体。分析结果:10.3％的收率。
LC-MS:RT＝1.37min；纯度:93.0％；ESI m/z[M+1]+＝460.37
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.45-8.44(m,1H),8.09-8.06(m,1H),7.34-7.31(m,2H),7.10-6.08(m,7H),4.60(t,J＝6.4Hz,2H),2.84(t,J＝6.4Hz,2H),1.58(s,4H),1.40-1.24(m,6H).
实施例中制备的化合物及其结构和名称如下表A所示
表A
实施例14
14.1化合物对TDG错配修复活性抑制率的实验测定
(1)合成含有尿嘧啶碱基的双链DNA探针T1-T2，其中T1链的核苷酸序列为：5'-FAM-TAA UGT GAA TGG AGC TGA AAT-biotin-3'；T2链的核苷酸序列为5'-ATT TCA GCTCCA TTC ACG TTA-3'。利用PCR仪退火程序，使T1链和T2链互补形成双链DNA探针T1-T2。
(2)在96孔板上每孔反应体系及步骤如下：a.TDG(100nM/L)与不同浓度的化合物混合，并于37℃下孵育30min，反应缓冲液的组成为：20mM HEPES pH7.5，100mM NaCl，0.2mMEDTA，2.5mM MgCl2；b.双链DNA探针T1-T2被加入到混合物中得到体系的终体积为100μL，浓度为30nM，于25℃孵育30min；c.将1μL链霉亲和素磁珠加入反应液与生物素标记的DNA充分结合1小时；d.将NaOH加入到反应液中至终浓度200mM，室温孵育30分钟；e.在磁力架的作用下链霉亲和素磁珠被吸附至管壁，将上清液转移至新的96孔板中，置入Tecan酶标仪中进行荧光测定。参数设置为：激发波长为485nm；发射波长为520nm。构建荧光强度与TDG浓度之间的线性曲线，R2＝0.9968,线性范围为0-50nM/L；
根据本实施例所述的生物学方法对本发明所选的化合物进行分析，其结果如表1所示。其中，表1的“++”指对TDG错配修复的IC50≤5μM的抑制活性；“+”指对TDG错配修复的>5μM的抑制活性。
14.2化合物对Calu-1细胞生长抑制率的实验测定
肺癌细胞系Calu-1，培养在90％McCoy's 5A培养液(BI,01-075-1ACS)+10％胎牛血清(Gibco,10270106)中，置于CO2培养箱(37℃，5％CO2,95％空气)培养。Calu-1细胞通过胰酶(Gibco,12604-021)消化并以500细胞每孔的密度接种于384孔板中，培养基为50μL，37℃培养箱培养过夜。第二天加入不同浓度的待测化合物，DMSO终浓度均为0.1％，在培养72小时后，取出细胞待测。将要测的384孔板中的细胞培养液去除，马上加入预混了CTG的新鲜培液：培液与
2.0 reagent(Promega,G9243)的比例为2:1，每孔加入30ul，室温振板20分钟，之后用多功能读板仪(TECAN,Infinite 200 Pro)根据试剂说明书，测定细胞存活情况。
根据本实施例所述的生物学方法对本发明所选的化合物进行分析，其结果如表1所示。其中，表1的“++”指对calu-1细胞生长的IC50≤5μM的抑制活性；“+”指对对calu-1细胞生长的IC50>5μM的抑制活性。
表1化合物对TDG错配修复与calu-1细胞生长抑制活性实验的结果
实施例15
化合物在细胞内的TDG抑制活性实验测定
本实施例操作步骤如下：
(1)制备甲基化报告质粒：
(a)将储液浓度为32mM的SAM用超纯水稀释为1600μM；
(b)按以下比例准备反应体系:30μl超纯水，5μl 10X NEBuffer 2，5μl稀释后SAM，1μg pCpGL-CMV-firefly质粒，1μl SssI甲基化酶(4 U/μl)；共50μl，37℃反应2个小时；
(c)65℃加热20分钟。之后加入0.2％SDS,80℃反应10min；再加入1μlProteinaseK,50℃,反应1h；
(d)用Dr.
助沉剂(TAKARA)回收甲基化质粒。
(2)制备5fC/5caC pCpGL-CMV-firefly报告质粒
(a)准备以下10×反应体系：
(b)按以下比例制备反应体系：
(c)37℃反应一个小时；
(d)二次加入24μg Tet1蛋白，继续反应一个小时；
(e)加入SDS至终浓度为0.5％,80℃,10分钟,再加入1μl Proteinase K，55℃过夜。
(f)用Dr.
