CN111471056B - 一种大环类免疫调节剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种大环类免疫调节剂，公开了式I所示的化合物及其互变异构体、对映异构体，或其药学上可接受的盐、晶型、水合物或溶剂合物。实验结果表明，本发明的化合物能够与STING有效结合，具有良好的STING蛋白激动功能。所以，本发明的化合物可作为STING激动剂并用于治疗各种相关病症。本发明提供的化合物在制备治疗与STING活性相关的疾病的药物，特别是在制备治疗炎性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症或癌前期综合征的药物中具有非常好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于药物领域，涉及一种大环类免疫调节剂。
背景技术
人体的免疫***通常可分为“天然免疫”和“适应免疫”***。天然免疫***在抵抗感染、抑制肿瘤生长以及自身免疫疾病的发病过程中起着重要作用，主要通过模式识别受体识别病原微生物和癌细胞组分，启动下游信号通路，最终通过诱导细胞因子表达，杀灭病原微生物和癌细胞组分，以及适应免疫***促进抗体和特异性T淋巴细胞生成。
STING(干扰素基因刺激因子，TMEM173，MITA等)是胞内应答DNA入侵的关键节点分子，在胞质DNA刺激下，识别胞质DNA受体的信号，对诱导产生干扰素的过程起关键作用。宿主细胞的DNA识别受体识别外源或内源“非己”DNA后，将信号传递给节点分子STING，然后STING迅速二聚化并从内质网转移至核外周小体上。STING的活化导致IRF3和NKκB途径的上调，从而导致干扰素-β和其它细胞因子的诱导。
诱导人干扰素的化合物可用于治疗各种病症，包括过敏性疾病和其它炎性病症、过敏性鼻炎和哮喘、感染性疾病、神经退行性疾病、癌前期综合症和癌症，也可以用作免疫组合物或疫苗佐剂。所以，激活STING是用于治疗有关1型IFN途径疾病(包括炎性、变应性和自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期综合征)的潜在方法。
发明内容
本发明提供了式I所示的化合物或其互变异构体、对映异构体，或其药学上可接受的盐、晶型、水合物或溶剂合物：
其中，
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R4选自氢、C1～C6的烷基、卤素或无；
R5选自氢、C1～C6的烷基；
X2选自C或N；
B环选自被0～4个Ra取代的苯环、被0～4个Ra取代的5～6元芳杂环；
Ra选自卤素、羟基、氨基、被0～4个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷氧基；
X选自-O-、-S-、-S(O)n-或无；n为1或2；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C10的亚烷基、被0～4个Ri取代的C2～C10的亚烯基，其中，当Ri至少有2个时，L1、L2中的Ri可以相连形成3～10元环；
Ri选自-ORj、卤素、-CN、C1～C6烷基；
Rj选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Z选自-O-、-C(O)-、
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、-C(O)Rk或无，或者Rc和Rd与它们所连接的氮原子连接形成被0～4个Re任选取代的3～8元杂环烷烃、被0～4个Re任选取代的3～10元杂芳环；
Rk选自被0～4个Rm取代的5～6元环烷基、被0～4个Rm取代的5～6元杂环烷基；Rm选自C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rg、Rh分别独自选自-C(O)-、-C(O)O-或无；
Re选自-ORf-、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rf选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
进一步地，所述化合物如式I所示：
其中，
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R4选自氢、C1～C6的烷基、卤素或无；
R5选自氢、C1～C6的烷基；
X2选自C或N；
B环选自被0～4个Ra取代的苯环、被0～4个Ra取代的5～6元芳杂环；
Ra选自被0～4个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷氧基；
X选自-O-、-S-或无；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C10的亚烷基，其中，当Ri至少有2个时，L1、L2中的Ri可以相连形成3～10元环；
Ri选自-ORj、卤素、-CN、C1～C6烷基；
Rj选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Z选自-O-、-C(O)-、
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基或无，或者Rc和Rd与它们所连接的氮原子连接形成被0～4个Re任选取代的3～8元杂环烷烃、被0～4个Re任选取代的3～10元杂芳环；
Rg、Rh分别独自选自-C(O)-、-C(O)O-或无；
Re选自-ORf-、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rf选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
进一步地，所述化合物如式II所示：
B环选自
R6、R7、R8分别独立选自氢、被0～4个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷氧基；
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3、R4分别独立选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R5选自氢、C1～6的烷基；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C10的亚烷基，其中，当Ri至少有2个时，L1、L2中的Ri可以相连形成3～10元环；
Ri选自-ORj、卤素、-CN、C1～C6烷基；
Rj选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Z选自-O-、-C(O)-、-C(O)NR-、-NR-、
R选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C6烷基或无，或者Rc和Rd与它们所连接的氮原子连接形成被0～4个Re任选取代的3～8元杂环烷烃、被0～4个Re任选取代的3～10元杂芳环；
Re选自-ORf-、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rf选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
进一步地，所述Z为-O-。
进一步地，所述式II所示化合物为：
进一步地，所述化合物如式III所示：
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3、R4分别独立选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R5选自氢、C1～6的烷基；
B环选自
R6、R7、R8分别独立选自氢、被0～4个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷氧基；
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C6烷基或无，或者Rc和Rd与它们所连接的氮原子连接形成被0～4个Re任选取代的
被0～4个Re任选取代的
被0～4个Re任选取代的
Rg、Rh分别独自选自-C(O)-、-C(O)O-或无；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C10的亚烷基，其中，当Ri至少有2个时，L1、L2中的Ri可以相连形成3～10元环；
Ri选自-ORj、卤素、-CN、C1～C6烷基；
Rj选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Re选自-ORf-、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rf选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
进一步地，所述式III所示化合物为：
进一步地，所述化合物如式IV所示：
B环选自
R6、R7、R8分别独立选自氢、被0～4个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷氧基；
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3、R4分别独立选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R5选自氢、C1～C6的烷基；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C10的亚烷基，其中，当Ri至少有2个时，L1、L2中的Ri可以相连形成3～10元环；
Ri选自-ORj、卤素、-CN、C1～C6烷基；
Rj选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Z选自-O-、-C(O)-、-C(O)NR-、-NR-、
R选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C6烷基或无，或者Rc和Rd与它们所连接的氮原子连接形成被0～4个Re任选取代的3～8元杂环烷烃、被0～4个Re任选取代的3～10元杂芳环；
Re选自-ORf-、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rf选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
进一步地，所述化合物如式V所示：
B环选自
R6、R7、R8分别独立选自氢、被0～4个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷氧基；
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3、R4分别独立选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R5选自氢、C1～C6的烷基；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C10的亚烷基，其中，当Ri至少有2个时，L1、L2中的Ri可以相连形成3～10元环；
Ri选自-ORj、卤素、-CN、C1～C6烷基；
Rj选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
进一步地，所述式V所示化合物为：
进一步地，所述化合物如式VI所示：
其中，
B环选自被0～3个Ra取代的5元含氮芳杂环；
Ra选自卤素、羟基、氨基、被0～3个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基；
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3、R4分别独立选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R5选自氢、C1～C6的烷基；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C6的亚烷基、被0～4个Ri取代的C2～C6的亚烯基，
Ri选自卤素、-CN、C1～C6烷基；
X选自-O-、-S-、-S(O)n-或无，n为1或2；
Z选自-O-、-C(O)-、
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、-C(O)Rk或无；Rk选自被0～4个Rm取代的5～6元环烷基、被0～4个Rm取代的5～6元杂环烷基；Rm选自C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rg、Rh分别独自选自-C(O)-、-C(O)O-或无。
进一步地，其特征在于：
B环选自
R6、R7、R8分别独立选自氢、卤素、羟基、氨基、被0～3个Rb任选取代的C1～C2烷基；
Rb选自卤素、羟基；
R1、R2分别独立选自氢、C1～C3的烷基；
R3、R4分别独立选自氢、C1～C3的烷基、卤素；
R5选自氢、C1～C3的烷基；
L1、L2分别独立选自被0～2个Ri取代的C1～C3的亚烷基、被0～2个Ri取代的C2～C3的亚烯基，
Ri选自卤素、-CN、C1～C3烷基；
X选自-O-、-S-、-S(O)n-或无，n为1或2；
Z选自-O-、-C(O)-、
优选的，Z为-O-；
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C3烷基、卤素取代的C1～C3烷基、-C(O)Rk或无；Rk选自被0～2个Rm取代的5～6元环烷基、被0～2个Rm取代的哌啶环；Rm选自C1～C3烷基、卤素取代的C1～C3烷基；
Rg、Rh分别独自选自-C(O)-、-C(O)O-或无。
进一步地，所述化合物为：
在本发明的一些实施方案中，对于式I所示的化合物，B环优选为被0～4个Ra取代的5元含氮芳杂环，Ra选自卤素、被0～4个卤素取代的C1～C6烷基，L1选自C2～C6的亚烷基、C2～C6的亚烯基，L2选自C2～C6的亚烷基，Z选自-O-、-C(O)-、-NHC(O)O-、-NRc-、-C(O)NH-，Rc选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、-C(O)Rk，Rk选自被0～2个Rm取代的5～6元环烷基、被0～2个Rm取代的5～6元杂环烷基，Rm选自C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
在本发明的一些实施方案中，对于式I所示的化合物，B环更优选为被0～3个Ra取代的吡咯、被0～3个Ra取代的吡唑、被0～3个Ra取代的咪唑、被0～3个Ra取代的噻唑、被0～3个Ra取代的异噻唑、被0～3个Ra取代的恶唑、被0～3个Ra取代的异恶唑，Ra选自卤素、被0～3个卤素取代的C1～C6烷基。
本发明还提供了上述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备激活STING类药物中的用途。
本发明还提供了上述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备治疗与STING活性相关的疾病的药物中的用途。
进一步地，所述与STING活性相关的疾病是与炎性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期综合征相关的疾病中的一种或几种。
本发明还提供了上述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备治疗炎性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症或癌前期综合征的药物中的用途。
本发明还提供了上述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备免疫佐剂中的用途。
本发明还提供了一种药物，它是以上述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
实验结果表明，本发明的化合物能够与STING有效结合，具有良好的STING蛋白激动功能。所以，本发明的化合物可作为STING激动剂并用于治疗各种相关病症。本发明提供的化合物在制备治疗与STING活性相关的疾病的药物，特别是在制备治疗炎性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症或癌前期综合征的药物中具有非常好的应用前景。
本发明所定义的STING活性相关的疾病是STING在该疾病的病理发生中起重要作用的疾病。
STING活性相关的疾病包括炎性、变应性和自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期综合征。
“癌症”或“恶性肿瘤”是指以不受控制的细胞异常增殖为特征的多种疾病中的任何一种，受影响的细胞在局部或通过血流和淋巴***扩散到其他部位的能力的身体(即转移)以及许多特征结构和/或分子特征中的任何一个。“癌细胞”是指经历多步骤肿瘤进展的早期，中期或晚期阶段的细胞。癌症包括肉瘤、乳腺癌、肺癌、脑癌、骨癌、肝癌、肾癌、结肠癌和***癌。在一些实施方案中，式I的化合物用于治疗选自结肠癌、脑癌、乳腺癌、纤维肉瘤和鳞状细胞癌的癌症。在一些实施方案中，癌症选自黑素瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌和卵巢癌。在一些实施方案中，所治疗的癌症是转移性癌症。
炎性疾病包括以组织病理性炎症为特征的多种病症。炎性疾病的例子包括寻常性痤疮、哮喘、腹腔疾病、慢性***炎、肾小球性肾炎、炎症性肠病、***、再灌注损伤、类风湿性关节炎、结节病、血管炎、房尘螨引起的气道炎症和间质性膀胱炎。炎性疾病与自身免疫性疾病之间存在显著重叠。本发明的一些实施方案涉及炎性疾病哮喘的治疗。免疫***通常涉及炎症性疾病，在过敏反应和一些肌病中都有表现，许多免疫***疾病导致异常炎症。
本发明中提供的化合物和衍生物可以根据IUPAC(国际纯粹与应用化学联合会)或CAS(化学文摘服务社，Columbus，OH)命名***命名。
关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。
“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。
碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示，例如，前缀Ca～Cb的烷基表明任何含“a”至“b”个碳原子的烷基。因此，例如，C1～C6的烷基是指包含1～6个碳原子的烷基。
本发明中“烷基”是指具有指定数目的成员原子的饱和烃链。例如，C1～C6烷基是指具有1至6个碳原子的烷基。烷基基团可以是直链或支链的。代表性的支链烷基基团具有一个、两个或三个支链。烷基基团可任选地被一个或多个如本文所定义的取代基取代。烷基包括甲基、乙基、丙基(正丙基和异丙基)、丁基(正丁基、异丁基和叔丁基)、戊基(正戊基、异戊基和新戊基)和己基。烷基基团也可以是其他基团的一部分，所述其他基团为例如C1～C6烷氧基。
本发明中Ca～Cb烷氧基指含有“a”至“b”个碳原子的烷基与对应的氧原子相连得到的基团。
本发明中“C1～C10的亚烷基”是指具有1至10个碳原子的二价饱和脂族烃基。亚烷基基团包括支链和直链烃基基团。例如，“(C1～C6)亚烷基”意在包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基亚丙基、二甲基亚乙基、亚戊基等等。因此，术语“亚丙基”可以通过下列结构例举：
同样地，术语“二甲基亚丁基”可以例如通过下列结构的任一种例举：
此外，术语“(C1～C6)亚烷基”意在包括此类支链烃基基团，诸如环丙基亚甲基，其可以通过下列结构例举：
同样的，“C2～C10的亚烯基”是指具有2至10个碳原子的、含一个或多个碳碳双键的脂族烃基。亚烯基基团包括支链和直链基团。亚烯基基团中的碳碳双键包括顺式双键和反式双键。
本发明中“卤素”是指卤素基团：氟、氯、溴或碘。
术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。
术语“盐”和“可药用的盐”是指上述化合物或其立体异构体，与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物，或其立体异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。
在某些实施方式中，本发明的一种或多种化合物可以彼此联合使用。也可选择将本发明的化合物与任何其它的活性试剂结合使用，用于制备调控细胞功能或治疗疾病的药物或药物组合物。如果使用的是一组化合物，则可将这些化合物同时、分别或有序地对受试对象进行给药。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，可通过购买市售产品所得。
本发明化合物的结构是通过核磁共振(NMR)和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(Bruker AvanceIII 400和Bruker Avance 300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3),氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
LC-MS的测定使用岛津液质联用仪(Shimadzu LC-MS 2020(ESI))。
HPLC的测定使用岛津高压液相色谱仪(Shimadzu LC-20A)。
反相制备色谱使用Gilson GX-281反相制备色谱仪。
薄层层析硅胶板用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于安耐吉化学、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司。
氢气氛围是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气球。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
实施例中无特殊说明，反应在氮气氛围下进行。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温。
实施例中无特殊说明，M是摩尔每升。
室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。
DCM：是指二氯甲烷。
DMF：是指N,N-二甲基甲酰胺。
DMSO：是指二甲基亚砜。
DIPEA：是指二异丙基乙基胺。
HATU：是指2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯。
Pd(dppf)Cl2：是指[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯。
TFA：是指三氟乙酸。
NBS：是指N-溴代丁二酰亚胺。
1、中间体4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺的合成：
步骤1：4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺的合成
将a(18.5g，75.3mmol)加入到含有氨水(200mL)的单口瓶中，在60℃搅拌3h。反应液浓缩至100mL，冷却后过滤，固体用冰水洗涤，经干燥后得到4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(12.5g，54.1mmol)，褐色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)δ8.29(s,1H),8.04(d,1H),7.87(d,1H),7.78(s,1H),4.01(s,3H)。
MS(ESI)m/z＝231[M+H]+。
步骤2：4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺的合成
在冰浴下，将b(12.5g，54.1mmol)分散于干燥的DCM(150mL)中，再把三溴化硼(200mL，1M)慢慢滴加到其中。滴加完后撤掉冰浴，氮气保护，室温下反应过夜。反应完全后，反应液倒入冰水中，剧烈搅拌30min后，过滤，并用水洗涤滤饼，滤饼经干燥后得到4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(10g，46.2mmol，85.3％收率)，淡黄色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)11.73(s,1H),δ8.21(s,1H),7.92(s,1H),7.80(s,1H),7.66(s,1H)。
MS(ESI)m/z＝217[M+H]+。
2、中间体1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯的合成：
步骤1：1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-碳酰氯的合成
