CN111423404A - 从黑苦荞中分离芦丁和槲皮素的方法 - Google Patents

从黑苦荞中分离芦丁和槲皮素的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种从黑苦荞中分离芦丁和槲皮素的方法。(1)提供黑苦荞初产物；(2)将黑苦荞初产物分散于甲醇溶液中形成初产物吸附液，将初产物吸附液加入聚酰胺树脂吸附柱中，用水对吸附柱初步洗脱；然后用第一乙醇水溶液进行一次洗脱；收集洗脱下层色带时所得的洗脱液作为一次洗脱液；最后用第二乙醇水溶液进行二次洗脱，收集洗脱上层色带时所得的洗脱液作为二次洗脱液；(3)将一次洗脱液浓缩结晶，得到苦荞芦丁产品；将二次洗脱液浓缩结晶，得到苦荞槲皮素产品；其中，第一乙醇水溶液含有40～65vol％的乙醇；第二乙醇水溶液含有70～90vol％的乙醇。本发明的方法重现性好，适合工业化生产。

Description

从黑苦荞中分离芦丁和槲皮素的方法
技术领域
本发明涉及一种分离提纯黑苦荞中芦丁和槲皮素的方法。
背景技术
苦荞(Fagopyrum tartaricum(L.)Gaetn)是蓼科荞麦属草本双子叶植物，是一种营养价值较高的经济作物。芦丁(Rutin)别名芸香苷(Rutinoside)或维生素P，是苦荞中最重要的活性成分之一，已经被医学界证明有预防多种疾病的作用，并有一定的抑菌作用。临床上，芦丁用于出血性疾病的辅助治疗，也用于治疗高血压和老年支气管炎等。芦丁也具有一定的抗放射性，对紫外线和X射线具有极强的吸收作用，参与体内氧化还原酶的作用，有很强的药用价值和养生功效。槲皮素(Quercetin)具有祛痰，止咳，降血压，减少毛细血管脆性等作用。槲皮素的结构决定了槲皮素具有能作为金属螯合物，在油脂等氧化过程中产生的游离集团接受体，可作为抗坏血酸或者油脂的抗氧化剂。槲皮素在许多植物的花叶和果实中有一定含量，除用于抗氧化外还可用于食用色素。工业中主要由芦丁水解生产槲皮素。
目前，芦丁主要来源于槐米，采用溶剂萃取、碱溶酸沉和超声等方法提取。以上方法存在的问题包括来源单一，得到的芦丁和槲皮素产品纯度不高等。因此，探究其他原料和方法获得高纯度的芦丁和槲皮素产品引起了人们的关注。黑苦荞是苦荞中的一种，其中的黄酮类物质，尤其是芦丁和槲皮素含量相对丰富。对于芦丁水解为槲皮素的研究和报导相对成熟，但如何将水解后的芦丁和槲皮素分离，并加以提纯的研究相对较少。
CN103340938A公开了一种苦荞标准提取物FT83及高纯度槲皮素的制备方法，以苦荞麸皮为原料，通过低级醇浸泡或超声提取、减压浓缩、喷雾干燥、柱层析纯化等步骤，得高含量的槲皮素。但是，该方法生产周期长、设备投入大，且仅得到苦荞中的一种活性成分槲皮素，生产过程使用对人体有危害的物质，不适合工业化生产。CN1385428A公开了一种苦荞生物黄酮提取工艺，以苦荞粉或苦荞叶为原料，用乙醇作溶剂，通过连续逆流提取、过滤、减压浓缩、真空干燥等步骤得苦荞黄酮。但是，该方法没有分离提纯工艺，所得产品为黄酮混合物。CN104069187A公开了一种从苦荞麦中提取纯化苦荞黄酮的工艺方法，以苦荞麦为原料，通过乙醇回流提取、离心、回收乙醇、加水沉淀、沉淀分离等步骤，得含量为86.5％的苦荞黄酮。该方法同样没有分离提纯工艺。CN1258999C公开了一种用苦荞麦做原料提取黄酮的制备工艺，以苦荞麦为原料，通过挤压去皮、微波处理苦荞麦皮层粉、加入乙醇微波提取、减压浓缩、加酸沉淀、真空干燥等步骤，得到芦丁成品。该方法所得成品中芦丁的含量较低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从黑苦荞中分离芦丁和槲皮素的方法。该方法可以保证芦丁和槲皮素充分分离。本申请通过如下技术方案达到上述目的。
本发明提供一种从黑苦荞中分离芦丁和槲皮素的方法，包括如下步骤:
