CN111285874A - Ret抑制剂、其药物组合物及其用途 - Google Patents

Ret抑制剂、其药物组合物及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物领域，涉及一种RET抑制剂、其药物组合物及其用途。具体地，本发明涉及一种式(I)所示的化合物，或式(I)所示化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，本发明还涉及包含所述这些化合物的药物组合物、以及所述这些化合物及其药物组合物在制备药物中的用途，该药物尤其用于治疗和预防可用RET相关的疾病和病症，包括癌症、肠易激综合征和/或与肠易激综合征相关的疼痛。

Description

RET抑制剂、其药物组合物及其用途
技术领域
本发明属于药物领域，具体的，本发明涉及呈现转染期重排(RET)激酶抑制的新化合物，包含所述化合物的药物组合物、化合物或其药物组合物在制备药物中的用途，该药物尤其用于治疗和预防RET相关的疾病和病症，包括癌症、肠易激综合征和/或与肠易激综合征相关的疼痛。
背景技术
转染重排(Re-arranged during transfection，RET)是属于钙黏蛋白超家族的受体型酪氨酸激酶之一，其激活涉及细胞增殖和存活的多个下游途径。
据报道RET基因产生异常(点突变、染色体易位、染色体逆位、基因扩增)的结果涉及癌化。RET融合蛋白与若干癌症有关，包括***状甲状腺癌和非小细胞肺癌。RET融合蛋白鉴定为某些癌症的驱动因素，这推动了使用具有RET抑制活性的多激酶抑制剂来治疗其肿瘤表达RET融合蛋白的患者。据报道索拉非尼(Sorafenib)、舒尼替尼、凡德他尼、普纳替尼等多激酶抑制剂对表达KIF5B-RET的细胞株表现出细胞增殖抑制作用(J Clin Oncol 30,2012,suppl；Abstract no:7510)。另外，据报道多激酶抑制剂卡博替尼对两名RET融合基因阳性的非小细胞肺癌患者表现出部分疗效(Cancer Discov,3(6),Jun 2013,p.630-5)。然而，这些药物不能总是以足以抑制RET所需的水平给药，这是由于除RET以外的靶标的抑制所致的毒性。此外，治疗癌症的最大挑战之一是肿瘤细胞对治疗产生抗性的能力。激酶经由突变被重新激活是一种常见的耐药机制。当发生耐药时，患者的治疗选择通常非常有限，并且在大多数情况下癌症进展不受抑制。WO 2017011776公开了单靶点的RET激酶抑制剂，对RET及其突变相关的癌症具有好的预防或治疗作用。目前仍需要进一步研发抑制RET以及其抗性突变体的化合物，来应对RET基因异常相关的癌症。
发明内容
本发明提供了一种呈现转染期重排(RET)激酶抑制的新化合物，该化合物对RET野生型和RET基因突变体具有良好的抑制作用，且对RET野生型和RET基因突变体具有较好的抑制选择性。
本发明化合物某些参数的优良特性，如半衰期、清除率、选择性、生物利用度、化学稳定性、代谢稳定性、膜的渗透性、溶解性等的优良特性，能够促使副作用的降低、治疗指数的扩大或耐受性的改进等。
一方面，本发明提供了一种式(I)所示的化合物，或式(I)所示化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002307183200000011
其中，
X1、X2、X3、X4和X5各独立地为CR4或N，其中X1、X2、X3和X4中的0、1或2个为N；
E为一个键、-NR6-或-O-；
A为Cyc或hetCyc，其中所述的Cyc和hetCyc各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6烷基、NR5R6(C＝O)烷氧基烷基、NR6R7烷氧基、NR6R7烷氧基烷基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、Cyc、hetCyc、hetCyc-烷基、烷氧基烷基、hetCyc-烷氧基烷基、环烷叉基和杂环叉基的取代基所取代；
Q为-(C＝O)-、-O-、-(C＝O)NR5-、-(C＝S)NR5-、-(S＝O)2-、-(S＝O)2NR5-、-NR5(C＝O)-、-NR5(C＝O)O-、-NR5(C＝O)NR5-、-NR5-、-(C＝O)O-或一个键；
M为-(C＝O)-、烷基、烯基、炔基、烷基芳基、烷基杂芳基、烯基芳基、炔基芳基、烯基杂芳基、炔基杂芳基、芳基、杂芳基、Cyc、hetCyc、芳基烷基、杂芳基烷基、Cyc-烷基或hetCyc-烷基，其中所述的烷基、烯基、炔基、烷基芳基、烷基杂芳基、烯基芳基、炔基芳基、烯基杂芳基、炔基杂芳基、芳基、杂芳基、Cyc、hetCyc、芳基烷基、杂芳基烷基、Cyc-烷基和hetCyc-烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、CF3、NR5R6、氧代、烷氧基、环烷叉基、杂环叉基、羟基烷基、烷基、环烷基、环烷基炔基和杂环基的取代基所取代；
R1为H、D、CN、F、Cl、Br、烷基、烯基或环烷基，其中所述的烷基、烯基和环烷基可独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、CN、NH2、OH和NO2的取代基所取代；
G为H、D、烷基、hetCyc、Cyc、hetCyc-烷基、Cyc-烷基、杂芳基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基烷基、R5O(C＝O)NR6烷基、R5(C＝O)NR6烷基、NR5R6(C＝O)烷基、R5(C＝O)烷基、NR5R6(C＝O)-或R5O烷基，其中所述的烷基、hetCyc、Cyc、hetCyc-烷基、Cyc-烷基、杂芳基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基烷基，以及R5O(C＝O)NR6烷基、R5(C＝O)NR6烷基、R5(C＝O)烷基、NR5R6(C＝O)烷基和R5O烷基中的烷基部分各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、氧代、环烷叉基、杂环叉基、烷基、烷氧基、烷氧基烷基、R5(C＝O)-、R5O(C＝O)-的取代基所取代；
R3为H、D、烷基、Cyc、hetCyc、芳基、杂芳基、Cyc-烷基、hetCyc-烷基、烷氧基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基或氨基烷基，其中所述的烷基、Cyc、hetCyc、芳基、杂芳基、Cyc-烷基、hetCyc-烷基、烷氧基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基和氨基烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、NR5R6、R5O-、R5O(C＝O)-、R5(C＝O)-、NR5R6(C＝O)NR5-、R5(S＝O)2-、NO2、CN、CF3、烷基和环烷基的取代基所取代；
R4为H、D、烷基、F、Cl、Br或烷氧基,其中所述的烷基和烷氧基可独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、CN、NH2、OH和NO2的取代基所取代；
R5为H、D、烷基、Cyc、hetCyc、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、Cyc-烷基或hetCyc-烷基，其中所述的烷基、Cyc、hetCyc、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、Cyc-烷基和hetCyc-烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NR6R7、烷基、烷基磺酰基、烷氧基、芳基和杂芳基的取代基所取代；
R6为H或烷基；
R7为烷基、芳基烷基或杂芳基烷基；
各Cyc独立地为环烷基、桥碳环基或螺碳环基；和
各hetCyc独立地为杂环基、桥杂环基或螺杂环基。
在一些实施方案中，G为H、D、C1-6烷基、3-12元hetCyc、3-12元Cyc、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基-C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、R5O(C＝O)NR6C1-6烷基、R5(C＝O)NR6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷基、R5(C＝O)C1-6烷基、NR5R6(C＝O)-、R5OC1-6烷基，其中所述的C1-6烷基、3-12元hetCyc、3-12元Cyc、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基-C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基，以及R5O(C＝O)NR6C1-6烷基、R5(C＝O)NR6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷基、R5(C＝O)C1-6烷基、R5O C1-6烷基中的C1-6烷基部分各独立任选地被1、2、3或4个选自氧代、F、Cl、Br、OH、C3-6环烷叉基、3-6元杂环叉基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基、R5(C＝O)-、R5O(C＝O)-的取代基所取代。
在一些实施方案中，G为H、D、C1-4烷基、3-10元hetCyc、3-10元Cyc、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、R5O(C＝O)NR6C1-4烷基、R5(C＝O)NR6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷基、R5(C＝O)C1-4烷基、NR5R6(C＝O)-、R5OC1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、3-10元hetCyc、3-10元Cyc、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基，以及R5O(C＝O)NR6C1-4烷基、R5(C＝O)NR6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷基、R5(C＝O)C1-4烷基、R5OC1-4烷基中的C1-4烷基部分各独立任选地被1、2、3或4个选自氧代、F、Cl、Br、OH、C3-6环烷叉基、3-6元杂环叉基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷基、R5(C＝O)-、R5O(C＝O)-的取代基所取代。
在一些实施方案中，G为H、D、C1-4烷基、3-6元hetCyc、3-6元Cyc、(3-6元hetCyc)-C1-4烷基、(3-6元Cyc)-C1-4烷基、(5-6元杂芳基)-C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、R5O(C＝O)NR6C1-4烷基、R5(C＝O)NR6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷基、R5(C＝O)C1-4烷基、NR5R6(C＝O)-或R5OC1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、3-6元hetCyc、3-6元Cyc、(3-6元hetCyc)-C1-4烷基、(3-6元Cyc)-C1-4烷基、(5-6元杂芳基)-C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基，以及R5O(C＝O)NR6C1-4烷基、R5(C＝O)NR6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷基、R5(C＝O)C1-4烷基、R5OC1-4烷基中的C1-4烷基部分各独立任选地被1、2、3或4个选自氧代、F、Cl、Br、OH、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基、吡咯烷叉基、吡唑烷叉基、四氢呋喃叉基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正丁基、异丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、正丙氧基甲基、异丙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、正丙氧基乙基、异丙氧基乙基、甲氧基丙基、乙氧基丙基、正丙氧基丙基、异丙氧基丙基、CH3(C＝O)-、CH3O(C＝O)-、CH3CH2O(C＝O)-和(CH3)3CO(C＝O)-的取代基所取代。
在一些实施方案中，A为3-12元Cyc或3-12元hetCyc，其中所述的3-12元Cyc和3-12元hetCyc各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、3-12元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-12元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，A为子结构式：
Figure BDA0002307183200000041
其中，Z1、Z2和Z4各独立地为CH或N；
各Z3、Z5独立地为一个键、CH2、O、S、NH、C＝O、S＝O或(S＝O)2；
m为0、1或2；
n、m1和n1各独立地为0或1；
A的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，A的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷氧基C1-4烷基、NR6R7C1-4烷氧基、NR6R7C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、3-10元hetCyc-C1-4烷氧基C1-4烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，A为子结构式：
Figure BDA0002307183200000042
Figure BDA0002307183200000051
其中，A的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-4烷基、NR6R7C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-4烷基、3-10元hetCyc-C1-4烷氧基C1-4烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，A的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、OH、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基、吡咯烷叉基或吡唑烷叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，M为-(C＝O)-、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷基-C6-10芳基、C1-6烷基-(5-10元杂芳基)、C2-6烯基-C6-10芳基、C2-6炔基-C6-10芳基、C2-6烯基-(5-10元杂芳基)、C2-6炔基-(5-10元杂芳基)、C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-12元hetCyc、3-12元Cyc、C6-10芳基-C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基或(3-12元Cyc)-C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷基-C6-10芳基、C1-6烷基-(5-10元杂芳基)、C2-6烯基-C6-10芳基、C2-6炔基-C6-10芳基、C2-6烯基-(5-10元杂芳基)、C2-6炔基-(5-10元杂芳基)、C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基-C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基和(3-12元Cyc)-C1-6烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、CF3、NR5R6、氧代、C1-6烷氧基、C3-6环烷叉基、3-6元杂环叉基、羟基C1-6烷基、C1-6烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基C2-6炔基和3-7元杂环基的取代基所取代。
在一些实施方案中，M为-(C＝O)-、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基-(5-10元杂芳基)、C2-4烯基苯基、C2-4炔基苯基、C2-4炔基-(5-10元杂芳基)、C2-4炔基-(5-10元杂芳基)、苯基、5-10元杂芳基、3-10元hetCyc、3-10元Cyc、苯基-C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基或(3-10元Cyc)-C1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基-(5-10元杂芳基)、C2-4烯基苯基、C2-4炔基苯基、C2-4炔基-(5-10元杂芳基)、C2-4炔基-(5-10元杂芳基)、苯基、5-10元杂芳基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基-C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基和(3-10元Cyc)-C1-4烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、CF3、NR5R6、氧代、C1-4烷氧基、C3-6环烷叉基、3-6元杂环叉基、羟基C1-4烷基、C1-4烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基C2-4炔基和3-6元杂环基的取代基所取代。
在一些实施方案中，M为-(C＝O)-、-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-CH＝CH2-、-CH2CH＝CH-、-CH2CH＝CHCH2-、-C≡C-、-CH2CH≡CH-、-CH2CH≡CHCH2-、-CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-CH2-苯基、-C≡C-苯基、-CH2C≡C-苯基、-CH2C≡C-CH2-苯基、-CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-CH2-吡啶基、-CH＝CH-吡唑基、-CH2CH＝CH-吡唑基、-CH＝CH-嘧啶基、-CH＝CH-吡嗪基、-CH＝CH-苯并咪唑基、-CH＝CH-苯并吡唑基、-C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-CH2-吡啶基、-C≡C-吡唑基、-CH2C≡C-吡唑基、-C≡C-嘧啶基、-C≡C-吡嗪基、-C≡C-苯并咪唑基、-C≡C-苯并吡唑基、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、-CH2-吡啶基、-CH2CH2-吡啶基、-CH2-苯基、-CH2CH2-苯基、-CH2-嘧啶基、-CH2-吡嗪基、-CH2-咪唑基、-CH2-吡唑基、苯基-CH2-、苯基-CH2CH2-、吡啶基-CH2-、吡啶基-CH2CH2-、嘧啶基-CH2-、吡嗪基-CH2-、咪唑基-CH2-或吡唑基-CH2-，其中所述的-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-CH＝CH2-、-CH2CH＝CH-、-CH2CH＝CHCH2-、-C≡C-、-CH2CH≡CH-、-CH2CH≡CHCH2-、-CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-CH2-苯基、-C≡C-苯基、-CH2C≡C-苯基、-CH2C≡C-CH2-苯基、-CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-CH2-吡啶基、-CH＝CH-吡唑基、-CH2CH＝CH-吡唑基、-CH＝CH-嘧啶基、-CH＝CH-吡嗪基、-CH＝CH-苯并咪唑基、-CH＝CH-苯并吡唑基、-C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-CH2-吡啶基、-C≡C-吡唑基、-CH2C≡C-吡唑基、-C≡C-嘧啶基、-C≡C-吡嗪基、-C≡C-苯并咪唑基、-C≡C-苯并吡唑基、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、-CH2-吡啶基、-CH2CH2-吡啶基、-CH2-苯基、-CH2CH2-苯基、-CH2-嘧啶基、-CH2-吡嗪基、-CH2-咪唑基、-CH2-吡唑基、苯基-CH2-、苯基-CH2CH2-、吡啶基-CH2-、吡啶基-CH2CH2-、嘧啶基-CH2-、吡嗪基-CH2-、咪唑基-CH2-和吡唑基-CH2-各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、CF3、NH2、氧代、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、环丙叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、氮杂环丁烷叉基、羟甲基、羟乙基、2-羟基-2-丙基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环丙基乙炔基、吡咯烷基和吗啉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R3为H、D、C1-6烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基、5-10元杂芳基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、(5-10元杂芳基)C1-6烷基或氨基C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基、5-10元杂芳基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、(5-10元杂芳基)C1-6烷基和氨基C1-6烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、NR5R6、R5O-、R5O(C＝O)-、R5(C＝O)-、NR5R6(C＝O)NR5-、R5(S＝O)2-、NO2、CN、CF3、C1-6烷基和C3-6环烷基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R3为H、D、C1-4烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基、5-10元杂芳基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、苯基C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基或氨基C1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基、5-10元杂芳基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、苯基C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基和氨基C1-4烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、NR5R6、R5O-、R5O(C＝O)-、R5(C＝O)-、NR5R6(C＝O)NR5-、R5(S＝O)2-、NO2、CN、CF3、C1-4烷基和C3-6环烷基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R3为H、D、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、三氟甲基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊基甲基、环丙基甲基、环丁基甲基、环己基甲基、螺[4.4]壬烷基甲基、双环[3.3.0]辛烷基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、哌啶基、吗啉基、氮杂环丁烷基甲基、哌啶基甲基、吗啉基甲基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、正丙氧基甲基、异丙氧基甲基、异丙氧基乙基、正丁氧基甲基、异丁氧基甲基、叔丁氧基甲基、叔丁氧基乙基、苯基、吡啶基、咪唑基、吡唑基、嘧啶基、3H-吲哚基、吲哚基、苯并咪唑基、3,8a-二氢吲哚嗪基、苯基甲基、3,8a-二氢吲哚嗪基甲基、吡啶基甲基、咪唑基甲基、吡唑基甲基、嘧啶基甲基、3H-吲哚基甲基、吲哚基甲基、苯并咪唑基甲基、NH2CH2-、NH(CH3)CH2-、N(CH3)2CH2-、NH2(CH2)2-、NH(CH3)CH2-、NH(CH3)(CH2)2-或N(CH3)2(CH2)2-，其中所述的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、三氟甲基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊基甲基、环丙基甲基、环丁基甲基、环己基甲基、螺[4.4]壬烷基甲基、双环[3.3.0]辛烷基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、哌啶基、吗啉基、氮杂环丁烷基甲基、哌啶基甲基、吗啉基甲基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、正丙氧基甲基、异丙氧基甲基、异丙氧基乙基、正丁氧基甲基、异丁氧基甲基、叔丁氧基甲基、叔丁氧基乙基、苯基、吡啶基、咪唑基、吡唑基、嘧啶基、3H-吲哚基、吲哚基、苯并咪唑基、3,8a-二氢吲哚嗪基、苯基甲基、3,8a-二氢吲哚嗪基甲基、吡啶基甲基、咪唑基甲基、吡唑基甲基、嘧啶基甲基、3H-吲哚基甲基、吲哚基甲基、苯并咪唑基甲基、NH2CH2-、NH(CH3)CH2-、N(CH3)2CH2-、NH2(CH2)2-、NH(CH3)CH2-、NH(CH3)(CH2)2-和N(CH3)2(CH2)2-各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NH2、NO2、CN、CF3、C(CH3)3O(C＝O)-、CH3(C＝O)-、NH2(C＝O)NH-、NHCH3(C＝O)NH-、CH3(S＝O)2-、甲基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、苯氧基、吡啶基氧基、环丙基、环丁基、环戊基和环己基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R1为H、D、CN、F、Cl、Br、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、乙烯基、环戊基或环己基，其中所述的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、乙烯基、环丙基、环丁基、环戊基和环己基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、CN、NH2、OH和NO2的取代基所取代；和
R4为H、D、F、Cl、Br、CN、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，其中所述的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基和叔丁氧基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、CN、NH2、OH和NO2的取代基所取代。
在一些实施方案中，R5为H、D、C1-6烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C6-10芳基C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C6-10芳氧基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基或(3-12元hetCyc)-C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C6-10芳基C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C6-10芳氧基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基和(3-12元hetCyc)-C1-6烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NR6R7、C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷氧基、C6-10芳基和5-10元杂芳基的取代基所取代；
R6为H、D或C1-6烷基；和
R7为H、D、C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基或(5-10元杂芳基)C1-6烷基。
在一些实施方案中，R5为H、D、C1-4烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基、5-10元杂芳基、苯基C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、苯氧基C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基或hetCyc-C1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基、5-10元杂芳基、苯基C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、苯氧基C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基和hetCyc-C1-4烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NR6R7、C1-6烷基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷氧基、苯基和5-10元杂芳基的取代基所取代；
R6为H、D或C1-4烷基；和
R7为H、D、C1-4烷基、苯基C1-4烷基或(5-10元杂芳基)C1-4烷基。
在一些实施方案中，R5为H、D、NH2CH2-、NH2(CH2)2-、NH(CH3)CH2-、NH(CH3)(CH2)2-、N(CH3)2CH2-、NH(CH3)2(CH2)2-、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙基甲基、环丙基乙基、环丁基乙基、环丁基甲基、环戊基甲基、环戊基乙基、环己基甲基、环己基乙基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、苯基甲基、苯基乙基、苯基正丙基、吡啶基甲基、吡啶基乙基、吡啶基正丙基、苯氧基甲基、苯氧基乙基、苯氧基正丙基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基或四氢吡喃基，其中所述的NH2CH2-、NH2(CH2)2-、NH(CH3)CH2-、NH(CH3)(CH2)2-、N(CH3)2CH2-、NH(CH3)2(CH2)2-、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙基甲基、环丙基乙基、环丁基乙基、环丁基甲基、环戊基甲基、环戊基乙基、环己基甲基、环己基乙基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、苯基甲基、苯基乙基、苯基正丙基、吡啶基甲基、吡啶基乙基、吡啶基正丙基、苯氧基甲基、苯氧基乙基、苯氧基正丙基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基和四氢吡喃基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NH2、NH(CH3)、CH3(S＝O)2-、CH3CH2(S＝O)2-、CH(CH3)2(S＝O)2-、C(CH3)3(S＝O)2-、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、苯基、吡啶基、吡唑基和嘧啶基的取代基所取代；
R6为H、D、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；和
R7为H、D、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、苯基甲基、苯基乙基、苯基正丙基、咪唑基甲基、吡唑基甲基、吡啶基甲基、吡啶基乙基、嘧啶基甲基或嘧啶基乙基。
在一些实施方案中，本发明所述的化合物具有式(I-1)的结构，或式(I-1)结构的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002307183200000091
其中，各R1、G、X1、X2、X3、X4、X5、E、Q、M和R3具有如本发明所述的定义；
Z1和Z2各独立地为CH或N；
各Z3、Z5独立地为一个键、CH2、O、S、NH、C＝O、S＝O或(S＝O)2；
m为0、1或2；
Figure BDA0002307183200000092
可任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，
Figure BDA0002307183200000093
为子结构式：
Figure BDA0002307183200000094
Figure BDA0002307183200000095
Figure BDA0002307183200000096
其中，
Figure BDA0002307183200000097
的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基或吡唑烷叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，本发明所述的化合物具有式(I-2)的结构，或式(I-2)结构的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002307183200000101
其中，各R1、G、X1、X2、X3、X4、X5、E、Q、M和R3具有如本发明所述的定义；
A1为以下子结构式：
Figure BDA0002307183200000102
Figure BDA0002307183200000103
Z1和Z2各独立地为CH或N；
且A1的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，
A1为子结构式：
Figure BDA0002307183200000104
其中A1的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基和吡唑烷叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，本发明所述的化合物具有式(I-3)或(I-4)的结构，或式(I-3)或(I-4)结构的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002307183200000111
其中，各R1、G、X1、X2、X3、X4、X5、E、Q、M和R3具有如本发明所述的定义；
Z1、Z2和Z4各独立地为CH或N；
m为0、1或2；
n、m1和n1各独立地为0或1；
Figure BDA0002307183200000112
各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，
Figure BDA0002307183200000113
为子结构式：
Figure BDA0002307183200000114
Figure BDA0002307183200000121
Figure BDA0002307183200000122
其中
Figure BDA0002307183200000123
的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基和吡唑烷叉基的取代基所取代；
Figure BDA0002307183200000124
为子结构式：
Figure BDA0002307183200000125
Figure BDA0002307183200000126
Figure BDA0002307183200000127
其中
Figure BDA0002307183200000128
的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基和吡唑烷叉基的取代基所取代。
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，包含本发明所述的化合物，和药学上可接受的辅剂。
另一方面，本发明还提供了本发明所述的化合物或本发明所述的药物组合物在制备用于预防或治疗RET相关疾病的药物中的用途。
在一些实施方案中，RET相关疾病包括癌症、肠易激综合征和/或与肠易激综合征相关的疼痛。
另一方面，本发明还提供了本发明所述的化合物或本发明所述的药物组合物用于预防或治疗RET相关疾病。
在一些实施方案中，RET相关疾病包括癌症、肠易激综合征和/或与肠易激综合征相关的疼痛。
另一方面，本发明还提供了预防或治疗RET相关疾病的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的本发明所述的化合物或其药物组合物。
在一些实施方案中，RET相关疾病包括癌症、肠易激综合征和/或与肠易激综合征相关的疼痛。
另一方面，本发明涉及制备式(I)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)结构所示化合物的中间体。
另一方面，本发明涉及式(I)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所示的化合物的制备、分离和纯化的方法。
另一方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明化合物及其药学上可接受的辅剂。在一些实施方案中，本发明所述的辅剂包括但不限于，载体，赋形剂，稀释剂，溶媒，或它们的组合。在一些实施方案中，药物组合物可以是液体，固体，半固体，凝胶或喷雾剂型。
除非其他方面表明，本发明的化合物所有的立体异构体，几何异构体，互变异构体，氮氧化物，水合物，溶剂化物，代谢产物，盐和药学上可接受的前药都属于本发明的范围。
具体地说，盐是药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的”包括物质或组合物必须是适合化学或毒理学，与组成制剂的其他组分和用于治疗的哺乳动物有关。
本发明的化合物的盐还包括用于制备或纯化式(I)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所示化合物的中间体或式(I)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所示化合物分离的对映异构体的盐，但不一定是药学上可接受的盐。
本发明的详细说明书
定义和一般术语
现在详细描述本发明的某些实施方案，其实例由随附的结构式和化学式说明。本发明意图涵盖所有的替代、修改和等同技术方案，它们均包括在如权利要求定义的本发明范围内。本领域技术人员应认识到，许多与本文所述类似或等同的方法和材料能够用于实践本发明。本发明绝不限于本文所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料的一篇或多篇与本申请不同或相矛盾的情况下(包括但不限于所定义的术语、术语应用、所描述的技术，等等)，以本申请为准。
应进一步认识到，本发明的某些特征，为清楚可见，在多个独立的实施方案中进行了描述，但也可以在单个实施例中以组合形式提供。反之，本发明的各种特征，为简洁起见，在单个实施方案中进行了描述，但也可以单独或以任意适合的子组合提供。
除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。
现在详细描述本发明的某些实施方案，其实例由随附的结构式和化学式说明。本发明意图涵盖所有的替
本发明所使用的术语“受试对象”是指动物。典型地所述动物是哺乳动物。受试对象，例如也指灵长类动物(例如人类，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、犬、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，所述受试对象是灵长类动物。在其他实施方案中，所述受试对象是人。
本发明所使用的术语“患者”是指人(包括成人和儿童)或者其他动物。在一些实施方案中，“患者”是指人。
术语“包含”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体，等等。
本发明所使用的立体化学定义和规则一般遵循S.P.Parker，Ed.，McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company，New York；andEliel，E.and Wilen，S.，“Stereochemistry of Organic Compounds”，John Wiley&Sons，Inc.，New York，1994。
所得的任何立体异构体的混合物可以依据组分物理化学性质上的差异被分离成纯的或基本纯的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，例如，通过色谱法和/或分步结晶法。
术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指具有不同能量的可通过低能垒(lowenergy barrier)互相转化的结构异构体。若互变异构是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(protontautomer)(也称为质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体(valence tautomer)包括通过一些成键电子的重组来进行的互相转化。酮-烯醇互变异构的具体实例是戊烷-2,4-二酮和4-羟基戊-3-烯-2-酮互变异构体的互变。互变异构的另一个实例是酚-酮互变异构。酚-酮互变异构的一个具体实例是吡啶-4-醇和吡啶-4(1H)-酮互变异构体的互变。除非另外指出，本发明化合物的所有互变异构体形式都在本发明的范围之内。
除非其他方面表明，本发明所描述的结构式包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构，和几何异构(或构象异构))：例如含有不对称中心的R、S构型，双键的(Z)、(E)异构体，和(Z)、(E)的构象异构体。因此，本发明的化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体，非对映异构体，或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。
除非其他方面表明，本发明所描述的结构式和所述的化合物包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构，几何异构或构象异构)、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐和前药。因此，本发明的化合物的单个立体化学异构体、对映异构体、非对映异构体、几何异构体、构象异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐和前药的化合物也属于本发明的范围。另外，除非其他方面表明，本发明所描述的化合物的结构式包括一个或多个不同的原子的富集同位素。
像本发明所描述的，本发明的化合物可以独立任选地被一个或多个取代基所取代，如上面的通式化合物，或者像实施例里面特殊的例子，子类，和本发明所包含的一类化合物。应了解“独立任选地被……取代”这个术语与“取代或非取代”这个术语可以交换使用。一般而言，术语“取代”表示所给结构中的一个或多个氢原子被具体取代基所取代。除非其他方面表明，一个任选的取代基团可以在基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不只一个位置能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。
另外，需要说明的是，除非以其他方式明确指出，在本发明中所采用的描述方式“各…独立地为”与“…各自独立地为”和“…独立地为”可以互换，均应做广义理解，其既可以是指在不同基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。
在本说明书的各部分，本发明公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本发明包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。例如，术语“C1-6烷基”特别指独立公开的甲基、乙基、C3烷基、C4烷基、C5烷基和C6烷基。
在本发明的各部分，描述了连接取代基。当该结构清楚地需要连接基团时，针对该基团所列举的马库什变量应理解为连接基团。例如，如果该结构需要连接基团并且针对该变量的马库什基团定义列举了“烷基”或“芳基”，则应该理解，该“烷基”或“芳基”分别代表连接的亚烷基基团或亚芳基基团。
术语“烷基”表示含有1至20个碳原子，饱和的直链或支链一价烃基基团，其中，所述烷基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。除非另外详细说明，烷基基团含有1-20个碳原子。在一实施方案中，烷基基团含有1-12个碳原子；在另一实施方案中，烷基基团含有1-6个碳原子；在又一实施方案中，烷基基团含有1-4个碳原子；还在一实施方案中，烷基基团含有1-3个碳原子。烷基基团的实例包含，但并不限于，甲基(Me、-CH3)，乙基(Et、-CH2CH3)，正丙基(n-Pr、-CH2CH2CH3)，异丙基(i-Pr、-CH(CH3)2)，正丁基(n-Bu、-CH2CH2CH2CH3)，异丁基(i-Bu、-CH2CH(CH3)2)，仲丁基(s-Bu、-CH(CH3)CH2CH3)，叔丁基(t-Bu、-C(CH3)3)，正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH3)，2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)，3-戊基(-CH(CH2CH3)2)，2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)，3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)，3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)，2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)，正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)，2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)，3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))，2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)，3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)，4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)，3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)，2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)，2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)，3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)，正庚基，正辛基，等等。
当烷基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了“烷基”，则“烷基”表示连接的亚烷基基团。如本发明定义中M为烷基时，则表示M为连接的亚烷基基团。术语“亚烷基”表示从饱和的直链或支链烃基中去掉两个氢原子所得到的饱和的二价烃基基团。烷基表示为连接的亚烷基基团的实例包括但不限于：-CH2-、-CH2CH2-、-CH(CH3)CH2-，等等。
术语“烯基”表示含有2-12个碳原子的直链或支链一价烃基，其中至少有一个不饱和位点，即有一个碳-碳sp2双键，其中，所述烯基基团可以任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代，其包括“cis”和“tans”的定位，或者“E”和“Z”的定位。在一实施方案中，烯基基团包含2-10个碳原子；在一实施方案中，烯基基团包含2-6个碳原子；在又一实施方案中，烯基基团包含2-4个碳原子。烯基基团的实例包括，但并不限于，乙烯基(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)、丙烯基(-C＝CHCH3)、异丙烯基(-C(CH3)＝CH2)等等。
当烯基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了“烯基”，则“烯基”表示连接的亚烯基基团。如本发明定义中M为烯基时，则表示M为连接的亚烯基基团。烯基表示为连接的亚烯基基团的实例包括但不限于：-CH＝CH2-、-CH2CH＝CH-、-CH2CH＝CHCH2-，等等。
术语“炔基”表示含有2-12个碳原子的直链或支链一价烃基，其中至少有一个不饱和位点，即有一个碳-碳sp三键，其中，所述炔基基团可以任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。在一实施方案中，炔基基团包含2-6个碳原子；在又一实施方案中，炔基基团包含2-10个碳原子；炔基基团包含2-4个碳原子。炔基基团的实例包括，但并不限于，乙炔基(-C≡CH)、炔丙基(-CH2C≡CH)、1-丙炔基(-C≡C-CH3)等等。当炔基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了“炔基”，则“炔基”表示连接的亚炔基基团。炔基表示为连接的亚炔基基团的实例包括但不限于：-C≡C-、-CH2CH≡CH-、-CH2CH≡CHCH2-，等等。
术语“环烷叉基”表示从3-7元饱和的单环碳环中的同一个碳原子上去除两个氢原子形成的二价的饱和的单环碳体系。在一些实施方案中，环烷叉基表示C3-6环烷叉基；在另一些实施方案中，环烷叉基表示C3-5环烷叉基。环烷叉基的实例包括但不限于，环丙叉基、环戊叉基、环丁叉基、环己叉基，等。
术语“杂环叉基”表示从3-7元饱和的单环杂环中的同一个碳原子上去除两个氢原子形成的二价的饱和的单环杂环体系，其中该体系中至少包含1个碳原子，包含1个、2个或3个选自O、N、S的杂原子。在一些实施方案中，杂环叉基表示3-6元杂环叉基；在另一些实施方案中，杂环叉基表示3-5元杂环叉基。杂环叉基的实例包括但不限于，环氧乙烷叉基、氮杂环丙烷叉基、氧杂环丁烷叉基、氧杂环戊烷叉基、氮杂环丁烷叉基，等。
术语“羟基烷基”表示被一个或多个羟基取代的烷基。在一些实施方案中，羟基烷基表示被1、2、3或4个羟基取代的烷基。在一些实施方案中，羟基烷基表示被1或2个羟基取代的烷基。在一些实施方案中，羟基烷基表示羟基C1-6烷基，即C1-6烷基被1个或多个羟基取代的烷基，优选的，羟基C1-6烷基表示，即C1-6烷基被1个羟基取代的烷基。在一些实施方案中，羟基烷基表示羟基C1-4烷基。在一些实施方案中，羟基烷基表示羟基C1-3烷基。羟基烷基的实例包括但不限于，CH2OH-、CH2OHCH2CH2CH2-、CH2OHCH2-、CH2OHCH2CHOHCH2-、CH(CH3)OHCH2CHOHCH2-，等。
术语“烷氧基”表示烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中烷基基团具有如本发明所述的含义。除非另外详细说明，所述烷氧基基团含有1-12个碳原子。在一实施方案中，烷氧基基团含有1-6个碳原子；在另一实施方案中，烷氧基基团含有1-4个碳原子；在又一实施方案中，烷氧基基团含有1-3个碳原子。所述烷氧基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。烷氧基基团的实例包括，但并不限于，甲氧基(MeO、-OCH3)，乙氧基(EtO、-OCH2CH3)，1-丙氧基(n-PrO、n-丙氧基、-OCH2CH2CH3)，2-丙氧基(i-PrO、i-丙氧基、-OCH(CH3)2)，1-丁氧基(n-BuO、n-丁氧基、-OCH2CH2CH2CH3)，2-甲基-l-丙氧基(i-BuO、i-丁氧基、-OCH2CH(CH3)2)，2-丁氧基(s-BuO、s-丁氧基、-OCH(CH3)CH2CH3)，2-甲基-2-丙氧基(t-BuO、t-丁氧基、-OC(CH3)3)，1-戊氧基(n-戊氧基、-OCH2CH2CH2CH2CH3)，2-戊氧基(-OCH(CH3)CH2CH2CH3)，3-戊氧基(-OCH(CH2CH3)2)，2-甲基-2-丁氧基(-OC(CH3)2CH2CH3)，3-甲基-2-丁氧基(-OCH(CH3)CH(CH3)2)，3-甲基-l-丁氧基(-OCH2CH2CH(CH3)2)，2-甲基-l-丁氧基(-OCH2CH(CH3)CH2CH3)，等等。
术语“烷氧基烷基”表示被一个烷氧基取代的烷基，其中，烷氧基和烷基具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，烷氧基烷基表示C1-6烷氧基C1-6烷基；在另一些实施方案中，烷氧基烷基表示C1-4烷氧基C1-4烷基；在另一些实施方案中，烷氧基烷基表示C1-4烷氧基C1-3烷基；在一些实施方案中，烷氧基烷基表示C1-3烷氧基C1-3烷基。烷氧基的实例包括但不限于，甲氧基甲基、乙氧基甲基、丙氧基甲基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、乙氧基乙基、乙氧基丙基、丙氧基乙基、丙氧基丙基，等。
术语“卤素”表示F(氟)、Cl(氯)、Br(溴)或I(碘)。
术语“卤代烷基”表示烷基基团被一个或多个卤素原子所取代，这样的实例包含，但并不限于，单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、单氟乙基、1,2-二氟乙基、1,1-二氟乙基、2,2-二氟乙基、单氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、单氯乙基、1,2-二氯乙基、1,1-二氯乙基、2,2-二氯乙基、1,1-二溴乙基，等等。
术语“环烷基”或“环烷烃”可交换使用，都表示3-7个碳原子的单价的饱和单环碳环体系。碳环中-CH2-基团可以任选地被-C(O)-替代。在一实施方案中，环烷基包含3-6个碳原子，即C3-6环烷基；在另一实施方案中，环烷基包含3-5个碳原子,即C3-5环烷基。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基，等。碳环中-CH2-基团可被-C(O)-替代的实例包括但不限于：环戊酮、环丁酮，等。当环烷基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了“环烷基”，则“环烷基”表示连接的亚环烷基基团。术语“亚环烷基”表示环烷基的环碳原子上去掉两个氢原子后形成的二价环烷烃基团。所述环烷基基团或环烷烃可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“芳环”或“芳烃”表示含有6-14个环原子，或6-12个环原子，或6-10个环原子的单环、双环和三环的碳环体系，其中，至少一个环体系是芳香族的，其中每一个环体系包含3-7个原子组成的环。芳环的实例可以包括苯、萘和蒽。
术语“芳基”表示芳环的环碳原子上去掉一个氢原子后形成的一价芳环基团。芳基基团的实例可以包括苯基、萘基和蒽。当芳基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了“芳基”，则“芳基”表示连接的亚芳基基团。如本发明定义中M为芳基时，则表示M为连接的亚芳基基团。术语“亚芳基”表示芳环的环碳原子上去掉两个氢原子后形成的二价芳环基团。芳基表示为连接的亚芳基基团的实例可以包括亚苯基、亚萘基和亚蒽基。所述芳基基团可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“杂芳环”表示含有5-12个环原子，或5-10个环原子，或5-6个环原子的单环、双环和三环体系，其中至少一个环体系是芳香族的，且至少一个环体系包含一个或多个杂原子，其中每一个环体系包含5-7个原子组成的环。
术语“杂芳基”表示杂芳环的环原子上去掉一个氢原子后形成的一价芳环基团。所述杂芳基基团任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。在一实施方案中，5-10个原子组成的杂芳基或5-10元杂芳基包含1，2，3或4个独立选自O，S和N的杂原子。在一些实施方案中，术语“杂芳基”表示含有5个环原子的杂芳环基或5元杂芳基，其中包含1，2，3或4个独立选自O，S和N的杂原子。杂芳基基团的实例包括，但并不限于，2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、N-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、哒嗪基(如3-哒嗪基)、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、四唑基(如5-四唑基)、***基(如2-***基和5-***基)、2-噻吩基、3-噻吩基、吡唑基(如2-吡唑基)、异噻唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,3-***基、1,2,3-硫代二唑基、1,3,4-硫代二唑基、1,2,5-硫代二唑基、吡嗪基、1,3,5-三嗪基；也包括以下的双环，但绝不限于这些双环：苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基(如2-吲哚基)、嘌呤基、喹啉基(如2-喹啉基，3-喹啉基，4-喹啉基)、异喹啉基(如1-异喹啉基、3-异喹啉基或4-异喹啉基)、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、[1,2,4]***并[4,3-b]哒嗪基、[1,2,4]***并[1,5-a]嘧啶基、[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶基，等等。当杂芳基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了杂芳基，则杂芳基表示连接的亚杂芳基。如本发明定义中M为杂芳基时，则表示M为连接的亚杂芳基基团。术语“亚杂芳基”表示杂芳基的环原子上去掉两个氢原子后形成的二价杂芳环基团。所述杂芳基可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“芳氧基”表示芳基-O-,即芳基通过氧原子与分子其余部分相连，其中芳基基团具有如本发明所述的定义。芳氧基的实例包括但不限于，苯氧基、萘氧基，等。
术语“芳氧基烷基”表示芳氧基取代的烷基，其中芳氧基和烷基基团具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，芳氧基烷基表示C6-10芳氧基C1-6烷基；在另一些实施方案中，芳氧基烷基表示苯氧基C1-6烷基；在另一些实施方案中，芳氧基烷基表示苯氧基C1-4烷基。芳氧基烷基的具体实例包括但不限于苯氧基甲基、苯氧基乙基、苯氧基正丙基、苯氧基异丙基、苯氧基正丁基、苯氧基异丁基、苯氧基叔丁基，等。
术语“芳基烷基”表示芳基取代的烷基，其中芳基和烷基基团具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，芳基烷基表示C6-10芳基C1-6烷基；在另一些实施方案中，芳基烷基表示苯基C1-6烷基；在另一些实施方案中，芳基烷基表示苯基C1-4烷基。芳基烷基的具体实例包括但不限于苯基甲基、苯基乙基、苯基正丙基、苯基异丙基、苯基正丁基、苯基异丁基、苯基叔丁基，等。
术语“杂芳基烷基”表示杂芳基取代的烷基，其中杂芳基和烷基基团具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，杂芳基烷基表示(5-10元杂芳基)-C1-6烷基；在另一些实施方案中，杂芳基烷基表示(5-10元杂芳基)-C1-4烷基；在另一些实施方案中，杂芳基烷基表示(5-6元杂芳基)-C1-4烷基。杂芳基烷基的实例包括但不限于，咪唑基甲基、咪唑基乙基、吡唑基甲基、吡唑基乙基、恶唑基甲基、恶唑基乙基、咪唑基丙基、吡啶基丙基、吡啶基甲基、吡啶基乙基、嘧啶基甲基，呋喃基甲基、呋喃基乙基、吲哚基甲基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基甲基等。
