CN111603434A - 一种改善皮肤皱纹的组合物及其化妆品 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种改善皮肤皱纹的组合物及其化妆品，旨在提供一种各成分协同增效，有效清除自由基，抗氧化能力较强，促进胶原蛋白合成，延缓皮肤衰老的组合物，该组合物主要包括下述重量份的成分：人参根提取物5‑10份、疑拟香桃木果提取物2‑7份、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物2‑6份、睡菜叶提取物0.5‑3份；属于化妆品技术领域。

Description

一种改善皮肤皱纹的组合物及其化妆品
技术领域
本发明公开了一种组合物，具体地说，是一种改善皮肤皱纹的组合物，属于化妆品技术领域。
背景技术
皮肤老化是一个由多种因素作用的生理过程，由于皮肤对机体防护能力、调节能力的减弱，使得皮肤不能适应内外环境的变化，而出现皮肤状态、色泽、质感等外观整体状况的改变。且随着环境污染、社会压力等问题日益突出，皮肤出现皱纹、松弛、暗哑等老化现象也变得越来越严重。
皮肤的老化分为内源性老化和外源性老化。内源性老化是指皮肤随年龄增长的自然老化，表现为皮肤变白，出现细小皱纹、弹性下降、皮肤松弛等。外源性老化的最主要原因是日晒所致的光老化，表现为皱纹、皮肤松弛、粗糙、淡黄或灰黄色的皮肤变色、毛细血管扩张、色素斑形成等。其中引起内源性老化最主要的因素是自由基，自由基是一类非常活跃的活性分子基团，通常是人体代谢的产物，为防止自由基损伤，机体有内生性的抗氧化剂，如谷胱苷肽、辅酶Q10和SOD，以防止自由基入侵。但引起外源性老化的环境因素对身体的伤害也可增加自由基，如污染、紫外线和阳光等，会破坏皮肤自身的抗氧化体系，使抗氧化酶活性水平下降并造成脂质过氧化物堆积，非酶自由基清除剂耗竭，导致皮肤损伤，损伤的皮肤抗氧化防御体系又会导致更多自由基的产生。而自由基增多将会阻碍胶原蛋白和弹性蛋白的合成，氧化健康细胞，从而加速人体皮肤衰老，使皱纹增多。因此，改善皱纹、抗衰老在很大程度上需要抗自由基、抗氧化。
目前，市场上通过抗氧化作用延缓皮肤老化的产品品种繁多，但有些抗氧化护肤品主要是通过化学试剂达到清除自由基功效的，长期使用可能会引起皮肤损伤，造成健康隐患，或者有的抗氧化护肤品清除自由基的能力有限，改善皱纹的效果欠佳。因此，需要开发出一种安全无刺激且抗氧化效果较理想的组合物并可将其应用于改善皮肤皱纹、抗衰老的产品中。
发明内容
针对上述不足，本发明的目的是提供一种改善皮肤皱纹的组合物，该组合物各成分协同增效，可有效清除自由基，抗氧化能力较强，从而促进胶原蛋白的合成，将其应用于化妆品中，起到淡化皮肤皱纹，延缓皮肤衰老的效果。
为此，本发明提供的第一个技术方案是这样的：
一种改善皮肤皱纹的组合物，主要包括下述重量份的成分：人参根提取物5-10份、疑拟香桃木果提取物2-7份、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物2-6份、睡菜叶提取物0.5-3份。
其中，人参根提取物富含多种人参皂苷、氨基酸、糖类、维生素等活性成分，具有清除自由基，抗氧化，抑制弹性蛋白酶活性的作用，并可提高皮肤中羟脯氨酸的含量，使皮肤光滑细致，达到延缓皮肤衰老，增加皮肤弹性的效果。
疑拟香桃木果素有“天然维生素C之王”或“维C果皇”的美誉，富含极高浓度的天然维生素C，是柑橘的30倍，其提取物具有强效抗氧化活性，清除与对抗自由基，促进胶原合成，并防止胶原纤维降解，限制促炎细胞因子的释放，维持皮肤的组织架构，还原皮肤健康、年轻状态。
鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物由鞘氨醇单胞菌发酵而来，可对抗活性氧自由基，增加抗氧化能力，并能抑制细胞衰老相关蛋白p21Waf1和p16INK4a的表达，重建细胞外基质，恢复真皮结构完整性，增加胶原蛋白和纤维蛋白表达，改善皮肤的致密度和弹性，预防皮肤细胞的衰老。
睡菜叶提取物具有强抗氧化能力，可促进合成更多的胶原蛋白和弹性蛋白，紧致肌肤，提升脸部轮廓，能够稳定、保护维生素C，增加胶原蛋白的合成，达到增加皮肤光滑度的效果。
