CN111487401A - 体液肿瘤细胞pdl1检测试剂盒 - Google Patents

体液肿瘤细胞pdl1检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，用于分离和鉴定已经脱离实体瘤进入体液中的肿瘤细胞，具有这样的特征，包括：细胞过滤器，用于对体液进行过滤得到体液肿瘤细胞；第一细胞固定液，用于对体液肿瘤细胞进行第一次固定；第二细胞固定液，用于对经过第一次固定的体液肿瘤细胞进行第二次固定；第一抗体，用于与体液肿瘤细胞进行结合；第二抗体，用于与第一抗体进行结合；以及核酸荧光染色液，其中，第一细胞固定液为琼脂糖溶液，该琼脂糖溶液的质量体积浓度为0.04％～0.08％，第二细胞固定液为多聚甲醛溶液，该多聚甲醛溶液的体积浓度为3％～5％，第一抗体为PDL1抗体，第二抗体为荧光标记的二抗。

Description

体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒
技术领域
本发明涉及生物技术与生物医学领域，具体涉及一种体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒。
背景技术
细胞程序式死亡配体1(PDL1)，也叫表面抗原分化簇274(CD274)或B7同源体(B7-H1)，它是人类体内由CD274基因编码的一种蛋白质。肿瘤通过表达PDL1来诱导形成免疫抑制性的肿瘤微环境，逃避机体的抗肿瘤免疫反应，使肿瘤细胞免于机体免疫***的监视和清除。目前通常使用免疫组织化学方法来检测癌症患者组织标本中的PDL1蛋白表达情况，该方法被认为是PDL1检测的金标准。但是对于肿瘤组织无法切除、穿刺组织易造成肿瘤扩散以及部分存在手术禁忌的癌症患者，PDL1状态评估非常困难。另外，对于肿瘤转移、复发早期的患者，由于获得肿瘤组织样本较为困难，从而无法评估PDL1的状态。
体液肿瘤细胞通常是指因自发或诊疗操作引起的从原发灶或转移灶侵入人体液的肿瘤细胞。体液肿瘤细胞一般以单细胞或者细胞团的形式存在于循环***中。大部分侵入循环***的肿瘤细胞会在短期内死亡，只有极少数具有高度转移倾向和活力的肿瘤细胞才能存活下来，相互聚集成团，并在一定条件下发展为转移灶。进入体液循环是发生肿瘤转移的必要条件，因此在体液中检测到肿瘤细胞预示着将有可能发生肿瘤转移，目前临床已经采用肿瘤细胞作为评估肿瘤预后的参考指标之一。近年来，肿瘤细胞在临床应用的研究获得了长足的发展，越来越的研究表明其可以为多种肿瘤提供重要的预后信息，如转移性乳腺癌，直肠癌，***癌等。由于肿瘤细胞检测的对象是血液、尿液、痰液、胸腔积液，脑脊液等标本，取材比传统意义上的组织活检更方便，而且可重复性强，而被称之为“液态的活检”。
体液肿瘤细胞的检测一般分为两个步骤：肿瘤细胞的分离以及肿瘤细胞的鉴定。肿瘤细胞的分离方法常见为：密度梯度离心法、红细胞裂解法、阴性选择富集法、膜滤过法及CellScarch等。肿瘤细胞的鉴定方法多为荧光鉴定法。但是，很难将膜过滤法与免疫荧光鉴定法结合以综合评估PDL1的表达状态，这是因为体液中的肿瘤细胞的数目非常少，经过膜过滤后，很难将如此数目稀少的肿瘤细胞进行很好地固定使其经过一系列的免疫荧光处理后仍然能够得以保留从而在荧光显微镜下进行检测。
发明内容
本发明是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒。
本发明提供了一种体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，用于分离和鉴定已经脱离实体瘤进入体液中的肿瘤细胞，具有这样的特征，包括：细胞过滤器，用于对体液进行过滤得到体液肿瘤细胞；第一细胞固定液，用于对体液肿瘤细胞进行第一次固定；第二细胞固定液，用于对经过第一次固定的体液肿瘤细胞进行第二次固定；第一抗体，用于与体液肿瘤细胞进行结合；第二抗体，用于与第一抗体进行结合；以及核酸荧光染色液，用于对体液肿瘤细胞的细胞核进行染色，其中，第一细胞固定液为琼脂糖溶液，该琼脂糖溶液的质量体积浓度为0.04％～0.08％，第二细胞固定液为多聚甲醛溶液，该多聚甲醛溶液的体积浓度为3％～5％，第一抗体为PDL1抗体，第二抗体为荧光标记的二抗。
在本发明提供的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，琼脂糖溶液的质量体积浓度为0.05％。
在本发明提供的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，第二抗体为荧光标记山羊抗小鼠的二抗。
在本发明提供的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，细胞过滤器包括装样管和设置在装样管内的微孔滤膜，装样管为容量为50mL的塑料管，微孔滤膜的微孔孔径为2μm～5μm。
在本发明提供的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，核酸荧光染色液为DAPI。
在本发明提供的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒中，还可以具有这样的特征，还包括：其中，破膜液，为含聚乙二醇辛基苯基醚和PBS的质量与体积比为64.2mg:1mL的溶液，pH为7.4。