术语“桥碳环”和“桥碳环基”可以互换使用，都表示共用两个或两个以上碳原子的非芳香性的饱和或部分不饱和的双环或多环体系，且环原子为碳原子。桥碳环中-CH2-基团可以任选地被-C(O)-替代。在一些实施方案中，桥碳环含有6-12个环碳原子，即表示6-12元桥碳环；在另外一些实施方案中，桥碳环含有6-10个环碳原子，即表示6-10元桥碳环。桥碳环的实例包括但不限于：二环[3.1.1]庚烷、二环[3.2.1]辛烷、二环[2.2.2]辛烷、二环[2.2.0]己烷、八氢-1H-茚，等。当桥碳环或桥碳环基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了桥碳环或桥碳环基，则桥碳环或桥碳环基表示连接的亚桥碳环基。术语“亚桥碳环基”表示桥碳环的环原子上去掉两个氢原子后形成的二价桥碳环基团。所述桥碳环或桥碳环基可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“螺碳环”和“螺碳环基”可以互换使用，都表示两个碳环共有一个碳原子形成的非芳香性的饱和或部分不饱和环体系。螺碳环中-CH2-基团可以任选地被-C(O)-替代。在一些实施方案中，螺碳环含有7-12个环碳原子，即表示7-12元螺碳环；在另外一些实施方案中，螺碳环含有7-10个环碳原子，即表示7-10元螺碳环。螺碳环的实例包括但不限于：螺[4.4]壬烷、螺[3.4]辛烷、螺[4.5]癸烷，等。当螺碳环或螺碳环基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了螺碳环或螺碳环基，则螺碳环或螺碳环基表示连接的亚螺碳环基。术语“亚螺碳环基”表示螺碳环的环原子上去掉两个氢原子后形成的二价螺碳环基团。所述螺碳环或螺碳环基可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“杂环”或“杂环基”可以互换使用，都表示有3-12个环原子的单价的非芳香性的饱和或部分不饱和单环体系，且该体系中至少包含1个碳原子，包含1个、2个或3个选自O、N、S的杂原子。除非另外说明，杂环基可以是碳基或氮基，且-CH2-基团可以任选地被-C(O)-替代。环的硫原子可以任选地被氧化成S-氧化物，环的氮原子可以任选地被氧化成N-氧化合物。在一些实施方案中，杂环含有4-7个环原子，即表示4-7元杂环；在另外一些实施方案中，杂环含有4-7个环原子，即表示4-7元杂环。杂环的实例包括但不限于：环氧乙烷基、氮杂环丁基，氧杂环丁基，硫杂环丁基，吡咯烷基，2-吡咯啉基，3-吡咯啉基，吡唑啉基，吡唑烷基，咪唑啉基，咪唑烷基，四氢呋喃基，二氢呋喃基，四氢噻吩基，二氢噻吩基，1,3-二氧环戊基，二硫环戊基，四氢吡喃基，二氢吡喃基，2H-吡喃基，4H-吡喃基，四氢噻喃基，哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基，哌嗪基，二噁烷基，二噻烷基，噻噁烷基，高哌嗪基，高哌啶基、1,1-二氧代-1,3-硫代吗啉，等。杂环基中-CH2-基团被-C(O)-取代的实例包括，但不限于，2-氧代吡咯烷基、氧代-1,3-噻唑烷基、2-哌啶酮基、3,5-二氧代哌啶基。杂环基中氮原子被氧化成N-氧化合物的实例包括但不限于1,1-二氧代-1,3-硫代吗啉。当杂环或杂环基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了杂环或杂环基，则杂环或杂环基表示连接的亚杂环基。术语“亚杂环基”表示杂环的环原子上去掉两个氢原子后形成的二价杂环基团。所述杂环或杂环基可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“桥杂环”或“桥杂环基”可以互换使用，都表示共用两个或两个以上碳原子的非芳香性的饱和或部分不饱和的双环或多环体系，且该体系中至少包含1个碳原子，包含1个、2个或3个选自O、N、S的杂原子。桥杂环中-CH2-基团可以任选地被-C(O)-替代。环的硫原子可以任选地被氧化成S-氧化物，环的氮原子可以任选地被氧化成N-氧化合物。在一些实施方案中，桥杂环含有6-12个环原子，即表示6-12元桥杂环；在另外一些实施方案中，桥杂环含有6-10个环原子，即表示6-10元桥杂环。桥杂环的实例包括但不限于：3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷、2-氮杂双环[2.2.1]庚烷、八氢咪唑并[1,5-c]嘧啶、6-氮杂双环[3.1.1]庚烷、3-氮杂双环[3.1.1]庚烷、8-氮杂双环[3.2.1]辛烷、3-氮杂双环[3.2.1]辛烷、2-二氮杂双环[2.2.2]辛烷、，等。当桥杂环或桥杂环基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了桥杂环或桥杂环基，则桥杂环或桥杂环基表示连接的亚桥杂环基。术语“亚桥杂环基”表示桥杂环的环原子上去掉两个氢原子后形成的二价桥杂环基团。所述桥杂环或桥杂环基可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“螺杂环”或“螺杂环基”可以互换使用，都表示两个环共有一个碳原子形成的非芳香性的饱和或部分不饱和环体系，且该体系中包含1个、2个或3个选自O、N、S的杂原子。螺杂环中-CH2-基团可以任选地被-C(O)-替代。环的硫原子可以任选地被氧化成S-氧化物，环的氮原子可以任选地被氧化成N-氧化合物。在一些实施方案中，螺杂环含有7-12个环原子，即表示7-12元螺杂环；在另外一些实施方案中，螺杂环含有7-10个环原子，即表示7-10元螺杂环。螺杂环的实例包括但不限于：4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷、2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷、2,7-二氮杂螺[4.5]癸烷、2,7-二氮杂螺[3.5]癸烷、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷、2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷、3-氮杂螺[5.5]十一烷、2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-1-酮，等。当螺杂环或螺杂环基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了螺杂环或螺杂环基，则螺杂环或螺杂环基表示连接的亚螺杂环基。术语“亚螺杂环基”表示螺杂环的环原子上去掉两个氢原子后形成的二价螺杂环基团。所述螺杂环或螺杂环基可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“烷基芳基”表示被烷基取代的芳基，其中烷基和芳基具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，“烷基芳基”表示C1-6烷基-C6-10芳基，即被C1-6烷基取代的C6-10芳基；在另一些实施方案中，“烷基芳基”表示C1-4烷基苯基，即被C1-4烷基取代的苯基。烷基芳基的实例包括但不限于，甲基苯基、乙基苯基、丙基苯基、甲基萘基，等。当烷基芳基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了烷基芳基，则烷基芳基表示连接的亚烷基芳基。如本发明定义中M为烷基芳基时，则表示M为连接的亚烷基芳基基团。术语“亚烷基芳基”表示烷基芳基基团的烷基上去掉一个氢原子和芳基的环原子上去掉一个氢原子后形成的二价烷基芳基基团。所述烷基芳基基团可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“烯基芳基”表示被烯基取代的芳基，其中烯基和芳基具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，“烯基芳基”表示C2-6烯基-C6-10芳基，即被C2-6烯基取代的C6-10芳基；在另一些实施方案中，“烯基芳基”表示C2-4烯基苯基，即被C2-4烯基取代的苯基。烯基芳基的实例包括但不限于，CH2＝CH-苯基、CH3CH＝CH-苯基、CH3CH＝CH-CH2-苯基，等。当烯基芳基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了烯基芳基，则烯基芳基表示连接的亚烯基芳基。如本发明定义中M为烯基芳基时，则表示M为连接的亚烯基芳基基团。所述亚烯基芳基基团的例子包括但不限于：-CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-CH2-苯基，等所述亚烯基芳基基团可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“炔基芳基”表示被炔基取代的芳基，其中炔基和芳基具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，“炔基芳基”表示C2-6炔基-C6-10芳基，即被C2-6炔基取代的C6-10芳基；在另一些实施方案中，“炔基芳基”表示C2-4炔基苯基，即被C2-4炔基取代的苯基。炔基芳基的实例包括但不限于，CH≡C-苯基、CH3C≡C-苯基、CH3C≡C-CH2-苯基，等。当炔基芳基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了炔基芳基，则炔基芳基表示连接的亚炔基芳基。如本发明定义中M为炔基芳基时，则表示M为连接的亚炔基芳基基团。所述亚炔基芳基基团的例子包括但不限于：-C≡C-苯基、CH3C≡C-苯基、CH3C≡C-CH2-苯基，等。所述炔基芳基基团可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“烷基杂芳基”表示被烷基取代的杂芳基。其中烷基和杂芳基具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，“烷基杂芳基”表示C1-6烷基-(5-10元杂芳基)，即被C1-6烷基取代的5-10元杂芳基；在另一些实施方案中，“烷基杂芳基”表示C1-4烷基-(5-6元杂芳基)，即被C1-4烷基取代的5-6元杂芳基。烷基杂芳基的实例包括但不限于，甲基吡啶基、乙基吡啶基、丙基吡啶基、甲基吡唑基、乙基吡唑基、丙基吡唑基、甲基嘧啶基、甲基吡嗪基、甲基苯并咪唑基、甲基苯并吡唑基，等。当烷基杂芳基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了烷基杂芳基，则烷基杂芳基表示连接的亚烷基杂芳基。如本发明定义中M为烷基杂芳基时，则表示M为连接的亚烷基杂芳基基团。术语“亚烷基杂芳基”表示烷基杂芳基基团的烷基上去掉一个氢原子和杂芳基的环原子上去掉一个氢原子后形成的二价烷基杂芳基基团。所述烷基杂芳基基团可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“烯基杂芳基”表示被烯基取代的杂芳基。其中烯基和杂芳基具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，“烯基杂芳基”表示C2-6烯基-(5-10元杂芳基)，即被C2-6烯基取代的5-10元杂芳基；在另一些实施方案中，“烯基杂芳基”表示C2-4烯基-(5-6元杂芳基)，即被C2-4烯基取代的5-6元杂芳基。烯基杂芳基的实例包括但不限于，CH2＝CH-吡啶基、CH3CH＝CH-吡啶基、CH3CH＝CH-CH2-吡啶基、CH2＝CH-吡唑基、CH3CH＝CH-吡唑基、CH2＝CH-嘧啶基、CH2＝CH-吡嗪基、CH2＝CH-苯并咪唑基、CH2＝CH-苯并吡唑基，等。当烯基杂芳基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了烯基杂芳基，则烯基杂芳基表示连接的亚烯基杂芳基。如本发明定义中M为烯基杂芳基时，则表示M为连接的亚烯基杂芳基基团。所述亚烯基芳基基团的例子包括但不限于：-CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-CH2-吡啶基、-CH＝CH-吡唑基、-CH2CH＝CH-吡唑基、-CH＝CH-嘧啶基、-CH＝CH-吡嗪基、-CH＝CH-苯并咪唑基、-CH＝CH-苯并吡唑基，等。所述烯基杂芳基基团可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“炔基杂芳基”表示被炔基取代的杂芳基。其中炔基和杂芳基具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，“炔基杂芳基”表示C2-6炔基-(5-10元杂芳基)，即被C2-6炔基取代的5-10元杂芳基；在另一些实施方案中，“炔基杂芳基”表示C2-4炔基-(5-6元杂芳基)，即被C2-4炔基取代的5-6元杂芳基。炔基杂芳基的实例包括但不限于，CH≡C-吡啶基、CH3C≡C-吡啶基、CH3C≡C-CH2-吡啶基、CH≡C-吡唑基、CH3C≡C-吡唑基、CH≡C-嘧啶基、CH≡C-吡嗪基、CH≡C-苯并咪唑基、CH≡C-苯并吡唑基，等。当炔基杂芳基为连接基团时，且针对该马库什基团定义列举了炔基杂芳基，则炔基杂芳基表示连接的亚炔基杂芳基。如本发明定义中M为炔基杂芳基时，则表示M为连接的亚炔基杂芳基基团。所述亚炔基芳基基团的例子包括但不限于：-C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-CH2-吡啶基、-C≡C-吡唑基、-CH2C≡C-吡唑基、-C≡C-嘧啶基、-C≡C-吡嗪基、-C≡C-苯并咪唑基、-C≡C-苯并吡唑基，等。所述炔基杂芳基基团可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“氨基烷基”表示被一个或多个氨基取代的烷基。在一些实施方案中，术语“氨基烷基”表示被一个氨基取代的烷基。在一些实施方案中，术语“氨基烷基”表示氨基C1-6烷基。在另一些实施方案中，术语“氨基烷基”表示氨基C1-4烷基。在另一些实施方案中，术语“氨基烷基”表示氨基C1-3烷基。氨基烷基的实例包括但不限于，氨基甲基、氨基乙基、氨基正丙基、氨基异丙基、氨基异丁基、氨基叔丁基、1,2-二氨基乙基，等。
术语“烷基氨基”表示被一个烷基取代的氨基。在一些实施方案中，术语“烷基氨基”表示C1-6烷基氨基。在另一些实施方案中，术语“烷基氨基”表示C1-4烷基氨基。在另一些实施方案中，术语“烷基氨基”表示C1-3烷基氨基。烷基氨基的实例包括但不限于，甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、异丙基氨基、异丁基氨基、叔丁基氨基，等。
术语“二烷基氨基”表示被两个烷基取代的氨基。在一些实施方案中，术语“二烷基氨基”表示二(C1-6烷基)氨基，即被两个C1-6烷基取代的氨基。在另一些实施方案中，术语“二烷基氨基”表示二(C1-4烷基)氨基，即被两个C1-4烷基取代的氨基。在另一些实施方案中，术语“二烷基氨基”表示二(C1-3烷基)氨基，即被两个C1-3烷基取代的氨基。二烷基氨基的实例包括但不限于，二甲基氨基、二乙基氨基、二正丙基氨基、二异丙基氨基、二异丁基氨基、二叔丁基氨基，等。
术语“烷基氨基烷基”表示被一个烷基氨基取代的烷基，其中烷基和烷基氨基具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，术语“烷基氨基烷基”表示C1-6烷基氨基-C1-6烷基，即被C1-6烷基氨基取代的C1-6烷基；在另一些实施方案中，术语“烷基氨基烷基”表示C1-4烷基氨基-C1-4烷基，即被C1-4烷基氨基取代的C1-4烷基。烷基氨基烷基的实例包括但不限于，甲基氨基甲基、乙基氨基乙基、甲基氨基乙基、乙基氨基甲基、丙基氨基甲基、甲基氨基丙基、甲基氨基正丁基、丙基氨基乙基，等。
术语“二烷基氨基烷基”表示被一个二烷基氨基取代的烷基，其中二烷基氨基和烷基具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，术语“二烷基氨基烷基”表示二(C1-6烷基)氨基-C1-6烷基；在另一些实施方案中，“二烷基氨基烷基”表示二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基。
术语“烷基磺酰基”表示烷基-S(＝O)2-，即烷基通过-S(＝O)2-与分子其余部分相连。在一些实施方案中，烷基磺酰基表示C1-6烷基磺酰基；在另一些实施方案中，烷基磺酰基表示C1-4烷基磺酰基；在另一些实施方案中，烷基磺酰基表示C1-4烷基磺酰基。烷基磺酰基的实例包括但不限于，甲基甲磺酰基、乙基甲磺酰基、正丙基甲磺酰基、异丙基甲磺酰基、正丁基甲磺酰基，等。
术语“Cyc”表示环烷基、桥碳环基或螺碳环基，其中环烷基、桥碳环基和螺碳环基具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，Cyc表示3-12元Cyc；在另一些实施方案中，Cyc表示3-10元Cyc。
术语“hetCyc”表示杂环基、桥杂环基或螺杂环基，其中杂环基、桥杂环基和螺杂环基具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，hetCyc表示3-12元hetCyc；在另一些实施方案中，Cyc表示3-10元hetCyc。
术语“R5O(C＝O)NR6烷基”表示烷基上的氢原子被R5O(C＝O)NR6-取代，其中，烷基、R5O(C＝O)NR6-具有如本发明所述的定义。术语“R5(C＝O)NR6烷基”表示烷基上的氢原子被R5(C＝O)NR6-取代，其中，烷基、R5(C＝O)NR6-具有如本发明所述的定义。
术语“NR5R6(C＝O)烷基”表示烷基上的氢原子被NR5R6(C＝O)-取代，其中，烷基、NR5R6(C＝O)-具有如本发明所述的定义。术语“R5(C＝O)烷基”表示烷基上的氢原子被R5(C＝O)-取代，其中，烷基、R5(C＝O)-具有如本发明所述的定义。术语“NR5R6烷基”表示烷基上的氢原子被NR6R7-取代，其中烷基和NR6R7-具有如本发明所述的定义。术语“NR6R7烷氧基”表示烷氧基上的氢原子被NR6R7-取代，其中烷氧基和NR6R7-具有如本发明所述的定义。术语“NR6R7烷氧基烷基”表示被NR6R7烷氧基取代的烷基，其中，NR6R7烷氧基和烷基具有如本发明所述的定义。术语“NR5R6(C＝O)烷氧基”表示被NR5R6(C＝O)-取代的烷氧基，其中NR5R6(C＝O)-和烷氧基具有如本发明所述的定义。术语“NR5R6(C＝O)烷氧基烷基”表示被NR5R6(C＝O)烷氧基取代的烷基，其中，NR5R6(C＝O)烷氧基和烷基具有如本发明所述的定义。术语“R5O烷基”表示烷基上的氢原子被R5O-取代，其中，烷基、R5O-具有如本发明所述的定义。
术语“Cyc-烷基”表示烷基上的氢原子被Cyc取代。其中烷基、Cyc具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，Cyc-烷基表示(3-12元Cyc)-C1-6烷基；在另一些实施方案中，Cyc-烷基表示(3-10元Cyc)-C1-4烷基；在另一些实施方案中，Cyc-烷基表示(3-10元Cyc)-C1-3烷基。Cyc-烷基的实例包括但不限于，环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环戊基乙基、环戊基正丙基、环丙基乙基、环丙基正丙基、环丁基乙基、环丁基丙基、环己基乙基、环己基甲基，等。
术语“hetCyc-烷基”表示烷基上的氢原子被hetCyc取代，其中烷基和hetCyc具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，“hetCyc-烷基”表示(3-12元hetCyc)-C1-6烷基；在另一些实施方案中，hetCyc-烷基表示(3-10元hetCyc)-C1-4烷基；在另一些实施方案中，hetCyc-烷基表示(3-10元hetCyc)-C1-3烷基。hetCyc-烷基的实例包括但不限于，氮杂环丁基甲基、吡咯烷基甲基、吗啉基甲基、吗啉基乙基、哌嗪基甲基、哌嗪基乙基、2-氧代吡咯烷基甲基、2-氧代吡咯烷基乙基、氧杂环丁烷基甲基、四氢呋喃基甲基，等。
术语“烷基hetCyc”表示被烷基取代的hetCyc，其中烷基、hetCyc具有如本发明所述的定义。在一些实施方案中，“烷基hetCyc”表示C1-6烷基-(3-12元hetCyc)；在另一些实施方案中，“烷基hetCyc”表示C1-4烷基-(3-10元hetCyc)；在另一些实施方案中，“烷基hetCyc”表示C1-3烷基-(3-10元hetCyc)。烷基hetCyc的实例包括但不限于，异丙基氮杂环丁烷基、甲基哌啶基、甲基氧杂环丁烷基、甲基吡咯烷基、甲基吗啉基、甲基咪唑烷基，等。
本发明化合物通式中，Q的左端连接A，Q的右端连接M，例如，当Q为-(S＝O)2NR5-时，则
Figure BDA0002307183200000221
表示
Figure BDA0002307183200000222
同样，A的左端连接E，A的右端连接Q，例如，当A为
Figure BDA0002307183200000223
时，则
Figure BDA0002307183200000224
表示
Figure BDA0002307183200000225
M的左端连接Q，M的右端连接
Figure BDA0002307183200000226
例如，当M为-CH2-苯基时，
Figure BDA0002307183200000227
表示
Figure BDA0002307183200000231
苯基
Figure BDA0002307183200000232
如本发明所描述的，除非另外详细说明，环取代基可以通过环上的任何可连接的位置与分子其余部分相连。例如，哌啶基包含哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和哌啶-4-基。
术语“保护基团”或“PG”是指一个取代基与其他官能团起反应的时候，通常用来阻断或保护特殊的功能性。例如，“氨基的保护基团”是指一个取代基与氨基基团相连来阻断或保护化合物中氨基的功能性，合适的氨基保护基团包括乙酰基，三氟乙酰基，叔丁氧羰基(BOC,Boc)，苄氧羰基(CBZ,Cbz)和9-芴亚甲氧羰基(Fmoc)。相似地，“羟基保护基团”是指羟基的取代基用来阻断或保护羟基的功能性，合适的保护基团包括乙酰基和甲硅烷基。“羧基保护基团”是指羧基的取代基用来阻断或保护羧基的功能性，一般的羧基保护基包括-CH2CH2SO2Ph，氰基乙基，2-(三甲基硅烷基)乙基，2-(三甲基硅烷基)乙氧基甲基，2-(对甲苯磺酰基)乙基，2-(对硝基苯磺酰基)乙基，2-(二苯基膦基)乙基，硝基乙基，等等。对于保护基团一般的描述可参考文献：T W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991；and P.J.Kocienski,Protecting Groups,Thieme,Stuttgart,2005.
本发明所使用的术语“前药”，代表一个化合物在体内转化为式(I)所示的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。本发明前体药物类化合物可以是酯，在现有的发明中酯可以作为前体药物的有苯酯类，脂肪族(C1-24)酯类，酰氧基甲基酯类，碳酸酯，氨基甲酸酯类和氨基酸酯类。例如本发明里的一个化合物包含羟基，即可以将其酰化得到前体药物形式的化合物。其他的前体药物形式包括磷酸酯，如这些磷酸酯类化合物是经母体上的羟基磷酸化得到的。关于前体药物完整的讨论可以参考以下文献：T.Higuchi and V.Stella,Pro-drugs as Novel DeliverySystems,Vol.14 of the A.C.S.Symposium Series,Edward B.Roche,ed.,BioreversibleCarriers in Drug Design,American Pharmaceutical Association and PergamonPress,1987,J.Rautio et al.,Prodrugs:Design and Clinical Applications,NatureReview Drug Discovery,2008,7,255-270,and S.J.Hecker et al.,Prodrugs ofPhosphates and Phosphonates,Journal of Medicinal Chemistry,2008,51,2328-2345。
“代谢产物”是指具体的化合物或其盐在体内通过代谢作用所得到的产物。一个化合物的代谢产物可以通过所属领域公知的技术来进行鉴定，其活性可以通过如本发明所描述的那样采用试验的方法进行表征。这样的产物可以是通过给药化合物经过氧化，还原，水解，酰氨化，脱酰氨作用，酯化，脱脂作用，酶裂解等等方法得到。相应地，本发明包括化合物的代谢产物，包括将本发明的化合物与哺乳动物充分接触一段时间所产生的代谢产物。
本发明所使用的“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的有机盐和无机盐。药学上可接受的盐在所属领域是为我们所熟知的，如文献：S.M.Berge et al.,describepharmaceutically acceptable salts in detail in J.Pharmaceutical Sciences,1977,66:1-19.所记载的。药学上可接受的无毒的酸形成的盐包括，但并不限于，与氨基基团反应形成的无机酸盐有盐酸盐，氢溴酸盐，磷酸盐，硫酸盐，高氯酸盐，和有机酸盐如乙酸盐，草酸盐，马来酸盐，酒石酸盐，柠檬酸盐，琥珀酸盐，丙二酸盐，或通过书籍文献上所记载的其他方法如离子交换法来得到这些盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐，藻酸盐，抗坏血酸盐，天冬氨酸盐，苯磺酸盐，苯甲酸盐，重硫酸盐，硼酸盐，丁酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊基丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，甲酸盐，反丁烯二酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，葡萄糖酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，氢碘酸盐，2-羟基-乙磺酸盐，乳糖醛酸盐，乳酸盐，月桂酸盐，月桂基硫酸盐，苹果酸盐，丙二酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，油酸盐，棕榈酸盐，扑酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，苦味酸盐，特戊酸盐，丙酸盐，硬脂酸盐，硫氰酸盐，对甲苯磺酸盐，十一酸盐，戊酸盐，等等。通过适当的碱得到的盐包括碱金属，碱土金属，铵和N+(C1-4烷基)4的盐。本发明也拟构思了任何所包含N的基团的化合物所形成的季铵盐。水溶性或油溶性或分散产物可以通过季铵化作用得到。碱金属或碱土金属盐包括钠，锂，钾，钙，镁，等等。药学上可接受的盐进一步包括适当的、无毒的铵，季铵盐和抗平衡离子形成的胺阳离子，如卤化物，氢氧化物，羧化物，硫酸化物，磷酸化物，硝酸化物，C1-8磺酸化物和芳香磺酸化物。
本发明的可药用盐可以用常规化学方法由母体化合物、碱性或酸性部分来合成。一般而言，该类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适宜碱(如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计量量的适宜酸反应来进行制备。该类反应通常在水或有机溶剂或二者的混合物中进行。一般地，在适当的情况中，需要使用非水性介质如***、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。在例如“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，第20版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，(1985)；和“药用盐手册：性质、选择和应用(Handbook of PharmaceuticalSalts：Properties，Selection，and Use)”，Stahl and Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)中可找到另外一些适宜盐的列表。
另外，本发明公开的化合物、包括它们的盐，也可以以它们的水合物形式或包含其溶剂(例如乙醇、DMSO，等等)的形式得到，用于它们的结晶。本发明公开化合物可以与药学上可接受的溶剂(包括水)固有地或通过设计形成溶剂化物；因此，本发明旨在包括溶剂化的和未溶剂化的形式。
本发明的“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明的化合物所形成的缔合物。形成溶剂化物的溶剂包括，但并不限于，水，异丙醇，乙醇，甲醇，二甲亚砜，乙酸乙酯，乙酸和氨基乙醇。术语“水合物”是指溶剂分子是水所形成的缔合物。
本发明的“氮氧化物”是指当化合物含几个胺官能团时，可将1个或大于1个的氮原子氧化形成N-氧化物。N-氧化物的特殊实例是叔胺的N-氧化物或含氮杂环氮原子的N-氧化物。可用氧化剂例如过氧化氢或过酸(例如过氧羧酸)处理相应的胺形成N-氧化物(参见Advanced Organic Chemistry,Wiley Interscience,第4版,Jerry March,pages)。尤其是，N-氧化物可用L.W.Deady的方法制备(Syn.Comm.1977,7,509-514)，其中例如在惰性溶剂例如二氯甲烷中，使胺化合物与间-氯过氧苯甲酸(MCPBA)反应。
如本发明所使用的术语“治疗”任何疾病或病症，在其中一些实施方案中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一些实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数。在另一些实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。在另一些实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作、发生或恶化。
本文使用的术语“RET相关癌症”是指与RET基因、RET激酶(在本文中也称为RET激酶蛋白或RET激酶)或其中任何一者的表达或活性或水平相关或具有失调的癌症。本文描述了RET相关癌症的非限制性示例。所述RET基因、RET激酶或者其中任何一者的表达或活性或水平的失调是RET基因中的一个或多个点突变。
短语“RET基因、RET激酶或其中任何一者的表达或活性或水平失调”是指基因突变(例如导致融合蛋白表达的RET基因易位，导致与野生型RET蛋白相比包含至少一个氨基酸缺失的RET蛋白表达的RET基因中的缺失，或导致具有一个或多个点突变的RET蛋白表达的RET基因中的突变，或导致与野生型RET蛋白相比RET蛋白中的至少一个氨基酸缺失的RET蛋白的RET mRNA的可变剪接形式)，或RET基因扩增，所述基因扩增导致RET蛋白过表达或由细胞RET基因过表达导致的自分泌活性，导致细胞中RET蛋白的激酶结构域的活性的致病性增加(例如，RET蛋白的激酶结构域的组成性激活)。作为另一个示例，RET基因、RET激酶或其中任何一者的表达或活性或水平失调可以是编码RET蛋白的RET基因中的突变，所述RET蛋白与不包含该突变的RET基因编码的蛋白质相比，具有组成型活性或具有增加的活性。例如，RET基因、RET激酶或其中任何一者的表达或活性或水平失调可以是基因或染色体易位的结果，其导致融合蛋白的表达，所述融合蛋白包含第一包含功能性激酶结构域的RET部分和伴侣蛋白的第二部分(即不是RET)。在一些示例中，RET基因、RET蛋白或表达或活性的失调可以是一个RET基因与另一个RET基因的基因翻译的结果。
RET激酶、RET基因或其中任何(例如一种或多种)的表达或活性或水平的失调可能有助于肿瘤发生。例如，RET激酶、RET基因失调或者其中任何一者的表达或活性或水平的失调可以是RET激酶、RET基因或RET激酶结构域的易位、过表达、激活、扩增或突变。易位可以包括涉及RET激酶结构域的易位，突变可以包括涉及RET配体结合位点的突变，并且扩增可以是RET基因。其他失调可包括RET mRNA剪接变体和RET自分泌/旁分泌信号传导，这也可能有助于肿瘤发生。
在一些实施方式中，RET基因、RET激酶或其中任何一者的表达或活性或水平的失调包括RET激酶中的一个或多个缺失(例如4位氨基酸的缺失)、***或点突变。在一些实施方式中，RET基因、RET激酶或其中任何一者的表达或活性或水平的失调包括RET激酶的一个或多个残基的缺失，导致RET激酶结构域的组成型活性。
术语“肠易激综合征”包括腹泻主导型、便秘主导型或交替排便模式、功能性胃气胀、功能性便秘、功能性腹泻、非特异性功能性肠病、功能性腹痛综合征、慢性特发性便秘、功能性食管病、功能性胃十二指肠病、功能性***直肠疼痛、炎性肠病，等。
本发明给出的任何结构式也意欲表示这些化合物未被同位素富集的形式以及同位素富集的形式。同位素富集的化合物具有本发明给出的通式描绘的结构，除了一个或多个原子被具有所选择原子量或质量数的原子替换。可引入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，如2H，3H，11C，13C，14C，15N，17O，18O，18F，31P，32P，35S，36Cl和125I。
另一方面，本发明所述化合物包括同位素富集的本发明所定义的化合物，例如，其中存在放射性同位素，如3H，14C和18F的那些化合物，或者其中存在非放射性同位素，如2H和13C。该类同位素富集的化合物可用于代谢研究(使用14C)、反应动力学研究(使用例如2H或3H)、检测或成像技术，如正电子发射断层扫描术(PET)或包括药物或底物组织分布测定的单光子发射计算机断层成像术(SPECT)，或可用于患者的放疗中。18F富集的化合物对PET或SPECT研究而言是特别理想的。同位素富集的式(I)所示化合物可以通过本领域技术人员熟悉的常规技术或本发明中的实施例和制备过程所描述使用合适的同位素标记试剂替代原来使用过的未标记试剂来制备。
此外，较重同位素特别是氘(即，2H或D)的取代可提供某些治疗优点，这些优点是由代谢稳定性更高带来的。例如，体内半衰期增加或剂量需求降低或治疗指数得到改善带来的。应当理解，本发明中的氘被看做式(I)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)化合物的取代基。可以用同位素富集因子来定义该类较重同位素特别是氘的浓度。本发明所使用的术语“同位素富集因子”是指所指定同位素的同位素丰度和天然丰度之间的比例。如果本发明化合物的取代基被指定为氘，该化合物对各指定的氘原子而言具有至少3500(各指定氘原子处52.5％的氘掺入)、至少4000(60％的氘掺入)、至少4500(67.5％的氘掺入)，至少5000(75％的氘掺入)，至少5500(82.5％的氘掺入)、至少6000(90％的氘掺入)、至少6333.3(95％的氘掺入)、至少6466.7(97％的氘掺入)、至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)的同位素富集因子。本发明可药用的溶剂化物包括其中结晶溶剂可以是同位素取代的例如D2O、丙酮-d6、DMSO-d6的那些溶剂化物。
本发明化合物的描述
本发明提供了一种呈现转染期重排(RET)激酶抑制的新化合物，该化合物对RET野生型和RET基因突变体具有良好的抑制作用，且对RET野生型和RET基因突变体具有较好的抑制选择性。
一方面，本发明提供了一种式(I)所示的化合物，或式(I)所示化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002307183200000261
其中，各R1、G、X1、X2、X3、X4、X5、E、A、Q、M和R3具有如本发明所述的定义。
在一些实施方案中，X1、X2、X3、X4和X5各独立地为CR4或N，其中X1、X2、X3和X4中的0、1或2个为N。
在一些实施方案中，E为一个键、-NR6-或-O-。
在一些实施方案中，A为Cyc或hetCyc，其中所述的Cyc和hetCyc各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6烷基、NR5R6(C＝O)烷氧基烷基、NR6R7烷氧基、NR6R7烷氧基烷基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、Cyc、hetCyc、hetCyc-烷基、烷氧基烷基、hetCyc-烷氧基烷基、环烷叉基和杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，Q为-(C＝O)-、-O-、-(C＝O)NR5-、-(C＝S)NR5-、-(S＝O)2-、-(S＝O)2NR5-、-NR5(C＝O)-、-NR5(C＝O)O-、-NR5(C＝O)NR5-、-NR5-、-(C＝O)O-或一个键。
在一些实施方案中，M为-(C＝O)-、烷基、烯基、炔基、烷基芳基、烷基杂芳基、烯基芳基、炔基芳基、烯基杂芳基、炔基杂芳基、芳基、杂芳基、Cyc、hetCyc、芳基烷基、杂芳基烷基、Cyc-烷基或hetCyc-烷基，其中所述的烷基、烯基、炔基、烷基芳基、烷基杂芳基、烯基芳基、炔基芳基、烯基杂芳基、炔基杂芳基、芳基、杂芳基、Cyc、hetCyc、芳基烷基、杂芳基烷基、Cyc-烷基和hetCyc-烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、CF3、NR5R6、氧代、烷氧基、环烷叉基、杂环叉基、羟基烷基、烷基、环烷基、环烷基炔基和杂环基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R1为H、D、CN、F、Cl、Br、烷基、烯基或环烷基，其中所述的烷基、烯基和环烷基可独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、CN、NH2、OH和NO2的取代基所取代。
在一些实施方案中，G为H、D、烷基、hetCyc、Cyc、hetCyc-烷基、Cyc-烷基、杂芳基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基烷基、R5O(C＝O)NR6烷基、R5(C＝O)NR6烷基、NR5R6(C＝O)烷基、R5(C＝O)烷基、NR5R6(C＝O)-或R5O烷基，其中所述的烷基、hetCyc、Cyc、hetCyc-烷基、Cyc-烷基、杂芳基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基烷基，以及R5O(C＝O)NR6烷基、R5(C＝O)NR6烷基、R5(C＝O)烷基、NR5R6(C＝O)烷基和R5O烷基中的烷基部分各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、氧代、环烷叉基、杂环叉基、烷基、烷氧基、烷氧基烷基、R5(C＝O)-、R5O(C＝O)-的取代基所取代。
在一些实施方案中，R3为H、D、烷基、Cyc、hetCyc、芳基、杂芳基、Cyc-烷基、hetCyc-烷基、烷氧基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基或氨基烷基，其中所述的烷基、Cyc、hetCyc、芳基、杂芳基、Cyc-烷基、hetCyc-烷基、烷氧基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基和氨基烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、NR5R6、R5O-、R5O(C＝O)-、R5(C＝O)-、NR5R6(C＝O)NR5-、R5(S＝O)2-、NO2、CN、CF3、烷基和环烷基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R4为H、D、烷基、F、Cl、Br或烷氧基,其中所述的烷基和烷氧基可独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、CN、NH2、OH和NO2的取代基所取代。
在一些实施方案中，R5为H、D、烷基、Cyc、hetCyc、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、Cyc-烷基或hetCyc-烷基，其中所述的烷基、Cyc、hetCyc、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、Cyc-烷基和hetCyc-烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NR6R7、烷基、烷基磺酰基、烷氧基、芳基和杂芳基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R6为H或烷基。
在一些实施方案中，R7为烷基、芳基烷基或杂芳基烷基。
在一些实施方案中，各Cyc独立地为环烷基、桥碳环基或螺碳环基。
在一些实施方案中，各hetCyc独立地为杂环基、桥杂环基或螺杂环基。
在一些实施方案中，G为H、D、C1-6烷基、3-12元hetCyc、3-12元Cyc、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基-C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、R5O(C＝O)NR6C1-6烷基、R5(C＝O)NR6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷基、R5(C＝O)C1-6烷基、NR5R6(C＝O)-、R5OC1-6烷基，其中所述的C1-6烷基、3-12元hetCyc、3-12元Cyc、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基-C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基，以及R5O(C＝O)NR6C1-6烷基、R5(C＝O)NR6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷基、R5(C＝O)C1-6烷基、R5O C1-6烷基中的C1-6烷基部分各独立任选地被1、2、3或4个选自氧代、F、Cl、Br、OH、C3-6环烷叉基、3-6元杂环叉基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基、R5(C＝O)-、R5O(C＝O)-的取代基所取代。
在一些实施方案中，G为H、D、C1-4烷基、3-10元hetCyc、3-10元Cyc、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、R5O(C＝O)NR6C1-4烷基、R5(C＝O)NR6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷基、R5(C＝O)C1-4烷基、NR5R6(C＝O)-、R5OC1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、3-10元hetCyc、3-10元Cyc、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基，以及R5O(C＝O)NR6C1-4烷基、R5(C＝O)NR6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷基、R5(C＝O)C1-4烷基、R5OC1-4烷基中的C1-4烷基部分各独立任选地被1、2、3或4个选自氧代、F、Cl、Br、OH、C3-6环烷叉基、3-6元杂环叉基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷基、R5(C＝O)-、R5O(C＝O)-的取代基所取代。
在一些实施方案中，G为H、D、C1-4烷基、3-6元hetCyc、3-6元Cyc、(3-6元hetCyc)-C1-4烷基、(3-6元Cyc)-C1-4烷基、(5-6元杂芳基)-C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、R5O(C＝O)NR6C1-4烷基、R5(C＝O)NR6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷基、R5(C＝O)C1-4烷基、NR5R6(C＝O)-或R5OC1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、3-6元hetCyc、3-6元Cyc、(3-6元hetCyc)-C1-4烷基、(3-6元Cyc)-C1-4烷基、(5-6元杂芳基)-C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基，以及R5O(C＝O)NR6C1-4烷基、R5(C＝O)NR6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷基、R5(C＝O)C1-4烷基、R5OC1-4烷基中的C1-4烷基部分各独立任选地被1、2、3或4个选自氧代、F、Cl、Br、OH、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基、吡咯烷叉基、吡唑烷叉基、四氢呋喃叉基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正丁基、异丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、正丙氧基甲基、异丙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、正丙氧基乙基、异丙氧基乙基、甲氧基丙基、乙氧基丙基、正丙氧基丙基、异丙氧基丙基、CH3(C＝O)-、CH3O(C＝O)-、CH3CH2O(C＝O)-和(CH3)3CO(C＝O)-的取代基所取代。
在一些实施方案中，A为3-12元Cyc或3-12元hetCyc，其中所述的3-12元Cyc和3-12元hetCyc各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、3-12元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-12元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，A为子结构式：
Figure BDA0002307183200000281
其中，Z1、Z2和Z4各独立地为CH或N；
各Z3、Z5独立地为一个键、CH2、O、S、NH、C＝O、S＝O或(S＝O)2；
m为0、1或2；
n、m1和n1各独立地为0或1；
A的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，A的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷氧基C1-4烷基、NR6R7C1-4烷氧基、NR6R7C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、3-10元hetCyc-C1-4烷氧基C1-4烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，A为子结构式：
Figure BDA0002307183200000291
Figure BDA0002307183200000301
其中，A的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-4烷基、NR6R7C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-4烷基、3-10元hetCyc-C1-4烷氧基C1-4烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，A的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、OH、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基、吡咯烷叉基或吡唑烷叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，M为-(C＝O)-、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷基-C6-10芳基、C1-6烷基-(5-10元杂芳基)、C2-6烯基-C6-10芳基、C2-6炔基-C6-10芳基、C2-6烯基-(5-10元杂芳基)、C2-6炔基-(5-10元杂芳基)、C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-12元hetCyc、3-12元Cyc、C6-10芳基-C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基或(3-12元Cyc)-C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷基-C6-10芳基、C1-6烷基-(5-10元杂芳基)、C2-6烯基-C6-10芳基、C2-6炔基-C6-10芳基、C2-6烯基-(5-10元杂芳基)、C2-6炔基-(5-10元杂芳基)、C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基-C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基和(3-12元Cyc)-C1-6烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、CF3、NR5R6、氧代、C1-6烷氧基、C3-6环烷叉基、3-6元杂环叉基、羟基C1-6烷基、C1-6烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基C2-6炔基和3-7元杂环基的取代基所取代。
在一些实施方案中，M为-(C＝O)-、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基-(5-10元杂芳基)、C2-4烯基苯基、C2-4炔基苯基、C2-4烯基-(5-10元杂芳基)、C2-4炔基-(5-10元杂芳基)、苯基、5-10元杂芳基、3-10元hetCyc、3-10元Cyc、苯基-C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基或(3-10元Cyc)-C1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基-(5-10元杂芳基)、C2-4烯基苯基、C2-4炔基苯基、C2-4烯基-(5-10元杂芳基)、C2-4炔基-(5-10元杂芳基)、苯基、5-10元杂芳基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基-C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基和(3-10元Cyc)-C1-4烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、CF3、NR5R6、氧代、C1-4烷氧基、C3-6环烷叉基、3-6元杂环叉基、羟基C1-4烷基、C1-4烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基C2-4炔基和3-6元杂环基的取代基所取代。
在一些实施方案中，M为-(C＝O)-、-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-CH＝CH2-、-CH2CH＝CH-、-CH2CH＝CHCH2-、-C≡C-、-CH2CH≡CH-、-CH2CH≡CHCH2-、-CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-CH2-苯基、-C≡C-苯基、-CH2C≡C-苯基、-CH2C≡C-CH2-苯基、-CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-CH2-吡啶基、-CH＝CH-吡唑基、-CH2CH＝CH-吡唑基、-CH＝CH-嘧啶基、-CH＝CH-吡嗪基、-CH＝CH-苯并咪唑基、-CH＝CH-苯并吡唑基、-C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-CH2-吡啶基、-C≡C-吡唑基、-CH2C≡C-吡唑基、-C≡C-嘧啶基、-C≡C-吡嗪基、-C≡C-苯并咪唑基、-C≡C-苯并吡唑基、苯基、嘧啶基、吡啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、-CH2-吡啶基、-CH2CH2-吡啶基、-CH2-苯基、-CH2CH2-苯基、-CH2-嘧啶基、-CH2-吡嗪基、-CH2-咪唑基、-CH2-吡唑基、苯基-CH2-、苯基-CH2CH2-、吡啶基-CH2-、吡啶基-CH2CH2-、嘧啶基-CH2-、吡嗪基-CH2-、咪唑基-CH2-或吡唑基-CH2-，其中所述的-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-CH＝CH2-、-CH2CH＝CH-、-CH2CH＝CHCH2-、-C≡C-、-CH2CH≡CH-、-CH2CH≡CHCH2-、-CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-CH2-苯基、-C≡C-苯基、-CH2C≡C-苯基、-CH2C≡C-CH2-苯基、-CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-CH2-吡啶基、-CH＝CH-吡唑基、-CH2CH＝CH-吡唑基、-CH＝CH-嘧啶基、-CH＝CH-吡嗪基、-CH＝CH-苯并咪唑基、-CH＝CH-苯并吡唑基、-C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-CH2-吡啶基、-C≡C-吡唑基、-CH2C≡C-吡唑基、-C≡C-嘧啶基、-C≡C-吡嗪基、-C≡C-苯并咪唑基、-C≡C-苯并吡唑基、苯基、嘧啶基、吡啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、-CH2-吡啶基、-CH2CH2-吡啶基、-CH2-苯基、-CH2CH2-苯基、-CH2-嘧啶基、-CH2-吡嗪基、-CH2-咪唑基、-CH2-吡唑基、苯基-CH2-、苯基-CH2CH2-、吡啶基-CH2-、吡啶基-CH2CH2-、嘧啶基-CH2-、吡嗪基-CH2-、咪唑基-CH2-和吡唑基-CH2-各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、CF3、NH2、氧代、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、环丙叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、氮杂环丁烷叉基、羟甲基、羟乙基、2-羟基-2-丙基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环丙基乙炔基、吡咯烷基和吗啉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R3为H、D、C1-6烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基、5-10元杂芳基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、(5-10元杂芳基)C1-6烷基或氨基C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基、5-10元杂芳基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、(5-10元杂芳基)C1-6烷基和氨基C1-6烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、NR5R6、R5O-、R5O(C＝O)-、R5(C＝O)-、NR5R6(C＝O)NR5-、R5(S＝O)2-、NO2、CN、CF3、C1-6烷基和C3-6环烷基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R3为H、D、C1-4烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基、5-10元杂芳基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、苯基C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基或氨基C1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基、5-10元杂芳基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、苯基C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基和氨基C1-4烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、NR5R6、R5O-、R5O(C＝O)-、R5(C＝O)-、NR5R6(C＝O)NR5-、R5(S＝O)2-、NO2、CN、CF3、C1-4烷基和C3-6环烷基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R3为H、D、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、三氟甲基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊基甲基、环丙基甲基、环丁基甲基、环己基甲基、螺[4.4]壬烷基甲基、双环[3.3.0]辛烷基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、哌啶基、吗啉基、氮杂环丁烷基甲基、哌啶基甲基、吗啉基甲基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、正丙氧基甲基、异丙氧基甲基、异丙氧基乙基、正丁氧基甲基、异丁氧基甲基、叔丁氧基甲基、叔丁氧基乙基、苯基、吡啶基、咪唑基、吡唑基、嘧啶基、3H-吲哚基、吲哚基、苯并咪唑基、3,8a-二氢吲哚嗪基、苯基甲基、3,8a-二氢吲哚嗪基甲基、吡啶基甲基、咪唑基甲基、吡唑基甲基、嘧啶基甲基、3H-吲哚基甲基、吲哚基甲基、苯并咪唑基甲基、NH2CH2-、NH(CH3)CH2-、N(CH3)2CH2-、NH2(CH2)2-、NH(CH3)CH2-、NH(CH3)(CH2)2-或N(CH3)2(CH2)2-，其中所述的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、三氟甲基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊基甲基、环丙基甲基、环丁基甲基、环己基甲基、螺[4.4]壬烷基甲基、双环[3.3.0]辛烷基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、哌啶基、吗啉基、氮杂环丁烷基甲基、哌啶基甲基、吗啉基甲基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、正丙氧基甲基、异丙氧基甲基、异丙氧基乙基、正丁氧基甲基、异丁氧基甲基、叔丁氧基甲基、叔丁氧基乙基、苯基、吡啶基、咪唑基、吡唑基、嘧啶基、3H-吲哚基、吲哚基、苯并咪唑基、3,8a-二氢吲哚嗪基、苯基甲基、3,8a-二氢吲哚嗪基甲基、吡啶基甲基、咪唑基甲基、吡唑基甲基、嘧啶基甲基、3H-吲哚基甲基、吲哚基甲基、苯并咪唑基甲基、NH2CH2-、NH(CH3)CH2-、N(CH3)2CH2-、NH2(CH2)2-、NH(CH3)CH2-、NH(CH3)(CH2)2-和N(CH3)2(CH2)2-各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NH2、NO2、CN、CF3、C(CH3)3O(C＝O)-、CH3(C＝O)-、NH2(C＝O)NH-、NHCH3(C＝O)NH-、CH3(S＝O)2-、甲基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、苯氧基、吡啶基氧基、环丙基、环丁基、环戊基和环己基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R1为H、D、CN、F、Cl、Br、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、乙烯基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基，其中所述的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、乙烯基、环丙基、环丁基、环戊基和环己基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、CN、NH2、OH和NO2的取代基所取代。
在一些实施方案中，R4为H、D、F、Cl、Br、CN、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，其中所述的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基和叔丁氧基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、CN、NH2、OH和NO2的取代基所取代。
在一些实施方案中，R5为H、D、C1-6烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C6-10芳基C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C6-10芳氧基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基或(3-12元hetCyc)-C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C6-10芳基C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C6-10芳氧基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基和(3-12元hetCyc)-C1-6烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NR6R7、C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷氧基、C6-10芳基和5-10元杂芳基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R6为H、D或C1-6烷基。
在一些实施方案中，R7为H、D、C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基或(5-10元杂芳基)C1-6烷基。
在一些实施方案中，R5为H、D、C1-4烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基、5-10元杂芳基、苯基C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、苯氧基C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基或hetCyc-C1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基、5-10元杂芳基、苯基C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、苯氧基C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基和hetCyc-C1-4烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NR6R7、C1-6烷基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷氧基、苯基和5-10元杂芳基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R6为H、D或C1-4烷基。
在一些实施方案中，R7为H、D、C1-4烷基、苯基C1-4烷基或(5-10元杂芳基)C1-4烷基。
在一些实施方案中，R5为H、D、NH2CH2-、NH2(CH2)2-、NH(CH3)CH2-、NH(CH3)(CH2)2-、N(CH3)2CH2-、NH(CH3)2(CH2)2-、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙基甲基、环丙基乙基、环丁基乙基、环丁基甲基、环戊基甲基、环戊基乙基、环己基甲基、环己基乙基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、苯基甲基、苯基乙基、苯基正丙基、吡啶基甲基、吡啶基乙基、吡啶基正丙基、苯氧基甲基、苯氧基乙基、苯氧基正丙基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基或四氢吡喃基，其中所述的NH2CH2-、NH2(CH2)2-、NH(CH3)CH2-、NH(CH3)(CH2)2-、N(CH3)2CH2-、NH(CH3)2(CH2)2-、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙基甲基、环丙基乙基、环丁基乙基、环丁基甲基、环戊基甲基、环戊基乙基、环己基甲基、环己基乙基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、苯基甲基、苯基乙基、苯基正丙基、吡啶基甲基、吡啶基乙基、吡啶基正丙基、苯氧基甲基、苯氧基乙基、苯氧基正丙基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基和四氢吡喃基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NH2、NH(CH3)、CH3(S＝O)2-、CH3CH2(S＝O)2-、CH(CH3)2(S＝O)2-、C(CH3)3(S＝O)2-、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、苯基、吡啶基、吡唑基和嘧啶基的取代基所取代。
在一些实施方案中，R6为H、D、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。
在一些实施方案中，R7为H、D、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、苯基甲基、苯基乙基、苯基正丙基、咪唑基甲基、吡唑基甲基、吡啶基甲基、吡啶基乙基、嘧啶基甲基或嘧啶基乙基。
在一些实施方案中，本发明所述的化合物具有式(I-1)的结构，或式(I-1)结构的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002307183200000331
其中，各R1、G、X1、X2、X3、X4、X5、E、Q、M和R3具有如本发明所述的定义；
Z1和Z2各独立地为CH或N；
