CN111349589A - 一种防治金线莲茎腐病的解淀粉芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种防治金线莲茎腐病的解淀粉芽孢杆菌及其应用，属于农作物病害防治技术领域。所述菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)GZ5，已于2019年11月21日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏号为CGMCC No.18987。本发明所述的菌株GZ5是从福建省光泽县健康番茄根围土壤中获得，与土壤生态和谐相容，无毒、无致病性。所述解淀粉芽孢杆菌GZ5菌株经平板对峙试验筛选获得，能够有效抑制金线莲茎腐病菌菌丝生长及孢子萌发，且与环境相容性好，具有良好的开发应用前景。

Description

一种防治金线莲茎腐病的解淀粉芽孢杆菌及其应用

技术领域

本发明涉及一种防治金线莲茎腐病的解淀粉芽孢杆菌及其应用，属于农作物病害防治技术领域。

背景技术

金线莲是我国珍稀中药材，新鲜或干燥全草皆可入药，在民间享有“药王”的美称。由于野生金线莲对生态环境要求严格，适应性较差，繁殖率低，生长缓慢，且由于其独特的营养价值和药用价值，导致人工过度采挖，成为濒危品种，已被福建省列为省级野生药材保护品种。目前金线莲以人工栽培为主，但在栽培过程中病害问题也日渐突显。其中由尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）引起的茎腐病是金线莲栽培中主要的病害之一，对金线莲不同生长期皆可造成危害。发病时植株茎基部出现黄褐色水渍状病斑，快速发展至绕茎一周，发病部位干枯腐烂。茎腐病病势发展迅速，幼苗迅速猝倒死亡，发病严重时危害率高达 90%，给种植户带来巨大的经济损失。

有关金线莲茎腐病综合防治研究报道较少，化学防治是目前生产上对该病害的主要防治方法，邵清松等人研究表明，戊唑醇乳油对金线莲茎腐病菌的抑制作用效果较好，其抑制毒力为多菌灵的92.50倍。除此之外常用的杀菌剂还有百菌通、代森锰锌和甲基托布津等。化学杀菌剂在金线莲茎腐病的防治中起到了一定的作用，但是随着化学杀菌剂的大量和不科学使用，很多弊端日益突出，如病原菌产生抗药性、对环境污染和生态***的破坏、农药残留等。近年来，随着人们对生态农业认识的加深，探索有效且能与环境相兼容的防治措施已引起国内外学者的普遍重视。生物防治是目前农业实践中重要的发展理念，其具有对人畜无害，无污染、无残留、可再生、难以使有害生物产生抗药性、易于产业化、成本低等特点，可以最大程度地降低农药的使用，减轻农药的环境污染，具有十分独特的优势，符合当前我国农业可持续发展的趋势，具有极其广阔的开发前景。

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)是与枯草芽孢杆菌亲缘性极高的***，广泛分布在自然界中，易于分离培养，并且具有广谱的抗菌活性，不污染环境，对人畜无毒，抗逆能力强，稳定性好。它能够产生多类高效的活性代谢产物，有效地抑制真菌和其它细菌的活性，同时促进植物生长并诱导生物体自身产生抗性，多方面控制植物病原菌的生长和对生物体的侵害作用。目前该菌已广泛应用于花卉、水果以及各种农作物病害防治。邱光等研究表明，解淀粉芽孢杆菌在草莓根围可以快速定殖，防控土传病害，提高草莓抗病性，改善草莓品质提高产量；何碧珀等研究表明，解淀粉芽孢杆菌对芝麻种子的萌发率及芝麻幼苗的株高、根长和鲜、干量都有显著促进作用，并且对芝麻茎点枯病具有防治效果。有研究表明解淀粉芽孢杆菌能够产生植物生长激素 IAA，刺激作物生长和诱导其防御***产生抗性，从而达到抑制植物病原菌预防植物病害的作用，同时能促进植物根部的生长，增加作物产量。

迄今，关于金线莲茎腐病化学防治已有相关报道，但金线莲茎腐病生物防治的研究鲜有报道。本实验室前期分离获得了一株具有生防作用的解淀粉芽孢杆菌GZ5，以该菌株作为生防菌，研究其对金线莲茎腐病病原菌尖孢镰刀菌菌丝生长抑制作用以及菌株发酵液及其无菌体过滤液对金线莲茎腐病病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用，为金线莲茎腐病的生物防治和该生防菌的深入开发应用提供实践依据。

