CN111317716A - 一种含维生素k1的结肠炎止血修复乳剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种含VK1的甘油二酯乳剂,所述的乳剂包含有鸭油甘油二酯和VK1。本发明还提供一种结肠炎的修复制剂,是使用上述的乳剂制备的;其一种具体制备方法,是将鸭油甘油二酯在一定温度下溶解,将鸭油甘油二酯和VK1按一定的质量比充分混合和搅拌制备而成。本发明的组合物对结肠炎小鼠具有改善生理指标,降低MPO活性,降低IL‑1β、IL‑4、IL‑6、IL‑17、TNF‑α和IL‑10肠道炎症因子,促进结肠肠道组织修复和肝脏中VK1的吸收,对溃疡性结肠炎有较好的止血修复效果。本修复剂与抗生素或中药联合使用也会产生良好协同与互补作用,提高修复疗效,有望开发一种新型高效的治疗修复结肠炎的保健品。
Description
技术领域
本发明属于肠炎治疗制剂技术领域,具体涉及一种含维生素K1的 结肠炎止血修复乳剂。
背景技术
肠炎性疾病((Inflammation bowel disease,IBD)是一种易复发的慢 性黏膜免疫相关的疾病,包括克罗恩病(Crohn's disease,CD)和溃疡性结 肠炎(UlcerativeColitis,UC)。UC是一种慢性的炎症疾病,它的临床症 状包括肠道黏膜病变和溃疡、结肠变窄、腹泻和大便带血等现象。近些 年来,随着人类食物生食比例和食品质量安全风险增加、工作压力加大 和环境污染严重,IBD的发病率在亚洲急剧上升,IBD在发展中国家的 发病率正在迅速增加,在肠炎的治疗方面将面临一个重大的卫生挑战。
UC是一个由多因素导致的复杂病变过程,包括基因、免疫***的 损伤和环境因素等,其发病率因饮食结构的改变和生活压力的增加目益 上升,不仅给患者身体带来极大痛苦,也给临床治疗工作带来挑战。目前 该病症根治性的产品较少,抗生素干预是治疗UC的一种常见方法,但 大多数抗生素常出现耐药性或伴有副作用。目前应用于结肠炎治疗药物主要有氨基水杨酸类、类固醇激素类和免疫抑制剂等。但是,随个体的 差异性,此类药物的临床疗效很不一致。治疗结肠炎的难点在于病变部 位位于肠道后部,由于肠道高酸和各种酶的干扰,使用的抗生素或激素 类药物难以到达,有效浓度降低较大,往往很难治愈,同时还会造成耐 药性。而畜禽饲养过程中由于饲料发霉、油脂酸败、大肠杆菌感染和应 激等原因也会造成结肠炎,给畜禽养殖造成很大损失。
维生素K(VK)是具有止血功能的有效药物,主要用于VK缺乏引 起来的出血,比如梗阻性黄疸和出血性肠炎等引起的出血。然而,VK1为脂溶性维生素,口服不溶于水,在肠道靠胆汁部分乳化吸收,利用率 很低,尤其是在胆管梗阻胆汁分泌受阻情况下VK吸收更少;如果采用 注射方式,对于畜禽群体治疗会造成很大应激。此外,VK1本身没有消 炎作用,单一服用不能够达到肠炎修复治疗的满意效果。
发明内容
本发明提供了一种生态结肠炎修复制剂,即一种用于结肠炎修复的 维生素K1制剂,使用鸭油甘油二酯(DDG)、维生素K1(VK1)组合 物用于结肠炎快速止血和修复结肠长度、调节溃疡性结肠炎炎症细胞因 子,促进结肠肠道发育;从而弥补现有技术的不足。
本发明首先提供结肠炎止血修复乳剂,包含有鸭油甘油二酯和VK1;
所述的鸭油甘油二酯和VK1的体积质量比为1.25~5.0:1(μL/μg);
鸭油甘油二酯与VK1的体积质量比为3.75:1(μL/μg)对小鼠溃疡性 结肠炎的修复效果最佳。
本发明的乳剂用于制备治疗溃疡性结肠炎的修复制剂。
本发明还提供一种结肠炎的修复制剂,是使用上述的乳剂制备的;
本发明的乳剂的一种制备方法,是将鸭油甘油二酯溶解,调整温度 范围为25~40℃,优选温度为35℃;避光条件下按鸭油甘油二酯和VK1进行混合,搅拌完成制备。
本发明的组合物对结肠炎小鼠具有改善生理指标,能够降低TNF-α、 IL-6肠道炎症因子,降低髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)活性, 促进肠道发育。因此,本发明的含VK1的甘油二酯乳剂用于修复治疗出 血性结肠炎,能够提高疗效和减少抗生素药物副作用,对改善根除结肠 炎和提高患者生活质量具有重大意义;有望开发一种新型高效的治疗溃 疡性结肠炎的保健品;同时该乳剂也可与其他药物复配使用。
附图说明
图1:不同处理水平对结肠炎小鼠体重的影响图;
图2:不同处理水平对结肠炎小鼠结肠长度的影响图;
图3:不同处理水平对结肠炎小鼠MPO活性的影响图;