(1)提供含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物；
(2)将含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物分散于甲醇溶液中形成初产物吸附液，将初产物吸附液加入聚酰胺树脂吸附柱中，用水对吸附柱进行初步洗脱；然后用第一乙醇水溶液进行一次洗脱，聚酰胺树脂吸附柱有较明显分层，包括上层色带和下层色带；收集洗脱下层色带时所得的洗脱液作为一次洗脱液；最后用第二乙醇水溶液进行二次洗脱，收集洗脱上层色带时所得的洗脱液作为二次洗脱液；其中，第一乙醇水溶液含有40～65vol％的乙醇，第二乙醇水溶液含有70～90vol％的乙醇。
(3)将一次洗脱液浓缩结晶，得到苦荞芦丁产品；将二次洗脱液浓缩结晶，得到苦荞槲皮素产品。
根据本发明的方法，优选地，聚酰胺树脂吸附柱的长径比为5～15:1；初产物吸附液加入量为0.5～1BV；蒸馏水的用量为2～5BV；其中，所述的BV表示柱体积单位。
根据本发明的方法，优选地，还包括聚酰胺树脂吸附柱的聚酰胺树脂的预处理步骤：
将聚酰胺树脂用乙醇浓度为90～98vol％的第三乙醇水溶液浸泡12～36小时，然后用水洗涤至中性；再用3～8wt％氢氧化钠水溶液浸泡6～15小时，然后用水洗至中性；再用3～8wt％醋酸水溶液浸泡6～15小时，然后用水洗至中性。
根据本发明的方法，优选地，第一乙醇水溶液和第二乙醇水溶液的流速均为1.5～2.5BV/h；其中，所述的BV表示柱体积单位。
根据本发明的方法，优选地，含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物采用如下步骤制备：
将黑苦荞在甲醇水溶液中回流提取，然后过滤，收集滤液，得到黑苦荞粗提液，将得到的黑苦荞粗提液进行浓缩、沉淀和干燥，得到含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物。
根据本发明的方法，优选地，黑苦荞以黑苦荞粉的形式使用，黑苦荞粉的粒径为10～40目。
根据本发明的方法，优选地，甲醇水溶液与黑苦荞的质量比为10～20:1。
根据本发明的方法，优选地，所述甲醇水溶液中甲醇含量为40～80vol％；回流提取的次数为1～5次；单次回流提取时间为0.5～1.5小时。
根据本发明的方法，优选地，黑苦荞以黑苦荞粉的形式使用，黑苦荞粉的粒径为20～40目；甲醇水溶液中甲醇含量为55～65vol％；回流提取时间为1.0～1.2小时；回流提取的次数为3～5次；将黑苦荞粗提液在旋转蒸发仪上蒸发浓缩；干燥温度为55～65℃，干燥时间为6～10小时。
根据本发明的方法，优选地，分别将一次洗脱液和二次洗脱液用旋转蒸发仪进行旋蒸浓缩，然后静置16～32小时，以获得苦荞芦丁产品和苦荞槲皮素产品。
本发明将粉碎过筛后的黑苦荞粉经过甲醇水溶液回流提取、结晶初产物、聚酰胺树脂柱分离、产品结晶，获得苦荞芦丁产品和苦荞槲皮素产品。这样可以将芦丁和槲皮素充分分离。本发明的方法分离程度好、所得芦丁和槲皮素的纯度高。此外，本发明的方法重现性好，适合工业化生产。
附图说明
图1为本发明中芦丁标准品的高效液相分析谱图。
图2为本发明中槲皮素标准品的高效液相分析谱图。
图3为本发明中黑苦荞粗提液的高效液相分析谱图。
图4为本发明中黑苦荞初产物的高效液相分析谱图。
图5为本发明中苦荞芦丁产品的高效液相分析谱图。
图6为本发明中苦荞槲皮素产品的高效液相分析谱图。
图7为本发明中苦荞芦丁产品的核磁共振氢谱图。
图8为本发明中苦荞槲皮素产品的核磁共振氢谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
在本发明中，“vol％”表示体积百分含量，“wt％”表示重量百分含量。
