CN111505317A - 脂联素测定试剂质控品及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种脂联素测定试剂质控品,包括以下组分的冻干品:磷酸盐缓冲液50~80份,碘化钠1~2份,0.02~0.1份的维生素B1,0.01~0.05份的柠檬酸钠,牛血清5~10份,脂联素蛋白0.1~0.5份,蔗糖2~5份,防腐剂1~2份。本发明的质控品为冻干品,能大大提升质控品在使用前的稳定性,易于保存;磷酸盐缓冲液能便于质控品的制备成型,防腐剂延长质控品的质量,碘化钠、维生素B1和柠檬酸钠能提高产品的稳定性,蔗糖能防止纯品脂联素在制备过程中失活。本发明还公开了上述质控品的制备方法,包括将原料混合均匀,并执行冷冻干燥,得所述脂联素测定试剂质控品。
Description
技术领域
本发明涉及生化检测技术领域,特别是涉及一种脂联素测定试剂质控品及制备方法。
背景技术
脂联素测定试剂盒用于体外定量检测血清、血浆中的脂联素含量,临床上用于评估2型糖尿病和心血管疾病的风险。
试剂盒中包括脂联素测定试剂、校准品和质控品,采用校准品对样品进行校准,利用校准品能生成校准***,然后再采用质控品检测校准***是否合格,因此质控品要求具有较高的精度和稳定性。目前,脂联素测定试剂质控品主要由脂联素蛋白和磷酸缓冲液组成。
现有的脂联素测定试剂质控品成分较单一,且多为液体,产品开封后难以保存,若未使用完则需丢弃,造成资源浪费。
发明内容
本发明的一个目的在于提出一种稳定易保存的脂联素测定试剂质控品。
一种脂联素测定试剂质控品,包括以下组分的冻干品:
磷酸盐缓冲液50~80份,
碘化钠1~2份,
0.02~0.1份的维生素B1,
0.01~0.05份的柠檬酸钠,
牛血清5~10份,
脂联素蛋白0.1~0.5份,
蔗糖2~5份,
防腐剂1~2份。
本发明的有益效果是:质控品为冻干品,能大大提升质控品在使用前的稳定性,易于保存;磷酸盐缓冲液能便于质控品的制备成型,防腐剂延长质控品的质量,碘化钠、维生素B1和柠檬酸钠能提高产品的稳定性,蔗糖能防止纯品脂联素在制备过程中失活。
另外,根据本发明提供的脂联素测定试剂质控品,还可以具有如下附加的技术特征:
进一步地,所述磷酸盐缓冲液由磷酸氢二钠和磷酸二氢钾组成,二者的质量比为4:1。
本发明的另一个目的在于提出一种上述脂联素测定试剂质控品的制备方法,包括以下步骤:
(1)取所述脂联素蛋白,加入磷酸盐缓冲液稀释,得稀释液;
(2)向所述稀释液中加入柠檬酸钠,保温搅拌,将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液,所述第一混合液和所述第二混合液的质量比为5:1~2;
(3)向所述第一混合液中加入碘化钠,混合均匀,并滴入维生素B1,该过程中持续向所述第一混合液中通入氧气,得第一冻干液;
(4)向所述第二混合液中加入牛血清,搅拌均匀,搅拌过程中持续向所述第二混合液中通入二氧化碳,得第二冻干液;
(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合,加入蔗糖和防腐剂,执行冷冻干燥,得所述脂联素测定试剂质控品。
进一步地,所述磷酸缓冲液的浓度为50~400mmol/L,所述碘化钠的浓度为0.5~1mol/L,所述维生素B1的浓度为100~500mmol/L,所述柠檬酸钠的浓度为50~200mmol/L,所述脂联素蛋白的浓度为50~100mg/L,所述牛血清的浓度为30~95%。
进一步地,所述步骤(2)中的所述保温搅拌为在30℃下恒温搅拌10~20min。
进一步地,所述步骤(3)中滴入维生素B1的速率为1~5mg/min。
进一步地,所述步骤(3)中通入氧气的量为50~100mL/min,氧气的浓度为85%。
进一步地,所述步骤(4)中通入二氧化碳的量为10~60mL/min,二氧化碳的浓度为50%。
进一步地,所述步骤(5)中冷冻干燥的步骤包括:
第一预冷冻,将待冻干液置于-30℃~-70℃的环境下保持8~12小时;
第二预冷冻,将待冻干液置于-60℃~-100℃的环境下保持1~3小时;
真空冷冻干燥,将待冻干液置于-20℃~-60℃的负压环境下保持24~48小时。
进一步地,所述真空冷冻干燥的负压环境为5~10Pa,温度为从-60℃开始以0.5~1℃/h的升温速率升温至所述真空冷冻干燥结束。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出,部分将从下面的描述中变得明显,或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
