CN111732597A - 含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物的制备及应用 - Google Patents

含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物的制备及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及通式Ⅰ和Ⅱ所示的含4‑酰胺苯氧基的2‑氨基嘧啶杂环类化合物的制备和应用及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物和前药，其中取代基X、R1和R2具有在说明书中给出的含义。本发明中涉及通式Ⅰ和Ⅱ的化合物具有强的抑制EGFR、EGFRT790M/L858R、EGFRT790M激酶的作用，且对人正常肝细胞LO2具有非常低的抑制活性，并且还涉及该类化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药在制备治疗由于EGFR激酶异常激活高表达及其T790M和L858R突变阳性所引起疾病的药物中的用途，特别是在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。

Description

含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物的制备及应用
技术领域
本发明涉及新的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或其前药的制备方法以及含有所述化合物的药物组合物，及其在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。
技术背景
癌症，即恶性肿瘤，能够使正常细胞的增殖和分化失去控制，进行异常***，并且肿瘤具有浸润性和转移性等多种生物学上的病理特征，是一种严重危害人类健康的疾病。据国际癌症研究机构2018年癌症数据的统计，全年中全球有1810万癌症病例，死亡率为52.9％；预计到2040年，全球癌症病例将会大幅上升至2950万。
研究发现，EGFR与肿瘤细胞的一系列生命活动如增殖、侵袭、血管生成、肿瘤转移及凋亡的抑制息息相关。EGFR家族成员具有举足轻重的地位，因而己经成为了治疗癌症的首要也是主要的靶标，尤其是针对NSCLC的治疗。通过抑制EGFR酪氨酸的激酶活性，阻断其信号通路传导，可有效抑制肿瘤的生长。目前已报道了大量的第三代EGFR小分子抑制剂(如下结构式所示)，在这些小分子抑制剂中，文献(Novel mutant-selective EGFR kinaseinhibitors against EGFR T790M.Nature.2009；462:1070–1074)报道了WZ4002在生物细胞活性及抗肿瘤酶活性上具有高效的作用，除此之外，还有很多EGFR小分子抑制剂具有优良的抗肿瘤活性，如奥斯替尼(Structure-and reactivity-based development ofcovalent inhibitors of the activating and gate keeper mutant for TOF MS ofthe epidermal growth factor receptor(EGFR).J Med Chem.2013；56:7025–7048)、CO1686(Discovery of a mutant-selective covalent inhibitor of EGFR thatovercomesT790M-mediated resistance in NSCLC.Cancer Discov.2013；3:1404–1415)、以及奥莫替尼(Abstract LB-100:discovery of HM61713as an orally available andmutant EGFR selective inhibitor.CancerRes.2014；74:LB-100)等，奥莫替尼显示出非常优良的抗肿瘤活性。一项人类NSCLC细胞系体外增殖研究表明，表达EGFRdel19的HCC827细胞、表达EGFRL858R/T790M的H1975细胞以及表达EGFRWT的细胞在半数最大生长抑制下的奥莫替尼浓度分别为9.2nmol/L、10nmol/L和2225nmol/L，表明奥莫替尼具有较强的对EGFR突变阳性的选择性。
Figure BDA0002548783230000021
为了研制出新型高效的抗肿瘤药物，本发明人对氨基杂环嘧啶类化合物进行了广泛研究，在保留氨基嘧啶、迈克尔受体等活性基团的基础上，维持第三代EGFR抑制剂化合物的U型结构支架，在嘧啶环和丙烯酰胺侧链上引入了小分子烷基侧链和卤素等活性基团以调节化合物的反应性，通过分子对接结果改变母核结构，设计并合成了一系列结构新颖的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物。本发明着重考察的是不同母核及不同取代基的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物的抗肿瘤活性，以期筛选出活性与选择性更佳的抗肿瘤药物。
发明内容
本发明涉及通式Ⅰ和Ⅱ所示含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药。
通式Ⅰ和Ⅱ的化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药。
Figure BDA0002548783230000031
其中：
X环选自：
Figure BDA0002548783230000032
R1选自：
Figure BDA0002548783230000033
Z为N、C；
-R2(CH)2R3选自：
Figure BDA0002548783230000034
Figure BDA0002548783230000035
其中R6选自氢、卤素、三氟甲基、氰基、硝基、羟基、氨基、巯基、羧基、三氟甲氧基、甲基、乙基、丙基、丁基、环丙烷、乙烯、丙烯、乙炔、丙炔、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基或叠氮基；
R7选自卤素、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、叠氮基、氰基、巯基、C1～C4烷基、C3～C6环烷基、C1～C4烯基、C1～C4炔基、C1～C4烷氧基。
本发明非常特别优选的通式Ⅰ和Ⅱ衍生物，包括其消旋体或旋光异构体，及其药学上可接受的盐和/或水合物，但这些化合物并不意味着对本发明的任何限制：
N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丁-2-烯酰胺
N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-3-甲基-2-烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)戊-2-烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-甲基戊-2-烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)己-2-烯酰胺
2-氟-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丁-2-烯酰胺