在本发明中，如无特别说明，所述“定量分析”为外标曲线法定量分析。
本发明提供一种从黑苦荞中分离芦丁和槲皮素的方法。本发明意外地发现，由于芦丁和槲皮素对树脂柱的吸附力不同，需要采用不同的洗脱试剂才能将它们分别洗脱下来，从而完成本发明。本发明的方法包括如下步骤:(1)初产物准备；(2)吸附柱分离；(3)产品结晶。任选地，还可以包括聚酰胺树脂预处理步骤。下面进行详细描述。
<初产物准备>
初产物准备步骤为提供含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物。黑苦荞初产物含有待分离的芦丁和槲皮素。优选地，黑苦荞初产物采用醇溶液提取得到。所用的醇溶液优选为甲醇水溶液。
在某些实施方案中，将黑苦荞在甲醇水溶液中回流提取，然后过滤，收集滤液，得到含有芦丁的黑苦荞粗提液，将得到的黑苦荞粗提液进行浓缩、沉淀和干燥，得到含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物。
本发明的黑苦荞优选为产于四川大凉山的带壳黑苦荞。优选地，本发明的黑苦荞以黑苦荞粉的形式使用。黑苦荞粉可以由黑苦荞粉碎而成。例如，将干燥的黑苦荞置于XFB-400高速中药粉碎机粉碎1～5分钟，优选2～4分钟，更优选2～3分钟得到黑苦荞粉。这样可以有助于充分提取黑苦荞中的芦丁和槲皮素。所得黑苦荞粉的粒径为10～40目；优选为20～40目；更优选为30～40目。
本发明的甲醇水溶液中，甲醇含量可以为40～80vol％，优选为50～70vol％，更优选为55～65vol％。甲醇水溶液与黑苦荞的质量比为10～20:1，优选为12～18:1，更优选为14～16:1。这样有利于去除其他杂质成分，从而提高提取物纯度。
在本发明中，回流提取的次数可以为1～5次，优选为2～5次，更优选为3～5次。单次回流提取时间可以为0.5～1.5小时，优选为0.8～1.4小时，更优选为1.0～1.2小时。每次回流提取所用甲醇水溶液的体积可以相同。这样既可以提取更多的芦丁和槲皮素，又可以提高粗提液中芦丁和槲皮素的纯度。
在本发明中，为了提高效率，回流提取后进行过滤时，可以采用抽滤的方式进行。合并三次过滤所得滤液，即得到黑苦荞粗提液。
黑苦荞粗提液中芦丁含量较高，槲皮素的含量很少。将黑苦荞粗提液进行浓缩、沉淀、干燥，得到含有芦丁和槲皮素的初产物。粗提液中的芦丁经过旋蒸浓缩后，一部分芦丁水解为槲皮素。
在本发明中，对黑苦荞粗提液的浓缩可以采用减压浓缩，优选用旋转蒸发仪进行减压浓缩。根据本发明的一个实施方式，将粗提液在旋转蒸发仪上浓缩，在出现少量黄色沉淀时停止旋蒸；接着，将浓缩液置于烧杯中静置以充分沉淀，静置时间可以为16～32小时，优选为18～30小时，更优选为22～28小时。静置结束，得到大量黄色沉淀物，将沉淀物进行干燥处理，得到含有芦丁和槲皮素的初产物。干燥的温度可以为45～70℃，优选为50～65℃，更优选为55～65℃。干燥时间一般为4～10小时，优选为6～10小时，更优选为8～10小时。沉淀物进行干燥之前可以先进行过滤处理以提高干燥效率。优选地，过滤采用抽滤的方式进行。这样处理得到的初产物中杂质较少。
<吸附柱分离>
将含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物分散于甲醇溶液中形成初产物吸附液。在本发明中，用于分散含有芦丁和槲皮素的初产物的甲醇溶液为分析纯甲醇溶液，其用量没有特别限定，只要能够完全溶解含有芦丁和槲皮素的初产物即可。
初产物吸附液形成后，将初产物吸附液加入聚酰胺树脂吸附柱中。取0.5～2BV初产物吸附液加入所述吸附柱中，优选地，取0.5～1BV初产物吸附液加入所述吸附柱中。初产物加入的量过大会使得分离效果不好，过小则会降低分离效率。吸附速率为1.5～2.5BV/h，优选为1.5～2BV/h，更优选为1.5～1.8BV/h。通过控制吸附速率，可以提高芦丁和槲皮素的纯度。
