CN111808783A - 一株耐盐碱阴沟肠杆菌及其活菌制剂生产方法与应用 - Google Patents

一株耐盐碱阴沟肠杆菌及其活菌制剂生产方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株耐盐碱阴沟肠杆菌及其活菌制剂生产方法与应用。本发明自盐碱地辣椒根际土壤分离到一株耐盐碱阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)ZTS‑10，该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)的保藏编号为CGMCC No.20181，保藏日期为2020年7月3日。该菌株耐盐碱能力较强，在盐碱土壤中定植率高，具有产IAA、解磷、解钾能力，能促进辣椒生长，且对辣椒疫病病原菌具有较强的拮抗作用，可用于生产微生物肥料，特别是盐碱地辣椒专用微生物肥料，可减少辣椒疫病发生，提高产量和质量。

Description

一株耐盐碱阴沟肠杆菌及其活菌制剂生产方法与应用
技术领域
本发明涉及一株耐盐碱阴沟肠杆菌及其活菌制剂生产方法与应用，属于农业生物技术领域。
背景技术
我国是辣椒生产大国，全国辣椒种植面积可达200万公顷，占蔬菜种植面积12％以上。辣椒适应性强、品种多、经济效益高，已成为许多地区农民增收、农村发展的重要支柱产品。辣椒疫病是当前威胁辣椒生产最严重的病害，该病害已经在世界各地的辣椒种植区广泛发生。如果田间发病条件适宜，该病害可以造成大约30％的减产，有时甚至高达100％，严重制约经济的发展。
辣椒疫病主要是由辣椒疫霉(Phytophthora capsici)引起的毁灭性真菌病害。辣椒疫霉主要以卵孢子和厚垣孢子的形式在植物种子、土壤和宿主植物的病残体中越冬，当温度与湿度适宜时萌发，侵染植物致其发病。辣椒疫病多发生在辣椒现蕾挂果时期，田间扩展迅速，常造成大面积成片死亡。
长期以来，辣椒疫病防控以化学防治为主，并结合优化栽培管理、改良灌溉方式等技术措施。化学防治以大量使用农用甲霜灵、精甲霜灵等苯酰胺类杀菌剂为主，虽然取得良好的防控效果，但化学农药的过量使用不仅使辣椒疫霉菌逐步产生一定程度的抗药性，而且对人类健康、食品安全和环境保护造成巨大的潜在威胁。因此，发展生物防治技术，减量化学农药的使用，是现代农业发展的必然趋势。
生物防治是指利用有益生物或基因产物来控制植物病害发生、发展的一种措施。其具有不污染环境、对人和其他生物安全、节约能源、保持生态平衡等优点，是发展绿色食品、保护生态环境的重要手段。辣椒疫病的生物防治措施主要包括筛选利用拮抗微生物、诱导寄主产生抗病性、采用基因工程技术防治辣椒疫病和开发生物源杀菌剂等。目前，芽孢杆菌、荧光假单胞杆菌等拮抗细菌，木霉菌、曲霉菌和寡雄腐霉菌等拮抗真菌已用于辣椒疫病的生物防治，但由于防治效果有限，对辣椒生长无明显促进作用，未能在农业生产中大面积推广。
盐碱地是我国重要的土地资源，我国盐碱地和盐碱障碍耕地总面积超过5亿亩，其中具有农业利用潜力的多达2亿亩，占中国耕地面积的10％左右。辣椒具有一定的耐盐碱能力，是盐碱地广为栽培的蔬菜作物之一。盐碱地辣椒疫病的生物防治，除要求生防菌株具有较好的抗病促生效果外，还要求其具有较强的耐盐碱能力，能够在盐碱土壤中定植。因此，筛选耐盐碱抗病促生菌株，具有重要意义。
针对上述现状，本发明提供一株耐盐碱阴沟肠杆菌，用于促进辣椒生长和辣椒疫病的生物防治，特别是用于盐碱地栽培辣椒疫病的生物防治。
发明内容
本发明的目的是提供一株阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)ZTS-10及其活菌制剂的制备方法与应用。阴沟肠杆菌ZTS-10菌株分离自盐碱地辣椒根际土壤，耐盐碱能力强，具有产IAA、解磷、解钾、拮抗辣椒疫霉的能力，其活菌制剂能促进辣椒生长，对辣椒疫霉引起的辣椒疫病具有较高的防效。
一株分离自盐碱地辣椒根际土壤的耐盐碱阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)ZTS-10，该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)的保藏编号为CGMCC No.20181；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2020年7月3日。