进一步地，本发明提供的改善皮肤皱纹的组合物还包括地茶叶提取物2-4份。地茶叶又名白雪茶，其提取物可清除自由基，发挥抗氧化活性，能够明显促进皮肤成纤维细胞的增殖，有效提高I型胶原蛋白的合成，并且提高成纤维细胞表达透明质酸，具有很好的保湿、抗衰老作用。
进一步地，本发明提供的改善皮肤皱纹的组合物还包括水解酵母蛋白1-4份。水解酵母蛋白含有氨基酸、小肽、丰富的B族维生素、谷胱甘肽及核苷酸类物质，可抵御自由基，促进胶原蛋白的合成。
进一步地，本发明提供的改善皮肤皱纹的组合物中所述的人参根为黑参根。黑参是白参通过蒸汽蒸煮，并反复九蒸九晒后得到的，含有更多的人参皂苷等活性成分，具有更强的生物活性。
进一步地，本发明提供的改善皮肤皱纹的组合物中所述人参根提取物与疑拟香桃木果提取物的重量比为3:2。
进一步地，本发明提供的改善皮肤皱纹的组合物中所述疑拟香桃木果提取物的制备方法包括如下步骤：
(1)原料预处理：以疑拟香桃木果果实为原料，洗净后，整体粉碎放入胶体磨，循环磨浆制成疑拟香桃木果果浆；
(2)酶解：向疑拟香桃木果果浆中加入10倍重量的水，然后加入疑拟香桃木果果浆重量为0.3％酶活为1000U/g的纤维素酶在pH＝4.0-5.5，温度40-55℃恒温条件下酶解1-3h，最后将酶解液升温至100℃灭活10min后，冷却至室温备用；
(3)微波处理：将步骤(2)中的酶解液进行微波处理，微波处理条件：功率200-400W，温度30-50℃，时间2-5min；
(4)发酵：在步骤(3)的混合液中接入体积比为0.5-1.5％的乳酸克鲁维酵母菌培养基，混和均匀后将其置于发酵罐中在30-35℃恒温条件下，在转速为100-150r/min的摇床上发酵培养3-5天；
(5)纯化：将步骤(4)中的发酵液在高温121℃条件下灭菌30min，冷却后离心得上清液，将上清液上H-60大孔吸附树脂柱，上样量为柱体积的3-5倍，上样流速为1.0mL/min，上样完成后静置1h，先用4倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用5-6倍柱体积浓度为50-60％的乙醇溶液洗脱，洗脱速率为0.5-2.0BV/h，回收洗脱液，减压浓缩至干，即得疑拟香桃木果提取物。
进一步地，上述疑拟香桃木果提取物的制备方法中步骤(4)中所述的乳酸克鲁维酵母菌的浓度为：107-108CFU/mL，步骤(4)中所述的培养基的成分包括：蛋白胨10.0g，牛肉粉8.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.05g，用去离子水定容至1000mL。
此外，为了使本发明组合物稳定性更好，上述组合物中还可添加重量份为0.1-1份的防腐剂，防腐剂可为苯氧乙醇、苯甲酸钠等常规防腐剂中的一种或几种的组合。
本发明提供的第二个技术方案是：
一种化妆品，包含上述改善皮肤皱纹的组合物和化妆品外用剂型的常用基质和/或去离子水。
具体地，上述化妆品外用剂型的常用基质包含乳化剂、油脂、润肤剂、保湿剂、增稠剂、pH调节剂、多元醇、防腐剂、色素和香精中的一种或多种。
上述化妆品制剂类型没有特别限制，优选为水、膏霜、乳液、精华、凝胶、啫喱。
与现有技术相比，本发明具有的有益效果如下：
(1)本发明组合物通过人参根提取物、疑拟香桃木果提取物、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物和睡菜叶提取物的合理搭配，抗氧化性能较强，能有效抵御自由基对机体的侵害，防止胶原蛋白降解的同时，可促进胶原的合成，进而改善和淡化皱纹，增强皮肤弹性和紧致度，预防皮肤衰老。当人参根为黑参根时，其清除自由基的能力更强，且人参根提取物与疑拟香桃木果提取物在特定比例下，组合物之间可以发挥较佳的抗氧化活性，改善皱纹、抵抗衰老的效果也更加明显。组合物中还可添加地茶叶提取物、水解酵母蛋白，与其他成分协同进一步加强其清除自由基的能力，祛除皱纹，缓解老化迹象。