N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-3-甲基-2-烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)戊-2-烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-甲基戊-2-烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)己-2-烯酰胺
N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丁-2-烯酰胺
N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-3-甲基-2-烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-甲基戊-2-烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)己-2-酰胺
N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
2-氟-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
(E)-4-(二甲氨基)-N-(3-((2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-丁-2-烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-(哌啶-1-基)-丁-2-烯酰胺
N-(3-((2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6,7-二氢噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6,7-二氢噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-戊-2-烯酰胺
N-(3-((2-((2-巯基吡啶-4-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
2-氟-N-(3-((2-((2-巯基吡啶-4-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
(E)-4-(二甲氨基)-N-(3-((2-((2-巯基吡啶-4-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-丁-2-烯酰胺
(E)-N-(3-((2-((2-巯基吡啶-4-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-(哌啶-1-基)-丁-2-烯酰胺
本发明还提供了一种药用组合物，包含上述通式Ⅰ和Ⅱ的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物、其几何异构体或及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药作为活性成分以及药学上可接受的赋型剂。
下面的合成路线描述了本发明通式Ⅰ和Ⅱ的制备，所有的原料都是通过合成路线中描述的方式、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。本发明的全部最终的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物都是通过合成路线中描述的方法或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。合成路线中应用的全部可变因数如下文的定义或如权利要求中的定义。
以N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺为例，合成方法如下所示，所有原料均为市售分析纯。
Figure BDA0002548783230000071
以N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺为例，合成方法如下所示，所有原料均为市售分析纯。
Figure BDA0002548783230000081
本发明首先合成中间体Ⅶ，再经与不同侧链胺及不同取代的小分子酰氯对接或其他方式得到目标化合物。
按照本发明所属领域的一些通常方法，本发明中上述通式Ⅰ和Ⅱ的喹唑啉类化合物可以与酸生成药学上可接受的盐。可药用加成盐包括无机酸和有机酸加成盐，与下列酸加成的盐是特别优选的：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、马来酸、柠檬酸、富马酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。
此外，本发明还包括本发明衍生物的前药。本发明衍生物的前药是上述通式Ⅰ的衍生物，它们自身可能具有较弱的活性甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。
本发明可以含有上述通式Ⅰ和Ⅱ的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物，及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物作为活性成份，与药学上可接受的载体或赋型剂混合制备成组合物，并制备成临床上可接受的剂型，上述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。本发明的衍生物可以与其他活性成份组合使用，只要它们不产生其他不利的作用，例如过敏反应。
本发明上述通式Ⅰ和Ⅱ的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物用于患者的临床剂量可以根据：活性成分在体内的治疗功效和生物利用度、它们的代谢和***速率和患者的年龄、性别、疾病期来进行适当调整，不过成人的每日剂量一般应当为10～500mg，优选为50～300mg。按照医生或药师的指导，这些制剂可以以一定间隔分若干次给药(优选为一至六次)。
本发明的药用组合物可配制成若干种剂型，其中含有药物领域中一些常用的赋形剂。如上所述的若干种剂型可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
用于本发明药物组合物的载体是药物领域中可得到的常见类型，包括：粘合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂、防腐剂、加溶剂和基质等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下不稳定的，可将其配制成肠衣片剂。
本发明还发现上述含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物在制备治疗和/或预防增生性疾病药物中的应用。本发明的活性化合物或其可药用盐及其溶剂化物可作为唯一的抗增生性药物单独使用，或者可以与现已上市的抗增生性药物联合使用，用于治疗和/或预防增生性疾病，如牛皮癣、良性***肥大、动脉粥样硬化和再狭窄。
本发明还发现上述含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物在制备治疗和/或预防癌症的药物中的应用。本发明化合物体外具有抑制肿瘤细胞生长活性，因此，它可以用作制备治疗和/或预防癌症的药物，如乳腺、肺、肝脏、肾脏、结肠、直肠、胃、***、膀胱、子宫、胰腺、骨髓、睾丸、卵巢、淋巴、软组织、头颈、甲状腺、食道的癌和白血病、成神经细胞瘤等。