所述阴沟肠杆菌ZTS-10菌株的菌落及菌体特征：在NA培养基上于37℃培养48h，菌落直径约0.5-0.8mm，白色半透明，圆形，表面光滑，***，湿润，粘稠，有光泽，质地均匀，边缘整齐；菌体呈短杆状。
所述阴沟肠杆菌ZTS-10菌株的生理生化特征：革兰氏阴性杆状菌；过氧化氢酶试验阳性，柠檬酸盐利用试验阳性，丙二酸盐利用试验阳性，硝酸盐还原试验阳性，V-P试验阳性；淀粉水解试验阴性，D-葡萄糖发酵试验阳性、D-甘露醇发酵试验阳性、乳糖发酵试验阳性、麦芽糖发酵试验阳性。
本发明还提供了一种以阴沟肠杆菌菌株ZTS-10为主要有效成分的活菌制剂。
所述阴沟肠杆菌ZTS-10菌株活菌制剂的制备方法，其特征是，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)ZTS-10经扩大培养后，接种于发酵培养基，37℃培养36-48h，然后加入没食子酸丙酯(PG)0.01-0.02％(w/w)、酵母浸出物干粉4-6％(w/w)和卡松0.01-0.03％(w/w)，搅拌均匀，即为所述活菌制剂。
所述阴沟肠杆菌ZTS-10菌株活菌制剂的制备方法包括以下步骤：
1)菌种活化：将低温保藏的阴沟肠杆菌ZTS-10菌种转接至NA培养基试管斜面，于37℃培养24-36h进行活化；
2)三角瓶种子制备：用接种环刮取活化后的阴沟肠杆菌ZTS-10菌苔，接种于NB培养基中，37℃培养24-36h；
3)种子罐菌种制备：将三角瓶种子以体积比1-2％的接种量转接入种子罐中，于37℃培养24-36h；
4)发酵培养：将种子罐菌种以体积比1-2％的接种量转接入发酵罐，37℃培养36-48h，获得阴沟肠杆菌ZTS-10的发酵液；
所述发酵培养基的配方为：麸皮粉5g、玉米粉10g、酵母浸粉5g、磷酸二氢钾1.5g、纤维素酶0.1g、水1000mL，初始pH7.5。
5)向所述阴沟肠杆菌ZTS-10发酵液中加入没食子酸丙酯(PG)0.01-0.02％(w/w)、酵母浸出物干粉4-6％(w/w)和0.01-0.03％卡松，搅拌均匀，获得活菌制剂。
本发明还提供了上述的耐盐碱阴沟肠杆菌ZTS-10菌株产IAA、解磷、解钾、拮抗辣椒疫霉方面的应用。
本发明还提供了上述的耐盐碱阴沟肠杆菌ZTS-10活菌制剂在防治辣椒疫病以及促进辣椒生长方面的应用。
阴沟肠杆菌ZTS-10活菌制剂的使用方法：阴沟肠杆菌ZTS-10活菌制剂加水稀释100～500倍，灌根或浇水时随水冲施。
本发明的有益效果：本发明阴沟肠杆菌ZTS-10分离自盐碱地土壤，耐盐碱能力较强，在盐碱土壤中定植率高，具有产IAA、解磷、解钾能力，能促进辣椒生长，且对辣椒疫病病原菌具有较强的抑制作用，可用于生产生物肥料，特别是盐碱地专用微生物肥料，用于辣椒疫病的生物防治，可减少病害发生，提高辣椒产量和质量。
附图说明
图1为阴沟肠杆菌ZTS-10菌株的菌体形态；
图2为阴沟肠杆菌ZTS-10菌株的产IAA能力；注：从左至右依次为：CK(阳性对照，加入50μL 50mg/L IAA)、接种ZTS-10菌株；结果显示：接种ZTS-10菌株后颜色变红，说明其具有产IAA的能力；
图3为阴沟肠杆菌ZTS-10菌株在有机磷培养基上的解磷圈，图中内环为菌落，外环为解磷透明圈；
图4为阴沟肠杆菌ZTS-10菌株在硅酸盐细菌培养基上的生长，形成光滑透明油滴状菌落。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：阴沟肠杆菌ZTS-10的筛选
(1)耐盐碱菌株的筛选
阴沟肠杆菌ZTS-10分离自辣椒根际土壤。土壤于2018年9月取样于山东省滨州市滨城区，为中度盐碱土壤。具体分离方法为：土样混匀，称取5g，放入盛有95mL无菌水和10粒玻璃珠的三角瓶中，于37℃、180rpm振荡30min。取土壤悬液1mL进行10-1—10-7系列浓度梯度稀释，然后取10-5、10-6、10-7三个稀释度涂布至含选择培养基的平板上，于37℃倒置培养2d。分别挑取单菌落划线至含选择培养基的平板上，于37℃倒置培养2d。挑取单菌落转接至保藏培养基试管斜面上，于37℃培养2d，长满菌苔后，置于4℃冰箱中保存备用。
所述选择培养基的配方为：蛋白胨10g、酵母膏5g、NaCl 20g、琼脂20g、蒸馏水1000mL、pH8.0，121℃灭菌20min。