为使本发明的目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。但是,本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施例。相反地,提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容更加透彻全面。
实施例1
一种脂联素测定试剂质控品,其特征在于,包括以下组分的冻干品:
磷酸盐缓冲液50份,
碘化钠1份,
0.02份的维生素B1,
0.01份的柠檬酸钠,
牛血清5份,
脂联素蛋白0.1份,
蔗糖2份,
防腐剂1份。
本发明的优势在于,质控品为冻干品,能大大提升质控品在使用前的稳定性,易于保存;磷酸盐缓冲液能便于质控品的制备成型,防腐剂延长质控品的质量,碘化钠、维生素B1和柠檬酸钠能提高产品的稳定性,蔗糖能防止纯品脂联素在制备过程中失活。
具体的,所述磷酸盐缓冲液由磷酸氢二钠和磷酸二氢钾组成,二者的质量比为4:1,在该条件下,磷酸盐缓冲液的PH值为7.4,能对脂联素蛋白起保护作用。
在本实施例中,防腐剂为山梨酸。
上述脂联素测定试剂质控品的制备方法,包括以下步骤:
(1)取所述脂联素蛋白,加入磷酸盐缓冲液稀释,得稀释液;
(2)向所述稀释液中加入柠檬酸钠,保温搅拌,将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液,所述第一混合液和所述第二混合液的质量比为5:1;
(3)向所述第一混合液中加入碘化钠,混合均匀,并滴入维生素B1,该过程中持续向所述第一混合液中通入氧气,得第一冻干液;
(4)向所述第二混合液中加入牛血清,搅拌均匀,搅拌过程中持续向所述第二混合液中通入二氧化碳,得第二冻干液;
(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合,加入蔗糖和防腐剂,执行冷冻干燥,得所述脂联素测定试剂质控品。
需要说明的是,在制备方法中,除蔗糖和防腐剂为固态外,其他成分均为溶液。
在本实施例中,将稀释液分为两份,较多的一份加入碘化钠和维生素能提高脂联素蛋白的稳定性,通入氧气能促进脂联素蛋白的稳定性,通入二氧化碳能调节溶液的酸度,提升保存效果。
进一步地,所述磷酸缓冲液的浓度为50mmol/L,所述碘化钠的浓度为0.5mol/L,所述维生素B1的浓度为100mmol/L,所述柠檬酸钠的浓度为50mmol/L,所述脂联素蛋白的浓度为50mg/L,所述牛血清的浓度为60%。
具体的,所述步骤(2)中的所述保温搅拌为在30℃下恒温搅拌15min。
另外,所述步骤(3)中滴入维生素B1的速率为1mg/min,通入氧气的量为50mL/min,氧气的浓度为85%。
另外,所述步骤(4)中通入二氧化碳的量为10mL/min,二氧化碳的浓度为50%,其余组分为氮气和氧气。
具体的,所述步骤(5)中冷冻干燥的步骤包括:
第一预冷冻,将待冻干液置于-30℃℃的环境下保持8小时;
第二预冷冻,将待冻干液置于-60℃℃的环境下保持1小时;
真空冷冻干燥,将待冻干液置于负压环境下保持36小时,所述真空冷冻干燥的负压环境为5Pa,温度为从-60℃开始以0.5℃/h的升温速率升温至所述真空冷冻干燥结束。
实施例2
一种脂联素测定试剂质控品,其特征在于,包括以下组分的冻干品:
磷酸盐缓冲液80份,
碘化钠2份,
0.1份的维生素B1,
0.05份的柠檬酸钠,
牛血清10份,
脂联素蛋白0.5份,
蔗糖5份,
防腐剂2份。
具体的,所述磷酸盐缓冲液由磷酸氢二钠和磷酸二氢钾组成,二者的质量比为4:1,在该条件下,磷酸盐缓冲液的PH值为7.4,能对脂联素蛋白起保护作用。
上述脂联素测定试剂质控品的制备方法,包括以下步骤:
(1)取所述脂联素蛋白,加入磷酸盐缓冲液稀释,得稀释液;
(2)向所述稀释液中加入柠檬酸钠,保温搅拌,将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液,所述第一混合液和所述第二混合液的质量比为5:1;
(3)向所述第一混合液中加入碘化钠,混合均匀,并滴入维生素B1,该过程中持续向所述第一混合液中通入氧气,得第一冻干液;
(4)向所述第二混合液中加入牛血清,搅拌均匀,搅拌过程中持续向所述第二混合液中通入二氧化碳,得第二冻干液;
(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合,加入蔗糖,执行冷冻干燥,得所述脂联素测定试剂质控品。
