CN111411050A - 一株f01放线菌及其抗病毒应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株链霉菌属放线菌F01，所述F01链霉菌属放线菌，于2018年12月24日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号：CGMCC No.17030。本发明还公开了F01链霉菌属放线菌用于抗作物病毒的用途。本发明所涉及的F01链霉菌属放线菌对多种植物病毒病具有防治效果，例如烟草花叶病毒病、小麦黄矮病毒病或水稻条纹叶枯病毒病等。

Description

一株F01放线菌及其抗病毒应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别是微生物抗植物病毒领域，更进一步地涉及放线菌作用于抗病毒的用途。
背景技术
植物病毒病是一类重要的植物病害，全球每年因植物病毒病危害而造成的经济损失多达600亿美元，其中仅粮食作物一项的损失就高达200亿美元。植物病毒没有完整的细胞结构，它对植物是绝对寄生的，再加上植物本身缺乏完整的免疫***，植物一旦被病毒侵染后，便终生带毒，持续遭受危害，这给植物病毒病的防治带来了极大的困难。目前，农业生产上还没有特效的抗植物病毒药剂。面对植物病毒病危害严重，抗植物病毒药剂短缺的局面，开发新型的抗植物病毒活性成分并研究其抗病毒机理具有重要的意义。近年来，高活性、低毒性、环境相容性好、副作用小的生物源多糖、糖肽、蛋白质等活性成分的研究受到了众多科研工作者的青睐。更有大量研究表明，许多生物源多糖、糖肽以及寡糖等对植物防御病原菌的入侵具有较好的免疫调控作用。这些发现为抗植物病毒药剂的开发提供了新的思路。
本实验室前期开展了生物源抗植物病毒活性材料的筛选、活性成分的分离鉴定及其抗病毒机理研究，由微生物源材料中得到F01链霉菌属放线菌发酵液对烟草花叶病毒和大麦黄矮病毒等具有较高的抑制活性。F01链霉菌属放线菌发酵液，可通过F01链霉菌属放线菌发酵来大量获得，其发酵获取成本低、提取工艺简单且不受外界环境条件的限制。更重要的是，F01链霉菌属放线菌为微生物源天然产物，具有对人畜安全、对植物无副作用、无残留和不易产生抗药性的特点，是农业生产上急需的低毒性、高活性的抗病毒物质，具有极大的产业化应用的潜力。
发明内容
本发明公开了一株链霉菌属放线菌F01用于抗植物病毒的用途。
此外，由于本发明的链霉菌属放线菌F01对多种植物病毒具有良好的抑制作用，本发明还提供一种链霉菌属放线菌F01制备具有抗病毒作用的药物用途。
上述链霉菌属放线菌F01用于防治烟草花叶病毒病(tobacco mosaic virus，TMV)、小麦黄矮病毒病(barley yellow dwarf virus，BYDV)或水稻条纹叶枯病毒病(ricestipe virus，RSV)，相比现有的抗病毒剂，例如以宁南霉素等为主要成分的抗病毒剂，具有更好的效果，其原始发酵液对烟草花叶病毒的防治效果至少为69％。
上述链霉菌属放线菌F01具有对人畜安全、对植物无副作用、无残留和不易产生抗药性的特点，是农业生产上急需的低毒性、高活性的抗病毒物质，具有极大产业化应用的潜力。
附图说明
图1：半叶法测定链霉菌属放线菌F01发酵液对TMV的治疗效果，烟草叶片接种TMV病毒后，左侧叶片用链霉菌属放线菌F01发酵液处理，右侧叶片用水处理作为对照。
图2：实时荧光定量PCR测定链霉菌属放线菌F01发酵液处理后TMV病毒的含量。
具体实施方式
为了理解本发明，下面以实施例进一步说明本发明，但下述实施例并不限制本发明。
实施例1：链霉菌属放线菌F01发酵液对TMV病毒的室内治疗效果。
(1)实验条件：作物选择室内盆栽烟草，品种为心叶烟；靶标为TMV。
(2)试验设计和安排：试验药剂为链霉菌属放线菌F01发酵液，设立8％宁南霉素水剂对照药剂和清水对照。3个处理，重复3次。
(3)施药方法：心叶烟长至5-6叶期，用于试验。采用半叶枯斑法，整个叶片先接种TMV病毒，接种2小时后，叶片左半叶涂抹链霉菌属放线菌F01发酵液或对照药剂，右半叶涂抹清水作为对照。
(4)调查方法：涂抹药剂后5天，统计左右半叶片产生的枯斑数量，按照如下公式计算防治效果：
防治效果(％)＝(右半叶枯斑数-左半叶枯斑数)/左半叶枯斑数×100
(5)实验结果：链霉菌属放线菌F01发酵液对TMV的治疗效果见表1，由表1可见链霉菌属放线菌F01原始发酵液对TMV的室内治疗效果为82.5％。
表1 链霉菌属放线菌F01发酵液对烟草花叶病毒病的室内防治效果
Figure BSA0000177538610000031
实施例2：链霉菌属放线菌F01发酵液对烟草花叶病毒病的大田防治效果。
(1)实验条件：作物选择大田烟草，品种为K326；靶标为TMV。
(2)试验设计和安排：试验药剂为链霉菌属放线菌F01发酵液，设立8％宁南霉素水剂对照药剂和清水对照。3个处理，重复3次，共9个小区。试验小区按随机区组排列。
(3)施药方法：烟草移栽后20天进行喷雾施药，隔7天后第二次喷药。
(4)调查方法：第二次施药后14天后进行药效调查，根据以下标准记录发病情况：
0级：全株无病；1级：新叶表现轻微花叶；2级：三分之一至二分之一叶片表现花叶；3级：二分之一至三分之二叶片表现花叶；4级：全株叶片花叶。