将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸(4g，25.9mmol)分散于干燥DCM(80mL)中，在冰浴下，向其中滴加草酰氯(3.9g，31.1mmol)和催化量的DMF。在室温下反应1h后，将可挥发物减压旋蒸除去。向粗品中加入DCM(20mL)，再旋蒸除去溶剂后得到1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-碳酰氯(4.46g，100％收率)，直接用于下一步反应。
步骤2：1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯的合成
在0℃下，将g(4.46g，25.9mmol)溶于干燥丙酮(20mL)并滴加到硫氰酸钾(5g，51.5mmol)的丙酮(100mL)溶液中，室温下搅拌3h，反应体系经过滤除去无机盐，滤液浓缩后的粗品经硅胶柱纯化(洗脱剂乙酸乙酯/石油醚,v/v＝1/15)得到1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯h(4g，20.4mmol，78.7％)，澄清的棕黄色液体。
MS(ESI)m/z＝196[M+H]+。
3、中间体4-乙基-2-甲基噻唑-5-羰基异硫氰酸酯的合成：
步骤1：4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰氯的合成
将4-乙基-2-甲基噻唑-5-羧酸(2g，11.7mmol)分散于干燥DCM(40ml)中，在冰浴下，向其中滴加草酰氯(1.9g，15.1mmol)和催化量的DMF。在室温下反应1h后，将可挥发物减压旋蒸除去。向粗品中加入DCM(20ml)，再旋蒸除去溶剂后得到4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰氯(2.2g，100％收率)，直接用于下一步反应。
步骤2：4-乙基-2-甲基噻唑-5-羰基异硫氰酸酯的合成
在0℃下，将4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰氯(2.2g，11.7mmol)溶于干燥丙酮(10mL)并滴加到硫氰酸钾(2.3g，23.4mmol)的丙酮(50mL)溶液中，室温下搅拌3h，反应体系经过滤除去无机盐，滤液浓缩后的粗品经硅胶柱纯化(洗脱剂乙酸乙酯/石油醚,v/v＝1/15)得到4-乙基-2-甲基噻唑-5-羰基异硫氰酸酯(2.15g，10.2mmol，收率87％)，澄清的棕黄色液体。
MS(ESI)m/z＝213[M+H]+。
4、中间体4-乙基-2-甲基恶唑-5-羰基异硫氰酸酯的合成
步骤1：2-氯-3-氧代戊酸甲酯的合成
将SO2Cl2(7.2g，58mmol)逐滴滴入3-氧代戊酸甲酯(5g，38mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中在冰浴下，升温至室温并搅拌4h，反应液用饱和碳酸钠溶液洗涤，分离的有机相用饱和食盐水洗，然后用无水硫酸钠干燥，过滤得到的滤液旋干得到化合物2-氯-3-氧代戊酸甲酯(6g，36.5mmol)，无色油状物，直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝166.0[M+H]+。
步骤2：2-乙酰氧基-3-氧代戊酸甲酯的合成
在冰浴下，将TEA(12.5mL)逐滴滴入醋酸(12.5mL)的DMF(63mL)溶液中，升温至室温后，将2-氯-3-氧代戊酸甲酯(6g，36.5mmol)加入反应液中，室温搅拌过夜。TLC监测反应完全，反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤得到的滤液旋干得到化合物2-乙酰氧基-3-氧代戊酸甲酯(3.0g，15.9mmol)，黄色油状物，直接用于下一步反应。
步骤3：4-乙基-2-甲基恶唑-5-羧酸甲酯的合成
2-乙酰氧基-3-氧代戊酸甲酯(3.0g，15.9mmol)溶于醋酸(50mL)中，然后加入乙酸铵(9.8g，127.6mmol)。混合液升温至120℃，并在此温度下搅拌4小时。浓缩反应液后，加水稀释，用乙酸乙酯萃取，分离的有机相用依次用水和饱和食盐水洗涤，然后无水硫酸钠干燥，过滤得到的滤液旋干，粗品用硅胶柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，9/1)得到4-乙基-2-甲基恶唑-5-羧酸甲酯(0.52g，3.1mmol)。
MS(ESI)m/z＝170.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ(ppm)3.89(s,3H),2.84(q,J＝7.6Hz,2H),2.50(s,3H),1.23(t,J＝7.6Hz,3H).
步骤4：4-乙基-2-甲基恶唑-5-羧酸的合成
将4-乙基-2-甲基恶唑-5-羧酸甲酯(323mg，1.9mmol)溶解在THF/MeOH(10mL/5mL)中，加入水合氢氧化锂(160mg，3.8mmol)，室温搅拌过夜。加水稀释反应液，加乙酸乙酯萃取，分离的水相用HCl(2M)调节pH至2.0，然后用乙酸乙酯再萃取。再次得到的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到4-乙基-2-甲基恶唑-5-羧酸(220mg，1.42mmol)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝156.1[M+H]+。
步骤5：4-乙基-2-甲基恶唑-5-羰基异硫氰酸酯的合成
将4-乙基-2-甲基恶唑-5-羧酸(220mg，1.42mmol)分散于干燥THF(10mL)中，在冰浴下，向其中滴加草酰氯(270mL，2.13mmol)和催化量的DMF。在室温下反应30min后，将可挥发物减压旋蒸除去。向粗品中加入DCM(20mL)，再旋蒸除去溶剂后得到的黄色油状物粗品，直接用于下一步反应。
在0℃下，将上述黄色油状物溶于干燥丙酮(10mL)并滴加到硫氰酸钾(276mg，2.84mmol)的丙酮(15mL)的溶清液中，室温下搅拌3h，反应体系经过滤除去无机盐，用正己烷洗涤，滤液浓缩后的粗品经硅胶柱纯化(洗脱剂乙酸乙酯/石油醚,v/v＝1/7)得到4-乙基-2-甲基恶唑-5-羰基异硫氰酸酯(176mg，63％)，澄清的浅黄色液体。
MS(ESI)m/z＝197.0[M+H]+
5、中间体化合物3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
步骤1：3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸的合成
将4-氟-3-硝基苯甲酸(50g，270mmol)分散于浓硫酸(200ml)中，再加入NBS(47.5g，270mmol)。升温至75℃，搅拌过夜。冷至室温后，慢慢倒入冰水中并搅拌，有淡黄色固体析出，过滤出固体并干燥后得到目标化合物(66g)。
步骤2：3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
在冰浴下，向3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸(66g，249mmol)的甲醇(400ml)溶液中滴加氯化亚砜(44.5g，373.5mmol)。升至75℃，搅拌过夜。浓缩至剩余溶剂约100ml，冷却后固体继续析出，过滤并干燥固体得到3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸甲酯(56g)。
6、中间体化合物4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
将4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(10g，40.7mmol)分散于无水二氯甲烷(100mL)中，在冰浴下慢慢滴加三溴化硼(40.8g,162.8mmol),滴加完后慢慢升至室温搅拌反应过夜。反应完全后，在冰浴下缓慢滴加甲醇淬灭，然后将其旋干。在向其中加入甲醇(100mL)，浓硫酸(0.2mL),反应液加热至75℃，搅拌过夜。冷却后，减压浓缩除掉溶剂，再加入150mL水，超声分散后，过滤，固体再用水洗涤，将固体干燥后得到4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯(8.89g，38.4mmol，收率94％)。
实施例1
步骤1：3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸的合成
在室温下，将4-氟-3-硝基苯甲酸(18.7g，101.02mmol)和NBS(17.98g，101.02mmol)加到浓硫酸(40mL)中,升温至65℃搅拌反应16h。反应完成后，加水析出固体，过滤，滤饼用水洗涤并干燥后得到3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸(化合物1a)(19g，71.97mmol)，淡黄色固体，收率：71％。
MS(ESI)m/z＝265[M+H]+。
步骤2:3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
在冰浴下，将二氯亚砜(8mL，110mmol)滴加到3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸(19g，71.97mmol)的甲醇(150mL)溶液中,加完后升温至70℃搅拌反应16h。反应完成后，旋干甲醇，粗品用乙酸乙酯溶解，分别用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥过滤后，旋干得到3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸甲酯(化合物1b)(18g，64.74mmol)，淡黄色固体，收率：89％。
MS(ESI)m/z＝279[M+H]+。
步骤3：3-溴-4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，将3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸甲酯(1.25g，7.19mmol)和叔丁基-(3-氨基丙基)氨基甲酸酯(2g，7.19mmol)加DMF(20mL)中，再加入DIPEA(2.8g，21.57mmol)，混合液在室温下搅拌反应0.5h。反应完成后，加水乙酸乙酯萃取(50mL x3)，合并有机相并分别用水和饱和食盐水洗涤，旋干溶剂得到3-溴-4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯(化合物1c)(2.55g，5.92mmol)黄色固体，收率82％。
MS(ESI)m/z＝433[M+H]+。
步骤4：(E)-3-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)-4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)-5-甲酯硝基苯的合成
在室温下，将化合物1c(500mg，1.16mmol)，丙烯酸叔丁酯(180mg，1.4mmol)和碳酸钾(320mg，2.31mmol)加到甲苯(5mL)中,氮气置换空气后加入Pd(dppf)Cl2(85mg，0.116mmol)，氮气换气后升温至100℃搅拌反应16h。反应完成后，冷却至室温，加水用乙酸乙酯萃取(20mL x3)，合并有机相并分别用水和饱和食盐水洗涤，旋干溶剂，经硅胶柱纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚,v/v＝1/15)得到(E)-3-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)-4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)-5-甲酯硝基苯(化合物1d)(400mg，0.834mmol)，淡黄色固体，收率：72％。
MS(ESI)m/z＝480[M+H]+。
步骤5：3-氨基-5-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙基)-4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)苯甲酸甲酯的合成
向化合物1d(200mg，0.417mmol)的甲醇和乙酸乙酯溶液中加入10％的钯碳(20mg)，氢化还原3h，过滤除掉钯碳，滤液浓缩后得到3-氨基-5-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙基)-4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)苯甲酸甲酯(化合物1e)(184mg，0.407mmol)，直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝452[M+H]+。
步骤6：7-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙基)-1-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲基)甲酰氨基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸甲酯的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(80mg，0.41mmol)滴加入化合物1e(180mg，0.399mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(160mg，0.421mmol)和N,N-二异丙基乙胺(110mg,0.851mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应液经反相MPLC分离(洗脱剂乙腈/水＝1/2，v/v)得到7-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙基)-1-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲基)甲酰氨基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸甲酯(化合物1f)(240mg，0.391mmol)，白色固体，收率96％。
MS(ESI)m/z＝613[M+H]+。
步骤7：3-(1-(3-氨基丙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)丙酸的合成
在冰浴下，将TFA(1mL)加入1f(230mg，0.375mmol)的DCM(2mL)中，室温下反应1h，待反应完全后旋干得到粗品3-(1-(3-氨基丙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)丙酸(化合物1g)(300mg)，直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝457[M+H]+。
步骤8：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-氧代-7,8,9,10,11,12-六氢-6H-2,9,12a-三氮杂环庚烷[cd]]茚-4-羧酸甲酯的合成
冰浴下，HATU(170mg,0.372mmol)和DIPEA(145mg，1.12mmol)加入到1g(170mg，0.372mmol)的DMF(2mL)和DCM(4mL)溶液中，搅拌0.5h，反应完成后，加水用乙酸乙酯萃取(10mLx3)，合并有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，旋干溶剂得到1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-氧代-7,8,9,10,11,12-六氢-6H-2,9,12a-三氮杂环庚烷[cd]]茚-4-羧酸甲酯(化合物1h)(110mg，0.25mmol)，白色固体，收率67％。
MS(ESI)m/z＝439[M+H]+。
步骤9：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-8-氧代7,8,9,10,11,12六氢-6H-2,9,12a-三氮杂环癸烷苯并[cd]茚-4-羧酸的合成
化合物1h(100mg，0.228mmol)溶解在混合溶剂四氢呋喃(2mL)和甲醇(1mL)中，再加入氢氧化锂(50mg，1.14mmol)的水(2mL)溶液中。反应液室温搅拌2h后。加水稀释旋干有机溶剂，用乙酸乙酯萃取一次，水相用稀盐酸(1M)酸化至pH≈4，乙酸乙酯萃取(10mL x3)，合并有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，旋干溶剂得到1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-8-氧代7,8,9,10,11,12六氢-6H-2,9,12a-三氮杂环癸烷苯并[cd]茚-4-羧酸(化合物1i)(74mg,0.174mmol)，白色固体，收率76.3％。
MS(ESI)m/z＝425[M+H]+。
步骤10：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-8-氧代7,8,9,10,11,12六氢-6H-2,9,12a-三氮杂环癸烷苯并[cd]茚-4-甲酰胺的合成
在冰浴下，将HATU(73mg,0.192mmol)加入化合物1i(70mg,0.165mmol)的DMF(2mL)溶液中。15min后，加入DIPEA(65mg,0.5mmol)和氯化铵(30mg,，0.56mmol)。反应1h，反应液用反相MPLC分离(洗脱剂乙腈/水＝1/1,v/v)得到化合物1(10.69mg)白色固体，收率14％。
MS(ESI)m/z＝424[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6):δ(ppm)1.35(t,J＝7.2Hz,3H)1.91～2.09(m,2H)2.18(s,3H)2.76～2.87(m,2H)2.98～3.11(m,2H)4.56～4.65(m,4H)6.63(s,1H)7.31(s,1H)7.60(s,1H)7.87(s,2H)7.91(s,1H)
实施例2
步骤1：(3-(3-(苄氧基)丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
冰浴下，将氢化钠(550mg，13.7mmol)加入到(3-羟丙基)氨基甲酸叔丁酯(2g，11.42mmol)的DMF(8mL)和四氢呋喃(16mL)混合溶剂中。搅拌30分钟后加入3-苄氧基溴丙烷(3.66g，15.989mmol)，升温至室温反应10h。反应完成后加水，乙酸乙酯萃取(50mL x3)，合并有机相旋干溶剂，粗品经柱层析分离(洗脱剂:乙酸乙酯/石油醚＝1/10,v/v)得到无色油状物(3-(3-(苄氧基)丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物2a)(1.23g，3.8mmol)，收率33％。
MS(ESI)m/z＝324[M+H]+。
步骤2：(3-(3-羟基丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
向化合物2a(800mg，2.47mmol)的甲醇和乙酸乙酯溶液中加入钯碳(10％，80mg)，氢化还原3h，过滤除掉钯碳，滤液浓缩后得到(3-(3-羟基丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物2b)(519mg，2.227mmol)，收率90％。直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝234[M+H]+。
步骤3：(3-(3-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
室温下，将化合物2b(510mg，2.19mmol)和4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(500mg，2.3mmol)溶于干燥四氢呋喃(20mL)中，氮气置换空气后加入三苯基膦(907mg，3.45mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(700mg，3.45mmol)，加完搅拌反应10h。反应完成后加水乙酸乙酯萃取(20mL x3)，合并有机相旋干溶剂，粗品经柱层析分离(洗脱剂乙酸乙酯/石油醚＝1/2,v/v)得到3-(3-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物2c)(750mg，1.736mmol)收率75％。
MS(ESI)m/z＝432[M+H]+。
步骤4：3-(3-(3-氨基丙氧基)丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺的合成
将TFA(3mL)加入化合物2c(740mg，1.716mmol)的DCM(6mL)中，室温下反应1h，反应完全后旋干，粗品用碳酸氢钠饱和溶液调至pH≈8，乙酸乙酯萃取(20mLx3)，合并有机相用饱和食盐水洗涤，再干燥后旋干得到3-(3-(3-氨基丙氧基)丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺(化合物2d)(555mg，1.68mmol)直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝332[M+H]+。
步骤5：10-硝基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧氮杂环十一烷-12-甲酰胺的合成
室温下，将3-(3-(3-氨基丙氧基)丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺(200mg，0.604mmol)和碳酸钾(100mg，0.725mmol)溶于DMF(120mL)中，升温至90℃搅拌反应20h。反应完成后旋干溶剂，乙酸乙酯(50mL)溶解后分别用水和饱和食盐水洗涤，旋干得到10-硝基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧氮杂环十一烷-12-甲酰胺(化合物2e)(177mg，0.597mmol)收率99％，直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝296[M+H]+。
步骤6：10-氨基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧氮杂环十一烷-12-甲酰胺的合成
向2e(170mg，0.574mmol)的甲醇和乙酸乙酯溶液中加入钯碳(10％，20mg)，氢化还原3h，过滤掉钯碳，滤液浓缩后得到10-氨基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧杂环十一烷-12-甲酰胺(化合物2f)(150mg，0.566mmol)，收率98％。直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝266[M+H]+。
步骤7：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂2,13a-二氮杂环十一烷苯并[cd]茚-4-甲酰胺的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(80mg，0.41mmol)滴加入化合物2f(108mg，0.407mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(160mg，0.421mmol)和N,N-二异丙基乙胺(105mg,0.814mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经反相HPLC纯化得到化合物2(8.7mg，收率5％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝427[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6):δ(ppm)1.35(t,J＝7.2Hz,3H)1.86～1.96(m,4H)2.17(s,3H)3.33～3.35(m,2H)3.61～3.75(m,2H)4.38～4.47(m,2H)4.47～4.55(m,2H)4.61(q,J1＝14Hz,J2＝7.2Hz,2H)6.64(s,1H)7.35(s,1H)7.45(s,1H)7.67(s,1H)7.98(s,1H)12.85(s,1H).