本发明还发现上述含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物在制备治疗和/或预防***癌、肺癌和***、乳腺癌的药物中的应用。
通过体外抑制肺癌细胞A549、A431、H1975(T790M/L858R双突变)、人乳腺癌细胞MCF-7、***细胞Hela以及人正常肝细胞LO2活性试验，本发明化合物对肺癌细胞、乳腺癌细胞、***细胞具有显著抑制作用，对人正常肝细胞具有非常低的抑制活性，预示着化合物的低毒副作用。
通过对EGFR激酶活性测试发现，本发明化合物具有显著的抑制EGFR激酶活性，对EGFR高表达的肺癌细胞有较强的抑制作用，特别用于制备治疗和/或预防肺癌的药物。
本发明的活性化合物或其可药用盐及其溶剂化物可作为唯一的抗肿瘤药物单独使用，或者可以与现已上市的抗肿瘤药物(如铂类药物顺铂、喜树碱类药物伊立替康、长春花碱类药物诺维本、脱氧胞昔类药物吉西他滨、足叶乙甙、紫杉醇等)联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。
本发明经体外对多种EGFR抑制剂高表达细胞株进行抗肿瘤活性筛选，结果表明具有较强的抗肿瘤活性和选择性，对人正常细胞LO2进行活性测试，发现大部分化合物对该细胞活性极低，实验表明某些化合物具有高效的抗肿瘤活性及较低的副作用。
具体实施方式
为了更好地解释本发明，以下结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，但它们不对本发明构成限定。
实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。衍生物的核磁共振氢谱用BrukerARX-400测定，质谱用Agilent 1100LC/TOF MSD测定；所用试剂均为分析纯或化学纯。
通式Ⅰ和Ⅱ的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物:
Figure BDA0002548783230000111
本发明实施例1～28的结构式如下表1所示。
表1实施例1～28的结构式:
Figure BDA0002548783230000112
Figure BDA0002548783230000121
Figure BDA0002548783230000131
Figure BDA0002548783230000141
Figure BDA0002548783230000151
实施例15N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
步骤A 4-氧四氢-2H-硫代吡喃-3-羧酸甲酯(Ⅲ1)的制备方法
将3,3'-硫代二丙酸二甲酯(Ⅱ)(1130.0g，630.3mmol)和NaH(60％，22.7g，945.5mmol)加入至装有500mL四氢呋喃的烧瓶中。将混合物在室温下搅拌4h。反应结束后，将上述混合液加入1000mL水中，用二氯甲烷多次萃取。所得有机相用无水硫酸钠干燥，减压回收二氯甲烷得Ⅲ1，黄色液体104.3g，收率95.0％。
步骤B 7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-2,4-二醇(Ⅳ1)的制备方法
将化合物Ⅲ1(50.0g，287.0mmol)和尿素(103.5g，1723.3mmol)溶于500mL甲醇钠溶液中。在80℃下搅拌反应大约5h后，反应完成。向反应液中缓慢加入500mL水，在混合过程中，肉眼可见的细小颗粒析出，减压抽滤并干燥后得到化合物Ⅳ1，淡黄色固体40.29g，收率76.2％。
步骤C 2,4-二氯-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶(Ⅴ1)的制备方法
将化合物Ⅳ1(20.0g，108.5mmol)溶于80mL三氯氧磷溶液中，在120℃下搅拌3h，反应结束后将反应混合物冷却至室温，然后缓慢加入500mL冰水并剧烈搅拌，固体沉淀。减压抽滤后，用蒸馏水清洗滤饼。干燥滤饼后得到19.8g浅灰色固体，收率为82.6％。
步骤D:(22-氯-4-(3-硝基苯氧基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶(Ⅵ1)的制备方法
将化合物Ⅴ1(19.0g，85.9mmol)和间硝基苯酚(12.0g，86.3mmol)、碳酸铯(31.0g，95.1mmol)在装有120mL 4-二氧六环的烧瓶中，于室温搅拌6h，反应过程中析出大量固体。反应结束后，将反应混合物倒入250mL水中搅拌30min，过滤干燥后得到白色固体27.0g，收率97.1％。
步骤E N-(3-甲氧基苯基)-4-(3-硝基苯氧基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-2-胺(Ⅶ1a)的制备方法
将化合物Ⅵ1(5g，15.4mmol)用60mL乙腈溶解，然后依次向其中加入对甲苯磺酸(5.6g，32.5mmol)和氨基侧链a(16.5mmol)。在100℃搅拌3h后，反应完成。冷却至室温后减压浓缩，乙腈浓缩约50％。加入两倍量的水后，大量的固体沉淀下来。减压抽滤固体并干燥以获得关键中间体Ⅶ1a。
步骤F 4-(3-氨基苯氧基)-N-(3-甲氧基苯基)-7,8-二氢-5H-硫代吡拉诺[4,3-d]嘧啶-2-胺(Ⅷ1a)的制备方法
化合物Ⅶ1a(13.0mmol)溶于60mL乙醇中。依次加入六水三氯化铁(15.6mmol)和活性炭(91.0mmol)。加热至80℃后，将水合肼(130.0mmol)与10mL乙醇混合并加入上述溶液中。将混合物回流搅拌4h，反应结束后过滤除去反应体系中的固体。然后用10mL无水乙醇清洗滤饼，收集滤液，溶剂用真空蒸馏法回收。残余物加入至60mL的饱和碳酸氢钠水溶液中，剧烈搅拌使固体沉淀。减压抽滤固体并干燥以获得关键中间体Ⅷ1a。
步骤G:N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(Ⅸ1a)的制备方法
将化合物Ⅷ1a(1.5mmol)溶于30mL二氯甲烷中，并加入DIPEA(3.0mmol)。将溶液在冰浴中搅拌5分钟，然后将用等量二氯甲烷稀释的的酰胺(3.0mmol)缓慢滴入上述溶液中。反应在2h内完成，反应完成后，过滤反应混合物，减压蒸馏回收溶剂。用二氯甲烷/甲醇＝70:1-30:1作为洗脱剂，将残余物通过硅胶柱色谱层析法纯化，获得纯度较高的目标化合物Ⅸ1a。
实施例1N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
m.p.:225.9–227.3℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:435.14；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.40(s,1H),7.67(s,1H),7.54(d,J＝6.8Hz,1H),7.39(t,J＝7.5Hz,1H),7.19(s,1H),7.04(d,J＝6.0Hz,1H),6.93(s,2H),6.51–6.41(m,1H),6.38(d,J＝6.8Hz,1H),6.25(d,J＝16.9Hz,1H),5.76(d,J＝9.7Hz,1H),3.77(s,2H),3.54(s,3H),2.97(s,4H).