病情指数＝∑(各级病株数×相对级数值)/(调查总株数×最高分级值)×100％
防治效果(％)＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100
(5)实验结果：链霉菌属放线菌F01发酵液对烟草花叶病毒病的防治效果见表2，由表2可见链霉菌属放线菌F01原始发酵液对烟草花叶病毒病的防治效果为69.8％。
表2 链霉菌属放线菌F01发酵液对烟草花叶病毒病的大田防治效果
Figure BSA0000177538610000041
实施例3：链霉菌属放线菌F01发酵液对小麦黄矮病毒病的大田防治效果。
(1)实验条件：作物选择大田小麦，品种为小偃6号；靶标为BYDV。
(2)试验设计和安排：试验药剂为链霉菌属放线菌F01发酵液，设立8％宁南霉素水剂对照药剂和清水对照。3个处理，重复3次，共9个小区。试验小区按随机区组排列。
(3)施药方法：小麦返青后20天进行喷雾施药，隔7天后第二次喷药。
(4)调查方法：第二次施药后14天后进行药效调查，每点调查相连的10株小麦，每小区调查250株，根据以下标准记录发病情况：
0级：全株无病；1级：部分叶尖黄化；2级：旗叶下1片叶黄化；3级：旗叶下2片叶黄化；4级：旗叶黄化1/4，旗叶下1片叶黄化；5级：旗叶黄化1/4，旗叶下2片叶黄化；6级：旗叶黄化；7级：旗叶黄化，旗叶下1片叶黄化；8级：旗叶黄化，旗叶下2片叶黄化；9级：植株矮化，但能抽穗；10级：植株矮化显著，不能抽穗。
病情指数＝∑(各级病株数×相对级数值)/(调查总株数×最高分级值)×100％
防治效果(％)＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100
(5)实验结果：链霉菌属放线菌F01发酵液对小麦黄矮病毒病的防治效果见表3，由表3可见链霉菌属放线菌F01发酵液对小麦黄矮病毒病的防治效果为72.6％。
表3 链霉菌属放线菌F01发酵液对小麦黄矮病毒病的大田防治效果
Figure BSA0000177538610000051
实施例4：链霉菌属放线菌F01发酵液对水稻条纹叶枯病毒病的大田防治效果。
(1)实验条件：作物选择大田水稻，品种为两优培九；靶标为RSV。
(2)试验设计和安排：试验药剂为链霉菌属放线菌F01发酵液，设立8％宁南霉素水剂对照药剂和清水对照。3个处理，重复3次，共9个小区。试验小区按随机区组排列。
(3)施药方法：水稻移栽后20天进行喷雾施药，隔7天后第二次喷药。
(4)调查方法：第二次施药后14天后进行药效调查，每点调查相连的10株水稻，每小区调查250株，根据以下标准记录发病情况：
0级：全株无病；1级：心叶基部沿叶脉出现少量褪绿黄斑，不卷曲；3级：新生叶出现与叶脉平行的黄绿相间条纹，轻微卷曲；5级：新生叶出现大量与叶脉平行的黄绿相间条纹，叶片卷曲、细弱；7级：植株矮化，叶片出现黄白色条纹卷起，新生叶扭曲下垂，不能正常开张；9级：植株严重矮化、失绿或死亡。
病情指数＝∑(各级病株数×相对级数值)/(调查总株数×最高分级值)×100％
防治效果(％)＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100
(5)实验结果：链霉菌属放线菌F01发酵液对水稻条纹叶枯病毒病的防治效果见表4，由表4可见链霉菌属放线菌F01发酵液对水稻条纹叶枯病毒病的防治效果为62.3％。
表4 链霉菌属放线菌F01发酵液对水稻条纹叶枯病毒病的大田防治效果
Figure BSA0000177538610000061

Claims (4)

1.一株放线菌，其特征在于，所述放线菌为链霉菌属(Streptomyces)放线菌F01，于2018年12月24日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号：CGMCC No.17030；
2.一种权利要求1所述链霉菌属放线菌的应用，其特征在于，所述链霉菌属放线菌用于防治农作物病毒病；
3.根据权利要求1所述的一株链霉菌属放线菌的应用，其特征在于：所述的培养基培养过程如下：
可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，NaCl 0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，水1L，固体培养基加入琼脂20g，液体培养基不加；
1)先将淀粉加入，加少量水调成糊状后，再加水定容到1L，搅拌均匀后再加入其它药品；
2)调节pH值到7.0-7.4，121℃高温高压灭菌，备用；
3)待培养基冷却后，在超净工作台中按照1∶50接种F01链霉菌属放线菌种子培养液到上述培养基中，然后置于摇床28℃、200rpm培养5天；
4.根据权利要求2所述的农作物病毒病为烟草花叶病毒病(tobacco mosaic virus，TMV)、小麦黄矮病毒病(barley yellow dwarf virus，BYDV)或水稻条纹叶枯病毒病(ricestipe virus，RSV)等。
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