CN111317705B - 一种抑制黑色素生长的蜗牛提取物及其在制备日化品中的应用 - Google Patents

一种抑制黑色素生长的蜗牛提取物及其在制备日化品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种抑制黑色素生长的蜗牛提取物及其在制备日化品中的应用，所述蜗牛提取物由如下方法制备：(1)将蜗牛捣碎呈糊状，加入生理盐水、活性干酵母、葡萄糖，混匀，于10‑35℃下发酵12‑48小时，过滤，得滤液和沉淀；(2)将步骤(1)得到的滤液用等体积的乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相，减压浓缩得粗提物1；(3)将步骤(1)得到的沉淀用体积分数50‑70％的乙醇溶液回流提取5‑6小时，过滤，滤液减压浓缩得粗提物2；(4)将得到的粗提物1和粗提物2混合，经大孔树脂柱层析，以体积分数60‑80％的乙醇溶液作为洗脱剂，收集4‑6倍柱体积的洗脱液，减压浓缩，干燥即得所述蜗牛提取物。

Description

一种抑制黑色素生长的蜗牛提取物及其在制备日化品中的 应用
技术领域
本发明属于微生物发酵提取及日化领域，具体涉及一种抑制黑色素生长的蜗牛提取物及其在制备日化品中的应用。
背景技术
蜗牛原液(粘液)、蜗牛多肽提取物等蜗牛分泌或提取物表现较好的抗氧化、皮肤修复等活性，被广泛用于化妆品领域，例如面膜、精华液等的制备。蜗牛粘液是蜗牛爬行过程中足腺分泌的粘液，可形成薄膜防护蜗牛免受刺激，据报道，其粘液中含有尿囊素、羟基乙酸、胶原蛋白、维生素等活性成分。本发明提供一种利用发酵技术提取蜗牛中能有效抑制黑色素生长的SOD活性成分的方法。
发明内容
本发明提供一种蜗牛提取物，其特征在于所述蜗牛提取物的制备方法包括如下步骤：
(1)将蜗牛捣碎呈糊状，加入生理盐水、活性干酵母、葡萄糖，混匀，于10-35℃下发酵12-48小时后，过滤，得滤液和沉淀；
(2)将步骤(1)得到的滤液用等体积的乙酸乙酯萃取2-4次，合并乙酸乙酯相，减压浓缩得粗提物1；
(3)将步骤(1)得到的沉淀用体积分数50-70％的乙醇溶液回流提取5-6小时，过滤，滤液减压浓缩得粗提物2；
(4)将步骤(2)和(3)得到的粗提物1和粗提物2混合后，经大孔树脂柱层析，以体积分数60-80％的乙醇溶液作为洗脱剂，收集4-6倍柱体积的洗脱液，减压浓缩，干燥即得所述蜗牛提取物。
步骤(1)中生理盐水的用量为蜗牛质量的1.5-3.0倍，活性干酵母的质量为蜗牛质量的2％-3％，葡萄糖的质量为活性干酵母质量的1.5-2.0倍；
步骤(3)中50-70％的乙醇溶液的用量为沉淀质量的15-20倍；
步骤(4)中大孔树脂的型号选自D101型或AB-8型。
本发明的另一实施方案提供上述蜗牛提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将蜗牛捣碎呈糊状，加入生理盐水、活性干酵母、葡萄糖，混匀，于10-35℃下发酵12-48小时后，过滤，得滤液和沉淀；
(2)将步骤(1)得到的滤液用等体积的乙酸乙酯萃取2-4次，合并乙酸乙酯相，减压浓缩得粗提物1；
(3)将步骤(1)得到的沉淀用体积分数50-70％的乙醇溶液回流提取5-6小时，过滤，滤液减压浓缩得粗提物2；
(4)将步骤(2)和(3)得到的粗提物1和粗提物2混合后，经大孔树脂柱层析，以体积分数60-80％的乙醇溶液作为洗脱剂，收集4-8倍柱体积的洗脱液，减压浓缩，干燥即得所述蜗牛提取物。
步骤(1)中生理盐水的用量为蜗牛质量的1.5-3.0倍，活性干酵母的质量为蜗牛质量的2％-3％，葡萄糖的质量为活性干酵母质量的1.5-2.0倍；
步骤(3)中50-70％的乙醇溶液的用量为沉淀质量的15-20倍；
步骤(4)中大孔树脂的型号选自D101型或AB-8型。
本发明的另一实施方案提供上述蜗牛提取物作为化妆品添加剂的应用。
本发明的另一实施方案提供上述蜗牛提取物在制备美白化妆品方面的应用，所述美白化妆品优选面膜、面霜、洗面奶、眼霜等。
本发明的另一实施方案提供上述蜗牛提取物在制备日化品中的应用。所述日化品优选面膜、精华液、洗发水、护发素、肥皂等。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。本发明所述的活性干酵母购自安琪酵母股份有限公司。