图4:不同处理水平对结肠炎小鼠肠道发育的影响图;
图5:不同处理水平对肝脏中VK1含量的影响图。
具体实施方式
本发明将脂溶性VK1和溶剂鸭油甘油二酯联合使用,使VK1能够得 到更好乳化和保护,顺利避开肠道中酸性环境,达到肠道靶组织。实验 结果表明,鸭油甘油二酯与VK1按照一定比例联合服用,具有消炎、止 血和加快创伤面愈合的作用;能有效抑制炎症因子的释放和促进肠道炎 症组织愈合。
下面结合实施例对本发明进行详细的描述。
实施例1:含VK1的甘油二酯乳剂的制备
VK1是一种脂溶性维生素,吸收利用率低,临床多采用VK1注射液 的形式注射给药。本发明采用鸭油甘油二酯作为VK1的溶剂,从而提高 VK1的吸收利用率,提高疗效,降低药物使用量,缩短修复期。
在以前的试验中曾将肠道炎症建模成功后的小鼠设计正常组、炎症 模型组、炎症修复3个组,每组3个重复,每个重复5只小鼠,共45 只小鼠。正常组和炎症模型组灌胃生理盐水,炎症修复组灌胃VK1蒸馏 水溶液75μL/只。结果表明,由于VK1是脂溶性维生素,难以溶解蒸馏 水中易造成沉淀,同时适口性差、浪费较多、难以吸收、修复时间长、 用药量多、成本高。
最终筛选确定采用鸭油甘油二酯作为VK1载体,使用的鸭油甘油二 酯在特殊温度下能够完全溶解VK1,作为乳化剂快速溶解VK1,并保护 VK1免受消化道内酸和酶解的影响;可将VK1快速运送到肠道后段,保 持VK1的活性,降低VK1使用量;同时鸭油甘油二酯具有抑菌特性,二 者协同抑菌可加快创伤口愈合。
为了筛选出最佳溶解温度,各取1mL甘油二酯和8mg VK1于7个 干净的试管,编号Ⅰ-Ⅶ,将Ⅰ-Ⅵ号试管分别放于35℃、45℃、55℃、 65℃、75℃水浴中,Ⅶ号试管放于常温中,不断搅拌观察各试管VK1的 溶解情况;2分钟后Ⅲ号试管中固体最先溶解。
实验结果表明,VK1在25~40℃鸭油甘油二酯中能够充分溶解,最 适温度为35℃;鸭油甘油二酯和VK1的体积质量比μL/μg为1.25~ 5.0:1;二者混合搅拌时间为0.5~2min;此过程需在避光条件下进行,防 止VK1在光下分解。
实施例2:乳剂对结肠炎小鼠体重、结肠长度及MPO活性的影响 试验动物及分组:试验分为两个阶段进行:
第一阶段:结肠炎模型建立。分为模型组和对照组,对照组4个重 复,模型组28个重复,每个重复5只,共160只小鼠;模型组小鼠每 日饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液,连续7天,对照组自由饮用蒸馏 水。
造模结束后,模型组和对照组各抽取10只小鼠,禁食12h,取血清 及各器官,并检测生长指标和血液生化指标,即验证模型建立是否成功。
第二阶段:鸭油甘油二酯与VK1协同对结肠炎小鼠干预效果试验。
选择第一阶段建模成功的小鼠140只,随机分成7个试验组,分别 为正常组、模型组和炎症修复组。正常组(I组)和模型组(Ⅱ组)给 予蒸馏水灌胃7d;炎症修复组(Ⅲ~Ⅷ组)采用2×3两因素交叉试验 设计,鸭油甘油二酯DDG添加水平分别为50、75、100μL,VK1添加 水平分别为20、40μg,分别灌胃治疗7d。具体试验设计见表1。
表1:鸭油甘油二酯与VK1协同对小鼠干预效果试验设计表
取材及处理:禁食24h,称量每只小鼠的体重。小鼠眼眶取血后脱 颈处死,血液4℃、3000r/min离心15min,取上清液放入1.5mL离心管 中,-80℃冰箱保存以待检测;解剖小鼠,量取结肠长度,取部分结肠 于10%甲醛中固定用于肠道组织切片观察。
检测指标:
1)称量每只小鼠的体重、结肠长度。
2)采用试剂盒测定MPO IL-1β、IL-4、IL-6、IL-17、TNF-α和IL-10 含量。
3)采用苏木精—伊红(Hematoxylin and Eosin HE)方法对肠道组织 切片进行颜色,观察肠道组织结构变化,测定绒毛长度和隐窝深度,计 算绒毛长度/隐窝深度。
试验结果:
如图1所示:鸭油甘油二酯与VK1协同修复结肠炎小鼠7d后,正 常组与模型组体重差异极显著(P<0.01),Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组 体重显著(P<0.05)高于Ⅱ组,Ⅳ组和Ⅴ组与Ⅰ组无显著性差异(P> 0.05),Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组显著低于Ⅰ组(P<0.05)。结果表明,DDG 与VK1协同可以修复结肠炎小鼠的体重。