所述保藏培养基的配方为：蛋白胨10g、酵母膏5g、NaCl 10g、琼脂20g、蒸馏水1000mL、pH7.5，121℃灭菌20min。
(2)产IAA(吲哚乙酸)菌筛选
向含有L-色氨酸(200mg/L)的LB液体培养基中接种步骤(1)筛选到的功能性菌株，28℃，180r/min，震荡培养4d。取50μL菌悬液滴于白色陶瓷板上，同时加50μL Salkowski比色液。将加入50μL 50mg/L IAA的比色液作为阳性对照。白色陶瓷板于室温避光放置30min后观察，颜色变红者表示能够分泌IAA。
所述LB液体培养基配方为：蛋白胨10.0g、酵母膏5.0g、NaCl 10.0g、蒸馏水1000mL；121℃灭菌20min；pH＝7.0。
所述的Salkowski比色液配方为：35％HClO4 50mL、0.5mol/L FeCl3 1mL。
(3)解磷菌株的筛选
将步骤(2)筛选的具有产IAA能力的菌株分别转接到有机磷细菌培养基，测定其是否具有解磷的能力。
所述有机磷细菌培养基配方为：葡萄糖10.0g、(NH4)2SO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.3g、MnSO4·4H2O 0.03g、KCl 0.3g、FeSO4·7H2O 0.03g、NaCl 0.3g、CaCO3 5.0g、卵磷脂0.2g、琼脂1.6％，蒸馏水1000mL，121℃灭菌20min，pH＝7.0～7.5。注：卵磷脂溶于无水乙醇中，全部溶解后加水，加热至乙醇全部蒸发。
(4)解钾菌株的筛选
将步骤(3)中筛选到的具有解磷能力的菌株采用三区划线的方法接种到硅酸盐细菌培养基平板上，37℃恒温培养72h，挑取在平板上能生长并形成菌落的菌株，即为初筛菌株。再对初筛菌株重复上述步骤进行复筛，选取生长快、菌落大的菌株。
所述硅酸盐细菌培养基配方为：蔗糖5g、MgSO4 0.5g、CaCO3 0.1g、Na2HPO4 2g、FeCl30.005g、玻璃粉1g、琼脂1.6％，蒸馏水1000mL，121℃灭菌15min，pH＝7.0。
(5)采用对峙培养法筛选辣椒疫霉拮抗菌
将直径5mm辣椒疫霉菌块接种到PDA培养基平板的中心，在距平板中心2.5cm处等距离接种上述步骤所筛菌株，以不接种所筛菌株的平板为对照，每个处理3次重复，28℃培养10d，选取抑菌圈直径较大的菌株，保存备用。
通过上述多重筛选，综合考虑菌株的生长能力、产IAA能力、解磷能力、解钾能力、拮抗辣椒疫霉的能力，得到一株耐盐碱能力强、具有产IAA、解磷、解钾能力的辣椒疫病致病菌的拮抗菌，编号为ZTS-10。如图2所示，接种ZTS-10菌株后颜色变红，说明其具有产IAA的能力；如图3所示，阴沟肠杆菌ZTS-10菌株在有机磷培养基上的解磷圈，图中内环为菌落，外环为解磷透明圈，说明菌株ZTS-10具有较强的解有机磷的能力；如图4所示，ZTS-10菌株可以在硅酸盐细菌培养基上生长并形成菌落，这说明其具有解钾能力。
实施例2阴沟肠杆菌ZTS-10的鉴定
(1)形态与生理生化特特征
所述阴沟肠杆菌ZTS-10菌株的菌落及菌体特征：在NA培养基上于37℃培养48h，菌落直径约0.5-0.8mm，白色半透明，圆形，表面光滑，***，湿润，粘稠，有光泽，质地均匀，边缘整齐；菌体呈短杆状(如图1所示)。所述NA培养基即营养琼脂培养基，其配方为牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂20g、水1000mL、pH 7.0。
所述阴沟肠杆菌ZTS-10菌株的生理生化特征：革兰氏阴性杆状菌；过氧化氢酶试验阳性，柠檬酸盐利用试验阳性，丙二酸盐利用试验阳性，硝酸盐还原试验阳性，V-P试验阳性；淀粉水解试验阴性，D-葡萄糖发酵试验阳性、D-甘露醇发酵试验阳性、乳糖发酵试验阳性、麦芽糖发酵试验阳性。
(2)16S rDNA序列分析
将ZTS-10菌株接种到NB培养基中，于37℃，180r/min摇床培养24h。所述NB培养基，其配方为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、水1000ml、pH 7.0。收集菌体，提取总DNA，然后以其为模板，在原核生物16S rRNA基因的通用引物F27:5′-AGA GTT TGA TCA TGG CTC AG-3′和F27:5′-AGA GTT TGA TCA TGG CTC AG-3′的引导下进行16S rDNA基因的PCR扩增。扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳分离后，采用胶回收试剂盒回收，交由上海生工生物技术有限公司测序。所测16S rDNA序列见SEQ No.1。