实施例1
(1)取蜗牛(500g)捣碎呈糊状，加入生理盐水(750g)、活性干酵母(10g)、葡萄糖(15g)，混匀，于10℃下发酵48小时后，过滤，得滤液和沉淀；
(2)将步骤(1)得到的滤液用等体积的乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯相，减压浓缩得粗提物1；
(3)将步骤(1)得到的沉淀用体积分数70％的乙醇溶液(用量为沉淀质量的15倍)回流提取6小时，过滤，滤液减压浓缩得粗提物2；
(4)将步骤(2)和(3)得到的粗提物1和粗提物2混合后，经D101型大孔树脂柱层析，以体积分数60-65％的乙醇溶液作为洗脱剂，收集4倍柱体积的洗脱液，减压浓缩，干燥即得所述蜗牛提取物(以下简称产品A)。
实施例2
(1)取蜗牛(500g)捣碎呈糊状，加入生理盐水(1.5kg)、活性干酵母(15g)、葡萄糖(30g)，混匀，于35℃下发酵12小时后，过滤，得滤液和沉淀；
(2)将步骤(1)得到的滤液用等体积的乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯相，减压浓缩得粗提物1；
(3)将步骤(1)得到的沉淀用体积分数50％的乙醇溶液(用量为沉淀质量的20倍)回流提取5小时，过滤，滤液减压浓缩得粗提物2；
(4)将步骤(2)和(3)得到的粗提物1和粗提物2混合后，经AB-8型大孔树脂柱层析，以体积分数75-80％的乙醇溶液作为洗脱剂，收集6倍柱体积的洗脱液，减压浓缩，干燥即得所述蜗牛提取物(以下简称产品B)。
实施例3
(1)取蜗牛(500g)捣碎呈糊状，加入生理盐水(750g)混匀，于10℃下浸泡48小时后，过滤，得滤液和沉淀；
(2)将步骤(1)得到的滤液用等体积的乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯相，减压浓缩得粗提物1；
(3)将步骤(1)得到的沉淀用体积分数70％的乙醇溶液(用量为沉淀质量的15倍)回流提取6小时，过滤，滤液减压浓缩得粗提物2；
(4)将步骤(2)和(3)得到的粗提物1和粗提物2混合后，经D101型大孔树脂柱层析，以体积分数60-65％的乙醇溶液作为洗脱剂，收集4倍柱体积的洗脱液，减压浓缩，干燥即得蜗牛提取物(以下简称产品C)。
实施例4蜗牛破壁液的制备
按文献方法(中国蜂业，第68卷第47-50页)制备蜗牛破壁液：将蜗牛洗净后置于-45℃冰箱中冷冻48h，捣碎呈糊状后，按重量比1:10加入经预冷的生理盐水充分搅拌后，用120目的尼龙纱布过滤，取滤液用10％醋酸调pH5.6，加入沸水中，搅拌下保温3-5min有浑浊出现时，立即冷却至常温，于8000r离心15min，取上清液即为蜗牛破壁液(以下简称产品D)。
实施例5
按文献方法(中国老年学杂志2014年3月第34卷第1280-1283)记载的方法，制备蜗牛多肽提取物(以下简称产品E)。
实施例6SOD酶活性测试
本发明采用NBT光还原法(参见文献《食品安全质量检测学报》第5卷第10期2014年第3319-3323页)测试产品A-E的SOD活性(U/mL)，产品A-E、市售蜗牛粘液冻干粉分别与去离子水配置成质量分数为2％的待测液。结果见下表，表中数值为三次平均值。
测试样品 SOD活性(U/mL)
产品A 863.32
产品B 856.58
产品C 35.69
产品D 27.28
产品E 10.54
蜗牛粘液冻干粉 18.24
实施例7酪氨酸酶抑制活性测试
按照中国发明专利(申请号：201710196028.0)中记载的方法，测定本发明产品A-E对土豆中酪氨酸酶活性的抑制作用，抑制率计算公式：[1-(T2-T1)/(C2-C1)]×100％
C1表示只有底物(土豆提取液和缓冲溶液的混合溶液)的吸光度值，C2表示含有底物和L-酪氨酸的吸光度值，C2-C1表示在扣除底物的吸光度后生成的黑色素的吸光度值。T1表示含有底物和样品的吸光度值，T2表示含有底物、L-酪氨酸和样品的吸光度值，T2-T1表示经过样品的抑制，在扣除样品和底物的吸光度后剩余的黑色素的吸光度值。
结果表明，只有产品A、B在500μg/mL浓度下，对酪氨酸酶的抑制率大于50％，分别为63.5％和62.4％，产品C-E在500μg/mL浓度下对酪氨酸酶的抑制率在15.8-31.4％之间。