助沉剂(TAKARA)回收处理后的caC-cmv-firefly质粒，定量。
(3)用荧光素酶活性测定方法检测小分子化合物对细胞内TDG的酶活抑制率
在96孔板中，每孔的反应体系及操作流程如下：
(a)1ng caC-cmv-firefly,1ng pCpGL-CMV-Relina和150ng pCDNA4-TDG或者150ng pCDNA4-myc质粒，稀释到75 ul Opti-MEM中，混匀静置5分钟；
(b)将2 ul转染试剂(Hieff TransTM Liposomal transfection Reagent(0.5ul/well,YEAEEN,Cat#40802))稀释到100 ul Opti-MEM中，混匀静置5分钟；
(c)分别将75 ul的(a)和(b)混匀，室温静置20分钟；
(d)胰酶消化HEK 293T TDG KO细胞，收集并进行细胞计数，将悬浮细胞浓度调整为4x 105/ml；
(e)将50 ul混合物(c)加入每个孔，同时将100 ul稀释好的细胞悬液加入同一孔，混匀。
(f)待细胞贴壁后，每孔加入不同浓度待测小分子化合物。DMSO终浓度不超过0.1％。
(g)在37℃CO2培养箱中培养72小时。去上清，并将细胞迅速冻存在-80℃。
(h)在检测荧光素酶活性前，将待测细胞从-80℃取出，在室温中静置30分钟。按
Luciferase Reagent(PROMEGA)说明书使用，分别检测每孔的firefly荧光值及Renilla荧光值。
(i)将每孔的firefly荧光值比上Renilla荧光值；以转染caC-cmv-firefly,pCpGL-CMV-Relina,pCDNA4-TDG质粒混合物加DMSO实验组和转染caC-cmv-firefly,pCpGL-CMV-Relina,pCDNA4-myc质粒混合物加DMSO实验组的比值计算96孔板Z'及实验窗口，并计算各个化合物相对酶活抑制率。
根据本实施例所述的生物学方法对本发明所选的化合物进行分析，其结果如表2所示。其中，表2的“+”指化合物在浓度为10μM下对TDG抑制活性≤25％；“++”指化合物在浓度为10μM下对TDG抑制活性>25％。
表2化合物在细胞内的TDG抑制活性实验的结果
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.一种如式I所示的化合物，或其立体异构体或互变异构体、或其药学上可接受的盐、或其水合物、或其晶型、或其溶剂化物，其特征在于，
其中，
R1和R2各自独立地选自下组：OH、SH、取代或未取代的C1-6烷氧基、取代或未取代的C1-6烷硫基；或者，R1和R2以及与其相连的碳原子共同形成取代或未取代的五至七元环；且所述五至七元环选自下组：
其中，X和Y各自独立地选自：C(Rc)2、O、S、NRa、C(＝O)、C(＝S)；
R1和R2中，所述取代是指基团中氢被选自下组的一个或多个(较佳地1-3个)取代基所取代：卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、氰基；
R3选自下组：C(Rc)2、C＝O、C＝S、CRc(OH)、CRc(SH)；
n为0、1、2、3或4；
R4为选自下组的二价基团：取代或未取代的C2-C6亚烯基、取代或未取代的C2-C6亚炔基、NRa、取代或未取代的环G基团；其中，所述环G选自下组：4至18元杂环、5至18元杂芳环、C3-C14芳环、C3-C18碳环；
R4中，所述取代是指R4基团中一个或多个氢各自独立地被R'和/或R”所取代；附加条件是，当R4为环G基团时，环G还能任选地被氧代和/或硫代；
R5选自下组：H、硝基、卤素、氰基、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未取代的C1-C12烷氧基、取代或未取代的C1-C12烷基羰基、-(C(Rc)2)o-OCORb、-(C(Rc)2)o-COORb、-(C(Rc)2)o-NRa-COORb、-(C(Rc)2)o-NRa-OCORb、N(Ra)2、取代或未取代的环E基团；其中，所述环E基团选自下组：4至18元杂环基、5至18元杂芳基、C6-C14芳基、C3-C18环烷基；R5中，所述取代是指R5基团中一个或多个氢被R'和/或R”所取代；附加条件是，当R5为环E基团时，环E基团还能任选地被氧代和/或硫代；
o＝0、1或2；
R'各自独立地选自下组：羟基、巯基、硝基、卤素、氰基、取代或未取代的C1-C10烷基、N(Ra)2、取代或未取代的C1-C10烷氧基、取代或未取代的C1-C10烷硫基、取代或未取代的C1-C10烷基羰基、-COORb、-OCORb、取代或未取代的4元至12元杂环基、取代或未取代的5元至12元杂芳基、取代或未取代的C6-C14芳基、取代或未取代的C3-C15碳环基；
R”各自独立地选自下组：H、羟基、巯基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；
Ra、Rb和Rc各自独立地选自下组：H、C1-6烷基、C1-C6卤代烷基；
除非特别说明，所述的取代是指基团中一个或多个氢被选自下组的取代基所取代：氰基、羟基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，
为R5-NRa-、
或者
其中，
代表环G，且环G为含至少一个N杂原子的杂环或杂芳环。
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，
为未取代的或被1至3个R'和/或R”所取代的选自下组的基团：
R5-NRa-、
4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述环E基团选自下组：
5.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物如式IV-A、式IV-B、式IV-C、式IV-或式IV-D所示，
其中，p＝0、1或2；n1＝1、2或3；R5、R'、R”、Y和X的定义同权利要求1中定义。
6.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自下组：
7.一种化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
使式A化合物与式B化合物反应，从而得到式I化合物；
其中，Z为离去基团；
n为1、2或3；
R5-R4'选自下组：
R5-N(Ra)H；
R1、R2、R3、R5和Rc的定义同权利要求1中定义。
8.一种药物组合物，其特征在于，包括(i)如权利要求1所述的化合物和(ii)药学上可接受的载体。
9.一种如权利要求1所述的化合物，或其盐，或其异构体，或者如权利要8求所述的药物组合物的用途，其特征在于，(i)用于制备TDG抑制剂，或者(ii)用于制备治疗和/或预防与TDG过度表达相关的疾病的药物。
10.一种抑制TDG活性的方法，所述方法包括步骤：
使对象与有效量的如权利要求1所述的化合物，或其立体异构体或互变异构体、或其药学上可接受的盐、或其水合物、或其晶型、或其溶剂化物，或者如权利要求8所述的药物组合物接触，从而抑制TDG活性。
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