(2)本发明中疑拟香桃木果提取物通过生物酶解及微波辅助发酵技术提取其活性成分，反应条件温和、反应效率高，尤其在合适的酶水解和微生物发酵条件下，得到的提取物与其他成分复配能更好的发挥抗氧化效果，减少面部皱纹产生，让皮肤变得更加细嫩紧致，恢复年轻。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。
实施例1
本发明提供的一种改善皮肤皱纹的组合物，由如下重量数的组分组成：人参根提取物5g、疑拟香桃木果提取物7g、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物6g、睡菜叶提取物2g。
实施例2
本发明提供的一种改善皮肤皱纹的组合物，由如下重量数的组分组成：人参根提取物8g、疑拟香桃木果提取物5g、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物4g、睡菜叶提取物3g。
实施例1-2中所述疑拟香桃木果提取物是通过下述步骤依次制得：
(1)原料预处理：以疑拟香桃木果果实为原料，洗净后，整体粉碎放入胶体磨，循环磨浆制成疑拟香桃木果果浆；
(2)酶解：向疑拟香桃木果果浆中加入10倍重量的水，然后加入疑拟香桃木果果浆重量为0.3％酶活为1000U/g的纤维素酶在pH＝4.5，温度40℃恒温条件下酶解3h，最后将酶解液升温至100℃灭活10min后，冷却至室温备用；
(3)微波处理：将步骤(2)中的酶解液进行微波处理，微波处理条件：功率250W，温度40℃，时间3min；
(4)发酵：在步骤(3)的混合液中接入体积比为0.5％的乳酸克鲁维酵母菌培养基，混和均匀后将其置于发酵罐中在35℃恒温条件下，在转速为100r/min的摇床上发酵培养4天；
(5)纯化：将步骤(4)中的发酵液在高温121℃条件下灭菌30min，冷却后离心得上清液，将上清液上H-60大孔吸附树脂柱，上样量为柱体积的3倍，上样流速为1.0mL/min，上样完成后静置1h，先用4倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用5倍柱体积浓度为60％的乙醇溶液洗脱，洗脱速率为1.0BV/h，回收洗脱液，减压浓缩至干，即得疑拟香桃木果提取物。
步骤(4)中所述的乳酸克鲁维酵母菌的浓度为：107CFU/mL，步骤(4)中所述的培养基的成分包括：蛋白胨10.0g，牛肉粉8.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.05g，用去离子水定容至1000mL。
实施例1-2中所述人参根提取物为白参根的提取物。
实施例3
本发明提供的一种改善皮肤皱纹的组合物，由如下重量数的组分组成：人参根提取物8g、疑拟香桃木果提取物5g、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物4g、睡菜叶提取物3g。
实施例3中所述疑拟香桃木果提取物是通过下述步骤依次制得：
(1)原料预处理：以疑拟香桃木果果实为原料，洗净后，整体粉碎放入胶体磨，循环磨浆制成疑拟香桃木果果浆；
(2)酶解：向疑拟香桃木果果浆中加入10倍重量的水，然后加入疑拟香桃木果果浆重量为0.3％酶活为1000U/g的纤维素酶在pH＝4.5，温度40℃恒温条件下酶解3h，最后将酶解液升温至100℃灭活10min后，冷却至室温备用；
(3)微波处理：将步骤(2)中的酶解液进行微波处理，微波处理条件：功率250W，温度40℃，时间3min；
(4)发酵：在步骤(3)的混合液中接入体积比为0.5％的乳酸克鲁维酵母菌培养基，混和均匀后将其置于发酵罐中在35℃恒温条件下，在转速为100r/min的摇床上发酵培养4天；
(5)纯化：将步骤(4)中的发酵液在高温121℃条件下灭菌30min，冷却后离心得上清液，将上清液上H-60大孔吸附树脂柱，上样量为柱体积的3倍，上样流速为1.0mL/min，上样完成后静置1h，先用4倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用5倍柱体积浓度为60％的乙醇溶液洗脱，洗脱速率为1.0BV/h，回收洗脱液，减压浓缩至干，即得疑拟香桃木果提取物。
