CN111714521B - 一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物及其制备方法和在制备抗炎或抗溃疡产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药技术领域，尤其涉及一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物及其制备方法和在制备抗炎或抗溃疡产品中的应用。该提取物以美洲大蠊粪便为原料，通过乙醇回流提取、过滤、浓缩制成浸膏、用水分散、用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，收集乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液而得，具有抗炎、抗溃疡的作用，药效作用优于美洲大蠊虫体提取物。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，特别是涉及一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物及其制备方法和在制备抗炎或抗溃疡产品中的应用。
背景技术
美洲大蠊(Periplaneta americana L.)为蜚镰科大镰属昆虫，其药用历史可追溯至《神农本草经》，目前已收录于《湖南省中药材标准》(2009年版)，具有健脾消疮、活血通脉、利水消肿、敛疮生肌的功效。近年来，研究人员开展了美洲大蠊化学成分、生物活性等研究，并开发了心脉隆注射液、康复新液、肝龙胶囊、消症益肝片等制剂，提升了美洲大蠊的药用价值。
在我国，以动物肠道菌群代谢产物即粪便入药有着悠久的历史。但是由于人们对粪便类中药在感官上接受困难，造成粪便类中药的应用受到较多限制，因此，目前美洲大蠊粪便仍被视为废弃物或仅用于肥料、饲料中。
胃溃疡是一种常见的消化道疾病，是由多种原因引起的胃黏膜屏障破坏以及胃酸、胃蛋白酶对胃黏膜的自我消化，其致病因素包括非甾体抗炎药物、酒精、条件应激、幽门螺杆菌等。炎症是具有血管***的生物机体应对损伤因子所发生的复杂的防御反应，临床表现为发炎部位发红、肿胀、发热和疼痛和功能障碍，并可能同时伴有不同程度的全身性反应。二者均为临床常见疾病。目前尚无将美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物用于制备抗溃疡或抗炎产品的相关报道。
发明内容
针对目前尚无将美洲大蠊肠道菌群代谢产物用于制备抗溃疡或抗炎产品的问题，本发明提供一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物的制备方法。
以及，本发明还提供一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物。
以及，本发明还提供一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物在制备抗炎或抗溃疡产品中的应用。
为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：
一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物的制备方法，将美洲大蠊粪便经过20～90％(v/v)乙醇水溶液回流提取，过滤，将所得滤液制成浸膏，再分散于水中制成分散液；依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取所述分散液，收集乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液，即得。
经实验证明，通过本发明上述制备方法得到的美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物对胃溃疡模型小鼠有显著的治疗作用，对二甲苯致小鼠耳廓肿胀具有显著的抑制作用，说明该制备方法所得美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物具有抗炎、抗溃疡的作用，可用于制备相应的产品，从而使美洲大蠊具有更高的药用附加值。
优选地，所述回流提取为提取1～3次，每次1～3h。
优选地，所述浸膏的制备方法为：在55～75℃条件下减压浓缩得到所述浸膏。该条件下浓缩能够回收全部乙醇。
优选地，所述石油醚为60～90℃石油醚。
优选地，所述萃取为分别用所述石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取3～5次，合并每种溶剂的萃取液。
优选地，所述水的质量为所述浸膏质量的3～10倍。
优选地，所述石油醚、乙酸乙酯和正丁醇的体积分别为所述水的体积的1～3倍。
优选地，该制备方法还包括将所述乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液浓缩、干燥，干燥后即得到乙酸乙酯部位和正丁醇部位，比萃取液更便于储存、使用以及进一步加工成制剂。
以及，本发明实施例还提供了所述一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物，由上述的美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物的制备方法制成。
以及，本发明实施例还提供上述美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物在制备抗炎、抗溃疡产品中的应用。
上述美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物具有抗炎、抗溃疡作用，可用于炎症、胃溃疡的预防与治疗，能够有效改善相应症状。