在本发明提供的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒中，还可以具有这样的特征，还包括：其中，封闭液，为含牛血清白蛋白和DMEM培养基溶液的质量与体积比为3.0g:100mL的无菌溶解，pH为7.4。
在本发明提供的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒中，还可以具有这样的特征，还包括：其中，封片液，为抗荧光淬灭封片液。
在本发明提供的体液肿瘤细胞PDL1检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，体液包括血液、尿液、唾液、胸腔积液、痰液以及脑脊液。
发明的作用与效果
根据本发明所涉及的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，因为包括细胞过滤器、第一细胞固定液、第二细胞固定液、第一抗体、第二抗体以及核酸荧光染色液，其中，第一细胞固定液为质量体积浓度为0.04％～0.08％的琼脂糖溶液，第二细胞固定液为3％～5％的多聚甲醛溶液，因此，通过细胞过滤器能够对体液进行过滤从而将体液肿瘤细胞从体液中分离出来，然后将分离的体液肿瘤细胞从滤膜上洗脱下来后涂于载玻片，晾干后用琼脂糖溶液进行固定，晾干后再用多聚甲醛溶液进行固定，从而能够将数量较少的体液肿瘤细胞进行很好地固定，然后再用破膜液、封闭液、第一抗体、第二抗体、核酸荧光染色液以及封片液进行免疫荧光处理后就能够在荧光显微镜下直接观察体液肿瘤细胞PDL1的表达情况。既解决了现有技术中获取肿瘤组织样本所带来的问题，又解决了体液肿瘤细胞的固定问题，因此通过将膜过滤法与免疫荧光鉴定法进行结合能够快速、高效地综合评估PDL1的表达状态。
附图说明
图1是本发明的实施例二中体液肿瘤细胞PDL1检测方法的流程图；
图2是本发明的实施例三中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒用于乳腺癌细胞检测镜下观察图；
图3是本发明的实施例四中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒用于乳腺癌患者血液样本的检测镜下观察图；
图4是本发明的实施例五中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒用于***癌患者尿液样本的检测镜下观察图；
图5是本发明的实施例六中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒用于脑胶质瘤患者脑脊液样本的检测镜下观察图；
图6是本发明的实施例七中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒用于胃癌患者胸腔积液样本的检测镜下观察图；以及
图7是本发明的实施例八中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒用于肺癌患者痰液样本的检测镜下观察图。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，以下实施例结合附图对本发明体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒作具体阐述。
<实施例一>
本实施例提供了一种体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，用于分离和鉴定已经脱离实体瘤进入体液中的肿瘤细胞，包括：细胞过滤器、第一细胞固定液、第二细胞固定液、破膜液、封闭液、第一抗体、第二抗体、核酸荧光染色液以及封片液。
细胞过滤器包括装样管和设置在装样管内的微孔滤膜。装样管内设置有支撑件，微孔滤膜固定在支撑件上从而将装样管内分隔成上、下两个容纳空间，其中上容纳空间用于盛放体液样品，下容纳空间用于盛装滤液。装样管为容量为50mL的塑料管，微孔滤膜的微孔孔径为2μm～5μm。优选地，微孔滤膜的微孔孔径为3μm。
本实施例中的体液样本包括血液、尿液、脑脊液、胸腔积液、痰液以及唾液等中的任意一种。
第一细胞固定液用于对体液肿瘤细胞进行第一次固定，为琼脂糖溶液。该琼脂糖溶液的质量体积浓度为0.04％～0.08％。优选地，琼脂糖溶液的质量体积浓度为0.05％。
第二细胞固定液用于对经过第一次固定的体液肿瘤细胞进行第二次固定，为多聚甲醛溶液。该多聚甲醛溶液的体积浓度为3％～5％。优选地，多聚甲醛溶液的体积浓度为4％。
破膜液为含聚乙二醇辛基苯基醚和PBS的质量与体积比为64.2mg:1mL的溶液，pH为7.4。
封闭液为含牛血清白蛋白和DMEM培养基溶液的质量与体积比为3.0g:100mL的无菌溶解，pH为7.4。
第一抗体为PDL1抗体。
第二抗体为荧光标记山羊抗小鼠的二抗。
核酸荧光染色液为DAPI。
封片液为抗荧光淬灭封片液。
<实施例二>
本实施例提供了一种体液肿瘤细胞PDL1检测方法，该检测方法利用实施例一中的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒来对癌症患者的体液中的肿瘤细胞PDL1的表达水平进行检测。