通过形态、生理生化特征和16S rDNA序列分析可知，该菌株为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，命名为阴沟肠杆菌ZTS-10。该菌株已于2020年7月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.20181。
实施例3阴沟肠杆菌ZTS-10菌剂的制备
所述阴沟肠杆菌ZTS-10菌株菌剂的制备方法包括以下步骤：
1)菌种活化：将低温保藏的阴沟肠杆菌ZTS-10菌种转接至NA培养基试管斜面，于37℃培养24h进行活化。所述NA培养基即营养琼脂培养基，其配方为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂20g、水1000mL、pH7.0。
2)三角瓶种子制备：用接种环刮取活化后的阴沟肠杆菌ZTS-10菌苔，接种于NB培养基中，37℃培养24h。所述NB培养基即营养肉汤培养基，其配方为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、水1000mL、pH7.0。
3)种子罐菌种制备：将三角瓶种子以体积比2％的接种量转接入装有6-7L NB培养基的10L种子罐中，于37℃培养24h，全程搅拌转速200-220rpm，0-10h通风量为3-4L/min，此后通风比为6-9L/min。
4)发酵培养：将种子罐菌种以体积比2％的接种量转接入500L的发酵罐。发酵罐内装发酵培养基300-350L，37℃培养36-48h，获得阴沟肠杆菌ZTS-10的发酵液。全程搅拌转速为150-180rpm，0-10h通风量为100-150L/min，此后通风量为150-200L/min。发酵结束后，发酵液中阴沟肠杆菌ZTS-10的活菌数为(1～2)×1010cfu/ml。
步骤4)所述发酵培养基的配方为：麸皮粉5g、玉米粉10g、酵母浸粉5g、磷酸二氢钾1.5g、纤维素酶0.1g、水1000mL，初始pH7.5。所述纤维素酶购自泰安信得利生物科技有限公司，产品规格均为10万U/g。纤维素酶的酶活力单位定义与检测方法执行中华人民共和国轻工行业标准QB 2583-2003《纤维素酶制剂》。
步骤4)所述发酵培养基的制备方法为：按照配方称取原料，溶于水中，加热至50-55℃，保温1-2h，然后升温至121℃，保温20-30min进行灭菌。
5)活菌制剂的制备：向所述阴沟肠杆菌ZTS-10发酵液中加入没食子酸丙酯(PG)0.01％(w/w)、酵母浸出物干粉5％(w/w)和0.01％卡松，搅拌均匀，获得活菌制剂，其活菌含量为(1.0～2.0)×1010cfu/mL。所述酵母浸出物干粉由安琪酵母股份有限公司生产。
实施例4阴沟肠杆菌ZTS-10菌剂对辣椒疫病的防治作用
盆栽实验用土取自山东省滨州市滨城区，土壤类型为盐碱土壤。盆栽试验施肥量：有机肥使用量为1％(有机肥干重/土壤干重)，所述有机肥由山东佐田氏生物科技有限公司生产，其养分指标为有机质55.6％、N 2.1％、P2O5 2.2％、K2O 1.6％。
盆栽试验设置1个处理组，1个对照组，每组10盆，每盆栽培辣椒2株，试验重复3次。辣椒植株生长至四叶期和六叶一心后，将阴沟肠杆菌ZTS-10活菌制剂(1×1010cfu/mL)稀释至100倍，处理组幼苗每盆灌根50mL，同时灌根50mL辣椒疫霉菌悬液。对照组(CK)每盆仅灌根50mL辣椒疫霉菌悬液。灌根处理10天后，观察症状并统计病害严重度和防效。辣椒疫霉菌悬液的制备方法：将辣椒疫霉接种于PDA平板中，28℃培养8-10d，长满菌丝后制成孢子悬浮液，孢子浓度为1×106cfu/mL。所述PDA培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH值自然。
病害分级标准，0级：完全无病；1级：外叶茎部有局部病症(黑褐色至黑色、溢缩)；2级：外叶茎部溢缩变色部分在1/3以下，或外叶少数蔫萎(脱落)；3级：全株1/3以上出现溢缩变色，或倒伏，叶片脱落，枯死。相关指标计算公式如下。
