CN111662382A - 特异结合cd3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用 - Google Patents

特异结合cd3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111662382A
CN111662382A CN201910166027.0A CN201910166027A CN111662382A CN 111662382 A CN111662382 A CN 111662382A CN 201910166027 A CN201910166027 A CN 201910166027A CN 111662382 A CN111662382 A CN 111662382A
Authority
CN
China
Prior art keywords
heavy chain
light chain
gene sequence
variable region
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910166027.0A
Other languages
English (en)
Inventor
张鹏
李艳
崔文俊
郜鹏
高位相
郭树华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Reyoung Suzhou Biology Science & Technology Co ltd
Original Assignee
Reyoung Suzhou Biology Science & Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Reyoung Suzhou Biology Science & Technology Co ltd filed Critical Reyoung Suzhou Biology Science & Technology Co ltd
Priority to CN201910166027.0A priority Critical patent/CN111662382A/zh
Publication of CN111662382A publication Critical patent/CN111662382A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种特异结合CD3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用。该抗体包括重链和轻链，重链可变区具有重链构架区和三个重链互补区，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQ ID No.24‑29，该重链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列；轻链可变区具有轻链框架区和三个轻链互补区，三个轻链互补区的氨基酸序列如SEQ ID No.21‑23所示，该轻链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列。该抗体具有优异的CD3结合性能，良好的表达稳定性；经过人源化改造，具有较低的免疫副作用。