Claims (9)

1.一种蜗牛提取物，其特征在于所述蜗牛提取物的制备方法包括如下步骤：
(1)将蜗牛捣碎呈糊状，加入生理盐水、活性干酵母、葡萄糖，混匀，于10-35℃下发酵12-48小时后，过滤，得滤液和沉淀；
(2)将步骤(1)得到的滤液用等体积的乙酸乙酯萃取2-4次，合并乙酸乙酯相，减压浓缩得粗提物1；
(3)将步骤(1)得到的沉淀用体积分数50-70％的乙醇溶液回流提取5-6小时，过滤，滤液减压浓缩得粗提物2；
(4)将步骤(2)和(3)得到的粗提物1和粗提物2混合后，经大孔树脂柱层析，以体积分数60-80％的乙醇溶液作为洗脱剂，收集4-6倍柱体积的洗脱液，减压浓缩，干燥即得所述蜗牛提取物；
步骤(1)中生理盐水的用量为蜗牛质量的1.5-3.0倍，活性干酵母的质量为蜗牛质量的2％-3％，葡萄糖的质量为活性干酵母质量的1.5-2.0倍。
2.根据权利要求1所述的蜗牛提取物，其特征在于步骤(3)中50-70％的乙醇溶液的用量为沉淀质量的15-20倍。
3.根据权利要求1所述的蜗牛提取物，其特征在于步骤(4)中大孔树脂的型号选自D101型或AB-8型。
4.根据权利要求1所述的蜗牛提取物的制备方法，其特征在于包括包括如下步骤：
(1)将蜗牛捣碎呈糊状，加入生理盐水、活性干酵母、葡萄糖，混匀，于10-35℃下发酵12-48小时后，过滤，得滤液和沉淀；
(2)将步骤(1)得到的滤液用等体积的乙酸乙酯萃取2-4次，合并乙酸乙酯相，减压浓缩得粗提物1；
(3)将步骤(1)得到的沉淀用体积分数50-70％的乙醇溶液回流提取5-6小时，过滤，滤液减压浓缩得粗提物2；
(4)将步骤(2)和(3)得到的粗提物1和粗提物2混合后，经大孔树脂柱层析，以体积分数60-80％的乙醇溶液作为洗脱剂，收集4-6倍柱体积的洗脱液，减压浓缩，干燥即得所述蜗牛提取物；
步骤(1)中生理盐水的用量为蜗牛质量的1.5-3.0倍，活性干酵母的质量为蜗牛质量的2％-3％，葡萄糖的质量为活性干酵母质量的1.5-2.0倍。
5.权利要求1-3任一项所述的蜗牛提取物作为化妆品添加剂的应用。
6.权利要求1-3任一项所述的蜗牛提取物在制备美白化妆品方面的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述美白化妆品选自面膜、面霜、洗面奶、眼霜。
8.权利要求1-3任一项所述的蜗牛提取物在制备日化品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于所述日化品选自面膜、精华液、洗发水、护发素、肥皂。
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