如图2所示:DDG与VK1协同修复结肠炎小鼠7d后,正常组与模 型组结肠长度差异极显著(P<0.01),Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅷ组结肠长度 显著(P<0.05)高于Ⅱ组,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅷ组与Ⅰ组无显著性差异(P >0.05),Ⅶ组显著(P<0.05)低于Ⅰ组,与Ⅱ组无显著性差异(P>0.05)。结果表明,DDG与VK1协同可以修复结肠炎小鼠的结肠长度。
如图3所示:正常组与模型组MPO活性差异极显著(P<0.01), Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、组MPO活性与Ⅰ组无显著性差异(P>0.05),与Ⅱ组有 显著性(P<0.05)差异。显著(P<0.05)高于Ⅱ组,Ⅲ、Ⅶ、Ⅷ组与 Ⅱ组无显著性差异(P>0.05),Ⅳ组MPO活性显著(P<0.05)低于Ⅴ、 Ⅵ组,极显著(P<0.01)低于Ⅱ组。结果表明,DDG与VK1协同可以 有效抑制结肠炎小鼠MPO活性。
实施例3鸭油甘油二酯与VK1协同对结肠炎小鼠炎症因子的影响
如表2所示:Ⅰ组的炎症细胞因子IL-17含量与Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组无显 著差异(P>0.05),显著(P<0.05)高于Ⅲ、Ⅶ、Ⅷ组,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、 Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组显著(P<0.05)低于Ⅱ组。DDG与VK1对结肠炎小鼠IL-17 含量的交互作用显著(P<0.05)。
Ⅰ组的炎症细胞因子IL-1β含量显著(P<0.05)低于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、 Ⅶ、Ⅷ组,Ⅱ组显著(P<0.05)高于Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组。DDG与VK1对 结肠炎小鼠IL-1β含量的交互作用显著(P<0.05)。
Ⅰ组的TNF-α含量与Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组无显著差异(P> 0.05),Ⅱ组显著(P<0.05)高于Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ组。DDG与VK1对结肠 炎小鼠TNF-α含量的交互作用显著(P<0.05)。
Ⅰ组的IL-6含量与Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ组无显著性差异(P>0.05), Ⅱ组显著(P<0.05)高于Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ组。DDG与VK1对结肠炎小鼠IL-6 含量的交互作用显著(P<0.05)。
Ⅰ组的IL-10含量与Ⅲ、Ⅴ、Ⅶ组无显著性差异(P>0.05),Ⅱ组 显著(P<0.05)高于Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组。DDG与VK1对结肠炎小鼠IL-10 含量的交互作用显著(P<0.05)。
Ⅰ组的IL-4含量与Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ组无显著性差异(P>0.05), Ⅱ组显著(P<0.05)高于Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ组。DDG与VK1对结肠炎小鼠IL-4 含量的交互作用显著(P<0.01),Ⅴ组显著(P<0.05)低于Ⅲ、Ⅵ组。
综上结果表明,DDG与VK1协同可有效减少结肠炎小鼠炎症细胞 因子的释放,加快肠炎收敛修复。
表2鸭油甘油二酯与VK1协同对结肠炎小鼠细胞因子的影响
实施例4鸭油甘油二酯与VK1协同对结肠炎小鼠结肠组织发育的 影响