Description

特异结合CD3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及 其应用
技术领域
本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种特异结合CD3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用。
背景技术
CD3蛋白是一种在T细胞上广泛存在的白细胞分化抗原，由γ、δ、ε、ζ和η五种肽链组成，其与T细胞受体(TCR)以非共价键的形式结合成TCR-CD3复合物(Matthew E.Call，Jason Pyrdol，Martin Wiedmann，Kai W.Wucherpfennig，2002，The OrganizingPrinciple in the Formation of the T Cell Receptor-CD3 Complex，Cell)。CD3具有稳定TCR-CD3复合物的作用，并且可以传递TCR特异性识别抗原的信号，促进T细胞的增殖与活化。
而抗CD3抗体可引起TCR-CD3复合物的构象改变，在不需要第二信号的参与下即可直接产生T细胞活化信号，即通过CD3途径使用单克隆抗体可以有效地激活T细胞的增殖及活化，并因此释放细胞因子如TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-3和GM-CSF等，释放的这些细胞因子在肿瘤杀伤方面发挥着重要的作用，因此抗CD3单克隆抗体在20世纪90年代就被用于CIK细胞治疗。
OKT3(Orthoclone OKT3)，商品名为Muromonab，是世界上第一个上市用于疾病治疗的鼠源单克隆抗体药物。OKT3与T细胞表面的CD3蛋白结合会导致T细胞的活化和细胞因子的释放(Lars Kjer-Nielsen,Michelle A.Dunstone,Lyudmila Kostenko,LaurenK.Ely,Travis Beddoe,Nicole A.Mifsud,Anthony W.Purcell,Andrew G.Brooks,JamesMcCluskey,amie Rossjohn,2004,Crystal structure of the human T cell receptorCD3εγheterodimer complexed to the therapeutic mAb OKT3,PNAS)。但OKT3是来源于小鼠的单克隆抗体，直接用于人类的疾病治疗会产生比较强的人抗鼠抗体(human anti-mouse antibody，HAMA)，在治疗过程中这种副作用也会变得越来越大，对OKT3抗体进行人源化改造变得十分必要。
发明内容
本申请的发明目的是提供一种特异结合CD3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用。
为实现上述发明目的，本申请的技术方案如下：
一种特异结合CD3的抗体，包括重链和轻链，重链可变区具有重链构架区(Framework，FR)和三个重链互补区(complementarity-determining region，CDR)，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQ ID No.24-29，该重链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列；
轻链可变区具有轻链框架区和三个轻链互补区，三个轻链互补区的氨基酸序列如SEQ ID No.21-23所示，该轻链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列。
本申请以人源抗体为模板，将鼠源抗CD3抗体的CDR区移植到人源抗体上，并对移植后抗体氨基酸序列中特定位置的氨基酸位点进行突变，以确保移植后抗CD3抗体能够保持正确的空间构型，最终获得本申请的人CD3特异性抗体。实证研究发现，本申请的人CD3特异性抗体能够与Jurkat细胞有效结合，表明其具有优异的结合CD3蛋白的性能；人源化后抗体的免疫副作用会大大降低，稳定性增强，大大扩大了抗体的应用范围。
在上述的特异结合CD3的抗体中，所述的重链构架区有四个，四个重链构架区的氨基酸序列选自SEQ ID No.1-6。
在上述的特异结合CD3的抗体中，所述的轻链构架区有四个，四个轻链构架区的氨基酸序列选自SEQ ID No.7-20。
在上述的特异结合CD3的抗体中，重链可变区具有如SEQID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.6所示的重链框架区，以及如SEQ ID No.24、SEQ ID No.25和SEQID No.26所示的重链互补区。
在上述的特异结合CD3的抗体中，轻链可变区具有如SEQ ID No.9、SEQ ID No.13、SEQ ID No.19和SEQ ID No.20所示的轻链框架区，以及如SEQ ID No.21、SEQ ID No.22和SEQ ID No.23所示的轻链互补区。
本申请中，该特异结合CD3的抗体的抗体亚型为IgG1、IgG2或IgG4。
在上述的特异结合CD3的抗体中，重链中，铰链区、重链恒定区2和重链恒定区3的氨基酸序列如SEQ ID No.32所示。
在上述的特异结合CD3的抗体中，重链中，重链恒定区1的氨基酸序列如SEQ IDNo.30所示，轻链中，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.31所示。
基于特异结合CD3的抗体与人CD3蛋白的特异性结合能力，本申请提供了所述的特异结合CD3的抗体在制备肿瘤治疗药物中的应用，所述的肿瘤治疗药物用于治疗胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、膀胱癌，***癌、***、卵巢癌、输卵管癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、神经胶质瘤或骨肉瘤。
在用于制备肿瘤治疗药物时，本申请的特异结合CD3的抗体可以单独使用，也可以与其他药物联用；并且，优选以注射制剂的形式给药。
一种特异结合CD3的抗原结合片段，包括通过链间二硫键相连的重链恒定区1和轻链恒定区，该重链恒定区1与重链可变区相连，该轻链恒定区与轻链可变区相连，所述的重链可变区具有重链构架区和三个重链互补区，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQ IDNo.24-29，该重链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列；
所述的轻链可变区具有轻链构架区和三个轻链互补区，三个轻链互补区的氨基酸序列如SEQ ID No.21-23所示，该轻链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列。
在上述的特异结合CD3的抗原结合片段中，所述的重链构架区有四个，四个重链构架区的氨基酸序列选自SEQ ID No.1-6；所述的轻链构架区有四个，四个轻链构架区的氨基酸序列选自SEQ ID No.7-20。
在上述的特异结合CD3的抗原结合片段中，所述的重链可变区具有如SEQID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.6所示的重链框架区，以及如SEQ ID No.24、SEQID No.25和SEQ ID No.26所示的重链互补区；
所述的轻链可变区具有如SEQ ID No.9、SEQ ID No.13、SEQ ID No.19和SEQ IDNo.20所示的轻链框架区，以及如SEQ ID No.21、SEQ ID No.22和SEQ ID No.23所示的轻链互补区。
在上述的特异结合CD3的抗原结合片段中，所述的重链恒定区1的氨基酸序列如SEQ ID No.30所示，所述的轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.31所示。