各Z3、Z5独立地为一个键、CH2、O、S、NH、C＝O、S＝O或(S＝O)2；
m为0、1或2；
Figure BDA0002307183200000341
可任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，
Figure BDA0002307183200000342
为子结构式：
Figure BDA0002307183200000343
Figure BDA0002307183200000344
Figure BDA0002307183200000345
其中，
Figure BDA0002307183200000346
的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基或吡唑烷叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，本发明所述的化合物具有式(I-1a)的结构，或式(I-1a)结构的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002307183200000347
其中，各R1、G、X1、X2、X3、X4、X5、E、Q、M和R3具有如本发明所述的定义；
Z1和Z2各独立地为CH或N；
Figure BDA0002307183200000351
可任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，
Figure BDA0002307183200000352
为子结构式：
Figure BDA0002307183200000353
Figure BDA0002307183200000354
其中
Figure BDA0002307183200000355
的各子结构式可独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基和吡唑烷叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，本发明所述的化合物具有式(I-2)的结构，或式(I-2)结构的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002307183200000356
其中，各R1、G、X1、X2、X3、X4、X5、E、Q、M和R3具有如本发明所述的定义；
A1为以下子结构式：
Figure BDA0002307183200000357
Figure BDA0002307183200000358
Z1和Z2各独立地为CH或N；
且A1的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，
A1为子结构式：
Figure BDA0002307183200000361
其中A1的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基或吡唑烷叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，本发明所述的化合物具有式(I-3)的结构，或式(I-3)结构的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002307183200000362
其中，各R1、G、X1、X2、X3、X4、X5、E、Q、M和R3具有如本发明所述的定义；
Z1、Z2和Z4各独立地为CH或N；
m为0、1或2；
n、m1和n1各独立地为0或1；
Figure BDA0002307183200000363
任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，
Figure BDA0002307183200000371
为子结构式：
Figure BDA0002307183200000372
Figure BDA0002307183200000373
Figure BDA0002307183200000374
其中
Figure BDA0002307183200000375
的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基和吡唑烷叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，本发明所述的化合物具有式(I-4)的结构，或式(I-4)结构的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002307183200000376
其中，各R1、G、X1、X2、X3、X4、X5、E、Q、M和R3具有如本发明所述的定义；
Z1和Z24各独立地为CH或N；
m为0、1或2；
n、m1和n1各独立地为0或1；
Figure BDA0002307183200000381
任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，
Figure BDA0002307183200000382
为子结构式：
Figure BDA0002307183200000383
Figure BDA0002307183200000384
Figure BDA0002307183200000385
其中
Figure BDA0002307183200000386
的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基和吡唑烷叉基的取代基所取代。
在一些实施方案中，本发明所述的化合物具有以下结构之一，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002307183200000387
Figure BDA0002307183200000391
Figure BDA0002307183200000401
Figure BDA0002307183200000411
Figure BDA0002307183200000421
Figure BDA0002307183200000431
Figure BDA0002307183200000441
Figure BDA0002307183200000451
Figure BDA0002307183200000461
Figure BDA0002307183200000471
Figure BDA0002307183200000481
Figure BDA0002307183200000491
Figure BDA0002307183200000501
Figure BDA0002307183200000511
Figure BDA0002307183200000521
Figure BDA0002307183200000531
Figure BDA0002307183200000541
Figure BDA0002307183200000551
Figure BDA0002307183200000561
Figure BDA0002307183200000571
Figure BDA0002307183200000581
Figure BDA0002307183200000591
Figure BDA0002307183200000601
Figure BDA0002307183200000611
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，包含本发明所述的化合物，和药学上可接受的辅剂。
另一方面，本发明还提供了本发明所述的化合物或本发明所述的药物组合物在制备用于预防或治疗RET相关疾病的药物中的用途。
在一些实施方案中，RET相关疾病包括癌症、肠易激综合征和/或与肠易激综合征相关的疼痛。
另一方面，本发明还提供了本发明所述的化合物或本发明所述的药物组合物用于预防或治疗RET相关疾病。
在一些实施方案中，RET相关疾病包括癌症、肠易激综合征和/或与肠易激综合征相关的疼痛。
另一方面，本发明还提供了预防或治疗RET相关疾病的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的本发明所述的化合物或其药物组合物。
在一些实施方案中，RET相关疾病包括癌症、肠易激综合征和/或与肠易激综合征相关的疼痛。
另一方面，本发明涉及制备式(I)、(I-1)、(I-1a)、(I-2)、(I-3)或(I-4)结构所示化合物的中间体。
另一方面，本发明涉及式(I)、(I-1)、(I-1a)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所示的化合物的制备、分离和纯化的方法。
另一方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明化合物及其药学上可接受的辅剂。在一些实施方案中，本发明所述的辅剂包括但不限于，载体，赋形剂，稀释剂，溶媒，或它们的组合。在一些实施方案中，药物组合物可以是液体，固体，半固体，凝胶或喷雾剂型。
本文还提供体外或体内抑制细胞增殖的方法，所述方法包括使细胞与有效量的本发明所述的化合物或其药物组合物接触。
本文还提供了在有治疗需要的患者中治疗肠易激综合征(IBS)和/或与IBS相关的疼痛的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的本发明所述化合物或其药物组合物。
本发明还提供了本发明所述的化合物或本发明所述的药物组合物在制备用于预防或治疗治疗肠易激综合征(IBS)和/或与IBS相关的疼痛的药物中的用途。
本发明还提供了本发明所述的化合物或本发明所述的药物组合物用于预防或治疗治疗肠易激综合征(IBS)和/或与IBS相关的疼痛。
除非其他方面表明，本发明的化合物所有的立体异构体，几何异构体，互变异构体，氮氧化物，水合物，溶剂化物，代谢产物，盐和药学上可接受的前药都属于本发明的范围。
具体地说，盐是药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的”包括物质或组合物必须是适合化学或毒理学，与组成制剂的其他组分和用于治疗的哺乳动物有关。
本发明的化合物的盐还包括用于制备或纯化式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所示化合物的中间体或式(I)、(I-1)、(I-1a)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所示化合物分离的对映异构体的盐，但不一定是药学上可接受的盐。
在本发明公开的结构中，当任意特定的手性原子的立体化学未指明时，则该结构的所有立体异构体都考虑在本发明之内，并且作为本发明公开化合物包括在本发明中。当立体化学被表示特定构型的实楔形线(solid wedge)或虚线指明时，则该结构的立体异构体就此明确和定义。
本发明化合物的氮氧化物也包含在本发明的范围之内。可以通过在升温下使用常用氧化剂(例如过氧化氢)，在有例如乙酸的酸存在下，氧化相应的含氮碱性物质，或者通过在适合的溶剂中与过酸反应，例如在二氯甲烷、乙酸乙酯或乙酸甲酯中与过乙酸反应，或在氯仿或二氯甲烷中与3-氯过氧苯甲酸反应，制备本发明化合物的氮氧化物。
如果本发明的化合物是碱性的，则想得到的盐可以通过文献上提供的任何合适的方法制备得到，例如，使用无机酸，如盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸和磷酸等等。或者使用有机酸，如乙酸，马来酸，琥珀酸，扁桃酸，富马酸，丙二酸，丙酮酸，草酸，羟乙酸和水杨酸；吡喃糖酸，如葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸；α-羟酸，如柠檬酸和酒石酸；氨基酸，如天门冬氨酸和谷氨酸；芳香族酸，如苯甲酸和肉桂酸；磺酸，如对甲苯磺酸，乙磺酸，等等。
如果本发明的化合物是酸性的，则想得到的盐可以通过合适的方法制备得到，如，使用无机碱或有机碱，如氨(伯氨，仲氨，叔氨)，碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物，等等。合适的盐包括，但并不限于，从氨基酸得到的有机盐，如甘氨酸和精氨酸，氨，如伯氨、仲氨和叔氨，和环状氨，如哌啶，吗啉和哌嗪等，和从钠，钙，钾，镁，锰，铁，铜，锌，铝和锂得到无机盐。
本发明化合物及其药物组合物、制剂和给药
本发明提供了抑制野生型RET和RET突变体的本发明化合物或其药物组合物，例如，对当前标准护理治疗具有抗性的RET突变体(“RET抗性突变体”)。另外，相对于其它激酶，本发明化合物或其药物组合物对野生型RET可有选择性，从而导致与抑制其它激酶相关的毒性降低。
本发明的药物组合物包括式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所示的化合物，本发明所列出的化合物，或实施例的化合物。本发明的组合物中化合物的量能有效地治疗或减轻患者RET相关疾病或病症，包括RET相关的癌症、肠易激综合征和/或与肠易激综合征相关的疼痛。
像本发明所描述的，本发明药学上可接受的组合物进一步包含药学上可接受的辅剂，这些像本发明所应用的，包括任何溶剂，稀释剂，或其他液体赋形剂，分散剂或悬浮剂，表面活性剂，等渗剂，增稠剂，乳化剂，防腐剂，固体粘合剂或润滑剂，等等，适合于特有的目标剂型。如以下文献所描述的：In Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st edition,2005,ed.D.B.Troy,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,andEncyclopedia of Pharmaceutical Technology,eds.J.Swarbrick and J.C.Boylan,1988-1999,Marcel Dekker,New York,综合此处文献的内容，表明不同的辅剂可应用于药学上可接受的组合物的制剂和它们公知的制备方法。除了任何常规的辅剂与本发明的化合物不相容的范围，例如所产生的任何不良的生物效应或与药学上可接受的组合物的任何其他组分以有害的方式产生的相互作用，它们的用途也是本发明所考虑的范围。
在制备本文提供的组合物时，通常将活性成分与赋形剂混合，通过赋形剂稀释或以例如胶囊、小袋、纸或其它容器的形式封装在这种运载体内。如果将赋形剂用作稀释剂，它可以是固体、半固体或液体材料，其用作活性成分的运载体、载体或介质。适宜的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉末剂、锭剂、囊剂、扁胶囊、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂(固体形式或在液体介质中)、例如最多含有10重量％活性化合物的软膏剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液以及无菌包装的粉末剂。在一个实施方式中，组合物被配制用于口服给药。在一个实施方式中，组合物被配制成片剂或胶囊剂。
当可用于治疗时，治疗有效量的本发明化合物，尤其是式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)化合物及其药学上可接受的盐可作为未加工的化学药品给予，还可作为药物组合物的活性成分提供。因此，本发明内容还提供药物组合物，该药物组合物包括治疗有效量的本发明化合物，尤其是式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的辅剂，辅剂包括但不限于载体、稀释剂或赋形剂，等。本文所使用的术语“治疗有效量”是指足以显示出有意义的患者益处(例如癌细胞减少)的各活性组分的总量。当使用单独的活性成分单独给药时，该术语仅指该成分。当组合应用时，该术语则是指不论组合，依次或同时给药时，都引起治疗效果的活性成分的组合量。本发明化合物，尤其是式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)化合物及其药学上可接受的盐如上所述。从与制剂其他成分相容以及对其接受者无害的意义上来讲，载体、稀释剂或赋形剂必须是可接受的。根据本发明内容的另一方面，还提供用于制备药物制剂的方法，该方法包括将本发明化合物，尤其是式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混匀。本发明所使用的术语“药学上可接受的”是指这样的化合物、原料、组合物和/或剂型，它们在合理医学判断的范围内，适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、***反应或与合理的利益/风险比相对称的其他问题和并发症，并有效用于既定用途。
与一种或多种辅剂结合以制备单剂型的活性成分的量将必需根据治疗的宿主和具体的给药路径而变化。式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)化合物与载体材料混合以制备单一剂型的活性成分的量将根据待治疗的疾病、疾病的严重程度、给药时间、给药途径、所用化合物的***速率、治疗时间和患者年龄、性别、体重和情况而改变。优选的单位剂型是含有本文上述活性成分的日剂量或分剂量或其适宜分数的单位剂型。可用显然低于化合物最佳剂量的小剂量开始治疗。此后，以较小的增量来加大剂量直到在这种情况下达到最佳效果。一般而言，最理想地给予化合物的浓度水平是通常可在抗肿瘤方面提供有效结果而又不至于引起任何有害或有毒的副作用。
包含本发明所述化合物的组合物可以配制成单位剂型，每个剂量包含约5至约1,000mg(1g)，更通常约100mg至约500mg的活性成分。术语“单位剂量形式”指适合作为单一剂量用于人体对象或其他患者的物理上离散的单位，每个单位包含预定量的活性材料(即如本文提供的通式I的化合物)和合适的药用赋形剂，所述预定量经计算能够产生所需的治疗效果。
在一些实施方式中，本文提供的组合物含有约5mg至约50mg的活性成分。本领域普通技术人员将理解，这体现了包含约5mg至约10mg，约10mg至约15mg，约15mg至约20mg，约20mg至约25mg，约25mg mg至约30mg，约30mg至约35mg，约35mg至约40mg，约40mg至约45mg或约45mg至约50mg活性成分的化合物或组合物。
在一些实施方式中，本文提供的组合物含有约50mg至约500mg的活性成分。本领域普通技术人员将会理解，这体现了包含约50mg至约100mg，约100mg至约150mg，约150mg至约200mg，约200mg至约250mg，约250mg至约300mg，约350mg至约400mg或约450mg至约500mg活性成分的化合物或组合物。
在一些实施方式中，本文提供的组合物含有约500mg至约1,000mg的活性成分。本领域普通技术人员将理解，这体现了包含约500mg至约550mg，约550mg至约600mg，约600mg至约650mg，约650mg至约700mg，约700至约750mg，约750mg至约800mg，约800mg至约850mg，约850mg至约900mg，约900mg至约950mg或约950mg至约1,000mg活性成分的化合物或组合物。
药物组合物适于通过任何合适的途径给药，例如通过口服(包括口腔或舌下)、直肠、鼻、局部(包括口腔、舌下或经皮)、***或胃肠外(包括皮下、皮内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或者真皮下注射或输注)途径。可按药剂学领域的任何已知方法制备这类制剂，例如通过将活性成分与载体或赋形剂混合。优选口服给药或注射给药。
本发明还提供了治疗患有RET相关癌症的个体的方法，所述方法包括在给予另一种抗癌药物(例如不是本发明所述化合物)之前、期间或之后给予本发明所述化合物。
本发明提供了用于治疗有需要的患者的癌症的方法，所述方法包括：(a)确定所述患者中的癌症是否是RET相关癌症(例如，包括具有一个或多个的RET抑制剂抗性突变的RET相关癌症的RET相关癌症)(例如，使用管理机构批准的，例如FDA批准的，试剂盒来鉴定患者中或患者的活检样品中的RET基因、RET激酶或其中任何一者的表达或活性或水平的失调，或通过进行本文所述测定的任何非限制性示例)；和(b)如果癌症被确定为RET相关癌症，则向患者施用治疗有效量的式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物。这些方法的一些实施方式进一步包括向对象施用另一种抗癌剂(例如另一种RET抑制剂，例如不是本发明所述化合物的RET抑制剂)。在一些实施方式中，对象先前用不是式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的RET抑制剂治疗，或先前(例如在切除肿瘤或放射疗法后)用其他抗癌剂治疗。
在本文所述的任何方法的一些实施方式中，式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)的化合物(或其药学上可接受的盐或溶剂合物)与治疗有效量的至少一种其他治疗剂联用，所述至少一种其他治疗剂选自一种或多种其他疗法或治疗(例如化学治疗)试剂。
其他治疗剂的非限制性示例包括：其它RET靶向治疗剂(即其他RET激酶抑制剂:不是本发明所述化合物的RET抑制剂)，受体酪氨酸激酶靶向的治疗剂，信号转导途径抑制剂，检查点抑制剂，凋亡途径调节剂(例如Obataclax)；细胞毒性化学治疗剂，血管生成靶向治疗剂，免疫靶向剂和放射疗法。
在一些实施方式中，其他RET靶向治疗剂是显示RET抑制活性的多激酶抑制剂。
RET靶向治疗剂的非限制性示例包括阿拉替尼，阿帕替尼，卡博替尼(XL-184)，多维替尼，乐伐替尼，莫泰沙尼，尼达尼布，普纳替尼，雷格拉非尼，斯塔替尼(sitravatinib)(MGCD516)，舒尼替尼，索拉非尼，瓦他拉尼，凡德他尼，AUY-922(5-(2,4-二羟基-5-异丙基-苯基)-N-乙基-4-[4-(吗啉代甲基)苯基]异噁唑-3-甲酰胺)，BLU6864，BLU-667，DCC-2157，NVP-AST487(1-[4-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基]-3-[4-[6-(甲氨基)嘧啶-4-基]氧苯基]脲)，PZ-1，RPI-1(1,3-二氢-5,6-二甲氧基-3-[(4-羟基苯基)亚甲基]-H-吲哚-2-酮)，RXDX-105(1-(3-(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)苯基)-3-(5-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)异噁唑-3-基)脲)，SPP86(1-异丙基-3-(苯基乙炔基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)和TG101209(N-(1,1-二甲基乙基)-3-[[5-甲基-2-[[4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]氨基]-4-嘧啶基]氨基]苯磺酰胺)。
其它治疗剂包括RET抑制剂，如在例如下述中所述的那些：美国专利号7,504,509；8,299,057；8,399,442；8,067,434；8,937,071；9,006,256；和9,035,063；美国公开号2014/0121239；20160176865；2011/0053934；2011/0301157；2010/0324065；2009/0227556；2009/0130229；2009/0099167；2005/0209195；国际公开号WO 2014/184069；WO 2014/072220；WO2012/053606；WO 2009/017838；WO 2008/031551；WO 2007/136103；WO 2007/087245；WO2007/057399；WO 2005/051366；WO 2005/062795；和WO 2005/044835；和J.Med.Chem.2012,55(10),4872-4876,其全部通过引用全文纳入本文。
本文还提供了治疗癌症的方法，包括向有需要的患者给予治疗癌症的药物组合，其包括(a)通式I的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，(b)其他治疗剂，和(c)任选的至少一种药学上可接受的运载体，以同时、分开或顺序用于治疗癌症，其中通式I的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的量和其他治疗剂的量在治疗癌症方面共同有效。
本文所述的化合物和组合物可单独施用或与其它化合物(包括其它RET调节化合物)或其它治疗剂组合施用。在一些实施方案中，本发明的化合物或组合物可与一种或多种选自以下的化合物组合施用：卡博替尼(COMETRIQ)、凡德他尼(CALPRESA)、索拉非尼(NEXAVAR)、舒尼替尼(SUTENT)、雷格拉非尼(STAVARGA)、普纳替尼(ICLUSIG)、贝伐单抗(阿瓦斯汀)、克唑替尼(XALKORI)或吉非替尼(IRESSA)。本发明的化合物或组合物可通过相同或不同给药途径与其它治疗剂同时或相继施用。本发明的化合物可与其它治疗剂一起包含在单一制剂中或在单独的制剂中。
在一些实施方式中，本发明的化合物可用于与一种或多种其他治疗剂或疗法组合治疗肠易激综合征(IBS)，所述其它治疗剂或疗法通过相同或不同作用机制起作用而在肠易激综合征治疗中有效。根据本领域技术人员已知的标准药学实践，所述至少一种其他治疗剂可以与通式I的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物作为相同或分开的剂型的一部分、经由相同或不同的给予途径、以及根据相同或不同的给予时间表而给予。用于治疗肠易激综合征(IBS)的其他治疗剂的非限制性示例包括益生菌，纤维增补剂(例如洋车前草，甲基纤维素)，止泻药(例如洛哌丁胺)，胆汁酸结合剂(例如考来烯胺，考来替泊，考来维仑)，抗胆碱能药和抗痉挛药(例如莨菪碱，双环胺)，抗抑郁药(例如三环类抗抑郁药如丙咪嗪或去甲替林或选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)如氟西汀或帕罗西汀)，抗生素(例如利福昔明)，阿洛司琼和鲁比前列酮。
本发明化合物和药物组合物的用途
本发明还提供了本发明所述的化合物或本发明所述的药物组合物在制备用于预防或治疗RET相关疾病或病症的药物中的用途，其中，RET相关疾病或病症包括RET相关的癌症、肠易激综合征和/或与肠易激综合征相关的疼痛。
本发明提供了抑制野生型RET和RET突变体的本发明化合物或其药物组合物，例如，对当前标准护理治疗具有抗性的RET突变体(“RET抗性突变体”)。另外，相对于其它激酶，本发明化合物或其药物组合物对野生型RET可有选择性，从而导致与抑制其它激酶相关的毒性降低。
本发明提供了本发明所述的抑制野生型RET和RET突变体的本发明化合物或其药物组合物在制备用于预防或治疗野生型RET和RET突变体相关疾病或病症的药物中的用途。
在本文所述的任何方法或用途的一些实施方式中，癌症(例如RET相关癌症)是血液学癌症。在本文所述的任何方法或用途的一些实施方式中，癌症(例如RET相关癌症)是实体瘤。在本文所述的任何方法或用途的一些实施方式中，癌症(例如RET相关癌症)是肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌)，***状甲状腺癌，甲状腺髓样癌，分化型甲状腺癌，复发性甲状腺癌，难治性分化型甲状腺癌，肺腺癌，细支气管肺癌，2A或2B型多发性内分泌肿瘤(分别为MEN2A或MEN2B)，嗜铬细胞瘤，甲状旁腺增生，乳腺癌，结直肠癌(例如转移性结肠直肠癌)，***状肾细胞癌，胃肠粘膜的神经节细胞瘤病，炎性肌纤维母细胞瘤或***。在本文所述的任何方法或用途的一些实施方式中，癌症(例如RET相关癌症)选自：急性淋巴细胞白血病(ALL)，急性髓性白血病(AML)，青少年癌症，肾上腺皮质癌，***癌、阑尾癌，星形细胞瘤，非典型性畸胎瘤/横纹肌样瘤，基底细胞癌，胆管癌，膀胱癌，骨癌，脑干胶质瘤，脑肿瘤，乳腺癌，支气管肿瘤，伯基特淋巴瘤，类癌瘤，未知原发癌，心脏肿瘤，***，儿童癌症，脊索瘤，慢性淋巴细胞白血病(CLL)，慢性骨髓性白血病(CML)，慢性骨髓增殖性肿瘤，结肠癌，结肠直肠癌，颅咽管瘤，皮肤T细胞淋巴瘤，胆管癌，原位导管癌，胚胎性肿瘤，子宫内膜癌，室管膜瘤，食道癌，成感觉神经细胞瘤，尤因肉瘤，颅外生殖细胞肿瘤，性腺外生殖细胞瘤，肝外胆管癌，眼癌，输卵管癌，骨纤维组织细胞瘤，胆囊癌，胃癌，胃肠类癌瘤，胃肠道间质瘤(GIST)，生殖细胞瘤，妊娠滋养细胞疾病，神经胶质瘤，多毛细胞瘤，多毛细胞白血病，头颈癌，心脏癌，肝细胞癌，组织细胞增多症，霍奇金淋巴瘤，下咽癌，眼内黑色素瘤，胰岛细胞瘤，胰腺神经内分泌瘤，卡波西肉瘤，肾癌，朗格汉斯细胞组织细胞增多症，喉癌，白血病，唇和口腔癌，肝癌，肺癌，淋巴瘤，巨球蛋白血症，骨恶性纤维组织细胞瘤，骨癌，黑色素瘤，梅克尔细胞癌，间皮瘤，转移性鳞状颈癌，中线状癌，口癌，多发性内分泌瘤综合征，多发性骨髓瘤，真菌病蕈样肉芽肿，骨髓增生异常综合征，骨髓增生异常/骨髓增殖性肿瘤，髓性白血病，骨髓性白血病，多发性骨髓瘤，骨髓增殖性肿瘤，鼻腔和鼻窦癌，鼻咽癌，成神经细胞瘤，非霍奇金淋巴瘤，非小细胞肺癌，口部癌，口腔癌，唇癌，口咽癌，骨肉瘤，卵巢癌，胰腺癌，***状瘤病，副神经节瘤，鼻旁窦和鼻腔癌，甲状旁腺癌，***癌，咽癌，嗜铬细胞瘤，垂体癌，浆细胞瘤，胸膜肺胚细胞瘤，妊娠和乳腺癌，原发性中枢神经***淋巴瘤，原发腹膜癌，***癌，直肠癌，肾细胞癌，视网膜母细胞瘤，横纹肌肉瘤，唾液腺癌，肉瘤，塞扎里综合征，皮肤癌，小细胞肺癌，小肠癌，软组织肉瘤，鳞状细胞癌，鳞状颈癌，胃癌，T细胞淋巴瘤，睾丸癌，咽喉癌，胸腺瘤和胸腺癌，甲状腺癌症，肾盂和输尿管的移行细胞癌，未知原发癌，尿道癌，子宫癌，子宫肉瘤，***癌，外阴癌和威尔姆氏瘤。
在一些实施方案中，本发明所述RET相关癌症选自肺癌，***状甲状腺癌，甲状腺髓样癌，分化的甲状腺癌，复发性甲状腺癌，难治性分化型甲状腺癌，2A或2B型多发性内分泌瘤(分别为MEN2A或MEN2B)，嗜铬细胞瘤，甲状旁腺增生，乳腺癌，结直肠癌，***状肾细胞癌，胃肠粘膜神经节细胞瘤和***。在一些实施方案中，所述RET相关癌症是RET融合体肺癌或甲状腺髓样癌。
在一些实施方式中，式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂合物可用于治疗患有RET抑制剂抗性突变(其导致对不是式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)的化合物或药学上可接受的盐或溶剂合物的抗性增加，例如在氨基酸位置804处的取代，例如V804M、V804L或V804E)的癌症的患者，所述治疗通过联合给药或作为现有药物治疗(例如，不是式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的其他RET激酶抑制剂)的后续治疗。本文描述了示例性的RET激酶抑制剂(例如，不是式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的其它RET激酶抑制剂)。在一些实施方式中，RET激酶抑制剂可以选自卡博替尼，凡德他尼，阿拉替尼，索拉非尼，乐伐替尼，普纳替尼，多维替尼，舒尼替尼，福替尼(foretinib)，BLU667和BLU6864。
在本文所述的任何方法或用途的一些实施方式中，所述肠易激综合征(IBS)包括腹泻主导型、便秘主导型或交替型、功能性腹胀、功能性便秘、功能性腹泻、不特异的功能性肠紊乱、功能性腹痛综合征、慢性特发性便秘、功能性食管疾病、功能性胃十二指肠疾病、功能性***直肠疼痛和炎性肠病。
根据本发明的方法，化合物和组合物可以是任何给药量和任何给药途径来有效地用于处理或减轻疾病的严重程度。必需的准确的量将根据患者的情况而改变，这取决于种族，年龄，患者的一般条件，感染的严重程度、特殊的因素、给药方式，等等。化合物或组合物可以和一个或多个其他治疗剂进行药物联用，如本发明所讨论的。
本发明化合物的一般合成方法
一般地，本发明的化合物可以通过本发明所描述的方法制备得到，除非有进一步的说明，其中取代基的定义如式(I)、(I-1a)、(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所示。下面的反应方案和实施例用于进一步举例说明本发明的内容。
所属领域的技术人员将认识到：本发明所描述的化学反应可以用来合适地制备许多本发明的其他化合物，且用于制备本发明的化合物的其它方法都被认为是在本发明的范围之内。例如，根据本发明那些非例证的化合物的合成可以成功地被所属领域的技术人员通过修饰方法完成，如适当的保护干扰基团，通过利用其他已知的试剂除了本发明所描述的，或将反应条件做一些常规的修改。另外，本发明所公开的反应或已知的反应条件也公认地适用于本发明其他化合物的制备。
下面所描述的实施例，除非其他方面表明所有的温度定为摄氏度。若无其他说明，试剂均可以从市场上购买得到，例如试剂可购买于商品供应商如凌凯医药，AldrichChemical Company,Inc.,Arco Chemical Company和Alfa Chemical Company，使用时都没有经过进一步纯化，除非其他方面表明。一般的试剂从汕头西陇化工厂，广东光华化学试剂厂，广州化学试剂厂，天津好寓宇化学品有限公司，青岛腾龙化学试剂有限公司，和青岛海洋化工厂购买得到。
无水四氢呋喃是经过金属钠回流干燥得到。无水二氯甲烷和氯仿是经过氢化钙回流干燥得到。乙酸乙酯，N,N-二甲基乙酰胺和石油醚是经无水硫酸钠事先干燥使用。
以下反应一般是在氮气或氩气正压下或在无水溶剂上套一干燥管(除非其他方面表明)，反应瓶都塞上合适的橡皮塞，底物通过注射器打入。玻璃器皿都是干燥过的。
色谱柱是使用硅胶柱。硅胶(300-400目)购于青岛海洋化工厂。核磁共振光谱以CDC13或DMSO-d6为溶剂(报导以ppm为单位)，用TMS(0ppm)或氯仿(7.25ppm)作为参照标准。当出现多重峰的时候，将使用下面的缩写：s(singlet，单峰)，d(doublet，双峰)，t(triplet，三重峰)，m(multiplet，多重峰)，br(broadened，宽峰)，dd(doublet ofdoublets，双二重峰)，dt(doublet of triplets，双三重峰)。偶合常数，用赫兹(Hz)表示。
低分辨率质谱(MS)数据通过配备G1312A二元泵和a G1316A TCC(柱温保持在30℃)的Agilent 6320系列LC-MS的光谱仪来测定的，G1329A自动采样器和G1315B DAD检测器应用于分析，ESI 源应用于LC-MS光谱仪。
低分辨率质谱(MS)数据通过配备G1311A四元泵和G1316A TCC(柱温保持在30℃)的Agilent 6120系列LC-MS的光谱仪来测定的，G1329A自动采样器和G1315D DAD检测器应用于分析，ESI源应用于LC-MS光谱仪。
以上两种光谱仪都配备了Agilent Zorbax SB-C18柱，规格为2.1×30mm，5μm。注射体积是通过样品浓度来确定；流速为0.6mL/min；HPLC的峰值是通过在210nm和254nm处的UV-Vis波长来记录读取的。流动相为0.1％的甲酸乙腈溶液(相A)和0.1％的甲酸超纯水溶液(相B)。
化合物纯化是通过Agilent 1100系列高效液相色谱(HPLC)来评价的，其中UV检测在210nm和254nm处，Zorbax SB-C18柱，规格为2.1×30mm，4μm，10分钟，流速为0.6mL/min，5-95％的(0.1％甲酸乙腈溶液)的(0.1％甲酸水溶液)，柱温保持在40℃。
下面简写词的使用贯穿本发明：
NaSO4·10H2O 十水合硫酸钠
AlCl3 三氯化铝
DCE 1,2-二氯乙烷
PE,pe,Pe 石油醚
EA 乙酸乙酯
DMA N,N-二甲基苯胺
Pd(PPh3)4 四(三苯基膦)钯
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
TFA 三氟乙酸
DCM 二氯甲烷
DMAP 4-二甲氨基吡啶
DCC 二环己基碳二亚胺
NH4Cl 氯化铵
DMF N,N-二甲基甲酰胺
THF 四氢呋喃
CuI 碘化亚铜
PdCl2(PPh3)2,Pd(PPh3)2Cl2 双三苯基磷二氯化钯
DPEPhos 双(2-二苯基磷苯基)醚
K2CO3 碳酸钾
MeOH,CH3OH 甲醇
DMSO 二甲亚砜
Na2S2O3 硫代硫酸钠
NaBH(OAc)3 三乙酰氧基硼氢化钠
EDCI 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
STAB 三乙酰氧基硼氢化钠
MsCl 甲磺酰氯
LiOH 氢氧化锂
LiOH·H2O 一水合氢氧化锂
NaBH4 硼氢化钠
NaOH 氢氧化钠
EtOH 乙醇
NaH 氢化钠
PPh3 三苯基膦
t-BuOK 叔丁醇钾
SOCl2 二氯亚砜
HCl/dioxane 盐酸的二氧六环溶液
DMAC 二甲基乙酰胺
AcOH 乙酸
NaHCO3 碳酸氢钠
THF/H2O 四氢呋喃和水的混合溶液
TEA,Et3N 三乙胺
H2O 水
SOCl2 氯化亚砜
mL,ml 毫升
g 克
mmol 毫摩尔
mL 毫升
mol/L 摩尔/升
℃，℃ 摄氏度
h 小时
d 天，天数
min 分钟
s 秒
TLC 薄层色谱
％ 百分号
N mol/L，摩尔/升
下列合成方案描述了制备本发明公开化合物的步骤。除非另外说明，R1、G、R3、R5、R6、X1、X2、X3、X4、X5、A、Q、M具有如本发明所述的定义。
中间体I-A合成方案：
Figure BDA0002307183200000691
中间体I-A的合成可参考上面中间体合成方案的合成步骤得到。其中，hal1为F、Cl、Br、I，优选Cl、Br；hal2为F、Cl、Br、I，优选F、Cl、Br。式I-A-1化合物与式I-A-2化合物在合适的偶联剂条件(如钯偶联剂，优选Pd(PPh3)4)下在合适的溶剂(如二氧六环，等)中发生偶联反应得到式I-A化合物。
中间体I-B合成方案
Figure BDA0002307183200000701
中间体I-B的合成可参考上面中间体合成方案的合成步骤得到。其中，hal2为F、Cl、Br、I，优选F、Cl、Br；Pg为氨基保护基团，包括但不限于Boc、Cbz、Fmoc等。式I-A化合物与式I-B-1化合物在合适的条件(如DIPEA)下在合适的溶剂(如DMSO，等)中反应得到式I-B-2化合物；式I-B-2化合物在酸性条件下(如HCl)在合适的溶剂(甲醇)中反应得到式I-B化合物或式I-B化合物的盐。
合成方案1：
Figure BDA0002307183200000702
当本发明通式(I)中E为一个键时，本发明式(I)化合物即为合成方案1中式(Ia)化合物。本发明式(Ia)化合物的合成可参考合成方案1的合成步骤得到。式I-A化合物与式I-B1化合物或式I-B1化合物的盐(如盐酸盐、三氟乙酸盐、氢溴酸盐，等)在合适的试剂条件(如DIPEA，等)下发生偶联反应得到式(Ia)化合物。
合成方案2：
Figure BDA0002307183200000703
当本发明通式(I)中E为-NR6-时，本发明式(I)化合物即为合成方案2中式(Ib)化合物。本发明式(Ia)化合物的合成可参考合成方案2的合成步骤得到。式I-A化合物与式I-B2化合物的盐(如盐酸盐、三氟乙酸盐、氢溴酸盐，等)在合适的试剂条件(如DIPEA，等)下发生偶联反应得到式(Ib)化合物。
合成方案3：
Figure BDA0002307183200000704
当本发明通式(I)中E为一个键、A左端与E通过N原子连接时，本发明式(I)化合物即为合成方案3中式(Ic)化合物。本发明式(Ic)化合物的合成可参考合成方案3的合成步骤得到。式I-A化合物与式I-B3化合物或式I-B3化合物的盐(如盐酸盐、三氟乙酸盐、氢溴酸盐，等)在合适的试剂条件(如DIPEA，等)下发生偶联反应得到式(Ic)化合物。
合成方案4：
Figure BDA0002307183200000711
当本发明通式(I)中E为一个键、Q为-(C＝O)-、A左端与E通过N原子连接且A右端通过N原子与Q连接时，本发明式(I)化合物即为合成方案4中式(Id)化合物。其中Pg为氨基保护基团，包括但不限于Boc、Cbz、Fmoc等，Ra为OH、Cl、Br。式I-B4-1化合物与式I-B4-2化合物在合适的碱性条件(如DCC、DIPEA、TEA、DMAP，等)下反应得到式I-B4-3化合物；式I-B4-3化合物在酸性条件(如盐酸、三氟乙酸、氢溴酸，等)下脱氨基保护得到式I-B4化合物的盐(如盐酸盐、三氟乙酸盐、氢溴酸盐，等)；式I-B4化合物的盐与式I-A化合物在合适的试剂条件(如DIPEA，等)下发生偶联反应得到式(Id)化合物。
合成方案5：
Figure BDA0002307183200000712
当本发明通式(I)中E为一个键、Q为-NR5(C＝O)-、A左端与E通过N原子连接且A右端与Q中的N原子连接时，本发明式(I)化合物即为合成方案5中式(Ie)化合物。其中Pg为氨基保护基团，包括但不限于Boc、Cbz、Fmoc等，Ra为OH、Cl、Br。式I-B5-1化合物与式I-B4-2化合物在合适的碱性条件(如DCC、DIPEA、TEA、DMAP，等)下反应得到式I-B5-3化合物；式I-B5-3化合物在酸性条件(如盐酸、三氟乙酸、氢溴酸，等)下脱氨基保护得到式I-B5化合物的盐(如盐酸盐、三氟乙酸盐、氢溴酸盐，等)；式I-B5化合物的盐与式I-A化合物在合适的试剂条件(如DIPEA，等)下发生偶联反应得到式(Ie)化合物。
合成方案6:
Figure BDA0002307183200000721
当本发明通式(I)中E为一个键、Q为-(C＝O)-、A左端与E通过N原子连接且A右端通过N原子与Q连接时，本发明式(I)化合物即为合成方案6中式(Id)化合物。其中Pg为氨基保护基团，包括但不限于Boc、Cbz、Fmoc等，Ra为OH、Cl、Br。式I-B4-1化合物与式I-A化合物在合适的碱性条件(如DCC、DIPEA、TEA、DMAP，等)下反应得到式I-B4-5化合物；式I-B4-5化合物在酸性条件(如盐酸、三氟乙酸、氢溴酸，等)下脱氨基保护得到式I-B4-6化合物的盐(如盐酸盐、三氟乙酸盐、氢溴酸盐，等)；式I-B4-6化合物的盐与式I-B4-2化合物在合适的试剂条件(如DCC、DIPEA、TEA、DMAP，等)下发生偶联反应得到式(Id)化合物。
合成方案7:
Figure BDA0002307183200000722
当本发明通式(I)中E为-NR6-、Q为-(C＝O)-、A右端通过N原子与Q连接时，本发明式(I)化合物即为合成方案7中式(If)化合物。其中Pg为氨基保护基团，包括但不限于Boc、Cbz、Fmoc等，Ra为OH、Cl、Br。式I-B6-1化合物与式I-A化合物在合适的碱性条件(如DCC、DIPEA、TEA、DMAP，等)下反应得到式I-B6-2化合物；式I-B6-2化合物在酸性条件(如盐酸、三氟乙酸、氢溴酸)下脱氨基保护得到式I-B6-3化合物的盐(如盐酸盐、三氟乙酸盐、氢溴酸盐，等)；式I-B6-3化合物的盐与式I-B4-2化合物在合适的试剂条件(如DCC、DIPEA、TEA、DMAP，等)下发生偶联反应得到式(If)化合物。
合成方案8：
Figure BDA0002307183200000731
当本发明通式(I)中E为一个键、Q为一个键、A左端与E通过N原子连接且A右端通过N原子与Q连接时，M为-CH2-Cy-，本发明式(I)化合物即为合成方案8中式(Ig)化合物。其中Pg为氨基保护基团，包括但不限于Boc、Cbz、Fmoc等；Cy为一个键、芳基、杂芳基、Cyc或hetCyc，其中芳基、杂芳基、Cyc、hetCyc具有如本发明所述的定义。式I-B4-1化合物与式I-A化合物在合适的碱性条件(如DCC、DIPEA、TEA、K2CO3、DMAP，等)下反应得到式I-B4-5化合物；式I-B4-5化合物在酸性条件(如盐酸、三氟乙酸、氢溴酸，等)下脱氨基保护得到式I-B4-6化合物的盐(如盐酸盐、三氟乙酸盐、氢溴酸盐，等)；式I-B4-6化合物的盐与式I-B4-7化合物在合适的试剂条件(如DCE和NaBH(OAc)3条件，等)下发生偶联反应得到式(Ig)化合物。
合成方案9：
Figure BDA0002307183200000732
式(Ih)化合物可通过合成方案9的制备方法得到，其中hal3为F、Cl、Br，优选Cl、Br；Cy1为一个键、芳基或杂芳基。式I-B4-6化合物的盐与式Ih-1化合物在碱性条件下(如碳酸钾，三乙胺，等)在合适的溶剂中(如N,N-二甲基甲酰胺，乙腈，等)下发生偶联反应得到式(Ih)化合物。
合成方案10：
Figure BDA0002307183200000733
式(Ii)化合物可通过合成方案10的制备方法得到，其中，Ra为OH、Cl、Br。式I-B化合物的盐与式I-B4-2化合物在合适的试剂条件(如EDCI、DIPEA、DMAP，等)下发生反应得到式(Ii)化合物。
合成方案11：
Figure BDA0002307183200000741
式(Ij)化合物可通过合成方案11的制备方法得到，其中，Ra为OH、Cl、Br。式I-C化合物的盐与式I-C1化合物在合适的试剂条件(如EDCI、DIPEA、DMAP，等)下发生反应得到式(Ij)化合物。
合成方案12：
Figure BDA0002307183200000742
式(Ik)化合物可通过合成方案11的制备方法得到，其中，Ra为OH、Cl、Br。式I-D化合物的盐与式I-C1化合物在合适的试剂条件(如EDCI、DIPEA、DMAP，等)下发生反应得到式(Ik)化合物。
具体实施例
中间体1：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
Figure BDA0002307183200000743
步骤1：3-氰基-4-溴-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶
在500mL单口瓶中将(E)-4-溴-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲醛肟(10.0g,37.026mmol)用醋酸酐(250mL)溶解，置于140℃条件下回流反应。溶液由黄色逐渐变成棕色。反应4.5h TLC检测反应完成。在该温度下减压蒸馏除去溶剂，残留物加水100mL，搅拌5min后抽滤，滤饼用20mL水洗，滤饼于50℃真空干燥箱烘干24h，得灰色固体6.83g，收率73.2％。Rf＝0.4(PE:EA＝2:1)。
步骤2：3-氰基-4-溴-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶
于1000mL单口瓶中将3-氰基-4-溴-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶(6.83g,27.1mmol)用DCE(273mL)溶解，一次性加入AlCl3(10.8g,81.0mmol)，转移至80℃油浴回流反应过夜。TLC检测反应完成。将反应液冷却至室温，搅拌下加入200mL NaSO4·10H2O的THF溶液，搅拌4h后抽滤，收集滤液旋干得棕色固体5.8g。收率90％。Rf＝0.2(PE:EA＝2:1)。
步骤3：3-氰基-4-溴-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶
在250mL单口瓶中将3-氰基-4-溴-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶(5g,21.005mmol)和碳酸钾(8.7g,63mmol)用DMA(125mL)溶解，搅拌下加入碘乙烷(5g,32.057mmol)，加毕后转移至60℃条件下反应。反应6h，TLC检测反应完成。往反应液中加入40mL氨水:水＝1:1的溶液，搅拌1h后抽滤，滤饼用50mL水洗涤，旋干，抽干得灰色固体4.48g，收率80.2％。Rf＝0.95(PE:EA＝1:1)。
步骤4：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
在压力管中将3-氰基-4-溴-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶(2.5g,9.4mmol)，2-氟吡啶-5-硼酸频哪醇酯(2.5g,11mmol)用1,4-二噁烷(94mL)溶解，加入Pd(PPh3)4(1.1g,0.95mmol)和碳酸钠溶液(9.4mL,19mmol,2mol/L)后封管，置于100℃油浴中加热。9h后停止加热，TLC检测反应完成。加入50mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，将反应液转移至分液漏斗中加入300mL的EA和50mL饱和食盐水，振荡后中间层有絮状灰色固体析出，抽滤，分离灰色固体，滤液分离有机相，水相再用250mL EA萃取两次，有机相与灰色固体合并旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝4:1-1:1，得产物淡黄色固体2.7g，收率100％。Rf＝0.35(PE:EA＝1:1)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.39(s,1H),8.21(s,1H),8.18(d,1H),8.01(td,J＝8.3,2.6Hz,1H),7.16(d,J＝1.8Hz,1H),7.12(dd,J＝8.4,2.9Hz,1H),4.11(q,J＝6.9Hz,2H),1.51(t,J＝6.9Hz,3H)。
中间体2：4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000751
步骤1：4-溴-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
于1000mL单口瓶中将4-溴-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(6.83g,27.1mmol)用DCE(273mL)溶解，一次性加入AlCl3(10.8g,81.0mmol)，转移至80℃油浴回流反应过夜。TLC检测反应完成。将反应液冷却至室温，搅拌下加入200mLNaSO4·10H2O的THF溶液，搅拌4h后抽滤，收集滤液旋干得棕色固体5.8g。收率90％。Rf＝0.2(PE:EA＝2:1)。
步骤2：4-(6-氟吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在50mL封管中依次加入4-溴-6-羟基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(1.54g,6.47mmol)，2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧环硼烷-2-基)吡啶(1.88g,8.43mmol)，2mol/L碳酸钠(9.7mL,19mmol)，1,4-二氧六环(30.8mL)，四(三苯基膦)钯(0.75g,0.65mmol)，搅拌下鼓氮气10min，密闭后置于100℃下搅拌7h。然后降至室温下冷却，搅拌过夜。反应液直接抽滤，滤饼拿大量EA(80ml)洗涤，滤液加入50mL水，分出水相用乙酸乙酯萃取(50ml×2)，合并有机相，水洗(50ml)，饱和食盐水洗(50ml)，无水硫酸钠干燥后旋干柱层析。洗脱液PE/EA＝4/1-2/1,集到淡黄色固体1.14g，收率69.3％。
步骤3：4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在20mL的压力管中，依次加入4-(6-氟吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(0.34g,1.3mmol)，碳酸钾(0.55g,4.0mmol)，2,2-二甲基环氧乙烷(0.96g,13mmol)，DMF(4mL)，封管后60℃磁力搅拌反应10h，再升温至80℃下反应过夜。TLC检测反应完毕后，反应液加入到冷的50ml水中，室温下搅拌1h，EA萃取(80mL×3)，有机相无水硫酸钠干燥后旋干硅胶柱层析(PE/EA＝9/1-2/1)收集得到白色固体183mg，收率42％。LC-MS:327.1[M+1]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(d,1H),8.24(d,J＝1.7Hz,1H),8.22(s,1H),8.05-7.98(m,1H),7.23(d,J＝1.8Hz,1H),7.13(dd,J＝8.5,2.8Hz,1H),3.88(s,2H),1.40(s,6H)。
中间体3：4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐
Figure BDA0002307183200000761
步骤1：3-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯
在30mL微波管中依次加入4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，1.48g,4.54mmol)，3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(1.1g，5.5mmol)，碳酸钾(1.89g,13.7mmol)，用二甲基亚砜(15ml)溶解，微波140℃加热4h。降至室温后加EA(100mL)，分别用水(50mL×5)，饱和食盐水(50mL)洗涤，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，硅胶柱层析纯化(PE/EA＝50：1-2:1)得到浅黄色固体1.61g即为目标产品，收率70.3％。Rf＝0.50(PE/EA＝1：1)。LC-MS：m/z＝505.20[M+H]+。
步骤2：4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-α]吡啶-3-甲腈二盐酸盐
在100mL单口瓶中，依次加入3-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(1.61g,3.19mmol)，盐酸甲醇溶液(4mol/L,13ml)，室温搅拌过夜。直接旋干，成粘稠油状物质，放入烘箱60℃真空烘干,得到白色固体1.48g，即为目标产品。Rf＝0.05(PE/EA＝1：1)。LC-MS：m/z＝405.10[M-2HCl]+。
中间体4：4-(6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐
Figure BDA0002307183200000762
步骤1：(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在10ml微波管中依次加入4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，400mg,1.226mmol)，N-(4-甲基-4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(341mg，1.5912mmol)，DIPEA(1.01ml,6.11mmol)，用二甲基亚砜(4ml)溶解，微波150℃加热反应5h。加EA(50mL)，分别用水(20ml×2)，饱和食盐水(20ml)洗涤，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，硅胶柱层析纯化(PE/EA＝3：1-2:1)得到黄色固体0.35g即为目标产品，收率54.84％。Rf＝0.40(PE/EA＝1：1.5)。LC-MS：m/z＝521.30[M+H]+。
步骤2：4-(6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐
在100mL单口瓶中，依次加(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(350mg,0.6723mmol)，盐酸甲醇溶液(4mol/L,10ml)，室温搅拌过夜。直接旋干，成粘稠油状物质，放入烘箱60℃真空烘干,得到白色固体0.3317g即为目标产品，收率100％。LC-MS：m/z＝421.10[M-2HCl]+。
中间体5：4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000771
步骤1：3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
室温下，单口瓶中加入3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(5.0g,29mmol)，EtOH(50mL)，搅拌下分次加入NaBH4(1.1g,29mmol)。TLC监控反应结束后往反应液中加入饱和氯化铵溶液至不再产生气泡，析出大量白色固体，抽滤，滤饼用乙醇洗涤(10mL)，滤液减压浓缩除去大部分乙醇，加入30mL水，EA萃取(100mL)，合并有机相，水洗(20mL×2)，饱和氯化钠洗(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:5)，得无色油状物5.0g，即为目标产物。LC-MS:m/z＝118.10[M-tBu+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ4.53(s,1H),4.13-4.09(m,2H),3.78(dd,J＝9.9,4.1Hz,2H),3.54-3.45(m,1H),1.41(s,9H)。
步骤2：3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下双口瓶中加入3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(500mg,2.89mmol)，DCM(15mL)，NaH(0.14g,5.8mmol)，转移至0℃搅拌下逐滴滴加MsCl(0.25mL,3.2mmol)。加毕继续在此温度下反应。TLC监控反应结束后往反应液中加入水(20mL)DCM(50mL)，分离有机相，水相再用EA萃取(50mL)，合并有机相水洗涤(20mL×2)，饱和氯化钠洗涤(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥后过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:5)，得无色油状物566mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝196.10[M-tBu+H]+，m/z＝152.10[M-Boc+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ5.18(tt,J＝6.7,4.2Hz,1H),4.26(ddd,J＝10.3,6.7,1.0Hz,2H),4.11–4.04(m,2H),3.05(s,3H),1.43(s,9H)。
步骤3：3-((6-溴吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
室温下将6-溴吡啶-3-醇(200mg,1.15mmol)溶解于DMSO(4mL)，搅拌下加入t-BuOK(168mg,1.5mmol)，搅拌20min后升温至80℃，缓慢滴加溶解于DMSO(2mL)中的3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(347mg,1.4mmol)，加毕继续保持该温度下搅拌。TLC监控反应结束后将反应液倾倒入水中(20mL)，EA萃取(50mL×2)，合并有机相，水洗(20mL×2)，饱和食盐水洗(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:20-1:10)，得淡黄色固体320mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝329.05[M+H]+。
步骤4：3-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下，在双口瓶中加入3-((6-溴吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(320mg,0.97mmol)，CuI(37mg,0.19mmol)，PdCl2(PPh3)2(68mg,0.097mmol)，THF(3mL)和TEA(3mL)，转移至50℃搅拌下滴加乙炔基(三甲基)硅烷(191mg,1.95mmol)，加毕继续在此温度下反应。TLC监控反应结束后将反应液过硅藻土抽滤，滤饼用少量EA洗涤，滤液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:20-1:10)，得棕色固体240mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝347.25[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.12(s,1H),7.39(d,J＝8.6Hz,1H),6.97(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),4.92(ddd,J＝10.4,6.3,4.0Hz,1H),4.31(dd,J＝9.6,6.8Hz,2H),4.00(dd,J＝9.8,3.4Hz,2H),1.45(s,9H),0.26(s,9H)。
步骤5：3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
室温下将3-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(240mg,0.69mmol)溶解于甲醇(2mL)中，搅拌下加入碳酸钾(194mg,1.38mmol)，室温反应。TLC监控反应结束后将反应液浓缩，残留物加入水(10mL)，EA萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:20-1:10)，得淡黄色固体180mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝275.20[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(d,J＝2.8Hz,1H),7.43(d,J＝8.6Hz,1H),6.99(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),4.92(tt,J＝6.4,4.1Hz,1H),4.32(ddd,J＝9.7,6.3,0.6Hz,2H),4.01(dd,J＝9.9,3.9Hz,2H),3.09(s,1H),1.45(s,9H)。
步骤6：5-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-乙炔基吡啶盐酸盐
室温搅拌下将3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(180mg,0.66mmol)溶解于HCl/dioxane(3mL,12mmol,4mol/L)中。TLC监控反应完全后直接旋干反应液，得淡黄色固体158mg，即为目标产物。
步骤7：4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL微波管中依次加入4-(6-氟吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(300mg,1.18mmol)，5-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-乙炔基吡啶盐酸盐(373mg，1.77mmol)，DIPEA(0.6ml,3.54mmol)，用二甲基亚砜(3ml)溶解，微波85℃加热，5bar，运行8h。反应结束后反应液中加水20mL，EA(100ml×5)萃取，有机相分别用水(100ml×2)，饱和食盐水(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩硅胶柱层析纯化(PE/EA＝5：1 1:2)得到棕黄色固体301mg即为目标产物(收率62.45％)，Rf＝0.15(PE/EA＝1：1)。LC-MS：m/z＝409.20[M+H]+，1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.48(s,1H),8.31(d,J＝1.9Hz,1H),8.27(dd,J＝5.3,2.5Hz,2H),7.76(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.55(d,J＝8.6Hz,1H),7.35(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),7.15(d,J＝1.8Hz,1H),6.58(d,J＝8.6Hz,1H),5.31(d,J＝3.3Hz,1H),4.53–4.47(m,2H),4.16(s,1H),4.00(dd,J＝9.4,3.4Hz,2H),1.97(s,1H)。
中间体6：6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000791
步骤1：4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
