CN111685227A - 一种益生菌饲料添加剂组合物及其制备方法和其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种益生菌饲料添加剂组合物的制备方法，包括如下步骤：(1)在发酵废液中加入酶剂后，经酶解制得酶解液，其中，所述的发酵废液中可溶性蛋白含量不低于1％，所述的发酵废液中游离氨基酸含量不低于0.05％；(2)在制得的酶解液中接种益生菌后进行发酵，即得益生菌饲料添加剂组合物。本发明将发酵废液中的大分子物质酶解为利于益生菌生长的小分子营养物质，通过益生菌发酵，制备成益生菌饲料添加剂组合物，实现了发酵废液的资源化利用。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种益生菌饲料添加剂组合物及其制备方法和其应用。
背景技术
益生菌是通过定殖在人体内或动物体内，改变宿主某一部位菌群，组成的一类对宿主有益的活性微生物。通过调节宿主黏膜与***免疫功能或通过调节肠道内菌群平衡，促进营养吸收保持肠道健康的作用，从而产生有利于健康作用的单微生物或组成明确的混合微生物。益生菌在动物体内的有益作用在于调整动物肠道菌群之间的生理平衡，通过提高益生菌的比例，降低肠道内腐败菌的异常增殖及致病菌的入侵和定植，从而减少或消除体内毒素的产生。因此常用作饲料添加剂。常见的益生菌饲料添加剂的制备方法，是将益生菌活菌接入培养基中，利用益生菌中的优质的单一或混合菌群，经培养得到高活性的益生菌发酵液，再利用真空冷冻干燥机制成活菌菌剂。但存在资源消耗量大、成本高等缺陷。为此，亟待寻找一种替代的益生菌饲料添加剂及其制备方法。
微生物发酵法多以葡萄糖为底物经微生物发酵生产目标产物，该方法具有生物基原料、高效率转化、反应温和、环保经济等优点，而被行业广泛运用。发酵液经除菌、除盐、除杂酸、浓缩等处理，制得目标产物的同时产生大量的发酵废液。发酵废液成分复杂，含有多种氨基酸、菌体、色素、破碎菌体、氨基杂酸、未完全反应的糖类原料、中间转化物质和未利用的培养基(如磷酸氢二铵、磷酸二氢钾、硫酸铵、七水硫酸镁、七水硫酸亚铁、维生素等)等物质，以及富含蛋白质和核酸等营养物质，还具有高化学需氧量(COD)和氨氮属性。已有技术将发酵废液经浓缩、干燥、破碎处理后，将其用作肥料基质、酵母发酵培养基或食用菌栽培原料，则存在利用价值低、产品附加值不高等缺陷。为此，如何提高发酵废液的综合利用效率，将其变废为宝、做好发酵中的三废处理、降低成本成为本领域急需解决的技术难题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种益生菌饲料添加剂组合物的制备方法，包括如下步骤：(1)在发酵废液加入酶剂后，经酶解制得酶解液，其中，所述的发酵废液中可溶性蛋白含量不低于1％，所述的发酵废液中游离氨基酸含量不低于0.05％；(2)在制得的酶解液中接种益生菌后进行发酵，即得益生菌饲料添加剂组合物。
本发明的优选技术方案中，所述的发酵废液中可溶性蛋白含量不低于2％。
本发明的优选技术方案中，所述的发酵废液中游离氨基酸含量不低于0.1％。
本发明的优选技术方案中，所述发酵废液在酶解前经灭菌、浓缩的前处理。
本发明的优选技术方案中，所述前处理的灭菌、浓缩步骤没有先后顺序。
本发明的优选技术方案中，所述灭菌选自化学灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述灭菌温度为60-100℃，优选为70-90℃，更优选为80-85℃。
本发明的优选技术方案中，所述灭菌时间为10-60分钟，优选为15-50分钟，更优选为20-40分钟。
本发明的优选技术方案中，所述浓缩选自真空浓缩、减压浓缩、薄膜浓缩、常压浓缩、膜浓缩的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述浓缩温度为40-90℃，优选为45-80℃，更优选为50-70℃，最优选为55-65℃。
本发明的优选技术方案中，所述膜浓缩选自超滤、纳滤、反渗透的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述浓缩将分离目标产物后收集的发酵废液浓缩10-40倍，优选为15-35倍，更优选为20-30倍。
