CN111375022A - 一种治疗***增生的中药组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提出一种治疗***增生的中药组合物,该中药组合物有效成份为西洋参、黄芪、枸杞子、黄精、三七、甘草;并按照下述重量份的原料药组成:西洋参:3.25‑15g;黄芪:2.5‑10g;枸杞子:5‑20g;黄精:5‑20g;三七:0.75‑3g;甘草:0.5‑2g。本发明中药组合物,能够减轻上皮和***增生,能降低***增生患者的***指数和脾指数,能降低血清中MDA含量,对血液中NOS不会产生明显影响。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物,具体的说是一种治疗***增生的中药组合物。
背景技术
***增生症又称良性***增生症、***肥大,是中老年男性常见疾病之一,随全球人口老年化发病日渐增多。***增生的发病率随年龄递增。多发于50-70岁。***增生储尿期症状表现为尿频、尿急、尿失禁以及夜尿增多;排尿期症状表现为排尿踌躇、排尿困难以及间断排尿;排尿后症状表现为排尿不尽,尿后滴沥;临床上也经常发现***增因生***黏膜上毛细血管充血及小血管扩张并受到增大腺体的牵拉或与膀胱摩擦导致血尿;***增生因膀胱憩室充盈导致下腹部包块或肾积水引起的上腹部包块而引发的长期下尿路梗阻;***增生因输尿管反流,肾积水导致肾功能破坏导致的肾功能损害,严重者可出现肾衰竭;还偶见***增生因***尿潴留常导致的***、因尿液在膀胱内停留时间延长而导致的膀胱结石下尿路梗阻。
发明内容
针对以上技术问题,本发明提出一种治疗***增生的中药组合物,通过减轻***腺上皮和***增生达到治疗***增生的目的。所述中药组合物有效成份为西洋参、黄芪、枸杞子、黄精、三七、甘草;并按照下述重量份的原料药组成:
西洋参:3.25-15g;黄芪:2.5-10g;枸杞子:5-20g;黄精:5-20g;三七: 0.75-3g;甘草:0.5-2g。
较佳地,本发明中药组合物按照下述重量份的原料药组成:
西洋参:7.5g;黄芪:5g;枸杞子:10g;黄精:10g;三七:1.5g;甘草: 1g。
较佳地,所述中药组合物为片剂、冲剂、袋泡剂、口服液剂或胶囊剂。
本发明还提出由西洋参、黄芪、枸杞子、黄精、三七、甘草原料药组成的中药组合物在制备减轻***腺上皮增生药物中的用途。
本发明还提出由西洋参、黄芪、枸杞子、黄精、三七、甘草原料药组成的中药组合物在制备减轻***腺***增生药物中的用途。
本发明还提出治疗***增生的中药组合物在制备延缓***腺组织衰老中的用途。
本发明所涉及的西洋参是五加科人参属多年生草本植物,别名花旗参、洋参、西洋人参、American ginseng。本发明中药组合物所涉及的西洋参产于加拿大的大魁北克或美国的威斯康辛州,或中国北京怀柔与长白山。
西洋参可补肺降火、养胃生津。西洋参性寒,味苦、微甘,归心、肺、肾经,具有补肺降火、养胃生津之功效。
西洋参能保护心血管***。常服西洋参可以抗心律失常、抗心肌缺血、抗心肌氧化、强化心肌收缩能力,冠心病患者症状表现为气阴两虚、心慌气短可长期服用西洋参,疗效显著。西洋参的功效还在于可以调节血压,可有效降低暂时性和持久性血压,有助于高血压、心律失常、冠心病、急性心肌梗塞、脑血栓等疾病的恢复。
西洋参具有增强中枢神经***功能。西洋参中的皂甙可以有效增强中枢神经,达到静心凝神、消除疲劳、增强记忆力等作用,可适用于失眠、烦躁、记忆力衰退及老年痴呆等症状。
西洋参能提高免疫力。洋参作为补气保健首选药材,可以促进血清蛋白合成、骨髓蛋白合成、器官蛋白合成等,提高机体免疫力,抑制癌细胞生长,有效抵抗癌症。
西洋参能促进血液活力。长服西洋参可以降低血液凝固性、抑制血小板凝聚、抗动脉粥样硬化并促进红血球生长,增加血色素。
西洋参可治疗糖尿病。西洋参可以降低血糖、调节胰岛素分泌、促进糖代谢和脂肪代谢,对治疗糖尿病有一定辅助作用。
在本发明中药组合物,西洋参用于补气养阴、清热生津,补益脾肾之气,益脾肾之阴,兼清虚热,填补津液。
黄芪又称黄耆,是豆科黄耆属植物,本品为豆科植物蒙古黄芪的根。本发明中药组合物所涉及的黄芪产于俄罗斯或中国。黄芪,味甘,性微温;归脾、肺经。具有补气固表,托毒排脓,利尿,生肌等功效。