发病率＝(发病株数/调查总株数)×100％。
防治效果＝(未发病株数/调查总株数)×100％。
病情指数＝Σ(各级株数×各级代表值)/(调查总株数×最高级值)×100％。
试验结果如表1所示，实验调查期间，对照组辣椒疫病的病情指数达到81.27％，这说明实验所采用的辣椒疫病病原菌对受试辣椒具有较强的致病性。同时接种阴沟肠杆菌ZTS-10活菌制剂和辣椒疫霉菌的处理组中辣椒疫病的病情指数明显降低，防治效果为56.39％。这说明阴沟肠杆菌ZTS-10活菌制剂对辣椒疫病具有较好的防治效果。
表1阴沟肠杆菌ZTS-10活菌制剂对辣椒疫病的防治作用
Figure BDA0002614841740000071
注:“-”表示无。同列数据后不同小写字母表示不同处理间差异在P＜0.05水平具有统计学意义。
实施例5阴沟肠杆菌ZTS-10菌剂对辣椒植株的促生作用
盆栽实验用土取自山东省滨州市滨城区，土壤类型为盐碱土壤。挑选籽粒饱满、大小均匀的辣椒种子，表面消毒。并将消毒后的种子均匀平铺在铺有灭菌纱布的保鲜盒中，覆盖一层灭菌纱布，加入适量的无菌水使纱布湿润，密封，28℃黑暗下催芽，待种子萌发出白色根尖后播种于育苗钵中，生长至六叶一心时备用。
取六叶一心的辣椒幼苗，将其移栽到含有200.0g盆栽试验用土的花盆中，取稀释500倍的阴沟肠杆菌ZTS-10活菌制剂15mL灌根接种于辣椒幼苗根围土壤中。同时设置对照，向辣椒幼苗根围土壤中加入灭菌的阴沟肠杆菌ZTS-10活菌制剂100倍稀释液(1×108cfu/mL)15mL。每个处理20盆，每盆1株辣椒幼苗。试验重复3次。上述处理的辣椒植株置于小温室中培养，培养条件:26℃，光照时间14h，黑暗10h。每天用灭菌蒸馏水浇水一次，每盆大约5mL。20d后，选择健康植株测定辣椒植株的株高、根长、茎粗、鲜重、干重和含水量等数据。
试验结果如表2所示，ZTS-10对辣椒的生长有显著的促生作用，表现在相比对照组，ZTS-10悬浮液处理对辣椒株高、根长、茎粗、鲜重和干重都有明显的增加，表明阴沟肠杆菌ZTS-10能够显著促进辣椒植株生长，增加物质积累。
表2阴沟肠杆菌ZTS-10活菌制剂对辣椒植株的促生作用
Figure BDA0002614841740000081
注:同列数据后不同小写字母表示不同处理间差异在P＜0.05水平具有统计学意义。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东佐田氏生物科技有限公司
<120> 一株耐盐碱阴沟肠杆菌及其活菌制剂生产方法与应用
<130> 0
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1407
<212> DNA
<213> 阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）ZTS-10的16S rRNA序列
<400> 1
agtcgaacgg tagcacagag agcttgctct cgggtgacga gtggcggacg ggtgagtaat 60
gtctgggaaa ctgcctgatg gagggggata actactggaa acggtagcta ataccgcata 120
atgtcgcaag accaaagagg gggaccttcg ggcctcttgc catcagatgt gcccagatgg 180
gattagctag taggtggggt aacggctcac ctaggcgacg atccctagct ggtctgagag 240
gatgaccagc cacactggaa ctgagacacg gtccagactc ctacgggagg cagcagtggg 300
gaatattgca caatgggcgc aagcctgatg cagccatgcc gcgtgtatga agaaggcctt 360
cgggttgtaa agtactttca gcggggagga aggtgttgtg gttaataacc acagcaattg 420
acgttacccg cagaagaagc accggctaac tccgtgccag cagccgcggt aatacggagg 480
gtgcaagcgt taatcggaat tactgggcgt aaagcgcacg caggcggtct gtcaagtcgg 540