按照实例1的方法合成方法，以中间体Ⅷ1a与不同取代基R2反应制得实施例2～7化合物。
实施例2(E)-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丁-2-烯酰胺
m.p.:198.2–202.7℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:449.16；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.53(s,1H),9.37(s,1H),7.70(s,1H),7.57(d,J＝6.5Hz,1H),7.40–7.31(m,1H),7.19(s,1H),7.03(s,1H),6.96–6.85(m,2H),6.76(s,1H),6.38(d,J＝5.0Hz,1H),6.25(d,J＝14.4Hz,1H),3.76(s,2H),3.53(s,3H),2.96(s,4H),1.85(d,J＝5.8Hz,3H).
实施例3N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-3-甲基-2-烯酰胺
m.p.:199.7–201.6℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:463.18；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,1H),7.27(s,1H),7.13(d,J＝8.0Hz,1H),7.05(t,J＝8.0Hz,1H),6.96(t,J＝8.1Hz,1H),6.45(d,J＝8.1Hz,1H),6.40(d,J＝8.0Hz,1H),6.35(s,1H),6.30(s,1H),5.25(s,2H),3.72(s,2H),3.55(s,3H),2.95(s,4H),2.18(s,3H),1,84(s,3H).
实施例4(E)-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)戊-2-烯酰胺
m.p.:200.7–202.4℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:463.18；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H),9.37(s,1H),7.63(s,1H),7.48(d,J＝8.6Hz,1H),7.35(t,J＝8.1Hz,1H),7.18(d,J＝9.2Hz,1H),7.02(d,J＝7.3Hz,1H),6.89(t,J＝8.1Hz,2H),6.36(d,J＝7.2Hz,1H),6.10(d,J＝15.3Hz,1H),5.95(d,J＝15.5Hz,1H),3.75(s,2H),3.51(s,3H),2.95(s,4H),2.06–1.89(m,2H),1.22(d,J＝10.0Hz,3H).
实施例5(E)-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-甲基戊-2-烯酰胺
m.p.:230.5–234.5℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:477.19；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),9.34(s,1H),7.27(s,1H),7.12(d,J＝8.1Hz,1H),7.04(t,J＝7.9Hz,1H),6.96(t,J＝8.1Hz,1H),6.45(d,J＝7.8Hz,1H),6.42–6.34(m,2H),6.30(d,J＝7.6Hz,1H),5.27(s,2H),3.72(s,2H),3.55(s,3H),2.95(s,4H),1.98(s,1H),1.23(s,6H).
实施例6(E)-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)己-2-烯酰胺
m.p.:226.7–229.4℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:477.19；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.18(s,1H),9.20(s,1H),7.64(s,1H),7.51(s,1H),7.39(t,J＝8.0Hz,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,2H),6.89(d,J＝7.7Hz,1H),6.78(dd,J＝14.8,7.4Hz,1H),6.59(d,J＝7.6Hz,2H),6.11(d,J＝15.2Hz,1H),3.76(s,2H),3.63(s,3H),2.99–2.89(m,4H),2.17(q,J＝6.7Hz,2H),1.44(dt,J＝14.4,7.3Hz,2H),0.94–0.89(m,3H).
实施例7 2-氟-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
m.p.:215.2–217.4℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:453.14；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.18(s,1H),9.36(s,1H),7.27(s,1H),7.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.05(t,J＝7.9Hz,1H),6.96(t,J＝8.1Hz,1H),6.45(d,J＝7.9Hz,1H),6.40(d,J＝7.9Hz,1H),6.35(s,1H),6.31(d,J＝7.9Hz,1H),5.26(s,2H),3.72(s,2H),3.55(s,3H),2.95(s,4H).