一种特异结合CD3的单链抗体可变区片段，包括通过-(GGGGS)3-短肽相连的重链可变区和轻链可变区，所述的重链可变区具有重链构架区和三个重链互补区，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQ ID No.24-29，该重链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列；
所述的轻链可变区具有轻链构架区和三个轻链互补区，三个轻链互补区的氨基酸序列如SEQ ID No.21-23所示，该轻链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列。
在上述的特异结合CD3的单链抗体可变区片段中，所述的重链构架区有四个，四个重链构架区的氨基酸序列选自SEQ ID No.1-6；所述的轻链构架区有四个，四个轻链构架区的氨基酸序列选自SEQ ID No.7-20。
在上述的特异结合CD3的单链抗体可变区片段中，所述的重链可变区具有如SEQIDNo.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.6所示的重链框架区，以及如SEQ ID No.24、SEQ ID No.25和SEQ ID No.26所示的重链互补区；
所述的轻链可变区具有如SEQ ID No.9、SEQ ID No.13、SEQ ID No.19和SEQ IDNo.20所示的轻链框架区，以及如SEQ ID No.21、SEQ ID No.22和SEQ ID No.23所示的轻链互补区。
本申请还提供了一种编码所述的特异结合CD3的抗体的核酸分子；编码所述的特异结合CD3的抗原结合片段的核酸分子；以及编码所述的单链抗体可变区片段的核酸分子。
本申请还提供了所述的特异结合CD3的抗原结合片段或所述的链抗体可变区片段在构建双特异性抗体中的应用。所述的双特异抗体具有能够特异结合CD3的结合臂，因此也能够用于制备肿瘤治疗药物，所述的肿瘤治疗药物用于治疗胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、膀胱癌，***癌、***、卵巢癌、输卵管癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、神经胶质瘤或骨肉瘤。
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
本申请以人源抗体为模板，将鼠源抗CD3抗体的CDR区移植到人源抗体上，并对移植后抗体氨基酸序列中特定位置的氨基酸位点进行突变，以确保移植后抗CD3抗体能够保持正确的空间构型，最终获得本申请的人CD3特异性抗体。实证研究发现，本申请的人CD3特异性抗体能够与Jurkat细胞有效结合，表明其具有优异的结合CD3蛋白的性能；人源化后抗体的免疫副作用会大大降低，稳定性增强，大大扩大了抗体的应用范围。
附图说明
图1为抗CD3抗体重链或轻链可变区组成示意图；
图2为完整抗CD3抗体的组成示意图；
图3为抗CD3抗体的抗原结合片段的组成示意图；
图4为抗CD3抗体的单链抗体可变区片段组成示意图；
图5为阴性对照(PBS)结合Jurkat细胞的FACS结果；其中，count表示(细胞)计数，下同；
图6a-图6i分别为A-I组轻重链组合获得的抗CD3抗体上清结合Jurkat细胞的FACS结果。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案做进一步详细说明。
实施例1
(1)鼠源CD3抗体的分子改造
以鼠源CD3抗体OKT3为参照，在NCBI网站上进行氨基酸序列比对，筛选与CKT3氨基酸序列具有较高同源性的人源CD3抗体。根据比对结果，选择抗体重链以IGHV1-46为模板，抗体轻链选择IGKV3-11或IGKV1-39为模板进行CDR移植，然后如表1所示选择氨基酸位点进行突变设计。
表1氨基酸突变位点设计
Figure BDA0001986285630000071
(2)抗CD3抗体的分子构建
根据上述设计方案获得的氨基酸序列，按照HEK293F细胞的转录偏好对氨基酸密码子进行优化，委托苏州泓迅生物科技有限公司分别合成抗体完整重链和抗体完整轻链(包括可变区和恒定区)的编码基因，并以pTT5载体进行表达载体的构建，将表达载体转入大肠杆菌中，确认正确转染和稳定表达后进行菌体保存。
其中，抗体重链或轻链可变区的组成均如图1所示，包含四个FR区和三个CDR区；获得的完整抗CD3抗体的结构如图2所示。
除了合成如图2所示的完整抗CD3抗体分子，还可以将抗体的重链可变区连接重链恒定区1、将轻链可变区连接轻链恒定区，再利用链间二硫键连接重链恒定区1和轻链恒定区，形成如图3所示的抗原结合片段(fragment of antigen binding，Fab)使用；或者直接通过-(GGGGS)3-短肽连接重链可变区和轻链可变区，形成如图4所示的单链抗体可变区片段(single-chain variable fragment，scFv)使用。
(3)载体质粒的提取及抗体表达
将保存的菌体接种到灭菌的LB培养基中，在LB培养基加入终浓度为100ug/ml的氨苄青霉素，于37℃，220rpm下过夜培养；离心菌液，收集菌体，用AxyPrep质粒小量制备试剂盒参照使用说明书抽提对应的载体质粒；培养HEK293F细胞，培养过程中对HEK293F细胞进行计数，选择细胞数量为2.0×106/ml的时期进行质粒转染；用PEI试剂进行质粒转染(将载有抗体重链编码基因的质粒和载有抗体轻链编码基因的质粒随机组合，进行质粒转染)，此次组合表达共9组，编号依次为A、B、C、D、E、F、G、H、I，其轻重链对应的序列信息如下表所示。转染后于37℃，6％CO2下摇床培养5天；离心收集上清，放置于4℃冰箱备用。
表2组合表达后各抗CD3抗体的重链和轻链序列信息
Figure BDA0001986285630000081
Figure BDA0001986285630000091
(注：SEQ ID No.1-32为氨基酸序列，其对应的核苷酸序列依次如SEQ ID No.33-64所示。)
实施例2 Jurkat细胞结合实验
在RPMI 1640细胞基础培养基中加入10％牛血清和1×青霉素/链霉素，于37℃，5％CO2下培养Jurkat细胞，Jurkat细胞每三天传代一次，收集总量为1×107的Jurkat细胞；用含1％BSA的PBS溶液洗涤Jurkat细胞2-3次，稀释Jurkat细胞密度为4×105/ml，将细胞铺于96孔细胞培养板中，离心后弃去上清，每孔加入100μl实施例1中收集的培养液上清后，置于4℃下孵育40min；同时，选取部分孔加入PBS作为阴性对照；离心后弃去上清，每孔加入100μl Goat anti-Human IgG Fc Secondary Antibody(该荧光二抗稀释比例为1:300)、FITC(Thermofisher，货号H10001C)，置于4℃下孵育40分钟；离心后弃去上清，用含1％BSA的PBS溶液重悬细胞，每孔重悬的体积为100μl。
用Attune NxT Flow Cytometer仪器进行检测，通过直方图的偏移结果判断表达上清与Jurkat细胞的结合情况。如图5和图6所示，根据检测结果，与阴性对照PBS相比，组合表达的抗CD3抗体A、B、C、D、E、F均能够与Jurkat细胞结合。
序列表
<110> 瑞阳（苏州）生物科技有限公司
<120> 特异结合CD3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用
<160> 32
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 2
<211> 14
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 2
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 3
<211> 32
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 3
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 4
<211> 32