atgtgaaatc cccgggctca acctgggaac tgcattcgaa actggcaggc tggagtcttg 600
tagagggggg tagaattcca ggtgtagcgg tgaaatgcgt agagatctgg aggaataccg 660
gtggcgaagg cggccccctg gacaaagact gacgctcagg tgcgaaagcg tggggagcaa 720
acaggattag ataccctggt agtccacgcc gtaaacgatg tcgatttgga ggttgtgccc 780
ttgaggcgtg gcttccggag ctaacgcgtt aaatcgaccg cctggggagt acggccgcaa 840
ggttaaaact caaatgaatt gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt 900
cgatgcaacg cgaagaacct tacctggtct tgacatccac agaactttcc agagatggat 960
tggtgccttc gggaactgtg agacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgttgtgaa 1020
atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttatcct ttgttgccag cggttaggcc 1080
gggaactcaa aggagactgc cagtgataaa ctggaggaag gtggggatga cgtcaagtca 1140
tcatggccct tacgaccagg gctacacacg tgctacaatg gcgcatacaa agagaagcga 1200
cctcgcgaga gcaagcggac ctcataaagt gcgtcgtagt ccggattgga gtctgcaact 1260
cgactccatg aagtcggaat cgctagtaat cgtagatcag aatgctacgg tgaatacgtt 1320
cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac catgggagtg ggttgcaaaa gaagtaggta 1380
gcttaacctt cgggagggcg ctaccac 1407

Claims (7)

1.一株耐盐碱阴沟肠杆菌，所述菌株为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)ZTS-10，保藏编号为CGMCC No.20181。
2.权利要求1所述的菌株在产IAA、解磷、解钾、拮抗辣椒疫霉方面的应用。
3.一种以权利要求1所述的阴沟肠杆菌菌株ZTS-10为主要有效成分的活菌制剂。
4.如权利要求3所述的活菌制剂的制备方法，其特征是，阴沟肠杆菌菌株ZTS-10经扩大培养后，接种于发酵培养基，37℃培养36-48h，发酵液加入没食子酸丙酯0.01-0.02％(w/w)、酵母浸出物干粉4-6％(w/w)和卡松0.01-0.03％(w/w)，搅拌均匀，即得活菌制剂。
5.如权利要求4所述的活菌制剂的制备方法，其特征是，所述发酵培养基为：麸皮粉5g、玉米粉10g、酵母浸粉5g、磷酸二氢钾1.5g、纤维素酶0.1g、水1000mL，初始pH7.5。
6.权利要求3所述的活菌制剂在防治辣椒疫病，促进辣椒生长方面的应用。
7.权利要求3所述的活菌制剂的使用方法，其特征是，将活菌制剂加水稀释100～500倍，灌根或浇水时随水冲施。
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Denomination of invention: Production method and application of a strain of Enterobacter cloacae and its live bacterial preparation

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