按照实施例1的方法合成Ⅵ1，与氨基侧链b反应制得Ⅶ1b，还原后得Ⅷ1b，以中间体Ⅷ1b与不同取代基R2反应制得实施例8～13化合物。
实施例8 N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
m.p.:189.2–190.7℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:436.14；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),9.32(s,1H),8.21(s,1H),7.78(d,J＝8.7Hz,1H),7.65(s,1H),7.48(d,J＝9.1Hz,1H),7.37(t,J＝8.1Hz,1H),6.89(dd,J＝8.0,2.2Hz,1H),6.78(dt,J＝14.3,7.0Hz,1H),6.48(d,J＝8.2Hz,1H),6.12(d,J＝15.3Hz,1H),5.53(d,J＝14.3Hz,1H),3.76(s,2H),3.74(s,3H),2.95(s,4H)
实施例9(E)-N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丁-2-烯酰胺
m.p.:187.6–190.1℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:450.16；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),9.27(s,1H),8.17(s,1H),7.75(d,J＝8.6Hz,1H),7.45(d,J＝7.4Hz,1H),7.38(d,J＝9.1Hz,1H),6.89(d,J＝7.3Hz,1H),6.83–6.73(m,2H),6.45(s,1H),6.11(d,J＝14.8Hz,1H),3.74(s,2H),3.72(s,3H),2.95–2.91(m,4H),1.85(d,J＝6.7Hz,3H).
实施例10 N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-3-甲基-2-烯酰胺
m.p.:221.1–224.1℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:450.16；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),9.83(s,1H),8.28(d,J＝5.4Hz,1H),8.05(s,1H),7.92(d,J＝8.4Hz,1H),7.39(s,1H),7.37–7.32(m,2H),7.29(d,J＝6.5Hz,1H),6.53(d,J＝8.1Hz,1H),3.75–3.70(m,5H),2.96(d,J＝21.6Hz,4H),2.10(s,3H),1.84(s,3H).
实施例11(E)-N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)戊-2-烯酰胺
m.p.:214.3–216.4℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:464.17；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),9.31(s,1H),8.21(s,1H),7.79(s,1H),7.65(s,1H),7.47(d,J＝7.6Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,1H),6.93–6.81(m,2H),6.49(s,1H),6.09(d,J＝15.4Hz,1H),3.76(s,3H),3.74(s,2H),2.95(s,4H),2.27–2.16(m,2H),1.03(t,J＝7.1Hz,3H).
实施例12(E)-N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-甲基戊-2-烯酰胺
m.p.:226.8–229.2℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:478.19；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),9.30(s,1H),8.19(s,1H),7.76(d,J＝8.4Hz,1H),7.63(s,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.37(d,J＝8.2Hz,1H),6.88(d,J＝7.8Hz,1H),6.81–6.73(m,1H),6.46(d,J＝6.5Hz,1H),6.04(d,J＝15.4Hz,1H),3.74(s,2H),3.72(s,3H),2.94(d,J＝10.9Hz,4H),2.44(dd,J＝13.0,6.5Hz,1H),1.02(d,J＝6.7Hz,6H).
实施例13(E)-N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)己-2-烯酰胺
m.p.:230.1–231.7℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:478.19；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),9.33(s,1H),8.21(s,1H),7.77(d,J＝6.9Hz,1H),7.65(s,1H),7.48(d,J＝8.2Hz,1H),7.37(t,J＝7.5Hz,1H),6.89(d,J＝7.9Hz,1H),6.78(dt,J＝14.6,6.9Hz,1H),6.48(d,J＝8.3Hz,1H),6.12(d,J＝15.3Hz,1H),3.75(s,2H),3.73(s,3H),2.95(s,4H),2.24–2.12(m,2H),1.49–1.42(m,2H),0.90(t,J＝7.0Hz,3H).
实施例14 N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
步骤A:2,4-二氯-6-(噻吩-2-基)嘧啶(Ⅴ2)的制备方法
以1,2-二甲氧基乙烷与水5:1的混合液体作为溶剂，将2,4,6-三氯嘧啶(70.0g，381.6mmol)、双(三苯基膦)二氯化钯和噻吩-2-基硼酸(25.2g，196.8mmol)装入500mL烧瓶中，使用一锅法将化合物置于90℃下搅拌反应大约1.5h后反应完全，体系呈黑色浑浊。将体系中的溶剂蒸干，使用乙酸乙酯/***＝70:1-50:1作为洗脱剂，将残余物通过硅胶柱色谱层析法纯化，获得21.0g纯度较高的目标化合物Ⅴ2，收率23.6％。
步骤B:2-氯-4-(3-硝基苯氧基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶(Ⅵ2)的制备方法
将化合物Ⅴ2(19.0g，82.3mmol)溶于120mL的1，4-二氧六环中，依次加入间硝基苯酚(12.0g，86.3mmol)、碳酸铯(32.0g，99.5mmol)于溶剂中，室温搅拌4h，反应过程中析出大量固体。反应结束后，将反应液倒入250mL水中并搅拌10分钟，减压抽滤出固体并干燥后得到黄色固体24.0g，收率87.4％。
步骤D:3-((4-(3-硝基苯氧基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-2-基)氨基)苯甲腈(Ⅶ2c)的制备方法
将化合物Ⅵ2(5.3g，16.0mmol)用60mL乙腈溶解，然后依次向上述溶液中加入对甲苯磺酸(5.6g，32.5mmol)和氨基侧链c(16.0mmol)。在100℃条件下搅拌，反应4-5h后完成，冷却至室温后，将反应体系用旋转蒸发仪浓缩。乙腈浓缩至约50％后，加入两倍量的水，析出大量固体。减压抽滤出固体后干燥，获得关键中间体Ⅶ2c。