20mL的微波管中加入叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(1g,5.3691mmol)，3-氰基-6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶(500mg,1.771mmol)和DMSO(10mL)，N,N-二异丙基乙胺(0.46g,3.6mmol)，置于150℃下微波反应3h。加入乙酸乙酯(50mL)和水(30mL)，水相用EA萃取(30mL×2)，合并有机相用饱和食盐水洗涤(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥过滤，硅胶柱层析纯化(PE/EA＝10/1-1/1)，得0.57g淡黄色固体即为目标化合物1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.64(s,1H),8.56(s,1H),8.34(s,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,1H),7.27(s,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),4.23-4.07(m,2H),3.59(d,J＝5.3Hz,4H),3.45(s,4H),1.42(d,J＝9.8Hz,9H),1.40-1.36(m,3H)。
步骤2：6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈-二三氟乙酸盐
冰浴条件下，100mL单口瓶中加入4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.57g,1.3mmol)，DCM(11mL)，搅拌5min后再加入TFA(3.5mL)，自然升至室温反应，TLC监控。反应完全直接旋干，泵抽得到淡棕色透明油状液体即为目标产物(收率100％)。LC-MS(ES-API):[M+H-2CF3COOH]＝349.2。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
50mL的单口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈-二三氟乙酸盐(1.12g,2.42mmol)，饱和碳酸氢钠溶液(22mL)，室温下搅拌反应5h。过滤，滤饼用10mL水洗涤，5mL正己烷洗涤，烘干得到淡黄色固体420mg，即为目标产物(收率50％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(d,J＝2.2Hz,1H),8.18(s,1H),8.09(d,J＝1.8Hz,1H),7.71(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.08(d,J＝1.8Hz,1H),6.75(d,J＝8.9Hz,1H),4.08(d,J＝7.0Hz,2H),3.63–3.59(m,4H),3.03–2.98(m,4H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H)。
中间体7：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐
Figure BDA0002307183200000792
步骤1：4-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
在30mL微波管中依次加入4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，0.75g,2.3mmol)，叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(0.5g，3.0mmol)，碳酸钾(1.0ml,7.2mmol)，用二甲基亚砜(8ml)溶解，微波150℃加热4h。低温条件下加水稀释(70mL)，用EA萃取(100mL×5)，合并有机相饱和食盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，硅胶柱层析纯化(PE/EA＝2：1-1:1)得到淡黄色固体0.65g即为目标产品(收率57％)。Rf＝0.50(PE/EA＝1：1)。LC-MS：m/z＝493.30[M+H]+。
步骤2：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐
在100mL单口瓶中，依次加4-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(650m g,1.32mmol)，盐酸甲醇溶液(4mol/L,10ml)，室温搅拌过夜。直接旋干反应液，成粘稠油状物质，放入烘箱60℃真空烘干,得到白色固体0.6141g即为目标产品，收率100％。Rf＝0.05(PE/EA＝1：1)。LC-MS：m/z＝393.20[M-2HCl]+。
中间体8：4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基[1,5-a]吡啶-3-甲腈盐酸盐
Figure BDA0002307183200000801
步骤1：3-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯
在10mL微波管中依次加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体1的合成，50mg,0.1771mmol)，3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(45.65mg，0.2303mmol)，DIPEA(0.146ml,0.883mmol)，用二甲基亚砜(0.5ml)溶解，微波150℃加热4h。降至室温加水(50mL)，用EA(50mL×2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，硅胶柱层析纯化(PE/EA＝5：1-2:1)得到白色固体55mg即为目标产品，收率67.43％。Rf＝0.60(PE/EA＝1：1)。LC-MS：m/z＝461.20[M+H]+。
步骤2：4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基[1,5-a]吡啶-3-甲腈盐酸盐
在10mL单口瓶中，依次加入3-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(55m g,3.19mmol)，盐酸甲醇溶液5ml(4mol/L,13ml)，室温搅拌过夜。直接旋干，成粘稠油状物质，放入烘箱60℃真空烘干,得到白色固体48.93mg即为目标产品。Rf＝0(PE/EA＝1：1)。LC-MS：m/z＝361.10[M-2HCl]+。
中间体9：4-(6-氟吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000802
步骤1：6-溴-4-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温条件下，在1L单口瓶中依次加6-溴-4-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(50g,198.36mmol)，水(16.5mL,916mmol)，氢氧化钠(16.03g,396.8mmol)，DMAC(500mL)，室温搅拌5min后转入0℃缓慢加入十二硫醇(97mL,397mmol)，加料结束后，反应转入45℃过夜。将反应液倒入3L冰水中，缓慢加入饱和柠檬酸水溶液调节PH＝5，搅拌半小时后静置，过滤，滤饼用水和石油醚多次洗涤，60℃烘干得到黄色固体44.1g即为目标产物(收率93.4％)。Rf＝0.35(PE/EA＝3：1)。LC-MS：m/z＝239.05[M+H]+。
步骤2：3-溴-3-氰基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基三氟甲磺酸酯
1L单口瓶中加入6-溴-4-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(44.1g,185mmol)，吡啶(45mL,559mmol)，DCM(800mL)，温度降到-10℃以下，缓慢加入三氟甲磺酸酐(50mL,297.2mmol)，搅拌1h后自然升到室温反应过夜。减压旋干DCM，加水(250ml)稀释，用EA萃取(500ml×3)，收集有机相，饱和食盐水洗涤(250ml)，无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液旋干，硅胶柱层析纯化(洗脱剂PE/EA＝50：1-25：1)得类黄色固体61.5g即为目标产物，收率89.7％。Rf＝0.45(PE/EA＝5：1)。
步骤3：6-溴-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
氮气保护条件下在1L三口瓶中加入3-溴-3-氰基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基三氟甲磺酸酯(61.5g,166mmol)，2-氟吡啶-5-硼酸酯(44.5g,200mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(6.8g,8.3mmol)，1,4-二氧六环(850mL)，温度降到-10℃下缓慢加入醋酸钾溶液(115mL,345mmol,3mol/L)，此温度下搅拌1h后自然恢复至室温继续反应过夜。过滤，EA(500ml×3)洗涤滤饼，滤液分出有机相水洗(500m l)，饱和食盐水洗涤(250ml)，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液旋干，硅胶柱层析纯化(洗脱剂PE/DCM＝2:1-0:1)，得白色固体49g，即为目标产物，收率93.0％。Rf＝0.50(PE/EA＝1：1)。LC-MS：m/z＝318.10[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.49(d,J＝1.2Hz,1H),8.73(s,1H),8.51(d,J＝1.9Hz,1H),8.27(td,J＝8.2,2.5Hz,1H),7.86(d,J＝1.2Hz,1H),7.40(dd,J＝8.4,2.5Hz,1H)。
步骤4：4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
250ml单口瓶中氮气保护条件下依次加入6-溴-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(8g,25.23mmol)，联硼酸频那醇酯(10g,39.39mmol)，乙酸钾(10g,101.9mmol)，重蒸甲苯(150mL)，氮气置换后再鼓泡10min后加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(2.1g,2.6mmo)，氮气置换鼓泡10min后120℃加热反应过夜。硅藻土过滤，EA洗涤(50ml×3)滤饼，有机相水洗(250mL)，用饱和食盐水洗(250mL)，无水硫酸钠干燥、过滤、旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE/DCM＝2:1-0:1)，收集旋干得到橘黄色固体8.5g，即为目标产物(收率93.0％)。Rf＝0.15(DCM)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.99(s,1H),8.43(d,J＝2.1Hz,1H),8.34(s,1H),8.02(td,J＝8.0,2.5Hz,1H),7.66(s,1H),7.13(dd,J＝8.5,2.8Hz,1H),1.40(s,12H)。
步骤5：4-(6-氟吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在250mL的单口瓶中依次加入4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(8.5g,23mmol)，四氢呋喃(120mL)，在冰浴条件下，缓慢加入氢氧化钠溶液(60mL,120mmol,2mol/L)，双氧水(14mL,140mmol,30mass％)，低温搅拌。TLC监控反应完全后缓慢加入硫代硫酸钠溶液(50mL,150mmol,3mol/L)，恢复室温后，加水(250mL)，EA萃取(250mL×2)，合并有机相用0.1M NaOH溶液洗(500mL×2)。合并所有水相，用稀盐酸将pH调到4,室温搅拌15min，抽滤，得到湿滤饼。母液EA萃取(250m l×3)，合并所有有机相，无水硫酸钠干燥、过滤、旋干，硅胶柱层析(洗脱剂DCM\MeOH＝100/0-100/1)得到浅黄色固体。合并所有固体，50℃烘干得到浅黄色固体5.1g即为目标产物(收率86.0％)。Rf＝0.25(DCM\MeOH＝100：1)。LCMS：m/z＝255.10[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.44-10.37(m,1H),8.54(s,1H),8.49-8.46(m,1H),8.42-8.40(m,1H),8.26-8.21(m,1H),7.40-7.35(m,1H),7.32-7.30(m,1H)。
实施例1：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(4-丙炔酰基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
Figure BDA0002307183200000821
步骤1：4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
在微波管中加入叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(1g,5.3691mmol)，6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(500mg,1.771mmol，参见中间体合成部分)和DMSO(10mL)，DIPEA(0.46g,3.6mmol)，置于150℃下微波反应。3h后停止微波反应，加入50mL乙酸乙酯和30mL水，分液，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相用饱和食盐水(30ml)洗涤，有机相无水硫酸钠干燥后过滤，蒸干有机溶剂粗品，柱层析纯化(PE/EA＝10/1-1/1),收集旋干得到0.57g淡黄色固体，收率72％。LC-MS:m/z＝449.2[M+1]+&m/z＝393.1[M-tBu+1]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.64(s,1H),8.56(s,1H),8.34(s,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,1H),7.27(s,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),4.23-4.07(m,2H),3.59(d,J＝5.3Hz,4H),3.41-3.49(m,4H),1.42(d,J＝9.8Hz,9H),1.40-1.36(m,3H)。
步骤2：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶■2,2,2-三氟乙酸盐
在100mL单口瓶中，加入4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1羧酸叔丁酯(0.57g,1.3mmol)，冰浴条件下加入DCM(11mL,79.1mmol)，搅拌5min后再加入TFA(3.5mL)，自然升至室温反应，TLC监控。5h后原料反应完毕，直接旋干，泵抽得到淡棕色透明油状液体，收率按100％计算。LC-MS:m/z＝349.2[M-CF3COO]+。
步骤3：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(4-丙炔酰基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
在25mL的单口瓶中加入3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶■2,2,2-三氟乙酸盐(200mg,0.4325mmol)，DCM(5mL)，冰浴条件下加入丙炔酸(0.04mL,0.6mmol),DCC(0.133g,0.645mmol),DIPEA(0.11g,0.85mmol)。自然升至室温搅拌反应，TLC监控(PE/EA＝1/1，rf＝0.55)。反应20h后补加丙炔酸(0.04mL),DIPEA(0.11g)继续反应24h。加入20mL二氯甲烷和15mL水，分出水相用20mL二氯甲烷萃取，合并有机相后用15mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，有机相蒸干后粗品硅胶柱层析，洗脱剂为PE/EA＝7/1-1/1，收集旋干得到淡黄色固体7.8mg，收率4.5％。LC-MS:401.1[M+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.12(d,J＝1.9Hz,1H),7.76(d,J＝6.8Hz,1H),7.10(d,J＝1.9Hz,1H),6.80(d,J＝8.7Hz,1H),4.09(q,J＝7.0Hz,2H),3.95–3.88(m,2H),3.84–3.71(m,4H),3.71–3.64(m,2H),3.18(s,1H),1.50(t,J＝7.0Hz,3H)。
实施例2：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(4-(3-苯基丙炔酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
Figure BDA0002307183200000822
步骤1：4-(3-苯基丙炔酰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
在单口瓶中将哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg,2.6846mmol)用DCM(10mL)溶解，室温搅拌下加入3-苯基丙-2-炔酸(0.47g,3.2mmol)，DCC(0.83g,4.0mmol)，反应过夜。加入20mLDCM和15mL水，分出水相用20mLDCM萃取，合并有机相后用15mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干有机溶剂的粗品，硅胶柱层析，洗脱剂为PE/EA＝10/1-4/1，收集旋干得到淡黄色固体0.57g，收率68％。
步骤2：3-苯基-1-(哌嗪-1-基)丙-2-炔-1-酮■2,2,2-三氟乙酸盐
在装有4-(3-苯基丙炔酰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.57g,1.8mmol)的50mL单口瓶中，加入DCM(6mL)溶解后加入TFA(2.0mL)，室温下搅拌反应。3h后TLC检测反应完成。直接旋干反应液得到无色透明油状液体产品。按理论收率直接投下一步反应。Rf＝0.01(PE:EA＝1:1)。
步骤3：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(4-(3-苯基丙炔酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
于微波管中称取3-氰基-4-(6-氟吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶(100mg,0.3542mmol，参见中间体合成部分)，3-苯基-1-(哌嗪-1-基)丙-2-炔-1-酮■2,2,2-三氟乙酸盐(350mg,1.1mmol)，加入DMSO(2mL)溶解后再加入DIPEA(0.25mL,1.5mmol)，135℃微波反应约7h。反应完后向反应液中加入30mL乙酸乙酯和15mL水，分出水相用EA萃取(20mL×2)，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥后蒸干有机溶剂粗品柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:5-1:1，收集得淡黄色固体46mg，收率69.7％。Rf＝0.5(PE:EA＝3:1)。LC-MS:477.1[M+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.12(d,J＝1.8Hz,1H),7.75(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.58(d,J＝7.1Hz,2H),7.41(dt,J＝14.6,7.1Hz,3H),7.10(d,J＝1.8Hz,1H),6.80(d,J＝8.8Hz,1H),4.09(dd,J＝13.8,6.9Hz,2H),4.01–3.95(m,2H),3.87–3.77(m,4H),3.73–3.68(m,2H),1.50(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例3：N-(1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-苯丙炔酸酰胺
Figure BDA0002307183200000831
步骤1：4-甲基-4-(3-苯丙炔酸酰胺)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在25mL的双口瓶中加入4-氨基-4-甲基-哌啶-1-叔丁羧酸酯(400mg,1.8665mmol)，DCM(8mL)，室温条件下加入苯丙炔酸(0.33g,2.3mmol)，DCC(0.6g,3mmol),搅拌反应过夜。TLC监控反应完毕后加入20mL二氯甲烷和15mL水，分出水相用20mL DCM萃取，合并有机相后用15mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析，洗脱剂为PE/EA＝10/1-4/1,收集旋干得到淡黄色固体128mg，收率20％。m/z＝365.1[M+Na]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.55(d,J＝7.0Hz,2H),7.43(t,J＝7.4Hz,1H),7.37(t,J＝7.3Hz,2H),3.84–3.77(m,2H),3.66(d,J＝5.3Hz,2H),3.55–3.50(m,2H),3.46(d,J＝5.4Hz,2H),1.61(s,3H),1.48(s,9H)。
步骤2：N-(4-甲基哌啶-4-基)-3-苯丙炔酰胺■2,2,2-三氟乙酸盐
在装有4-甲基-4-(3-苯丙炔酸酰胺)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.125g,0.365mmol)的50mL单口瓶中，加入DCM(5mL)溶解后加入TFA(0.5mL)，室温下搅拌反应。5h后TLC检测反应完成。直接旋干反应液得到无色透明油状液体产品。按理论收率直接投下一步反应。Rf＝0.01(PE:EA＝1:1)。
步骤3：N-(1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-苯丙炔酸酰胺
于微波管中称取3-氰基-4-(6-氟吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶(50mg,0.1771mmol，参见中间体合成部分)，N-(4-甲基哌啶-4-基)-3-苯丙炔酰胺■2,2,2-三氟乙酸盐(130mg,0.36mmol)，加入DMSO(2mL)溶解后再加入DIPEA(0.15mL,0.91mmol)，130℃微波反应5h。向反应液中加入30ml乙酸乙酯和15ml水，分出水相用乙酸乙酯萃取(20ml×2)，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥后蒸干有机溶剂的粗品过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:5-1:1，收集得淡黄色固体26mg，收率27.37％。Rf＝0.5(PE:EA＝1:1)。LC-MS:505.2[M+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36-8.31(m,1H),8.18(s,1H),8.10(s,1H),7.74-7.67(m,1H),7.53(s,2H),7.35(s,3H),7.09(s,1H),6.85-6.76(m,1H),5.77-5.67(m,1H),4.08(d,J＝7.0Hz,2H),4.02-3.92(m,2H),3.47-3.37(m,2H),2.28-2.21(m,2H),1.83-1.74(m,2H),1.54(s,3H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例4：N-(1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-4-乙炔基苯甲酰胺
Figure BDA0002307183200000841
步骤1：4-乙炔基苯甲酸
在25mL单口瓶中将4-乙炔基苯甲酸甲酯(200mg,1.2487mmol)溶于THF(4mL)中，搅拌下加入含氢氧化钠(125mg,3.1252mmol)的自来水(4mL)溶液，加毕后在置于室温下搅拌，溶液呈红棕色。反应2h，TLC检测反应完成。搅拌下加入1N稀盐酸调节pH至1，析出大量淡黄色固体，转移至分液漏斗中加入EA萃取(50mL×3)，合并有机相，50mL饱和氯化钠洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后旋干得黄色固体180mg。收率98.64％。Rf＝0.01(PE:EA＝8:1)。LC-MS:m/z＝147.1[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO)δ7.93(d,J＝8.2Hz,2H),7.59(d,J＝8.2Hz,2H),4.44(s,1H)。
步骤2：4-(4-乙炔基苯甲酰氨基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯
0℃下，在25mL单口瓶中加入4-氨基-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg,0.93327mmol)和4-乙炔基苯甲酸(178mg,1.2180mmol)，加入DCM(4mL)溶解，搅拌下加入DCC(289mg,1.401mmol)和DMAP(12mg,0.098224mmol)加毕使自然升温至室温，反应液呈橙黄色。反应4.5h TLC检测反应完成。往反应液中加入10mL水，将反应液转移至分液漏斗中加DCM(30mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:3-1:2，得无色油状物210mg。收率65.72％。Rf＝0.5(PE:EA＝1:1)。LC-MS:m/z＝287.20[M-tBu+2H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(d,J＝8.3Hz,2H),7.54(d,J＝8.1Hz,2H),5.79(s,1H),3.70(s,2H),3.20(d,J＝6.2Hz,3H),2.16(s,2H),1.72–1.64(m,2H),1.52(s,3H),1.46(s,9H)。
步骤3：4-乙炔基-N-(4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺■2,2,2-三氟乙酸盐
在10mL单口瓶中将4-(4-乙炔基苯甲酰氨基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(210mg,0.6133mmol)用DCM(4.2mL)溶解，搅拌下滴加TFA(0.91mL,12mmol)，加毕在室温下搅拌。反应3h，TLC检测反应完成。直接旋干反应液，得淡黄色透明油状物230mg，按理论收率直接投下一步反应。Rf＝0.01(PE:EA＝1:1)。
步骤4：N-(1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-4-乙炔基苯甲酰胺
10mL微波管中称取3-氰基-6-乙氧基-4-(6-氟-吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶(85mg,0.3011mmol，参见中间体合成部分)，4-乙炔基-N-(4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺■2,2,2-三氟乙酸盐(215mg,0.6034mmol)，加入DMSO(1.7mL)溶解后再加入DIPEA(0.25mL,1.5mmol)，微波(温度150℃，压力10bar)反应3h。TLC检测反应完成。待温度降至室温后，将反应液倒入20mL水中，有大量黑色固体析出，滤出黑色固体，水相加入EA萃取(50mL×3)，合并有机相，50mL饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后旋干与黑色固体合并过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:4-1:1，得淡黄色固体24mg。收率15.80％。Rf＝0.2(PE:EA＝1:1)。LC-MS:505.30[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.10(d,J＝1.7Hz,1H),7.71(d,J＝8.2Hz,3H),7.55(d,J＝8.2Hz,2H),7.09(s,1H),6.82(d,J＝8.9Hz,1H),5.90(s,1H),4.08(dd,J＝14.1,7.0Hz,2H),4.01(d,J＝13.4Hz,2H),3.43(t,J＝11.2Hz,2H),3.19(s,1H),2.33(d,J＝12.8Hz,2H),1.92–1.82(m,2H),1.59(s,3H),1.50(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例5：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(4-(4-乙炔基苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
Figure BDA0002307183200000851
步骤1：4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
于微波管中加入3-氰基-6-乙氧基-4-(6-氟-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]吡啶(600mg,2.125mmol，参见中间体的合成部分)，叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(1.19g,6.39mmol)，加入DMSO(12mL)溶解后再加入DIPEA(0.7mL,4mmol)，微波反应(150℃，压力10bar)3h。TLC检测反应完成。待反应体系冷却至室温，往反应液中加入水40mL，用EA萃取(100mL×3)，合并有机相，50mL饱和食盐水洗，有机相无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:10-1:4，得淡黄色固体630mg。收率66.09％。
Rf＝0.2(PE:EA＝4:1)。LC-MS:m/z＝449.20[M+H]+。
步骤2：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶■2,2,2-三氟乙酸盐
在单口瓶中加入4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(630mg,1.405mmol)，用DCM(12.6mL)溶解，搅拌下滴加TFA(2.09mL,28.1mmol)，加毕，室温下搅拌反应3h，TLC检测反应完成。直接旋干溶剂，得黄色固体657mg，按理论收率直接投下一步反应。Rf＝0.01(PE:EA＝1:1)。
步骤3：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(4-(4-乙炔基苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
在单口瓶中将3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶■三氟乙酸盐(50mg,0.1110mmol)，4-乙炔基苯甲酸(20mg,0.13686mmol)溶解于DCM(1mL)中，0℃搅拌下加入DIPEA(28mg,0.21665mmol)，DCC(34mg,0.1648mmol)，加毕使自然升温至室温，搅拌过夜。TLC检测反应完成，往反应液中加入水(2mL)和DCM(5mL)，分离有机相，水相再用DCM(5mL)萃取一遍，合并有机相，无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:2-2:1，得淡黄色固体16mg。收率31.05％。Rf＝0.4(PE:EA＝1:1)。LC-MS:m/z＝477.10[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.11(d,J＝1.8Hz,1H),7.74(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),7.56(d,J＝8.1Hz,2H),7.42(d,J＝8.1Hz,2H),7.09(d,J＝1.8Hz,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,1H),4.09(q,J＝13.8,6.8Hz,2H),3.73(t,J＝66.0Hz,8H),3.16(s,1H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例6：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(4-(3-乙炔基苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
Figure BDA0002307183200000861
步骤1：4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
于微波管中加入3-氰基6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶(600mg,2.125mmol，参见中间体的合成部分)，叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(1.19g,6.39mmol)，加入DMSO(12mL)溶解后再加入DIPEA(0.7mL,4mmol)，微波反应(150℃，压力10bar)3h。TLC检测反应完成。待反应体系冷却至室温，往反应液中加入水40mL，用EA萃取(100mL×3)，合并有机相，50mL饱和食盐水洗，有机相无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:10-1:4，得淡黄色固体630mg。收率66.09％。
Rf＝0.2(PE:EA＝4:1)。LC-MS:m/z＝449.20[M+H]+。
步骤2：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶■2,2,2-三氟乙酸盐
在单口瓶中加入4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(630mg,1.405mmol)，用DCM(12.6mL)溶解，搅拌下滴加TFA(2.09mL,28.1mmol)，加毕，室温下搅拌反应3h，TLC检测反应完成，Rf＝0.01(PE:EA＝1:1)。直接旋干溶剂，得黄色固体657mg，按理论收率直接投下一步反应。。
步骤3：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(4-(3-乙炔基苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
在单口瓶中将3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶■2,2,2-三氟乙酸盐(50mg,0.1081mmol)，3-乙炔基苯甲酸(20mg,0.13686mmol)溶解于DCM(1mL)中，0℃搅拌下加入DIPEA(28mg,0.21665mmol)，DCC(35mg,0.1697mmol)，加毕使自然升温至室温，搅拌过夜。TLC检测反应完成。往反应液中加入2mL水和5mL DCM，分离有机相，水相再用5mL DCM萃取一遍，合并有机相，无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:2-2:1，得淡黄色固体17mg。收率32.99％。Rf＝0.4(PE:EA＝1:1)。LC-MS:m/z＝477.10[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.11(d,J＝1.9Hz,1H),7.75(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.57(d,J＝4.9Hz,2H),7.42(d,J＝7.7Hz,2H),7.09(d,J＝1.9Hz,1H),6.79(d,J＝8.9Hz,1H),4.09(q,J＝6.9Hz,2H),3.73(t,J＝65.5Hz,8H),3.13(s,1H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例7：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(4-(5-乙炔基吡啶甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
Figure BDA0002307183200000862
步骤1：5–((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入5-溴吡啶甲酸甲酯(500mg,2.3145mmol)，CuI(53mg,0.27829mmol)和PdCl2(PPh3)2(49mg,0.06981mmol)，加入无水THF(3mL)溶解后滴加乙炔基(三甲基)硅烷(273mg,2.779mmol)，溶液呈橙色，再在室温搅拌下滴加TEA(1.5mL)，溶液变成黑色。反应4h TLC检测反应完成。往反应液加入20mL水淬灭反应，加入50mL EA，有大量棕色固体析出，铺硅藻土抽滤，滤液分离有机相，水相加加EA萃取(50mL×2)，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:10-1:5，得黄色固体450mg。收率83.32％。Rf＝0.5(PE:EA＝5:1)。LC-MS:m/z＝234.20[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(s,1H),8.07(d,J＝8.1Hz,1H),7.87(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H),4.00(s,3H),0.27(s,9H)。
步骤2：5-乙炔基吡啶甲酸
氮气保护下，在双口瓶中将5–((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶甲酸甲酯(450mg,1.9285mmol)溶解于无水甲醇(9mL)中，室温搅拌下一次性加入碳酸钾(533mg,3.8565mmol)，搅拌过夜。往反应液中加入20mL水，用1N稀盐酸调节pH＝1，加EA萃取(50mL×3)，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后旋干得黄色固体280mg。收率98.68％。Rf＝0.01(PE:EA＝5:1)。LC-MS:m/z＝148.10[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.78(s,1H),8.08(d,J＝8.1Hz,1H),8.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.67(s,1H)。
步骤3：5-乙炔基吡啶甲酰氯
氮气保护下，在双口瓶中将5-乙炔基吡啶甲酸(20mg,0.13593mmol)溶解于DCM(5mL)中，搅拌下加入DMF(0.01mL)，5min后逐滴滴加SOCl2(20mg,0.16811mmol)，加毕，溶液有大量黄色固体析出，继续在此温度下搅拌。固体随时间逐渐溶解，溶液逐渐变成橙色，澄清透明。反应0.5h直接旋干反应液，抽干未经进一步纯化即投下一步反应。收率按100％算。
步骤4：4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
于微波管中加入3-氰基-6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶(600mg,2.125mmol)，叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(1.19g,6.39mmol)，加入DMSO(12mL)溶解后再加入DIPEA(0.7mL,4mmol)，微波反应(150℃，压力10bar)3h。TLC检测反应完成，Rf＝0.2(PE:EA＝4:1)。待反应体系冷却至室温，往反应液中加入水40mL，用EA萃取(100mL×3)，合并有机相，50mL饱和食盐水洗，有机相无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:10-1:4，得淡黄色固体630mg。收率66.09％。LC-MS:m/z＝449.20[M+H]+。
步骤5：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶■2,2,2-三氟乙酸盐
在单口瓶中加入4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(630mg,1.405mmol)，用DCM(12.6mL)溶解，搅拌下滴加TFA(2.09mL,28.1mmol)，加毕，室温下搅拌反应3h，TLC检测反应完成。直接旋干溶剂，得黄色固体657mg，按理论收率直接投下一步反应。Rf＝0.01(PE:EA＝1:1)。
步骤5：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(4-(5-乙炔基吡啶甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
氮气保护下，在双口瓶中将5-乙炔基吡啶甲酰氯(21.5mg,0.130mmol)用DCM(5mL)溶解，搅拌下加入TEA(33mg,0.32612mmol)，3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶■2,2,2-三氟乙酸盐(50mg,0.1081mmol)，溶液呈橙色，澄清透明。反应2h，TLC检测反应完成。往反应液中加入2mL水和5mL DCM，分离有机相，水相再用5mLDCM萃取一遍，合并有机相，无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:5-1:2。得类白色固体8mg，收率15.49％。Rf＝0.2(PE:EA＝1:1)。LC-MS:m/z＝478.15[M+H]+。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ8.70(s,1H),8.35(s,1H),8.19(s,1H),8.11(s,1H),7.90(d,J＝8.0Hz,1H),7.74(d,J＝8.7Hz,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.09(s,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,1H),4.09(q,J＝6.8Hz,2H),3.97–3.94(m,2H),3.81–3.78(m,4H),3.74–3.71(m,2H),3.31(s,1H),1.50(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例8：N-(1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-乙炔基吡啶酰胺
Figure BDA0002307183200000881
步骤1：5–((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入5-溴吡啶甲酸甲酯(500mg,2.3145mmol)，CuI(53mg,0.27829mmol)和PdCl2(PPh3)2(49mg,0.06981mmol)，加入无水THF(3mL)溶解后滴加乙炔基(三甲基)硅烷(273mg,2.779mmol)，溶液呈橙色，再在室温搅拌下滴加TEA(1.5mL)，溶液变成黑色。反应4h TLC检测反应完成。往反应液加入20mL水淬灭反应，加入50mL EA，有大量棕色固体析出，铺硅藻土抽滤，滤液分离有机相，水相加加EA萃取(50mL×2)，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:10-1:5，得黄色固体450mg。收率83.32％。Rf＝0.5(PE:EA＝5:1)。LC-MS:m/z＝234.20[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(s,1H),8.07(d,J＝8.1Hz,1H),7.87(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H),4.00(s,3H),0.27(s,9H)。
步骤2：5-乙炔基吡啶甲酸
氮气保护下，在双口瓶中将5–((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶甲酸甲酯(450mg,1.9285mmol)溶解于无水甲醇(9mL)中，室温搅拌下一次性加入碳酸钾(533mg,3.8565mmol)，搅拌过夜。往反应液中加入20mL水，用1N稀盐酸调节pH＝1，加EA萃取(50mL×3)，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后旋干得黄色固体280mg。收率98.68％。Rf＝0.01(PE:EA＝5:1)。LC-MS:m/z＝148.10[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.78(s,1H),8.08(d,J＝8.1Hz,1H),8.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.67(s,1H)。
步骤3：5-乙炔基吡啶甲酰氯
氮气保护下，在双口瓶中将5-乙炔基吡啶甲酸(50mg,0.33984mmol)溶解于DCM(10mL)中，搅拌下加入DMF(0.02mL)，5min后逐滴滴加SOCl2(50mg,0.42027mmol)，加毕，溶液有大量黄色固体析出，继续在此温度下搅拌。固体随时间逐渐溶解，溶液逐渐变成橙色，澄清透明。反应0.5h直接旋干反应液，抽干未经进一步纯化即投下一步反应。
步骤4：4-(5-乙炔基吡啶甲酰胺基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下，在双口瓶中将4-氨基-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(60mg,0.27998mmol)和5-乙炔基吡啶酰氯(56mg,0.33821mmol)在室温搅拌下用DCM(6mL)溶解，溶清后滴加入TEA(57mg,0.56330mmol)，加毕，继续在此温度下搅拌，溶液呈橙黄色。反应3hTLC检测反应完成。往反应液中加入水5mL和DCM 10mL，分离有机相，水相再用DCM萃取(10mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:5-1:3，得淡黄色油状物90mg。收率93.61％。Rf＝0.3(PE:EA＝3:1)。LC-MS:m/z＝283.30[M-tBu+2H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(s,1H),8.11(dd,J＝7.7,3.8Hz,1H),7.98–7.86(m,2H),3.83–3.69(m,2H),3.33(s,1H),3.14(dd,J＝16.1,8.4Hz,2H),2.28–2.18(m,2H),1.67–1.64(m,2H),1.51(s,3H),1.44(s,9H)。
步骤5：5-乙炔基-N-(4-甲基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺■2,2,2-三氟乙酸盐
在单口瓶中将4-(5-乙炔基吡啶酰胺基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(90mg,0.2621mmol)用DCM(2mL)溶解，室温搅拌下滴加入TFA(0.39mL,5.3mmol)。加毕，继续在此温度下搅拌。反应3h TLC检测反应完成，Rf＝0.01(PE:EA＝3:1)。直接旋干反应液，得淡黄色油状液体150mg。
步骤6：N-(1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-乙炔基吡啶酰胺
在微波管中称取3-氰基-6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶(50mg,0.1771mmol，参考中间体的合成)，5-乙炔基-N-(4-甲基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺■2,2,2-三氟乙酸盐(95mg,0.2659mmol)，用DMSO(2mL)溶解后加入DIPEA(0.09mL,0.5mmol)，微波(150℃，10bar)反应2.5h。将反应液倒入10mL水中，用EA(30mL×3)萃取，合并有机相，30mL饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:5-1:1，得淡黄色固体18mg，Rf＝0.5(PE:EA＝2:1)，收率20.10％。LC-MS:506.20[M+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.60(s,1H),8.31(d,J＝2.3Hz,1H),8.17(s,1H),8.13(d,J＝8.0Hz,1H),8.08(d,J＝1.9Hz,1H),8.05(s,1H),7.91(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),7.68(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),7.06(d,J＝2.0Hz,1H),6.78(d,J＝8.9Hz,1H),4.12-4.06(m,4H),3.40-3.33(m,2H),3.32(s,1H),2.41-2.35(m,2H),1.81(t,J＝10.3Hz,2H),1.57(s,3H),1.48(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例9：N-(1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-乙炔基苯甲酰胺
Figure BDA0002307183200000891
步骤1：4-(3-乙炔基苯甲酰氨基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯
50mL反应瓶中称入4-氨基-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg,2.33mmol)，3-乙炔基苯甲酸(409mg,2.80mmol)，DCC(729mg,3.50mmol)，DMAP(28mg,0.23mmol)，置换氮气，加入DCM(23mL)溶解，室温搅拌过夜。TLC监测已反应完全，用砂芯漏斗过滤反应液白色不溶固体，滤饼以二氯甲烷洗涤两次，滤液减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝6:1-4:1)，得白色固体795mg即为目标产物(收率99.5％)。LC-MS：m/z＝365.20[M+Na]+,287.20[M-tBu+2H]+；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(s,1H),7.72(d,J＝7.8Hz,1H),7.60(d,J＝7.7Hz,1H),7.41(t,J＝7.8Hz,1H),5.79(s,1H),3.70(br s,2H),3.21(ddd,J＝13.6,10.3,3.2Hz,2H),3.13(s,1H),2.18(br s,2H),1.72–1.64(m,2H),1.52(s,3H),1.46(s,9H)。
步骤2：4-(3-乙炔基苯甲酰氨基)-4-甲基哌啶-1-鎓■2,2,2-三氟乙酸盐
室温下，将4-(3-乙炔基苯甲酰氨基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(790mg,2.31mmol)溶于DCM(23mL)，搅拌下向其中加入三氟乙酸(1.7mL,23mmol)，反应过夜。TLC监测反应完全，减压旋干。即得粗产物，不做进一步纯化，直接用于下一步反应，反应以100％收率计。LC-MS：m/z＝243.1[M-CF3COO]+；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.46(br s,1H),8.23(brs,1H),7.78(s,1H),7.66(dd,J＝18.3,7.8Hz,2H),7.42(t,J＝7.8Hz,1H),6.18(s,1H),3.33(br s,4H),3.15(s,1H),2.64(d,J＝15.0Hz,2H),2.02–1.90(m,2H),1.58(s,3H)。
步骤3：N-(1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-乙炔基苯甲酰胺
4-(3-乙炔基苯甲酰氨基)-4-甲基哌啶-1-鎓■2,2,2-三氟乙酸盐(126mg,0.36mmol)和6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(47.8mg,0.17mmol)溶于DMSO(2mL)，向其中加入DIPEA(0.22mL,1.3mmol)，微波反应3h(150℃，10bar,预搅拌30s)。待反应液冷却至室温后，加入EA(100mL)稀释，有机相依次以水(20mL)，饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，残余物上样硅胶柱层析(PE:EA＝2:1-1.5:1)，得淡黄色固体20.3mg即为目标产物(收率23.8％)。LC-MS:m/z＝505.3[M+H]+；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ8.33(s,1H),8.18(s,1H),8.09(s,1H),7.83(s,1H),7.74(d,J＝7.4Hz,1H),7.70(d,J＝8.5Hz,1H),7.60(d,J＝7.2Hz,1H),7.40(d,J＝7.5Hz,1H),7.08(s,1H),6.80(d,J＝8.7Hz,1H),5.94(s,1H),4.12–4.04(m,2H),3.99(d,J＝13.2Hz,2H),3.41(t,J＝10.7Hz,2H),3.12(s,1H),2.32(d,J＝13.1Hz,2H),1.84(t,J＝9.9Hz,2H),1.58(s,3H),1.49(t,J＝5.9Hz,3H)。
实施例257：4-(6-(6-((6-乙炔基-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000901
步骤1：6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶
室温，氮气保护下，向6-溴吡啶-3-甲醛(1000mg,5.3761mmol)，双(三苯基膦)二氯化钯(151mg,0.215128mmol)和碘化亚铜(52mg,0.27304mmol)体系中加入三乙胺(8.1mL,58mmol)、三甲基硅乙炔(1.52mL,10.8mmol)，室温反应7h。减压蒸干溶剂，残余物拌硅胶上样，硅胶柱层析(PE:EA＝10:1-8:1)，得黄白色固体0.66g(收率60％)，即为目标产物。
步骤2：6-乙炔基烟碱醛
在25mL的单口瓶中，依次加入6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶(660mg,3.2463mmol)、碳酸钾(897mg,6.4901mmol)和甲醇(8.12mL)，室温搅拌反应过夜。饱和NH4Cl(10mL)淬灭反应。减压蒸除有机溶剂，剩余溶液以EA(20mL×2)萃取，有机相合并，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，残余物上样，硅胶柱层析(PE:EA＝10:1-4:1)，得白色固体240mg(收率56.4％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝132.1[M+H]。
步骤3：4-(6-(6-((6-乙炔基-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL的单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，25mg,0.05237mmol)，6-乙炔基烟碱醛(10mg,0.076260mmol)，DCM(2mL)，三乙酰基硼氢化钠(45mg,0.21232mmol)，室温下反应过夜。直接旋干，残渣硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/4)，得到白色固体12mg(收率44.10％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝520.2[M+H]；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.58(s,1H),8.41(d,J＝2.2Hz,1H),8.22(s,1H),8.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.78(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.73(d,J＝7.5Hz,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.17(d,J＝2.0Hz,1H),6.69(d,J＝8.8Hz,1H),3.87(s,2H),3.85-3.77(m,4H),3.68(s,2H),3.66-3.58(m,2H),3.13(s,1H),2.78-2.69(m,1H),2.05-1.98(m,1H),1.40(s,6H)。HPLC:97.65％。
实施例258：4-(6-(6-((5-乙炔基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000911
步骤1：5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶
室温下，氮气保护下，向5-溴-吡啶-3-甲醛(600mg,3.2256mmol)，双(三苯基膦)二氯化钯(90mg,0.128222mmol)和碘化亚铜(30mg,0.15752mmol)的混合物中依次加入三乙胺(4.8mL,34mmol)和三甲基硅乙炔(0.91mL,6.4mmol)，室温反应过夜。减压蒸干溶剂，残余物拌硅胶上样，硅胶柱层析(PE:EA＝20:1)，得淡黄色固体591mg(收率90％)，即为目标产物。
步骤2：5-乙炔基烟碱醛
室温下，向5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶(591mg,2.9069mmol)的甲醇(7.3mL)溶液加入碳酸钾(40mg,0.28941mmol)，室温反应1h。饱和NH4Cl(10mL)淬灭反应。减压蒸除有机溶剂，剩余溶液以EA(40mL×2)萃取，有机相合并，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，残余物上样，硅胶柱层析(PE:EA＝15:1)，得白色固体350mg(收率91.8％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝132.10[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.10(s,1H),9.02(s,1H),8.92(s,1H),8.22(s,1H),3.32(s,1H)。
步骤3：4-(6-(6-((5-乙炔基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL的单口瓶中依次加入在10ml的单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，12mg,0.02967mmol)，5-乙炔基烟碱醛(10mg,0.076260mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(19mg,0.089648mmol)，DCE(2mL)，35℃下反应4.5h。直接旋干，残渣硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/4)，得到白色固体4mg(收率24.0％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝520.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(d,J＝2.0Hz,1H),8.21(s,1H),8.16(d,J＝1.1Hz,1H),7.78(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.44-7.39(m,1H),7.15(s,1H),7.09-7.04(m,2H),6.70(d,J＝8.5Hz,1H),4.01-3.95(m,2H),3.92-3.84(m,4H),3.74-3.63(m,4H),3.59-3.48(m,4H),2.79-2.74(m,1H),2.25-2.18(m,1H),1.40(s,6H)。HPLC:93.76％。
实施例259：4-(6-(6-(4-乙炔基苄基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000921
步骤1：4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲醛
室温下，氮气保护下，向4-溴苯甲醛(600mg,3.2429mmol)，双(三苯基膦)二氯化钯(91mg,0.129647mmol)，碘化亚铜(30mg,0.15752mmol)的混合物中依次加入三乙胺(4.9mL,35mmol)和三甲基硅乙炔(0.92mL,6.5mmol)，室温反应过夜。减压蒸干溶剂，残余物拌硅胶上样，硅胶柱层析(PE:EA＝20:1)，得黄色固体631mg(收率96.2％)，即为目标产物。
步骤2：4-乙炔基苯甲醛
室温下，向4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲醛(631mg,3.1188mmol)的甲醇(7.8mL)溶液加入碳酸钾(43mg,0.31112mmol)。室温反应4h。饱和NH4Cl(10mL)淬灭反应。减压蒸除有机溶剂，剩余溶液以EA(40mL×2)萃取，有机相合并，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，残余物上样，硅胶柱层析(PE:EA＝15:1)，得白色固体378mg(收率93.1％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝131.10[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.99(s,1H),7.82(d,J＝8.2Hz,2H),7.61(d,J＝8.1Hz,2H),3.29(s,1H)。