本发明中药组合物,黄芪用于补气健脾、利尿消肿,补五脏六腑之气,使脾气得充,利尿治标。
枸杞子,又称枸杞,别名苟起子、枸杞红实、甜菜子、西枸杞、狗***、红青椒、枸蹄子、枸杞果、地骨子、枸茄茄、红耳坠、血枸子、枸地芽子、枸杞豆、血杞子、津枸杞,为茄科植物枸杞的成熟果实,本发明中药组合物所涉及的枸杞子产于中国,本发明所涉及的枸杞子来源于茄科植物宁夏枸杞的干燥成熟果实,夏、秋二季果实呈红色时采收,热风烘干,除去果梗,或晾至皮皱后,晒干,除去果梗。
枸杞子性味甘,平,归肝、肾经。滋补肝肾,益精明目。枸杞可提升肝脏的耐受性,提升肝脏的抗病毒能力。
枸杞子含枸杞多糖,又含甜菜碱(betaine)、阿托品、天仙子胺;另含玉蜀黍黄素(zeaxanthin)、酸浆红素(physalein)、隐黄质(cryptoxanthin)、东莨菪素(scopoletin)、胡萝卜素、核黄素、烟酸、维生素B1、B2及C.种子含氨基酸:天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸等。本发明枸杞子有增强非特异性免疫作用,能提高巨噬细胞的吞噬功能,增强血清溶菌酶,提高血清中抗绵羊红细胞抗体的效价,还能增加脾脏中抗绵羊红细胞的抗体形成细胞的数量。
枸杞子多糖具有抑瘤作用;能提高正常脾脏T淋巴细胞增殖反应;能对抗细胞免疫功能低下;与其它抑瘤药物合用能增强该抑瘤药物的抑瘤作用;能作用于 T细胞的免疫增强剂,能增强CTL,NK细胞的功能;对巨噬细胞在非特异性抗肿瘤或特异性抗肿瘤过程中具有激活作用;对白细胞介素-2的活性有增强作用并使中老年人白细胞介素-2活性得到恢复;对中老年人抑制性T细胞(Ts)有明显调节作用,增强Ts细胞的活性;能增强T细胞介导的免疫反应与NK细胞的活性。还能显著增加巨噬细胞C3b和Fc受体的数量和活力,并能减轻醋酸可的松对其的抑制作用,提高免疫球蛋白含量(尤其是IgM)和补体活性。
本发明中药组合物,枸杞子用于滋补肾阴,填充先天之阴,为平补之品,提升肝脏的耐受性,提升肝脏的抗病毒能力。
黄精(学名:Polygonatum sibiricum),又名:鸡头黄精、黄鸡菜、笔管菜、爪子参、老虎姜、鸡爪参,为黄精属植物,产于西伯利亚、蒙古、朝鲜或中国。采用如下炮制方法:除去杂质,洗净,略润,切厚片,干燥。
黄精能抗病原微生物,对伤寒杆菌、金黄色葡萄球菌、抗酸杆菌有抑制作用;对肾上腺素引起的血糖过高呈显着抑制作用;
本发明中药组合物,黄精用于补气益阴、健脾益肾养血,调补肝脏,使先后天之本得以气阴双补。
三七,性味:甘、微苦,温。归肝、胃经。为五加科植物三七 Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根。具有化瘀止血,活血定痛的功效。主治出血证,跌打损伤,瘀血肿痛。三七能提高血清超氧化物歧化酶(SOD),还原型谷胱甘肽,过氧化氢酶(CAT)水平,NOS含量,具有较强的抗自由基氧化作用。三七还可以提高脑组织中SOD、NOS含量,同时降低MDA和MAO含量。三七具有延缓衰老的功效。
本发明中药组合物,三七用于化瘀止血、补虚强壮,化瘀生新,化瘀而不伤正,补益。提高血清超氧化物歧化酶(SOD),还原型谷胱甘肽,过氧化氢酶(CAT) 水平,NOS含量,同时降低MDA和MAO含量,提高脑组织中SOD、NOS含量,同时降低MDA和MAO含量,延缓衰老。
MDA含量是衰老生理的一个指标。
超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)是生物体内存在的一种抗氧化金属酶,它能够催化超氧阴离子自由基歧化生成氧和过氧化氢,在机体氧化与抗氧化平衡中起到至关重要的作用。提高血清中的SOD含量能延缓皮肤衰老、抗氧化、祛色斑、降低体内的多余自由基引起的细胞损伤。
甘草,可用于痈疽疮疡、咽喉肿痛,气喘咳嗽,胃痛、腹痛及腓肠肌挛急疼痛,调和某些药物的烈性;此外,甘草有类似肾上腺皮质激素样作用。对组胺引起的胃酸分泌过多有抑制作用;并有抗酸和缓解胃肠平滑肌痉挛作用。甘草还有抗炎,抗过敏作用,能保护发炎的咽喉和气管粘膜。所含的次酸能阻断致癌物诱发肿瘤生长的作用。甘草里含有一种甘草酸,它可以预防肝细胞受损,保肝护肝。