图1是本发明的实施例二中体液肿瘤细胞PDL1检测方法的流程图。
如图1所示，本实施例中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法包括以下步骤：
步骤S1，细胞分离。
细胞分离的具体过程为：
步骤S1-1，将采集的体液样本移入细胞过滤器中，然后将细胞过滤器置入离心机。然后执行步骤S1-2。
步骤S1-2，设置离心转速为800rpm，离心时间为3min，开始离心。然后执行步骤S1-3。
步骤S1-3，向细胞过滤器中加入2mLPBS将膜上细胞清洗下来，并置入新的离心管中。然后执行步骤S2-1。
步骤S2，细胞爬片。
细胞爬片的具体过程为：
步骤S2-1，将离心管置入离心机进行离心，离心力为1000rpm，时间为5min。然后执行步骤S2-2。
步骤S2-2，吸弃上清，下层预留30μL～50μL细胞溶液然后执行步骤S3-3。
步骤S2-3，将预留的细胞溶液完全吸尽，涂于防脱载玻片上，待干(自然晾干)。然后执行步骤S3-1。
步骤S3，细胞固定。
细胞固定的具体过程为：
步骤S3-1，向防脱载玻片上的细胞上滴加50μL的第一细胞固定液，待干(自然晾干)。然后执行步骤S3-2。
步骤S3-2，向防脱载玻片上的细胞上滴加50μL的第二细胞固定液，常温下固定10min，PBS洗3次，每次5min。然后执行步骤S3-3。
步骤S3-3，轻甩防脱载玻片，将PBS甩干后用组化笔在防脱载玻片上细胞分布均匀的位置画圈，并加入100μL破膜液，PBS洗3次，每次5min。然后执行步骤S4-1。
步骤S4，细胞免疫荧光染色。
细胞免疫荧光染色的具体过程为：
步骤S4-1，封闭。即，加入100μL封闭液，室温封闭30min。然后执行步骤S4-2。
步骤S4-2，第一抗体孵育。即，去除封闭液后，在圈内滴加用PBS稀释好的第一抗体50μL，稀释比为1：200，平放于湿盒内4℃孵育过夜。然后执行步骤S4-3。
步骤S4-3，第二抗体孵育。即，用PBS洗涤3次，每次5min。去除PBS后在圈内滴加用PBS稀释好的第二抗体50μL，稀释比为1：400，避光常温孵育60min。然后执行步骤S4-4。
步骤S4-4，核酸荧光染色。即，用PBS洗涤3次，每次5min。去除PBS后在圈内滴加核酸荧光染色液，避光室温孵育10min。然后执行步骤S5。
步骤S5，封片。
即，用PBS洗涤3次，每次5min。去除PBS后用抗荧光淬灭封片液将玻片封固在载玻片上封片。然后执行步骤S6。
步骤S6，镜检。
即，将封片进行荧光显微镜拍照观察。
核酸荧光染色液的紫外激发波长330nm～380nm，发射波长420nm，发蓝光；荧光标记的第二抗体激发波长465nm～495nm，发射波长515nm～555nm，发绿光。
<实施例三>
本实施例为采用实施例一中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒并按照实施例二中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法对乳腺癌(SKBR3)细胞的PDL1表达水平进行检测。
首先，进行样本制备。即取常规传代培养的乳腺癌细胞(SKBR3)进行计数，取1×106个置于15mL离心管中，用7.5mLPBS缓冲溶液稀释得到待测样本。
然后使用实施例一中的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒将待测样本按照实施例二中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法进行处理，荧光显微镜下的检测结果如图2所示。
图2是本发明的实施例三中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒用于乳腺癌细胞检测镜下观察图。
如图2所示，A为封片在核酸荧光染色液对应的激发波长和发射波长下的蓝色图片，B为封片的同一位置在第二抗体对应的激发波长和发射波长下的绿色图片，C为A和B的重叠图。从图2可以看出，该细胞的细胞核被DAPI着染并且细胞的表面结合有第二抗体，表明该细胞是PDL1表达了的癌细胞。
<实施例四>
本实施例为采用实施例一中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒并按照实施例二中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法对乳腺癌患者血液样本进行检测。
首先，进行样本采集。即用医用抗凝采血管采集医院乳腺癌患者血液7.5mL作为待测样本，抗凝剂为EDTA·K2。4℃保存，在存储、处理和运输过程中避免冷冻，48h内进行检测(样本采集单位有科研合作项目，经医院伦理委员会同意，并与患者签署知情同意书)。
然后使用实施例一中的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒将待测样本按照实施例二中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法进行处理，荧光显微镜下的检测结果如图3所示。