步骤E:3-((4-(3-氨基苯氧基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-2-基)氨基)苯甲腈(Ⅷ2c)的制备方法
化合物Ⅶ2c(13.0mmol)溶于60mL乙醇中。依次加入六水三氯化铁(15.6mmol)和活性炭(91.0mmol)。加热至80℃后，将水合肼(130.0mmol)与10mL乙醇混合并加入上述溶液中。将混合物回流搅拌4h，反应结束后过滤除去反应***中的固体。然后用10mL无水乙醇清洗滤饼，收集滤液。大部分溶剂用真空蒸馏法除去。加入饱和碳酸氢钠水溶液60mL，剧烈搅拌使固体沉淀。化合物Ⅷ2c通过过滤和滤饼干燥得到。
步骤F:N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(Ⅸ2c)的制备方法
将化合物Ⅷ2c(1.5mmol)溶于30mL二氯甲烷中，并加入N,N二异丙基乙胺(DIPEA)3.0mmol。将溶液在冰浴中搅拌5min，然后将用等量二氯甲烷稀释的酰胺(3.0mmol)缓慢滴入上述溶液中。反应在2h内完成，反应完成后，减压抽滤除去反应体系中的固体，滤液通过减压蒸馏回收。用二氯甲烷/甲醇＝70:1-30:1作为洗脱剂，将残余物通过硅胶柱色谱层析法纯化，获得纯度较高的目标化合物Ⅸ2c。
实施例14 N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
m.p.:207.2–208.4℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:440.11；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),9.95(s,1H),8.08–8.05(m,1H),7.84(d,J＝5.2Hz,2H),7.71(d,J＝6.3Hz,1H),7.52(d,J＝8.3Hz,1H),7.44(t,J＝8.1Hz,2H),7.33(s,2H),7.28–7.24(m,1H),7.16(s,1H),7.03–6.99(m,1H),6.43(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.25(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),5.79–5.74(m,1H).
按照实施例14的方法，以中间体Ⅷ2c与不同取代基R2反应制得实施例15～18化合物。
实施例15(E)-N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丁-2-烯酰胺
m.p.:209.9–211.1℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:454.13；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),9.95(s,1H),8.07(d,J＝5.8Hz,2H),7.84(d,J＝5.1Hz,2H),7.69(d,J＝10.9Hz,1H),7.49(d,J＝8.2Hz,1H),7.43(d,J＝7.9Hz,1H),7.34(s,2H),7.27–7.24(m,1H),7.16(s,1H),6.98(d,J＝8.1Hz,1H),6.79(dd,J＝15.3,7.6Hz,1H),6.11(d,J＝15.3Hz,1H),1.85(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例16 N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-3-甲基-2-烯酰胺
m.p.:197.2–199.2℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:468.15；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.01(s,1H),9.95(s,1H),8.06(d,J＝3.8Hz,1H),7.84(d,J＝4.9Hz,2H),7.67(s,1H),7.42(dt,J＝16.2,8.2Hz,3H),7.34(s,2H),7.27–7.24(m,1H),7.15(s,1H),6.95(d,J＝8.1Hz,1H),5.86(s,1H),2.12(s,3H),1.85(s,3H).
实施例17(E)-N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-甲基戊-2-烯酰胺
m.p.:210.5.2–211.9℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:482.16；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.94(s,1H),8.06(d,J＝3.8Hz,1H),7.84(d,J＝5.2Hz,2H),7.69(d,J＝4.5Hz,1H),7.49(d,J＝8.3Hz,1H),7.42(t,J＝8.1Hz,1H),7.33(s,2H),7.25(t,J＝4.4Hz,1H),7.15(s,1H),6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.81(d,J＝6.3Hz,1H),6.79–6.74(m,1H),6.06(d,J＝15.4Hz,1H),2.43(dd,J＝13.1,6.6Hz,1H),1.03(d,J＝6.5Hz,6H).
实施例18(E)-N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)己-2-酰胺
m.p.:222.3–223.5℃；TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:482.16；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),9.95(s,1H),8.07(d,J＝3.7Hz,1H),7.85(d,J＝5.0Hz,2H),7.68(s,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.42(t,J＝8.0Hz,2H),7.33(s,2H),7.26(dd,J＝5.0,3.8Hz,1H),7.16(s,1H),6.98(d,J＝7.9Hz,1H),6.82–6.76(m,1H),6.10(d,J＝15.4Hz,1H),2.18(d,J＝7.0Hz,2H),1.45(d,J＝7.3Hz,2H),0.90(d,J＝3.5Hz,3H).
实施例19 N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:445.13.
实施例20 2-氟-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:463.12.
实施例21(E)-4-(二甲氨基)-N-(3-((2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-丁-2-烯酰胺
TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:476.18.
实施例22(E)-N-(3-((2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-(哌啶-1-基)-丁-2-烯酰胺
TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:516.21.