本发明中药组合物,甘草用于补脾益气、调和诸药,擅入中焦,补益脾气,防止肝细胞受损,保肝护肝,助参芪成气虚之功,发挥调和作用、矫正方中药物滋味。
本发明中药组合物,采取“补虚祛瘀”之法进行治疗***增生。中医认为***增生为本虚标实之病。本虚为气血阴阳亏虚,标实为淤。因而可。肾为先天之本,脾为后天之本,补益人体气血阴阳,当从脾肾入手。脾肾得充,则运化、气化功能得以恢复,水湿无以停留成痰,小便藏泄有序。
有益效果:本中药组合物其组方由国医大师李济仁长期服用的气血双补茶化裁而来,药物较少,但是所选取药物既考虑其病之标本,也考虑老年患者身体特性,方中大部分药不止一效。所用补益药气血阴阳皆补,此外补益脾肾,先后天之本得以补足,使得脾运化功能得复,达到培土制水之效;肾之气化得复,则水湿无以停留。对于其标之淤,选取三七一味,一来化其之淤,二来取其化瘀止血、化瘀不伤正,三来取其补虚之效,则淤得以化,且不耗气血阴阳,且可补益气血,符合癃闭患者的病理特性,一药多用。且方中黄芪、三七两味药皆有利尿治其标之疗效,一定程度上可达急则治其标之功。
此外,***增生是中老年男性常见疾病之一,随着身体的衰老,***增生的发病率随年龄递增。本发明中药组合物在治疗***增生的同时,还能提高血清超氧化物歧化酶(SOD),还原型谷胱甘肽,过氧化氢酶(CAT)水平,NOS 含量,同时降低MDA和MAO含量,提高脑组织中SOD、NOS含量,同时降低MDA 和MAO含量,达到了延缓衰老的功效。本发明中药组合物在延缓衰老的同时治疗***增生其效果要远优于其他单纯治疗***增生的药物。肝脏,是人体的主要解毒器官。毒物(包括使用不当的药物)侵犯人体时,肝脏首当其冲。若这种侵犯力超过肝脏的解毒力,肝脏则发生病理改变。临床上,人们大多重视肝病的药物治疗,而容易忽视乱吃药物造成的药源性肝损害。其实,不但西药药源性肝损害应当得到临床专家和群众的重视,中药所致的肝损害也非常大。肝脏出现损失,会加速人体衰老。肝脏出现损失,肝血流量会减少。血液是护肝养肝的基础,血流量的减少使肝内血液循环功能下降,肝脏吸收营养、代谢和清除毒素的能力也相应减退,人体将会衰老。肝脏因为药物出现损伤,还会导致肝肝细胞数量锐减,从而加速人体衰老。本发明中药组合物采用甘草、黄精、枸杞、西洋参等原料药,在调补肝脏、保肝护肝的基础上,且还采用了较少的原料药来治疗***增生,防止了药物对肝脏的损伤致使身体加速衰老,相对于其它治疗***增生的药物,解决了一面治疗***增生,一面又因为药物损伤肝脏,加速身体衰老,身体衰老又致使***增生的技术难题。
综上而言,本方较为精简,但为治本治法,兼有治标之效,能在延缓衰老的同时治疗***增生,在调补肝脏、保肝护肝的基础上采用了较少的原料药,能防止药物对肝脏的损伤致使身体加速衰老从而又引发***增生,适合***增生患者服用,且无明显毒副作用。从实验数据看,本发明中药组合物,能够减轻上皮和***增生,能降低***增生患者的***指数和脾指数,能降低血清中MDA含量,对血液中NOS不会产生明显影响。
下面结合试验数据来进一步说明本发明中药组合物能减轻上皮和***增生以达到治疗***增生的疗效。
一、试验名称:中药组方对丙酸***致动物***增生的治疗作用比较实验
二、实验目的:采用丙酸***连续皮下注射4周致小鼠***增生,观察处方1中药组方对丙酸***致小鼠***增生的治疗作用比较。
三、实验原理:***是雄激素依赖器官,***的生长依赖于体内雄激素的存在,连续给予动物丙酸***雄激素可引起外源性的***增生,复制***增生动物模型。观察处方1中药组方对***增生动物的治疗作用比较。
四、实验材料
(1)实验动物
SPF-ICR小鼠,体重27-32g,由南通大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(苏)2014-0001。
(2)实验药物和实验试剂
中药阳性前列舒乐:通化利民药业有限公司批号:170611;
12粒/60kg、0.6g/粒、7.2/60kg、0.12/kg,临床人用量20倍、2.4g/kg, 0.12g/ml、0.2ml/10g;
西药阳性哈天(盐酸坦素罗辛缓释胶囊);