本发明的优选技术方案中，所述发酵废液为从微生物发酵液中分离出目标产物后所得的废液，优选选自氨基酸发酵废液、玉米发酵废液、酒精发酵废液的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述氨基酸发酵废液为从微生物发酵液中分离出目标氨基酸后所得的废液，优选选自丙氨酸发酵废液、缬氨酸发酵废液、赖氨酸发酵废液、谷氨酸发酵废液、苯丙氨酸发酵废液、亮氨酸发酵废液、苏氨酸发酵废液、色氨酸发酵废液、蛋氨酸发酵废液、异亮氨酸发酵废液中的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述发酵废液中酶剂的添加量为0.5-10g/L，优选为1.5-9g/L，更优选为3.5-8g/L。
本发明的优选技术方案中，所述酶剂为复合酶，优选复合酶由溶菌酶和水解酶组成。
本发明的优选技术方案中，所述复合酶中溶菌酶：水解酶的质量比为0.5:1-5:1，优选为0.8:1-3:1，更优选为1:1-2:1。
本发明的优选技术方案中，将复合酶加入发酵废液时，组成复合酶的溶菌酶和水解酶选自同时加入、先后加入的任一种，优选为加入溶菌酶后再加入水解酶。
本发明的优选技术方案中，所述溶菌酶选自葡聚糖酶、几丁质酶、纤维素酶、果胶酶的任一种或其组合，优选为葡聚糖酶。
本发明的优选技术方案中，所述水解酶选自碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶的任一种或其组合，优选为碱性蛋白酶。
本发明的优选技术方案中，所述酶解反应pH6.5-9.0，优选pH7.0-8.5，更优选pH7.5-8.0。
本发明的优选技术方案中，所述酶解反应温度为40-60℃，优选为42-55℃，更优选为45-50℃。
本发明的优选技术方案中，所述酶解反应时间为5-20小时，优选为8-18小时，更优选为9-15小时。
本发明的优选技术方案中，所述接种益生菌为益生菌活菌数为10-100亿个/g的固态菌剂。
本发明的优选技术方案中，所述酶解液中接种益生菌的添加量为0.05-1g/L，优选为0.08-0.5g/L，更优选为0.1-0.3g/L。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌为乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌中的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述乳酸菌选自乳酸球菌、乳酸杆菌、双歧杆菌中的至少一种。
本发明的优选技术方案中，所述酵母菌为产朊假丝酵母或酿酒酵母。
本发明的优选技术方案中，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌为复合菌，优选复合由乳酸球菌、乳酸杆菌和双歧杆菌组成，更优选复合菌中乳酸球菌：乳酸杆菌：双歧杆菌的质量比为1-1：1-2：1-5，优选为1:1:2
本发明的优选技术方案中，所述益生菌为复合菌，优选复合菌由乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌组成，更优选复合菌中乳酸菌：酵母菌：芽孢杆菌的质量比为1-4:1-6:1-4，优选为2:3:2。
本发明的优选技术方案中，所述发酵温度为30-50℃，优选为35-45℃，更优选为37～44℃。
本发明的优选技术方案中，所述发酵时间为12-36小时，优选为18-30小时，更优选为20-24小时。
本发明的优选技术方案中，所述发酵pH为6.5-9.0，优选为6-8，更优选为6.5-7.0。