步骤3：4-(6-(6-(4-乙炔基苄基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL的单口瓶中依次加入在10ml的单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15mg,0.03708mmol)，4-乙炔基苯甲醛(10mg,0.076840mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(24mg,0.11324mmol)，DCE(2mL)，35℃下反应过夜。直接旋干，残渣硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/4)，得到白色固体12mg(收率57.7％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝519.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(d,J＝1.9Hz,1H),8.22(s,1H),8.16(d,J＝1.7Hz,1H),7.78(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,2H),7.36(d,J＝7.7Hz,2H),7.17(d,J＝1.6Hz,1H),6.69(d,J＝8.9Hz,1H),3.89-3.80(m,6H),3.72-3.57(m,5H),3.05(s,1H),2.82-2.72(m,1H),2.05-1.99(m,1H),1.40(s,6H)。HPLC:95.37％。
实施例260：4-(6-(6-((5-乙炔基吡啶-2-基)甲基)-3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-氢-2-甲基丙氧基)吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000922
步骤1：5-((三甲基硅基)乙炔基)吡啶醛
N2保护下，5-溴吡啶-2-乙醛(1.00g,5.38mmol)，PdCl2(PPh3)2(0.38g,0.54mmol)，CuI(102mg,0.54mmol)，PPh3(141mg,0.54mmol)溶于THF(15mL)中，加入三甲基硅乙炔(0.79g,8.0mmol)和Et3N(1.09g,10.8mmol)，室温搅拌反应2h。停止反应，饱和NH4Cl淬灭反应，EA(10mL×3)萃取，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(淋洗液PE/EA＝10/1-3/1)，得黄棕色固体0.69g，即为目标产物(产率63％)。LC-MS:m/z＝204.1[M+H]+。
步骤2：4-(6-(6-((5-乙炔基吡啶-2-基)甲基)-3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-氢-2-甲基丙氧基)吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲腈
4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，19mg,0.04mmol)和5-((三甲基硅基)乙炔基)吡啶醛(12mg,0.06mmol)溶于DCE(2mL)，缓慢加入三乙酰基硼氢化钠(165mg,1.19mmol)，室温继续搅拌反应12h。反应液直接浓缩，残渣用CH3OH(5mL)溶解后，加入K2CO3(0.30g)，常温搅拌反应0.5h。反应液浓缩，残渣硅胶柱层析(淋洗液DCM/CH3OH＝50/1-20/1)，得黄棕色固体4mg，即为目标产物。LC-MS：m/z＝520.1[M+H]。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.66(s,1H),8.42(d,J＝2.1Hz,1H),8.23(s,1H),8.19(d,J＝1.7Hz,1H),7.85–7.74(m,2H),7.45(d,J＝8.1Hz,1H),7.18(d,J＝1.8Hz,1H),6.73(d,J＝8.9Hz,1H),4.08–3.92(m,4H),3.89(s,2H),3.88(s,2H),3.71(d,J＝11.4Hz,2H),3.21(s,1H),2.90–2.81(m,1H),1.78–1.72(m,1H),1.42(s,6H)。HPLC:97.24％。
实施例261：4-(6-(6-((6-乙炔基吡啶-2-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000931
步骤1：6-(2-三甲基硅乙炔基)吡啶-2-甲醛
室温下，氮气保护下，向6-溴吡啶-2-甲醛(A,600mg,3.226mmol)，双(三苯基膦)二氯化钯(90mg,0.128mmol)和碘化亚铜(30mg,0.157mmol)的混合物中依次加入三乙胺(4.8mL,34mmol)和三甲基硅乙炔(B,0.91mL,6.4mmol)，室温反应过夜。减压蒸干溶剂，残余物拌硅胶上样，硅胶柱层析(PE:EA＝10:1)，得黄色固体398mg(收率60.7％)，即为目标产物。
步骤2：6-乙炔基吡啶甲醛
室温下，向6-(2-三甲基硅乙炔基)吡啶-2-甲醛(398mg,1.957mmol)的甲醇(4.9mL)溶液加入碳酸钾(27mg,0.195mmol)。室温反应1h。饱和NH4Cl(10mL)淬灭反应。减压蒸除有机溶剂，剩余溶液以EA(40mL×2)萃取，有机相合并，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，残余物上样，硅胶柱层析(PE:EA＝10:1)，得白色固体214mg(收率83.4％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝132.15[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.04(s,1H),7.92(dd,J＝7.7,0.9Hz,1H),7.86(t,J＝7.7Hz,1H),7.68(dd,J＝7.6,1.0Hz,1H),3.26(s,1H)。
步骤3：4-(6-(6-((6-乙炔基吡啶-2-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL的单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15mg,0.037mmol)，6-乙炔基吡啶甲醛(10mg,0.076mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(24mg,0.113mmol)，DCE(2mL)，35℃下反应过夜。直接旋干反应液，残余物硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/3)，得白色固体12mg(收率57.62％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝520.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(d,J＝1.8Hz,1H),8.21(s,1H),8.16(d,J＝1.6Hz,1H),7.76(dd,J＝8.7,2.1Hz,1H),7.65(t,J＝7.8Hz,1H),7.49(d,J＝7.7Hz,1H),7.36(d,J＝7.4Hz,1H),7.17(d,J＝1.6Hz,1H),6.68(d,J＝8.7Hz,1H),3.93-3.84(m,6H),3.82(s,2H),3.68-3.57(m,2H),3.11(s,1H),2.85-2.70(m,1H),2.06-1.95(m,1H),1.40(s,6H)。HPLC:92.41％。
实施例263：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(2-甲氧基吡啶-4-基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.10.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000941
步骤1：3-(2-甲氧基吡啶-4-基)丙-2-炔-1-醇
50mL的双口瓶，依次加入4-溴-2-甲氧基-吡啶(500mg,2.6593mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(9.4mg,0.013mmol)，CuI(20mg,0.10502mmol)，抽真空充氮气，然后加入丙炔醇(0.31mL,5.3mmol)，THF(5mL)和Et3N(2.5mL,18mmol)，80℃反应过夜。反应液过滤，EA(100mL)洗，滤液旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝50：1-20：1)，得到淡黄色固体245mg,即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.13(d,J＝5.2Hz,1H),6.89(d,J＝5.2Hz,1H),6.79(s,1H),4.52(d,J＝4.3Hz,2H),3.95(s,3H),1.86(s,1H).
步骤2：3-(2-甲氧基吡啶-4-基)丙炔醛
室温下，向3-(2-甲氧基吡啶-4-基)丙-2-炔-1-醇(240mg,1.4709mmol)的DCE(22mL)溶液中依次加入碳酸氢钠(618mg,7.35mmol)和戴斯马丁试剂(945mg,2.20577mmol)，室温下反应1.5h。饱和Na2S2O3淬灭反应，DCM(30mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝50:1-20:1)，得白色絮蓬松固体210mg,即为目标产物(收率：88.591％)。LC-MS(ESI)m/z＝162.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.45(s,1H),8.24(d,J＝5.2Hz,1H),7.01(d,J＝5.2Hz,1H),6.93(s,1H),3.97(s,3H)。
步骤3：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(2-甲氧基吡啶-4-基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.10.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15mg,0.03708mmol)，3-(2-甲氧基-4-吡啶基)丙-2-炔醛(12mg,0.074460mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(24mg,0.10984mmol)，DCE(2mL)，35℃反应过夜。直接旋干反应液，残渣硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-30:1)，得到淡黄色固体4mg，即为目标产物(产率：19.63％)，Rf＝0.5(DCM/MeOH＝20/1)。LC-MS：m/z＝550[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.43(s,1H),8.24(s,1H),8.20(d,J＝1.5Hz,1H),8.12(d,J＝5.3Hz,1H),7.83(d,J＝6.4Hz,1H),7.55(d,J＝8.2Hz,1H),7.37(s,1H),7.18(d,J＝1.9Hz,1H),6.74(d,J＝8.8Hz,1H),5.36(s,2H),5.32(s,3H),3.94(s,2H),3.89(s,2H),3.66(s,2H),2.36(s,1H),2.24(s,1H),1.42(s,6H)。HPLC：91.59％。
实施例265:6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.10.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000951
步骤1：3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇
室温氮气保护下，向5-溴-2-甲氧基吡啶(500mg,2.66mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(93mg,0.13mmol)，CuI(25mg,0.13mmol)的混合物中依次加入Et3N(4.0mL,29mmol)和2-丙炔-1-醇(0.76mL,13mmol)，80℃反应过夜。减压蒸干溶剂，残余物硅胶柱层析(PE:EA＝3:1)，得淡黄色固体80mg(收率18.4％)。LC-MS：164.20[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(d,J＝1.7Hz,1H),7.59(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),6.69(d,J＝8.6Hz,1H),4.49(s,2H),3.94(s,3H).
步骤2：3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙炔醛
室温下，向3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇(80mg,0.49mmol)的DCM(4.9mL)溶液中依次加入NaHCO3(207mg,2.45mmol)和Dess-Martin氧化剂(420mg,0.98mmol)，室温反应1h。饱和Na2S2O3(5mL)淬灭反应,待分层清晰后用DCM(20mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，残余物硅胶柱层析(PE:EA＝4:1),得淡黄色固体56mg(收率70.9％)。LC-MS：162.10[M+H]+；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.43(s,1H),8.48(d,J＝2.3Hz,1H),7.76(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),6.80(d,J＝8.6Hz,1H),4.01(s,3H).
步骤3：3-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯
在微波管中，依次加入4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(183mg,0.56mmol)，3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(133mg,0.67mmol)，碳酸钾(542mg,3.92mmol)，DMSO(3mL)，室温下搅拌10min后，转移至微波100℃下反应4h。反应完，把反应液加入到15mL冷水中，EA萃取(30mL×3)，有机相饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥后旋干硅胶柱层析(PE/EA＝9/1-2/1)收集得到白色固体原料58mg，白色固体产品105mg，收率37.1％。LC-MS:505.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.14(d,J＝1.9Hz,1H),7.73(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.15(d,J＝2.0Hz,1H),6.65(d,J＝8.8Hz,1H),4.31(d,J＝4.5Hz,2H),4.22-4.13(m,2H),3.86(s,2H),3.63-3.45(m,2H),2.72-2.63(m,1H),2.19-2.09(m,1H),1.67(s,1H),1.38(d,J＝4.0Hz,15H)。
步骤4：4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-腈-二盐酸盐
在25mL单口瓶中一次加入3-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(100mg,0.198mmol)和4mol/L的盐酸甲醇(5mL,20mmol)，室温下搅拌反应过夜。TLC检测反应完全后反应液直接旋干，泵抽得到淡红色固体。未经进一步纯化直接投下一步反应，收率按100％计算。
步骤5：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.10.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL的单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈-二盐酸盐(12mg,0.030mmol)，3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙炔醛(10mg,0.062mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(19mg,0.090mmol)，DCE(2mL)，35℃下反应过夜。反应完全后直接旋干硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/4)，得到白色固体11.5mg(收率65.3％)。LC-MS：550.3[M+1]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.39(d,1H),8.24(d,1H),8.21(s,1H),8.16(d,1H),7.78(dd,1H),7.58(dd,1H),7.15(d,1H),6.70(d,1H),6.67(d,1H),3.99-3.94(m,2H),3.93(s,3H),3.89-3.83(m,4H),3.71-3.62(m,2H),3.51(s,2H),2.81-2.73(m,1H),1.70-1.68(m,1H),1.40(s,6H)。
实施例266：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000961
在10mL单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15mg,0.031mmol)，碳酸钾(33mg,0.238mmol)，乙腈(1.0mL)，后缓慢加入溴丙炔(4.5mg，0.038mmol)，室温搅拌过夜。过滤，滤液旋干，残渣硅胶层析柱(洗脱剂DCM/MeOH＝50:1-30:1)，收集旋干得到黄色固体11mg即为目标产物(收率79.12％)。(Rf＝0.15，DCM/MeOH＝30/1)。LC-MS(ES-API):m/z＝443.45[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(d,J＝2.2Hz,1H),8.26–8.15(m,2H),7.79(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.17(d,J＝2.0Hz,1H),6.70(d,J＝8.8Hz,1H),3.95–3.87(m,4H),3.82(d,J＝12.0Hz,2H),3.63(d,J＝11.6Hz,2H),3.29(d,J＝2.2Hz,2H),2.73(dd,J＝13.7,6.3Hz,1H),2.23(t,J＝2.4Hz,1H),2.03(s,1H),1.42(s,6H)。HPLC:96.94％。
实施例285：6-乙氧基-4-(6-(4-炔丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000971
步骤1：4-炔丙基哌嗪-1-羧酸叔丁酯
室温下，将1-Boc-哌嗪(1.00g,5.37mmol)溶于乙腈(27mL)，依次加入碳酸钾(1.11g,8.03mmol)和3-溴丙炔(0.5mL,6mmol)，室温下搅拌过夜。反应液过滤，滤液旋干，硅胶柱层析(DCM:MeOH＝30:1),得黄色油状物1.03g(收率85.5％)，即为目标产物。LCMS:m/z＝225.15[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.46(t,J＝4.9Hz,4H),3.30(d,J＝2.3Hz,2H),2.50(t,J＝4.8Hz,4H),2.25(t,J＝2.3Hz,1H),1.45(s,9H).
步骤2：1-炔丙基哌嗪
0℃下，将4-炔丙基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.03g,4.59mmol)溶于DCM(46mL)，搅拌下向其中加入三氟乙酸(3.4mL,46.0mmol)，加毕移出冷浴自然升至室温反应过夜。TLC监测反应已完全，用饱和碳酸钠溶液调节pH至11，水相用DCM(30mL×5)萃取，有机相合并，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，得淡黄色油状物350mg(收率61.4％)，即为粗产物，经放置过夜后成为黄色固体。LC-MS:125.20[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.28(d,J＝2.2Hz,2H),3.02–2.85(m,4H),2.53(br s,4H),2.24(t,J＝2.2Hz,1H).
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(4-炔丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
1-炔丙基哌嗪(39mg,0.31mmol)和3-氰基-6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶(30mg,0.11mmol)溶于DMSO(1mL)，向其中加入DIPEA(0.10mL,0.60mmol)，微波反应3.5h(150℃，10bar,预搅拌30s)。反应完毕后，待反应液冷却至室温后，加入EA(100mL)稀释，有机相依次以水(20mL)，饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，残余物上样硅胶柱层析(PE:EA＝1:1-1:1.5)，得淡黄色固体20.6mg(收率50.2％)，即为目标产物。LC-MS:387.15[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(d,J＝2.2Hz,1H),8.18(s,1H),8.10(d,J＝1.9Hz,1H),7.72(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.08(d,J＝1.9Hz,1H),6.77(d,J＝8.8Hz,1H),4.08(q,J＝7.0Hz,2H),3.70(t,J＝4.9Hz,4H),3.38(d,J＝2.3Hz,2H),2.70(t,J＝5.0Hz,4H),2.28(t,J＝2.2Hz,1H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H).
实施例286：4-(6-(6-(3-乙炔基苄基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000972
步骤1：3-((三甲基硅烷基)乙炔基)苯甲醛
室温下，氮气保护下，向3-碘苯甲醛(800mg,3.45mmol)，DPEPhos(75mg,0.14mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(96mg,0.14mmol)，CuI(32mg,0.17mmol)的混合物中依次加入Et3N(5.2mL,37mmol)和三甲基硅烷基乙炔(0.98mL,6.9mmol)，室温反应过夜。减压蒸干溶剂，残余物硅胶柱层析(PE:EA＝10:1)，得淡褐色油状物687mg(收率98.5％)。LC-MS：203.10[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.98(s,1H),7.96(s,1H),7.82(d,J＝7.7Hz,1H),7.70(d,J＝7.7Hz,1H),7.47(t,J＝7.7Hz,1H),0.26(s,9H).
步骤2：3-乙炔基苯甲醛
室温下，向3-((三甲基硅烷基)乙炔基)苯甲醛(680mg,3.36mmol)的MeOH(8.4mL)溶液加入K2CO3(46mg,0.33mmol)，室温反应4.5h。饱和NH4Cl(10mL)淬灭反应，减压蒸除有机溶剂，剩余溶液以EA(40mL×2)萃取，有机相合并，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，残余物硅胶柱层析(PE:EA＝10:1),得淡黄色固体360mg(收率82.3％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.00(s,1H),7.99(s,1H),7.87(d,J＝7.7Hz,1H),7.74(d,J＝7.7Hz,1H),7.51(t,J＝7.7Hz,1H),3.16(s,1H).
步骤3：3-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯
在微波管中，依次加入4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(183mg,0.56mmol)，3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(133mg,0.67mmol)，碳酸钾(542mg,3.92mmol)，DMSO(3mL)，室温搅拌10min后转移至微波100℃下反应4h。反应完后反应液加入到15mL冷水中，EA萃取(30mL×3)，有机相饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥后旋干，硅胶柱层析(PE/EA＝9/1-2/1)收集得白色固体原料58mg，白色固体产品105mg，收率37.1％。LC-MS:505.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.14(d,J＝1.9Hz,1H),7.73(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.15(d,J＝2.0Hz,1H),6.65(d,J＝8.8Hz,1H),4.31(d,J＝4.5Hz,2H),4.22-4.13(m,2H),3.86(s,2H),3.63-3.45(m,2H),2.72-2.63(m,1H),2.19-2.09(m,1H),1.67(s,1H),1.38(d,J＝4.0Hz,15H)。
步骤4：4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-腈-二盐酸盐
在25mL单口瓶中依次加入3-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(100mg,0.198mmol)和4mol/L的盐酸甲醇(5mL,20mmol)，室温下搅拌反应过夜。反应完全后反应液直接旋干，泵抽得到淡红色固体。未经进一步纯化直接投下一步反应，收率按100％计算。
步骤5：4-(6-(6-(3-乙炔基苄基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10ml的单口瓶中依次加入4-6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-腈-二盐酸盐(12mg,0.030mmol)，3-炔基苯甲醛(13mg,0.10mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(31mg,0.146mmol)，DCE(2mL)，35℃下反应过夜。反应完全后直接旋干硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/4)，得到白色固体16.5mg，收率62.8％。LC-MS：519.1[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.68(s,1H),8.58(s,1H),8.43(s,1H),7.88(d,J＝7.7Hz,1H),7.83-7.63(m,1H),7.62-7.34(m,3H),7.30(s,1H),6.83(s,1H),4.74(s,1H),4.72-4.59(m,1H),4.51-4.34(m,1H),4.36-4.13(m,2H),4.16-3.98(m,2H),4.01-3.62(m,7H),1.23(s,6H).
实施例287:4-(6-(6-((2-乙炔基吡啶-4-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200000991
步骤1：2-((三甲基硅烷基)乙炔基)-4-甲酰基吡啶
室温下，氮气保护下，向2-溴-4-甲酰基吡啶(600mg,3.23mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(90mg,0.13mmol)，CuI(30mg,0.16mmol)的混合物中依次加入Et3N(4.8mL,34mmol)和三甲基硅烷基乙炔(0.91mL,6.4mmol)，室温反应过夜，减压蒸干溶剂，残余物硅胶柱层析(PE:EA＝6:1)，得淡黄色固体537mg(收率81.9％)。
步骤2：2-乙炔基-4-甲酰基吡啶
室温下，向2-((三甲基硅烷基)乙炔基)-4-甲酰基吡啶(2,537mg,2.64mmol)的MeOH(6.6mL)溶液加入K2CO3(36mg,0.26mmol)，室温反应2h。饱和NH4Cl(10mL)淬灭反应。减压蒸除有机溶剂，剩余溶液以EA(40mL×2)萃取，有机相合并，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，残余物硅胶柱层析(PE:EA＝4:1–2:1)，得白色固体297mg(收率85.8％)。LC-MS：132.10[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.05(s,1H),8.84(d,J＝4.8Hz,1H),7.86(s,1H),7.67(d,J＝4.7Hz,1H),3.27(s,1H).
步骤3：3-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯
在微波管中，依次加入4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(183mg,0.56mmol)，3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(133mg,0.67mmol)，碳酸钾(542mg,3.92mmol)，DMSO(3mL)，室温下搅拌10min后，转移至微波100℃下反应4h。反应完，把反应液加入到15mL冷水中，EA萃取(30mL×3)，有机相饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥后旋干硅胶柱层析(PE/EA＝9/1-2/1)收集得到白色固体原料58mg，白色固体产品105mg，收率37.1％。LC-MS:505.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.14(d,J＝1.9Hz,1H),7.73(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.15(d,J＝2.0Hz,1H),6.65(d,J＝8.8Hz,1H),4.31(d,J＝4.5Hz,2H),4.22-4.13(m,2H),3.86(s,2H),3.63-3.45(m,2H),2.72-2.63(m,1H),2.19-2.09(m,1H),1.67(s,1H),1.38(d,J＝4.0Hz,15H)。
步骤4：4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-腈-二盐酸盐
在25mL单口瓶中一次加入3-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(100mg,0.198mmol)和4mol/L的盐酸甲醇(5mL,20mmol)，室温下搅拌反应过夜。TLC检测反应完全后反应液直接旋干，泵抽得到淡红色固体。未经进一步纯化直接投下一步反应，收率按100％计算。
步骤5：4-(6-(6-((2-乙炔基吡啶-4-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL的单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-腈-二盐酸盐(20mg,0.049mmol)，2-乙炔基吡啶-4-甲醛(25mg,0.19mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(62mg,0.29mmol)，DCE(2mL)，35℃下反应过夜。反应完全后直接旋干硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/4)，得到白色固体14.6mg，收率56.8％。LC-MS：520.2[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.67(s,1H),8.58(s,1H),8.47(s,1H),8.40(s,1H),7.85(d,1H),7.54(s,1H),7.41(s,1H),7.29(s,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,1H),4.73(s,1H),4.35-3.48(m,13H),1.23(s,6H).
实施例288:6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.10.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001001
步骤1：3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇
室温下，氮气保护下，向3-溴-5-甲氧基吡啶(500mg,2.66mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(93mg,0.13mmol)，CuI(25mg,0.13mmol)的混合物中依次加入Et3N(4.0mL,29mmol)和2-丙炔-1-醇(0.76mL,13mmol)，得黑色悬浊液，加热至80℃，反应过夜。反应液用EA(40mL)稀释，有机相倾倒出来，残余黑色黏稠物用EA(30mL×3)洗涤，有机相合并，减压蒸干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝4:1-2:1)，得淡黄色固体280mg(收率64.5％)。LC-MS:164.15[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(s,1H),8.25(s,1H),7.23(s,1H),4.51(s,2H),3.85(s,3H).
步骤2：3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙炔醛
室温下，向3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇(280mg,1.72mmol)的DCM(17.2mL)溶液中依次加入NaHCO3(724mg,8.58mmol)和Dess-Martin氧化剂((1.10g,2.57mmol)，室温反应0.75h。饱和Na2S2O3(20mL)淬灭反应,待分层清晰后用DCM(50mL×2)萃取，合并有机相，以无水硫酸钠干燥，减压蒸干，残余物上样硅胶柱层析(PE:EA＝3:1),得白色固体202mg(收率73.0％)。LC-MS:162.10[M+1]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.42(s,1H),8.42(s,1H),8.38(d,J＝2.5Hz,1H),7.34(s,1H),3.87(s,3H).
步骤3：3-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯
在微波管中，依次加入4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(183mg,0.56mmol)，3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(133mg,0.67mmol)，碳酸钾(542mg,3.92mmol)，DMSO(3mL)，室温下搅拌10min后，转移至微波100℃下反应4h。反应完，把反应液加入到冷的15mL水中，EA萃取(30mL×3)，有机相饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥后旋干硅胶柱层析(PE/EA＝9/1-2/1)收集得到白色固体原料58mg，白色固体产品105mg，收率37.1％。LC-MS:505.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.14(d,J＝1.9Hz,1H),7.73(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.15(d,J＝2.0Hz,1H),6.65(d,J＝8.8Hz,1H),4.31(d,J＝4.5Hz,2H),4.22-4.13(m,2H),3.86(s,2H),3.63-3.45(m,2H),2.72-2.63(m,1H),2.19-2.09(m,1H),1.67(s,1H),1.38(d,J＝4.0Hz,15H)。
步骤4：4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-腈二盐酸盐
在25mL单口瓶中一次加入3-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(100mg,0.198mmol)和4mol/L的盐酸甲醇(5mL,20mmol)，室温下搅拌反应过夜。TLC检测反应完全后反应液直接旋干，泵抽得到淡红色固体。未经进一步纯化直接投下一步反应，收率按100％计算。
步骤5：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.10.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL的单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-腈二盐酸盐(12mg,0.030mmol)，3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙炔醛(25mg,0.19mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(19mg,0.090mmol)，DCE(2mL)，35℃下反应过夜。TLC监测反应完全，直接旋干硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/4)，得到白色固体16.5mg，收率71.6％。LC-MS：550.3[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.40(s,1H),8.28–8.20(m,3H),8.16(s,1H),7.83–7.72(m,1H),7.21(s,1H),7.15(s,1H),6.70(d,1H),3.95(d,J＝4.9Hz,2H),3.87(s,3H),3.85–3.81(m,4H),3.70–3.59(m,2H),3.52(s,2H),2.80–2.69(m,1H),1.72–1.66(m,1H),1.40(s,6H).
实施例289：6-乙氧基-4-(6-((1-(4-乙炔基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001011
步骤1：(1-(4-乙炔基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
50mL反应瓶中称入N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(500mg,2.50mmol)，4-乙炔基苯甲酸(383mg,2.62mmol)，DCC(780mg,3.74mmol)，DMAP(30mg,0.24mmol)，置换氮气，加入DCM(25mL)溶解，室温搅拌过夜。TLC监测已反应完全。反应液有大量白色不溶固体，用砂芯漏斗过滤，滤饼以DCM洗涤两次，滤液减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝2:1)，得白色固体410mg(收率50.0％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝351.20[M+Na]+,273.15[M-tBu+2H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.52(d,J＝8.2Hz,2H),7.34(d,J＝8.2Hz,2H),4.64–4.40(m,2H),3.76–3.68(m,2H),3.14(s,1H),3.10–2.88(m,2H),2.03–1.88(m,2H),1.44(s,9H),1.40–1.29(m,2H)。
步骤2：1-(4-乙炔基苯甲酰基)哌啶-4-铵2,2,2-三氟乙酸盐
室温下，将(1-(4-乙炔基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(400mg,1.22mmol)溶于DCM(6mL)，搅拌下向其中加入三氟乙酸(0.9mL,10mmol)，反应过夜。TLC监测反应完全，减压旋干。即得粗产物，不做进一步纯化，直接用于下一步反应，反应以100％收率计。LC-MS:m/z＝229.2[M-CF3COO]+。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-((1-(4-乙炔基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
1-(4-乙炔基苯甲酰基)哌啶-4-铵2,2,2-三氟乙酸盐(127mg,0.37mmol)和6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体1的合成，35mg,0.12mmol)溶于DMSO(2mL)，向其中加入DIPEA(0.10mL,0.60mmol)，微波反应4h(150℃，10bar,预搅拌30s)。反应完毕后，取样送LC-MS。待反应液冷却至室温后，加入EA(100mL)稀释，有机相依次以水(20mL)，饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，残余物上样硅胶柱层析(PE:EA＝1:1-1:1.5(1％三乙胺))，得淡黄色固体8.3mg(收率14％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝491.30[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24(s,1H),8.18(s,1H),8.10(s,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.53(d,J＝7.7Hz,2H),7.38(d,J＝7.8Hz,2H),7.08(s,1H),6.51(d,J＝8.8Hz,1H),4.63(d,J＝7.1Hz,2H),4.08(q,6.7Hz,2H),3.80-3.67(m,1H),3.24-3.05(m,3H),2.24-1.98(m,4H),1.49(t,J＝6.7Hz，3H)。
实施例290：6-乙氧基-4-(6-((1-(3-乙炔基)哌啶-4-基)氨基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001021
步骤1：(1-(3-乙炔基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
50mL反应瓶中称入N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(500mg,2.50mmol)，3-乙炔基苯甲酸(383mg,2.62mmol)，DCC(780mg,3.74mmol)，DMAP(30mg,0.24mmol)，置换氮气，加入DCM(25mL)溶解，室温搅拌过夜。TLC监测已反应完全。反应液有大量白色不溶固体，用砂芯漏斗过滤，滤饼以DCM洗涤两次，滤液减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝2:1)，得白色固体795mg(收率92.0％)，即为目标产物。LC-MS：m/z＝351.20[M+Na]+,273.20[M-tBu+2H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.59-7.51(m,1H),7.49(s,1H),7.41-7.32(m,2H),4.69-4.37(m,2H),3.70(s,2H),3.11(s,1H),3.10-2.85(m,2H),2.03-1.86(m,2H),1.44(s,9H),1.41-1.30(m,2H)。
步骤2：4-((3-乙炔基苯甲酰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-鎓2,2,2-三氟乙酸盐
室温下，将(1-(3-乙炔基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(790mg,2.31mmol)溶于DCM(23mL)，搅拌下向其中加入三氟乙酸(1.7mL,23mmol)，反应过夜。TLC监测反应完全，减压旋干。即得粗产物，不做进一步纯化，直接用于下一步反应，反应以100％收率计。LC-MS：m/z＝229.2[M-CF3COO]+。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-((1-(3-乙炔基)哌啶-4-基)氨基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
4-((3-乙炔基苯甲酰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-鎓2,2,2-三氟乙酸盐(145mg,0.43mmol)和6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体1的合成，40mg,0.14mmol)溶于DMSO(2mL)，向其中加入DIPEA(0.12mL,0.69mmol)，微波反应4h(150℃，10bar,预搅拌30s)。反应完毕后，待反应液冷却至室温后，加入EA(100mL)稀释，有机相依次以水(20mL)，饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，残余物上样硅胶柱层析(PE:EA＝1:1-1:1.5(1％三乙胺))，得淡黄色固体18mg(收率25.9％)，即为目标产物。m/z＝491.25[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24(s,1H),8.18(s,1H),8.10(s,1H),7.67–7.59(m,1H),7.58–7.49(m,2H),7.42–7.34(m,2H),7.08(s,1H),6.51(d,J＝8.6Hz,1H),4.77–4.54(m,2H),4.08(dd,J＝14.3,7.4Hz,2H),3.80–3.66(m,1H),3.29–3.00(m,3H),2.27–2.06(m,2H),1.80–1.63(m,2H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例291：4-(6-(4-((6-乙炔基-3-基)氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001031
步骤1：4-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下，双口瓶中加入4-[(6-溴-3-吡啶基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(460mg,1.3mmol)，CuI(49mg,0.26mmol)，PdCl2(PPh3)2(91mg,0.13mmol)，加入3mL THF和3mL TEA，50℃搅拌下滴加乙炔基(三甲基)硅烷(190mg,1.9mmol)，加毕继续在此温度下反应。TLC监控反应结束后反应液抽滤，滤饼用少量EA洗涤，滤液旋干，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:10-1:3)，得淡黄色固体400mg即为目标产物。LC-MS：m/z＝374.10[M+H]+。
步骤2：4-(6-乙炔基吡啶-3-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
室温下将4-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg,1.071mmol)溶解于4mL MeOH中，搅拌下加入K2CO3(300mg,2.1mmol)。TLC监控反应结束后，将反应液浓缩，加入10mL水，用EA(30mL×3)萃取，合并有机相水洗(30mL×3)，饱和食盐水洗(30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA：PE＝1：8-1：3)，得淡黄色油状物130mg，即为目标产物。LC-MS：m/z＝302.10[M+H]+。
步骤3：6-乙炔基-N-(哌啶-4-基)吡啶-3-胺盐酸盐
将4-(6-乙炔基吡啶-3-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(130mg,0.43mmol)溶解于2mL HCl/1,4-二氧六环中，室温下搅拌。TLC监控反应结束后直接旋干反应液，得到黄色固体103mg，即为目标产物。
步骤4：4-(6-(4-((6-乙炔基-3-基)氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
微波管中加入4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，30mg,0.092mmol)，6-乙炔基-N-(4-哌啶基)吡啶-3-胺三盐酸盐(43mg,0.14mmol)，加入2mL DMSO使其溶解，再加入DIPEA(0.08mL,0.50mmol)，微波120℃反应4h。反应液中加入水4mL，EA(10mL×2)萃取，有机相水洗涤(10mL)，饱和氯化钠洗涤(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干硅胶柱层析(洗脱剂DCM:MeOH＝100:1-20:1)，得到棕色固体15mg即为目标产物。Rf＝0.5(DCM:MeOH＝20:1)。LC-MS:m/z＝508.20[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),8.00(d,J＝2.4Hz,1H),7.71(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.30(d,J＝8.5Hz,1H),7.14(d,J＝2.0Hz,1H),6.85 6.79(m,2H),4.39 4.34(m,2H),3.90(s,1H),3.86(s,2H),3.62–3.55(m,1H),3.19–3.12(m,2H),3.03(s,1H),2.16(d,J＝10.0Hz,2H),1.56–1.51(m,2H),1.39(s,6H)，HPLC:90.32％。
实施例292：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)苯基)氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001041
步骤1：4-((4-碘苯)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
1-甲酸叔丁酯-4-哌啶酮(1.82g,9.13mmol)和4-碘苯胺(2.00g,9.13mmol)溶于DCE(50mL)和AcOH(0.83g,14mmol)，缓慢加入三乙酰基硼氢化钠(3.79g,27.4mmol)，室温反应14h。TLC监测反应(PE/EA＝4/1，Rf＝0.35)完全，1N NaOH溶液调至pH＝9，DCM(10mL×3)萃取，合并有机相水洗(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，母液浓缩，硅胶柱层析(淋洗液PE/EA＝10/1-5/1)，得白色固体2.93g，即为目标产物。LC-MS：m/z＝347.1[M-tBu+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(d,J＝8.7Hz,2H),6.41(d,J＝8.7Hz,2H),4.05(s,2H),3.58(s,1H),3.47–3.30(m,1H),2.94(t,J＝11.9Hz,2H),2.09–1.96(m,2H),1.49(s,9H),1.38–1.29(m,2H)。
步骤2：4-((4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)苯基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
N2保护下，4-((4-碘苯)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.64g,4.08mmol)，CuI(78mg,0.41mmol)，PPh3(107mg,0.41mmol)，PdCl2(PPh3)2(286mg,0.408mmol)溶于DMF(10mL)，缓慢加入2-甲基丁-3-炔-2-醇(1.03g,12.2mmol)和Et3N(1.24g,12.3mmol)，升至50℃搅拌反应16h。TLC监测反应完全，降至室温停止反应，反应液抽滤，EA(10mL×3)萃取，合并有机相水洗(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，母液浓缩，硅胶柱层析(淋洗液PE/EA＝5/1-4/1)，得棕色固体1.19g，即为目标产物(产率82％)。LC-MS：m/z＝303.3[M-tBu+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.19(d,J＝8.6Hz,2H),6.47(d,J＝8.7Hz,2H),4.02(d,J＝7.4Hz,2H),3.47-3.31(m,1H),2.88(d,J＝7.3Hz,1H),2.02-1.98(m,2H),1.98-1.91(m,2H),1.57(s,6H),1.44(s,9H),1.33-1.26(m,2H)。
步骤3：4-((4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)苯基)氨基)哌啶
0℃，4-((4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)苯基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.11g,0.31mmol)，缓慢加入盐酸EA溶液(4mL,20mmol,5mol/L)，自然升至常温搅拌反应3h。停止反应，加H2O(15mL)分液，水相用饱和NaHCO3溶液调至pH＝8，EA(15mL×3)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得棕黄色固体73mg，即为目标产物。LC-MS：m/z＝259.1[M+H]。
步骤4：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)苯基)氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑啉[1,5-a]吡啶-3-甲腈
4-((4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)苯基)氨基)哌啶(76mg,0.29mmol)，4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，30mg,0.09mmol)溶于DMSO(2mL)，加入DIPEA(114mg,0.88mmol)，微波反应器130℃搅拌反应4h。降至室温，EA(10mL×3)萃取，有机相水洗(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(淋洗液DCM/CH3OH＝40/1-20/1)，得黄色固体4mg，即为目标产物(产率2.4％)。LC-MS：m/z＝565.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝2.2Hz,1H),8.23(s,1H),8.18(d,J＝2.0Hz,1H),7.87(d,J＝8.7Hz,2H),7.76–7.71(m,1H),7.17(d,J＝2.0Hz,1H),6.83(d,J＝8.9Hz,1H),6.69(s,1H),6.62(d,J＝8.7Hz,2H),4.39(d,J＝13.5Hz,2H),3.89(s,2H),3.69(brs,1H),3.20(t,J＝11.3Hz,2H),1.42(s,6H),1.35(brs,2H),1.31(brs,2H),1.28(s,6H)。HPLC：90.58％。
实施例293：4-[6-[3-[(6-乙炔基-3-吡啶基)氨基]氮杂环丁烷-1-基]-3-吡啶基]-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001051
步骤1：3-[(6-溴-3-吡啶基)氨基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
100mL单口瓶中，依次加入6-溴吡啶-3-胺(300mg,1.734mmol)，3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(342mg,1.998mmol)，THF(6mL)溶解，加入三氟乙酸(0.386mL,5.20mmol)，缓慢加入三乙酰氧基硼氢化钠(568mg,2.600mmol)，55℃油浴锅反应4h。TLC显示反应完毕，1M NaOH溶液15mL淬灭，EA(60mL×2)萃取，30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂正己烷:EA＝8：1-2：1)，得到黄白色固体0.335g(收率59％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝328.10[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.65(d,J＝2.9Hz,1H),7.22(d,J＝8.5Hz,1H),6.69(dd,J＝8.6,3.1Hz,1H),4.63(d,J＝6.1Hz,1H),4.29–4.24(m,2H),3.74–3.70(m,3H),1.41(s,9H)。
步骤2：3-[[6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)-3-吡啶基]氨基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
10mL双口瓶中，加入CuI(14mg,0.074mmol)，PdCl2(PPh3)2(25mg,0.036mmol)，3-[(6-溴-3-吡啶基)氨基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(230mg,0.701mmol)，氮气保护下抽真空，无水THF(2.3mL,17mmol)溶解，TEA(2.3mL,17mmol)加入，溶液呈橙红色，逐滴加入乙炔基(三甲基)硅烷(0.2mL,1mmol)，溶液由橙黄色变为变成黑色，65℃搅拌反应过夜。TLC显示反应完毕，抽滤，EA60mL洗涤滤饼，滤液饱和食盐水(20mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝10:1-1:5)，得到灰白色固体0.15g(收率62％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝346.20[M+H]+。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.92(d,J＝2.6Hz,1H),7.29(d,J＝8.5Hz,1H),6.69(dd,J＝8.5,2.8Hz,1H),4.33–4.20(m,4H),3.75(dd,J＝9.1,4.6Hz,2H),1.44(s,9H),0.24(s,9H)。
步骤3：N-(氮杂环丁烷-3-基)-6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)吡啶-3-胺盐酸盐
25mL单口瓶中，加入3-[[6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)-3-吡啶基]氨基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(0.15g,0.43mmol)，盐酸乙酸乙酯溶液(5mL,20mmol)，室温搅拌反应2h。TLC显示反应完毕，反应液旋干，得到暗红色油状物，60℃烘干得到理论量棕红色固体0.12g。LC-MS(ES-API):m/z＝246.50[M+H]+。
步骤4：4-[6-[3-[(6-乙炔基-3-吡啶基)氨基]氮杂环丁烷-1-基]-3-吡啶基]-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
10mL单口瓶中，依次加入N-(氮杂环丁烷-3-基)-6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)吡啶-3-胺盐酸盐(52mg,0.185mmol)，4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，40mg,0.123mmol)，碳酸钾(68mg,0.492mmol)，加入DMSO(1.5mL)溶解，油浴锅130℃加热反应过夜。TLC显示反应完毕，加水淬灭(10mL)，EA(50mL×3)萃取，有机相饱和食盐水50mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝20/0-20/1)，得到淡黄色固体26.7mg(收率45.4％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝480.10[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(d,J＝1.8Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),8.00(d,J＝2.5Hz,1H),7.69(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.34(d,J＝8.5Hz,1H),7.14(d,J＝2.1Hz,1H),6.79(dd,J＝8.5,2.8Hz,1H),6.45(d,J＝8.9Hz,1H),4.68(d,J＝3.4Hz,1H),4.58–4.49(m,3H),4.44(s,1H),3.94(dd,J＝8.3,3.9Hz,2H),3.86(s,2H),3.05(s,1H),1.39(s,6H)。HPLC：89.66％。
实施例294：N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-4-乙炔基吡啶酰胺
Figure BDA0002307183200001061
步骤1：4-溴吡啶甲酸甲酯
在50mL单口瓶中，依次加入4-溴吡啶-2-羧酸(1g,4.9505mmol)，DMF(25mL)，碳酸铯(1.77g,5.43mmol)，碘甲烷(0.34mL,5.5mmol)，室温下搅拌反应过夜。加入25mL水和40mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(40mL×2)，合并有机相水洗(25mL)，饱和氯化钠洗涤(25mL)，无水硫酸钠干燥后过滤，旋干硅胶柱层析(洗脱剂为PE/EA＝25/1-8/1)，收集得到白色针状结晶固体805mg，即为目标产物(收率75.3％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.56(d,J＝5.2Hz,1H),8.30(d,J＝1.5Hz,1H),7.66(dd,J＝5.2,1.8Hz,1H),4.02(s,3H).