安斯泰来药业有限公司批号:201705T3201,0.2mg/60kg,临床人用量20 倍、0.067mg/kg,0.0033mg/ml,0.2ml/10g;
Pqq、中国药科大学提供;4mg/kg,0.2mg/ml、0.2ml/10g;
仙灵脾颗粒,四川峨眉山药业有限公司,批号20180102;
30g/60kg,临床人用量20倍、10g/kg,0.5g/ml、0.2ml/10g;
处方1本发明中药组合物:西洋参:7.5g;黄芪:5g;枸杞子:10g;黄精: 10g;三七:1.5g;甘草:1g;
30g/60kg;临床人用量20倍、10g/kg,0.5g/ml、0.2ml/10g
(3)实验耗材
超氧化歧化酶(S0D)试剂盒20180416,丙二醛(MDA)试剂盒,20180417、一氧化碳合酶(NOS)试剂盒20180404、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒 20180506、CAT试剂盒20180507、由南京建成生物工程研究所提供。
(4)实验用饲料
全价营养颗粒饲料;由南京协同动物饲料厂提供。批号:180123
(5)实验统计方法
采用SPSS19.0统计软件进行统计分析,结果采用均数±标准差(±s)表示,采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
(6)实验条件
室温22±2℃,湿度55-65%,光照适度,通风洁净良好。
(7)实验用设备
FA1004电子天平:上海精科天平厂;
LDZ5-2型离心机:北京京立离心机有限公司;
分光光度计,北京普析通用厂。
五、实验方法
取ICR小鼠115只,♂,27~32g,随机取15只皮下注射橄榄油5ml/kg(0.1ml/ 只)作为空白组,其余小鼠按体重随机分组分为10组
(1)空白组:给与生理盐水20ml/kg,
(2)模型组:给与生理盐水20ml/kg,
(3)中药一组高剂量组:20g/kg、1g/ml,20ml/kg,
(4)中药一组低剂量组:10g/kg、0.5g/ml,20ml/kg,
(5)中药阳性对照组(仙灵脾颗粒):10g/kg、0.5g/ml,20ml/kg,
(6)西药阳性哈天组:0.067mg/kg 0.0033mg/ml,0.2ml/10g
(7)前列舒乐组:2.4g/kg,0.12g/ml 0.2ml/10g
以上动物灌胃给药,给药同时(除空白组外)其余小鼠全部皮下注射溶解于橄榄油的丙酸***5mg/kg,(25mg/支,0.5mg/ml,0.1ml/只)。1次/d,连续 21d后,处死空白对照组和丙酸***组各2只,解剖观察***形状、色泽、质地及与周围组织粘连情况。取***称重和切片镜检病理学检查,确认造模是否成功。连续给药30d,末次给药后24h,禁食不禁水,处死动物前取血清采用全波长分光光度计测定NOS、SOD和MDA。各组动物解剖分离***组织和脾脏后立即称重,计算***指数(PI)和脾脏指数(SI)。
***指数(g/10g)=***平均重量(g)/平均体重(g)*10;
脾脏指数(g/10g)=脾脏平均重量(g)/平均体重(g)*10。
取各组动物的***进行病理学检查并评分。
六、实验结果
(1)给与动物丙酸***5mg/kg连续21d后取空白组和模型组各2只,病理组织学检查,结果表明空白组见正常***组织。模型组低倍镜下可见***组织形态发生明显变化,上皮层增厚,腺上皮细胞的细胞质游离端空间结构混乱,结构松散,组织间隙可见脂肪样。高倍镜下可见模型组组织中有炎症浸润出现。提示已形成***增生模型。见图1-3
图1为空白组低倍镜下***组织形态,从图1中可以看出空白组正常***组织,腺体松散分布,腺腔内可见分泌物,间质疏松;量少。(100X)
图2模型组1低倍镜下***组织形态:从图2中可以看出模型组1***组织形态发生明显变化,上皮层增厚,腺上皮细胞的细胞质游离端空间结构混乱, (100X)。
图3模型组2低倍镜下***组织形态:从图3中可以看出模型组2***组织形态发生明显变化,***组织间隙可见脂肪样。可见***组织中有炎症浸润出现。(100X)
(2)中药组方对***增生动物体重的影响结果见表1
与模型组比较ΔΔP<0.01
实验结果所示:
采用丙酸***连续皮下注射4周致小鼠***增生,处方1高剂量组动物在实验7d至实验末体重有下降,与模型组比具有显著性差异(P<0.01)。处方 1低剂量组动物在实验第2周和第三周体重有下降,与模型组比具有显著性差异 (P<0.01)。其余各组小鼠体重与模型组比无明显差异。提示:处方2对***增生小鼠体重有一定的影响。
(3)处方1中药组方对***增生动物***指数(PI)和脾脏指数(SI)的影响,结果见表2
与空白组比较**P<0.01;*P P<0.05,与模型组比较ΔΔP<0.01,ΔP<0.05
实验结果所示:
采用丙酸***连续皮下注射4周致小鼠***增生,实验末,模型组小鼠***和脾脏重量明显增加,***指数、脾指数明显升高,与正常组比有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。中药阳性组、西药阳性组、处方1高剂量组、处方1 低剂量组小鼠***、脾脏重量未见明显增加,***指数、脾指数与模型组比有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。提示:处方1可明显降低丙酸***致***增生小鼠的***指数和脾指数。
(4)处方1中药组方对***增生小鼠血清中SOD、MDA和NOS的影响,结果见表3、表4、表5
与正常组比**P<0.01;*P<0.05,与模型组比ΔΔP<0.01,ΔP<0.05
实验结果所示:
采用丙酸***连续皮下注射4周致小鼠***增生,实验末,取血清按试剂盒方法项下检测SOD含量,模型组小鼠血清中SOD活力明显降低,与空白组比有显著性差异(P<0.01);处方1高剂量组、处方1低剂量组小鼠血清中
SOD活力明显升高,与模型组比有显著性差异(P<0.01)。处方1可升高丙酸***致小鼠***增生血清中SOD活力。
组别 | OD值(um) | 浓度(nmol/ml) |
空白组 | 0.022±0.006 | 4.61±1.48 |
模型组 | 0.045±0.008** | 10.71±2.12** |
中药阳性组 | 0.017±0.005ΔΔ | 3.53±1.37ΔΔ |
西药阳性组 | 0.017±0.007ΔΔ | 3.37±1.81ΔΔ |
处方1高剂量组 | 0.016±0.007ΔΔ | 3.21±1.83ΔΔ |
处方1低剂量组 | 0.017±0.004ΔΔ | 3.53±1.18ΔΔ |
仙灵脾颗粒组 | 0.014±0.005ΔΔ | 2.74±1.21ΔΔ |
与空白组比**P<0.01;*P<0.05,与模型组比ΔΔP<0.01,ΔP<0.05
实验结果所示:
采用丙酸***连续皮下注射4周致小鼠***增生,实验末,取血清检测 MDA含量,模型组小鼠血清中MDA含量明显增高,与正常组比有显著性差异 (P<0.01);
处方1高剂量组、处方1低剂量组小鼠其余各组小鼠血清中MDA含量明显降低,与模型组比有显著性差异(P<0.01)。
提示:处方1均可降低丙酸***致***增生小鼠血清中MDA含量。
组别 | OD值 | 浓度 |
空白组 | 0.098±0.009 | 10.96±1.28 |
模型组 | 0.121±0.015** | 14.10±2.17** |
中药阳性组 | 0.109±0.011Δ | 12.42±1.61 |
西药阳性组 | 0.118±0.013 | 13.68±1.90 |
处方1高剂量组 | 0.122±0.005 | 14.34±0.74 |
处方1低剂量组 | 0.120±0.012 | 14.02±1.66 |
仙灵脾颗粒组 | 0.120±0.008 | 14.04±1.09 |
与空白组比较**P<0.01,与模型组比较ΔP<0.05
实验结果所示:
采用丙酸***连续皮下注射4周致小鼠***增生,实验末,取其血清检测NOS含量,模型组小鼠血清中NOS的OD值增高,活力明显增高,与正常组比较有显著性差异(P<0.01);其余各组与模型组比较均无明显变化。
处方1对用丙酸***连续皮下注射4周致小鼠***增生对血液中NOS没有明显影响。
(5)处方1中药组方对***增生小鼠***病理组织学检查结果