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 4
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 5
<211> 32
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 5
Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 6
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 7
<211> 23
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 7
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 8
<211> 23
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 9
<211> 23
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 9
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 10
<211> 15
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 10
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 11
<211> 15
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 11
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Arg Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 12
<211> 15
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 12
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 13
<211> 15
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 13
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 14
<211> 32
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 14
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 15
<211> 32
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 15
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 16
<211> 32
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 16
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 17
<211> 32
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 17
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 18
<211> 32
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 18
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 19
<211> 32
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 19
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 20
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 21
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠( Mus musculus)
<400> 21
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn
1 5 10
<210> 22
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠( Mus musculus)
<400> 22
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 23
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠( Mus musculus)
<400> 23
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
1 5
<210> 24
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠( Mus musculus)
<400> 24
Arg Tyr Thr Met His
1 5
<210> 25
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠( Mus musculus)
<400> 25
Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 26
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠( Mus musculus)
<400> 26
Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 27
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠( Mus musculus)
<400> 27
Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠( Mus musculus)
<400> 28
Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Tyr Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 29
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠( Mus musculus)
<400> 29
Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Gly Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 30
<211> 103
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 30
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
100
<210> 31
<211> 107
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 31
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 32
<211> 107
<212> PRT
<213> 人( Homo sapiens)
<400> 32
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105