步骤(4)中所述的乳酸克鲁维酵母菌的浓度为：107CFU/mL，步骤(4)中所述的培养基的成分包括：蛋白胨10.0g，牛肉粉8.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.05g，用去离子水定容至1000mL。
实施例4
本发明提供的一种改善皮肤皱纹的组合物，由如下重量数的组分组成：人参根提取物10g、疑拟香桃木果提取物4.5g、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物3g、睡菜叶提取物0.5g、地茶叶提取物2g。
实施例5
本发明提供的一种改善皮肤皱纹的组合物，由如下重量数的组分组成：人参根提取物6g、疑拟香桃木果提取物7g、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物2g、睡菜叶提取物1g、地茶叶提取物4g。
实施例4-5中所述疑拟香桃木果提取物是通过下述步骤依次制得：
(1)原料预处理：以疑拟香桃木果果实为原料，洗净后，整体粉碎放入胶体磨，循环磨浆制成疑拟香桃木果果浆；
(2)酶解：向疑拟香桃木果果浆中加入10倍重量的水，然后加入疑拟香桃木果果浆重量为0.3％酶活为1000U/g的纤维素酶在pH＝4.0，温度55℃恒温条件下酶解1h，最后将酶解液升温至100℃灭活10min后，冷却至室温备用；
(3)微波处理：将步骤(2)中的酶解液进行微波处理，微波处理条件：功率200W，温度50℃，时间2min；
(4)发酵：在步骤(3)的混合液中接入体积比为1.0％的乳酸克鲁维酵母菌培养基，混和均匀后将其置于发酵罐中在30℃恒温条件下，在转速为150r/min的摇床上发酵培养3天；
(5)纯化：将步骤(4)中的发酵液在高温121℃条件下灭菌30min，冷却后离心得上清液，将上清液上H-60大孔吸附树脂柱，上样量为柱体积的5倍，上样流速为1.0mL/min，上样完成后静置1h，先用4倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用6倍柱体积浓度为50％的乙醇溶液洗脱，洗脱速率为2.0BV/h，回收洗脱液，减压浓缩至干，即得疑拟香桃木果提取物。
步骤(4)中所述的乳酸克鲁维酵母菌的浓度为：108CFU/mL，步骤(4)中所述的培养基的成分包括：蛋白胨10.0g，牛肉粉8.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.05g，用去离子水定容至1000mL。
实施例6
本发明提供的一种改善皮肤皱纹的组合物，由如下重量数的组分组成：人参根提取物6g、疑拟香桃木果提取物2g、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物3g、睡菜叶提取物2g、地茶叶提取物3g、水解酵母蛋白4g、苯氧乙醇0.4g、苯甲酸钠0.1g。
实施例6中所述疑拟香桃木果提取物是通过下述步骤依次制得：
(1)原料预处理：以疑拟香桃木果果实为原料，洗净后，整体粉碎放入胶体磨，循环磨浆制成疑拟香桃木果果浆；
(2)酶解：向疑拟香桃木果果浆中加入10倍重量的水，然后加入疑拟香桃木果果浆重量为0.3％酶活为1000U/g的纤维素酶在pH＝5.5，温度50℃恒温条件下酶解2h，最后将酶解液升温至100℃灭活10min后，冷却至室温备用；
(3)微波处理：将步骤(2)中的酶解液进行微波处理，微波处理条件：功率400W，温度30℃，时间5min；
(4)发酵：在步骤(3)的混合液中接入体积比为1.5％的乳酸克鲁维酵母菌培养基，混和均匀后将其置于发酵罐中在35℃恒温条件下，在转速为120r/min的摇床上发酵培养5天；
(5)纯化：将步骤(4)中的发酵液在高温121℃条件下灭菌30min，冷却后离心得上清液，将上清液上H-60大孔吸附树脂柱，上样量为柱体积的4倍，上样流速为1.0mL/min，上样完成后静置1h，先用4倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用5.5倍柱体积浓度为55％的乙醇溶液洗脱，洗脱速率为0.5BV/h，回收洗脱液，减压浓缩至干，即得疑拟香桃木果提取物。