实验结束后剖取***经10%***固定,常规取材,脱水,石蜡包埋,切片厚4~5μm,采用HE染色方法,考察不同中药组方对***增生动物***组织有无异常炎性细胞浸润等病理变化。
【实验试剂】
【实验器材】
【实验方法】
①取材:新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整,将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。
②脱水:将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯 5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。
③包埋:将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框,待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却,蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
④切片:将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片,片厚4μm。切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平,用载玻片将组织捞起,并放进60℃烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
取石蜡切片,经过以下步骤脱蜡:
①二甲苯(Ⅰ)15min;
②二甲苯(Ⅱ)15min;
③二甲苯:无水乙醇=1:1 2min
④100%乙醇(Ⅰ)5min;
⑤100%乙醇(Ⅱ)5min;
⑥80%乙醇5min;
⑦蒸馏水5min
脱蜡后按以下流程进行HE染色
HE染色:将切片置于苏木素染缸中染色15分钟后,流水稍洗去苏木***1-3 s,1%盐酸乙醇1min,双蒸水稍水洗10-30s,迅速置于0.5%伊红液染色3min 用双蒸水冲洗数分钟。
切片分别经以上染色后按下述步骤脱水:
⑴80%乙醇稍洗1-2s ⑵95%乙醇(Ⅰ)2-3s
⑶95%乙醇(Ⅱ)3-5s ⑷无水乙醇5-10min
⑸无水乙醇5-10min ⑹二甲苯(Ⅰ)2min
⑺二甲苯(Ⅱ)2min ⑻二甲苯(Ⅲ)2min
切片脱水后,使用中性树胶封片,通风厨中晾干后,置于显微镜下观察,图像采集分析。由病理专业人员阅片。
光学显微镜下检查指标如下:
(1)腺体大小是否均匀;
(2)腺体上皮是否增生;
(3)间质平滑肌及***是否增生;
(4)间质是否充血
(5)间质否有炎细胞浸润。根据各种病变轻重程度,依次记为“无-,轻度 +,中度++,重度+++”
[病理检查结果]
A.空白组(5只):
腺体大小一致、排列整齐,腺腔内有少量分泌物,腺上皮细胞呈单层柱状、排列整齐、基底膜完整,胞核圆形或卵圆形,位于基底部。间质中平滑肌细胞及纤维***未见增生,未见明显炎性细胞浸润。
B.模型组(5只):
小鼠***腺体大小不一,部分腺体腺腔扩张呈囊状,囊内储积大量分泌物,部分腺泡腺上皮细胞增生,形成较多的***状,***状皱襞凸向管腔,部分腺上皮增生层次增多,形成筛网状,细胞胞质内可见分泌颗粒,腺腔内可见部分脱落的腺上皮及少量分泌物,间质***明显增生,血管扩张充血。
C.西药阳哈天组:(5只)
与模型组相比,腺上皮增生减轻,局部形成***状较小,间质***增生程度亦减轻。
D.中药前列舒乐组:(5只)
腺上皮增生减轻,局部形成***状较小,腺腔内少量分泌物,间质***增生程度亦减轻。
E.仙灵脾组(5只)
与模型组相比,腺上皮增生减轻,局部形成***状较小,间质***增生程度亦减轻。
F.处方1低剂量组(5只)
与模型组相比,腺上皮增生减轻,局部形成***状较小,间质***增生程度亦减轻。
G.处方1高剂量组(5只)
与模型组相比,腺上皮增生明显减轻,间质***增生程度亦减轻。与模型组比少量炎症因子浸润,腺体出现少量增生,与空白组形态接近,明显好转。
[结论]