发明内容

本发明的目的在于：针对目前金线莲茎腐病严重发生，且面积逐年扩大，化学防治效果不理想，同时带来环境污染的问题，提供一种防治金线莲茎腐病的解淀粉芽孢杆菌及其应用。

本发明通过如下技术方案实现：

一种防治金线莲茎腐病的解淀粉芽孢杆菌，经形态观察、培养特征观察和分子生物学研究鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) GZ5，已于2019年11月21月保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC No.18987。

将菌株GZ5划线接种在LB培养基(l0 g胰蛋白胨、5 g酵母粉、5 g氯化钠和15 g琼脂粉加蒸馏水定容至1000 mL，溶解并调pH为7.0-7.2，高压灭菌备用) ，37℃培养48 h后进行菌落特征和形态特征观察。菌落特征：该菌株菌落为圆形，乳白色，不透明，边缘整齐，中央凸起，表面湿润、略黏稠。形态特征：菌株GZ5革兰氏染色阳性，菌体短杆状，两端钝圆，内生芽孢，芽孢囊不膨大，芽孢椭圆形，中生到次端生。

所述的解淀粉芽孢杆菌菌株制备的生防菌剂，其制备过程如下：

将所述的菌株接种于LB液体培养基中37℃，180 r/min，培养24 h，制成种子液，取10mL种子液接种于发酵培养基中。经优化后得到的发酵培养基配方为：10 g胰蛋白胨、5 g酵母粉、5 g氯化钠和15 g琼脂粉加蒸馏水定容至1000 mL，溶解并调pH为7.0-7.2。通过对培养条件的摸索，得到最佳发酵条件为：接种量5%(v/v)、装瓶量100mL /250mL，发酵培养基pH值7.0-7.2，37℃，180 r/min，培养48 h，制成浓度约为10⁸ CFU/ml的菌株GZ5发酵液。将发酵液经4 ℃，8000 r/min离心20 min后，用0.22 µm细菌过滤器过滤，得GZ5无菌体发酵液即为所述生防菌剂。

所述的解淀粉芽孢杆菌GZ5在在防治金线莲茎腐病中的应用，具体在抑制金线莲茎腐病菌菌丝生长和孢子萌发的方法如下：

菌株GZ5活体对金线莲茎腐病病原菌菌丝生长的抑制作用

取备用的PDA和LB培养基，微波炉熔解后，等比例混合倒板。在PDA与LB等比例混合培养皿正中央接种尖孢镰刀菌菌丝块（D=7 mm），在距离菌丝块相对两侧2.5 cm处，用接种环蘸取板上的GZ5菌液划线，以只接同样大小的尖孢镰刀菌菌丝块为对照，重复3次，放置在28℃恒温培养箱中培养，统计抑菌率。

菌株GZ5发酵液对金线莲茎腐病病原菌菌丝生长的抑制作用

在PDA平板中央放置尖孢镰刀菌菌丝块(D=7 mm)，在菌丝块上下相对位置各相距2.5cm处放置直径为5 mm的灭菌滤纸片，在滤纸片上各滴加10 mL菌株GZ5发酵液，以只接同样大小的尖孢镰刀菌菌丝块为对照，重复3次，置于28 ℃恒温培养，统计抑菌率。

菌株GZ5发酵液对金线莲茎腐病病原菌孢子萌发的抑制作用

采用凹玻片孢子萌发法测定孢子的萌发率，即按1：1：1体积比在凹玻片上依次滴加菌株GZ5发酵液，浓度为1×10⁵个/mL的尖孢镰刀菌孢子悬浮液，1wt.％葡萄糖水溶液，对照组加入LB液体培养基代替发酵液。28 ℃保湿培养即将凹玻片置于铺满湿滤纸的大号培养皿内用保鲜膜密封，处理24 h后于光学显微镜下观察尖孢镰刀菌孢子萌发情况，萌发标准为芽管长度达到孢子直径一半，若24 h后尚未萌发或萌发数量少，则每隔2 h观察一次，至少观察5个视野，每个视野观察30~40个孢子萌发情况。

菌株GZ5无菌体发酵液对金线莲茎腐病病原菌菌丝生长的抑制作用

将菌株GZ5无菌体发酵液2 mL加入到融化的20 mL冷却至45 ℃左右的PDA培养基中混合倒平板，制成GZ5无菌发酵液的抑菌平板。在平板中央接种直径大小为7 mm尖孢镰刀菌菌丝块。将2 mL LB液体培养基加入到融化的20 mL冷却至45 ℃左右的 PDA培养基中混合倒平板，同样在平板中央接种直径大小为7 mm尖孢镰刀菌菌丝块为对照，重复3次，置于28 ℃培养箱中培养，以十字交叉法测量的菌落生长直径，统计抑菌率。