本发明的优选技术方案中，所述pH调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钙、氢氧化镁、生石灰(氧化钙)、盐酸、硫酸、氯酸、硝酸、氢溴酸、氢氟酸、磷酸、磺酸、苹果酸、富马酸、枸橼酸、羧酸、羟基酸、酮酸、醋酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、丙二酸、丁二酸、丙酮酸、谷氨酸、酒石酸、乳酸、衣康酸、抗坏血酸、延胡索酸、α-酮戊二酸、果酸的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述的pH调节剂为缓冲剂，优选所述缓冲剂选自柠檬酸、柠檬酸钾、柠檬酸钠、苹果酸、苹果酸钠、苹果酸钾、氢氧化钾、碳酸氢钠、氢氧化钠、碳酸钙、碳酸钠、磷酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、乳酸、乳酸钠、乳酸钾、丙酸、酒石酸、酒石酸钠、富马酸钠、酒石酸钾、富马酸钾、富马酸的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌饲料添加剂组合物中的益生菌活菌数不低于1.0亿个/ml，优选为不低于5.0亿个/ml。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌饲料添加剂组合物中的粗蛋白的干重百分含量不低于10％，优选为不低于12％。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌饲料添加剂组合物无异味。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌饲料添加剂组合物中不含黄曲霉毒素。
本发明的另一目的在于提供一种益生菌饲料添加剂组合物，所述组合物的制备方法包括下述步骤：(1)在发酵废液加入酶剂后，经酶解制得酶解液，其中，所述的发酵废液中可溶性蛋白含量不低于1％，所述的发酵废液中游离氨基酸含量不低于0.05％；(2)在制得的酶解液中接种益生菌后进行发酵，即得益生菌饲料添加剂组合物。
本发明的优选技术方案中，所述的发酵废液中可溶性蛋白含量不低于2％。
本发明的优选技术方案中，所述的发酵废液中游离氨基酸含量不低于0.1％。
本发明的优选技术方案中，所述发酵废液在酶解前经灭菌、浓缩的前处理。
本发明的优选技术方案中，所述前处理的灭菌、浓缩步骤没有先后顺序。
本发明的优选技术方案中，所述灭菌选自化学灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述灭菌温度为60-100℃，优选为70-90℃，更优选为80-85℃。
本发明的优选技术方案中，所述灭菌时间为10-60分钟，优选为15-50分钟，更优选为20-40分钟。
本发明的优选技术方案中，所述浓缩选自真空浓缩、减压浓缩、薄膜浓缩、常压浓缩、膜浓缩的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述浓缩温度为40-90℃，优选为45-80℃，更优选为50-70℃，最优选为55-65℃。
本发明的优选技术方案中，所述膜浓缩选自超滤、纳滤、反渗透的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述浓缩将分离目标产物后收集的发酵废液浓缩10-40倍，优选为15-35倍，更优选为20-30倍。
本发明的优选技术方案中，所述发酵废液为从微生物发酵液中分离出目标产物后所得的废液，优选为氨基酸发酵废液、玉米发酵废液、酒精发酵废液的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述氨基酸发酵废液为从微生物发酵液中分离出目标氨基酸后所得的废液，优选为丙氨酸发酵废液、缬氨酸发酵废液、赖氨酸发酵废液、谷氨酸发酵废液、苯丙氨酸发酵废液、亮氨酸发酵废液、苏氨酸发酵废液、色氨酸发酵废液、蛋氨酸发酵废液、异亮氨酸发酵废液中的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述发酵废液中酶剂的添加量为0.5-10g/L，优选为1.5-9g/L，更优选为3.5-8g/L。
本发明的优选技术方案中，所述酶剂为复合酶，优选复合酶由溶菌酶和水解酶组成。