首先，用水对吸附柱进行初步洗脱。可以采用蒸馏水、去离子水或者超纯水进行初步洗脱。初产物吸附液加入所述吸附柱中后，先用2～5BV的水进行初步洗脱。这样可以去除初产物中极性大于芦丁的杂质，还可以将溶解初产物的甲醇洗脱出来，提高产物纯度。
然后，用第一乙醇水溶液进行一次洗脱，聚酰胺树脂吸附柱有较明显分层，包括上层色带和下层色带。色带为浅黄色或黄色。收集洗脱下层色带时所得的洗脱液作为一次洗脱液，其中含有芦丁。第一乙醇水溶液的浓度为40～65vol％；优选地，浓度为45～60vol％，更优选地，浓度为50～55vol％。这样可以将芦丁洗脱下来，但槲皮素保持在吸附柱上，从而实现二者分离提纯。这样的工艺重现性好，适合工业化生产。
在本发明中，第一乙醇水溶液的流速为1.5～2.5BV/h，优选为1.5～2BV/h，更优选为1.5～1.8BV/h。通过控制洗脱速率，可以避免槲皮素被洗脱下来。
最后，用第二乙醇水溶液进行二次洗脱，收集洗脱上层色带时所得的洗脱液作为二次洗脱液，其中含有槲皮素。第二乙醇水溶液中乙醇的浓度为70～90vol％；优选地，浓度为75～90vol％；更优选地，浓度为80vol％。这样可以将槲皮素洗脱下来。这样的工艺重现性好，适合工业化生产。
在本发明中，第二乙醇水溶液的流速为1.5～2.5BV/h，优选为1.5～2BV/h，更优选为1.5～1.8BV/h。通过控制洗脱速率，可以将槲皮素充分洗脱下来。
<产品结晶>
对一次洗脱液进行浓缩结晶，得到苦荞芦丁产品。浓缩可以采用旋蒸浓缩。例如，将洗脱液用RE-52A旋转蒸发仪分别旋蒸浓缩至大量晶体析出，停止旋蒸，然后静置16～32小时，优选18～30小时，更优选22～28小时，获得苦荞芦丁产品。
对二次洗脱液进行浓缩结晶，得到苦荞槲皮素产品。浓缩可以采用旋蒸浓缩。例如，将洗脱液用RE-52A旋转蒸发仪分别旋蒸浓缩至大量晶体析出，停止旋蒸，然后静置16～32小时，优选18～30小时，更优选22～28小时，获得苦荞槲皮素产品。
<聚酰胺树脂预处理>
聚酰胺树脂在装柱前，需要进行预处理。聚酰胺树脂吸附柱的聚酰胺树脂的预处理步骤包括：
将聚酰胺树脂用第三乙醇水溶液浸泡，然后用水洗涤至中性；再用氢氧化钠水溶液浸泡，然后用水洗至中性；再用醋酸水溶液浸泡，然后用水洗至中性。
第三乙醇水溶液的乙醇浓度为90～98vol％，优选为91～96vol％，更优选为93～95vol％。第三乙醇水溶液浸泡时间为12～36小时，优选为15～30小时，更优选为24～28小时。第三乙醇水溶液浸泡后，洗涤可以采用去离子水或蒸馏水等。
氢氧化钠水溶液浓度为3～8wt％，优选为3～7wt％，更优选为5～6wt％。氢氧化钠水溶液浸泡时间为6～15小时，优选为8～13小时，更优选为9～12小时。氢氧化钠水溶液浸泡后，洗涤可以采用去离子水或蒸馏水等。
醋酸水溶液的浓度为5～10wt％，优选为6～10wt％，更优选为8～10wt％。醋酸水溶液浸泡时间为6～15小时，优选为8～13小时，更优选为9～12小时。醋酸水溶液浸泡后，洗涤可以采用去离子水或蒸馏水等。经过上述处理，在醇-水体系下，聚酰胺树脂对槲皮素的吸附力大于芦丁，从而有利于二者分离。
根据本发明的一个实施方式，将聚酰胺树脂用乙醇浓度为90～98vol％的第三乙醇水溶液浸泡12～36小时，然后用水洗涤至中性；再用3～8wt％氢氧化钠水溶液浸泡6～15小时，然后用水洗至中性；再用3～8wt％醋酸水溶液浸泡6～15小时，然后用水洗至中性。根据本发明的一个具体实施方式，将聚酰胺树脂用浓度为95vol％的第三乙醇水溶液浸泡24h，然后用去离子水洗涤至中性，再用5wt％氢氧化钠水溶液浸泡12h，最后用去离子水洗至中性，再用8wt％醋酸水溶液浸泡12h，然后用去离子水洗至中性。