步骤2：4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入4-溴吡啶甲酸甲酯(800mg,3.7032mmol)，CuI(84mg,0.44106mmol)和PdCl2(PPh3)2(77mg,0.1097mmol)，无水THF(5mL)，乙炔基(三甲基)硅烷(436mg,4.439mmol)，在0℃搅拌下滴加TEA(2.4mL,100mass％)，室温下反应过夜。反应液加入20mL水淬灭反应，加入EA(50mL)，铺硅藻土抽滤，滤液分离有机相，水相EA萃取(50mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥后抽滤旋干，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:20-1:7)，得黄色固体423mg即为目标产物(收率48.95％)。LC-MS(ESI):m/z＝234.2[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.68(d,J＝4.9Hz,1H),8.14(s,1H),7.50–7.43(m,1H),4.01(s,3H),0.27(s,9H)。
步骤3：4-乙炔基吡啶甲酸
氮气保护下，在双口瓶中将4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶甲酸甲酯(420mg,1.7999mmol)溶解于无水甲醇(8mL)中，搅拌下一次性加入碳酸钾(500mg,3.6177mmol,100mass％)，室温反应过夜。往反应液中加入水(20mL)，用1N稀盐酸调节pH＝1，加EA萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥、抽滤、旋得黄色固体95mg即为目标产物(收率35.9％)。1H NMR(600MHz,(CD3)2SO)δ8.73(d,J＝4.9Hz,1H),8.00(s,1H),7.70(dd,J＝4.9,1.6Hz,1H),4.74(s,1H)。
步骤4：N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-4-乙炔基吡啶酰胺
5mL的反应瓶，依次加入4-[6-(4-氨基-4-甲基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体4的合成，15mg,0.030mmol)，4-乙炔基吡啶-2-羧酸(10mg,0.067mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基二硫代酰胺盐酸盐(10mg,0.051mmol)和DCM(2mL)，室温下搅拌过夜。反应液减压旋干，残渣硅胶柱层析(流动相DCM:MeOH＝0-100:5)得到白色固体产物3mg,即为目标产物(产率：17.95％)。Rf＝0.4(DCM/MeOH＝30/1),LC-MS,m/z＝550.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.51(d,J＝4.9Hz,1H),8.34(d,J＝2.3Hz,1H),8.23(s,1H),8.19(s,1H),8.15(d,J＝1.9Hz,1H),8.09(s,1H),7.70(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.47(dd,J＝4.9,1.3Hz,1H),7.14(d,J＝1.9Hz,1H),6.80(d,J＝8.9Hz,1H),4.05(s,1H),3.86(s,2H),3.65(s,2H),3.36(s,2H),1.85–1.79(m,2H),1.64(dd,J＝14.5,7.2Hz,2H),1.39(s,6H),1.37(s,3H)。HPLC:：94.15％。
实施例295：N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-6-乙炔基烟酰胺
Figure BDA0002307183200001071
步骤1：6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶
室温氮气保护下，向6-溴吡啶-3-甲醛(600mg,3.2256mmol)，PdCl2(PPh3)2(90mg,0.128222mmol)和CuI(30mg,0.15752mmol)的混合物中依次加入三乙胺(4.8mL,34mmol)和三甲基硅乙炔(0.92mL,6.5mmol)，将该混合物室温搅拌4h。减压蒸干溶剂，残余物拌硅胶上样，硅胶柱层析(PE:EA＝10:1-8：1)，得白色固体454mg(收率69.2％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝204.20[M+H]+。
步骤2：6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)烟酸
0℃下，用浓盐酸调节磷酸二氢钠(0.15mL,0.15mmol,1mol/L)和过氧化氢(0.06mL,0.6mmol)的溶液至PH为3，加入到6-(2-三甲基硅乙炔基)吡啶-3-甲醛(100mg,0.492mmol)的乙腈(2mL)溶液中，分三次缓慢加入次氯酸钠(40mg,0.532mmol)，室温反应6h。EA(30mL×2)萃取，水(5mL)和饱和食盐水(5mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压旋干得到淡黄色固体0.108g，即为目标产物(产率：100％)。rf＝0.5(DCM/MeOH＝2/1),LC-MS：m/z＝220.1[M+H]+。
步骤3：N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)烟酰胺
5mL的反应瓶，依次加入4-[6-(4-氨基-4-甲基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体4的合成，15mg,0.030mmol)，6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)烟酸(10mg,0.046mmol)，EDCI(10mg,0.052mmol)，DMAP(1mg,0.008mmol)和DCM(2mL)，室温下搅拌过夜。反应液直接减压旋干，残渣硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:5)，得白色固体产物4mg，即为目标产物(产率：21.16％)。rf＝0.5(DCM/MeOH＝30/1)。LC-MS：m/z＝622.3[M+H]+。
步骤4：N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-6-乙炔基烟酰胺
单口瓶，依次加入N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)烟酰胺(13mg,0.021mmol)，甲醇(3mL)，碳酸钾(10.0mg,0.072mmol)，室温下搅拌过夜。反应液旋干，薄层色谱板层析(展开剂：DCM/MeOH＝30/1)，得到白色固体10mg，即为目标产物(产率：87.03％)。LC-MS：m/z＝550.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.95(s,1H),8.36(d,J＝2.3Hz,1H),8.22(s,1H),8.18(d,J＝2.0Hz,1H),8.09(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),7.73(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.17(d,J＝2.0Hz,1H),6.83(d,J＝8.8Hz,1H),6.03(s,1H),3.97(dt,J＝13.4,4.8Hz,2H),3.88(s,2H),3.66(s,1H),3.54–3.45(m,2H),3.30(s,1H),3.15(dd,J＝14.5,7.2Hz,1H),2.34(d,J＝14.9Hz,2H),2.07–2.03(m,2H),1.63(s,3H),1.31(s,6H)。HPLC：92.42％
实施例296：N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-4-乙炔基苯甲酰胺
Figure BDA0002307183200001081
步骤1：4-((4-乙炔基苯甲酰基)氨基)-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯
在25mL的单口瓶中加入4-氨基-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(600mg,2.7998mmol)，DCM(12mL)，4-乙炔基苯甲酸(0.50g,3.4mmol)，EDCI(0.8g,4mmol)，DMAP(0.034g,0.28mmol)，室温搅拌反应过夜。反应液加入二氯甲烷(20mL)和水(15mL)，分出水相用DCM(20mL)萃取，合并有机相后用饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，母液浓缩，硅胶柱层析(洗脱剂PE/EA＝20/1-4/1),得白色泡沫固体423mg(收率30％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝287.1[M-tBu+2H]，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(d,J＝8.4Hz,2H),7.54(d,J＝8.3Hz,2H),5.78(s,1H),3.71(s,2H),3.26-3.16(m,3H),2.16(s,2H),1.68(ddd,J＝14.1,10.3,4.2Hz,2H),1.52(s,3H),1.46(s,9H)。
步骤2：4-乙炔基-N-(4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺-三氟乙酸盐
在装有4-((4-乙炔基苯甲酰基)氨基)-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.42g,1.2mmol,)的50mL单口瓶中，加入DCM(5mL)和TFA(1.5mL)，室温下搅拌反应3.5h。直接旋干反应液得到无色透明油状液体产品。按理论收率直接投下一步反应。LC-MS:m/z＝243.1[M-CF3COO-]。
步骤3：N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-4-乙炔基苯甲酰胺
于10mL微波管中称取4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，30mg,0.092mmol)，4-乙炔基-N-(4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺-三氟乙酸盐(65mg,0.182mmol)，加入DMSO(1.5mL)溶解后再加入DIPEA(0.1mL,0.6mmol)，微波(温度135℃，压力10bar)反应5h。将反应液倒入水中(20mL)，EA萃取(40mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液浓缩，硅胶柱层析(洗脱剂DCM:MeOH＝100:1-30:1)，得淡黄色固体20mg(收率27.26％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝541.1[M+H]；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,3H),7.54(d,J＝8.3Hz,2H),7.14(d,J＝2.0Hz,1H),6.80(d,J＝8.9Hz,1H),5.92(s,1H),4.03-3.95(m,2H),3.86(s,2H),3.47-3.38(m,2H),3.19(s,1H),2.36-2.29(m,2H),1.89-1.82(m,2H),1.39(s,6H),1.25(s,3H)。HPLC:90.64％。
实施例297：4-(6-(4-(4-乙炔基苯氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001091
步骤1：4-(4-碘苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
双口瓶，依次加入4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.744g,13.63mmol)，4-碘苯酚(2g,9.09mmol)，三苯基膦(3.16g,11.8mmol)，抽真空，氮气保护下加入无水四氢呋喃(15mL)，0℃下缓慢滴加二异丙基偶氮二羧酸酯(2.4mL,12mmol)，30min滴完后升到室温继续反应4.5h。反应液加入EA(150mL)和水(50mL)，分离有机相，水相用EA(150mL)萃取，合并有机相，饱和食盐水水(10mL)洗，减压旋干，硅胶柱柱层析(流动相PE:EA＝0-100:5)，得到无色油状液体产物3.46g，即为目标产物(产率：94.4％)。Rf＝0.4(PE/EA＝20/1)。LC-MS：m/z＝403.2[M]+。
步骤2：4-(4-碘苯氧基)哌啶
单口瓶，加入4-(4-碘苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.00g,2.48mmol)，盐酸甲醇溶液(15mL,60mmol,4mol/L)，室温反应2h。反应液减压旋干，得到黄色固体产物0.842g，即为目标产物(产率：100％)。(Rf＝0.3，DCM/MeOH＝8/1)。LC-MS：m/z＝304.0[M]+。
步骤3：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(4-碘苯氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，单口瓶依次加入4-(4-碘苯氧基)哌啶(31mg,0.091284mmol)，4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，20mg,0.06129mmol)，甲苯(2mL)和N,N-二异丙基乙胺(0.1mL,0.6mmol)，120℃下反应36h。反应液直接减压旋干，残余物硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3)，得到白色固体33mg，即为目标产物(产率：88.33％)。(Rf＝0.4，PE/EA＝1/2)。LC-MS：m/z＝610.0[M+H]+。
步骤4：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
取一个50mL的双口瓶，依次加入6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(4-碘苯氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(33mg,0.054mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(1mg,0.0014mmol)，三乙胺(5mL)，碘化亚铜(1mg,0.0052508mmol)。氮气保护下搅拌15min，加入乙炔基(三甲基)硅烷(0.05mL,0.4mmol)，室温下搅拌7h。反应液硅藻土过滤，EA(50mL)洗，滤液减压旋干硅胶柱层析(流动相PE/EA＝0-100/10)，得棕黑色液体10mg，即为目标产物(产率：31.86％)。(Rf＝0.5，PE/EA＝10/1)。LC-MS：m/z＝580.3[M+H]+。
步骤5：4-(6-(4-(4-乙炔基苯氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
单口瓶，依次加入6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(10.0mg,0.01725mmol)，碳酸钾(10mg,0.072354mmol)，甲醇(2mL)，室温下搅拌5h。反应液减压旋干，残余物硅胶柱层析(洗脱剂PE/EA＝3/1)，得淡黄色固体8.0mg,即为目标产物(产率：91.0％)。LC-MS：m/z＝508.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.3Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝1.9Hz,1H),7.71(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.44(d,J＝8.7Hz,2H),7.15(d,J＝2.0Hz,1H),6.89(d,J＝8.7Hz,2H),6.81(d,J＝8.8Hz,1H),4.65–4.55(m,1H),4.01–3.92(m,2H),3.86(s,2H),3.66–3.55(m,2H),3.01(s,1H),2.12–2.05(m,2H),1.95–1.86(m,2H),1.39(s,6H)。HPLC：97.34％。
实施例298：(R)-4-(6-(3-((6-乙炔基-3-基)氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001101
步骤1：(S)-3-((甲基磺酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下将(3S)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2.00g,10.7mmol)溶于THF(50mL)中，加入NaH(1.284g,32.1mmol)，冰浴条件下加入甲磺酰氯(0.911mL,11.8mmol)，保温反应4.5h。加入水(10mL)和EA(50mL)，水相用EA(50mL)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压旋干得到无色透明液体产物2.00g，即为目标产物(产率100％)。(Rf＝0.5，PE/EA＝4/1)。LC-MS：m/z＝210.2[M-tBu+H]+。
步骤2：(R)-3-((6-溴吡啶-3-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将6-溴吡啶-3-醇(500mg,2.8736mmol)溶于DMSO(6mL)，搅拌条件下加入叔丁醇钾(493mg,3.73mmol)，搅拌20min后升温至100℃，缓慢滴加溶于DMSO(30mL)的(S)-3-((甲基磺酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.838g,3.16mmol)，120℃反应5.5h。加入水(10mL)和EA(200mL)，有机相用饱和氯化钠(10mL×3)洗，分出有机相减压旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝0-100：10)，得到无色透明液体0.26g，即为目标产物(产率26％)。(Rf＝0.5，PE/EA＝4/1)。LC-MS:m/z＝287.0[M-tBu]+。
步骤3：(R)-3-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下50mL的双口瓶依次加入(3S)-3-[(6-溴-3-吡啶基)氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.26g,0.76mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(11mg,0.0155149mmol)，三乙胺(5mL)和THF(2mL)，CuI(7mg,0.036755mmol)，搅拌15min后加入乙炔基(三甲基)硅烷(0.21mL,1.5mmol)，室温下搅拌2.5h。反应液直接减压旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)，得棕色液体100mg，即为目标产物(产率：37％)。(Rf＝0.5，PE/EA＝4/1)。LC-MS：m/z＝361.1[M+H]+。
步骤4：(R)-3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
单口瓶，依次加入(3S)-3-[[6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)-3-吡啶基]氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.10g,0.28mmol)，碳酸钾(77mg,0.55712mmol)，甲醇(3mL)，室温下搅拌1h。反应液过滤，EA(50mL)洗涤滤饼，母液减压旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)，得淡黄色液体0.10g，即为目标产物。(Rf＝0.3，PE/EA＝3/1)。LC-MS：m/z＝289.3[M+H]+。
步骤5：(R)-2-乙炔基-5-(吡咯烷-3-基氧基)吡啶盐酸盐
单口瓶，将(R)-3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(66mg,0.2289mmol)溶于1,4-二氧六环(1mL)中，加入4M的盐酸1,4-二氧六环溶液(2mL,8mmol,4mol/L)，室温下搅拌0.5h。反应液减压旋干得到白色固体51mg，即为目标产物(产率99.15％)。LC-MS：m/z＝189.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.62(s,1H),9.49(s,1H),8.29(d,J＝2.7Hz,1H),7.56(d,J＝8.6Hz,1H),7.48(dd,J＝8.7,2.9Hz,1H),5.27(s,1H),4.21(s,1H),3.72(dd,J＝15.0,9.7Hz,2H),3.40–3.29(m,2H),2.29–2.09(m,2H)。
步骤6：(R)-4-(6-(3-((6-乙炔基-3-基)氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，向4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，20mg,0.06129mmol)的DMSO(1.5mL)溶液中加入(R)-2-乙炔基-5-(吡咯烷-3-基氧基)吡啶盐酸盐(13mg,0.069064mmol)和DIPEA(0.03mL,0.2mmol)，加毕，微波130℃反应5。加入水(10mL)和EA(100mL)，有机相用饱和食盐水(6mL×3)洗，减压旋干，硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3)，得黄色油状物11.0mg，即为目标产物(产率36.3％)。(Rf＝0.4，DCM/MeOH＝20/1)。LC-MS：m/z＝495.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.32(d,J＝2.0Hz,1H),8.29(d,J＝2.4Hz,1H),8.19(s,1H),8.15(d,J＝1.8Hz,1H),7.71(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),7.45(d,J＝8.6Hz,1H),7.35-7.34(m,1H),7.13(d,J＝1.8Hz,1H),6.54(d,J＝8.8Hz,1H),5.14(s,1H),3.93–3.87(m,2H),3.86(s,2H),3.78–3.68(m,2H),3.64(s,1H),3.09(s,1H),2.39–2.30(m,2H),1.28(s,6H)。HPLC：93.38％。
实施例299：2-((3-氰基-4-(6-(3-((6-乙炔基-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氧基)乙酰胺
Figure BDA0002307183200001121
5mL单口瓶中加入4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体5的合成，27mg,0.066mmol)，碳酸钾(45mg,0.31mmol)，2-氯乙酰胺(29mg,0.31mmol)，DMF(0.6mL)，90℃下反应。反应结束后反应液冷却至室温后加水(10mL)，EA(20mL×2)萃取，合并有机相水洗(10mL×6)，饱和食盐水洗(10mL)，无水硫酸钠干燥后过滤，滤液浓缩硅胶柱层析(洗脱剂为DCM:MeOH＝30:1)，得到黄色固体10mg即为目标产物。LC-MS：m/z＝466.10[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.62(d,J＝23.2Hz,2H),8.31(d,J＝17.3Hz,2H),7.80(d,J＝8.1Hz,1H),7.65(s,1H),7.56(d,J＝8.2Hz,1H),7.49(s,1H),7.40(s,2H),6.60(d,J＝8.3Hz,1H),5.34(s,1H),4.61(s,2H),4.54(s,2H),4.19(s,1H),4.03(d,J＝7.0Hz,2H)。HPLC：92.99％。
实施例300：4-(6-(3-((6-乙炔基-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001122
步骤1：2-(吡咯烷-1-基)乙醇
在25mL单口瓶依次加入四氢吡咯(1.2mL,14.0mmol)，2-氯乙醇(1.1mL,16.9mmol)，甲苯10mL，120℃加热回流5h。反应结束后反应液缓慢恢复至室温，未做后处理，收率按100％计算，直接用下一步。Rf＝0.3(EA/MeOH＝5/1)。
步骤2：1-(2-氯乙基)吡咯烷
在25mL单口瓶依次加入2-(吡咯烷-1-基)乙醇的甲苯溶液，冰浴条件下缓慢加入二氯亚砜(2.15mL,28.2mmol)，加入完毕后恢复至室温搅拌过夜。反应结束后，反应液中加饱和碳酸氢钠溶液(30mL)，二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相水洗(50ml×2)，无水硫酸钠干燥，过滤后硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝20：1)，得棕黄色固体1.56g即为目标产物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.02(t,J＝6.3Hz,2H),3.52(t,J＝6.4Hz,2H),3.42(s,4H),2.14(s,4H)。
步骤3：4-(6-(3-((6-乙炔基-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈
5mL单口瓶中加入1-(2-氯乙基)吡咯(65mg,0.49mmol)，4-[6-[3-[(6-乙炔基-3-吡啶基)氧基]氮杂环丁烷-1-基]-3-吡啶基]-6-羟基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体5的合成，26mg,0.064mmol)，碳酸钾(60mg,0.42mmol)，DMF(0.8mL)，油浴90℃下反应。反应结束后反应液冷却至室温，加水10mL，EA(20mL×3)萃取，有机相水洗(10mL×6)，无水硫酸钠干燥后过滤，母液浓缩硅胶柱层析(洗脱剂DCM:MeOH＝50:1-20:1)，得黄色固体10mg，即为产物。LC-MS：m/z＝506.10[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(d,J＝1.9Hz,1H),8.21(d,J＝2.7Hz,1H),8.19(s,1H),8.15(d,J＝1.8Hz,1H),7.71(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.46(d,J＝8.6Hz,1H),7.14(d,J＝1.8Hz,1H),7.07(dd,J＝8.6,2.8Hz,1H),6.47(d,J＝8.6Hz,1H),5.17(m,1H),4.58–4.50(m,2H),4.21 4.17(m,4H),3.10(s,1H),3.01(t,J＝5.5Hz,2H),2.70(s,4H),1.85(s,4H)。HPLC：93.60％。
实施例301：6-(2-(1H-咪唑-1-基)乙氧基)-4-(6-(3-((6-乙炔基-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001131
步骤1：1-(2-氯乙基)-1H-咪唑
25mL单口瓶中加入咪唑(500mg,7.3mmol)，加入乙腈(8mL)使其溶解，搅拌下加入碳酸钾(5.2g,36mmol)，1-溴-2-氯乙烷(1.8mL,22mmol)，室温下反应。反应结束后反应液抽滤，滤液旋干，硅胶柱层析，洗脱剂为DCM：MeOH＝20：1，得到无色液体340mg即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54(s,1H),7.09(s,1H),6.98(s,1H),4.28(t,J＝6.0Hz,2H),3.75(t,J＝6.0Hz,2H)。
步骤2：6-(2-(1H-咪唑-1-基)乙氧基)-4-(6-(3-((6-乙炔基-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
5mL单口瓶中加4-[6-[3-[(6-乙炔基-3-吡啶基)氧基]氮杂环丁烷-1-基]-3-吡啶基]-6-羟基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体5的合成，30mg,0.073mmol)，碳酸钾(50mg,0.35mmol)，1-(2-氯乙基)-1H-咪唑(35mg,0.27mmol)，DMA(0.5mL)，油浴90℃下反应。反应结束后反应液中加入水(5mL)，EA(15mL×2)萃取，有机相水洗(5mL×6)，饱和食盐水洗(5mL)，浓缩硅胶柱层析，洗脱剂为DCM:MeOH＝20:1，得到亮黄色固体10mg，即为目标产物。LC-MS：m/z＝503.10[M+H]+，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(d,J＝1.8Hz,1H),8.21(d,J＝2.7Hz,1H),8.19(s,1H),8.09(d,J＝1.7Hz,1H),7.69(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),7.65(s,1H),7.46(d,J＝8.6Hz,1H),7.137.02(m,4H),6.46(d,J＝8.7Hz,1H),5.18(m,1H),4.59 4.51(m,2H),4.43(t,J＝4.7Hz,2H),4.28(t,J＝4.7Hz,2H),4.20(dd,J＝9.2,3.7Hz,2H),3.10(s,1H)，HPLC：94.80％。
实施例302：4-(6-(3-((6-乙炔基-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(恶唑-2-基甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001141
5mL单口瓶中加入4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体5的合成，30mg,0.073mmol)，2-(氯甲基)恶唑(16mg,0.14mmol)，碳酸钾(24mg,0.16mmol)，DMF(0.6mL)，油浴90℃下反应。TLC检测反应结束后，反应液冷却至室温后加水(5mL)，EA(15mL×2)萃取，有机相水洗(5mL×5)，饱和食盐水洗(5mL)，无水硫酸钠干燥过滤，滤液浓缩后残余物硅胶柱层析(洗脱剂DCM:MeOH＝50:1)，得黄色固体7mg即为目标产物。LC-MS：m/z＝490.90[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.85(d,J＝1.9Hz,1H),8.61(s,1H),8.33(s,1H),8.28(d,J＝2.8Hz,1H),8.23(s,1H),7.80(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.56(d,J＝8.6Hz,1H),7.40 7.38(m,1H),7.387.34(m,1H),7.32(s,1H),6.59(d,J＝8.6Hz,1H),5.42(s,2H),5.33(d,J＝4.0Hz,1H),4.53(dd,J＝9.3,6.6Hz,2H),4.20(s,1H),4.02(dd,J＝9.7,3.3Hz,2H)。HPLC：89.19％。
实施例303：4-(6-(4-((6-乙炔基-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001142
步骤1：4-((6-溴吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
双口瓶，依次加入4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(868mg,4.312mmol)，6-溴吡啶-3-醇(500mg,2.873mmol)，三苯基膦(1000mg,3.736mmol)，抽真空充氮气，加入THF(10mL)，冷却到0℃，缓慢滴加二异丙基偶氮二羧酸酯(0.75mL,3.7mmol)(30min)，室温反应过夜。加入水(10mL)，反应液用EA(150mL)萃取，有机相用饱和食盐水(10mL)洗，母液减压旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)纯化得到无色液体产物0.812g，即为目标产物(产率79.1％)。(Rf＝0.4，PE/EA＝4/1)。LC-MS,m/z:301.1[M-tBu]+；303.1[M-tBu+2H]+。
步骤2：4-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下，50mL的双口瓶依次加入4-((6-溴吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.812g,2.27mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(32mg,0.045mmol)，三乙胺(5mL)和THF(5mL)，搅拌15min后，加入CuI(22mg,0.115mmol)和乙炔基(三甲基)硅烷(0.5mL,4mmol)，室温下搅拌2.5h。反应液直接旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)，得到土黄色固体产物0.78g，即为目标产物(产率92％)。(Rf＝0.4，PE/EA＝4/1)。LC-MS，m/z:375.2[M+H]+。
步骤3：4-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
单口瓶，依次加入4-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.78g,2.1mmol)，碳酸钾(557mg,4.0301mmol)，甲醇(10mL)，室温下搅拌1h。反应液过滤，EA(50mL)洗，母液减压旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)，得到淡黄色固体产物0.63g，即为目标产物。(Rf＝0.3，PE/EA＝2/1)。LC-MS：m/z:303.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(d,J＝2.7Hz,1H),7.42(d,J＝8.6Hz,1H),7.15(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),4.53(tt,J＝6.9,3.3Hz,1H),3.76–3.61(m,2H),3.41–3.29(m,2H),3.07(s,1H),2.00–1.86(m,2H),1.80-1.72(m,J＝13.5,7.3Hz,2H),1.47(s,9H)。
步骤4：2-乙炔基-5-(哌啶-4-基氧基)吡啶盐酸盐
单口瓶中依次加入4-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.63g,2.1mmol)，4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(4mL,16mmol)，室温下搅拌1h(有白色固体析出)。反应液减压旋干得到黄白色固体产物0.41g，即为目标产物(产率82％)。LC-MS：m/z:203.1[M+H]+。
步骤5：4-(6-(4-((6-乙炔基-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，向4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，26mg,0.07968mmol)的DMSO(1.5mL)溶液中加入2-乙炔基-5-(哌啶-4-基氧基)吡啶盐酸盐(23mg,0.096351mmol)和DIPEA(0.5mL,3mmol)，加毕，微波反应5h(150℃，5bar)。降到室温后加入水(10mL)和EA(100mL)，有机相用饱和食盐水(6mL×3)洗，无水硫酸钠干燥，过滤后母液减压旋干，硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/3)，得到黄色油状物7.5mg，即为目标产物(产率19％)。LC-MS：m/z:509.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(d,J＝2.3Hz,1H),8.31(d,J＝2.8Hz,1H),8.20(s,1H),8.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.72(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.45(d,J＝8.6Hz,1H),7.20(dd,J＝8.7,2.9Hz,1H),7.15(d,J＝2.0Hz,1H),6.82(d,J＝8.8Hz,1H),4.69–4.61(m,1H),3.97(m,2H),3.87(s,2H),3.67–3.60(m,3H),3.09(s,1H),2.12–2.07(m,2H),1.95–1.89(m,2H),1.40(s,6H)。HPLC：91.29％。
实施例304：4-(((3-氰基-4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002307183200001151
25mL单口瓶中加入4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体5的合成，100mg,0.244mmol)，碳酸钾(158mg,1.11mmol)，4-(溴甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(280mg,1.00mmol)，DMF(3mL)，油浴90℃过夜反应。反应结束后反应液加水20mL，EA(80mL×2)萃取，有机相水洗(20mL×8)，饱和食盐水洗(20mL)，无水硫酸钠干燥后过滤，滤液浓缩硅胶柱层析(洗脱剂DCM:MeOH＝50：1)，得白色固体142mg，即为目标产物。LC-MS：m/z＝606.20[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(d,J＝1.8Hz,1H),8.22(d,J＝2.7Hz,1H),8.19(s,1H),8.11(d,J＝1.8Hz,1H),7.71(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),7.46(d,J＝8.6Hz,1H),7.08-7.06(m,2H),6.47(d,J＝8.6Hz,1H),5.18(s,1H),4.55(dd,J＝9.0,6.6Hz,2H),4.20(dd,J＝9.2,3.7Hz,4H),3.86(d,J＝6.2Hz,2H),3.10(s,1H),2.76(m,2H),2.09-1.98(m,1H),1.85-1.82(m,2H),1.47(s,9H),1.38–1.32(m,2H)，HPLC：98.52％。
实施例305：6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001161
步骤1：2-(二甲基氨基)乙醇
在25mL单口瓶依次加入二甲胺的四氢呋喃溶液(8mL,16.0mmol,2.0mol/L)，2-氯乙醇(1.3mL,19mmol)，甲苯10mL，120℃加热回流5h。反应结束后反应液缓慢恢复至室温，未做后处理，收率按100％计算，直接用下一步。
步骤2：二甲氨基氯乙烷盐酸盐
在25mL单口瓶依次加入2-(二甲基氨基)乙醇的甲苯溶液，冰浴条件下缓慢加入二氯亚砜(2.4mL,31mmol)，滴加结束后恢复至室温搅拌过夜。反应结束后，浓缩除去甲苯和二氯亚砜，得粘稠油状物。加入无水乙醇(3mL)，60℃搅拌溶清，降温析出白色沉淀，过滤，滤饼烘干得白色固体，即为目标产物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.27(s,1H),4.02(t,J＝6.8Hz,2H),3.46(t,J＝6.8Hz,2H),2.78(s,6H)。
步骤3：6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
5mL单口瓶中加入4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体5的合成，20mg,0.04897mmol)，碳酸钾(17mg,0.12mmol)，2-氯-N,N-二甲基-乙胺盐酸盐(10mg,0.069mmol)，DMF(0.4mL)，油浴90℃下过夜反应。反应结束后反应液中加入水(5mL)，EA(15mL×2)萃取，有机相水洗(5mL×5)，无水硫酸钠干燥后过滤，滤液浓缩，TLC层析，得黄色固体5mg。LC-MS：m/z＝480.75[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(d,J＝2.0Hz,1H),8.24 8.14(m,3H),7.70(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.46(d,J＝8.6Hz,1H),7.14(d,J＝1.9Hz,1H),7.07(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),6.46(d,J＝8.6Hz,1H),5.17(m,1H),4.55(dd,J＝9.2,6.5Hz,2H),4.24 4.15(m,4H),3.10(s,1H),2.90(s,2H),2.44(s,6H)。HPLC：96.71％。
实施例306：4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001171
步骤1：3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
室温下，单口瓶中加入3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(5.0g,29mmol)，EtOH(50mL)，搅拌下分次加入NaBH4(1.1g,29mmol)。TLC监控反应结束后往反应液中加入饱和氯化铵溶液至不再产生气泡，析出大量白色固体，抽滤，滤饼用乙醇洗涤(10mL)，滤液减压浓缩除去大部分乙醇，加入30mL水，EA萃取(100mL)，合并有机相，水洗(20mL×2)，饱和氯化钠洗(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:5)，得无色油状物5.0g，即为目标产物。LC-MS:m/z＝118.10[M-tBu+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ4.53(s,1H),4.13-4.09(m,2H),3.78(dd,J＝9.9,4.1Hz,2H),3.54-3.45(m,1H),1.41(s,9H)。
步骤2：3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下双口瓶中加入3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(500mg,2.89mmol)，DCM(15mL)，NaH(0.14g,5.8mmol)，转移至0℃搅拌下逐滴滴加MsCl(0.25mL,3.2mmol)。加毕继续在此温度下反应。TLC监控反应结束后往反应液中加入水(20mL)DCM(50mL)，分离有机相，水相再用EA萃取(50mL)，合并有机相水洗涤(20mL×2)，饱和氯化钠洗涤(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥后过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:5)，得无色油状物566mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝196.10[M-tBu+H]+，m/z＝152.10[M-Boc+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ5.18(tt,J＝6.7,4.2Hz,1H),4.26(ddd,J＝10.3,6.7,1.0Hz,2H),4.11–4.04(m,2H),3.05(s,3H),1.43(s,9H)。
:步骤3：3-((6-溴吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
室温下将6-溴吡啶-3-醇(200mg,1.15mmol)溶解于DMSO(4mL)，搅拌下加入t-BuOK(168mg,1.5mmol)，搅拌20min后升温至80℃，缓慢滴加溶解于DMSO(2mL)中的3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(347mg,1.4mmol)，加毕继续保持该温度下搅拌。TLC监控反应结束后将反应液倾倒入水中(20mL)，EA萃取(50mL×2)，合并有机相，水洗(20mL×2)，饱和食盐水洗(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:20-1:10)，得淡黄色固体320mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝329.05[M+H]+。
步骤4：3-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下，在双口瓶中加入3-((6-溴吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(320mg,0.97mmol)，CuI(37mg,0.19mmol)，PdCl2(PPh3)2(68mg,0.097mmol)，THF(3mL)和TEA(3mL)，转移至50℃搅拌下滴加乙炔基(三甲基)硅烷(191mg,1.95mmol)，加毕继续在此温度下反应。TLC监控反应结束后将反应液过硅藻土抽滤，滤饼用少量EA洗涤，滤液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:20-1:10)，得棕色固体240mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝347.25[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.12(s,1H),7.39(d,J＝8.6Hz,1H),6.97(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),4.92(ddd,J＝10.4,6.3,4.0Hz,1H),4.31(dd,J＝9.6,6.8Hz,2H),4.00(dd,J＝9.8,3.4Hz,2H),1.45(s,9H),0.26(s,9H)。
步骤5：3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
室温下将3-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(240mg,0.69mmol)溶解于甲醇(2mL)中，搅拌下加入碳酸钾(194mg,1.38mmol)，室温反应。TLC监控反应结束后将反应液浓缩，残留物加入水(10mL)，EA萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:20-1:10)，得淡黄色固体180mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝275.20[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(d,J＝2.8Hz,1H),7.43(d,J＝8.6Hz,1H),6.99(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),4.92(tt,J＝6.4,4.1Hz,1H),4.32(ddd,J＝9.7,6.3,0.6Hz,2H),4.01(dd,J＝9.9,3.9Hz,2H),3.09(s,1H),1.45(s,9H)。
步骤6：5-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-乙炔基吡啶盐酸盐
室温搅拌下将3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(180mg,0.66mmol)溶解于HCl/dioxane(3mL,12mmol,4mol/L)中。TLC监控反应完全后直接旋干反应液，得淡黄色固体158mg，即为目标产物。
步骤7：4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
微波管中加入4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，30mg,0.092mmol)，5-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-乙炔基-吡啶二盐酸盐(34mg,0.14mmol)，加入2mL DMSO使其溶解，加入DIPEA(60mg,0.46mmol)，微波120℃反应4h。反应结束后往反应液中加入水(2mL)，EA(10mL×2)萃取，有机相水洗涤(10mL)，饱和氯化钠洗涤(10mL)，无水硫酸钠干燥后过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂DCM:MeOH＝100:1-20:1)，得到棕色固体15mg，即为目标产物。Rf＝0.5(DCM:MeOH＝20:1)。LC-MS:m/z＝481.30[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(d,J＝1.9Hz,1H),8.21(d,J＝2.4Hz,1H),8.20(s,1H),8.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.71(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.46(d,J＝8.6Hz,1H),7.14(d,J＝2.0Hz,1H),7.07(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),6.47(d,J＝8.5Hz,1H),5.17(ddd,J＝10.1,5.0,3.1Hz,1H),4.55(dd,J＝9.1,6.6Hz,2H),4.20(dd,J＝9.5,3.8Hz,2H),3.86(s,2H),3.10(s,1H),1.39(s,6H)。HPLC:92.94％。
实施例307：N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-3-苯基丙炔酰胺
Figure BDA0002307183200001181
5mL的反应瓶，依次加入4-(6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体4的合成，15mg,0.03040mmol)，DCM(2mL)，3-苯基丙-2-炔酸(10mg,0.068428mmol)，N，N'-二环己基碳(10mg,0.0479812mmol)，室温下搅拌反应18h。反应液减压浓缩，残余物硅胶柱层析(DCM/MeOH＝0-100:3)，得白色固体6.5mg，即为目标产物(产率39％)。(Rf＝0.6，DCM/MeOH＝10/1)。LC-MS：m/z＝549.2[M+H]+。HPLC:94.15％。
实施例308：6-乙氧基-4-(6-(4-甲基-4-(炔丙基氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001191
步骤1：4-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
室温下，将4-氨基-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.00g,4.67mmol)溶于乙腈(23mL)，依次加入碳酸钾(967mg,7.00mmol)和3-溴丙炔(0.44mL,5.1mmol)，室温下搅拌过夜。反应液过滤，滤液旋干即得粗产物，为淡黄色油状物1.08g(收率91.7％)。LC-MS:m/z＝253.20[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.45–3.35(m,4H),3.33(d,J＝2.4Hz,2H),2.16(t,J＝2.3Hz,1H),1.52–1.42(m,4H),1.41(s,9H),1.10(s,3H)。
步骤2：4-甲基-4-(N-(丙-2-炔-1-基)乙酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
0℃下，向4-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.2g,4.8mmol)的DCM(48mL)与三乙胺(2.0mL,14mmol)的溶液中缓慢滴加乙酰氯(0.68mL,9.5mmol)，加毕自然升至室温，反应过夜。加水(10mL)淬灭反应，继续搅拌20min。混合物用DCM(50mL)稀释，有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，残余物上样硅胶柱层析(PE:EA＝2:1-1:1)，得黄色油状物1.25g(收率89％)，即为目标产物。核磁数据显示该产物为立体异构体混合物(应该为构象异构体)，比例为2:1。LC-MS:m/z＝317.25[M+Na]+；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ4.01(d,J＝2.4Hz,2H),3.99(d,J＝2.5Hz,1H),3.66–3.53(m,3H),3.28–3.19(m,3H),2.34(t,J＝2.4Hz,0.5H),2.30(t,J＝2.4Hz,1H),2.27(s,1.5H),2.22(s,3H),2.20–2.12(m,3H),2.03–1.94(m,3H),1.50(s,1.5H),1.49(s,3H),1.45(s,13.5H)。
步骤3：4-甲基-4-(N-(丙-2-炔-1-基)乙酰氨基)哌啶-1-鎓，三氟乙酸盐
0℃下，将4-甲基-4-(N-(丙-2-炔-1-基)乙酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.25g,4.25mmol)溶于DCM(42.5mL)，搅拌下向其中加入三氟乙酸(3.2mL,43mmol)，加毕移出冷浴，自然升至室温，反应过夜。减压旋干溶剂，不作进一步纯化，直接用于下一步反应，收率以100％计。LCMS:m/z＝195.15[M-CF3COO]+。
步骤4：6-乙氧基-4-(6-(4-甲基-4-(炔丙基氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
4-甲基-4-(N-(丙-2-炔-1-基)乙酰氨基)哌啶-1-鎓，三氟乙酸盐(98mg,0.32mmol)和6-乙氧基-4-(6-氟-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体1的合成，30mg,0.11mmol)溶于DMSO(1mL)，向其中加入DIPEA(0.10mL,0.60mmol)，微波反应3.5h(150℃，10bar,预搅拌30s)。反应完毕后，待反应液冷却至室温后，加入EA(100mL)稀释，有机相依次以水(20mL)，饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，残余物上样硅胶柱层析(PE:EA＝1:1)，得淡黄色固体20mg(收率45.4％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝415.30[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(d,J＝2.3Hz,1H),8.18(s,1H),8.09(d,J＝1.8Hz,1H),7.69(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.08(d,J＝1.8Hz,1H),6.77(d,J＝8.9Hz,1H),4.08(q,J＝6.9Hz,2H),3.75–3.62(m,4H),3.43(d,J＝2.3Hz,2H),2.21(t,J＝2.3Hz,1H),1.74–1.60(m,4H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H),1.20(s,3H)。
实施例309：4-(6-(4-(4-(环丙基乙炔基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001201
步骤1：4-(环丙基乙炔基)苯甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入4-碘苯甲酸甲酯(500mg,1.9081mmol)，CuI(44mg,0.23103mmol)、PdCl2(PPh3)2(40mg,0.05699mmol)，TEA(5mL),溶解后在0℃搅拌下滴加乙炔基环丙烷(150mg,2.269mmol)，自然升至室温反应过夜。铺硅藻土抽滤，EA洗涤(50mL)，滤液加水(20mL)，分离有机相，水相加EA萃取(50mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，硅胶柱层析(EA:PE＝1:200)，得黄色固体0.3446g，即为目标产物(收率90.21％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(d,J＝8.2Hz,2H),7.41(d,J＝8.2Hz,2H),3.90(s,3H),1.47(ddd,J＝13.1,8.3,5.1Hz,1H),0.94-0.80(m,4H)。
步骤2：4-(环丙基乙炔基)苯甲酸
氮气保护下，在双口瓶中将4-(环丙基乙炔基)苯甲酸甲酯(340mg,1.698mmol)溶解于甲醇(7mL)中，室温搅拌下加入水(0.7mL)，NaOH(68mg,1.7mmol)，反应过夜。反应液中加入20mL水，用1N稀盐酸调节pH＝1，EA萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥过滤，旋得黄色固体0.3055g，即为目标产物(收率96.6％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.01(d,J＝8.3Hz,2H),7.45(d,J＝8.3Hz,2H),1.52-1.43(m,1H),1.25(s,1H),0.94-0.89(m,2H),0.87-0.83(m,2H)。
步骤3：4-(6-(4-(4-(环丙基乙炔基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL的单口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，30mg,0.08611mmol)，4-(环丙基乙炔基)苯甲酸(24mg,0.12889mmol)，EDCI(33mg,0.17214mmol)，DMAP(2mg,0.016371mmol)，DCM(2mL)，室温搅拌反应，TLC监控。反应完毕后加入DCM(30mL)和水(15mL)，水相用DCM萃取(25mL×2)，合并有机相饱和食盐水洗涤(15mL)，分出有机相无水硫酸钠干燥，过滤，硅胶柱层析(PE/EA＝2/1-1.2/1)，收集到黄色产品29.5mg,即为目标产物(收率66.3％)。LC-MS(ESI):m/z572.1[M+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.1Hz,1H),8.19(s,1H),8.11(d,J＝1.9Hz,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,2H),7.36(d,J＝8.2Hz,2H),7.09(d,J＝1.9Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),4.09(q,J＝6.9Hz,2H),3.92-3.54(m,8H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H),1.47-1.41(m,1H),0.90-0.88(m,2H),0.85-0.82(m,2H)。HPLC:98.44％。
实施例310：4-(6-(4-(4-(3-(叔丁氧基)丙-1-炔-1-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001211
步骤1：4-溴-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
在100mL的单口瓶中加入4-溴-3-(三氟甲基)苯甲酸(2g,7.4344mmol)，碳酸铯(2.75g,8.44mmol,)，DMF(50mL)，碘甲烷(0.525mL,8.43mmol)，室温下反应过夜。反应液以EA(50mL)稀释，依次用水(30mL×2)、饱和食盐水(30mL)洗涤，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝100:1-50:1),得淡黄色透明油状液体1.65g即为目标产物(收率78.4％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.89(s,1H),7.75(d,J＝8.3Hz,1H),7.68(d,J＝8.3Hz,1H),3.93(s,3H)。