具体的,所述磷酸缓冲液的浓度为400mmol/L,所述碘化钠的浓度为1mol/L,所述维生素B1的浓度为500mmol/L,所述柠檬酸钠的浓度为200mmol/L,所述脂联素蛋白的浓度为100mg/L,所述牛血清的浓度为95%。
进一步地,所述步骤(2)中的所述保温搅拌为在30℃下恒温搅拌15min。
进一步地,所述步骤(3)中滴入维生素B1的速率为5mg/min。
进一步地,所述步骤(3)中通入氧气的量为100mL/min,氧气的浓度为85%。
进一步地,所述步骤(4)中通入二氧化碳的量为60mL/min,二氧化碳的浓度为50%。
进一步地,所述步骤(5)中冷冻干燥的步骤包括:
第一预冷冻,将待冻干液置于-70℃的环境下保持12小时;
第二预冷冻,将待冻干液置于-100℃的环境下保持3小时;
真空冷冻干燥,将待冻干液置于负压环境下保持36小时,所述真空冷冻干燥的负压环境为5Pa,温度为从-60℃开始以1℃/h的升温速率升温至所述真空冷冻干燥结束。
实施例3
一种脂联素测定试剂质控品,其特征在于,包括以下组分的冻干品:
磷酸盐缓冲液60份,
碘化钠2份,
0.1份的维生素B1,
0.02份的柠檬酸钠,
牛血清7份,
脂联素蛋白0.5份,
蔗糖5份,
防腐剂1份。
具体的,所述磷酸盐缓冲液由磷酸氢二钠和磷酸二氢钾组成,二者的质量比为4:1,在该条件下,磷酸盐缓冲液的PH值为7.4,能对脂联素蛋白起保护作用。
上述脂联素测定试剂质控品的制备方法,包括以下步骤:
(1)取所述脂联素蛋白,加入磷酸盐缓冲液稀释,得稀释液;
(2)向所述稀释液中加入柠檬酸钠,保温搅拌,将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液,所述第一混合液和所述第二混合液的质量比为5:1;
(3)向所述第一混合液中加入碘化钠,混合均匀,并滴入维生素B1,该过程中持续向所述第一混合液中通入氧气,得第一冻干液;
(4)向所述第二混合液中加入牛血清,搅拌均匀,搅拌过程中持续向所述第二混合液中通入二氧化碳,得第二冻干液;
(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合,加入蔗糖,执行冷冻干燥,得所述脂联素测定试剂质控品。
进一步地,所述磷酸缓冲液的浓度为200mmol/L,所述碘化钠的浓度为1mol/L,所述维生素B1的浓度为200mmol/L,所述柠檬酸钠的浓度为50mmol/L,所述脂联素蛋白的浓度为100mg/L,所述牛血清的浓度为60%。
具体的,所述步骤(2)中的所述保温搅拌为在30℃下恒温搅拌20min。
另外,所述步骤(3)中滴入维生素B1的速率为5mg/min,通入氧气的量为100mL/min,氧气的浓度为85%。
另外,所述步骤(4)中通入二氧化碳的量为60mL/min,二氧化碳的浓度为50%。
具体的,所述步骤(5)中冷冻干燥的步骤包括:
第一预冷冻,将待冻干液置于-50℃的环境下保持12小时;
第二预冷冻,将待冻干液置于-80℃的环境下保持3小时;
真空冷冻干燥,将待冻干液置于负压环境下保持36小时,所述真空冷冻干燥的负压环境为5Pa,温度为从-60℃开始以0.5℃/h的升温速率升温至所述真空冷冻干燥结束。
对照例1
本对照例与实施例3基本一致,不同之处在于:
本对照例未将稀释液分为两份,且未通入氧气和二氧化碳。
对照例2
本对照例与实施例3基本一致,不同之处在于:
本对照例直接将维生素B1与第一混合液混合。
对照例3
本对照例与实施例3基本一致,不同之处在于:
本对照例未通入氧气和二氧化碳。
对照例4
本对照例与实施例3基本一致,不同之处在于:
冷冻干燥的步骤为:
预冷冻,将所述冻干材料置于-70℃的环境下保持24小时;
真空冷冻干燥,将待冻干液负压环境下保持36小时,负压环境为5Pa,环境温度为-60℃。
取上述实施例和对照例所得质控品,分为低值组、中值组和高值组加水复溶,其初始浓度分别为30mg/L、60mg/L和120mg/L,连续检测7天浓度,计算其变异系数CV,结果见表1。
表1
分组 | 低值组CV(%) | 中值组CV(%) | 高值组CV(%) |
实施例1 | 2.53 | 2.11 | 0.95 |
实施例2 | 1.83 | 1.94 | 0.57 |
实施例3 | 0.88 | 1.37 | 0.48 |
对照例1 | 5.06 | 5.64 | 3.38 |
对照例2 | 2.55 | 2.97 | 2.31 |