将预处理好的聚酰胺树脂装入玻璃层析柱获得聚酰胺树脂吸附柱。吸附柱的长径比(柱长/柱直径)可以为10～20:1，优选为15～20:1。这样可以保证吸附分离效果，提高提取物中的产品含量。
根据本发明的一个实施方式，将含有芦丁和槲皮素的初产物分散于分析纯的甲醇中形成初产物吸附液，将初产物吸附液加入预处理的聚酰胺树脂吸附柱，吸附柱的长径比为10:1。吸附柱先用蒸馏水进行初步洗脱，蒸馏水的用量为2～5BV。初步洗脱完毕后，用乙醇浓度为50vol％的第一乙醇水溶液进行一次洗脱，聚酰胺树脂吸附柱有较明显分层，包括上层色带和下层色带；收集洗脱下层色带时所得的洗脱液作为一次洗脱液，对得到的一次洗脱液进行浓缩结晶，得到苦荞芦丁产品；一次洗脱完毕后，用乙醇浓度为80vol％的第二乙醇水溶液进行二次洗脱，收集洗脱上层色带时所得的洗脱液作为二次洗脱液，对得到的二次洗脱液进行浓缩结晶，得到苦荞槲皮素产品。第一乙醇水溶液和第二乙醇水溶液的流速均为2BV/h。
以下实施例中使用的原料说明如下:
0.4wt％磷酸溶液：优级纯磷酸，购于天津市化学试剂供销公司，配制成0.4wt％磷酸水溶液；
芦丁和槲皮素标准品：购自武汉天植生物技术有限公司；
甲醇(色谱纯)：购自天津市化学试剂供销公司；
聚酰胺树脂粉(100-200目)：购自国药集团化学试剂有限公司
<测试及分析方法说明>
1)苦荞芦丁和苦荞槲皮素的高效液相色谱分析：
准确称量芦丁标准品和槲皮素标准品5.0mg，分别用色谱纯甲醇溶解后定容在25ml容量瓶中，即配制成浓度为0.2mg/mL的芦丁标准溶液和浓度为0.2mg/mL的槲皮素标准溶液。分别量取0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL的芦丁标准溶液(0.2mg/mL)和槲皮素标准溶液(0.2mg/mL)到10mL的容量瓶中，用色谱纯甲醇定容。用高效液相色谱测定其峰面积，以芦丁标准品浓度或槲皮素标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
准确称取苦荞芦丁产品和苦荞槲皮素产品各5mg，分别用色谱纯甲醇定容于25mL容量瓶中，得到苦荞芦丁产品溶液和苦荞槲皮素产品溶液，浓度均为0.2mg/mL。
将芦丁标准溶液、槲皮素标准溶液、黑苦荞粗提液、初产物吸附液、苦荞芦丁产品溶液、苦荞槲皮素产品溶液经0.45μm的滤膜过滤后，用于高效液相色谱分析。
高效液相色谱分析的测定条件设定如下：
色谱柱为SB-C18(250×4.6mm，5μm)；流动相是色谱纯甲醇-0.4wt％磷酸水溶液；流速设置为1.0mL/min，柱温设置为25℃，进样量设置为10μL。检测波长设置为358nm。
2)苦荞芦丁产品和苦荞槲皮素产品纯度的计算:
将0.2mg/mL的苦荞芦丁(苦荞槲皮素)产品溶液和0.2mg/mL的芦丁(槲皮素)标准品溶液在相同的液相色谱条件下，进行高效液相色谱分析，记录峰面积，代入下述公式计算产品纯度；
Figure BDA0002472992180000111
其中，P为苦荞芦丁(苦荞槲皮素)产品的定量纯度(％)，A为苦荞芦丁(苦荞槲皮素)产品的液相色谱峰面积(mAU·s)，As为芦丁(槲皮素)标准品的液相色谱峰面积(mAU·s)。
3)苦荞芦丁和苦荞槲皮素产品产率的计算:
准确称取干燥的提取物质量进行计算，带入下述公式计算产品产率:
Figure BDA0002472992180000121
其中:Y为苦荞芦丁(苦荞槲皮素)产品的产率，％；m苦荞芦丁(苦荞槲皮素)产品的质量(g)；G为所用黑苦荞粉的质量(g)。
4)芦丁提取物和槲皮素提取物的核磁共振氢谱分析：
取适量芦丁提取物和槲皮素提取物，分别以氘代二甲基亚砜为溶剂溶解，进行核磁共振氢谱的测定。
实施例1