步骤2：4-(3-(叔丁氧基)丙-1-炔-1-基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入4-溴-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(500mg,1.7665mmol)，CuI(40mg,0.21003mmol)，PdCl2(PPh3)2(37mg,0.05271mmol)，1,4二氧六环(5mL)，溶解后0℃滴加3-(叔丁氧基)丙-1-炔(240mg,2.1396mmol)，再滴加TEA(1.5mL)，50℃反应过夜。往反应液加入水(20mL)淬灭反应，加入EA(50mL)，铺硅藻土抽滤，滤液分离有机相，水相加加EA萃取(50mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:100-1:50)，得黄色油状液体355mg，即为目标产物(收率63.94％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(s,1H),7.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),4.32(s,2H),3.93(s,3H),1.29(s,9H)。
步骤3：4-(3-(叔丁氧基)丙-1-炔-1-基)-3-(三氟甲基)苯甲酸
氮气保护下，在双口瓶中将4-(3-(叔丁氧基)丙-1-炔-1-基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(300mg,0.9545mmol)溶解于甲醇(6mL)中，室温搅拌下一次性加入碳酸钾(270mg,1.9535mmol)，反应过夜。往反应液中加入水(20mL)，用1N稀盐酸调节pH＝1，加EA萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥过滤后旋得黄色固体0.225g，即为目标产物(收率78.6％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.84(s,1H),7.66(d,J＝7.8Hz,1H),4.34(s,2H),1.30(s,9H)
步骤4：4-(6-(4-(4-(3-(叔丁氧基)丙-1-炔-1-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL的单口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，30mg,0.08611mmol)，4-(3-(叔丁氧基)丙-1-炔-1-基)-3-(三氟甲基)苯甲酸(38mg,0.1265mmol)，EDCI(33mg,0.17214mmol)，DMAP(2mg,0.016371mmol)，DCM(2mL)，室温搅拌反应过夜。反应液加入DCM(30mL)和水(15mL)，水相用DCM萃取(25mL×2)，合并有机相饱和食盐水洗涤(15mL)，分出有机相，无水硫酸钠干燥、过滤、旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE/EA＝2/1-1.2/1)，收集到黄色泡沫状固体产品34.4mg,即为目标产物(收率63.3％)。LC-MS(ESI):m/z＝631.2[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(d,J＝1.6Hz,1H),8.18(s,1H),8.11(s,1H),7.79(s,1H),7.73(dd,J＝8.7,2.0Hz,1H),7.65(d,J＝7.8Hz,1H),7.30(d,J＝7.8Hz,1H),7.08(d,J＝1.3Hz,1H),6.77(d,J＝8.8Hz,1H),4.32(s,2H),4.08(dd,J＝13.7,6.8Hz,2H),4.01-3.84(m,2H),3.80-3.68(m,2H),3.63-3.56(m,2H),3.35-3.25(m,2H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H),1.29(s,9H)。HPLC:95.58％。
实施例311：4-(6-(4-(3-(环丙基乙炔基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001221
步骤1：3-(环丙基乙炔基)苯甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入3-溴苯甲酸甲酯(1.0g,4.7mmol)，CuI(180mg,0.94513mmol)，Pd(PPh3)4(540mg,0.46729mmol)，用乙腈(19mL)搅拌溶解后加入TEA(3.2mL,23mmol)和乙炔基环丙烷(460mg,6.959mmol)，缓慢升温至60℃。反应6hTLC检测反应完成。将反应液减压旋干，残留物加60mLEA和20mL水，抽滤，滤液分离有机相，再用10mL饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:20-1:10，得黄色油状物920mg，即为目标产物(收率99.0％)。Rf＝0.8(PE:EA＝10:1)。LC-MS:m/z＝201.10[M+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(s,1H),7.91(d,J＝7.8Hz,1H),7.54(d,J＝7.7Hz,1H),7.33(t,J＝7.8Hz,1H),3.90(s,3H),1.48–1.42(m,1H),0.90–0.85(m,2H),0.84–0.80(m,2H)。
步骤2：3-(环丙基乙炔基)苯甲酸
在单口瓶中将3-(环丙基乙炔基)苯甲酸甲酯(920mg,4.595mmol)用THF(36.8mL)溶解，室温搅拌下加入LiOH(220mg,9.186mmol)，甲醇(18.4mL)和水(18.4mL)。反应过夜。将反应液减压旋去部分溶剂，残留物加30mL水，0℃搅拌下用2N盐酸调节水相pH＝2，析出大量固体，往水相加入EA萃取(100mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥后旋干，得白色固体836mg。收率97.7％。Rf＝0.01(PE:EA＝10:1)。LC-MS:m/z＝187.00[M+H]+，1H-NMR(400MHz,DMSO)δ7.86(d,J＝8.4Hz,2H),7.59(d,J＝7.7Hz,1H),7.46(t,J＝7.7Hz,1H),1.91(s,1H),1.59–1.52(m,1H),0.92–0.87(m,2H),0.78–0.74(m,2H)。
步骤3：4-(6-(4-(3-(环丙基乙炔基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
氮气保护下，在25mL双口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，20mg,0.05741mmol)和3-(环丙基乙炔基)苯甲酸(16mg,0.085924mmol)，用DCM(5mL)溶解后加入DMAP(2mg,0.016371mmol)和EDCI(22mg,0.11476mmol)，置于室温下搅拌反应过夜。往反应液中加入30mL DCM和10mL水，分离有机相，再用10mL水洗，有机相无水硫酸钠干燥，过滤后旋干，硅胶柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:1，得白色固体4mg。收率13.49％。Rf＝0.3(PE:EA＝1:1)。LC-MS:m/z＝517.3[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(s,1H),8.21(s,1H),8.13(s,1H),7.76(d,J＝9.4Hz,1H),7.48–7.44(m,2H),7.37–7.34(m,2H),7.12(s,1H),6.81(d,J＝8.0Hz,1H),4.10(dd,J＝5.3,3.6Hz,2H),3.78–3.63(m,8H),1.55–1.54(m,1H),1.28(s,3H),0.82–0.74(m,4H).HPLC:94.29％。
实施例312：6-乙氧基-4-(6-(4-(3-(丙-2-炔-1-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001231
步骤1：3-(3-(三甲基甲硅烷基)丙-2-炔-1-基)苯甲酸甲酯
氮气保护下，将3-(溴甲基)苯甲酸甲酯(1.0g,4.4mmol)溶解于THF(20mL)中，搅拌下加入CuI(100mg,0.52507mmol)，三苯基膦(110mg,0.4194mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(120mg,0.1310mmol)，乙炔基三甲基硅烷(600mg,6.109mmol)和碳酸铯(2g,6.1384mmol)，于50℃条件下反应过夜。往反应液中加入60mLEA和20mL饱和氯化铵溶液，抽滤，滤液分离有机相，再用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:20-1:10，得棕色油状液体320mg。收率29.7％。Rf＝0.9(PE:EA＝10:1)。LC-MS:m/z＝247.05[M+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.02(s,1H),7.91(d,J＝7.8Hz,1H),7.56(d,J＝7.4Hz,1H),7.40(t,J＝7.7Hz,1H),3.92(s,3H),1.26(s,2H),0.20(s,9H)。
步骤2：3-(丙-2-炔-1-基)苯甲酸
在单口瓶中将3-(3-(三甲基甲硅烷基)丙-2-炔-1-基)苯甲酸甲酯(320mg,1.299mmol)用THF(12.8mL)溶解，室温搅拌下加入LiOH(94mg,3.925mmol)，甲醇(6.4mL)和H2O(6.4mL)，反应过夜。将反应液减压旋去部分溶剂，残留物加30mL水，0℃搅拌下用2N盐酸调节水相pH＝2，析出大量固体，往水相加入EA萃取(100mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥后旋干，得黄色固体200mg。收率96.15％。Rf＝0.01(PE:EA＝10:1)。LC-MS:m/z＝161.10[M+H]+，1H-NMR(400MHz,DMSO)δ7.88(s,1H),7.78(d,J＝7.5Hz,1H),7.52(d,J＝7.6Hz,1H),7.47(d,J＝7.6Hz,1H),6.46(t,J＝6.8Hz,1H),5.35(d,J＝6.8Hz,2H)。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(4-(3-(丙-2-炔-1-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
氮气保护下，在25mL双口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，20mg,0.05741mmol)和3-(丙-2-炔-1-基)苯甲酸(14mg,0.087407mmol)，用DCM(5mL)溶解后加入DMAP(2mg,0.016371mmol)和EDCI(22mg,0.11476mmol)，置于室温下搅拌过夜。往反应液中加入DCM(30mL)和水(30mL)，分离有机相，再水洗(10mL)，有机相无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液旋干后硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:1)，得白色固体12mg，即为目标产物(收率42.61％)。Rf＝0.3(PE:EA＝1:1)。LC-MS:m/z＝491.20[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(d,J＝2.2Hz,1H),8.22(s,1H),8.14(d,J＝1.9Hz,1H),7.77(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.41(dd,J＝11.2,5.7Hz,4H),7.12(d,J＝2.0Hz,1H),6.81(d,J＝8.8Hz,1H),6.21(dd,J＝8.7,4.6Hz,1H),5.22(s,2H),4.10(q,J＝6.5Hz,2H),3.81–3.54(m,8H),1.52(t,J＝6.9Hz,3H).HPLC:97.01％。
实施例313：6-乙氧基-4-(6-(4-(4-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001232
步骤1：4-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)苯甲酸甲酯
氮气保护下，在双口瓶中加入4-碘苯甲酸甲酯(500mg,1.9081mmol)，2-甲基丁-3-炔-2-醇(169mg,2.009mmol)，用TEA(20mL)溶解后加入CuI(15mg,0.078761mmol)和PdCl2(PPh3)2(27mg,0.03847mmol)，室温下搅拌过夜。将反应液减压旋干，残留物加EA(30mL)和水(30mL)，分离有机相，再用饱和食盐水洗涤(10mL)，无水硫酸钠干燥后，过滤，旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:20-1:10，得淡黄色固体400mg。收率96.07％。Rf＝0.4(PE:EA＝10:1)。LC-MS:m/z＝241.10[M+Na]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(d,J＝8.0Hz,2H),7.47(d,J＝8.0Hz,2H),3.91(s,3H),2.08(s,1H),1.63(s,6H)。
步骤2：4-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)苯甲酸
在单口瓶中将4-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)苯甲酸甲酯(400mg,1.833mmol)用甲醇(8mL)溶解，搅拌下加入LiOH(88mg,3.674mmol)，自来水(8mL)，室温下搅拌过夜。将反应液减压旋去部分甲醇，残留物加30mL水，0℃搅拌下用2N盐酸调节水相pH＝2，析出大量固体，往水相加入EA萃取(100mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥后旋干，得黄色固体370mg。收率98.83％。Rf＝0.01(PE:EA＝10:1)。LC-MS:m/z＝203.10[M-H]-，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.81(d,J＝7.3Hz,2H),7.30(d,J＝7.3Hz,2H),4.24(s,1H),1.44(s,6H)。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(4-(4-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
氮气保护下，在25mL双口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，20mg,0.05741mmol)和4-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)苯甲酸(18mg,0.088140mmol)，用DCM(5mL)溶解后加入EDCI(22mg,0.11476mmol)和DMAP(1mg,0.0081853mmol)，置于室温下搅拌5h，TLC检测反应完成。往反应液中加入30mLDCM和10mL水，分离有机相，再用10mL水洗一遍，有机相无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:1，得白色固体21mg(收率68.43％)。Rf＝0.2(PE:EA＝1:1)。LC-MS:535.25[M+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(s,1H),8.19(s,1H),8.11(s,1H),7.74(d,J＝6.8Hz,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,2H),7.40(d,J＝8.1Hz,2H),7.09(s,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),4.07(q,J＝6.8Hz,2H),3.89-3.59(m,8H),2.15(s,1H),1.63(s,6H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H)。HPLC:99.27％。
实施例314：6-乙氧基-4-(6-(2-(3-乙炔基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001241
步骤1：2-(3-乙炔基苯甲酰基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
在25mL的单口瓶中加入2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(500mg,2.081mmol)，DCM(10mL)，3-乙炔基苯甲酸(0.365g,2.50mmol)，EDCI(0.6g,3mmol)，DMAP(0.025g,0.20mmol)，室温搅拌反应过夜。加入二氯甲烷(30mL)和水(20mL)，分出水相用DCM萃取(30mL)，合并有机相后用饱和食盐水洗涤(15mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，硅胶柱层析(洗脱剂为Pe/EA＝80/1-2/1)，得白色泡沫固体295mg，即为目标产物(收率38.47％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.61(s,1H),7.50(dd,J＝16.7,7.1Hz,2H),7.36(s,1H),3.78-3.12(m,8H),3.09(s,1H),1.86(d,J＝4.0Hz,2H),1.57(d,J＝16.4Hz,4H),1.44(d,J＝8.4Hz,5H),1.39(s,4H)，核磁显示有两套峰，为手性化合物。
步骤2：(3-乙炔基苯基)(2,8-二氮杂螺[4.5]癸-2-基)甲酮三氟乙酸盐
在装有2-(3-乙炔基苯甲酰基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.22g,3.31mmol)的50mL单口瓶中，加入DCM(13mL)和TFA(4mL)，室温下搅拌过夜。反应液直接旋干溶剂，泵抽，得到无色透明油状液体，即为目标化合物(收率100％)，未经进一步纯化直接投下一步反应。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(2-(3-乙炔基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在微波管中称取6-乙氧基-4-(6-氟-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体1的合成，20mg,0.07085mmol)，(3-乙炔基苯基)(2,8-二氮杂螺[4.5]癸-2-基)甲酮三氟乙酸盐(55mg,0.1438mmol)，用DMSO(1mL)溶解后加入DIPEA(46mg,0.35593mmol)，微波(150℃，10bar)反应4h。将反应液倒入水(10mL)中，用EA(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥过滤，旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:5-1:1)，得黄色固体8mg，即为目标产物。Rf＝0.3(PE:EA＝2:1)。LC-MS:531.30[M+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.28(d,J＝17.0Hz,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.70-7.64(m,2H),7.54(d,J＝7.1Hz,1H),7.45(d,J＝8.7Hz,2H),7.09(d,J＝5.3Hz,1H),6.73(dd,J＝32.4,8.7Hz,1H),4.09(q,J＝7.0,2.3Hz,2H),3.88–3.51(m,7H),3.47–3.38(m,2H),1.50(q,J＝6.4Hz,3H),1.27–1.24(m,6H)。HPLC:91.38％。
实施例315：4-(6-(4-(2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001251
步骤1：2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酸甲酯和2,5-双(环丙基乙炔基)烟酸甲酯
室温下，氮气保护下，向5-溴-2-氯-吡啶-3-甲酸甲酯(500mg,2.00mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(56mg,0.080mmol)和CuI(19mg,0.10mmol)的混合物中依次加入Et3N(3.3mL,24mmol)，THF(0.2mL,99.9mass％)和环丙基乙炔(0.34mL,4.0mmol)，得黑色悬浊液，将该混合物继续室温搅拌过夜。待反应完全，减压蒸干溶剂，残余物拌硅胶上样硅胶柱层析(PE:EA＝6:1-4:1),得目标产物2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酸甲酯为淡黄色固体250mg(收率53.1％)，目标产物2,5-双(环丙基乙炔基)烟酸甲酯为淡黄色油状物250mg(收率46％)。2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酸甲酯：LC-MS:m/z＝236.05[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),3.94(s,3H),1.50-1.41(m,1H),0.97-0.90(m,2H),0.86–0.82(m,2H)。2,5-双(环丙基乙炔基)烟酸甲酯：LC-MS:m/z＝266.10[M+H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(d,J＝1.9Hz,1H),8.12(d,J＝2.0Hz,1H),3.92(s,3H),1.57-1.52(m,1H),1.51-1.42(m,1H),0.98-0.89(m,6H),0.87-0.81(m,2H)。
步骤2：2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酸
室温下，向2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酸甲酯(250mg,1.06mmol)的THF/H2O(3.5/1.5mL)溶液中一次性加入LiOH·H2O(54mg,1.26mmol)，继续室温搅拌过夜。待反应完全，减压蒸干有机溶剂，加水(10mL)稀释,水相用DCM/PE(2/3mL)混合溶剂洗涤一次。分出水相，用2N盐酸调节pH至3，水相用EA萃取(40mL×2),有机相合并，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，得棕色固体129mg(54.9％)，即为粗产物，不作进一步纯化，直接用于下一步反应。LC-MS:m/z＝222.20[M+H]+。
步骤3：4-(6-(4-(2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，氮气保护下，向6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，25mg,0.072mmol)，2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酸(37.8mg,0.171mmol)，DMAP(2mg,0.016mmol)的DCM(2mL,99.9mass％)溶液中加入EDCI(69mg,0.36mmol)，继续室温搅拌过夜。待反应完全后，用DCM(50mL)稀释，依次用水(20mL)，饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝1.5:1-1:1),得白色固体32.5mg(收率82.1％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝552.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(d,J＝2.0Hz,1H),8.34(d,J＝2.0Hz,1H),8.18(s,1H),8.11(d,J＝1.7Hz,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.62(d,J＝2.1Hz,1H),7.09(d,J＝1.8Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),4.08(q,J＝6.9Hz,2H),4.04–3.82(m,2H),3.84–3.57(m,4H),3.51–3.28(m,2H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H),1.47–1.39(m,1H),0.94–0.82(m,4H)。
实施例316：4-(6-(4-(2,5-双(环丙基乙炔基)烟酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001261
步骤1：2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酸甲酯和2,5-双(环丙基乙炔基)烟酸甲酯
室温下，氮气保护下，向5-溴-2-氯-吡啶-3-甲酸甲酯(500mg,2.00mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(56mg,0.080mmol)和CuI(19mg,0.10mmol)的混合物中依次加入Et3N(3.3mL,24mmol)，THF(0.2mL,99.9mass％)和环丙基乙炔(0.34mL,4.0mmol)，得黑色悬浊液，将该混合物继续室温搅拌过夜。待反应完全，减压蒸干溶剂，残余物拌硅胶上样硅胶柱层析(PE:EA＝6:1-4:1),得目标产物2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酸甲酯为淡黄色固体250mg(收率53.1％)，目标产物2,5-双(环丙基乙炔基)烟酸甲酯为淡黄色油状物250mg(收率46％)。2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酸甲酯：LC-MS:m/z＝236.05[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),3.94(s,3H),1.50-1.41(m,1H),0.97-0.90(m,2H),0.86–0.82(m,2H)。2,5-双(环丙基乙炔基)烟酸甲酯：LC-MS:m/z＝266.10[M+H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(d,J＝1.9Hz,1H),8.12(d,J＝2.0Hz,1H),3.92(s,3H),1.57-1.52(m,1H),1.51-1.42(m,1H),0.98-0.89(m,6H),0.87-0.81(m,2H)。
步骤2：2,5-双(环丙基乙炔基)烟酸
室温下，向2,5-双(环丙基乙炔基)烟酸甲酯(250mg,0.942mmol)的THF/H2O(3.5/1.5mL)溶液中一次性加入LiOH·H2O(80mg,1.91mmol)，加热至40℃，反应4h，减压蒸干有机溶剂，加水(10mL)稀释,水相用DCM/PE(2/3mL)混合溶剂洗涤一次。分出水相，用2N盐酸调节pH至3，水相用EA萃取(40mL×2),有机相合并，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，得棕色固体229mg(96.7％)，即为粗产物，不作进一步纯化，直接用于下一步反应。LC-MS:m/z＝252.20[M+H]+。
步骤3：4-(6-(4-(2,5-双(环丙基乙炔基)烟酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，氮气保护下，向6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，22mg,0.063mmol)，2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酸(37.8mg,0.15mmol)，DMAP(2mg,0.016mmol)的DCM(2mL)溶液中加入EDCI(69mg,0.36mmol)，继续室温搅拌过夜。待反应完全后，用DCM(50mL)稀释，依次用水(20mL)，饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝1:1-1:1.5)，得白色固体7.4mg(收率20％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝582.10[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.53(s,1H),8.34(d,J＝2.0Hz,1H),8.19(s,1H),8.11(s,1H),7.74(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),7.58(d,J＝1.6Hz,1H),7.09(d,J＝1.5Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),4.09(q,J＝6.9Hz,2H),3.93(brs,2H),3.78(brs,2H),3.71–3.31(m,4H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H),1.48–1.42(m,2H),0.93–0.83(m,8H)。
实施例317：4-(6-(4-(2-(环丙基乙炔基)异烟酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001271
步骤1：2-溴异烟酸甲酯
室温下，氮气保护下，向2-溴异烟酸(513mg,2.54mmol)，DMAP(31mg,0.25mmol)，EDCI(737mg,3.81mmol)的DCM(25mL)溶液一次性加入MeOH(0.5mL,10mmol)，室温反应6h。反应用DCM(50mL)稀释，依次用水(20mL)，饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝4:1-2:1)，得淡黄色油状物350mg(收率63.8％)，经放置过夜后成为白色固体。LC-MS:m/z＝218.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(d,J＝5.0Hz,1H),8.03(s,1H),7.80(dd,J＝5.0,1.0Hz,1H),3.96(s,3H)。
步骤2：2-(环丙基乙炔基)异烟酸甲酯
室温下，氮气保护下，向2-溴异烟酸甲酯(350mg,1.62mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(45mg,0.064mmol)和CuI(15mg,0.079mmol)的混合物中依次加入Et3N(3mL,21.5mmol)，THF(0.2mL)和环丙基乙炔(0.30mL,4.0mmol)，得黑色悬浊液，将该混合物继续室温搅拌过夜。减压蒸干溶剂，加硅胶拌样，上样硅胶柱层析(PE:EA＝6:1-4:1),得淡黄色固体247mg(收率75.8％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝202.10[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.65(d,J＝5.0Hz,1H),7.88(s,1H),7.69(dd,J＝5.0,1.2Hz,1H),3.94(s,3H),1.53–1.44(m,1H),0.94–0.85(m,4H)。
步骤3：2-(环丙基乙炔基)异烟酸
室温下，向2-(环丙基乙炔基)异烟酸甲酯(240mg,1.19mmol)的THF/H2O(3.5/1.5mL)溶液中一次性加入LiOH·H2O(76mg,1.78mmol)，继续室温搅拌过夜。减压蒸干有机溶剂，加水(10mL)稀释,，用2N盐酸调节pH至3，水相用DCM/EtOH混合溶剂(1:1)萃取(40mL×2),有机相合并，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，50℃真空干燥11h,得黄色固体156mg(69.9％),即为粗产物，不作进一步纯化，直接用于下一步反应。LC-MS:m/z＝188.05[M+H]+。
步骤4：4-(6-(4-(2-(环丙基乙炔基)异烟酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，氮气保护下，向6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，18.4mg,0.053mmol)，2-氯-5-(环丙基乙炔基)烟酸(37.0mg,0.198mmol)，DMAP(2mg,0.016mmol)的DCM(2mL)溶液中加入EDCI(69mg,0.36mmol)，继续室温搅拌过夜。待反应完全后，用DCM(50mL)稀释，依次用水(20mL)，饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝1:1.5)，得白色固体17.0mg(收率62.2％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝518.10[M+H]+,259.6[M/2+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.61(d,J＝4.9Hz,1H),8.33(d,J＝2.1Hz,1H),8.18(s,1H),8.11(d,J＝1.8Hz,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.35(s,1H),7.19(d,J＝4.9Hz,1H),7.08(d,J＝1.8Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),4.08(q,J＝6.9Hz,2H),3.90(brs,2H),3.78–3.61(m,4H),3.49(brs,2H),1.48(t,J＝6.9Hz,3H),1.07–1.02(m,1H),0.94–0.87(m,4H)。
实施例318：6-乙氧基-4-(6-(4-(4-乙炔基-3-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001281
步骤1：3-氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入3-氟-4-碘苯甲酸甲酯(500mg,1.7855mmol)，CuI(40mg,0.21003mmol)，PdCl2(PPh3)2(37mg,0.05271mmol)，TEA(5mL)，乙炔基(三甲基)硅烷(210mg,2.138mmol)，室温下反应过夜。反应液铺硅藻土抽滤，滤饼用EA(20mL)洗涤，母液旋干，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝0:500-1:100)，得442mg淡黄色透明液体即为目标产物(收率98.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79–7.66(m,2H),7.51(t,J＝7.4Hz,1H),3.92(s,3H),0.27(s,9H)。
步骤2：4-乙炔基-3-氟苯甲酸
在双口瓶中将3-氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯(440mg,1.758mmol)溶解于甲醇(9mL)和水(0.45mL)中，一次性加入碳酸钾(500mg,3.6177mmol)，室温搅拌反应过夜。反应液中加入水(30mL)和EA(20mL)，分出水相用1N稀盐酸调节pH＝1，EA萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤后旋干得淡粉色固体194mg，即为目标产物(收率67.25％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.49(s,1H),7.75(dd,J＝12.2,9.0Hz,2H),7.69(t,J＝7.5Hz,1H),4.75(s,1H)。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(4-(4-乙炔基-3-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL的单口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，25mg,0.06495mmol)，4-乙炔基-3-氟苯甲酸(15mg,0.091391mmol)，EDCI(25mg,0.13041mmol)，DMAP(2mg,0.016371mmol)，DIPEA(0.05mL,0.3mmol)，DCM(2mL)，室温搅拌反应过夜。反应液加入DCM(30mL)和水(15mL)，分出水相用DCM萃取(25mL×2)，合并有机相并用饱和食盐水洗涤(15mL)，分出有机相，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干硅胶柱层析(洗脱剂PE/EA＝4/1-1.5/1)，得黄色固体22.9mg，即为目标产物(收率71.3％)。LC-MS(ESI):m/z＝495.0[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.11(d,J＝1.9Hz,1H),7.75(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.56(t,J＝7.5Hz,1H),7.22(s,1H),7.09(d,J＝1.9Hz,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,1H),6.53(d,1H),4.09(q,J＝7.0Hz,2H),3.94-3.52(m,8H),3.39(s,1H),1.50(t,J＝6.9Hz,3H)。HPLC:94.67％。
实施例319：6-乙氧基-4-(6-(4-(4-乙炔基吡啶酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001291
步骤1：4-溴吡啶甲酸甲酯
在50ml单口瓶中，依次加入4-溴吡啶-2-羧酸(1g,4.9505mmol)，DMF(25mL)，碳酸铯(1.77g,5.43mmol)，碘甲烷(0.34mL,5.5mmol)，室温下搅拌反应过夜。加入25mL水和40mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(40mL×2)，合并有机相水洗(25mL)，饱和氯化钠洗涤(25mL)，无水硫酸钠干燥后过滤，旋干硅胶柱层析(洗脱剂为PE/EA＝25/1-8/1)，收集得到白色针状结晶固体805mg，即为目标产物(收率75.3％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.56(d,J＝5.2Hz,1H),8.30(d,J＝1.5Hz,1H),7.66(dd,J＝5.2,1.8Hz,1H),4.02(s,3H)。
步骤2：4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入4-溴吡啶甲酸甲酯(800mg,3.7032mmol)，CuI(84mg,0.44106mmol)和PdCl2(PPh3)2(77mg,0.1097mmol)，无水THF(5mL)，乙炔基(三甲基)硅烷(436mg,4.439mmol)，在0℃搅拌下滴加TEA(2.4mL,100mass％)，室温下反应过夜。反应液加入20mL水淬灭反应，加入EA(50mL)，铺硅藻土抽滤，滤液分离有机相，水相EA萃取(50mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥后抽滤旋干，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:20-1:7)，得黄色固体423mg即为目标产物(收率48.95％)。LC-MS(ESI):m/z＝234.2[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.68(d,J＝4.9Hz,1H),8.14(s,1H),7.50–7.43(m,1H),4.01(s,3H),0.27(s,9H)。
步骤3：4-乙炔基吡啶甲酸
氮气保护下，在双口瓶中将4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶甲酸甲酯(420mg,1.7999mmol)溶解于无水甲醇(8mL)中，搅拌下一次性加入碳酸钾(500mg,3.6177mmol,100mass％)，室温反应过夜。往反应液中加入水(20mL)，用1N稀盐酸调节pH＝1，加EA萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥、抽滤、旋得黄色固体95mg即为目标产物(收率35.9％)。1H NMR(600MHz,(CD3)2SO)δ8.73(d,J＝4.9Hz,1H),8.00(s,1H),7.70(dd,J＝4.9,1.6Hz,1H),4.74(s,1H)。
步骤4：6-乙氧基-4-(6-(4-(4-乙炔基吡啶酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL的单口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，25mg,0.07176mmol)，4-乙炔基吡啶甲酸(15mg,0.10195mmol)，EDCI(27mg,0.14085mmol)，DMAP(2mg,0.016371mmol)，DCM(2mL)，DIPEA(0.035mL,0.21mmol)，室温搅拌反应过夜。反应液加入DCM(30mL)和水(15mL)，分出水相用DCM萃取(25mL×2)，合并有机相饱和食盐水洗涤(15mL)，分出有机相无水硫酸钠干燥，过滤，旋干硅胶柱层析(洗脱剂PE/EA＝3/1-1.5/1)，得黄色固体19.8mg，即为目标产物(收率57.8％)。LC-MS(ESI):m/z＝478.0[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(d,J＝5.0Hz,1H),8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.11(d,J＝1.8Hz,1H),7.77(s,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.42(d,J＝5.0Hz,1H),7.09(d,J＝1.9Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),4.09(q,J＝6.9Hz,2H),3.95(t,J＝5.3Hz,2H),3.82-3.75(m,4H),3.73(t,2H),3.36(s,1H),1.50(t,J＝7.0Hz,3H)。HPLC:97.85％。
实施例320：4-(6-(4-(3-氯-4-乙炔基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001301
步骤1：3-氯-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入4-溴-3-氯苯甲酸甲酯(500mg,2.0041mmol)，CuI(45mg,0.23628mmol)和PdCl2(PPh3)2(42mg,0.05984mmol,)，TEA(5mL)，乙炔基(三甲基)硅烷(240mg,2.443mmol),80℃下反应过夜。往反应液加入水(20mL)淬灭反应，加入EA(50mL)，铺硅藻土抽滤，滤液分离有机相，水相EA萃取(50mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥、过滤，旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:500-1:50)，得淡黄色液体500mg，即为目标产物(收率93.5％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.05(d,J＝1.3Hz,1H),7.85(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H),7.55(d,J＝8.1Hz,1H),3.92(s,3H),0.28(s,9H)。
步骤2：3-氯-4-乙炔基苯甲酸
在双口瓶中将3-氯-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯(500mg,1.874mmol)溶解于甲醇(10mL)和水(0.5mL)中，搅拌下一次性加入碳酸钾(550mg,3.9795mmol,100mass％)，室温搅拌反应过夜。反应液中加入(30mL)水和EA(20mL)，分出水相用1N稀盐酸调节pH＝1，EA萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥、抽滤、旋干得白色固体229mg，即为目标产物(收率67.66％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.13(d,1H),7.93(dd,J＝8.1Hz,1H),7.62(d,J＝8.1Hz,1H),3.56(s,1H)。
步骤3：4-(6-(4-(3-氯-4-乙炔基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL的单口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(20mg,0.05741mmol)，3-氯-4-乙炔基苯甲酸(15mg,0.083061mmol)，EDCI(22mg,0.11476mmol)，DMAP(2mg,0.016371mmol)，DCM(2mL)，DIPEA(0.5mL,3mmol)，室温搅拌反应过夜。反应液加入DCM(30mL)和水(15mL)，分出水相用DCM萃取(25mL×2)，合并有机相饱和食盐水洗涤(15mL)，分出有机相无水硫酸钠干燥，过滤，旋干硅胶柱层析(洗脱剂PE/EA＝3/1-1.5/1)，得黄色固体17.3mg，即为目标产物(收率59.0％)。LC-MS(ESI):m/z＝511.0[M+H]+。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ8.35(d,1H),8.19(s,1H),8.11(d,1H),7.75(d,J＝8.8Hz,1H),7.60(d,J＝7.9Hz,1H),7.52(s,1H),7.31(d,J＝9.0Hz,1H),7.09(d,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,1H),4.09(q,J＝6.8Hz,2H),3.97-3.84(m,2H),3.75-3.66(m,4H),3.63-3.51(m,2H),3.46(s,1H),1.50(t,J＝6.9Hz,3H)。HPLC:95.85％。
实施例321：6-乙氧基-4-(6-(4-(3-乙炔基-4-甲基苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001311
步骤1：4-甲基-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入3-碘-4-甲基苯甲酸甲酯(500mg,1.8111mmol)，CuI(41mg,0.21528mmol)，PdCl2(PPh3)2(38mg,0.05414mmol)，TEA(5mL)，乙炔基(三甲基)硅烷(0.31mL,2.2mmol)，80℃下反应过夜。往反应液加入EA(30mL)，铺硅藻土抽滤，滤液旋干，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:500-1:50)，得白色轻质固体257mg，即为目标产物(收率57.6％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(d,J＝1.1Hz,1H),7.86(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.26(d,J＝2.9Hz,1H),3.90(s,3H),2.48(s,3H),0.26(s,9H)。
步骤2：3-乙炔基-4-甲基苯甲酸
在双口瓶中将4-甲基-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯(250mg,1.015mmol)溶解于甲醇(5mL)和水(0.25mL)中，搅拌下一次性加入NaOH(80mg,2mmol)，室温搅拌反应过夜。反应液中加入(30mL)水和EA(20mL)，分出水相用1N稀盐酸调节pH＝1，EA萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL，有机相无水硫酸钠干燥、抽滤、旋干得白色固体118mg，即为目标产物(收率69.7％)。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(4-(3-乙炔基-4-甲基苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL的单口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，20mg,0.05741mmol)，3-乙炔基-4-甲基苯甲酸(15mg,0.093650mmol)，EDCI(22mg,0.11476mmol)，DMAP(2mg,0.016371mmol)，DCM(2mL)，DIPEA(0.5mL,3mmol)，室温搅拌反应过夜。反应液加入DCM(30mL)和水(15mL)，分出水相用DCM萃取(25mL×2)，合并有机相饱和食盐水洗涤(15mL)，分出有机相无水硫酸钠干燥，过滤，旋干硅胶柱层析(洗脱剂PE/EA＝3/1-1.5/1)，得黄色固体7.5mg，即为目标产物(收率27.0％)。LC-MS(ESI):m/z＝491.2[M+H]+。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.11(d,J＝1.7Hz,1H),7.74(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),7.55(s,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,1H),7.29(d,J＝7.9Hz,1H),7.09(d,J＝1.8Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),4.09(dd,J＝13.9,6.9Hz,2H),3.93-3.55(m,8H),3.32(s,1H),2.49(s,3H),1.50(t,J＝6.9Hz,3H)。HPLC:99.09％。
实施例322：6-乙氧基-4-(6-(4-(3-乙炔基-4-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001321
步骤1：4-氟-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入3-溴-4-氟苯甲酸甲酯(500mg,2.1456mmol)，CuI(49mg,0.25729mmol)和PdCl2(PPh3)2(45mg,0.06411mmol)，TEA(5mL)，乙炔基(三甲基)硅烷(260mg,2.647mmol)，80℃下反应过夜。反应液加入水(20mL)淬灭反应，加入EA(50mL)，铺硅藻土抽滤，滤液分离有机相，水相加EA萃取(50mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥、抽滤、旋干，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:500-1:50)，得淡黄色液体352mg,即为目标产物(收率65.5％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.05(d,J＝1.3Hz,1H),7.85(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H),7.55(d,J＝8.1Hz,1H),3.92(s,3H),0.28(s,9H)。
步骤2：3-乙炔基-4-氟苯甲酸
在双口瓶中将4-氟-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯(350mg,1.9645mmol)溶解于甲醇(7mL)和水(0.35mL)中，搅拌下一次性加入碳酸钾(400mg,2.8941mmol)，室温搅拌反应过夜。应液中加入(30mL)水和EA(20mL)，分出水相用1N稀盐酸调节pH＝1，EA萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥、抽滤、旋干得白色固体219mg，即为目标产物(收率67.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(dd,J＝6.7,2.0Hz,1H),8.13-8.06(m,1H),7.18(t,J＝8.7Hz,1H),3.36(s,1H)。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(4-(3-乙炔基-4-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL的单口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，20mg,0.05741mmol)，3-乙炔基-4-氟苯甲酸(14mg,0.085298mmol)，EDCI(22mg,0.11476mmol)，DMAP(2mg,0.016371mmol)，DCM(2mL)，DIPEA(0.5mL,3mmol,％)，室温搅拌反应过夜。反应液加入DCM(30mL)和水(15mL)，分出水相用DCM萃取(25mL×2)，合并有机相饱和食盐水洗涤(15mL)，分出有机相无水硫酸钠干燥、过滤、旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE/EA＝3/1-1.5/1)，得黄色固体26.1mg，即为目标产物(收率84.9％)。LC-MS(ESI):m/z＝495.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.19(s,1H),8.11(s,1H),7.75(d,1H),7.61(d,1H),7.46(t,1H),7.16(t,1H),7.09(s,1H),6.78(d,1H),4.09(q,J＝6.9Hz,2H),3.97-3.53(m,8H),3.36(s,1H),1.49(t,J＝6.8Hz,3H)。HPLC:98.45％。
实施例323：6-乙氧基-4-(6-(4-(4-乙炔基-2,6-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001322
步骤1：2,6-二氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入4-溴-2,6-二氟苯甲酸甲酯(590mg,2.3504mmol)，CuI(53mg,0.27829mmol)和PdCl2(PPh3)2(50mg,0.07124mmol)，加入TEA(6mL)，乙炔基(三甲基)硅烷(0.4mL,3mmol)，70℃下反应过夜。往反应液加入EA(30mL)，铺硅藻土抽滤，滤液旋干，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:500-1:50)，得淡黄色液体489mg,即为目标产物(收率77.54％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.02(d,J＝8.4Hz,2H),3.94(s,3H),0.25(s,9H)。
步骤2：4-乙炔基-2,6-二氟苯甲酸
在双口瓶中将2,6-二氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯(480mg,1.789mmol)溶解于甲醇(10mL)和水(0.5mL)中，搅拌下一次性加入NaOH(145mg,3.625mmol)，室温搅拌反应过夜。反应液中加入(30mL)水和EA(20mL)，分出水相用1N稀盐酸调节pH＝1，EA萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥、抽滤、旋干得淡黄色固体304mg，即为目标产物(收率93.3％)。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(4-(4-乙炔基-2,6-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL的单口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，20mg,0.05741mmol)，4-乙炔基-2,6-二氟苯甲酸(16mg,0.087854mmol)，EDCI(22mg,0.11476mmol)，DMAP(2mg,0.016371mmol)，DCM(2mL)，DIPEA(0.5mL,3mmol)，室温搅拌反应过夜。反应液加入DCM(30mL)和水(15mL)，分出水相用DCM萃取(25mL×2)，合并有机相饱和食盐水洗涤(15mL)，分出有机相无水硫酸钠干燥、过滤、旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE/EA＝3/1-1.5/1)，得黄色固体5.6mg，即为目标产物(收率19％)。LC-MS(ESI):m/z＝513.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.19(s,1H),8.11(s,1H),7.75(d,1H),7.09(d,3H),6.79(d,1H),4.09(q,2H),4.00–3.91(m,2H),3.80–3.66(m,4H),3.50–3.42(m,2H),3.24(s,1H),1.50(t,3H)。HPLC:96.26％。
实施例324：6-乙氧基-4-(6-(4-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶基羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001331
步骤1：5-(丙-1-炔-1-基)吡啶甲酸甲酯
室温下，氮气保护下，向5-溴吡啶甲酸甲酯(500mg,2.31mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(64mg,0.091mmol)和CuI(22mg,0.12mmol)的混合物中依次加入Et3N(3.8mL,27mmol)，THF(10mL)和丙炔(9.1mL,4.6mmol,3％的正戊烷溶液)，得黑色悬浊液，将该混合物加热至50℃反应过夜。减压旋干溶剂，向残余的黑色混合物中加入水(30mL)和乙酸乙酯(40mL),用垫硅藻土的砂芯漏斗过滤，水相用EA(20mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝6:1-4:1)，得黄色固体73mg(收率18％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝176.15[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(s,1H),8.06(d,J＝8.1Hz,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,1H),4.00(s,3H),2.11(s,3H)。
步骤2：5-(丙-1-炔-1-基)吡啶甲酸
室温下，向5-(丙-1-炔-1-基)吡啶甲酸甲酯(70mg,0.40mmol)的THF/H2O(2.0/0.8mL)溶液中一次性加入LiOH·H2O(25mg,0.58mmol)，室温反应7h，减压蒸干有机溶剂，加水(10mL)稀释,水相用DCM/PE(2/3mL)混合溶剂洗涤一次。分出水相，用2N盐酸调节pH至3，水相用EA萃取(40mL×2),有机相合并，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，得棕色固体64mg(96.7％)，即为粗产物，不作进一步纯化，直接用于下一步反应。LC-MS:m/z＝162.10[M+H]+。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(4-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶基羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，氮气保护下，向4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-鎓氯化物(18mg,0.047mmol)，5-(丙-1-炔-1-基)吡啶甲酸(15.0mg,0.093mmol)，DMAP(1mg,0.008mmol)的DCM(1mL)溶液中加入DIPEA(0.1mL,0.6mmol)和EDCI(45mg,0.23mmol)，继续室温搅拌过夜。待反应完全后，用DCM(50mL)稀释，依次用水(20mL)，饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝1.5:1-1:1)，得白色固体12.0mg(收率52％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝492.05[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(s,1H),8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.11(d,J＝1.8Hz,1H),7.78(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.66(d,J＝8.1Hz,1H),7.09(d,J＝1.9Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),4.08(q,J＝6.9Hz,2H),3.98–3.90(m,2H),3.85–3.75(m,4H),3.74–3.67(m,2H),2.10(s,3H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例325：6-乙氧基-4-(6-(4-(5-乙炔基呋喃-2-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001341