步骤(4)中所述的乳酸克鲁维酵母菌的浓度为：107CFU/mL，步骤(4)中所述的培养基的成分包括：蛋白胨10.0g，牛肉粉8.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.05g，用去离子水定容至1000mL。
实施例7
本发明提供的一种改善皮肤皱纹的组合物，由如下重量数的组分组成：人参根提取物6g、疑拟香桃木果提取物4g、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物3g、睡菜叶提取物2g、地茶叶提取物4g、水解酵母蛋白1g。
实施例8
本发明提供的一种改善皮肤皱纹的组合物，由如下重量数的组分组成：人参根提取物5g、疑拟香桃木果提取物5g、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物3g、睡菜叶提取物2g、地茶叶提取物4g、水解酵母蛋白1g。
实施例7-8中所述疑拟香桃木果提取物是通过下述步骤依次制得：
(1)原料预处理：以疑拟香桃木果果实为原料，洗净后，整体粉碎放入胶体磨，循环磨浆制成疑拟香桃木果果浆；
(2)酶解：向疑拟香桃木果果浆中加入10倍重量的水，然后加入疑拟香桃木果果浆重量为0.3％酶活为1000U/g的纤维素酶在pH＝5.0，温度45℃恒温条件下酶解2h，最后将酶解液升温至100℃灭活10min后，冷却至室温备用；
(3)微波处理：将步骤(2)中的酶解液进行微波处理，微波处理条件：功率300W，温度30℃，时间4min；
(4)发酵：在步骤(3)的混合液中接入体积比为1.2％的乳酸克鲁维酵母菌培养基，混和均匀后将其置于发酵罐中在35℃恒温条件下，在转速为120r/min的摇床上发酵培养4天；
(5)纯化：将步骤(4)中的发酵液在高温121℃条件下灭菌30min，冷却后离心得上清液，将上清液上H-60大孔吸附树脂柱，上样量为柱体积的4倍，上样流速为1.0mL/min，上样完成后静置1h，先用4倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用6倍柱体积浓度为50％的乙醇溶液洗脱，洗脱速率为1.0BV/h，回收洗脱液，减压浓缩至干，即得疑拟香桃木果提取物。
步骤(4)中所述的乳酸克鲁维酵母菌的浓度为：107CFU/mL，步骤(4)中所述的培养基的成分包括：蛋白胨10.0g，牛肉粉8.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.05g，用去离子水定容至1000mL。
实施例3-8中所述人参根提取物为黑参根的提取物。
上述实施例1-8中任意一组改善皮肤皱纹组合物的使用方法：按实施例1-8中任意一组重量数称取各个组分，与适量水和多元醇混合至50g，具体制备方法如下：
(1)将苯甲酸钠预先与少量水一起混合均匀，备用(无苯甲酸钠时，此步骤省略)；
(2)将苯氧乙醇预先与少量多元醇一起混合均匀，备用(无苯氧乙醇时，此步骤省略)；
(3)将剩余水加热至40-45℃后先加入剩余多元醇搅拌均匀，接着加入预先处理好的步骤(1)和步骤(2)的溶液搅拌均匀，再加入其他物料搅拌均匀，即得。
上述多元醇可优选甘油、丁二醇、1,3-丙二醇、1,2-戊二醇、丙二醇等中的一种或多种。
为了证明本发明的效果，下面给出本申请的对比实验例：
对比例1
与实施例2对比，仅将人参根提取物用等量地茶叶提取物代替，其他成分相同。
其中疑拟香桃木果提取物的制备方法同实施例2。
对比例2
与实施例2对比，仅将睡菜叶提取物用等量水解酵母蛋白代替，其他成分相同。
其中疑拟香桃木果提取物的制备方法同实施例2。
对比例3
与实施例2对比，改善皮肤皱纹组合物的原料组成相同。
其中疑拟香桃木果提取物通过商业渠道购买，采购自来裕生技(国际)集团。
对比例4
与实施例3对比，改善皮肤皱纹组合物的原料组成相同。
其中疑拟香桃木果提取物是通过下述步骤依次制得：
(1)原料预处理：以疑拟香桃木果果实为原料，洗净后，整体粉碎放入胶体磨，循环磨浆制成疑拟香桃木果果浆；