实施例23 N-(3-((2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6,7-二氢噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:395.12.
实施例24(E)-N-(3-((2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6,7-二氢噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-戊-2-烯酰胺
TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:423.16.
实施例25 N-(3-((2-((2-巯基吡啶-4-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:448.09.
实施例26 2-氟-N-(3-((2-((2-巯基吡啶-4-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺
TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:466.08.
实施例27(E)-4-(二甲氨基)-N-(3-((2-((2-巯基吡啶-4-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-丁-2-烯酰胺
TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:505.14.
实施例28(E)-N-(3-((2-((2-巯基吡啶-4-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-(哌啶-1-基)-丁-2-烯酰胺
TOF MS ES+(m/z):(M+H)+:545.17.
本发明产物的药理研究
体外细胞毒活性
对按照本发明的通式Ⅰ和Ⅱ的含嘧啶及吡啶类喹啉衍生物进行了体外抑制肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MCF-7、***细胞Hela及人正常细胞LO2活性筛选，对照品为奥莫替尼。
(1)细胞复苏并传代2-3次稳定后，用胰蛋白酶溶液(0.25％)使其从培养瓶底部消化下来。将细胞消化液倒入离心管中后，之后加入培养液以终止消化。将离心管在800r/min下离心10min，弃去上清液后加入5mL培养液，吹打混匀细胞，吸取10μL细胞混悬液加入细胞计数板中计数，调整细胞浓度为104个/孔。96孔板中除A1孔为空白孔不加细胞外，其余皆加入100μL细胞混悬液。将96孔板放入培养箱中培养24h。
(2)用50μL二甲基亚砜溶解受试样品，然后加入适量培养液，使样品溶解成2mg/mL药液，然后在24孔板中将样品稀释为20,4,0.8,0.16,0.032μg/mL。
每个浓度加入3孔，其中周围两行两列细胞长势受环境影响较大，只和为空白细胞孔使用。将96孔板放入培养箱中培养72h。
(3)将96孔板中带药培养液弃去，用磷酸缓冲溶液(PBS)将细胞冲洗两遍，在每孔中加入MTT(四氮唑)(0.5mg/mL)100μL放入培养箱中4h后，弃去MTT溶液，加入二甲基亚砜100μL。在磁力振荡器上振荡使存活细胞与MTT反应产物甲臜充分溶解，放入酶标仪中测定结果。通过Bliss法可求出药物IC50值。
化合物的抑制肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MCF-7、***细胞Hela及人正常细胞LO2活性结果(见表二)。
EGFR激酶活性试验
以奥莫替尼为阳性对照，利用HTRF技术，测试新合成化合物对各种癌细胞抑制作用的IC50值，并测试部分化合物对EGFR的抑制作用。
具体方法：配制所需浓度的ATP、TK Substrate-biotin(TK-底物生物素)、Kinasebuffer(激酶缓冲液)的工作液，ATP、TK Substrate-biotin、Kinase buffer按体积比例2:2:2取液混匀；用Kinase buffer稀释药物配制为所需浓度；配制EGFR酶工作液。在白色384孔板中，每孔加入6μL混匀液，2μL药物，2μL激酶，混匀，置于37℃下反应30min。然后加入5μL链激酶素标记的XL-665及5μL结合了Eu3+的穴状化合物抗体，混匀。室温放置30min后于酶标仪314nm激发，检测665、620nm波长处的荧光，计算激酶抑制率，根据吸光度用Bliss法计算出每个药物的IC50值。
抑制率(％)＝(Ratio665/620对照孔－Ratio665/620给药孔)/Ratio665/620对照孔×100％。
实验数据均以平均值±标准差表示，计量资料的组间显著性检验采用单因素方差分析，两两比较采用t检验，p<0.05为有显著性差异，p<0.01为有非常显著性差异。
表2部分目标化合物体外抗肿瘤活性
Figure BDA0002548783230000291
Figure BDA0002548783230000301
表3部分目标化合物酶活性
Figure BDA0002548783230000302
Figure BDA0002548783230000311
从上述试验结果可以清楚地看出，本发明所要保护的通式Ⅰ和Ⅱ的化合物，具有良好的体外抗细胞增殖活性和抗EGFR激酶活性，所有目标化合物对人正常细胞LO2的毒性低于奥莫替尼，部分化合物对L858R/T790M双突变细胞肺癌细胞H1975的抑制活性优于奥莫替尼。从上表的数据可以看出，相对于抗EGFR野生型激酶活性，实例化合物对EGFR双突变激酶具有一定的选择性，这也可证明实例化合物靶向性好，选择性高，如实施例1和6。由此可得出结论，本发明中通式Ⅰ和Ⅱ的化合物可能是潜在的EGFR抑制剂。
尽管已经通过特定实施方案描述了本发明，但修改和等价变化对于精通此领域的技术人员而言是显见的，且它们都包含在本发明范围之内。
应用例1：胶囊剂
以实施例9化合物10g，按照药剂学胶囊剂的要求将辅料20g混匀后，装入空心胶囊，每个胶囊重300mg。
应用例2：片剂
以实施例3化合物10g，按照药剂学一般压片法加辅料20g混匀后，压制成100片，每片重300mg。
应用例3:软膏剂
以实施例4化合物10g，研细后与凡士林等油性基质500g研匀制得。
尽管已经通过特定实施方案描述了本发明，但修改和等价变化对于精通此领域的技术人员而言是显见的，且它们都包含在本发明范围之内。
应用例4：气雾剂
以实施例9化合物10g，用适量丙二醇溶解后，加入蒸馏水及其他辐料后，制成500mL的澄清溶液即得。
应用例5:滴丸剂
以实施例12化合物10g，与明胶等基质50g加热熔化混匀后，滴入低温液体石蜡中，共制得滴丸1000丸。
应用例6:外用搽剂
以实施例16化合物10g，按照常规药剂学方法与乳化剂等辅料2.5g混合研磨，再加蒸馏水至200mL制得。
应用例7:膜剂
以实施例19化合物10g，将聚乙烯醇、药用甘油、水等搅拌膨胀后加热溶解，80目筛网过滤，再将实施例14化合物加入到滤液中搅拌溶解，涂膜机制膜100片。
应用例8:栓剂
以实施例24化合物10g，将之研细加入甘油适量，研磨均匀后加入已熔化的甘油明胶，研磨均匀，倾入已涂润滑剂的模型中，制得栓剂10颗。

Claims (6)