实施例3
在冰浴下，将化合物1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(64mg，0.3mmol)滴加入化合物2f(80mg，0.3mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(114mg，0.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(77mg,0.6mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经反相HPLC纯化得到化合物3(19.2mg,收率14.4％)。
MS(ESI)m/z＝445[M+H]+
1H NMR(400MHz,MeOD):δ(ppm)7.64-7.65(m,1H)，7.46(m,1H)，6.78(s,1H)，5.03-5.06(t,J＝5.2Hz,1H)，4.97-5.00(t,J＝5.2Hz,1H)，4.84-4.85(t,J＝5.2Hz,1H)，4.72-4.75(t,J＝5.2Hz,1H)，4.66(s,2H)，4.48(s,2H)，3.80(s,2H)，3.50-3.52(t,J＝3.6Hz,2H)，2.28(s,3H)，2.02-2.05(m,4H).
实施例4
在冰浴下，将化合物1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(44mg，0.226mmol)滴加入化合物2f(60mg，0.226mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(86mg，0.226mmol)和N,N-二异丙基乙胺(58mg,0.452mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经反相HPLC纯化得到化合物4(9.9mg,收率10.3％)。
MS(ESI)m/z＝428[M+H]+
1H NMR(400MHz,MeOD):δ(ppm)7.65(s,1H),7.47(s,1H),4.59-4.75(m,2H),4.42-4.55(m,2H),3.71-3.90(m,2H),3.50-3.51(m,2H),3.08-3.15(m,2H),2.52(s,3H),2.00-2.08(m,4H),1.28-1.32(m,3H).
实施例5
在冰浴下，将化合物1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(64mg，0.3mmol)滴加入化合物2f(80mg，0.3mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(114mg，0.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(77mg，0.6mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经反相HPLC纯化得到化合物5(55mg,收率41.4％)。
MS(ESI)m/z＝444[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm12.80(s,1H),7.98(s,1H),7.65(s,1H),7.35-7.45(m,2H),4.41-4.47(m,4H),3.67(s,2H),3.34-3.35(m,2H),3.17-3.23(m,2H),2.61(s,3H),1.90(m,4H),1.21-1.25(t,J＝7.6Hz,3H).
实施例6
在冰浴下，将化合物3-(二氟甲基)-1-乙基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(52mg，0.226mmol)滴加入化合物2f(60mg，0.226mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(86mg，0.226mmol)和N,N-二异丙基乙胺(58mg，0.452mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经反相HPLC纯化得到化合物6(41mg,收率39.4％)。
MS(ESI)m/z＝463[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)12.93(s,1H),7.64-7.65(m,1H),7.46(m,1H),6.78(s,1H),5.76(s,1H),4.72-4.75(m,2H),4.42-4.45(m,4H),3.60-3.77(m,2H),3.34-3.38(m,2H),1.87-1.99(m,4H),1.39-1.43(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例7
步骤1：(3-(2-(苄氧基)乙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
冰浴下，将氢化钠(550mg，13.7mmol)加入到(3-羟丙基)氨基甲酸叔丁酯(2g，11.42mmol)的DMF(8mL)和四氢呋喃(16mL)混合溶剂中。搅拌30分钟后加入3-苄氧基溴乙烷(3.42g，15.99mmol)，升温至室温反应10h。反应完成后加水，乙酸乙酯萃取(50mLx3)，合并有机相旋干溶剂，粗品经柱层析分离(洗脱剂:乙酸乙酯/石油醚＝1/10,v/v)得到无色油状物3-(2-(苄氧基)乙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯7a(1.23g，3.98mmol)，收率34.9％。
MS(ESI)m/z＝310[M+H]+。
步骤2：(3-(2-羟基乙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
向化合物7a(1.2g，3.88mmol)的甲醇和乙酸乙酯溶液中加入10％钯碳(120mg)，氢化还原3h，过滤除掉钯碳，滤液浓缩后得到(3-(2-羟基乙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯7b(760mg，3.49mmol)，收率90％。直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝220[M+H]+。
步骤3：(叔丁基(3-(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)乙氧基)丙基)氨基甲酸酯的合成
室温下，将化合物7b(510mg，2.19mmol)和4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(500mg，2.3mmol)溶于干燥四氢呋喃(20mL)中，氮气置换空气后加入三苯基膦(907mg，3.45mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(700mg，3.45mmol)，加完搅拌反应10h。反应完成后加水乙酸乙酯萃取(20mL x3)，合并有机相旋干溶剂，粗品经柱层析分离(洗脱剂乙酸乙酯/石油醚＝1/2,v/v)得到(叔丁基(3-(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)乙氧基)丙基)氨基甲酸酯7c(750mg，1.736mmol)收率75％。
MS(ESI)m/z＝418[M+H]+。
步骤4：3-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺的合成
将TFA(3mL)加入化合物2c(740mg，1.716mmol)的DCM(6mL)中，室温下反应1h，反应完全后旋干，粗品用碳酸氢钠饱和溶液调至pH≈8，乙酸乙酯萃取(20mLx3)，合并有机相用饱和食盐水洗涤，再干燥后旋干得到3-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺7d(555mg，1.68mmol)直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝318[M+H]+。
步骤5：9-硝基-2,3,5,6,7,8-六氢苯并[E][1,4,7]二氧氮杂十烷-11-甲酰胺的合成
室温下，将3-(3-(3-氨基丙氧基)丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺(200mg，0.604mmol)和碳酸钾(100mg，0.725mmol)溶于DMF(120mL)中，升温至90℃搅拌反应20h。反应完成后旋干溶剂，乙酸乙酯(50mL)溶解后分别用水和饱和食盐水洗涤，旋干得到9-硝基-2,3,5,6,7,8-六氢苯并[E][1,4,7]二氧氮杂十烷-11-甲酰胺7e(177mg，0.597mmol)收率99％，直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝282[M+H]+。
步骤6：9-氨基-2,3,5,6,7,8-六氢苯并[E][1,4,7]二氧氮杂十烷-11-甲酰胺的合成
向2e(170mg，0.574mmol)的甲醇和乙酸乙酯溶液中加入钯碳(10％，20mg)，氢化还原3h，过滤掉钯碳，滤液浓缩后得到9-氨基-2,3,5,6,7,8-六氢苯并[E][1,4,7]二氧氮杂十烷-11-甲酰胺7f(150mg，0.566mmol)，收率98％。直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝252[M+H]+。
步骤7：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-8,10,11,12四氢-7H-6,9-二氧杂2,12a-二氮杂癸烷苯并[cd]茚-4-甲酰胺的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(80mg，0.41mmol)滴加入化合物7f(108mg，0.407mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(160mg，0.421mmol)和N,N-二异丙基乙胺(105mg,0.814mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经反相HPLC纯化得到化合物7(8.7mg，收率5％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝413[M+H]+。
实施例8
步骤1：2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙氧基)乙基甲磺酸酯的合成
(3-(2-羟基乙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(1.15g,5.25mmol)溶于DCM(30mL)，加入TEA(2.2mL,15.8mmol)，冰浴冷却下滴入甲磺酰氯(0.49mL,6.30mmol)，冰浴下搅拌2小时，反应完成。加水，分离出DCM相，水层用DCM萃取2次，合并有机相干燥后旋干，得化合物8a(1.6g)收率：103％。直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝298[M+H]+。
步骤2：S-(2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙氧基)乙基)乙硫醇酯的合成
化合物8a(1.6g,5.39mmol)溶于DMF(20mL)中，加入硫代乙酸钾(1.23g,10.77mmol)，室温下搅拌过夜。反应完全后加水，乙酸乙酯萃取(20mL x3)，合并有机相干燥，浓缩后得到的粗品经柱层析纯化(PE:EA＝5:1),，得化合物8b(1.31g)淡黄色油，收率：87.8％。
MS(ESI)m/z＝278[M+H]+。
步骤3：S-(2-(3-氨基丙氧基)乙基)乙硫醇酯的合成
将化合物8b(1.31g,4.73mmol)溶于DCM(30mL)中，加入TFA(5mL)，室温下搅拌过夜。反应液减压浓缩得到化合物S-(2-(3-氨基丙氧基)乙基)乙硫醇酯的合成8c，直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝178[M+H]+。
步骤4：4-((3-(2-(乙酰硫基)乙氧基)丙基)氨基)-3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
化合物8c(837mg,4.73mmol)溶于DMF(20mL)，加入3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸甲酯(850mg,3.09mmol)和TEA(1.96mL,14.2mmol)，室温下搅拌过夜。加水稀释，乙酸乙酯萃取(20mL*3)，合并有机相，干燥后浓缩得到的从粗品经柱层析纯化(PE:EA＝5:1)，得4-((3-(2-(乙酰硫基)乙氧基)丙基)氨基)-3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯8d(1.183g)，收率：84.9％。
MS(ESI)m/z＝435[M+H]+。
步骤5：3-溴-4-((3-(2-巯基乙氧基)丙基)氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
化合物8d(1.1g,2.53mmol)溶于MeOH(20mL)中，冰浴冷却下加入MeONa(410mg,7.6mmol)，搅拌1h，反应完成。加稀盐酸(3M)调至pH≈4，旋干，残余物加水溶解，乙酸乙酯萃取(15mL*3)，合并有机相干燥后旋干，得3-溴-4-((3-(2-巯基乙氧基)丙基)氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯8e(980mg)黄色固体，直接用于下一步，收率：98.7％。
MS(ESI)m/z＝393[M+H]+。
步骤6：9-硝基-2,3,5,6,7,8-六氢苯并[e][1,4,7]氧硫杂吖啶-11-羧酸甲酯的合成
化合物8e(980mg,2.49mmol)溶于1,4-二氧六环(30mL)中，氮气保护下，依次加入Xantphos(288mg,0.498mmol),DIPEA(1.23mL,7.47mmol)和Pd2(dba)3(228mg,0.249mmol)，100度下反应过夜。过滤除去不溶物，浓缩后得到的粗品经柱层析纯化(PE:EA＝5:1to 3:1)，得9-硝基-2,3,5,6,7,8-六氢苯并[e][1,4,7]氧硫杂吖啶-11-羧酸甲酯8f(180mg)黄色固体，收率：23.2％。
MS(ESI)m/z＝313[M+H]+。
步骤7：9-氨基-2,3,5,6,7,8-六氢苯并[e][1,4,7]氧噻嗪-11-羧酸甲酯的合成
化合物8f(50mg,0.16mmol)悬浮于MeOH(8mL)中，冰浴冷却下滴入Na2S2O4(139mg,0.80mmol)的水溶液，室温下搅拌2h，反应完全。过滤除去不溶物，滤液旋干，残余物加水溶解，再用乙酸乙酯萃取(10mL*3)，合并有机相干燥后旋干，得9-氨基-2,3,5,6,7,8-六氢苯并[e][1,4,7]氧噻嗪-11-羧酸甲酯8g(45mg)，直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝283[M+H]+。
步骤8：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,10,11,12-四氢-7H-9-氧杂-6-硫杂-2,12a-二氮杂环癸烯[cd]茚-4-羧酸乙酯的合成
化合物8g(45mg,0.16mmol)溶于5mL DMF中，冰浴下加入1-乙基-3-甲基-5-吡唑甲酸异硫氰酸酯(32mg,0.16mmol)，搅拌10min后送LCMS，显示反应完全。加入HATU(67mg,0.176mmol)和DIPEA(0.85mL,0.48mmol)，室温下搅拌过夜。加水稀释，用乙酸乙酯萃取(10mL x2)，合并有机相干燥，旋干得到1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,10,11,12-四氢-7H-9-氧杂-6-硫杂-2,12a-二氮杂环癸烯[cd]茚-4-羧酸乙酯8h(62mg)黄色固体，直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝444[M+H]+。
步骤9：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,10,11,12-四氢-7H-9-氧杂-6-硫杂-2,12a-二氮杂环癸烯[cd]茚-4-羧酸的合成
化合物8h(62mg,0.14mmol)溶于5mL MeOH/H2O(10:1)的混合溶剂中，加入水合氢氧化锂(59mg,1.4mmol)，加热到40度下反应过夜。冷至室温后加稀盐酸(1M)调至Ph～4,旋干。残余物加水溶解，用乙酸乙酯萃取(10mL x2)，合并有机相干燥，旋干得到1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,10,11,12-四氢-7H-9-氧杂-6-硫杂-2,12a-二氮杂环癸烯[cd]茚-4-羧酸8i(42mg)，直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝430[M+H]+。
步骤10：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,10,11,12-四氢-7H-9-氧杂-6-硫杂-2,12a-二氮杂环癸烯[cd]茚-4-甲酰胺的合成
化合物8i(42mg,0.1mmol)溶于DMF(3mL)中，依次加入TEA(0.55mL,0.4mmol),HATU(57mg,0.15mmol)，室温下搅拌30min，再加入氯化铵(18mg,0.3mmol)，室温下搅拌过夜。反应液经反相prep-HPLC纯化得到化合物8(10mg)。
MS(ESI)m/z＝429[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.00(s,1H),8.05–7.98(m,3H),7.41(s,1H),6.15–6.12(m,1H),4.61–4.58(m,2H),4.21–4.18(m,1H),3.87-3.84(m,1H),3.75-3.73(m,1H),3.14-3.05(m,2H),2.86-2.75(m,2H),2.34-2.31(m,1H),2.07(s,3H),2.05-1.95(m,1H),1.35(t,J＝7.5Hz,3H).