优选地，所述产品为药品。将上述美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物制成药品能够在临床用于患有炎症或胃溃疡的患者。药物的剂型包括但不限于片剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、口服液等。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。以下实施例中的美洲大蠊粪便样品取自云南腾药制药股份有限公司石头山美洲大蠊GAP养殖基地，其美洲大蠊的饲养条件严格按照GAP标准执行，饲料主要成分为豆类成分。
实施例1
本发明实施例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物，其制备方法为：以美洲大蠊粪便为原料，经粉碎后过20目筛，得到美洲大蠊粪便粗粉。称取1kg美洲大蠊粪便粗粉，加入5L 20％(v/v)乙醇水溶液，回流提取2次，每次提取1.5小时，滤过，滤液合并，在55℃条件下减压回收乙醇，得浸膏；按照质量比(m/m)向得到的浸膏中加入3倍量水，搅拌分散均匀，得分散液，再用分散液1倍体积的石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取分散液，每种溶剂萃取3次，分别合并各溶剂的萃取液，浓缩回收溶剂，干燥，分别得到总浸膏经有机溶剂萃取的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位，以及正丁醇萃取后余下的水溶性部位；收集乙酸乙酯部位和正丁醇部位，混合，得到78.26g提取物。
实施例2
本发明实施例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物，其制备方法为：以美洲大蠊粪便为原料，经粉碎后过20目筛，得到美洲大蠊粪便粗粉。称取1kg美洲大蠊粪便粗粉，加入8L 90％(v/v)乙醇水溶液，回流提取2次，每次提取1小时，滤过，滤液合并，在75℃条件下减压回收乙醇，得浸膏；按照质量比(m/m)向得到的浸膏中加入5倍量水，搅拌分散均匀，得分散液，再用分散液1.5倍体积的石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取分散液，每种溶剂萃取5次，分别合并各溶剂的萃取液，浓缩回收溶剂，干燥，分别得到总浸膏经有机溶剂萃取的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位，以及正丁醇萃取后余下的水溶性部位；收集乙酸乙酯部位和正丁醇部位，混合，得到53.28g提取物。
实施例3
本发明实施例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物，其制备方法为：以美洲大蠊粪便为原料，经粉碎后过20目筛，得到美洲大蠊粪便粗粉。称取1kg美洲大蠊粪便粗粉，加入12L 50％(v/v)乙醇水溶液，回流提取3次，每次提取2小时，滤过，滤液合并，在65℃条件下减压回收乙醇，得浸膏；按照质量比(m/m)向得到的浸膏中加入10倍量水，搅拌分散均匀，得分散液，再用分散液3倍体积的石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取分散液，每种溶剂萃取5次，分别合并各溶剂的萃取液，浓缩回收溶剂，干燥，分别得到总浸膏经有机溶剂萃取的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位，以及正丁醇萃取后余下的水溶性部位；收集乙酸乙酯部位和正丁醇部位，混合，得到65.05g提取物。
实施例4
本发明实施例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物，其制备方法为：以美洲大蠊粪便为原料，经粉碎后过20目筛，得到美洲大蠊粪便粗粉。称取1kg美洲大蠊粪便粗粉，加入10L 35％(v/v)乙醇水溶液，回流提取3次，每次提取1小时，滤过，滤液合并，在55℃条件下减压回收乙醇，得浸膏；按照质量比(m/m)向得到的浸膏中加入8倍量水，搅拌分散均匀，得分散液，再用分散液2倍体积的石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取分散液，每种溶剂萃取4次，分别合并各溶剂的萃取液，浓缩回收溶剂，干燥，分别得到总浸膏经有机溶剂萃取的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位，以及正丁醇萃取后余下的水溶性部位；收集乙酸乙酯部位和正丁醇部位，混合，得到73.56g提取物。
实施例5
本发明实施例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物，其制备方法为：以美洲大蠊粪便为原料，经粉碎后过20目筛，得到美洲大蠊粪便粗粉。称取1kg美洲大蠊粪便粗粉，加入20L 70％(v/v)乙醇水溶液，回流提取1次，提取3小时，滤过，滤液合并，在70℃条件下减压回收乙醇，得浸膏；按照质量比(m/m)向得到的浸膏中加入7倍量水，搅拌分散均匀，得分散液，再用分散液2.5倍体积的石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取分散液，每种溶剂萃取5次，分别合并各溶剂的萃取液，浓缩回收溶剂，干燥，分别得到总浸膏经有机溶剂萃取的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位，以及正丁醇萃取后余下的水溶性部位；收集乙酸乙酯部位和正丁醇部位，混合，得到58.85g提取物。
实施例6