采用丙酸***致***增生小鼠***主要病变是***腺体大小不一,部分腺体腺腔扩张呈囊状,囊内储积大量分泌物,部分腺泡腺上皮细胞增生,形成较多的***状,***状皱襞凸向管腔,部分腺上皮增生层次增多,形成筛网状,细胞胞质内可见分泌颗粒,腺腔内可见部分脱落的腺上皮及少量分泌物,间质***明显增生,血管扩张充血。各给药组均能减轻小鼠***腺上皮和***增生的作用。
图4为空白组HE图片:从图中可以看出,腺体大小一致、排列整齐,腺腔内有少量分泌物,腺上皮细胞呈单层柱状、排列整齐、基底膜完整,胞核圆形或卵圆形,位于基底部。间质中平滑肌细胞及纤维***未见增生,未见明显炎性细胞浸润。400X
图5为模型组(1)HE图片;从图中可以看出,腺腔内可见部分脱落的腺上皮及少量分泌物,间质***明显增生,血管扩张充血。400X
图6为模型组(2)HE图片;从图中可以看出,腺泡萎缩,腺体管腔变小,管腔分泌物减少,分泌物淡红色,大量炎性细胞浸润,大量纤维组织增生。400X
图7为模型组(3)HE图片;从图中可以看出,腺泡萎缩,腺体管腔闭塞,皱裂明显减少;管腔分泌物减少,可见多核巨噬细胞形成炎性肉芽肿性病变,纤维组织增生。400X
图8处方1低剂量组HE图片;与模型组相比,腺上皮增生减轻,局部形成***状较小,间质***增生程度亦减轻。400X
图9处方1高剂量组HE图片;与模型组相比,腺上皮增生减轻,局部形成***状较小,间质***增生程度亦减轻。腺体出现少量增生,与空白组形态接近,明显好转。400X
图10西药阳哈天组HE图片;从图中可以看出,部分腺体上皮细胞呈高柱状,***间质有少量炎性浸润,间质疏松,有部分上皮细胞坏死。100X
图11为仙灵脾组HE图片;从图中可以看出,腺体和间质增生,***分充血未见炎性浸润,间质肌纤维增生100X;
图12中药前列舒乐组HE图片;从图中可以看出,腺上皮增生减轻,局部形成***状较小,腺腔内少量分泌物,间质***增生程度亦减轻。400X
(6)处方1中药组方对***增生动物组织中IL-1b***酸性磷酸酶 (PAP)的活性的影响
【实验试剂】
【实验仪器】
【实验方法】
1)白片37℃烤过夜
2)二甲苯1,2,3各10min,乙醇100%,95%,90%,80%,70%,50%各2min,蒸馏水1min
3)TBS洗3次,每次5min
4)抗原修复(高火至沸,转为低火20min),自然冷却
5)TBS洗3次,每次5min
6)切片放入3%H2O2溶液,室温孵育10min,以阻断内源性过氧化物酶。
7)TBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封闭20min
8)去除BSA液,,每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织,4℃过夜
9)TBS洗3次,每次5min
10)去除PBS液,每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗,4℃孵育50min。
11)TBS洗3次,每次5min
12)去除TBS液,每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液,显微镜控制显色,用蒸馏水冲洗
13)苏木素染色25s,用自来水流水冲洗3-5min返蓝
14)用蒸馏水洗1min,然后50%,70%,80%,90%,100%浸泡1min,二甲苯 1,2浸泡几分钟,晾干,滴加中性树胶,封片
【实验结果】
IL-1B免疫组化标记结果:
各种蛋白阳性细胞以胞浆胞膜呈淡黄色至黄棕色,阴性不着色。
评分标准:
(1)阴性(-),0分;(2)弱阳性(+),1分;(3)中度阳性(++),2分; (4)强阳性(+++),3分。
(2)免疫组化结果:
从图14-图20,可以看出:
A.空白组:***组织呈现阴性,IL-1B呈现(-)表达。
B.模型组:***组织呈现棕黄色,IL-1B呈现强阳性(+++)表达。
C.前列舒乐组:***组织呈现淡黄色,IL-1B呈现阳性(+)表达。
D.西药哈天组:***组织呈现阴性,IL-1B呈现(-)表达。
E.仙灵脾组:***组织呈现淡黄色,IL-1B呈现弱阳性(+)表达。
F.处方1高组:***组织呈现阴性,IL-1B呈现(-)表达。