实施例9
步骤1：4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-2-醇的合成
向丁烷-1,3-二醇(5g，55.48mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入叔丁基二甲基氯硅烷(8.36g，55.48mmol)和咪唑(4.53g，66.58mmol)，室温下搅拌过夜。将反应液倒入水中，分离出的有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，干燥后浓缩得到4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-2-醇9a(13.89g)。不再纯化直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝205[M+H]+。
步骤2：(3-((4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-2-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
在冰浴下，向化合物9a(6g，29.36mmol)的DMF(100mL)溶液中加入氢化钠(1.4g，35.23mmol)，搅拌0.5h。然后将3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(9.09g，38.2mmol)，升至室温后搅拌过夜。用饱和氯化铵淬灭后将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(100mL x3)，合并有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，干燥后浓缩得到(3-((4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-2-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯9b(8.28g)，直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝362[M+H]+。
步骤3：(3-((4-羟基丁-2-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
室温下，向化合物9b(8.28g，22.9mmol)的四氢呋喃(80mL)溶液加入TBAF(34.35mmol，1M的四氢呋喃溶液)。反应液升至55℃，搅拌过夜。将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(100mL x3)，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥后旋干。粗品经硅胶柱纯化(洗脱机：石油醚/乙酸乙酯＝1/1，v/v)得到(3-((4-羟基丁-2-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯9c(1.86g)。
MS(ESI)m/z＝248[M+H]+。
步骤4：(3-((4-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丁-2-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
室温下，将化合物9c(600mg，2.42mmol)和4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(420mg，1.94mmol)溶于干燥四氢呋喃(20mL)中，氮气置换空气后加入三苯基膦(1.14g，4.36mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(880mg，4.36mmol)。然后升至60℃搅拌反应过夜。反应完成后加水乙酸乙酯萃取(20mL x3)，合并有机相旋干溶剂，粗品经柱层析分离(洗脱剂二氯甲烷/甲醇＝50/1,v/v)得到(3-((4-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丁-2-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯9d(320mg，收率29.6％)。
MS(ESI)m/z＝446[M+H]+。
步骤5：3-(3-(3-氨基丙氧基)丁氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺的合成
将TFA(3mL)加入化合物9d(320mg，0.72mmol)的DCM(10mL)中，室温下反应1h，反应完全后减压旋干，得到3-(3-(3-氨基丙氧基)丁氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺9e(350mg，三氟乙酸盐)，直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝346[M+H]+。
步骤6：4-甲基-10-硝基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧氮杂十一烷-12-甲酰胺的合成
室温下，将化合物9e(350mg(70％纯度)，0.72mmol)和碳酸钾(76mg，1.1mmol)溶于DMF(150mL)中，升温至90℃搅拌反应3h。反应完成后旋干溶剂，乙酸乙酯(50mL)溶解后分别用水和饱和食盐水洗涤，旋干后经正相硅胶柱(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/3,v/v)纯化得到4-甲基-10-硝基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧氮杂十一烷-12-甲酰胺9f(200mg，90％收率)。
MS(ESI)m/z＝310[M+H]+。
步骤7：10-氨基-4-甲基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧氮杂十一烷-12-甲酰胺的合成
向9f(127mg，0.41mmol)的甲醇溶液中加入钯碳(10％，20mg)，氢化还原3h，过滤掉钯碳，滤液浓缩后得到10-氨基-4-甲基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧氮杂十一烷-12-甲酰胺9g(90mg，78.7％收率)。直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝280[M+H]+。
步骤8：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-9-甲基7,8,9,11,12,13六氢-6,10-二氧杂2,13a-二氮杂环十一烷[CD]茚-4-甲酰胺的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(62mg，0.0.32mmol)滴加入化合物9g(90mg，0.32mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(147mg，0.38mmol)和N,N-二异丙基乙胺(82mg,0.64mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经反相HPLC纯化得到化合物9(33mg，收率23％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝441[M+H]+。
实施例9-1
步骤1：4-((三苯基甲基)氧基)丁-2-醇的合成
向丁烷-1,3-二醇(50g，554.8mmol)的二氯甲烷(750mL)溶液中加入三甲基氯甲烷(8.36g，154.8mmol)，三乙胺(140mL，665.8mmol)和4-二甲基氨基吡啶(1.3g，10.6mmol)，室温下搅拌过夜。将反应液倒入水中，分离出的有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，干燥后浓缩，柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝20/1,10/1,v/v)得到4-((三苯基甲基)氧基)丁-2-醇9-1a(110g,59.6％),无色透明油状物。
MS(ESI)m/z＝333.0[M+H]+。
步骤2：1-叔丁基二甲基硅基-3-((4-(三苯甲氧基)丁烷-2-基)氧基)丙-1-醇的合成
在冰浴下，向化合物9-1a(50g，150.0mmol)的DMF(500mL)溶液中加入氢化钠(9g，225mmol)，搅拌0.5h。然后将3-溴丙氧基(叔丁基)二甲基硅烷(45.5g，180mmol)和四丁基碘化铵(5.5g，15mmol)依次加入。反应液升至室温后加热至80℃，并搅拌过夜。用饱和氯化铵淬灭后将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(600mL*3)，合并有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，干燥后浓缩得到粗品，经硅胶柱分离(石油醚/乙酸乙酯＝20/1～10/1,v/v)纯化得到9-1b(14g，18.5％)，无色油状物。
MS(ESI)m/z＝505.0[M+H]+。
步骤3：3-((4-(三苯甲氧基)丁烷-2-基)氧基)丙-1-醇的合成
室温下，向化合物9-1b(14g，27.78mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液加入TBAF(33mmol，1M的四氢呋喃溶液)。搅拌过夜。将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(100mL*3)，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥后旋干。粗品经硅胶柱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝70/30，v/v)得到9-1c(7.7g，74％)，无色油状物。
MS(ESI)m/z＝391.0[M+H]+。
步骤4：3-((4-(三苯甲氧基)丁烷-2-基)氧基)丙-1-醇对甲苯磺酸酯的合成
室温下，将化合物9-1c(7.5g，19.23mmol)溶于二氯甲烷(20mL)和吡啶(20mL)的混合液中，加入对甲苯磺酰氯(4.03g，21.15mmol)。反应液室温搅拌过夜，反应完成后浓缩，旋除二氯甲烷和吡啶，然后加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并的有机相经浓缩，后滤除不溶物，滤液浓缩干燥得9-1d(8.75g)，不再纯化直接用于下一步反应。。
MS(ESI)m/z＝545.0[M+H]+。
步骤5：(3-(((4-(三苯甲氧基)丁烷-2-基)氧基)丙基)氨基二甲酸叔丁酯的合成
将化合物9-1d(8.75g，16.7mmol)溶于DMF(80mL)中，依次加入K2CO3(4.6g，33.5mmol)，双(叔丁氧羰基)胺(4.0g，18.5mmol)和碘甲烷(20mg)。加热至80℃反应过夜，反应完全后加水稀释，并乙酸乙酯萃取，合并有机相旋干得到的粗品，经硅胶柱纯化(洗脱机：石油醚/乙酸乙酯＝100/5，v/v)得9-1e(2.9g，34％)，无色油状物。
MS(ESI)m/z＝590.0[M+H]+。
步骤6：(3-((4-羟基丁-2-基氧基)丙基)氨基二甲酸叔丁酯的合成
室温下，将甲酸(2mL)滴加入9-1e(2.9g，5.0mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中，室温搅拌反应3h。反应完成后加水稀释，二氯甲烷萃取，合并的有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，旋干后经正相硅胶柱(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝70/30,v/v)纯化得到9-1f(1.2g，57％收率)，无色油状物。
MS(ESI)m/z＝348.0[M+H]+。
步骤7：3-(3-(3-(((叔丁氧基羰基)氨基)丙氧基)丁氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
室温下，将化合物9-1f(600mg，2.42mmol)和4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯(562mg，2.43mmol)溶于干燥四氢呋喃(10mL)中，氮气置换空气后加入三苯基膦(1.15g，4.37mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(4mg，4.37mmol)。然后升至60℃搅拌反应过夜。反应完成后加水乙酸乙酯萃取(20mL x3)，合并有机相旋干溶剂，粗品经柱层析分离(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯＝85/15,v/v)得到9-1g(1.91g，粗品含三苯基氧膦)，黄色油状物。
MS(ESI)m/z＝462.0[M+H]+。
步骤8：3-(3-(3-氨基丙氧基)丁氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
在冰浴下，将TFA(2mL)滴加入化合物9-1g(1.9g粗品，2.38mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中，室温反应2h。反应完全后,旋干溶剂，干燥得到化合物3-(3-(3-氨基丙氧基)丁氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酸甲酯9-1h(1.39g，粗品)，黄色油状物。直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝362.0[M+H]+。
步骤9：(S)-4-甲基-10-硝基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧杂氮杂环十一碳烯-12-羧酸甲酯的合成
室温下，将化合物9-1h(1.39g(70％纯度)，3.85mmol)和碳酸钾(797mg，5.77mmol)溶于DMF(400mL)中，升温至60℃搅拌反应过夜。反应完成后旋干溶剂，乙酸乙酯(50mL)溶解后分别用水和饱和食盐水洗涤，旋干后经正相硅胶柱(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/3,v/v)纯化,得到的消旋体802mg，又经SFC纯化分离，得9-1i(300mg)，橙色固体。
MS(ESI)m/z＝325.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.50(t,J＝6.2Hz,1H),8.21(d,J＝1.9Hz,1H),7.48(d,J＝1.8Hz,1H),4.55–4.45(m,1H),4.22–4.09(m,1H),3.94(td,J＝10.3,2.4Hz,1H),3.82(s,3H),3.68–3.51(m,2H),3.44–3.34(m,1H),3.19–3.07(m,1H),1.96–1.62(m,4H),1.13(d,J＝6.3Hz,3H).
步骤10：(S)-4-甲基-10-胺基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧杂氮杂环十一碳烯-12-羧酸甲酯的合成
向9-1i(300mg，0.93mmol)的甲醇(15mL)和四氢呋喃(15mL)混合溶液中加入钯碳(10％，113mg)，氢化还原3h，过滤掉钯碳，滤液浓缩后得到9-1l(300mg，粗品)。直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝295.0[M+H]+。
步骤11：(S)-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂-2，13a-二氮杂环苯并[cd]茚满-4-羧酸甲酯的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(33mg，0.17mmol)滴加入化合物9-1l(50mg，0.17mmol)的DMF(2mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(77mg，0.20mmol)和N,N-二异丙基乙胺(43mg,0.34mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经过滤水洗，得到化合物9-1m(77mg，粗品)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝456.0[M+H]+。
步骤12：(S)-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂-2，13a-二氮杂环苯并[cd]茚满-4-羧酸的合成
化合物9-1m(77mg,0.17mmol)溶于5mL MeOH/H2O(10:1)的混合溶剂中，加入水合氢氧化锂(70mg,1.7mmol)，加热到65度下反应5h。冷至室温后，加水稀释，乙酸乙酯萃取，分离的水相加稀盐酸(3M)调至pH：3～2,析出的白色固体经过滤干燥得9-1n(55mg，73％收率)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝442.0[M+H]+。
步骤13：(S)-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂-2，13a-二氮杂环苯并[cd]茚满-4-甲酰胺的合成
化合物9-1n(55mg,0.12mmol)溶于DMF(2mL)中，依次加入DIPEA(31mg,0.24mmol),HATU(55mg,0.14mmol)，室温下搅拌30min，再加入碳酸氢铵(19.7mg,0.25mmol)，室温下搅拌过夜。反应液加水稀释，析出白色固体，经过滤收集并水洗三次得9-1(47.79mg,86％收率)。
MS(ESI)m/z＝443.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.81(s,1H),7.96(s,1H),7.65(s,1H),7.43(s,1H),7.33(s,1H),6.62(s,1H),4.71–4.53(m,4H),4.39–4.29(m,1H),4.18(t,J＝10.1Hz,1H),3.65–3.53(m,1H),3.48(s,1H),3.30–3.23(m,1H),2.17(s,3H),1.99–1.84(m,3H),1.79(d,J＝14.6Hz,1H),1.35(t,J＝7.1Hz,3H),1.17(d,J＝6.3Hz,3H).
实施例9-2
步骤1：(R)-4-甲基-10-硝基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧杂氮杂环十一碳烯-12-羧酸甲酯的合成
室温下，将化合物9-1h(1.39g(70％纯度)，3.85mmol)和碳酸钾(797mg，5.77mmol)溶于DMF(400mL)中，升温至60℃搅拌反应过夜。反应完成后旋干溶剂，乙酸乙酯(50mL)溶解后分别用水和饱和食盐水洗涤，旋干后经正相硅胶柱(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/3,v/v)纯化,得到的消旋体经SFC纯化分离，得9-2a(300mg)，橙色固体。
MS(ESI)m/z＝325.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.50(t,J＝6.2Hz,1H),8.21(d,J＝1.9Hz,1H),7.48(d,J＝1.8Hz,1H),4.55–4.46(m,1H),4.21–4.09(m,1H),3.99–3.89(m,1H),3.82(s,3H),3.65–3.52(m,2H),3.42–3.34(m,1H),3.20–3.06(m,1H),1.96–1.62(m,4H),1.13(d,J＝6.3Hz,3H).
步骤2：(R)-4-甲基-10-胺基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧杂氮杂环十一碳烯-12-羧酸甲酯的合成
向9-2a(300mg，0.93mmol)的甲醇(15mL)和四氢呋喃(15mL)混合溶液中加入钯碳(10％，113mg)，氢化还原3h，过滤掉钯碳，滤液浓缩后得到9-2b(307mg，粗品)。直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝295.0[M+H]+。
步骤3：(R)-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂-2，13a-二氮杂环苯并[cd]茚满-4-羧酸甲酯的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(33mg，0.17mmol)滴加入化合物9-2b(50mg，0.17mmol)的DMF(2mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(77mg，0.20mmol)和N,N-二异丙基乙胺(43mg,0.34mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经过滤水洗，得到化合物9-2c(74mg，粗品)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝456.0[M+H]+。
步骤4：(R)-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂-2，13a-二氮杂环苯并[cd]茚满-4-羧酸的合成
化合物9-2c(74mg,0.16mmol)溶于5mL MeOH/H2O(10:1)的混合溶剂中，加入水合氢氧化锂(70mg,1.7mmol)，加热到65度下反应5h。冷至室温后，加水稀释，乙酸乙酯萃取，分离的水相加稀盐酸(3M)调至pH：3～2,析出的白色固体经过滤干燥得9-2d(64mg，85％收率)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝442.0[M+H]+。
步骤5：(R)-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂-2，13a-二氮杂环苯并[cd]茚满-4-甲酰胺的合成
化合物9-2d(64mg,0.14mmol)溶于DMF(2mL)中，依次加入DIPEA(36mg,0.28mmol),HATU(66mg,0.17mmol)，室温下搅拌30min，再加入碳酸氢铵(22mg,0.28mmol)，室温下搅拌过夜。反应液加水稀释，析出白色固体，经过滤收集并水洗三次得9-2(58mg,90％收率)。
MS(ESI)m/z＝441.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.81(s,1H),7.96(s,1H),7.66(s,1H),7.43(s,1H),7.33(s,1H),6.62(s,1H),4.71–4.53(m,4H),4.35(dt,J＝5.2,4.1Hz,1H),4.18(t,J＝9.8Hz,1H),3.65–3.53(m,1H),3.53–3.42(m,1H),3.29–3.22(m,1H),2.17(s,3H),1.98–1.83(m,3H),1.83–1.72(m,1H),1.35(t,J＝7.1Hz,3H),1.17(d,J＝6.3Hz,3H).