1.一种含有4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物，其特征在于，结构如下述通式I和Ⅱ所示：
Figure FDA0002548783220000011
其中：
X环取自含S的五元、六元杂环；
R1选自吡啶、苯环、嘧啶、噻唑、吡唑环等五元或六元杂环或者芳(杂)环，所述的五元或六元杂环或者芳(杂)环含有1-3个选自氢、卤素、三氟甲基、氰基、甲氧基、(C1～C4)烷基的取代基；
R2选自氢，(C1～C4)烷基或卤素；
R3选自氢、(C1～C10)烷基、(C3～C10)环烷基、(C1～C4)醇羟基、
Figure FDA0002548783220000012
R4、R5相同或不同，分别独立地选自(C1～C6)烷基或(C3～C6)环烷基、羟乙基、巯基乙基，或R4和R5与和它们所连接的氮原子一起形成5～10元饱和杂环基，所述饱和杂环基除了与R4和R5连接的氮原子外，任选含有1～3个选自O、N和S的杂原子；
n为0～3。
2.根据权利要求1所述的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物，其特征在于：
X环选自：
Figure FDA0002548783220000021
R1选自：
Figure FDA0002548783220000022
-R2(CH)2R3选自：
Figure FDA0002548783220000023
Figure FDA0002548783220000024
其中R6选自氢、卤素、三氟甲基、氰基、硝基、羟基、氨基、巯基、羧基、三氟甲氧基、甲基、乙基、丙基、丁基、环丙烷、乙烯、丙烯、乙炔、丙炔、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基或叠氮基；
R7选自卤素、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、叠氮基、氰基、巯基、C1～C4烷基、C3～C6环烷基、C1～C4烯基、C1～C4炔基、C1～C4烷氧基。
3.权利要求1所述的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物，其特征在于：所述通式Ⅰ和Ⅱ的化合物为选自下列化合物中的一种：
N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丁-2-烯酰胺；
N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-3-甲基-2-烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)戊-2-烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-甲基戊-2-烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)己-2-烯酰胺；
2-氟-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺；
N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丁-2-烯酰胺；
N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-3-甲基-2-烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)戊-2-烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-甲基戊-2-烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((6-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-7,8-二氢-5H-硫代吡喃[4,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)己-2-烯酰胺；
N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丁-2-烯酰胺；
N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-3-甲基-2-烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-甲基戊-2-烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((3-氰基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)己-2-酰胺；
N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺；
2-氟-N-(3-((2-((3-甲氧基苯基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺；
(E)-4-(二甲氨基)-N-(3-((2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-丁-2-烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-(哌啶-1-基)-丁-2-烯酰胺；
N-(3-((2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6,7-二氢噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-6,7-二氢噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)-戊-2-烯酰胺；
N-(3-((2-((2-巯基吡啶-4-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺；
2-氟-N-(3-((2-((2-巯基吡啶-4-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺；
(E)-4-(二甲氨基)-N-(3-((2-((2-巯基吡啶-4-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-丁-2-烯酰胺；
(E)-N-(3-((2-((2-巯基吡啶-4-基)氨基)-6-(噻吩-2-基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-(哌啶-1-基)-丁-2-烯酰胺。
4.一种如权利要求1-3所述的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物在制备治疗和/或预防增生性疾病药物中的应用。
5.一种如权利要求1-3所述的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物在制备治疗和/或预防癌症的药物中的应用。
6.一种如权利要求1-3所述的含4-酰胺苯氧基的2-氨基嘧啶杂环类化合物在制备治疗和/或预防***癌、肺癌或***的药物中的应用。
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