菌株GZ5无菌体发酵液对金线莲茎腐病病原菌孢子萌发的抑制作用

采用凹玻片孢子萌发法测定孢子的萌发抑制率，按1：1：1体积比在凹玻片上依次滴加菌株GZ5的无菌体发酵液，浓度为1×10⁵个/mL的尖孢镰刀菌孢子悬浮液，1％葡萄糖水溶液，对照加入LB液体培养基代替无菌体发酵液，每个处理重复3次。28 ℃保湿培养，处理24h后于光学显微镜下观察尖孢镰刀菌孢子萌发情况，萌发标准为芽管长度达到孢子直径一半，若24 h后尚未萌发或萌发数量少，则每隔2 h观察一次，至少观察5个视野，每个视野观察30~40个孢子萌发情况。

本发明有益效果：

1、本发明筛选出的解淀粉芽孢杆菌GZ5抑制作用强，能够明显抑制金线莲茎腐病菌菌丝生长和孢子萌发。由于该菌株分离自番茄根围土壤，与土壤生态和谐相容，且是生物制剂，因此没有化学农药使用带来的一系列问题，可减少农业污染，且能有效防治金线莲茎腐病，具有良好的开发应用前景。

2、本发明解淀粉芽孢杆菌菌株培养条件简单，容易保存，易于工业化生产，是一种理想的生防细菌。

附图说明

图1菌株GZ5活体对金线莲茎腐病病原菌菌丝生长的抑制作用。

图2菌株GZ5发酵液对金线莲茎腐病病原菌菌丝生长的抑制作用。

图3菌株GZ5发酵液对金线莲茎腐病病原菌孢子萌发的抑制作用。

图4菌株GZ5无菌体发酵液对金线莲茎腐病病原菌菌丝生长的抑制作用。

图5菌株GZ5无菌体发酵液对金线莲茎腐病病原菌孢子萌发的抑制作用。

图6菌株GZ5活体处理金线莲茎腐病病原菌后的电镜观察。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面结合附图和实施例对本发明做进一步阐述，但并不是对本发明的限制。下述实施例中所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

实施例一拮抗菌的分离鉴定

l、菌株分离

轻轻铲去健康番茄植株根际周围的表土，使用土壤取样器取5-10 cm深度的土壤样品，将其倒入已经灭菌备用的自封袋内，做好实时记录，带回实验室分离。每份土壤随机称取10g置于装有90 mL 无菌水及少量玻璃珠的250 mL 三角瓶中，瓶口固定封口膜后放在200 r/min摇床上震荡30 min，静置5 min后，用移液枪分别吸取1 ml土样悬浮液，加入盛有9 ml无菌水的试管后充分混匀，即为10^-2倍土样稀释液，采用同样的方法，依次制备10^-3、10^-4 、10^-5 、10^-6倍土样稀释液。将制备好的各梯度倍数的土样稀释液分别取100 ul均匀涂布在LB平板中，封上封口膜，平板倒置于37℃生化培养箱中培养2-4 d。观察生长出细菌菌落的颜色、形态、透明度等特征，并挑取不同类型单菌落重新纯化，将获得的纯培养移入LB斜面，置于4 ℃冰箱中保存、备用。

采用平板对峙法进行尖孢镰刀菌拮抗菌株的筛选。取备用的PDA和LB培养基，微波炉熔解后等比例混合倒板。用直径7mm的打孔器在活化后的尖孢镰刀菌菌落边缘同一直径打取菌饼，然后将菌饼接种在PDA与LB等比例混合培养皿正中央，同时在距离菌饼相对两侧2.5cm处，用接种环蘸取在LB培养基上已活化的待测拮抗菌液划线，以在平板中央仅接种同样大小的尖孢镰刀菌菌饼作为对照，每个处理重复3次，放置在28 ℃恒温培养箱中培养，待对照组生长至平板边缘时，测量抑菌带大小。

、形态特征观察

将抑菌带最明显的拮抗菌株GZ5划线接种于LB培养基 (l0 g胰蛋白胨、5 g酵母粉、5 g氯化钠和15 g琼脂粉加蒸馏水定容至1000 mL，溶解并调pH为7.0-7.2，高压灭菌备用) ，37℃培养48 h后进行菌落特征和形态特征观察。菌落特征：该菌株菌落为圆形，乳白色，不透明，边缘整齐，中央凸起，表面湿润、略黏稠。形态特征：菌株GZ5革兰氏染色阳性，菌体呈杆状，两端钝圆，内生芽孢，芽孢囊不膨大，芽孢椭圆形，中生到次端生。根据形态特征初步判断菌株GZ5属于芽孢杆菌属(Bacillus sp)。