本发明实施例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物，其制备方法为：以美洲大蠊粪便为原料，经粉碎后过20目筛，得到美洲大蠊粪便粗粉。称取1kg美洲大蠊粪便粗粉，加入15L 80％(v/v)乙醇水溶液，回流提取3次，每次提取1小时，滤过，滤液合并，在65℃条件下减压回收乙醇，得浸膏；按照质量比(m/m)向得到的浸膏中加入6倍量水，搅拌分散均匀，得分散液，再用分散液2倍体积的石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取分散液，每种溶剂萃取3次，分别合并各溶剂的萃取液，浓缩回收溶剂，干燥，分别得到总浸膏经有机溶剂萃取的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位，以及正丁醇萃取后余下的水溶性部位；收集乙酸乙酯部位和正丁醇部位，混合，得到60.37g提取物。
实施例7
本发明实施例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物在制备抗炎、抗溃疡药物中的应用。
制备方法为：将实施例1所得美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物粉碎后，与微晶纤维素、PVP、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压制成片，得到片剂。
实施例8
本发明实施例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物在制备抗炎、抗溃疡药物中的应用。
制备方法为：将实施例2所得美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物粉碎后加入气相二氧化硅、矫味剂，混合均匀，分装，得到散剂。
实施例9
本发明实施例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物在制备抗炎、抗溃疡药物中的应用。
制备方法为：将实施例3所得美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物与增稠剂、矫味剂、抗氧化剂等辅料混合，灭菌、分装，制成口服液。
实施例10
本发明实施例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物在制备抗炎、抗溃疡药物中的应用。
制备方法为：将实施例4所得美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物粉碎后，与糊精、淀粉浆混合制粒，整粒后加入滑石粉混合，灌4#硬胶囊壳，得到硬胶囊剂。
实施例11
本发明实施例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物在制备抗炎、抗溃疡药物中的应用。
制备方法为：将实施例5所得美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物粉碎后与大豆油混合并充分分散，密封于软质囊材中制成软胶囊。
实施例12
本发明实施例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物在制备抗炎、抗溃疡药物中的应用。
制备方法为：将实施例6所得美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物与微晶纤维素、糖粉、水制粒，整粒后加入硬脂酸镁混合，分装，制成颗粒剂。
对比例1
本对比例提供了一种美洲大蠊提取物，其制备方法以实施例3为基础，以美洲大蠊为原料，仅进行乙醇提取，具体操作为：以美洲大蠊为原料，经粉碎后过20目筛，得到美洲大蠊粗粉。称取1kg美洲大蠊粗粉，加入12L 50％(v/v)乙醇，回流提取3次，每次提取2小时，滤过，滤液合并，在65℃条件下减压回收乙醇制成浸膏，即得。
对比例2
本对比例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物，其制备方法以实施例3为基础，仅进行乙醇提取，具体操作为：以美洲大蠊粪便为原料，经粉碎后过20目筛，得到美洲大蠊粪便粗粉。称取1kg美洲大蠊粪便粗粉，加入12L 50％(v/v)乙醇，回流提取3次，每次提取2小时，滤过，滤液合并，在65℃条件下减压回收乙醇制成浸膏，即得。
对比例3
本对比例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物，其制备方法与实施例3相同，仅取乙酸乙酯部位。
对比例4
本对比例提供了一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物，其制备方法与实施例3相同，仅取正丁醇部位。
效果例1
本效果例提供了本发明中美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物对急性胃溃疡模型小鼠的药效学实验。
1、实验样品
本发明实施例3所得提取物；对比例1～4所得提取物。
2、实验方法
2.1动物模型建立及分组给药
清洁级雄性昆明种小鼠70只，体重20±2g，由中国医学科学院血液病医院提供，适应性饲养一周后，随机分为7组，每组10只，分别为：本发明实施例3样品组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组、模型组、空白组，各组均灌胃给药1周(各组给药剂量相同，均为100mg/kg)，空白组和模型组给予等体积0.5wt％的CMC-Na溶液。实验结束前将小鼠禁食24h，末次灌胃给药1.5h后，通过灌胃的方法注入无水乙醇(每只0.2mL)，造成急性胃溃疡模型，正常组给予同样剂量的生理盐水灌胃。禁食禁水1h后处死。测定相应的药效学指标。