由图4和表3可知,Ⅰ组结肠结构完整,无炎症细胞浸润,与Ⅰ组 相比,Ⅱ组结肠结构不完整,小肠绒毛长度明显缩短,经DDG和VK1干预治疗后,与Ⅱ组相比,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组结肠明显得到修 复。由表3可知,与Ⅰ组相比,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组的绒毛长度无显著性差异 (P>0.05),显著高于Ⅲ、Ⅶ、Ⅷ组。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组显著 高于Ⅱ组。DDG与VK1协同对结肠炎小鼠结肠绒毛高度有交互作用(P <0.05),Ⅳ和Ⅵ组无显著性差异(P>0.05),但显著(P<0.05)高 于Ⅲ、Ⅷ组。与Ⅰ组相比,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组隐窝高度无显著 性差异(P>0.05),Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组显著低于Ⅱ组,DDG 与VK1协同对结肠炎小鼠结肠隐窝深度无交互作用(P>0.05)。与Ⅰ 组相比,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组的绒毛高度与隐窝深度的比值无显著性差异 (P>0.05),Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组显著高于Ⅱ组。DDG与VK1协同对结肠炎小鼠绒毛高度与隐窝深度的比值有交互作用(P<0.05)。 表明,DDG与VK1协同可有效修复结肠炎小鼠的绒毛长度和隐窝深度。
表3:鸭油甘油二酯与VK1联合对结肠炎小鼠结肠发育的影响表
实施例5鸭油甘油二酯与VK1协同对结肠炎小鼠肝脏中VK1含量 的影响
由图5可知,与Ⅰ组相比,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ组无显著差异(P<0.05), Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组显著(P<0.05)高于Ⅱ组,Ⅵ组显著(P<0.05)高 于Ⅲ、Ⅳ组。由表3可知,鸭油DDG与VK1对结肠炎小鼠肝脏中VK1的含量的交互作用不显著(P>0.05),DDG对结肠炎小鼠中VK1的含 量影响显著(P<0.01)。结果表明,DDG能促进结肠炎小鼠肝脏中VK1的吸收。
由实施例2、3、4、5综合来看,鸭油甘油二酯和VK1协同能够促进 小鼠溃疡性结肠炎的修复,减轻结肠组织的损伤,促进肝脏中VK1的吸 收;其中Ⅴ组对溃疡性结肠炎小鼠的修复效果最佳;以此得出,组合物 鸭油甘油二酯与VK1的体积质量比为3.75:1(μL/μg)对小鼠溃疡性结肠炎 的修复效果最佳。
本发明将鸭油甘油二酯与VK1组合制成肠炎止血修复剂,可以直接 用于溃疡性肠炎的修复治疗,尤其是对难以治疗的结肠炎修复效果更为 明显。能够有效缓解小鼠体重下降、小鼠结肠长度缩短,降低MPO活 性,有效减少结肠炎小鼠中炎症细胞因子(IL-1β、IL-4、IL-6、IL-17、 TNF-α和IL-10)的释放,促进结肠肠道组织修复和VK1的吸收,对溃疡 性结肠炎有较好的修复止血效果;本修复剂也可与抗生素或中药联合使 用也会产生协同与互补作用,提高修复疗效,是一种很有开发价值的肠 道炎症修复乳剂。
Claims (7)
1.一种结肠炎止血修复乳剂,其特征在于,所述的乳剂包含有鸭油甘油二酯和VK1。
2.如权利要求1所述的结肠炎止血修复乳剂,其特征在于,所述的鸭油甘油二酯和VK1的体积质量比μL/μg为1.25~5.0:1。
3.如权利要求1所述的结肠炎止血修复乳剂,其特征在于,所述的鸭油甘油二酯和VK1的体积质量比μL/μg为3.75:1。
4.权利要求1-3任一项所述的结肠炎止血修复乳剂在制备治疗溃疡性结肠炎的修复制剂中的应用。
5.一种结肠炎的修复制剂,其特征在于,所述的修复制剂包含有权利要求1-3任一项所述的结肠炎止血修复乳剂。
6.权利要求1-3任一项所述的结肠炎止血修复乳剂的制备方法,其特征在于,所述的乳剂的制备方法,是将鸭油甘油二酯溶解,调整温度范围为25~40℃,避光条件下按鸭油甘油二酯和VK1进行混合,搅拌完成制备。
7.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述的温度为35℃。
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