Claims (10)

1.一种特异结合CD3的抗体，包括重链和轻链，其特征在于，重链可变区具有重链构架区和三个重链互补区，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQ ID No.24-29，该重链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列；
轻链可变区具有轻链框架区和三个轻链互补区，三个轻链互补区的氨基酸序列如SEQID No.21-23所示，该轻链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列。
2.如权利要求1所述的特异结合CD3的抗体，其特征在于，所述的重链构架区有四个，四个重链构架区的氨基酸序列选自SEQ ID No.1-6。
3.如权利要求1所述的特异结合CD3的抗体，其特征在于，所述的轻链构架区有四个，四个轻链构架区的氨基酸序列选自SEQ ID No.7-20。
4.一种特异结合CD3的抗原结合片段，包括通过链间二硫键相连的重链恒定区1和轻链恒定区，该重链恒定区1与重链可变区相连，该轻链恒定区与轻链可变区相连，其特征在于，所述的重链可变区具有重链构架区和三个重链互补区，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQ ID No.24-29，该重链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列；
所述的轻链可变区具有轻链构架区和三个轻链互补区，三个轻链互补区的氨基酸序列如SEQ ID No.21-23所示，该轻链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列。
5.一种特异结合CD3的单链抗体可变区片段，包括通过-(GGGGS)3-短肽相连的重链可变区和轻链可变区，其特征在于，所述的重链可变区具有重链构架区和三个重链互补区，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQ ID No24-29，该重链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列；
所述的轻链可变区具有轻链构架区和三个轻链互补区，三个轻链互补区的氨基酸序列如SEQ ID No.21-23所示，该轻链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列。
6.一种编码如权利要求1-3任意一项所述的特异结合CD3的抗体的核酸分子。
7.一种编码如权利要求4所述的特异结合CD3的抗原结合片段的核酸分子。
8.一种编码如权利要求5所述的单链抗体可变区片段的核酸分子。
9.如权利要求1-4任意一项所述的特异结合CD3的抗体在制备肿瘤治疗药物中的应用，其特征在于，所述的肿瘤治疗药物用于治疗胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、膀胱癌，***癌、***、卵巢癌、输卵管癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、神经胶质瘤或骨肉瘤。
10.如权利要求4所述的特异结合CD3的抗原结合片段或如权利要求5所述的链抗体可变区片段在构建双特异性抗体中的应用。
CN201910166027.0A 2019-03-06 2019-03-06 特异结合cd3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用 Pending CN111662382A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910166027.0A CN111662382A (zh) 2019-03-06 2019-03-06 特异结合cd3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910166027.0A CN111662382A (zh) 2019-03-06 2019-03-06 特异结合cd3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111662382A true CN111662382A (zh) 2020-09-15

Family

ID=72381646

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910166027.0A Pending CN111662382A (zh) 2019-03-06 2019-03-06 特异结合cd3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111662382A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022068809A1 (zh) * 2020-09-29 2022-04-07 信达生物制药(苏州)有限公司 抗cd3抗体以及其用途

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103709249A (zh) * 2006-12-20 2014-04-09 Mmr全球公司 抗体及其制备和使用方法
US20150175699A1 (en) * 2012-06-14 2015-06-25 Therapix Biosciences Ltd. Humanized antibodies to cluster of differentiation 3 (cd3)
WO2017125897A1 (en) * 2016-01-21 2017-07-27 Novartis Ag Multispecific molecules targeting cll-1
WO2018129270A1 (en) * 2017-01-05 2018-07-12 Fred Hutchinson Cancer Research Center Systems and methods to improve vaccine efficacy
WO2019008379A1 (en) * 2017-07-05 2019-01-10 Ucl Business Plc BISPECIFIC ANTIBODIES DIRECTED AGAINST ROR1 AND CD3