本发明的优选技术方案中，所述复合酶中溶菌酶：水解酶的质量比为0.5:1-5:1，优选为0.8:1-3:1，更优选为1:1-2:1。
本发明的优选技术方案中，将复合酶加入发酵废液时，组成复合酶的溶菌酶和水解酶选自同时加入、先后加入的任一种，优选为加入溶酶菌后再加入水解酶。
本发明的优选技术方案中，所述溶菌酶选自葡聚糖酶、几丁质酶、纤维素酶、果胶酶的任一种或其组合，优选为葡聚糖酶。
本发明的优选技术方案中，所述水解酶选自碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶的任一种或其组合，优选为碱性蛋白酶。
本发明的优选技术方案中，所述酶解反应pH6.5-9.0，优选pH7.0-8.5，更优选pH7.5-8.0。
本发明的优选技术方案中，所述酶解反应温度为40-60℃，优选为42-55℃，更优选为45-50℃。
本发明的优选技术方案中，所述酶解反应时间为5-20小时，优选为8-18小时，更优选为9-15小时。
本发明的优选技术方案中，所述接种益生菌为益生菌活菌数为10-100亿个/g的固态菌剂。
本发明的优选技术方案中，所述酶解液中接种益生菌的添加量为0.05-1g/L，优选为0.08-0.5g/L，更优选为0.1-0.3g/L。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌为乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌中的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述乳酸菌选自乳酸球菌、乳酸杆菌、双歧杆菌中的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述酵母菌为产朊假丝酵母或酿酒酵母。
本发明的优选技术方案中，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌为复合菌，优选复合由乳酸球菌、乳酸杆菌和双歧杆菌组成，更优选复合菌中乳酸球菌：乳酸杆菌：双歧杆菌的质量比为1-1：1-2：1-5，优选为1:1:2
本发明的优选技术方案中，所述益生菌为复合菌，优选复合菌由乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌组成，更优选复合菌中乳酸菌：酵母菌：芽孢杆菌的质量比为1-4:1-6:1-4，优选为2:3:2。
本发明的优选技术方案中，所述发酵温度为30-50℃，优选为35-45℃，更优选为37-44℃。
本发明的优选技术方案中，所述发酵时间为12-36小时，优选为18-30小时，更优选为20-24小时。
本发明的优选技术方案中，所述发酵pH为6.5-9.0，优选为6-8，更优选为6.5-7.0。
本发明的优选技术方案中，所述pH调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钙、氢氧化镁、生石灰(氧化钙)、盐酸、硫酸、氯酸、硝酸、氢溴酸、氢氟酸、磷酸、磺酸、苹果酸、富马酸、枸橼酸、羧酸、羟基酸、酮酸、醋酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、丙二酸、丁二酸、丙酮酸、谷氨酸、酒石酸、乳酸、衣康酸、抗坏血酸、延胡索酸、α-酮戊二酸、果酸的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述的pH调节剂为缓冲剂，优选所述缓冲剂选自柠檬酸、柠檬酸钾、柠檬酸钠、苹果酸、苹果酸钠、苹果酸钾、氢氧化钾、碳酸氢钠、氢氧化钠、碳酸钙、碳酸钠、磷酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、乳酸、乳酸钠、乳酸钾、丙酸、酒石酸、酒石酸钠、富马酸钠、酒石酸钾、富马酸钾、富马酸的任一种或其组合。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌饲料添加剂组合物中的益生菌活菌数不低于1.0亿个/ml，优选为不低于5.0亿个/ml。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌饲料添加剂组合物中的粗蛋白的干重百分含量不低于10％，优选为不低于12％。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌饲料添加剂组合物无异味。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌饲料添加剂组合物中不含黄曲霉毒素。