将干燥的黑苦荞置于XFB-400高速中药粉碎机中粉碎3分钟，获得黑苦荞粉。将40g黑苦荞粉用600mL的60vol％甲醇水溶液进行回流提取1小时。回流提取后进行抽滤，收集所得滤液。重复三次回流提取过程，合并三次过滤所得滤液，即得到黑苦荞粗提液。
将黑苦荞粗提液在旋转蒸发仪上蒸发浓缩，至出现少量黄色沉淀时停止旋蒸。将浓缩液静置24小时以充分沉淀，得到大量黄色沉淀物。将带有沉淀物的浓缩液进行抽滤，沉淀物在60℃下干燥6小时，得到含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物。
将聚酰胺树脂用乙醇浓度为95vol％的第三乙醇水溶液浸泡24h，然后用去离子水洗涤至中性，再用5wt％氢氧化钠水溶液浸泡12h，最后用去离子水洗至中性，再用8wt％醋酸水溶液浸泡12h，然后用去离子水洗至中性。
将处理好的聚酰胺树脂装入玻璃层析柱，得到柱高10cm和长径比为10:1的预处理的聚酰胺树脂吸附柱。将含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物分散于少量分析纯的甲醇中形成初产物吸附液。
将0.5BV的初产物吸附液加入预处理的聚酰胺树脂吸附柱中。吸附柱先用3BV蒸馏水进行初步洗脱。初步洗脱完毕后，用第一乙醇水溶液(50vol％的乙醇水溶液)进行一次洗脱，第一乙醇水溶液的流速为2BV/h。预处理的聚酰胺树脂吸附柱有较明显分层，包括上层色带和下层色带。收集洗脱下层色带时所得的洗脱液作为一次洗脱液，浓缩结晶，得到苦荞芦丁产品。一次洗脱完毕后，用第二乙醇水溶液(80vol％的乙醇水溶液)对吸附柱进行二次洗脱，第二乙醇水溶液的流速为2BV/h，收集洗脱上层色带时所得的洗脱液作为二次洗脱液，浓缩结晶，得到苦荞槲皮素产品。
各阶段以及标准品的高效液相分析谱图见图1～6，苦荞芦丁产品和苦荞槲皮素产品的核磁共振氢谱见图7和图8。
由图1～6可知，芦丁标准品的保留时间为9.261min；槲皮素标准品的保留时间为26.025min。黑苦荞粗提液中主要含有芦丁，槲皮素的含量很少，且存在一些杂质(图3)。经过旋蒸浓缩后，初产物中含有芦丁和由芦丁水解来的槲皮素(图4)，杂质含量大幅减少。经过色谱分离、产品结晶后，得到高纯度的苦荞芦丁产品(图5)和苦荞槲皮素产品(图6)。
由图7可知，苦荞芦丁产品的核磁氢谱数据为：δH12.6(1H’s’5-OH),δH(10.85、9.68、9.19)(3H 3′-OH 4′-OH 7-OH),δH 7.54(2H’d’J＝8.0Hz H-2′H-6′),δH 6.84(1H’d’J＝8.0Hz H-5′),δH6.39(1H’d’J＝2.0Hz H-8),δH 6.19(1H’d’J＝1.6Hz H-6),δH5.35(1H’d’J＝7.2Hz’Glu’H-1〞),δH 4.38(1H’brs’Rha’H-1”’),δH 0.99(3H’d’J＝6.0Hz’Rha-Me)。
由图8可知，苦荞槲皮素产品的核磁氢谱数据为：δH12.5(1H’s’5-OH),δH(10.80、9.62、9.39)(3H 3′-OH’4′-OH’7-OH),δH7.69(1H’d’J＝6.0Hz H-2′),δH 7.55(1H’dd’J＝8.8,7.2Hz H-6′),δH 6.89(1H’d’J＝8.0Hz H-5′),δH 6.42(1H’d’J＝6.0Hz H-8),δH6.20(1H’d’J＝6.0Hz H-6)。
按照实施例1的方法重复两次，分别记为S2和S3，并分别定量分析其纯度。分析结果如表1所示。
表1
编号 实施例1 S2 S3 平均值
芦丁产率/％ 1.71 1.68 1.74 1.71
槲皮素产率/％ 2.45 2.49 2.35 2.43
芦丁纯度/％ 98.5 97.8 98.7 98.3
槲皮素纯度/％ 99.4 97.4 98.6 98.5