(2)酶解：向疑拟香桃木果果浆中加入10倍重量的水，然后加入疑拟香桃木果果浆重量为0.3％酶活为1000U/g的纤维素酶在pH＝4.5，温度40℃恒温条件下酶解3h，最后将酶解液升温至100℃灭活10min后，冷却至室温备用；
(3)微波处理：将步骤(2)中的酶解液进行微波处理，微波处理条件：功率250W，温度40℃，时间3min；
(4)纯化：将步骤(3)中的混合物冷却后离心得上清液，将上清液上H-60大孔吸附树脂柱，上样量为柱体积的3倍，上样流速为1.0mL/min，上样完成后静置1h，先用4倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用5倍柱体积浓度为60％的乙醇溶液洗脱，洗脱速率为1.0BV/h，回收洗脱液，减压浓缩至干，即得疑拟香桃木果提取物。
对比例5
一种改善皮肤皱纹的组合物，由如下重量数的组分组成：人参根提取物12g、疑拟香桃木果提取物8g、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物3g、睡菜叶提取物2g、地茶叶提取物4g、水解酵母蛋白1g。
所述疑拟香桃木果提取物是通过下述步骤依次制得：
(1)原料预处理：以疑拟香桃木果果实为原料，洗净后，整体粉碎放入胶体磨，循环磨浆制成疑拟香桃木果果浆；
(2)酶解：向疑拟香桃木果果浆中加入10倍重量的水，然后加入疑拟香桃木果果浆重量为0.3％酶活为1000U/g的纤维素酶在pH＝5.0，温度45℃恒温条件下酶解2h，最后将酶解液升温至100℃灭活10min后，冷却至室温备用；
(3)微波处理：将步骤(2)中的酶解液进行微波处理，微波处理条件：功率300W，温度30℃，时间4min；
(4)发酵：在步骤(3)的混合液中接入体积比为1.2％的乳酸克鲁维酵母菌培养基，混和均匀后将其置于发酵罐中在35℃恒温条件下，在转速为120r/min的摇床上发酵培养4天；
(5)纯化：将步骤(4)中的发酵液在高温121℃条件下灭菌30min，冷却后离心得上清液，将上清液上H-60大孔吸附树脂柱，上样量为柱体积的4倍，上样流速为1.0mL/min，上样完成后静置1h，先用4倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用6倍柱体积浓度为50％的乙醇溶液洗脱，洗脱速率为1.0BV/h，回收洗脱液，减压浓缩至干，即得疑拟香桃木果提取物。
步骤(4)中所述的乳酸克鲁维酵母菌的浓度为：107CFU/mL，步骤(4)中所述的培养基的成分包括：蛋白胨10.0g，牛肉粉8.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.05g，用去离子水定容至1000mL。
对比例5中所述人参根提取物为黑参根的提取物。
对比例1-5任意一组组合物的使用方法和制备方法与实施例中相同。
上述改善皱纹的组合物可作为活性成分用于制备改善皱纹、延缓皮肤衰老的化妆品。所述化妆品中还可由化妆品外用剂型的常用基质和/或去离子水组成，主要包括乳化剂、油脂、润肤剂、保湿剂、增稠剂、pH调节剂、多元醇、防腐剂、色素和香精等。具体使用时，将本发明制备的组合物直接添加至化妆品基质中，添加量为0.1wt％-6wt％。
为了更好的说明本发明的优点，下面给出本发明提供的改善皱纹的组合物的功效实验：
测试1：皮肤刺激性测试
(1)测试样品：实施例1-8制备的组合物。
(2)测试方法：选取健康志愿者30名，年龄18～45岁，受试者应符合志愿者入选标准，无过敏性皮炎史，且前一个月也未使用刺激性产品。
取测试样品约0.020～0.025ml涂于斑试器(北京科普仪器厂)小室中，外用专用胶带贴敷于受试者背部，24小时后除去斑试器，如有剩余产品用湿润的纸巾轻轻擦去，分别于0.5小时、24小时、48小时，按《化妆品安全技术规范》(2015)中皮肤反应分级标准记录其结果。鉴定标准见表1。
表1鉴定标准
等级 鉴定标准
0 无刺激、无红斑
1 轻度红斑
2 红斑
3 红斑、丘疹、水泡
4 严重附浮肿、大泡