本发明的另一目的在于提供本发明的益生菌饲料添加剂用于制备益生菌发酵饲料中的应用。
本发明的另一目的在于提供一种益生菌发酵饲料，所述益生菌发酵饲料由基础日粮85％-99.95％和益生菌饲料添加剂组合物0.05％-15％组成。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌发酵饲料中的益生菌饲料添加剂组合物的量为0.1％-10％，优选为1％-5％。
本发明优选的技术方案中，所述的基础日粮选自鸡基础日粮、鸭基础日粮、鹅基础日粮、猪基础日粮、牛基础日粮、马基础日粮、驴基础日粮、猫基础日粮、狗基础日粮、鱼基础日粮、兔基础日粮、羊基础日粮中的任一种。
本发明优选的技术方案中，所述的益生菌发酵饲料选自鸡益生菌发酵饲料、鸭益生菌发酵饲料、鹅益生菌发酵饲料、猪益生菌发酵饲料、牛益生菌发酵饲料、马益生菌发酵饲料、驴益生菌发酵饲料、猫益生菌发酵饲料、狗益生菌发酵饲料、鱼益生菌发酵饲料、兔益生菌发酵饲料、羊益生菌发酵饲料中的任一种。
本发明的另一目的在于提供一种益生菌发酵饲料的制备方法，包括下述步骤：称取所需量的本发明制得的益生菌饲料添加剂组合物和基础日粮，将其充分混匀，即得，其中，所述益生菌发酵饲料由基础日粮85％-99.95％和益生菌饲料添加剂组合物0.05％-15％组成。
本发明的优选技术方案中，所述益生菌发酵饲料中的益生菌饲料添加剂组合物的量为0.1％-10％，优选为1％-5％。
本发明优选的技术方案中，所述的基础日粮选自鸡基础日粮、鸭基础日粮、鹅基础日粮、猪基础日粮、牛基础日粮、马基础日粮、驴基础日粮、猫基础日粮、狗基础日粮、鱼基础日粮、兔基础日粮、羊基础日粮中的任一种。
本发明优选的技术方案中，所述的益生菌发酵饲料选自鸡益生菌发酵饲料、鸭益生菌发酵饲料、鹅益生菌发酵饲料、猪益生菌发酵饲料、牛益生菌发酵饲料、马益生菌发酵饲料、驴益生菌发酵饲料、猫益生菌发酵饲料、狗益生菌发酵饲料、鱼益生菌发酵饲料、兔益生菌发酵饲料、羊益生菌发酵饲料中的任一种。
除非另有说明，本发明涉及液体与液体之间的百分比时，所述的百分比为体积/体积百分比；本发明涉及液体与固体之间的百分比时，所述百分比为体积/重量百分比；本发明涉及固体与液体之间的百分比时，所述百分比为重量/体积百分比；其余为重量/重量百分比。
除非另有说明，本发明按照下述方法检测可溶性蛋白含量、游离氨基酸含量、乳酸含量、益生菌活菌数量、粗蛋白干重百分含量、黄曲霉毒素和气味：
1、可溶性蛋白含量测定：按照进出口行业标准《SN/T 3926-2014出口乳、蛋、豆类食品中蛋白质含量的测定考马斯亮蓝法》测定。
2、游离氨基酸含量测定：按照农业标准《NY/T 1975-2010水溶肥料游离氨基酸含量的测定》测定。
3、乳酸含量测定：按照进出口行业标准《SN/T 1511.1-2005进出口果汁中乳酸含量检验方法》测定。
4、乳酸菌活菌数量测定：按照《GB4789.35-2016食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》测定。
5、枯草芽孢杆菌数量测定：按照《GB/T 26428-2016饲料生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测》测定。
6、酵母菌数量测定：按照《GB 4789.15-2016食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》测定。
7、粗蛋白干重百分含量测定：按照国家标准《GB/T 18868-2002饲料中水分、粗蛋白质、粗纤维、粗脂肪、赖氨酸、蛋氨酸快速测定近红外光谱法》测定。