、16S rDNA 序列分析

基因组提取试剂盒提取菌株GZ5基因组DNA后，采用通用引物L1: 5-AGTCGTAACAACGTAGCCGT-3’和L2: 5-GTGCCAAGGCATCCACC-3’，进行 16S rDNA 的PCR扩增。回收PCR扩增产物，经连接、转化、鉴定后，阳性克隆送生工生物工程（上海）有限公司测序，序列全长为1000 bp（请见序列）。将所得序列提交到GenBank 数据库进行BLAST 分析比对，发现其与解淀粉芽孢杆菌有99%以上的序列同源性。

序列：

GTGCAAGGGCGGCGTGCTATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGATTTATTTCGAAGCAACGCGAAGATCTTACCAGTTTTGACATCCTCTGATATCCTAGAGATAGACGTCCCT。

结合形态学特征和培养特征，将菌株GZ5 鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。

实施例二：菌株GZ5活体对金线莲茎腐病病原菌菌丝生长的抑制作用

取备用的PDA和LB培养基，微波炉熔解后，等比例混合倒板。在PDA与LB等比例混合培养皿正中央接种尖孢镰刀菌菌丝块（D=7 mm），在距离菌丝块相对两侧2.5 cm处，用接种环蘸取板上的GZ5菌液划线，以只接同样大小的尖孢镰刀菌菌丝块为对照，重复3次，放置在28℃恒温培养箱中培养，统计抑菌率。结果如图1所示，在不含GZ5活体的培养基上尖孢镰刀菌菌丝生长茂盛，而在含GZ5活体培养基上菌丝生长明显受到抑制， 培养6 d后菌丝生长抑制率为63.75%。

实施例三：菌株GZ5发酵液对金线莲茎腐病病原菌菌丝生长的抑制作用

在PDA平板中央放置尖孢镰刀菌菌丝块(D=7 mm)，在菌丝块上下相对位置各相距2.5cm处放置直径为5 mm的灭菌滤纸片，在滤纸片上各滴加10 mL菌株GZ5发酵液，以只接同样大小的的尖孢镰刀菌菌丝块为对照，重复3次，置于28 ℃恒温培养，统计抑菌率。结果如图2所示，菌株GZ5发酵液对尖孢镰刀菌菌丝生长有明显的抑制作用，培养6 d后菌丝生长抑菌率为62.58%。

实施例四：菌株GZ5发酵液对金线莲茎腐病病原菌孢子萌发的抑制作用

采用凹玻片孢子萌发法测定孢子的萌发率，即按1：1：1体积比在凹玻片上依次滴加菌株GZ5发酵液，浓度为1×10⁵个/mL的尖孢镰刀菌孢子悬浮液，1wt.％葡萄糖水溶液，对照组加入LB液体培养基代替发酵液。28 ℃保湿培养即将凹玻片置于铺满湿滤纸的大号培养皿内用保鲜膜密封，处理后24 h后于光学显微镜下观察尖孢镰刀菌孢子萌发情况，萌发标准为芽管长度达到孢子直径一半，若24 h后尚未萌发或萌发数量少，则每隔2 h观察一次，每个处理至少观察5个视野，每个视野观察30~40个孢子萌发情况。结果如图3所示，在经过GZ5发酵液处理24 h后孢子萌发率为11.1%，孢子萌发抑制率为78.83%，说明GZ5发酵液显著抑制了尖孢镰刀菌的孢子萌发。

实施例五：菌株GZ5无菌体发酵液对金线莲茎腐病病原菌菌丝生长的抑制作用

将菌株GZ5无菌体发酵液2 mL加入到融化的20 mL冷却至45 ℃左右的PDA培养基中混合倒平板，制成GZ5无菌体发酵液的抑菌平板。在平板中央接种直径大小为7 mm尖孢镰刀菌菌丝块。将2 mL LB液体培养基加入到融化的20 mL冷却至45℃左右的 PDA培养基中混合倒平板，同样在平板中央接种直径大小为7 mm尖孢镰刀菌菌丝块为对照，重复3次，置于28 ℃培养箱中培养，以十字交叉法测量的菌落生长直径，统计抑菌率。结果如图4所示，在加入GZ5无菌体发酵液的培养基中，尖孢镰刀菌丝生长缓慢且菌丝生长稀疏，菌丝量明显减少，培养6 d后菌落生长直径为22 mm，菌丝生长抑制率为63.33%。