由表可知，本发明的方法的重现性好，适合工业化生产。
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。

Claims (10)

1.一种从黑苦荞中分离芦丁和槲皮素的方法，其特征在于，包括如下步骤:
(1)提供含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物；
(2)将含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物分散于甲醇溶液中形成初产物吸附液，将初产物吸附液加入聚酰胺树脂吸附柱中，用水对吸附柱进行初步洗脱；然后用第一乙醇水溶液进行一次洗脱，聚酰胺树脂吸附柱有较明显分层，包括上层色带和下层色带；收集洗脱下层色带时所得的洗脱液作为一次洗脱液；最后用第二乙醇水溶液进行二次洗脱，收集洗脱上层色带时所得的洗脱液作为二次洗脱液；其中，第一乙醇水溶液含有40～65vol％的乙醇，第二乙醇水溶液含有70～90vol％的乙醇；
(3)将一次洗脱液浓缩结晶，得到苦荞芦丁产品；将二次洗脱液浓缩结晶，得到苦荞槲皮素产品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，聚酰胺树脂吸附柱的长径比为5～15:1；初产物吸附液加入量为0.5～1BV；水的用量为2～5BV；其中，所述的BV表示柱体积单位。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括聚酰胺树脂吸附柱的聚酰胺树脂的预处理步骤：
将聚酰胺树脂用乙醇浓度为90～98vol％的第三乙醇水溶液浸泡12～36小时，然后用水洗涤至中性；再用3～8wt％氢氧化钠水溶液浸泡6～15小时，然后用水洗至中性；再用3～8wt％醋酸水溶液浸泡6～15小时，然后用水洗至中性。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，第一乙醇水溶液和第二乙醇水溶液的流速均为1.5～2.5BV/h；其中，所述的BV表示柱体积单位。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物采用如下步骤制备：
将黑苦荞在甲醇水溶液中回流提取，然后过滤，收集滤液，得到黑苦荞粗提液，将得到的黑苦荞粗提液进行浓缩、沉淀和干燥，得到含有芦丁和槲皮素的黑苦荞初产物。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，黑苦荞以黑苦荞粉的形式使用，黑苦荞粉的粒径为10～40目。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，甲醇水溶液与黑苦荞的质量比为10～20:1。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述甲醇水溶液中甲醇含量为40～80vol％；回流提取的次数为1～5次；单次回流提取时间为0.5～1.5小时。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：
黑苦荞以黑苦荞粉的形式使用，黑苦荞粉的粒径为20～40目；
甲醇水溶液中甲醇含量为55～65vol％；
回流提取时间为1.0～1.2小时；回流提取的次数为3～5次；
将黑苦荞粗提液在旋转蒸发仪上蒸发浓缩；
干燥温度为55～65℃，干燥时间为6～10小时。
10.根据权利要求1～9任一项所述的方法，其特征在于，分别将一次洗脱液和二次洗脱液用旋转蒸发仪进行旋蒸浓缩，然后静置16～32小时，以获得苦荞芦丁产品和苦荞槲皮素产品。
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