图3是本发明的实施例四中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒用于乳腺癌患者血液样本的检测镜下观察图。
如图3所示，A为封片在核酸荧光染色液对应的激发波长和发射波长下的蓝色图片，B为封片的同一位置在第二抗体对应的激发波长和发射波长下的绿色图片，C为A和B的重叠图。从图3可以看出，该细胞的细胞核被DAPI着染并且细胞的表面结合有第二抗体，表明该细胞是PDL1表达了的癌细胞。
<实施例五>
本实施例为采用实施例一中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒并按照实施例二中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法对***癌患者尿液样本进行检测。
首先，进行样本采集。即用无菌管采集***癌患者尿液样本15mL作为待测样本。4℃保存，在存储、处理和运输过程中避免冷冻，48h内进行检测(样本采集单位有科研合作项目，经医院伦理委员会同意，并与患者签署知情同意书)。
然后使用实施例一中的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒将待测样本按照实施例二中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法进行处理，荧光显微镜下的检测结果如图4所示。
图4是本发明的实施例五中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒用于***癌患者尿液样本的检测镜下观察图。
如图4所示，A为封片在核酸荧光染色液对应的激发波长和发射波长下的蓝色图片，B为封片的同一位置在第二抗体对应的激发波长和发射波长下的绿色图片，C为A和B的重叠图。从图4可以看出，该细胞的细胞核被DAPI着染并且细胞的表面结合有第二抗体，表明该细胞是PDL1表达了的癌细胞。
<实施例六>
本实施例为采用实施例一中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒并按照实施例二中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法对脑胶质瘤患者脑脊液样本进行检测。
首先，进行样本采集。即用无菌玻璃管采集脑胶质瘤患者脑脊液样本7.5mL作为待测样本。4℃保存，在存储、处理和运输过程中避免冷冻，48h内进行检测(样本采集单位有科研合作项目，经医院伦理委员会同意，并与患者签署知情同意书)。
然后使用实施例一中的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒将待测样本按照实施例二中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法进行处理，荧光显微镜下的检测结果如图5所示。
图5是本发明的实施例六中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒用于脑胶质瘤患者脑脊液样本的检测镜下观察图。
如图5所示，A为封片在核酸荧光染色液对应的激发波长和发射波长下的蓝色图片，B为封片的同一位置在第二抗体对应的激发波长和发射波长下的绿色图片，C为A和B的重叠图。从图5可以看出，该细胞的细胞核被DAPI着染并且细胞的表面结合有第二抗体，表明该细胞是PDL1表达了的癌细胞。
<实施例七>
本实施例为采用实施例一中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒并按照实施例二中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法对胃癌患者胸腔积液样本进行检测。
首先，进行样本采集。即用无菌玻璃管采集胃癌患者胸腔积液样本7.5mL作为待测样本。4℃保存，在存储、处理和运输过程中避免冷冻，48h内进行检测(样本采集单位有科研合作项目，经医院伦理委员会同意，并与患者签署知情同意书)。
然后使用实施例一中的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒将待测样本按照实施例二中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法进行处理，荧光显微镜下的检测结果如图6所示。
图6是本发明的实施例七中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒用于胃癌患者胸腔积液样本的检测镜下观察图。
如图6所示，A为封片在核酸荧光染色液对应的激发波长和发射波长下的蓝色图片，B为封片的同一位置在第二抗体对应的激发波长和发射波长下的绿色图片，C为A和B的重叠图。从图6可以看出，该细胞的细胞核被DAPI着染并且细胞的表面结合有第二抗体，表明该细胞是PDL1表达了的癌细胞。
<实施例八>
本实施例为采用实施例一中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒并按照实施例二中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法对肺癌患者痰液样本进行检测。