实施例六：菌株GZ5无菌体发酵液对金线莲茎腐病病原菌孢子萌发的抑制作用

采用凹玻片孢子萌发法测定孢子的萌发抑制率，按1：1：1体积比在凹玻片上依次滴加菌株GZ5无菌体发酵液，浓度为1×10⁵个/mL的尖孢镰刀菌孢子悬浮液，1wt.％葡萄糖水溶液，对照加入LB液体培养基代替无菌体发酵液，每个处理重复3次。28 ℃保湿培养，处理24h后于光学显微镜下观察尖孢镰刀菌孢子萌发情况，萌发标准为芽管长度达到孢子直径一半，若24 h后尚未萌发或萌发数量少，则每隔2 h观察一次。每个处理至少观察5个视野，每个视野观察30~40个孢子萌发情况。结果如图5所示，在经无菌体发酵液处理24 h后孢子萌发率为26.73%，孢子萌发抑制率为54.59%，说明菌株GZ5无菌体发酵液对尖孢镰刀菌孢子萌发有一定抑制作用。

实施例七：菌株GZ5活体处理金线莲茎腐病病原菌后的电镜观察

依照实施例二的方法对尖孢镰刀菌进行处理后，在实验组中挑取少量受抑制菌落边缘的菌丝，在对照组中挑取菌落边缘的菌丝，分别在电子显微镜下观察菌丝的形态。结果如图6所示，对照菌丝生长旺盛，菌丝纤长，均匀，饱满，而实验组菌丝畸形，菌丝干瘪，皱缩。可见，GZ5活体处理可引起尖孢镰刀菌菌丝形态发生明显的变化。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 福建省农业科学院植物保护研究所

<120> 一种防治金线莲茎腐病的解淀粉芽孢杆菌及其应用

<130> 3

<160> 3

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1000

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

gtgcaagggc ggcgtgctat acatgcaagt cgagcggaca gatgggagct tgctccctga 60

tgttagcggc ggacgggtga gtaacacgtg ggtaacctgc ctgtaagact gggataactc 120

cgggaaaccg gggctaatac cggatggttg tttgaaccgc atggttcaga cataaaaggt 180

ggcttcggct accacttaca gatggacccg cggcgcatta gctagttggt gaggtaacgg 240

ctcaccaagg cgacgatgcg tagccgacct gagagggtga tcggccacac tgggactgag 300

acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtagggaatc ttccgcaatg gacgaaagtc 360

tgacggagca acgccgcgtg agtgatgaag gttttcggat cgtaaagctc tgttgttagg 420

gaagaacaag tgccgttcaa atagggcggc accttgacgg tacctaacca gaaagccacg 480

gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttgtc cggaattatt 540

gggcgtaaag ggctcgcagg cggtttctta agtctgatgt gaaagccccc ggctcaaccg 600

gggagggtca ttggaaactg gggaacttga gtgcagaaga ggagagtgga attccacgtg 660

tagcggtgaa atgcgtagag atgtggagga acaccagtgg cgaaggcgac tctctggtct 720

gtaactgacg ctgaggagcg aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac cctggtagtc 780

cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gggggtttcc gccccttagt gctgcagcta 840

acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 900

gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtga tttatttcga agcaacgcga agatcttacc 960

agttttgaca tcctctgata tcctagagat agacgtccct 1000

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

agtcgtaaca acgtagccgt 20

<210> 3

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

gtgccaaggc atccacc 17

Claims (5)

1.一种防治金线莲茎腐病的解淀粉芽孢杆菌菌株，其特征在于，所述的菌株为解淀粉

芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens) GZ5，已于2019年11月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 18987。

2.如权利要求l所述的解淀粉芽孢杆菌菌株制备的生防菌剂。

3.根据权利要求2所述的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂是由所述解淀粉芽孢杆菌菌株GZ5发酵而成。

4.权利要求3所述的生防菌剂，其特征在于：将所述的菌株接种于LB液体培养基中37℃，180 r/min，培养24 h，制成种子液，取10 mL种子液接种于发酵培养基中，发酵条件为：接种量5 %(v/v)、装瓶量100mL /250mL，发酵培养基pH值7.0-7.2，37℃，180 r/min，培养48h，制成浓度为10⁸ CFU/ml的菌株GZ5发酵液；将发酵液经4℃,8000 r/min离心20 min后，用0.22 µm细菌过滤器过滤，得无菌体发酵液即为所述生防菌剂；所述发酵培养基配方为：10g胰蛋白胨、5 g酵母粉、5 g氯化钠和15 g琼脂粉加蒸馏水定容至1000 mL，溶解并调pH为7.0-7.2。

5.如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌菌株在防治金线莲茎腐病中的应用。

Images