G.处方1低组:***组织呈现淡棕黄色,IL-1B呈现阳性(++)表达。PAP免疫组化标记结果:
1)评分标准:
阴性(-),0分;
弱阳性(+),1分;
中度阳性(++),2分;
强阳性(+++),3分。
2)免疫组化结果:
从图21-28可以看出:
A.空白组:***组织呈现阴性,PAP呈现阴性(-)表达。
B.模型组:***组织呈现棕黄色,PAP呈现较强阳性(+++)表达。
C.前列舒乐组:***组织呈现淡黄色,PAP呈现弱阳性(+)表达。
D.西药哈天组:***组织呈现阴性,PAP呈现阴性(-)表达。
E.仙灵脾组:***组织呈现淡黄色,PAP呈现弱阳性(+)表达。
F.处方1高组:***组织呈现淡黄色,PAP呈现弱阳性(+)表达。
G.处方1低组:***组织呈现阴性,PAP呈现阴性(-)表达。
附图说明
图1为空白组低倍镜下***组织形态;
图2为模型组1低倍镜下***组织形态;
图3为模型组2低倍镜下***组织形态;
图4为空白组HE图片;
图5为模型组(1)HE图片;
图6为模型组(2)HE图片;
图7为模型组(3)HE图片;
图8为处方1低剂量组HE图片;
图9为处方1高剂量组HE图片;
图10为西药阳哈天组HE图片;
图11为仙灵脾组HE图片;
图12为中药前列舒乐组HE图片;
图13为空白组免疫组化结果图;
图14为模型组(1)IL-1B免疫组化结果图(×400);
图15为模型组(2)IL-1B免疫组化结果图(×400);
图16为前列舒乐组IL-1B免疫组化结果图(×400);
图17为西药哈天组IL-1B免疫组化结果图(×400);
图18为仙灵脾组IL-1B免疫组化结果图(×400);
图19为处方1高剂量组IL-1B免疫组化结果图(×400);
图20为处方1低剂量组IL-1B免疫组化结果图(×400);
图21为空白组PAP免疫组化结果图(×400);
图22为模型组(1)PAP免疫组化结果图(×400);
图23为模型组(2)PAP免疫组化结果图(×400);
图24为前列舒乐组PAP免疫组化结果图(×400);
图25为西药哈天组PAP免疫组化结果图(×400);
图26为仙灵脾PAP免疫组化结果图(×400);
图27为处方1高剂量组PAP免疫组化结果图(×400);
图28为处方1低剂量组PAP免疫组化结果图(×400)。
具体实施方式
实施例:
一种治疗***增生的中药组合物,通过减轻***腺上皮和***增生达到治疗***增生的目的。所述中药组合物有效成份为西洋参、黄芪、枸杞子、黄精、三七、甘草;并按照下述重量份的原料药组成:
西洋参:3.25-15g;黄芪:2.5-10g;枸杞子:5-20g;黄精:5-20g;三七: 0.75-3g;甘草:0.5-2g。
较佳地,本发明中药组合物按照下述重量份的原料药组成:
西洋参:7.5g;黄芪:5g;枸杞子:10g;黄精:10g;三七:1.5g;甘草:1g。
较佳地,所述中药组合物为片剂、冲剂、袋泡剂、口服液剂或胶囊剂。
本发明还提出治疗***增生的中药组合物在制备延缓***腺组织衰老中的用途。
Claims (6)
1.一种治疗***增生的中药组合物,其特征在于:所述中药组合物有效成份为西洋参、黄芪、枸杞子、黄精、三七、甘草;并按照下述重量份的原料药组成:
西洋参:3.25-15g;黄芪:2.5-10g;枸杞子:5-20g;黄精:5-20g;三七:0.75-3g;甘草:0.5-2g。
2.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于:所述中药组合物按照下述重量份的原料药组成:西洋参:7.5g;黄芪:5g;枸杞子:10g;黄精:10g;三七:1.5g;甘草:1g。
3.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于:所述中药组合物为片剂、冲剂、袋泡剂、口服液剂或胶囊剂。
4.权利要求1所述的中药组合物在制备减轻***腺上皮增生药物中的用途。
5.权利要求1所述的中药组合物在制备减轻***腺***增生药物中的用途。
6.权利要求1所述的中药组合物在制备延缓***腺组织衰老中的用途。
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