实施例10
步骤1：3-氨基-5-溴-4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)苯甲酸甲酯的合成
化合物1c(600mg，1.39mmol)溶解于甲醇(10mL)，溶液冷却到0℃，然后依次加入氨水(2.5mL)、连二亚硫酸钠(1.2g，6.9mmol)的水溶液(5mL)。反应混合液在0℃下搅拌1h，反应液颜色由橙红色变为白色。反应液旋蒸除甲醇，然后加水稀释，加乙酸乙酯萃取(20mL×4)，分离得到的有机相用饱和食盐水洗(20mL×2)，无水硫酸钠干燥、过滤，然后旋干得到化合物10a(440mg，收率79％)。
MS(ESI)m/z＝402.1[M+H]+
步骤2：7-溴-1-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸甲酯的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(214mg，1.1mmol)滴加入化合物10a(440mg，1.1mmol)的DMF(5mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(493mg，1.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(284mg,2.2mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应液经反相MPLC分离(洗脱剂乙腈/水＝1/2，v/v)得到化合物10b(560mg，收率90％)。
MS(ESI)m/z＝563.1[M+H]+。
步骤3：7-溴-1-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)-2-(1-乙基-3-甲基-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸甲酯的合成
在室温下，将DIPEA(503mg，3.9mmol)加入10b(550mg，0.98mmol)的DMF(5mL)中，升温至40℃反应过夜。将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(5mL*3)，合并有机相分别用水、饱和食盐水洗，并用无水硫酸钠干燥、过滤，浓缩得到化合物10c(640mg，收率94％)，直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝693.2[M+H]+。
步骤4：(E)-7-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁-1-烯-1-基)-1-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)-2-(1-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸甲酯的合成
在室温下，向10c(640mg，0.92mmol)的N,N-二甲基乙酰胺中加入醋酸钯(1.03g，4.6mmol)，2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(86mg，0.18mmol)和DIPEA(356mg，2.76mmol)。氮气置换后维持惰性氛围升温至110℃，反应18h。将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(10mL*3)，合并有机相分别用水、饱和食盐水洗，并用无水硫酸钠干燥、过滤，浓缩得到粗品，经硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到化合物10c(400mg，收率70％)。
MS(ESI)m/z＝625.3[M+H]+。
步骤5：(E)-4-(1-(3-氨基丙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)丁-3-烯酸的合成
在冰浴下，将TFA(5mL)加入10c(254mg，0.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中。升至室温搅拌过夜，旋干溶剂并用油泵减压除去过量的三氟乙酸，得到的化合物10d(235mg，100％收率)直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝469.2[M+H]+
步骤6：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-9-氧代8,9,10,11,12,13-六氢-2,10,13a-三氮杂环戊烯[cd]茚-4-羧酸甲酯的合成
化合物10d(235mg，0.4mmol)溶于DMF(10mL)中，再加入DIPEA(258mg，2.0mmol)和HBTU(167mg，0.44mmol)。室温反应2h，将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(10mL*3)，合并有机相分别用水、饱和食盐水洗，并用无水硫酸钠干燥、过滤，浓缩得到粗品，经硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)得到化合物10e(84mg，收率45％)。
MS(ESI)m/z＝451.2[M+H]+
步骤7：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-9-氧代8,9,10,11,12,13-六氢-2,10,13a-三氮杂环戊烯[cd]茚-4-羧酸的合成
化合物10e(84mg，0.18mmol)溶解在混合溶剂四氢呋喃(2mL)和甲醇(1mL)中，再加入氢氧化锂(76mg，1.8mmol)的水(2mL)溶液中。反应液室温搅拌16h后。加水稀释旋干有机溶剂，水相用稀盐酸(1M)酸化至pH≈4，乙酸乙酯萃取(10mL x3)，合并有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，旋干溶剂得到化合物10f(65mg，收率83％)
MS(ESI)m/z＝437.2[M+H]+。
步骤8：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-9-氧代8,9,10,11,12,13-六氢-2,10,13a-三氮杂环戊烯[cd]茚-4-甲酰胺的合成
在冰浴下，将HATU(68mg，0.18mmol)加入化合物10f(65mg，0.15mmol)的DMF(2mL)溶液中。15min后，加入DIPEA(58mg,0.45mmol)和氯化铵(29mg，0.54mmol)。反应1h，反应液用反相MPLC分离(洗脱剂乙腈/水＝1/1,v/v)得到化合物10g(26mg，收率33％)。
MS(ESI)m/z＝436.2[M+H]+。
步骤9：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-9-氧代-6,7,8,9,10,11,12,13-八氢-2,10,13a-三氮杂环芳基[cd]茚-4-甲酰胺的合成
室温下，向10g(24mg，0.055mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入钯/碳(10％，10mg)，氢化反应1h。过滤除掉钯碳，旋干溶剂得到化合物10(10mg，收率42％)。
MS(ESI)m/z＝438.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,MeOD):δppm7.96(s,1H),7.87(s,1H),7.75(s,1H),6.82(s,1H),4.73(q,J＝6.8,14Hz,2H),4.44(s,2H),3.14(s,2H),2.32(s,3H),2.26(m,2H),1.47(t,J＝7.2Hz,3H),1.30-1.35(m,2H)
实施例11
步骤1：(S)-1-(1-乙基-4-氟-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂-2，13a-二氮杂环苯并[cd]茚满-4-羧酸甲酯的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基4-氟-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(215mg，1.01mmol)滴加入化合物(S)-10-氨基-4-甲基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧杂氮杂环十一碳烯-12-羧酸甲酯(277mg，0.92mmol)的DMF(4mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(420mg，1.1mmol)和N,N-二异丙基乙胺(237mg,1.84mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经过滤水洗，得到化合物11a(380mg，粗品)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝474.0[M+H]+。
步骤2：(S)-1-(1-乙基-4-氟-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂-2，13a-二氮杂环苯并[cd]茚满-4-羧酸的合成
化合物11a(374mg,0.79mmol)溶于30mL MeOH/H2O(10:1)的混合溶剂中，加入水合氢氧化锂(329mg,7.9mmol)，加热到65度下反应5h。冷至室温后，加水稀释，乙酸乙酯萃取，分离的水相加稀盐酸(3M)调至pH：3～2,析出的白色固体经过滤干燥得11b(247mg，68％收率)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝460.0[M+H]+。
步骤3：(S)-1-(1-乙基-4-氟-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂-2，13a-二氮杂环苯并[cd]茚满-4-甲酰胺的合成
化合物11b(247mg,0.53mmol)溶于DMF(4mL)中，依次加入DIPEA(130mg,1.0mmol),HATU(241mg,0.63mmol)，室温下搅拌30min，再加入碳酸氢铵(85mg,1.0mmol)，室温下搅拌过夜。反应液加水稀释，析出白色固体，经过滤收集并水洗三次得11(195mg,80％收率)。
MS(ESI)m/z＝459.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.83(s,1H),7.97(s,1H),7.66(s,1H),7.44(s,1H),7.34(s,1H),4.77–4.58(m,2H),4.58–4.44(m,2H),4.34(d,J＝12.6Hz,1H),4.18(t,J＝10.1Hz,1H),3.65–3.52(m,1H),3.47(s,1H),3.30–3.19(m,1H),2.15(s,3H),1.99–1.69(m,4H),1.33(t,J＝7.1Hz,3H),1.16(d,J＝6.2Hz,3H).
实施例12
步骤1：(R)-1-(1-乙基-4-氟-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂-2，13a-二氮杂环苯并[cd]茚满-4-羧酸甲酯的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基4-氟-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(215mg，1.01mmol)滴加入化合物(R)-10-氨基-4-甲基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧杂氮杂环十一碳烯-12-羧酸甲酯(306mg，0.92mmol)的DMF(4mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(420mg，1.1mmol)和N,N-二异丙基乙胺(237mg,1.84mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经过滤水洗，得到化合物12a(370mg，粗品)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝474.0[M+H]+。
步骤2：(R)-1-(1-乙基-4-氟-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂-2，13a-二氮杂环苯并[cd]茚满-4-羧酸的合成
化合物12a(363mg,0.77mmol)溶于30mL MeOH/H2O(10:1)的混合溶剂中，加入水合氢氧化锂(352mg,7.8mmol)，加热到65度下反应5h。冷至室温后，加水稀释，乙酸乙酯萃取，分离的水相加稀盐酸(3M)调至pH：3～2,析出的白色固体经过滤干燥得12b(250mg，77％收率)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝460.0[M+H]+。
步骤3：(R)-1-(1-乙基-4-氟-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂-2，13a-二氮杂环苯并[cd]茚满-4-甲酰胺的合成
化合物12b(250mg,0.54mmol)溶于DMF(4mL)中，依次加入DIPEA(139mg,1.0mmol),HATU(246mg,0.65mmol)，室温下搅拌30min，再加入碳酸氢铵(86mg,1.0mmol)，室温下搅拌过夜。反应液加水稀释，析出白色固体，经过滤收集并水洗三次得12(196mg,80％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.86(s,1H),7.97(s,1H),7.66(s,1H),7.44(s,1H),7.34(s,1H),4.74–4.58(m,2H),4.58–4.47(m,2H),4.41–4.28(m,1H),4.18(t,J＝10.1Hz,1H),3.65–3.53(m,1H),3.53–3.42(m,1H),3.30–3.22(m,1H),2.01–1.86(m,2H),1.85–1.66(m,2H),1.33(t,J＝7.1Hz,3H),1.16(d,J＝6.3Hz,3H).
实施例13
步骤1：(S)-1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二恶唑-2,13a-二氮杂环戊烯[cd]茚4-羧酸甲酯的合成
在冰浴下，将化合物4-乙基-2-甲基噻唑-5-羰基异硫氰酸酯(107mg，0.50mmol)滴加入化合物(S)-10-氨基-4-甲基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧杂氮杂环十一碳烯-12-羧酸甲酯(153mg，0.46mmol)的DMF(4mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(210mg，0.55mmol)和N,N-二异丙基乙胺(118mg,0.90mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经过滤水洗，得到化合物13a(185mg，粗品)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝473.0[M+H]+。
步骤2：(S)-1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二恶唑-2,13a-二氮杂环戊烯[cd]茚4-羧酸的合成
化合物13a(181mg,0.39mmol)溶于15mL MeOH/H2O(10:1)的混合溶剂中，加入水合氢氧化锂(176mg,3.9mmol)，加热到65度下反应5h。冷至室温后，加水稀释，乙酸乙酯萃取，分离的水相加稀盐酸(3M)调至pH：3～2,析出的白色固体经过滤干燥得13b(125mg，77％收率)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝459.0[M+H]+。
步骤3：(S)-1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二恶唑-2,13a-二氮杂环戊烯[cd]茚4-甲酰胺的合成
化合物13b(125mg,0.27mmol)溶于DMF(3mL)中，依次加入DIPEA(70mg,0.5mmol),HATU(123mg,0.33mmol)，室温下搅拌30min，再加入碳酸氢铵(43mg,0.33mmol)，室温下搅拌过夜。反应液加水稀释，析出白色固体，经过滤收集并水洗三次得13(98mg,80％收率)。
MS(ESI)m/z＝458.0[M+H]+。
实施例14
步骤1：(R)-1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二恶唑-2,13a-二氮杂环戊烯[cd]茚4-羧酸甲酯的合成
在冰浴下，将化合物4-乙基-2-甲基噻唑-5-羰基异硫氰酸酯(110mg，0.52mmol)滴加入化合物(R)-10-氨基-4-甲基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧杂氮杂环十一碳烯-12-羧酸甲酯(139mg，0.47mmol)的DMF(4mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(214mg，0.56mmol)和N,N-二异丙基乙胺(121mg,0.94mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经过滤水洗，得到化合物13a(175mg，粗品)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝473.0[M+H]+。
步骤2：(R)-1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二恶唑-2,13a-二氮杂环戊烯[cd]茚4-羧酸的合成
化合物14a(90mg,0.19mmol)溶于10mL MeOH/H2O(10:1)的混合溶剂中，加入水合氢氧化锂(88mg,1.95mmol)，加热到65度下反应5h。冷至室温后，加水稀释，乙酸乙酯萃取，分离的水相加稀盐酸(3M)调至pH：3～2,析出的白色固体经过滤干燥得14b(63mg，76％收率)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝459.0[M+H]+。
步骤3：(R)-1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-9-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二恶唑-2,13a-二氮杂环戊烯[cd]茚4-甲酰胺的合成
化合物14b(63mg,0.14mmol)溶于DMF(3mL)中，依次加入DIPEA(40mg,0.3mmol),HATU(62mg,0.16mmol)，室温下搅拌30min，再加入碳酸氢铵(13mg,0.165mmol)，室温下搅拌过夜。反应液加水稀释，析出白色固体，经过滤收集并水洗三次得14(49mg,80％收率)。
MS(ESI)m/z＝458.0[M+H]+
实施例15
步骤1：3-溴-4-((3-羟丙基)氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，将化合物3-羟基丙胺(622mg,8.29mmol)和DIPEA(1.78g,13.8mmol)滴加入化合物3-溴-4氟5-硝基苯甲酸甲酯(1.92g,6.9mmol)的DMF(10mL)溶液中，反应3h。反应完全后加水稀释，二氯甲烷萃取，合并的有机相经水洗,饱和食盐水洗涤,干燥浓缩后得到化合物15a(2.1g,粗品)，黄色油状物。直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝334.0[M+H]+。
步骤2：3-氨基-5-溴-4-((3-羟丙基)氨基)苯甲酸甲酯的合成
冰浴下，将氨水(5mL，33mmol)加入化合物15a(1.1g,3.3mmol)的MeOH(20mL)溶剂中，5min后，加入保险粉(2.87g,16.5mmol)的水溶液(6mL)，逐渐升至室温并搅拌2h后反应完全，加水稀释，二氯甲烷萃取，分离的有机相加水，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥浓缩后，得15b(772mg，77％收率)，黄色油状物。未经纯化直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝304.0[M+H]+。
步骤3：7-溴-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-1-(3-羟丙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸甲酯的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基4-氟-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(545mg，2.79mmol)滴加入化合物15b(770mg，2.54mmol)的DMF(10mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(1.16mg，1.1mmol)和N,N-二异丙基乙胺(655mg,5.08mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经过滤水洗，得到化合物15c(765mg，粗品)，浅粉色固体。
MS(ESI)m/z＝465.0[M+H]+。
步骤4：7-溴-2-(1-乙基-3-甲基-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-1-(3-羟丙基)-1H-苯并[d]咪唑5-羧酸甲酯的合成
室温下，向化合物15c(765mg，1.65mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液加入碳酸铯(1.6g，4.97mmol)，(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(550mg，3.3mmol)。搅拌过夜。反应完全后浓缩反应液，得到的粗品经硅胶柱纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝95/5，v/v)得到15d(570mg，58％收率)，类白色固体。
MS(ESI)m/z＝594.0[M+H]+。
步骤5：7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙-1-炔-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(3-羟丙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸甲酯的合成
室温下，将化合物15d(270mg，0.45mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中，加入N-叔丁氧羰基丙炔胺(106mg，0.68mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(16mg,0.02mmol),三叔丁基磷(10％甲苯溶液，37mg，0.04mmol)，碘化亚铜(8.7mg，0.04mmol)和DIPEA(117mg，0.91mmol)。混合液氮气置换5次，氮气保护下加热至85℃并在此温度下搅拌过夜，反应完成后浓缩，干燥得粗品，经硅胶柱纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝92/8，v/v)得15e(76mg，25％收率)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝669.0[M+H]+。