对照例3 | 2.16 | 2.37 | 1.85 |
对照例4 | 2.82 | 3.10 | 2.69 |
由于对质控品的精度要求较高,因此,针对质控品需对不同ADPN浓度的进行测定,当所测得结果均满足要求时,才证明该脂联素测定试剂质控品为合格产品。本发明分别采用低值组、中组组和高值组进行检测,并以7天内ADPN浓度变化的变异系数作为参考,评价质控品的稳定性。CV值越小说明质控品越稳定,越易于保存,当三组均满足CV<3%时,判断其为合格产品。
从表1可以看出,实施例1~3较对照例1~4均达到了更好的效果,即实施例的CV值普遍低于对照例的,说明本发明的技术方案能达到更优的效果。
另外,对比实施例3和对照例1~4可知,实施例3的CV值明显低于对照例,则对照例在舍弃实施例3中的条件时,会导致质控品的质量下降。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种脂联素测定试剂质控品,其特征在于,包括以下组分的冻干品:
磷酸盐缓冲液50~80份,
碘化钠1~2份,
0.02~0.1份的维生素B1,
0.01~0.05份的柠檬酸钠,
牛血清5~10份,
脂联素蛋白0.1~0.5份,
蔗糖2~5份,
防腐剂1~2份。
2.根据权利要求1所述的脂联素测定试剂质控品,其特征在于,所述磷酸盐缓冲液由磷酸氢二钠和磷酸二氢钾组成,二者的质量比为4:1。
3.根据权利要求1~3任意一项所述的脂联素测定试剂质控品的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)取所述脂联素蛋白,加入磷酸盐缓冲液稀释,得稀释液;
(2)向所述稀释液中加入柠檬酸钠,保温搅拌,将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液,所述第一混合液和所述第二混合液的质量比为5:1~2;
(3)向所述第一混合液中加入碘化钠,混合均匀,并滴入维生素B1,该过程中持续向所述第一混合液中通入氧气,得第一冻干液;
(4)向所述第二混合液中加入牛血清,搅拌均匀,搅拌过程中持续向所述第二混合液中通入二氧化碳,得第二冻干液;
(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合,加入蔗糖和防腐剂,执行冷冻干燥,得所述脂联素测定试剂质控品。
4.根据权利要求3所述的脂联素测定试剂质控品的制备方法,其特征在于,所述磷酸缓冲液的浓度为50~400mmol/L,所述碘化钠的浓度为0.5~1mol/L,所述维生素B1的浓度为100~500mmol/L,所述柠檬酸钠的浓度为50~200mmol/L,所述脂联素蛋白的浓度为50~100mg/L,所述牛血清的浓度为30~95%。
5.根据权利要求3所述的脂联素测定试剂质控品的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中的所述保温搅拌为在30℃下恒温搅拌10~20min。
6.根据权利要求3所述的脂联素测定试剂质控品的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中滴入维生素B1的速率为1~5mg/min。
7.根据权利要求3所述的脂联素测定试剂质控品的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中通入氧气的量为50~100mL/min,氧气的浓度为85%。
8.根据权利要求3所述的脂联素测定试剂质控品的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)中通入二氧化碳的量为10~60mL/min,二氧化碳的浓度为50%。
9.根据权利要求3所述的脂联素测定试剂质控品的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)中冷冻干燥的步骤包括:
第一预冷冻,将待冻干液置于-30℃~-70℃的环境下保持8~12小时;
第二预冷冻,将待冻干液置于-60℃~-100℃的环境下保持1~3小时;
真空冷冻干燥,将待冻干液置于-20℃~-60℃的负压环境下保持24~48小时。
10.根据权利要求9所述的脂联素测定试剂质控品的制备方法,其特征在于,所述真空冷冻干燥的负压环境为5~10Pa,温度为从-60℃开始以0.5~1℃/h的升温速率升温至所述真空冷冻干燥结束。
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