由封闭型斑贴测试结果可知，30名受试者在0.5小时、24小时、48小时对实施例1-8制得的改善皮肤皱纹的组合物未表现任何不良反应，没有出现红斑、烧灼感、瘙痒等症状。说明本发明组合物使用安全温和，对皮肤无刺激。
测试2：清除自由基能力测试
本实验通过测定组合物对DPPH自由基的清除能力来评价本发明组合物清除自由基的性能。DPPH自由基是一种非常稳定的自由基，在517nm处有强吸收，当遇到自由基清除剂时，DPPH的单电子被配对而使溶液颜色变浅，其褪色程度反映抗氧活性。
(1)测试样品：实施例1-8，对比例1-5制备的组合物，用去离子水稀释成质量分数为3％的测试溶液。
(2)测试方法：取3mL浓度为0.2mmol/L的DPPH-无水乙醇溶液于比色皿中，再加入1mL测试样品，混匀，室温避光30min，在517nm波长处测吸光度，吸光值记为A1，加入3mL无水乙醇溶液和1mL测试样品溶液的吸光度值记为A2，加3mLDPPH-无水乙醇溶液和1mL无水乙醇溶液的吸光值记为A3。按下式计算DPPH自由基清除率：DPPH自由基清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A3]×100％，取三次测量的平均值。测试结果如表2所示。
表2清除DPPH自由基能力测试结果
Figure BDA0002522137140000111
Figure BDA0002522137140000121
由表2的实验结果可知，本发明组合物对DPPH自由基有较强的清除能力，且与对比例组合物相比其清除自由基的效果更佳，说明本发明组合物协同增效，可提高组合物清除自由基的能力，增加抗氧化性能，减少和避免自由基对机体造成的损伤，从而达到延缓机体衰老的目的。尤其实施例7组合物对DPPH自由基的清除率达到最大值，说明人参根提取物与疑拟香桃木果提取物在一定比例下复配时，可使组合物的效果发挥至最佳。对比例3与实施例2对比，对比例4与实施3对比，它们清除DPPH自由基的能力均小于相应实施例，说明疑拟香桃木果提取物采用本发明的制备方法提取，可增强其抗氧化的性能。
测试3：改善皱纹功效测试
(1)测试样品：将实施例2、3、7、8和对比例1-5制备的组合物分别添加至下面的精华液基质中，添加量为3wt％，得到含实施例2、3、7、8和对比例1-5组合物的化妆品，依次命名为精华液1-4、对比精华液1-5，并以精华液基质作为对照。
A相：水加至100g，苯氧乙醇//乙基己基甘油0.5g，EDTA二钠0.03g；
B相：1,3-丙二醇5g，卡波姆0.3g，羟乙基纤维素//乙酸钠//水//纤维素0.05g，黄原胶0.1g，羟苯甲酯0.12g；
C相：水1.5g，氢氧化钠0.07g；
D相：丁二醇3g，甜菜碱0.5g；
E相：柠檬酸钠0.08g，柠檬酸0.04g，水3g；
F相：实施例2、3、7、8或对比例1-5制备的组合物3g，PEG-40氢化蓖麻油0.06g，香精适量。
上述精华液1-4、对比精华液1-5的制备方法如下：
将A相物料加入真空乳化锅中，搅拌升温至85℃，加入B相物料，混合搅拌均匀，保温搅拌20分钟，降温至60℃，加入C相物料，搅拌均匀，继续降温至50℃，加入预混合的D相物料，搅拌均匀，降温至45℃，加入E相、F相物料，搅拌均匀，降温至40℃，对板，合格后出料，即可。
(2)测试方法：选取平均年龄为25～45岁有皱纹、皮肤健康无损伤的志愿者50名，随机分成10组，每组5名，分别使用上述测试样品。每组受试者每次取0.6g精华液在脸部涂抹，每天早晚各涂抹一次，连续使用4周。实验期间，受试者在实验部位不能涂抹任何其它化妆品。
使用皮肤弹性仪CutometerMPA580分别于未使用时、第4周时进行数据采集，测试部位为颧部，测量时探头在同一受测区域重复测量3次，取平均值。测试参数为R2(无负压时皮肤的回弹量Ua与有负压时的最大拉伸量Uf之比)，R2越接近1，皮肤的弹性越好，R2平均变化值＝第4周R2值－第0周R2值，R2平均变化率＝R2平均变化值/第0周R2值。实验结果见表4。测定结果见表3。
表3改善皱纹功效测试结果
Figure BDA0002522137140000131