步骤6：7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)-2-(1-乙基-3-甲基-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基-1-(3-羟丙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸甲酯的合成
将化合物15e(76mg，0.11mmol)溶于甲醇(8mL)中，加入Pd/C(20mg，)，氢气置换后，在氢气球保护下室温搅拌48h。反应完全后，过滤除掉Pd/C，滤液旋干得15f(68mg，收率89％)，无色油状物。
MS(ESI)m/z＝673.0[M+H]+。
步骤7：7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)-2-(1-乙基-3-甲基-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基-1-(3-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)丙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸甲酯的合成
冰浴下，将对硝基氯甲酸苯酯(18mg，0.09mmol)，吡啶(13mg，0.16mmol)加入15f(68mg，0.08mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中。之间升温至室温，然后搅拌反应3h。反应完成后，减压蒸馏除掉有机相，得到的粗品，经TLC(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝15/1，v/v)硅胶板纯化，得到15g(32mg，49％收率)，无色油状物。
MS(ESI)m/z＝838.0[M+H]+。
步骤8：7-(3-氨基丙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺基)-1-(3-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)丙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸甲酯的合成
室温下，将三氟醋酸(1mL)滴加入化合物15g(32mg，0.02mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中，室温下搅拌2h，反应完全后，旋除有机相，干燥得到15h(35mg，粗品)，黄色油状物。
MS(ESI)m/z＝608.0[M+H]+。
步骤9：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-10-氧代-6,7,8,9,10,12,13,14-八氢-11-氧杂-2,9，14a-三氮杂环十二烷基[cd]茚-4-羧酸甲酯的合成
在室温下，将DIPEA(13mg，0.1mmol)滴加入化合物15h(35mg粗品，0.02mmol)的乙腈(5mL)溶液中，室温反应5h。反应完全后,反应完成后，减压蒸馏除掉有机相，得到的粗品，经TLC(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝15/1，v/v)硅胶板纯化，得到15i(10mg，粗品)，黄色油状物。
MS(ESI)m/z＝469.0[M+H]+。
步骤10：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-10-氧代-6,7,8,9,10,12,13,14-八氢-11-氧杂-2,9，14a-三氮杂环十二烷基[cd]茚满-4-羧酸的合成
室温下，将化合物15i(10mg(70％纯度)，0.01mmol)溶于氨水中(5mL)中，升温至90℃搅拌反应过夜。反应完成后旋干溶剂，干燥得到15j(15mg，cupin)，黄色油状物。未经纯化直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝455.0[M+H]+。
步骤11：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-10-氧代-6,7,8,9,10,12,13,14-八氢-11-氧杂-2,9，14a-三氮杂环十二烷基[cd]茚满-4-甲酰胺的合成
向15h(15mg，粗品，0.01mmol)的二氧六环(3mL)溶液中加入(Boc)2O(3mg,0.015mmol)，吡啶(一滴)和NH4HCO3(2mg，0.02mmol)。室温下搅拌过夜，反应完成后，旋干溶剂，粗品经制备薄层色谱(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝15/1，v/v)后再经MPLC(洗脱剂：水/乙腈)，得化合物15(3.5mg，77％收率)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝454.0[M+H]+。
实施例16
步骤1：4-甲基-2-苯基-1,3-二恶烷的合成
氮气保护下，将1,3-丁二醇(15g，167mmol)、苯甲醛(17.7g，167mmol)、无水硫酸钠(40g，333mmol)、对甲苯磺酸(2.9g，17mmol)溶于DCM(200mL)，室温反应10h。反应完成后过滤无机盐，有机相旋干溶剂得到16a(29g，163mmol)，收率97％。
MS(ESI)m/z＝179[M+H]+。
步骤2：3-(苄氧基)丁烷-1-醇的合成
氮气保护下，将16a(17.8g，100mmol)的DCM(200mL)溶液降温至-78℃，缓慢滴入DIBAL-H(100mL,1M二氯甲烷溶液,100mmol)，升温至室温反应10h。反应完成后加十水硫酸钠淬灭反应，过滤无机盐，有机相旋干溶剂，粗品经柱层析分离(洗脱剂:乙酸乙酯/石油醚＝1/4,v/v)得到16b(14.7g，81mmol)，收率82％。
MS(ESI)m/z＝181[M+H]+。
步骤3：(3-(3-(苄氧基)丁氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成冰浴下，将氢化钠(107mg，2.66mmol)加入到16b(400mg，2.22mmol)的DMF(8mL)和四氢呋喃(16mL)混合溶剂中。搅拌30分钟后加入N-叔丁氧羰基溴丙胺16c(635mg，2.66mmol)，升温至室温反应10h。反应完成后加水，乙酸乙酯萃取(50mL x3)，合并有机相旋干溶剂，粗品经柱层析分离(洗脱剂:乙酸乙酯/石油醚＝1/10,v/v)得到16d(847g，2.51mmol)，收率57％。
MS(ESI)m/z＝338[M+H]+。
步骤4：(3-(3-羟基丁氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
向化合物16d(847mg，2.51mmol)的甲醇和乙酸乙酯溶液中加入钯碳(10％，80mg)，氢化还原3h，过滤除掉钯碳，滤液浓缩后得到16e(562mg，2.27mmol)，收率99％。直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝248[M+H]+。
步骤5：(3-(3-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
室温下，将化合物16e(562mg，2.27mmol)和4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(491mg，2.27mmol)溶于干燥四氢呋喃(20mL)中，氮气置换空气后加入三苯基膦(894mg，3.41mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(689mg，3.41mmol)，加完搅拌反应10h。反应完成后加水乙酸乙酯萃取(20mL x3)，合并有机相旋干溶剂，粗品经柱层析分离(洗脱剂乙酸乙酯/石油醚＝1/2,v/v)得到16f(900mg，2.01mmol)收率92％。
MS(ESI)m/z＝446[M+H]+。
步骤6：3-((4-(3-氨基丙氧基)丁-2-基)氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺的合成
将TFA(20mL)加入化合物16f(900mg，2.01mmol)的DCM(20mL)中，室温下反应1h，反应完全后旋干，粗品用碳酸氢钠饱和溶液调至pH≈8，乙酸乙酯萃取(20mLx3)，合并有机相用饱和食盐水洗涤，再干燥后旋干得到16g(377mg，1.09mmol)，收率54％，直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝346[M+H]+。
步骤7：2-甲基-10-硝基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧杂氮杂环十一烷-12-甲酰胺的合成
室温下，将16g(377mg，1.09mmol)和碳酸钾(301mg，2.18mmol)溶于DMF(120mL)中，升温至90℃搅拌反应20h。反应完成后旋干溶剂，乙酸乙酯(50mL)溶解后分别用水和饱和食盐水洗涤，旋干得到16h(366mg，1.09mmol)收率99％，直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝310[M+H]+。
步骤8：2-甲基-10-胺基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[b][1,8,4]二氧杂氮杂环十一烷-12-甲酰胺的合成
向16h(336mg，1.09mmol)的甲醇和乙酸乙酯溶液中加入钯碳(10％，20mg)，氢化还原3h，过滤掉钯碳，滤液浓缩后得到16i(272mg，0.975mmol)，收率89％。直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝280[M+H]+。
步骤9：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-甲基-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二氧杂2,13a-二氮杂环十一烷苯并[cd]茚-4-甲酰胺的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(35mg，0.18mmol)滴加入化合物16i(50mg，0.18mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(75mg，0.20mmol)和N,N-二异丙基乙胺(46mg,0.36mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经反相HPLC纯化得到化合物16(5.5mg,收率7.1％)。
MS(ESI)m/z＝441[M+H]+
1H NMR(400M,DMSO-d6)δ12.84(s,1H),7.97-8.04(m,1H),7.62-7.67(m,1H),7.42-7.48(m,1H),7.31-7.38(m,1H),6.63(s,1H),4.92-4.98(m,1H),4.76-4.84(m,1H),4.56-4.66(m,2H),4.24-4.30(m,1H),3.94-4.01(m,1H),3.07-3.21(m,2H),2.17(s,3H),1.85-2.11(m,4H),1.61-1.69(m,1H),1.52(d,J＝6.08Hz,3H),1.35(t,J＝7.08Hz,3H).
实施例17
步骤1：1-(4-乙基-2-(氟甲基)噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-6,10-二恶唑-2,13a-二氮杂环己基[cd]茚4-羧酰胺的合成
在冰浴下，将化合物4-乙基-2-(氟甲基)噻唑-5-羰基异硫氰酸酯(23mg，0.1mmol)滴加入化合物2f(27mg，0.1mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(46mg，0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(26mg,0.2mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经反相MPLC纯化得到化合物17(20mg,收率43％)。
MS(ESI)m/z＝462[M+H]+
1H NMR(400M,DMSO-d6)δ12.86(s,1H),7.85-8.11(m,1H),7.60-7.72(m,1H),7.43-7.55(m,1H),7.31-7.41(m,1H),5.65-5.78(m,1H),5.53-5.64(m,1H),4.33-4.64(m,4H),3.63-3.74(m,1H),3.21-3.29(m,2H),1.82-2.00(m,2H),1.20-1.32(m,3H).
实施例18
在冰浴下，将化合物2-(二氟甲基)-4-乙基噻唑-5-羰基异硫氰酸酯(25mg，0.1mmol)滴加入化合物2f(27mg，0.1mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(46mg，0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(26mg,0.2mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经反相HPLC纯化得到化合物18(8.5mg,收率17.7％)。
MS(ESI)m/z＝480[M+H]+
1H NMR(400M,DMSO-d6)δ12.91(s,1H),7.95-8.03(m,1H),7.65-7.70(m,1H),7.44-7.50(m,1H),7.14-7.44(m,2H),4.40-4.58(m,4H),3.64-3.76(m,2H),3.25-3.31(m,2H),1.86-1.99(m,2H),1.27(t,J＝7.48Hz,3H).
实施例19
在冰浴下，将化合物1-乙基-4-氟-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(21mg，0.1mmol)滴加入化合物2f(27mg，0.1mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(46mg，0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(26mg,0.2mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经反相HPLC纯化得到化合物19(6.6mg,收率14.9％)。
MS(ESI)m/z＝445[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)12.85(s,1H),7.98(s,1H),7.67(s,1H),7.45(s,1H),7.35(s,1H),4.55～4.40(m,6H),3.75～3.70(m,2H),2.16(s,3H),1.92～1.90(m,4H),1.34(t,J＝7.2Hz,3H)
实施例20
在冰浴下，将化合物1-乙基-4-氯-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(23mg，0.1mmol)滴加入化合物2f(27mg，0.1mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h。然后把HATU(46mg，0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(26mg,0.2mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应完全后经反相HPLC纯化得到化合物20(5.8mg,收率12.6％)。
MS(ESI)m/z＝461[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)12.96(s,1H),7.99(s,1H),7.69(s,1H),7.47(s,1H),7.36(s,1H),4.55～4.45(m,6H),3.79～3.74(m,2H),2.17(s,3H),1.94～1.90(m,4H),1.36(t,J＝7.2Hz,3H)
实施例21
步骤1：(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基苄基(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基)氨基甲酸苄酯的合成
在室温下，向N-BOC丙二胺(2.1g，12mmol)的乙腈溶液中加入DIPEA(3.1g，24mmol)和O-TBS溴丙烷(2.0g，7.9mmol)。反应液升至80℃，反应4h。冷却至室温后，将苄氧羰酰琥珀酰亚胺(2.98g，12mmol)，继续反应3h。旋干溶剂后经硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到化合物21a(2.4g，62％)
MS(ESI)m/z＝481.3[M+H]+
步骤2：(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(3-羟丙基)氨基甲酸苄酯的合成
将化合物21a(2.4g，5mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，再加入四丁基氟化铵(10mL，1M)，反应2h后旋蒸除掉四氢呋喃，粗品溶于乙酸乙酯中，分别用水、饱和食盐水洗，浓缩后经硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/3)得到化合物21b(1.3g，收率70％)
MS(ESI)m/z＝367.2[M+H]+
步骤3：3-(3-(((苄氧基)羰基)(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
将21b(400mg，1.09mmol)和4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯(252mg，1.09mmol)溶于干燥四氢呋喃中(10mL)，再加入三苯基膦(428mg，1.63mmol)。待冰浴降至0℃，在氮气保护下加入偶氮二甲酸二异丙酯(440mg，2.18mmol)。然后升至室温，反应18h。旋干后过柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/2)得到化合物21c(600mg，收率94％)。
MS(ESI)m/z＝580.2[M+H]+
步骤4：3-(3-((3-氨基丙基)((苄氧基)羰基)氨基)丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
在冰浴下，将三氟乙酸(5mL)加入21c(600mg，1.03mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中，升至室温反应1h，旋干溶剂，再用油泵除掉过量三氟乙酸得到化合物21d(700mg，收率100％)。
MS(ESI)m/z＝480.2[M+H]+
步骤5：5-苄基12-甲基10-硝基-3,4,6,7,8,9-六氢苯并[b][1,4,8]草二氮杂环十一癸-5,12(2H)-二羧酸酯的合成
将21d(700mg，1.03mmol)溶于DMF(100mL)中，加入碳酸钾(569mg，4.12mmol)，升至90℃反应16h，旋干溶剂，加入乙酸乙酯溶解后，用水洗除去无机盐，旋干有机相得到粗品经硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到化合物21e(230mg，收率50％)
MS(ESI)m/z＝444.1[M+H]+
步骤6：5-苄基12-甲基10-氨基-3,4,6,7,8,9-六氢苯并[b][1,4,8]草二氮杂环十一癸-5,12(2H)-二羧酸酯的合成
21e(230mg，0.52mmol)溶于甲醇(5mL)和四氢呋喃(5mL)中，冰浴下加入氨水(1mL)。10min后，将连二亚硫酸钠(452mg，2.6mmol)的水溶液(2mL)加入反应液中。半小时后反应完全，乙酸乙酯萃取，有机相分别用水、饱和食盐水，无水硫酸钠干燥后过滤并浓缩得到化合物21f(190mg，收率88％)
MS(ESI)m/z＝414.2[M+H]+
步骤7：10-((苄氧基)羰基)-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,10,11,12,13-六氢-7H-6-oxa-2，10,13a-三氮杂杂环基[cd]茚-4-羧酸甲酯的合成
在冰浴下，向21f(190mg，0.46mmol)的DMF(10mL)溶液中加入1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(85mg，0.46mmol)。十分钟后，加入DIPEA(148mg，1.15mmol)和HATU(194mg，0.51mmol)。反应2h后，旋干DMF，加入乙酸乙酯有固体析出，过滤收集固体即得到化合物21g(200mg，收率74％)。
MS(ESI)m/z＝575.2[M+H]+
步骤8：10-((苄氧基)羰基)-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,10,11,12,13-六氢-7H-6-oxa-2，10,13a-三氮杂杂环基[cd]茚-4-羧酸的合成将21g(200mg，0.34mmol)溶于甲醇(3mL)和四氢呋喃(3mL)中，加入水合氢氧化锂(74mg，1.7mmol)。升至75℃，反应2h。冷却后，用稀盐酸(1M)调至pH达到3左右，析出固体，过滤固体并干燥得到化合物21h(160mg，收率84％)。
MS(ESI)m/z＝561.2[M+H]+
步骤9：10-((苄氧基)羰基)-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,10,11,12,13-六氢-7H-6-oxa-2，10,13a-三氮杂杂环基[cd]茚-4-甲酰胺的合成
在冰浴下，向21h(160mg，0.28mmol)的DMF(5mL)溶液中加入HATU(106mg，0.28mmol)、DIPEA(108mg，0.84mmol)和氯化铵(74mg，1.4mmol)。反应2h后，旋干DMF，乙酸乙酯溶解后分别用水、饱和食盐水洗，旋干有机相得到化合物21i(130mg，收率82％)。
MS(ESI)m/z＝560.2[M+H]+
步骤10：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,10,11,12,13-六氢-7H-6-oxa-2,10,13a-三氮杂杂环基[cd]茚-4-甲酰胺的合成
将21i(130mg，0.23mmol)分散于二氯甲烷(5mL)中，加入氢溴酸/醋酸(33％，5mL)，室温下反应1h。旋干溶剂得到粗品(140mg，氢溴酸盐并含有乙酸)，分出50mg粗品经制备HPLC纯化得到化合物21(22mg)。
MS(ESI)m/z＝426.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm8.06(s,1H)，7.73(s,1H)，7.54(s,1H)，7.40(s,1H)，6.72(s,1H)，4.62-4.55(m,6H)，3.20(s,br,2H)，2.94(s,br,2H)，2.19-2.13(m,5H)，2.08(s,br,2H)，1.36(t,J＝7.4,3H).