首先，进行样本采集。即用无菌玻璃管采集肺癌患者痰液样本3mL(约1mL/次，取3次)作为待测样本。4℃保存，在存储、处理和运输过程中避免冷冻，48h内进行检测(样本采集单位有科研合作项目，经医院伦理委员会同意，并与患者签署知情同意书)。
然后使用实施例一中的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒将待测样本按照实施例二中的体液肿瘤细胞PDL1检测方法进行处理，荧光显微镜下的检测结果如图7所示。
图7是本发明的实施例八中体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒用于肺癌患者痰液样本的检测镜下观察图。
如图7所示，A为封片在核酸荧光染色液对应的激发波长和发射波长下的蓝色图片，B为封片的同一位置在第二抗体对应的激发波长和发射波长下的绿色图片，C为A和B的重叠图。从图7可以看出，该细胞的细胞核被DAPI着染并且细胞的表面结合有第二抗体，表明该细胞是PDL1表达了的癌细胞。
实施例的作用与效果
根据本实施例一所涉及的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，因为包括细胞过滤器、第一细胞固定液、第二细胞固定液、破膜液、封闭液、第一抗体、第二抗体、核酸荧光染色液以及封片液，其中，细胞过滤器具有微孔滤膜，第一细胞固定液为质量体积浓度为0.04％～0.08％的琼脂糖溶液，第二细胞固定液为4％的多聚甲醛溶液，因此，通过细胞过滤器能够对体液进行过滤从而将体液肿瘤细胞从体液中分离出来，然后将分离的体液肿瘤细胞从滤膜上洗脱下来后涂于载玻片，晾干后用琼脂糖溶液进行固定，晾干后再用多聚甲醛溶液进行固定，从而能够将数量较少的体液肿瘤细胞进行很好地固定，然后再用破膜液、封闭液、第一抗体、第二抗体、核酸荧光染色液以及封片液进行免疫荧光处理后就能够在荧光显微镜下直接观察体液肿瘤细胞PDL1的表达情况。既解决了现有技术中获取肿瘤组织样本所带来的问题，又解决了体液肿瘤细胞的固定问题，因此通过将膜过滤法与免疫荧光鉴定法进行结合能够快速、高效地综合评估PDL1的表达状态。
实施例一中的微孔滤膜的微孔孔径为2μm～5μm，这一孔径范围能够使得大于5μm的细胞留在滤膜上而直径较小的细胞及呈圆饼状的红细胞通过离心后则被过滤下去，配合离心作用，过滤效果好。
上述实施方式为本发明的优选案例，并不用来限制本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，用于分离和鉴定已经脱离实体瘤进入体液中的肿瘤细胞，其特征在于，包括：
细胞过滤器，用于对体液进行过滤得到体液肿瘤细胞；
第一细胞固定液，用于对所述体液肿瘤细胞进行第一次固定；
第二细胞固定液，用于对经过第一次固定的所述体液肿瘤细胞进行第二次固定；
第一抗体，用于与所述体液肿瘤细胞进行结合；
第二抗体，用于与所述第一抗体进行结合；以及
核酸荧光染色液，用于对所述体液肿瘤细胞的细胞核进行染色，
其中，所述第一细胞固定液为琼脂糖溶液，该琼脂糖溶液的质量体积浓度为0.04％～0.08％，
所述第二细胞固定液为多聚甲醛溶液，该多聚甲醛溶液的体积浓度为3％～5％，
所述第一抗体为PDL1抗体，
所述第二抗体为荧光标记的二抗。
2.根据权利要求1所述的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述琼脂糖溶液的质量体积浓度为0.05％。
3.根据权利要求1所述的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述第二抗体为荧光标记山羊抗小鼠的二抗。
4.根据权利要求1所述的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述细胞过滤器包括装样管和设置在装样管内的微孔滤膜，所述装样管为容量为50mL的塑料管，
所述微孔滤膜的微孔孔径为2μm～5μm。
5.根据权利要求1所述的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述核酸荧光染色液为DAPI。
6.根据权利要求1所述的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，其特征在于，还包括：
破膜液，为含聚乙二醇辛基苯基醚和PBS的质量与体积比为64.2mg:1mL的溶液，pH为7.4。
7.根据权利要求1所述的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，其特征在于，还包括：
封闭液，为含牛血清白蛋白和DMEM培养基溶液的质量与体积比为3.0g:100mL的无菌溶解，pH为7.4。
8.根据权利要求1所述的体液肿瘤细胞PDL1检测试剂盒，其特征在于，还包括：
封片液，为抗荧光淬灭封片液。
9.根据权利要求1所述的体液肿瘤细胞PDL1检测方法，其特征在于：
其中，所述体液包括血液、尿液、唾液、胸腔积液、痰液以及脑脊液。
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