8、黄曲霉毒素测定：按照农业标准《NY/T 2071-2011饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定液相色谱-串联质谱法》测定。
9、气味检测：人为感官测定。
与现有技术相比，本发明具有下述有益技术效果：
1、本发明制得的益生菌饲料添加剂组合物将发酵废液中的大分子物质酶解为利于益生菌生长的小分子营养物质，再将其通过益生菌发酵，制得的益生菌饲料添加剂组合物用于制备益生菌饲料，实现了发酵废液和资源的循环利用，明显改善动物肠道功能并提高动物生长性能，避免三废处理带来的生成成本增高。
2、本发明的制备方法具有操作简便，显著缩短生产周期，进而显著降低生产成本，适合于大规模工业化生产。
附图说明
图1对比例2(不使用酶剂)和实施例4(使用酶剂)的乳酸含量对比
图2对比例2(不使用酶剂)和实施例4(使用酶剂)的乳酸菌活菌数量对比
图3对比例2(不使用酶剂)和实施例4(使用酶剂)的粗蛋白干重百分含量对比
图4对比例3(不使用酶剂)和实施例6(使用酶剂)的益生菌活菌数量对比
图5对比例3(不使用酶剂)和实施例6(使用酶剂)的粗蛋白干重百分含量对比
具体实施方式
以下参照实施例说明本发明，但本发明不局限于实施例。
具体实施方式中使用的葡聚糖酶、碱性蛋白酶、几丁质酶、纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶购买自东恒华道生物科技有限公司。使用的乳酸球菌、乳酸杆菌、双歧杆菌购买自江苏远山生物技术有限公司。
对比例1和实施例1-3
取0.1m3L-缬氨酸发酵废液，在80℃条件下灭菌20min，超滤膜浓缩10倍后，将其均分成四等份，将其用于对比例1和实施例1-3(见表1)。
对比例1中不加酶剂。实施例1-3中，先添加3g/L的溶菌酶，控制酶解温度40℃，pH为6.5，搅拌反应10h后，再添加3g/L的水解酶，控制酶解温度45℃，pH为7，继续搅拌反应10h，制得酶解液。溶菌酶和水解酶的选择详见表1。
检测酶解液中的可溶性蛋白和游离氨基酸含量。结果见表1。
表1添加不同酶剂后酶解液中可溶性蛋白和游离氨基酸含量对比
对比例2乳酸菌发酵实验
按照乳酸球菌：乳酸杆菌：双歧杆菌的质量比为1：1：2配制乳酸菌复合菌。再按照0.1g/L将乳酸菌复合菌剂接入到对比例1的酶解液中，搅拌，调节酶解液pH为6.5，在37℃条件下自然发酵24小时，得到乳酸菌饲料添加剂组合物。
实施例4乳酸菌发酵实验
按照乳酸球菌：乳酸杆菌：双歧杆菌的质量比为1：1：2配制乳酸菌复合菌。再按照0.1g/L将乳酸菌复合菌剂接入到实施例1的酶解液中，搅拌，调节酶解液pH为6.5，在37℃条件下自然发酵24小时，得到乳酸菌饲料添加剂组合物。
按照本发明所述的方法检测对比例2(不使用酶剂)和实施例4(使用酶剂)发酵所得的乳酸菌饲料添加剂组合物中的乳酸含量、乳酸菌活菌菌落数、粗蛋白含量、黄曲霉毒素和气味。结果见图1-3。从发酵第12小时开始，对比例2出现了异味，随着时间延长异味愈加浓烈，且终产品检出了黄曲霉毒素。实施例4发酵全程无异味，终产品未检出无黄曲霉毒素。
实施例5乳酸菌发酵饲料的制备
根据《T/CFIAS 001-2018仔猪、生长育肥猪配合饲料》标准，配置仔猪基础日粮为：玉米70.24％，豆粕20.00％，玉米蛋白粉1.58％，鱼粉2.60％，豆油1.10％，磷酸二氢钙1.50％，石粉1.30％，食盐0.30％，L-赖氨酸0.30％，蛋氨酸0.18％，苏氨酸0.15％，三氧化二铬0.25％和基础日粮预混料0.50％。
将实施例4制备的乳酸菌饲料添加剂，按0.5％的添加量添加到仔猪基础日粮中，搅拌混匀，即得乳酸菌发酵饲料。
按照本发明所述的方法检测乳酸菌发酵饲料中乳酸菌活菌数大于5亿个/ml。将上述乳酸菌发酵饲料用于仔猪喂养，仔猪生长性能得到显著提升。
对比例3益生菌复合菌发酵实验
按照乳酸菌：酵母菌：芽孢杆菌的质量比为2：3：2配制益生菌复合菌。再按照0.1g/L将益生菌复合菌剂接入到对比例1的酶解液中，搅拌，调节酶解液pH为6.5，在37℃条件下自然发酵24小时，得到益生菌饲料添加剂组合物。