实施例22
步骤1：(3-(3-(苄氧基)丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成冰浴下，将氢化钠(550mg，13.7mmol)加入到(3-羟丙基)氨基甲酸叔丁酯(2g，11.42mmol)的DMF(8mL)和四氢呋喃(16mL)混合溶剂中。搅拌30分钟后加入3-苄氧基溴丙烷(3.66g，15.989mmol)，升温至室温反应10h。反应完成后加水，乙酸乙酯萃取(50mL x3)，合并有机相旋干溶剂，粗品经柱层析分离(洗脱剂:乙酸乙酯/石油醚＝1/10,v/v)得到无色油状物(3-(3-(苄氧基)丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物22a)(1.23g，3.8mmol)，收率33％。
MS(ESI)m/z＝324[M+H]+。
步骤2：(3-(3-羟基丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
向化合物22a(800mg，2.47mmol)的甲醇和乙酸乙酯溶液中加入钯碳(10％，80mg)，氢化还原3h，过滤除掉钯碳，滤液浓缩后得到(3-(3-羟基丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物22b)(519mg，2.227mmol)，收率90％。直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝234[M+H]+。
步骤3：甲磺酸-3-(3-叔丁氧羰基氨基)丙氧基)丙酯的合成
冰浴下，将化合物22b(800mg,3.43mmol)和三乙胺(1.43mL,10.3mmol)溶于DCM(20mL)中，缓慢滴入甲基磺酰氯(0.3mL,4.12mmol)，滴完后升到室温下反应过夜。LCMS显示反应完成，反应液用水洗，干燥后旋干，得到甲磺酸-3-(3-叔丁氧羰基氨基)丙氧基)丙酯(化合物22c)(1.35g,4.34mmol)，收率126％，直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝312[M+H]+。
步骤4：乙酸-3-(3-叔丁氧羰基氨基)丙氧基)丙硫酯的合成
将化合物22c(1.35g,4.34mmol)溶于DMF(20mL)中，加入硫代乙酸钾(0.94g,8.68mmol)并于室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完成。将反应认倒入水中，乙酸乙酯提取(3x40mL)，合并乙酸乙酯层，干燥后旋干，柱层析纯化(洗脱剂:乙酸乙酯/石油醚＝1/5,v/v)(茚三酮显色)，得黄色油乙酸-3-(3-叔丁氧羰基氨基)丙氧基)丙硫酯(化合物22d)(1.062g,3.65mmol)，收率84％.
MS(ESI)m/z＝292[M+H]+。
步骤5：乙酸-3-(3-氨基丙氧基)丙硫酯的合成
室温下，将化合物22d(1.062g,3.65mmol)加入二氯甲烷(20mL)和三氟乙酸(4mL)的混合溶剂中，搅拌过夜。LCMS显示反应完成，将反应液直接旋干，得乙酸-3-(3-氨基丙氧基)丙硫酯的三氟乙酸盐(化合物22e)(1.11g,3.65mmol)，收率100％.
MS(ESI)m/z＝192[M+H]+。
步骤6：4-(3-(3-乙硫基丙氧基)丙氨基)-3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
将化合物22e的三氟乙酸盐(1.11g,3.65mmol)溶于DMF(15mL)中，室温下依次加入3-溴-4-氟-5-硝基苯甲酸甲酯(1.00g,3.65mmol)和三乙胺(1.51mL,10.95mmol)，室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(3x40mL)，合并乙酸乙酯层后干燥，旋干，柱层析纯化(洗脱剂:乙酸乙酯/石油醚＝1/6,v/v)，得4-(3-(3-乙硫基丙氧基)丙氨基)-3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯(化合物22f)(1.52g,3.39mmol)，收率92.8％。
MS(ESI)m/z＝448[M+H]+。
步骤7：4-(3-(3-巯基丙氧基)丙氨基)-3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯的合成
将化合物22f(1.52g,3.39mmol)溶于甲醇(40mL)中，冰浴下加入甲醇钠(366mg,6.79mmol)，于冰浴下搅拌30分钟，LCMS显示反应完成。加1M HCl调至酸性，旋干。残余物用水和乙酸乙酯(50mL)溶解，分出乙酸乙酯层，干燥后旋干，得4-(3-(3-巯基丙氧基)丙氨基)-3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯(化合物22g)(1.30g,3.19mmol)，收率94.3％。
MS(ESI)m/z＝406[M+H]+。
步骤8：10-硝基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[f][1,5,8]氧硫氮杂环十一烷-12-甲酸甲酯的合成
室温下，化合物22g(1.30g,3.19mmol)溶于二氧六环(80mL)中，氮气保护下依次加入N,N-二异丙基乙胺(1.58mL,9.57mmol)，Xantphos(369mg,0.638mmol)，Pd2(dba)3(292mg,0.319mmol)，升温至100℃下反应过夜。LCMS显示反应完成。过渡除去不溶物，滤液旋干，柱层析纯化(洗脱剂:乙酸乙酯/石油醚＝1/5to 1/3,v/v)，得10-硝基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[f][1,5,8]氧硫氮杂环十一烷-12-甲酸甲酯(化合物22h)(570mg,1.74mmol)，收率54.7％。
MS(ESI)m/z＝327[M+H]+。
步骤9：10-氨基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[f][1,5,8]氧硫氮杂环十一烷-12-甲酸甲酯的合成
将化合物22h(400mg,1.23mmol)悬浮于甲醇(30mL)中，冰浴下加入氨水(1mL)，滴入连二亚硫酸钠(1.07g,6.14mmol)的水溶液(5mL)，滴完后升至室温下搅拌2小时，LCMS显示反应完成。过滤除去不溶物，滤液旋干，残余物用水和乙酸乙酯(50mL)重新溶解，分出乙酸乙酯层后干燥，旋干，得10-氨基-3,4,6,7,8,9-六氢-2H-苯并[f][1,5,8]氧硫氮杂环十一烷-12-甲酸甲酯(化合物22i)(320mg,1.08mmol)，收率88.1％。
MS(ESI)m/z＝297[M+H]+。
步骤10：1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸甲酯的合成
将化合物22i(160mg,0.54mmol)溶于DMF(5mL)，冰浴冷却下加入4-乙基-2-甲基噻唑-5-羰基异硫氰酸酯(126mg,0.594mmol)，冰浴下反应30分钟，LCMS显示加成完毕后，加入HATU(226mg,0.594mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.28mL,1.62mmol)，升至室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，过滤析出的固体，滤饼用DMF(1mL)和石油醚(20mL)各洗一次，干燥后得到1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸甲酯(化合物22j)(140mg,0.295mmol)，收率54.6％。
MS(ESI)m/z＝475[M+H]+。
步骤11：1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸的合成
将化合物22j(70mg,0.148mmol)悬浮于甲醇(5mL)中，加入水(1mL)和一水合氢氧化锂(62mg,1.48mmol)，升温至40℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。加1M HCl调至酸性，旋干溶剂。残余物用水和二氯甲烷(30mL)重新溶解，分出二氯甲烷层，干燥后旋干，得1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸(化合物22k)(61mg,0.133mmol)，收率81.8％。
MS(ESI)m/z＝461[M+H]+。
步骤12：1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酰胺的合成
将化合物22k(61mg,0.133mmol)溶于DMF(5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(0.09mL,0.532mmol)，HATU(76mg,0.20mmol)，室温下搅拌30分钟后加入氯化铵(21mg,0.398mmol)，室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(3x30mL)，合并乙酸乙酯层，干燥后旋干，prep-HPLC纯化，得1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酰胺(化合物22)(23.5mg,0.051mmol)，收率28％。
MS(ESI)m/z＝460[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.93(s,1H),8.07(s,1H),7.97(d,J＝16.7Hz,2H),7.40(s,1H),5.53(s,1H),4.19(s,1H),3.21(s,4H),3.22–3.15(m,1H),2.99(s,1H),2.61(s,3H),2.29(s,1H),1.96(s,1H),1.62(s,2H),1.53(s,1H),1.24(t,J＝7.3Hz,4H).
实施例23
步骤1：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸甲酯的合成
将化合物22i(160mg,0.54mmol)溶于DMF(5mL)，冰浴冷却下加入1-乙基-3-甲-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(116mg,0.594mmol)，冰浴下反应30分钟，LCMS显示加成完毕后，加入HATU(226mg,0.594mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.28mL,1.62mmol)，升至室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，反应液倒入水中，乙酸乙酯提取(3x30mL)，合并乙酸乙酯层，干燥后旋干，得1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸甲酯(化合物23a)(335mg,0.733mmol)，收率136％。
MS(ESI)m/z＝458[M+H]+。
步骤2：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸的合成
将化合物23a(190mg,0.416mmol)悬浮于甲醇(5mL)中，加入水(1mL)和一水合氢氧化锂(175mg,4.16mmol)，升温至50℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。加1M HCl调至酸性，旋干溶剂。残余物用水和乙酸乙酯(30mL)重新溶解，分出乙酸乙酯层，干燥后旋干，得1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸(化合物23b)(148mg,0.334mmol)，收率80.4％。
MS(ESI)m/z＝444[M+H]+。
步骤3：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酰胺的合成
将化合物23b(148mg,0.334mmol)溶于DMF(5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(0.22mL,1.336mmol)，HATU(190mg,0.501mmol)，室温下搅拌30分钟后加入氯化铵(53mg,1.00mmol)，室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(3x30mL)，合并乙酸乙酯层，干燥后旋干，prep-HPLC纯化，得1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酰胺(化合物23)(17.5mg,0.040mmol)，收率11.4％。
MS(ESI)m/z＝443[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.96(s,1H),8.08(s,1H),7.99(d,J＝10.0Hz,2H),7.40(s,1H),6.65(s,1H),5.52(s,1H),4.62(q,J＝7.2Hz,2H),4.25(s,1H),3.73(s,1H),3.57(s,1H),3.26(s,1H),3.17(s,1H),2.98(s,1H),2.25(s,1H),2.18(s,3H),1.97(s,1H),1.63(s,1H),1.53(s,1H),1.36(t,J＝7.1Hz,3H).
实施例24
步骤1：1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸甲酯-6,6-二氧化物的合成
将化合物22j(70mg,0.147mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入间氯过氧苯甲酸(51mg,0.295mmol)，室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，反应液加水洗，分出有机层，干燥后旋干，得1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸甲酯-6,6-二氧化物(化合物24a)(76mg,0.15mmol)，收率101.7％。
MS(ESI)m/z＝507[M+H]+。
步骤2：1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸-6,6-二氧化物的合成
将化合物24a(76mg,0.15mmol)悬浮于甲醇(5mL)中，加入水(1mL)和一水合氢氧化锂(63mg,1.5mmol)，升温至50℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。加1M HCl调至酸性，旋干溶剂。残余物用水和乙酸乙酯(30mL)重新溶解，分出乙酸乙酯层，干燥后旋干，得1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸-6,6-二氧化物(化合物24b)(25mg,0.051mmol)，收率34％。
MS(ESI)m/z＝493[M+H]+。
步骤3：1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酰胺-6,6-二氧化物的合成
将化合物24b(25mg,0.051mmol)溶于DMF(5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(0.033mL,0.204mmol)，HATU(29mg,0.077mmol)，室温下搅拌30分钟后加入氯化铵(8mg,0.152mmol)，室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(3x30mL)，合并乙酸乙酯层，干燥后旋干，prep-HPLC纯化，得1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酰胺-6,6-二氧化物(化合物24)(0.9mg,0.0018mmol)，收率3.6％。
MS(ESI)m/z＝492[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.42(d,J＝1.6Hz,1H),8.22(d,J＝1.7Hz,1H),5.60(s,1H),5.36(t,J＝4.8Hz,1H),,3.37(s,3H),2.72(s,3H),2.34(s,3H),2.21(s,2H),1.79(s,1H),1.62(s,1H),1.43(s,1H),1.37–1.28(m,1H),0.92(t,J＝6.7Hz,3H)
实施例25
步骤1：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸甲酯-6-氧化物的合成
将化合物23a(136mg,0.298mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，冰浴冷却下加入间氯过氧苯甲酸(61mg,0.357mmol)，冰浴下搅拌3小时。LCMS显示反应完成，反应液加碳酸氢钠饱和溶液洗，分出有机层，干燥后旋干，得1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸甲酯-6-氧化物(化合物25a)(50mg,0.106mmol)，收率35.5％。
MS(ESI)m/z＝474[M+H]+。
步骤2：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸-6-氧化物的合成
将化合物25a(50mg,0.106mmol)悬浮于甲醇(5mL)中，加入水(1mL)和一水合氢氧化锂(45mg,1.06mmol)，升温至50℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。加1M HCl调至酸性，旋干溶剂。残余物用水和乙酸乙酯(30mL)重新溶解，分出乙酸乙酯层，干燥后旋干，得1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酸-6-氧化物(化合物25b)(50mg,0.11mmol)，收率103％。
MS(ESI)m/z＝460[M+H]+。
步骤3：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酰胺-6-氧化物的合成
将化合物25b(50mg,0.11mmol)溶于DMF(5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(0.07mL,0.44mmol)，HATU(63mg,0.165mmol)，室温下搅拌30分钟后加入氯化铵(18mg,0.33mmol)，室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(3x30mL)，合并乙酸乙酯层，干燥后旋干，prep-HPLC纯化，得1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,11,12,13-六氢-10-氧-6-硫-2,13a-二氮杂环十一[cd]茚-4-甲酰胺-6-氧化物(化合物25)(0.9mg,0.002mmol)，收率1.8％。
MS(ESI)m/z＝459[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.08(s,1H),8.30(d,J＝15.1Hz,2H),8.15(s,1H),7.56–7.46(m,1H),6.67(s,1H),4.74(t,J＝12.6Hz,1H),4.61(p,J＝7.0,6.6Hz,2H),4.42–4.33(m,1H),4.04(s,1H),3.54(t,J＝10.6Hz,1H),3.48(t,J＝5.3Hz,2H),3.18(d,J＝6.6Hz,1H),2.27(s,1H),2.19(s,3H),2.00(dt,J＝13.2,6.3Hz,1H),1.75(d,J＝15.2Hz,1H),1.36(t,J＝7.1Hz,3H),1.24(s,2H)
实施例26
步骤1：1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-8,10,11,12-四氢-7H-9-氧-6-硫-2,12a-二氮杂环癸[cd]茚-4-甲酸甲酯的合成
将化合物8g(120mg,0.425mmol)溶于DMF(5mL)，冰浴冷却下加入4-乙基-2-甲基噻唑-5-羰基异硫氰酸酯(90mg,0.425mmol)，冰浴下反应30分钟，LCMS显示加成完毕后，加入HATU(178mg,0.468mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.23mL,1.28mmol)，升至室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，反应液倒入水中，乙酸乙酯提取(3x30mL)，合并乙酸乙酯层，干燥后旋干，得到1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-8,10,11,12-四氢-7H-9-氧-6-硫-2,12a-二氮杂环癸[cd]茚-4-甲酸甲酯(化合物26a)(220mg,0.478mmol)，收率112％。
MS(ESI)m/z＝461[M+H]+。
步骤2：1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-8,10,11,12-四氢-7H-9-氧-6-硫-2,12a-二氮杂环癸[cd]茚-4-甲酸的合成
将化合物26a(220mg,0.478mmol)悬浮于甲醇(10mL)中，加入水(2mL)和一水合氢氧化锂(201mg,4.78mmol)，升温至40℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。加1M HCl调至酸性，旋干溶剂。残余物用水和二氯甲烷(30mL)重新溶解，分出二氯甲烷层，干燥后旋干，得1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-8,10,11,12-四氢-7H-9-氧-6-硫-2,12a-二氮杂环癸[cd]茚-4-甲酸(化合物26b)(80mg,0.179mmol)，收率37.5％。
MS(ESI)m/z＝447[M+H]+。
步骤3：1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-8,10,11,12-四氢-7H-9-氧-6-硫-2,12a-二氮杂环癸[cd]茚-4-甲酰胺的合成
将化合物26b(80mg,0.179mmol)溶于DMF(5mL)中，加入三乙胺(0.1mL,0.716mmol)，HATU(102mg,0.0.269mmol)，室温下搅拌30分钟后加入氯化铵(29mg,0.538mmol)，室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取(3x30mL)，合并乙酸乙酯层，干燥后旋干，prep-HPLC纯化，得1-(4-乙基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺基)-8,10,11,12-四氢-7H-9-氧-6-硫-2,12a-二氮杂环癸[cd]茚-4-甲酰胺(化合物26)(6mg,0.013mmol)，收率7.5％。
MS(ESI)m/z＝446[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.98(s,1H),8.08–7.93(m,3H),7.41(s,1H),6.18–6.07(m,1H),4.16–4.07(m,1H),3.86(dt,J＝10.5,3.9Hz,1H),3.74(d,J＝9.5Hz,1H),3.19(q,J＝7.7Hz,2H),3.10(dt,J＝13.9,4.1Hz,2H),2.89(s,1H),2.73(s,1H),2.60(s,3H),2.34(s,1H),2.04(s,1H),1.23(t,J＝7.5Hz,3H).