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103709249A (zh) * 2006-12-20 2014-04-09 Mmr全球公司 抗体及其制备和使用方法
US20150175699A1 (en) * 2012-06-14 2015-06-25 Therapix Biosciences Ltd. Humanized antibodies to cluster of differentiation 3 (cd3)
WO2017125897A1 (en) * 2016-01-21 2017-07-27 Novartis Ag Multispecific molecules targeting cll-1
WO2018129270A1 (en) * 2017-01-05 2018-07-12 Fred Hutchinson Cancer Research Center Systems and methods to improve vaccine efficacy
WO2019008379A1 (en) * 2017-07-05 2019-01-10 Ucl Business Plc BISPECIFIC ANTIBODIES DIRECTED AGAINST ROR1 AND CD3

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HIROTAKE SHIRAIWA等: "Engineering a bispecific antibody with a common light chain: Identification and optimization of an anti-CD3 epsilon and anti-GPC3 bispecific antibody, ERY974", 《METHODS》 *
STEVEN R LEONG等: "An anti-CD3/anti-CLL-1 bispecific antibody for the treatment of acute myeloid leukemia", 《BLOOD》 *
XIFU LIU等: "Construction of expression vectors and study on single-chain antibody and reshaping single-domain antibody against CD3", 《SCIENCE IN CHINA (SERIES C)》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022068809A1 (zh) * 2020-09-29 2022-04-07 信达生物制药(苏州)有限公司 抗cd3抗体以及其用途

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6866294B2 (ja) 抗ｐｄ−ｌ１抗体
CN110294807B (zh) 抗tim-3抗体
CN109651507B (zh) 一种激动型4-1bb单克隆抗体
CN113015749B (zh) 靶向cd3的抗体、双特异性抗体及其用途
CN112601762A (zh) 抗cd47抗体及其应用
JP2021521784A (ja) ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲａＦｃ融合タンパク質とＰＤ−１抗原結合ドメインを含むＰＤ−１標的化ヘテロダイマー融合タンパク質およびそれらの使用
TW201827464A (zh) 人程序性死亡受體ｐｄ－１的單株抗體及其片段
CN109160949B (zh) 一种鼠抗人pd-1单克隆抗体及应用
IL271325B1 (en) Guidance and navigation control proteins and a method for producing and using them
CN107488229A (zh) Pd‑l1抗体及其用途
TWI821474B (zh) Ｃｄ３抗體及其藥物用途
JP2022523929A (ja) ヒトｌａｇ－３に結合する抗体、その製造方法および用途
WO2023125888A1 (zh) 一种gprc5d抗体及其应用
CN112041347A (zh) 结合人il-4r的抗体、其制备方法和用途
Wang et al. Nanobody-armed T cells endow CAR-T cells with cytotoxicity against lymphoma cells
JP7078237B1 (ja) 抗ｔｓｐａｎ８－抗ｃｄ３二重特異性抗体及び抗ｔｓｐａｎ８抗体
CN111662382A (zh) 特异结合cd3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用
WO2022020945A1 (en) Anti-cd22 single domain antibodies and therapeutic constructs
CN117024592B (zh) 抗b7h3抗体及其用途
WO2023116802A1 (zh) 抗gucy2c纳米抗体及其应用
WO2023088295A1 (zh) 一种多特异性抗体及其药物用途
CN116239690B (zh) 一种抗cd123的纳米抗体及其制备方法和应用
CN114773485B (zh) 抗人PD-L1抗体和TGFβRII的双功能融合蛋白分子
WO2024037627A1 (zh) 一种双特异性抗体及其应用
WO2023066336A1 (zh) 抗muc17纳米抗体及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200915

RJ01 Rejection of invention patent application after publication