实施例6益生菌复合菌发酵实验
按照乳酸菌：酵母菌：芽孢杆菌的质量比为2：3：2配制益生菌复合菌。再按照0.1g/L将益生菌复合菌剂接入到实施例1的酶解液中，搅拌，调节酶解液pH为6.5，在37℃条件下自然发酵24小时，得到益生菌饲料添加剂组合物。
按照本发明所述的方法检测对比例3(不使用酶剂)和实施例6(使用酶剂)发酵所得的益生菌饲料添加剂组合物中的益生菌活菌菌落数、粗蛋白含量、黄曲霉毒素和气味。结果见图4-5。从发酵第12小时开始，对比例3出现了异味，随着时间延长异味愈加浓烈，且终产品检出了黄曲霉毒素。实施例6发酵全程无异味，终产品未检出无黄曲霉毒素。
实施例7益生菌发酵饲料的制备
根据《T/CFIAS 001-2018仔猪、生长育肥猪配合饲料》标准，配置仔猪基础日粮为：玉米74.49％，豆粕16.00％，玉米蛋白粉0.96％，鱼粉2.30％，豆油2.00％，磷酸二氢钙1.50％，石粉1.10％，食盐0.30％，L-赖氨酸0.32％，蛋氨酸0.09％，苏氨酸0.17％，色氨酸0.02％，三氧化二铬0.25％和基础日粮预混料0.50％。
将实施例6制备的益生菌饲料添加剂，按0.5％的添加量添加到仔猪基础日粮中，搅拌混匀，即得益生菌发酵饲料。
按照本发明所述的方法检测益生菌发酵饲料中益生菌活菌数大于5亿个/ml。将上述益生菌发酵饲料用于仔猪喂养，仔猪生长性能得到显著提升。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明权利要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种益生菌饲料添加剂组合物的制备方法，包括如下步骤：(1)在发酵废液加入酶剂后，经酶解制得酶解液，其中，所述的发酵废液中可溶性蛋白含量不低于1％，所述的发酵废液中游离氨基酸含量不低于0.05％；(2)在制得的酶解液中接种益生菌后进行发酵，即得益生菌饲料添加剂组合物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵废液中酶剂的添加量为0.5-10g/L，优选为1.5-9g/L，更优选为3.5-8g/L，所述酶剂为复合酶，优选复合酶由溶菌酶和水解酶组成，所述复合酶中溶菌酶：水解酶的质量比为0.5:1-5:1，优选为0.8:1-3:1，更优选为1:1-2:1。
3.如权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于，所述酶解反应pH 6.5-9.0，优选pH7.0-8.5，更优选pH 7.5-8.0。
4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述酶解反应温度为40-60℃，优选为42-55℃，更优选为45-50℃。
5.如权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述益生菌为乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌中的任一种或其组合。
6.如权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述益生菌饲料添加剂组合物中的益生菌活菌数不低于1.0亿个/ml，优选为不低于5.0亿个/ml。
7.如权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，所述益生菌饲料添加剂组合物中粗蛋白的干重百分含量不低于10％，优选为不低于12％。
8.如权利要求1-7所述的方法制备的益生菌饲料添加剂组合物。
9.如权利要求1-8任一项所述的益生菌饲料添加剂组合物用于制备益生菌发酵饲料中的应用。
10.一种益生菌发酵饲料，其特征在于，所述饲料由基础日粮85％-99.95％和如权利要求9所述的益生菌饲料添加剂组合物0.05％-15％组成。
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