实施例27
向21(20mg，0.047mmol)的甲醇(2mL)溶液中加入乙酸至pH为4左右，再加入甲醛醇溶液(1mL)。室温下反应0.5h后，氰基硼氢化钠(15mg，0.24mmol)，待反应完全，经制备HPLC纯化得到化合物27(8mg，收率38％)
MS(ESI)m/z＝440.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm12.79(s,1H)，7.96(s,1H)，7.67(s,1H)，7.46(s,1H)，7.33(s,1H)，6.65(s,1H)，4.73(t,J＝6.52，1H)，4.63(q,J＝6.57，2H)，4.54(m,2H)，2.28-2.22(m,5H)，2.18(s,3H)，1.87-1.83(m,2H)，1.80-1.76(m,2H)，1.36(t,J＝6.87,3H).
实施例28
将1-甲基哌啶-4-甲酸(8mg，0.056mmol)溶于DMF(2mL)中，室温下加入HATU(21mg，0.056mmol)和DIPEA(12mg，0.094mmol)搅拌1h后，再将21(20mg，0.047mmol)加入反应液中。两小时后反应完全，反应液经制备HPLC纯化得到化合物28(4.8mg，收率15％)
MS(ESI)m/z＝551.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm7.99(s,1H)，7.69(s,1H)，7.55(s,0.3H)，7.51(s,0.8H)，7.35(s,1H)，6.75(s,0.7H)，6.75(s,0.3H)，4.62(q,J＝7.28,4H)，4.46-4.36(m,3H)，4.29-4.24(m,2H)，4.20-4.15(m,1H)，3.72-3.67(m,0.6H)，3.56-3.50(m,2H)，3.49-3.39(m,3H)，3.35-3.29(m,0.4H)，3.09-2.94(m,3H)，2.79-2.75(m,3H)，2.21-2.18(m,3H)，2.16-2.10(m,2H)，2.05-1.95(m,2H)，1.94-1.80(m,4H)，1.36(t,J＝7.28,3H).
以下通过试验例的方式来说明本发明的有益效果。
试验例1、本发明化合物与Sting蛋白的结合亲和力测试
(1)实验方法
利用蛋白质热转移实验(TSA)进行化合物同Sting蛋白的结合亲和力测定，在20mMHepes,150mM NaCl,1mM MgCl2,1mM DTT,pH＝7.5缓冲液中将100ug/ml Sting蛋白同不同浓度的化合物及5X SYPRO Orange染料混合，在qPCR仪上测定蛋白的溶解曲线，用ProteinThermal Shift Software 1.3软件拟合Tm值，计算加入不同浓度化合物和未加入化合物时蛋白的Tm差值，根据ΔTm随化合物浓度变化拟合得到解离常数Kd，Kd越低，表示化合物与Sting蛋白的结合亲和力越强。
(2)实验结果
表1化合物与Sting蛋白的结合亲和力
| 化合物 | Kd |
| 2 | +++ |
| 3 | +++ |
| 4 | ++ |
| 5 | +++ |
| 6 | +++ |
| 7 | ++ |
| 9 | +++ |
| 13 | +++ |
| 16 | +++ |
| 17 | +++ |
| 19 | +++ |
| 20 | +++ |
| 21 | + |
| 22 | ++ |
| 23 | ++ |
| 27 | + |
| 28 | ++ |
其中测定各化合物的Kd值按照以下说明分类：
“+”表示Kd值大于100μM小于500μM；
“++”表示Kd值小于100μM大于50μM；
“+++”表示Kd值小于50μM；
上述实验结果表明，本发明化合物具有良好的与Sting蛋白结合的能力，特别是化合物2～6，9，13，16，17，19，20，23，28。所以本发明化合物可作为一种有效的STING蛋白调节剂。
试验例2、本发明化合物对Sting蛋白的激动功能测试
(1)实验方法
本实验通过检测化合物刺激人外周血单核细胞系THP1细胞(上海细胞库)产生的CXCL10(IP10)细胞因子变化来评价sting激动剂的功能。实验第一天按IP10 ELISA检测试剂盒(BD,#550926)说明书包被ELISA板。取化合物DMSO溶解成储液，并用培养基稀释成2X工作浓度，加入96孔板，每孔100μL；取对数生长期的THP1细胞计数，并稀释成2*106/mL浓度，加入上述含化合物的96孔板中，每孔100μL，混匀，于37℃，5％CO2培养箱中培养18小时。第二天取上述细胞培养上清，每孔100μL，按IP10 ELISA检测试剂盒(BD,#550926)说明书进行检测，读取OD450值，根据标准曲线换算成IP10浓度，并用GraphPad 5.0拟合剂效曲线计算EC50值。EC50为半最大效应浓度(concentration for 50％of maximal effect,EC50)是指能引起50％个体有效的药物浓度。
(2)实验结果
表2化合物对CXCL10(IP10)细胞因子的影响
| 化合物 | EC<sub>50</sub> |
| 2 | ++ |
| 4 | ++ |
| 9-1 | +++ |
| 9-2 | ++ |
| 11 | +++ |
| 12 | ++ |
| 19 | ++ |
| 20 | ++ |
| 22 | + |
| 23 | ++ |
| 27 | + |
其中测定各化合物的EC50值按照以下说明分类：
“+”表示EC50值大于10μM小于50μM；
“++”表示EC50值小于10μM大于1μM；
“+++”表示EC50值小于1μM；
上述实验结果表明，本发明化合物具有良好的刺激THP1细胞产生CXCL10(IP10)细胞因子的活性，具有良好的STING蛋白激动功能，特别是化合物2，4，9-1，9-2，11，12，19，20，23。
综上，本发明提供了式I所示结构新颖的化合物，实验结果表明，本发明的化合物能够与STING有效结合，具有良好的STING蛋白激动功能。所以，本发明的化合物可作为STING激动剂并用于治疗各种相关病症。本发明提供的化合物在制备治疗与STING活性相关的疾病的药物，特别是在制备治疗炎性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症或癌前期综合征的药物中具有非常好的应用前景。
Claims (20)
1.式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基、氰基、硝基、羟基、氨基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷胺基、卤素取代的C1～C6烷基；
R3选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R4选自氢、C1～C6的烷基、卤素、氰基、硝基、羟基、氨基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷胺基、卤素取代的C1～C6烷基或无；
R5选自氢、C1～C6的烷基；
X2选自C或N；
B环选自被0～4个Ra取代的苯环、被0～4个Ra取代的5～6元芳杂环；
Ra选自卤素、羟基、氨基、被0～4个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷氧基；
X选自-O-、-S-、-S(O)n-或无；n为1或2；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C10的亚烷基、被0～4个Ri取代的C2～C10的亚烯基，其中，当Ri至少有2个时，L1、L2中的Ri可以相连形成3～10元环；
Ri选自-ORj、卤素、-CN、C1～C6烷基；
Rj选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Z选自-O-、-C(O)-、
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、-C(O)Rk或无，或者Rc和Rd与它们所连接的氮原子连接形成被0～4个Re任选取代的3～8元杂环烷烃、被0～4个Re任选取代的3～10元杂芳环；
Rk选自被0～4个Rm取代的5～6元环烷基、被0～4个Rm取代的5～6元杂环烷基；Rm选自C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rg、Rh分别独自选自-C(O)-、-C(O)O-或无；
Re选自-ORf-、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rf选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述化合物如式I所示：
其中，
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R4选自氢、C1～C6的烷基、卤素或无；
R5选自氢、C1～C6的烷基；
X2选自C或N；
B环选自被0～4个Ra取代的苯环、被0～4个Ra取代的5～6元芳杂环；
Ra选自被0～4个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷氧基；
X选自-O-、-S-或无；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C10的亚烷基，其中，当Ri至少有2个时，L1、L2中的Ri可以相连形成3～10元环；
Ri选自-ORj、卤素、-CN、C1～C6烷基；
Rj选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Z选自-O-、-C(O)-、
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基或无，或者Rc和Rd与它们所连接的氮原子连接形成被0～4个Re任选取代的3～8元杂环烷烃、被0～4个Re任选取代的3～10元杂芳环；
Rg、Rh分别独自选自-C(O)-、-C(O)O-或无；
Re选自-ORf-、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rf选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
3.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述化合物如式II所示：
B环选自
R6、R7、R8分别独立选自氢、被0～4个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷氧基；
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3、R4分别独立选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R5选自氢、C1～6的烷基；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C10的亚烷基，其中，当Ri至少有2个时，L1、L2中的Ri可以相连形成3～10元环；
Ri选自-ORj、卤素、-CN、C1～C6烷基；
Rj选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Z选自-O-、-C(O)-、-C(O)NR-、-NR-、
R选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C6烷基或无，或者Rc和Rd与它们所连接的氮原子连接形成被0～4个Re任选取代的3～8元杂环烷烃、被0～4个Re任选取代的3～10元杂芳环；
Re选自-ORf-、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rf选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
4.根据权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述Z为-O-。
5.根据权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述式II所示化合物为：
6.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述化合物如式III所示：
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3、R4分别独立选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R5选自氢、C1～6的烷基；
B环选自
R6、R7、R8分别独立选自氢、被0～4个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷氧基；
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C6烷基或无，或者Rc和Rd与它们所连接的氮原子连接形成被0～4个Re任选取代的
被0～4个Re任选取代的
被0～4个Re任选取代的
Rg、Rh分别独自选自-C(O)-、-C(O)O-或无；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C10的亚烷基，其中，当Ri至少有2个时，L1、L2中的Ri可以相连形成3～10元环；
Ri选自-ORj、卤素、-CN、C1～C6烷基；
Rj选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Re选自-ORf-、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rf选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
7.根据权利要求6所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述式III所示化合物为：
8.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述化合物如式IV所示：
B环选自
R6、R7、R8分别独立选自氢、被0～4个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷氧基；
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3、R4分别独立选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R5选自氢、C1～C6的烷基；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C10的亚烷基，其中，当Ri至少有2个时，L1、L2中的Ri可以相连形成3～10元环；
Ri选自-ORj、卤素、-CN、C1～C6烷基；
Rj选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Z选自-O-、-C(O)-、-C(O)NR-、-NR-、
R选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C6烷基或无，或者Rc和Rd与它们所连接的氮原子连接形成被0～4个Re任选取代的3～8元杂环烷烃、被0～4个Re任选取代的3～10元杂芳环；
Re选自-ORf-、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rf选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
9.根据权利要求8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述化合物如式V所示：
B环选自
R6、R7、R8分别独立选自氢、被0～4个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷氧基；
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3、R4分别独立选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R5选自氢、C1～C6的烷基；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C10的亚烷基，其中，当Ri至少有2个时，L1、L2中的Ri可以相连形成3～10元环；
Ri选自-ORj、卤素、-CN、C1～C6烷基；
Rj选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基。
10.根据权利要求9所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述式V所示化合物为：
11.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述化合物如式VI所示：
其中，
B环选自被0～3个Ra取代的5元含氮芳杂环；
Ra选自卤素、羟基、氨基、被0～3个Rb任选取代的C1～C6烷基；
Rb选自卤素、羟基；
R1、R2分别独立选自氢、C1～C6的烷基；
R3、R4分别独立选自氢、C1～C6的烷基、卤素；
R5选自氢、C1～C6的烷基；
L1、L2分别独立选自被0～4个Ri取代的C1～C6的亚烷基、被0～4个Ri取代的C2～C6的亚烯基，
Ri选自卤素、-CN、C1～C6烷基；
X选自-O-、-S-、-S(O)n-或无，n为1或2；
Z选自-O-、-C(O)-、
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、-C(O)Rk或无；Rk选自被0～4个Rm取代的5～6元环烷基、被0～4个Rm取代的5～6元杂环烷基；Rm选自C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
Rg、Rh分别独自选自-C(O)-、-C(O)O-或无。
12.根据权利要求11所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：
B环选自
R6、R7、R8分别独立选自氢、卤素、羟基、氨基、被0～3个Rb任选取代的C1～C2烷基；
Rb选自卤素、羟基；
R1、R2分别独立选自氢、C1～C3的烷基；
R3、R4分别独立选自氢、C1～C3的烷基、卤素；
R5选自氢、C1～C3的烷基；
L1、L2分别独立选自被0～2个Ri取代的C1～C3的亚烷基、被0～2个Ri取代的C2～C3的亚烯基，
Ri选自卤素、-CN、C1～C3烷基；
X选自-O-、-S-、-S(O)n-或无，n为1或2；
Z选自-O-、-C(O)-、
Rc、Rd分别独自选自氢、C1～C3烷基、卤素取代的C1～C3烷基、-C(O)Rk或无；Rk选自被0～2个Rm取代的5～6元环烷基、被0～2个Rm取代的哌啶环；Rm选自C1～C3烷基、卤素取代的C1～C3烷基；
Rg、Rh分别独自选自-C(O)-、-C(O)O-或无。
13.根据权利要求12所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：Z为-O-。
14.根据权利要求12所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述化合物为：
15.权利要求1～14任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备激活STING类药物中的用途。
16.权利要求1～14任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗与STING活性相关的疾病的药物中的用途。
17.根据权利要求16所述的用途，其特征在于：所述与STING活性相关的疾病是与炎性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期综合征相关的疾病中的一种或几种。
18.权利要求1～14任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗炎性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症或癌前期综合征的药物中的用途。
19.权利要求1～14任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备免疫佐剂中的用途。
20.一种药物，其特征在于：它是以权利要求1～14任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
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