从表3的实验结果可以看出，持续使用本发明组合物制成的精华液4周后，皮肤弹性R2值的变化率到达15％以上，明显优于对比例精华液提升皮肤弹性的效果，说明本发明通过人参提取物、疑拟香桃木果提取物、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物、睡菜叶提取物、睡菜叶提取物、水解酵母蛋白的合理复配，可增加胶原蛋白和弹性蛋白的表达，增加皮肤弹性，紧致肌肤，最终达到改善皱纹、延缓皮肤衰老的效果。当人参根提取物选自黑参根，且人参根提取物与疑拟香桃木果提取物在特定比例下作用时，组合物对皮肤弹性的提升效果更加显著。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种改善皮肤皱纹的组合物，其特征在于，主要包括下述重量份的成分：人参根提取物5-10份、疑拟香桃木果提取物2-7份、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物2-6份、睡菜叶提取物0.5-3份。
2.根据权利要求1所述的一种改善皮肤皱纹的组合物，其特征在于，还包括地茶叶提取物2-4份。
3.根据权利要求2所述的一种改善皮肤皱纹的组合物，其特征在于，还包括水解酵母蛋白1-4份。
4.根据权利要求1所述的一种改善皮肤皱纹的组合物，其特征在于，所述人参根提取物为黑参根的提取物。
5.根据权利要求1所述的一种改善皮肤皱纹的组合物，其特征在于，所述人参根提取物与疑拟香桃木果提取物的重量比为3:2。
6.根据权利要求1所述的一种改善皮肤皱纹的组合物，其特征在于，所述疑拟香桃木果提取物的制备方法包括如下步骤：
(1)原料预处理：以疑拟香桃木果果实为原料，洗净后，整体粉碎放入胶体磨，循环磨浆制成疑拟香桃木果果浆；
(2)酶解：向疑拟香桃木果果浆中加入10倍重量的水，然后加入疑拟香桃木果果浆重量为0.3％酶活为1000U/g的纤维素酶在pH＝4.0-5.5，温度40-55℃恒温条件下酶解1-3h，最后将酶解液升温至100℃灭活10min后，冷却至室温备用；
(3)微波处理：将步骤(2)中的酶解液进行微波处理，微波处理条件：功率200-400W，温度30-50℃，时间2-5min；
(4)发酵：在步骤(3)的混合液中接入体积比为0.5-1.5％的乳酸克鲁维酵母菌培养基，混和均匀后将其置于发酵罐中在30-35℃恒温条件下，在转速为100-150r/min的摇床上发酵培养3-5天；
(5)纯化：将步骤(4)中的发酵液在高温121℃条件下灭菌30min，冷却后离心得上清液，将上清液上H-60大孔吸附树脂柱，上样量为柱体积的3-5倍，上样流速为1.0mL/min，上样完成后静置1h，先用4倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用5-6倍柱体积浓度为50-60％的乙醇溶液洗脱，洗脱速率为0.5-2.0BV/h，回收洗脱液，减压浓缩至干，即得疑拟香桃木果提取物。
7.根据权利要求6所述的一种改善皮肤皱纹的组合物，其特征在于，步骤(4)中所述的乳酸克鲁维酵母菌的浓度为：107-108CFU/mL，步骤(4)中所述的培养基的成分包括：蛋白胨10.0g，牛肉粉8.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖20.0g，吐温80 1.0mL，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.05g，用去离子水定容至1000mL。
8.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品包含如权利要求1-7任一项所述的改善皮肤皱纹的组合物和化妆品外用剂型的常用基质和/或去离子水。
9.根据权利要求8所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品外用剂型的常用基质包含乳化剂、油脂、润肤剂、保湿剂、增稠剂、pH调节剂、多元醇、防腐剂、色素和香精中的一种或多种。
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