2.2胃溃疡相关指标检测
取各组小鼠胃组织，游标卡尺测量胃充血或弥漫性出血条带的长、宽度，计算溃疡面积，并计算溃疡抑制率。
2.3统计方法
试验数据采用SPSS22.0统计软件进行统计分析，统计量用均值±标准差
表示，组间比较用单因素方差分析。
3、实验结果
各组小鼠溃疡面积和溃疡抑制率见表1。
表1各组小鼠溃疡面积和溃疡抑制率(
n＝10)
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
表1结果显示，对急性胃溃疡模型小鼠的治疗中，各组样品均有较好的治疗作用，与模型组比较，溃疡面积均有一定程度的较小，均呈现显著性差异(P<0.05或0.01)；各样品中，尤以本发明样品的抗溃疡作用最为显著，其溃疡面积为各组中最小，溃疡抑制率为58.52％，且显著优于其余各组。
效果例2
本效果例提供了本发明中美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀小鼠的药效学实验。
1、实验样品
本发明实施例3所得提取物；对比例1～4所得提取物。
2、实验方法
2.1动物模型建立及分组给药
清洁级雄性昆明种小鼠60只，体重20±2g，由中国医学科学院血液病医院提供，适应性饲养一周后，随机分为6组，每组10只，分别为：本发明实施例3样品组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组、模型组，各组均灌胃给药1周(各组给药剂量相同，均为100mg/kg)，空白组给予等体积0.5％的CMC-Na溶液。实验结束前将小鼠禁食24h，末次灌胃给药1h后，将二甲苯涂于小鼠右耳前后两面，每鼠0.1ml，左耳作对照。1h后处死动物，用8mm直径打孔器分别在两耳同一部位打下圆耳片，用电子天平称定质量。计算左、右耳片重量差值和肿胀抑制率。
2.2统计方法
试验数据采用SPSS22.0统计软件进行统计分析，统计量用均值±标准差
表示，组间比较用单因素方差分析。
3、实验结果
各组小鼠耳重差值和肿胀抑制率见表2。
表2、各组小鼠耳重差值和肿胀抑制率(
n＝10)
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
表2结果显示，在二甲苯致小鼠耳廓肿胀的急性炎症模型实验中，除对比例4组外，其余各组样品均有较好的治疗作用，与模型组比较，耳重差值明显减少，均呈现显著性差异(P<0.05或0.01)；各样品中，尤以本发明样品的抗炎作用最为显著，其耳重差值为各组中最小，炎症抑制率为55.69％，且显著优于其余各组。
综合以上药效学实验结果，本发明的提取物具有显著的抗炎、抗溃疡作用。本发明将醇提物中的乙酸乙酯部位与正丁醇部位混合使用，其抗炎、抗溃疡作用有了显著提升，具有明显的协同作用，药效作用优于美洲大蠊虫体提取物。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物的制备方法，其特征在于：将美洲大蠊粪便经过20～90％(v/v)乙醇水溶液回流提取，过滤，将所得滤液制成浸膏，再分散于水中制成分散液；依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取所述分散液，收集乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液，即得。
2.根据权利要求1所述的美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物的制备方法，其特征在于：所述回流提取为提取1～3次，每次1～3h。
3.根据权利要求1所述的美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物的制备方法，其特征在于：所述浸膏的制备方法为：在55～75℃条件下减压浓缩制成所述浸膏。
4.根据权利要求1所述的美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物的制备方法，其特征在于：所述石油醚为60～90℃石油醚。
5.根据权利要求1所述的美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物的制备方法，其特征在于：所述萃取为分别用所述石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取3～5次，合并每种溶剂的萃取液。
6.根据权利要求1所述的美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物的制备方法，其特征在于：所述水的质量为所述浸膏质量的3～10倍；和/或
所述石油醚、乙酸乙酯和正丁醇的体积分别为所述水的体积的1～3倍。
7.根据权利要求1～6任一项所述的美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括将所述乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液浓缩、干燥。
8.一种美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物，其特征在于，由权利要求1～7任一项所述的美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物的制备方法制成。
9.权利要求8所述的美洲大蠊肠道菌群代谢产物提取物在制备抗炎、抗溃疡产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，所述产品为药品。
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