步骤1：5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)呋喃-2-羧酸甲酯
室温下，氮气保护下，向5-溴呋喃-2-甲酸甲酯(600mg,2.93mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(102mg,0.15mmol)和CuI(27mg,0.14mmol)的THF(5mL)悬浊液中依次加入Et3N(3.0mL,22mmol)，和三甲基硅基乙炔(0.80mL,6mmol)，得黑色悬浊液，将该混合物室温反应过夜。减压旋干溶剂，向残余的黑色混合物中加入水(30mL)和乙酸乙酯(50mL),用垫硅藻土的砂芯漏斗过滤，水相用EA(20mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝10:1)，得淡棕色油状物650mg(收率99.9％)，即为目标产物，放置过夜后成为针状结晶。LC-MS:m/z＝223.20[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.13(d,J＝3.6Hz,1H),6.63(d,J＝3.6Hz,1H),3.89(s,3H),0.25(s,9H)。
步骤2：5-乙炔基呋喃-2-羧酸
室温下，向5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)呋喃-2-羧酸甲酯(640mg,2.88mmol)的THF/H2O(14.0/6.0mL)溶液中一次性加入LiOH·H2O(308mg,7.09mmol)，室温反应过夜，减压蒸干有机溶剂，加水(20mL)稀释,水相用DCM/PE(10/5mL)混合溶剂洗涤一次。分出水相，用2N盐酸调节pH至3，水相用EA萃取(50mL×2),有机相合并，用饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，得黄色固体340mg(收率：86.8％)，即为粗产物，不作进一步纯化，直接用于下一步反应。LC-MS:m/z＝137.10[M+H]+。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(4-(5-乙炔基呋喃-2-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，氮气保护下，向4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-鎓氯化物(18mg,0.047mmol)，5-乙炔基呋喃-2-羧酸(12.0mg,0.088mmol)，DMAP(1mg,0.008mmol)的DCM(1mL)溶液中加入DIPEA(0.1mL,0.6mmol)和EDCI(45mg,0.23mmol)，继续室温搅拌过夜。待反应完全后，用DCM(50mL)稀释，依次用水(20mL)，饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝1.5:1-1:1)，得白色固体17.0mg(收率79％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝467.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.19(s,1H),8.11(s,1H),7.75(d,J＝8.6Hz,1H),7.13–7.02(m,2H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),6.72(s,1H),4.09(q,J＝6.7Hz,2H),4.03–3.86(m,4H),3.82–3.65(m,4H),3.45(s,1H),1.50(t,J＝6.7Hz,3H)。
实施例326：6-乙氧基-4-(6-(4-(5-乙炔基噻吩-2-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001351
步骤1：5-溴噻吩-2-羧酸甲酯
室温下，在氮气保护下，向5-溴噻吩-2-羧酸(500mg,2.42mmol)的DMF(9mL)溶液中依次加入K2CO3(671mg,4.83mmol)和CH3I(0.30mL,4.8mmol)，室温反应5h。反应以EA(50mL)和水(15mL)稀释，水相用EA萃取(20mL×2),合并有机相，依次用水(20mL),饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，残余物上样快速硅胶柱层析(PE:EA＝6:1),得白色固体386mg(收率72％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.55(d,J＝4.0Hz,1H),7.07(d,J＝3.9Hz,1H),3.87(s,3H)。
步骤2：5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)噻吩-2-羧酸甲酯
室温以及氮气保护下，向5-溴噻吩-2-甲酸甲酯(350mg,1.58mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(60mg,0.086mmol)和CuI(16mg,0.084mmol)的THF(5mL)悬浊液中依次加入Et3N(1.7mL,12mmol)，和三甲基硅基乙炔(0.50mL,4mmol)，得黑色悬浊液，将该混合物60℃反应过夜。减压旋干溶剂，向残余的黑色混合物中加入水(30mL)和乙酸乙酯(50mL)，用垫硅藻土的砂芯漏斗过滤，水相用EA(20mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝50:1-30:1)，得黄色油状物192mg(收率50.9％)，即为目标产物，经放置过夜成为棕色晶体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.62(d,J＝3.9Hz,1H),7.16(d,J＝3.9Hz,1H),3.88(s,3H),0.26(s,9H)。
步骤3：5-乙炔基噻吩-2-羧酸
室温下，向5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)噻吩-2-羧酸甲酯(187mg,0.78mmol)的THF/H2O(5.0/2.0mL)溶液中一次性加入LiOH·H2O(83mg,1.94mmol)，室温反应过夜，减压蒸干有机溶剂，加水(20mL)稀释,水相用DCM/PE(10/5mL)混合溶剂洗涤一次。分出水相，用2N盐酸调节pH至3，水相用EA萃取(50mL×2),有机相合并，用饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，得黄色固体112mg(93.8％)，即为粗产物，不作进一步纯化，直接用于下一步反应。m/z＝153.10[M+H]+。
步骤4：6-乙氧基-4-(6-(4-(5-乙炔基噻吩-2-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温以及氮气保护下，向4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-鎓氯化物(20mg,0.047mmol)，5-乙炔基噻吩-2-羧酸(23.0mg,0.15mmol)，DMAP(1mg,0.008mmol)的DCM(1mL)溶液中加入DIPEA(0.1mL,0.6mmol)和EDCI(50mg,0.26mmol)，继续室温搅拌过夜。待反应完全后，用DCM(50mL)稀释，依次用水(20mL)，饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝1.5:1-1:1)，得白色固体12.0mg(收率47.8％)，即为目标产物。m/z＝483.30[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.11(d,J＝1.9Hz,1H),7.75(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.21(s,2H),7.09(d,J＝1.9Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),4.09(q,J＝6.9Hz,2H),3.94–3.84(m,4H),3.79–3.70(m,4H),3.43(s,1H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例327：4-(6-(6-(4-乙炔基苯甲酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001361
氮气保护下，在10mL双口瓶中加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，20mg,0.04189mmol)和4-乙炔基苯甲酸(8mg,0.054742mmol)，用DCM(2mL)溶解后加入DMAP(2mg,0.016371mmol)和EDCI(16mg,0.083464mmol)，室温搅拌过夜。往反应液中加入DCM(30mL)和水(30mL)，水相DCM萃取(30mL×2)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶薄层板层析(展开剂DCM:MeOH＝50:1)，得白色固体13mg(收率58.26％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝533.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(d,J＝2.1Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝1.8Hz,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.62-7.50(m,4H),7.14(d,J＝1.8Hz,1H),6.63(d,J＝8.8Hz,1H),4.80–4.66(m,2H),4.30(s,1H),3.86(s,2H),3.83-3.59(m,4H),3.18(s,1H),2.96-2.88(m,1H),2.26-2.17(m,1H),1.39(s,6H)。HPLC:99.01％。
实施例328：4-(6-(6-(3-乙炔基苯甲酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001371
氮气保护下，在10mL双口瓶中加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，20mg,0.04189mmol)和3-乙炔基苯甲酸(8mg,0.054742mmol)，用DCM(2mL)溶解后加入DMAP(2mg,0.016371mmol)和EDCI(16mg,0.083464mmol)，室温搅拌过夜。往反应液中加入DCM(30mL)和水(30mL)，水相DCM萃取(30mL×2)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶薄层板层析(展开剂DCM:MeOH＝50:1)，得白色固体16mg(收率71.71％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝533.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.77-7.72(m,2H),7.64-7.58(m,2H),7.39(t,J＝7.7Hz,1H),7.14(d,J＝2.0Hz,1H),6.64(d,J＝8.8Hz,1H),4.79-4.69(m,2H),4.30(s,1H),3.86(s,2H),3.80-3.67(m,4H),3.11(s,1H),2.97-2.91(m,1H),2.26-2.18(m,1H),1.39(s,6H)。HPLC:98.93％。
实施例329：4-(6-(6-(4-乙炔基-3-氟苯甲酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001372
步骤1：3-氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入3-氟-4-碘苯甲酸甲酯(500mg,1.7855mmol)，CuI(40mg,0.21003mmol)，PdCl2(PPh3)2(37mg,0.05271mmol)，TEA(5mL)，乙炔基(三甲基)硅烷(210mg,2.138mmol)，室温下反应过夜。反应液用硅藻土抽滤，滤饼用EA(20mL)洗涤，母液旋干，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝0:500-1:100)，得442mg淡黄色透明液体即为目标产物(收率98.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79–7.66(m,2H),7.51(t,J＝7.4Hz,1H),3.92(s,3H),0.27(s,9H)。
步骤2：4-乙炔基-3-氟苯甲酸
在双口瓶中将3-氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯(440mg,1.758mmol)溶解于甲醇(9mL)和水(0.45mL)中，一次性加入碳酸钾(500mg,3.6177mmol)，室温搅拌反应过夜。反应液中加入水(30mL)和EA(20mL)，分出水相用1N稀盐酸调节pH＝1，EA萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤后旋干得淡粉色固体194mg，即为目标产物(收率67.25％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.49(s,1H),7.75(dd,J＝12.2,9.0Hz,2H),7.69(t,J＝7.5Hz,1H),4.75(s,1H)。
步骤3：4-(6-(6-(4-乙炔基-3-氟苯甲酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
氮气保护下，在25mL双口瓶中加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15mg,0.032mmol)和4-乙炔基-3-氟苯甲酸(3,8mg,0.049mmol)，用DCM(5mL)溶解后加入DMAP(2mg,0.0164mmol)和EDCI(12mg,0.0626mmol)，置于室温下搅拌过夜。往反应液中加入30mLDCM和10mL水，分离有机相，再用10mL水洗一遍，有机相无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂MeOH:DCM＝1:50-1:30，得白色固体3mg。收率17.34％。Rf＝0.3(MeOH:DCM＝1:30)。LC-MS:m/z＝551.40[M+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.1Hz,1H),8.20(s,1H),8.16(d,J＝1.8Hz,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),7.54(d,J＝7.8Hz,1H),7.38(d,J＝4.4Hz,1H),7.35(d,J＝2.1Hz,1H),7.14(d,J＝1.8Hz,1H),6.64(d,J＝8.8Hz,1H),4.73(d,J＝22.3Hz,2H),4.30(d,J＝6.9Hz,1H),3.86(s,2H),3.81–3.76(m,1H),3.74–3.69(m,2H),3.41(s,1H),2.96–2.89(m,1H),2.04–2.01(m,1H),1.25(s,6H)。HPLC:93.93％。
实施例330：4-(6-(6-(4-乙炔基-2,6-二氟苯甲酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001381
步骤1：2,6-二氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入4-溴-2,6-二氟苯甲酸甲酯(590mg,2.3504mmol)，CuI(53mg,0.27829mmol)和PdCl2(PPh3)2(50mg,0.07124mmol)，加入TEA(6mL)，乙炔基(三甲基)硅烷(0.4mL,3mmol)，70℃下反应过夜。往反应液加入EA(30mL)，铺硅藻土抽滤，滤液旋干，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:500-1:50)，得淡黄色液体489mg,即为目标产物(收率77.54％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.02(d,J＝8.4Hz,2H),3.94(s,3H),0.25(s,9H)。
步骤2：4-乙炔基-2,6-二氟苯甲酸
在双口瓶中将2,6-二氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯(480mg,1.789mmol)溶解于甲醇(10mL)和水(0.5mL)中，搅拌下一次性加入NaOH(145mg,3.625mmol)，室温搅拌反应过夜。反应液中加入(30mL)水和EA(20mL)，分出水相用1N稀盐酸调节pH＝1，EA萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥、抽滤、旋干得淡黄色固体304mg，即为目标产物(收率93.3％)。
步骤3：4-(6-(6-(4-乙炔基-2,6-二氟苯甲酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
氮气保护下，将4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-α]吡啶-3-腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15mg,0.032mmol)和4-乙炔基-2,6-二氟苯甲酸(9mg,0.049mmol)用DCM(2mL)溶解后加入DMAP(2mg,0.016mmol)和EDCI(12mg,0.063mmol)，反应置于室温下反应18h。往反应液中加入30mL DCM和10mL水，分离有机相，10mL水洗，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂MeOH:DCM＝1:50-1:30)，得白色固体4mg，即为目标产物(收率22.39％)。Rf＝0.3(MeOH:DCM＝1:30)。LC-MS:m/z＝569.30[M+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝2.1Hz,1H),8.20(s,1H),8.16(d,J＝1.8Hz,1H),7.75(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.17(d,J＝1.9Hz,1H),7.07(d,J＝7.5Hz,2H),6.64(d,J＝8.8Hz,1H),4.87(s,1H),4.36(s,1H),4.23(d,J＝10.6Hz,1H),3.87(s,2H),3.81(d,J＝10.6Hz,1H),3.70(t,J＝10.3Hz,2H),3.23(s,1H),2.92(dd,J＝14.3,6.6Hz,1H),2.10(s,1H),1.82(d,J＝8.7Hz,1H),1.40(s,6H)。HPLC:94.50％。
实施例331：4-(6-(4-(4-乙炔基苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001391
氮气保护下，在25mL双口瓶中加入6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，20mg,0.04297mmol)和4-乙炔基苯甲酸(10mg,0.068428mmol)，用DCM(3mL)溶解后加入DMAP(3mg,0.024556mmol)和EDCI(17mg,0.088680mmol)，室温反应过夜。反应液中加入DCM(30mL)和水(30mL)，水相DCM萃取(30mL×2)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶薄层板层析(展开剂DCM:MeOH＝100:3)，得白色固体6mg(收率26.82％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝521.2[M+H]；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(d,J＝2.3Hz,1H),8.20(s,1H),8.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.56(d,J＝8.2Hz,2H),7.42(d,J＝8.2Hz,2H),7.15(d,J＝2.0Hz,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,1H),3.86(s,2H),3.67(d,J＝23.0Hz,8H),3.17(s,1H),1.39(s,6H)。HPLC:98.64％。
实施例332：4-(6-(6-(5-乙炔基吡啶酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001392
步骤1：5–((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入5-溴吡啶甲酸甲酯(500mg,2.3145mmol)，CuI(53mg,0.27829mmol)和PdCl2(PPh3)2(49mg,0.06981mmol)，加入无水THF(3mL)溶解后滴加乙炔基(三甲基)硅烷(273mg,2.779mmol)，溶液呈橙色，再在室温搅拌下滴加TEA(1.5mL)，溶液变成黑色。反应4hTLC检测反应完成。往反应液加入20mL水淬灭反应，加入50mLEA，有大量棕色固体析出，用硅藻土抽滤，滤液分离有机相，水相加加EA萃取(50mL×2)，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:10-1:5，得黄色固体450mg。收率83.32％。Rf＝0.5(PE:EA＝5:1)。LC-MS:m/z＝234.20[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(s,1H),8.07(d,J＝8.1Hz,1H),7.87(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H),4.00(s,3H),0.27(s,9H)。
步骤2：5-乙炔基吡啶甲酸
氮气保护下，在双口瓶中将5–((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶甲酸甲酯(450mg,1.9285mmol)溶解于无水甲醇(9mL)中，室温搅拌下一次性加入碳酸钾(533mg,3.8565mmol)，搅拌过夜。往反应液中加入20mL水，用1N稀盐酸调节pH＝1，加EA萃取(50mL×3)，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后旋干得黄色固体280mg。收率98.68％。Rf＝0.01(PE:EA＝5:1)。LC-MS:m/z＝148.10[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.78(s,1H),8.08(d,J＝8.1Hz,1H),8.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.67(s,1H)。
步骤3：5-乙炔基吡啶酰氯
氮气保护下，在双口瓶中将5-乙炔基吡啶甲酸(20mg,0.13593mmol)溶解于DCM(5mL)中，搅拌下加入DMF(0.01mL)，5min后逐滴滴加SOCl2(20mg,0.16811mmol)，加毕，溶液有大量黄色固体析出，继续在此温度下搅拌。固体随时间逐渐溶解，溶液逐渐变成橙色，澄清透明。反应0.5h直接旋干反应液，抽干未经进一步纯化即投下一步反应。收率按100％算。
步骤4：4-(6-(6-(5-乙炔基吡啶酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下在单口瓶中加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15mg,0.031mmol)，2mL DCM，溶解后搅拌下加入TEA(16mg,0.16mmol)，5min后加入溶解于1mL的5-乙炔基-2-氯甲基吡啶(8mg,0.048mmol)DCM溶液，加毕继续在此温度下反应。反应结束后将反应液倒入5mL水中，DCM(10mL)萃取，有机相5mL水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂MeOH:DCM＝1:50-1:30)，得淡黄色固体6mg，即为目标产物。Rf＝0.3(DCM:MeOH＝30:1)。LC-MS：m/z＝534.20[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.66(s,1H),8.33(d,J＝2.3Hz,1H),8.19(s,1H),8.14(s,1H),8.08(d,J＝8.1Hz,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.71(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),7.11(s,1H),6.63(d,J＝9.1Hz,1H),4.22(d,J＝10.1Hz,1H),4.05(d,J＝11.2Hz,1H),3.93–3.87(m,2H),3.85(s,2H),3.82–3.73(m,2H),3.32(s,1H),2.94–2.91(m,1H),2.08–2.07(m,1H),1.38(s,6H)。HPLC:95.39％。
实施例333：4-(6-(6-(4-乙炔基-3,5-二氟苯甲酰)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001401
步骤1：4-溴-3,5-苯甲酸甲酯
0℃下，4-溴-3,5-二氟-苯甲酸(1.50g,6.33mmol)溶于CH3OH(15mL)，缓慢加入SOCl2(5mL,68.5mmol)，自然升至室温后，升至60℃搅拌反应3h。降至室温，反应液浓缩，得灰白色固体1.49g，即为目标产物(产率94％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64(s,1H),7.63(s,1H),3.96(s,3H)。
步骤2：3,5-二氟-4-((三甲基硅基)乙炔基)苯甲酸甲酯
N2保护下，双口瓶中加入依次4-溴-3,5-苯甲酸甲酯(0.30g,1.2mmol)、PdCl2(PPh3)2(84mg,0.12mmol)、CuI(23mg,0.12mmol)、PPh3(31mg,0.12mmol)，再加入DMF(2mL)和Et3N(2mL)后缓慢加入三甲基硅基乙炔(0.23g,2.3mmol)，50℃搅拌反应24h。停止反应，降至室温，反应液加入水(10mL)，EA(20mL×3)萃取，水洗(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(淋洗液PE)，得棕色固体0.23g，即为目标产物(产率72％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(s,1H),7.56(s,1H),3.95(s,3H),0.31(s,9H).
步骤3：4-乙炔基-3,5-二氟苯甲酸
3,5-二氟-4-((三甲基硅基)乙炔基)苯甲酸甲酯(0.20g,0.75mmol)溶于乙醇(6mL)和H2O(2mL)，缓慢加入LiOH.H2O(0.31g,7.4mmol)，室温搅拌反应1h。反应液加入DCM(5mL)，分液，水相用盐酸调至pH＝2，DCM(10mL×3)萃取，合并有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得棕色固体0.11g，即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68(s,1H),7.66(s,1H),3.71(s,1H).
步骤4：4-(6-(6-(4-乙炔基-3,5-二氟苯甲酰)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
0℃，4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，18mg,0.04mmol)，4-乙炔基-3,5-二氟苯甲酸(10mg,0.05mmol)溶于DCM(2mL)，缓慢加入EDCI(30mg,0.16mmol)，DMAP(2mg,0.02mmol)，自然升至室温继续搅拌反应3h。反应液浓缩，残渣硅胶柱层析(淋洗液DCM/CH3OH＝50/1-20/1)，得棕色固体2mg，即为目标产物。LC-MS：m/z＝569.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝2.2Hz,1H),8.23(s,1H),8.18(d,J＝1.9Hz,1H),7.80–7.74(m,1H),7.24(d,J＝7.1Hz,2H),7.17(d,J＝1.9Hz,1H),6.67(d,J＝8.8Hz,1H),4.83–4.71(m,2H),4.48–4.19(m,2H),3.89(s,2H),3.79–3.69(m,2H),3.64(s,1H),3.51(s,1H),3.00–2.93(m,1H),1.82(d,J＝8.9Hz,1H),1.42(s,6H)。HPLC：91.33％。
实施例334：4-(6-(4-(5-乙炔基吡啶酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001411
步骤1：5–((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶甲酸甲酯
氮气保护下，在三口瓶中加入5-溴吡啶甲酸甲酯(500mg,2.3145mmol)，CuI(53mg,0.27829mmol)和PdCl2(PPh3)2(49mg,0.06981mmol)，加入无水THF(3mL)溶解后滴加乙炔基(三甲基)硅烷(273mg,2.779mmol)，溶液呈橙色，再在室温搅拌下滴加TEA(1.5mL)，溶液变成黑色。反应4hTLC检测反应完成。往反应液加入20mL水淬灭反应，加入50mLEA，有大量棕色固体析出，铺硅藻土抽滤，滤液分离有机相，水相加加EA萃取(50mL×2)，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:10-1:5，得黄色固体450mg。收率83.32％。Rf＝0.5(PE:EA＝5:1)。LC-MS:m/z＝234.20[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(s,1H),8.07(d,J＝8.1Hz,1H),7.87(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H),4.00(s,3H),0.27(s,9H)。
步骤2：5-乙炔基吡啶甲酸
氮气保护下，在双口瓶中将5–((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶甲酸甲酯(450mg,1.9285mmol)溶解于无水甲醇(9mL)中，室温搅拌下一次性加入碳酸钾(533mg,3.8565mmol)，搅拌过夜。往反应液中加入20mL水，用1N稀盐酸调节pH＝1，加EA萃取(50mL×3)，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后旋干得黄色固体280mg。收率98.68％。Rf＝0.01(PE:EA＝5:1)。LC-MS:m/z＝148.10[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.78(s,1H),8.08(d,J＝8.1Hz,1H),8.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.67(s,1H)。
步骤3：4-(6-(4-(5-乙炔基吡啶酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下在单口瓶中加入6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-4-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，15mg,0.032mmol)，5-乙炔基吡啶甲酸(10mg,0.068mmol)，加入2mL DCM使其溶解，搅拌下加入DCC(10mg,0.048mmol)，加毕继续在此温度下反应。TLC监控反应结束后将反应液旋干，残渣硅胶柱层析(洗脱剂MeOH:DCM＝1:80-1:30)，得淡黄色固体4mg，即为目标产物。Rf＝0.3(DCM:MeOH＝30:1)。LC-MS:m/z＝522.10[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(s,1H),8.36(d,J＝2.2Hz,1H),8.20(s,1H),8.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.90(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H),7.76–7.70(m,2H),7.15(d,J＝2.0Hz,1H),6.78(d,J＝8.9Hz,1H),3.98–3.93(m,2H),3.86(s,2H),3.82–3.78(m,4H),3.75–3.71(m,2H),3.31(s,1H),1.39(s,6H)。HPLC:94.65％。
实施例335：6-乙氧基-4-(6-(4-(3-乙炔基噻吩-2-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001421
步骤1：3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)噻吩-2-羧酸甲酯
室温下，氮气保护下，向3-溴噻吩-2-羧酸甲酯(500mg,2.26mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(79mg,0.11mmol)和CuI(21mg,0.11mmol)的Et3N(2.3mL,17mmol)溶液中加入三甲基硅基乙炔(0.64mL,4.5mmol)，得黑色悬浊液，将该混合物室温反应过夜。减压旋干溶剂，向残余的黑色混合物中加入水(30mL)和乙酸乙酯(60mL),用垫硅藻土的砂芯漏斗过滤，水相用EA(20mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝30:1)，得淡黄色油状物507mg(收率94％)，即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41(d,J＝5.1Hz,1H),7.14(d,J＝5.1Hz,1H),3.90(s,3H),0.28(s,9H).
步骤2：3-乙炔基噻吩-2-羧酸
室温下，向3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)噻吩-2-羧酸甲酯(507mg,2.13mmol)的THF/H2O(12.8/6.4mL)溶液中一次性加入LiOH·H2O(227mg,5.30mmol)，室温反应过夜。减压蒸干有机溶剂，加水(10mL)稀释,水相用2N盐酸调节pH至3，水相用EA萃取(40mL×3),有机相合并，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，得淡黄色固体256mg(79.1％)，即为粗产物，不作进一步纯化，直接用于下一步反应。LC-MS:m/z＝153.00[M+H]+。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(4-(3-乙炔基噻吩-2-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，氮气保护下，向4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-鎓氯化物(20mg,0.052mmol)，3-乙炔基噻吩-2-羧酸(23mg,0.15mmol)，DMAP(1mg,0.008mmol)的DCM(1mL)溶液中加入DIPEA(0.1mL,0.6mmol)和EDCI(50mg,0.26mmol)，继续室温搅拌过夜。待反应完全后，用DCM(50mL)稀释，依次用水(20mL)，饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝1.5:1-1:1)，得白色固体12.4mg(收率49.4％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝483.30[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.11(d,J＝1.9Hz,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.36(d,J＝5.1Hz,1H),7.12–7.06(m,2H),6.79(d,J＝8.8Hz,1H),4.08(q,J＝6.9Hz,2H),3.87–3.71(m,8H),3.27(s,1H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H).
实施例336：6-乙氧基-4-(6-(4-(5-乙炔基噻吩-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001431
步骤1：5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)噻吩-3-羧酸乙酯
室温下，氮气保护下，向5-溴噻吩-3-羧酸乙酯(532mg,2.26mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(79mg,0.11mmol)和CuI(21mg,0.11mmol)的Et3N(2.3mL,17mmol)溶液中加入三甲基硅基乙炔(0.64mL,4.5mmol)，得黑色悬浊液，将该混合物加热至80℃反应过夜。减压旋干溶剂，向残余的黑色混合物中加入水(30mL)和乙酸乙酯(60mL),用垫硅藻土的砂芯漏斗过滤，水相用EA(20mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝30:1)，得淡棕色油状物484mg(收率84.7％)，即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.96(d,J＝1.1Hz,1H),7.61(d,J＝1.1Hz,1H),4.31(q,J＝7.1Hz,2H),1.35(t,J＝7.1Hz,3H),0.25(s,9H).
步骤2：5-乙炔基噻吩-3-羧酸
室温下，向5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)噻吩-3-羧酸乙酯(484mg,1.92mmol)的THF/H2O(11.5/5.8mL)溶液中一次性加入LiOH·H2O(205mg,4.79mmol)，室温反应过夜，减压蒸干有机溶剂，加水(10mL)稀释，水相用2N盐酸调节pH至3，水相用EA萃取(40mL×3),有机相合并，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，得淡黄色固体205mg(收率：70.3％)，即为粗产物，不作进一步纯化，直接用于下一步反应。LC-MS:m/z＝153.05[M+H]+。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(4-(5-乙炔基噻吩-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，氮气保护下，向4-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-鎓氯化物(20mg,0.052mmol)，5-乙炔基噻吩-3-羧酸(23mg,0.15mmol)，DMAP(1mg,0.008mmol)的DCM(1mL)溶液中加入DIPEA(0.1mL,0.6mmol)和EDCI(50mg,0.26mmol)，继续室温搅拌过夜。待反应完全后，用DCM(50mL)稀释，依次用水(20mL)，饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，浓缩物用硅胶柱层析(PE:EA＝1.5:1-1:1)纯化，得白色固体15.9mg(收率63.4％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝483.25[M+H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.19(s,1H),8.11(s,1H),7.74(d,J＝8.7Hz,1H),7.49(s,1H),7.36(s,1H),7.09(s,1H),6.78(d,J＝8.7Hz,1H),4.09(q,6.7Hz,2H),3.90–3.63(m,8H),3.38(s,1H),1.49(t,J＝6.8Hz,3H).
实施例337：6-乙氧基-4-(6-(4-(3-(4-(三氟甲基)苯基)丙炔酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001441
步骤1：3-(4-(三氟甲基)苯基)丙炔酸乙酯
在三口瓶中加入1-碘-4-(三氟甲基)苯(500mg,1.8382mmol)，CuI(42mg,0.22053mmol)和PdCl2(PPh3)2(38mg,0.05414mmol)，碳酸钾(0.51g,3.7mmol)，氮气保护下加入THF(5.5mL,100mass％)，65℃下注射器缓慢注射丙炔酸乙酯(0.76mL,7.3mmol)，3h注射完毕后65℃下反应4h。硅藻土抽滤，滤饼EA洗涤(30mL)，母液旋干，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:200)，得无色透明液体185mg，即为目标产物(收率41.56％)。1H-NMR:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(dd,J＝21.9,8.3Hz,4H),4.32(q,J＝7.1Hz,2H),1.37(t,J＝7.1Hz,3H)。
步骤2：3-(4-(三氟甲基)苯基)丙炔酸
在50ml单口瓶中将3-(4-(三氟甲基)苯基)丙炔酸乙酯(340mg,1.4039mmol)溶解于甲醇(7mL)，水(0.7mL)中，室温搅拌下一次性加入氢氧化钾(470mg,8.376mmol)，反应过夜。往反应液中加入水(30mL)，EA萃取(20mL)，水相用1N稀盐酸调节pH＝1，加EA萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL)，有机相无水硫酸钠干燥、抽滤，旋干泵抽得白色固体105m g，即为目标产物(收率34.9％)。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(4-(3-(4-(三氟甲基)苯基)丙炔酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL的单口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体6的合成，30mg,0.07794mmol)，3-(4-(三氟甲基)苯基)丙炔酸(20mg,0.093397mmol)，EDCI(30mg,0.15649mmol)，DMAP(2mg,0.016371mmol)，DIPEA(0.06mL,0.4mmol)，DCM(2mL)，室温搅拌反应过夜。反应液加入DCM(30mL)和水(15mL)，水相用DCM萃取(25mL×2)，合并有机相饱和食盐水洗涤(15mL)，分出有机相无水硫酸钠干燥，过滤，硅胶柱层析(洗脱剂PE/EA＝2/1-1.2/1)，收集得黄色固体16.5mg，即为目标产物(收率38.9％)。LC-MS(ESI):m/z＝545.2[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝2.1Hz,1H),8.19(s,1H),8.12(d,J＝1.7Hz,1H),7.75(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),7.67(q,J＝8.5Hz,4H),7.10(d,J＝1.7Hz,1H),6.81(d,J＝8.9Hz,1H),4.09(q,J＝6.9Hz,2H),3.96(t,2H),3.87-3.78(m,4H),3.71(t,2H),1.50(t,J＝6.9Hz,3H)。HPLC:97.05％。
实施例338：6-乙氧基-4-(6-(7-(3-苯基丙炔酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001451
步骤1：7-(3-苯基丙炔酰基)-2,7-二氮杂螺[3,5]壬烷-2-羧酸叔丁酯
在25mL的单口瓶中加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(0.12g,0.53mmol)，DCM(5mL)，3-苯基丙炔酸(0.93g,0.64mmol)，EDCI(0.15g,0.78mmol)，DMAP(0.010g,0.082mmol)，室温搅拌反应过夜。反应液加入二氯甲烷(30mL)和(20mL)水，分出水相用二氯甲烷萃取(30mL×2)，合并有机相后用饱和食盐水洗涤(15mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干硅胶柱层析(洗脱剂Pe/EA＝10/1-3/1),得黄色固体52mg，即为目标产物(收率27.7％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54(d,J＝6.9Hz,2H),7.43(t,J＝7.3Hz,1H),7.37(t,J＝7.3Hz,2H),3.79-3.73(m,2H),3.73-3.66(m,4H),3.65-3.58(m,2H),1.90-1.71(m,4H),1.45(s,9H)。
步骤2：3-苯基-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙-2-炔-1-酮2,2,2-三氟乙酸盐
在装有7-(3-苯基丙炔酰基)-2,7-二氮杂螺[3,5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(1.31g,3.70mmol,)的50mL单口瓶中，加入DCM(13mL)和TFA(4mL)，室温下搅拌反应过夜。反应液直接旋干，泵抽，得到无色透明油状液体产品即为目标化合物(收率100％)。未经进一步纯化直接投下一步反应。
步骤3：6-乙氧基-4-(6-(7-(3-苯基丙炔酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在25mL的单口瓶中加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体1的合成，15mg,0.05313mmol)，3-苯基-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙-2-炔-1-酮2,2,2-三氟乙酸盐(29mg,0.07872mmol)，N,N-二异丙基乙胺(0.026mL,0.159mmol)和DMSO(1mL)，置于150℃下微波反应3.5h。反应液加入EA(30mL)和水(15mL)，水相用EA萃取(25mL×2)，合并有机相饱和食盐水洗涤(15mL)，分出有机相无水硫酸钠干燥，过滤，硅胶柱层析(PE/EA＝5/1-1/1.5)，得黄色固体7.1mg，即为目标产物(收率26％)。LC-MS:m/z＝517.15[M+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(d,1H),8.19(s,1H),8.10(d,1H),7.69(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),7.56(d,J＝7.0Hz,2H),7.42–7.34(m,3H),7.08(d,J＝1.7Hz,1H),6.42(d,J＝8.6Hz,1H),4.08(q,J＝6.9Hz,2H),3.90(s,4H),3.84(t,2H),3.70(t,J＝5.2Hz,2H),1.97(t,2H),1.90(t,2H),1.49(t,J＝6.9Hz,3H)。HPLC:94.08％。
实施例339：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-苯基丙炔酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001461
氮气保护下，在10mL双口瓶中加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，20mg,0.04189mmol)和苯丙炔酸(8mg,0.054742mmol)，用DCM(2mL)溶解后加入DMAP(2mg,0.016371mmol)和EDCI(16mg,0.083464mmol)，室温搅拌过夜。往反应液中加入DCM(30mL)和水(30mL)，水相DCM萃取(30mL*2)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶薄层板层析(展开剂DCM:MeOH＝50:1)，得淡黄色固体7.5mg(收率34％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝533.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)8.37(d,J＝2.1Hz,1H),8.20(s,1H),8.16(d,J＝1.8Hz,1H),7.75(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.54(d,J＝7.0Hz,2H),7.43(t,J＝7.4Hz,1H),7.39-7.35(m,2H),7.15(d,J＝1.9Hz,1H),6.66(d,J＝8.8Hz,1H),4.76(t,2H),4.16(t,2H),3.96(d,J＝11.7Hz,1H),3.86(s,2H),3.74(d,J＝10.9Hz,1H),3.64(s,1H),2.87(dd,J＝14.3,6.5Hz,1H),2.03-1.99(m,1H),1.39(s,6H)。HPLC:94.77％。
实施例340：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙炔酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001462
步骤1：3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇
室温以及氮气保护下，向3-溴-5-甲氧基吡啶(500mg,2.6593mmol)和二(三苯基膦)二氯化钯(93mg,0.132496mmol)，CuI(25mg,0.13127mmol)的混合物中依次加入三乙胺(4.0mL,29mmol)和丙-2-炔-1-醇(0.76mL,13mmol)，加热至80℃反应5h。反应液用EA(40mL)稀释，有机相倾倒出来，残余黑色黏稠物用EA(30mL×3)洗涤，有机相合并，减压蒸干，残留物用硅胶柱层析(PE:EA＝4:1-2:1)分离，得淡黄色固体即为目标产物(收率64.54％)。LC-MS:m/z＝164.15[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(s,1H),8.25(s,1H),7.23(s,1H),4.51(s,2H),3.85(s,3H)。
步骤2：3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙炔醛
室温下，向3-(5-甲氧基-3-吡啶基)丙-2-炔-1-醇(280mg,1.7160mmol)的二氯甲烷(17.2mL)溶液中依次加入碳酸氢钠(724mg,8.58mmol)和戴斯马丁试剂(1.102g,2.572mmol)，室温反应1h。反应液用饱和硫代硫酸钠溶液淬灭(20mL)，水相用DCM(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，硅胶柱层析(PE:EA＝3:1)，得白色固体202mg(收率73.0％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝162.10[M+H]+。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.42(s,1H),8.42(s,1H),8.38(d,J＝2.5Hz,1H),7.34(s,1H),3.87(s,3H)。
步骤3：3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙炔酸
在10mL单口瓶中,将磷酸二氢钠水溶液(0.31mL,0.28mmol,0.91mol/L,浓盐酸调pH＝2)、双氧水(0.11mL,1.1mmol,30mass％)加入到3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙炔醛(150mg,0.93075mmol)的乙腈(0.76mL)溶液中。冰浴条件下，亚氯酸钠水溶液(1.1mL,1.1mmol,1mol/L)缓慢加入到上述溶液中，保持温度在10℃以下反应2h。停止反应，分出水相用EA萃取(20mL×3)，合并有机相用饱和碳酸氢钠溶液反萃取(20mL×3)，合并水相用浓盐酸调pH值为1，EA萃取(20mL×3)，合并有机相饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥后减压旋干得白色固体0.84mg，即为目标产物(收率51％)。LC-MS:m/z＝178.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.37-8.31(m,2H),7.63(s,1H),3.91(s,3H)。
步骤4：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙炔酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL的单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶3-腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，25mg,0.05237mmol)，3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙炔酸(15mg,0.084669mmol)，DMAP(1mg,0.0081853mmol)，EDCI(30mg,0.15649mmol)，DCM(1mL)，N,N-二异丙基乙胺(0.05mL,0.3mmol)，室温搅拌反应过夜。反应液加入DCM(30mL)和水(15mL)，分出水相用DCM萃取(25mL×2)，合并有机相饱和食盐水洗涤(15mL)，分出有机相无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/3)，得白色固体6.3mg，即为目标产物(收率21.0％)。LC-MS(ESI)：m/z＝564.2[M+1]。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.39-8.35(m,2H),8.20(s,1H),8.16(d,1H),7.76(dd,1H),7.37-7.30(m,2H),7.15(d,1H),6.66(d,J＝8.9Hz,1H),4.82-4.71(m,2H),4.15(d,J＝11.6Hz,2H),3.98(d,J＝10.6Hz,1H),3.89-3.84(m,5H),3.75(d,J＝10.0Hz,1H),3.64(s,1H),2.93-2.84(m,1H),2.04-2.00(m,1H),1.28(s,6H)。HPLC:91.73％。
实施例341：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙炔酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001471
步骤1：3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇
在25mL双口瓶中依次加入5-溴-2-甲氧基吡啶(600mg,3.19mmol,)，碘化亚铜(33mg,0.17mmol)，双三苯基膦二氯化钯(121mg,0.17mmol)，氮气保护下，缓慢加入三乙胺(5mL)和丙炔醇(0.6mL,10mmol)，将该混合物加热至80℃继续搅拌过夜。将反应液缓慢恢复至室温，加水稀释(100mL)，过滤，EA(100mL×3)多次洗涤黑色糊状物，萃取分离合并有机相，饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后旋干，硅胶柱层析(洗脱剂：PE/EA＝4：1)，得黄色固体350mg，即为目标产品(收率：67.217％)。LC-MS(ES-API):m/z＝164.00[M+H]+。
步骤2：3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醛
在50mL单口瓶中依次加入3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇(0.35g,2.1mmol,)，戴斯马丁试剂(1.25g,2.95mmol)，碳酸氢钠(0.95g,11mmol)于二氯甲烷(25mL)中，室温搅拌过夜。反应液用饱和硫代硫酸钠溶液(50mL)淬灭，分离有机相，水相用DCM(100mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后旋干，硅胶柱层析(PE/EA＝10：1)，得黄色固体290mg即为目标产品(收率：84.0％，Rf＝0.7(PE/EA＝4/1))。
步骤3：3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙炔酸
在冰浴条件下，用盐酸(12mol/L)调节磷酸二氢钠(0.55mL,0.55mmol,1.0mol/L)和双氧水(0.25mL,2.4mmol,30mass％)溶液PH至2，加入3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醛(290mg,1.7995mmol)的乙腈(2mL)溶液，随后分三次缓慢加入亚氯酸钠(180mg,1.9902mmol)，保持该温度继续搅拌2h。将反应液缓慢恢复至室温，加水(50mL)稀释，EA(100mL×3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干得黄色固体275mg即为目标产品。(收率：86.263％，Rf＝0.15(EA))。LC-MS(ES-API):m/z＝178.10[M+H]+。
步骤4：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙炔酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5ml单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15.8mg,0.033mmol)，DIPEA(0.05mL,0.3mmol)，EDCI(31mg,0.161mmol)，DMAP(1mg,0.008mmol)于二氯甲烷(1.5mL)溶液中，再加入3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙炔酸(17mg,0.095958mmol)，室温搅拌过夜。反应液过滤后母液旋干硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100:1-40:1)，得白色固体11.2mg，即为目标产品。(Rf＝0.4，DCM/MeOH＝30/1)。LC-MS ES-API):m/z＝564.20[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(d,J＝2.2Hz,1H),8.23(s,1H),8.18(d,J＝2.0Hz,1H),7.79(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.17(d,J＝2.0Hz,1H),6.70(d,J＝8.8Hz,1H),3.91(d,J＝6.1Hz,2H),3.89(s,2H),3.82(d,J＝12.0Hz,2H),3.63(d,J＝11.6Hz,2H),3.29(d,J＝2.2Hz,2H),2.73(dd,J＝13.7,6.3Hz,1H),2.23(t,J＝2.4Hz,1H),2.03(s,1H),1.42(s,6H)。HPLC:90.19％。
实施例342：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001481
步骤1：3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇
室温以及氮气保护下，向3-溴-5-甲氧基吡啶(500mg,2.6593mmol)和二(三苯基膦)二氯化钯(93mg,0.132496mmol)，CuI(25mg,0.13127mmol)的混合物中依次加入三乙胺(4.0mL,29mmol)和丙-2-炔-1-醇(0.76mL,13mmol)，加热至80℃反应5h。反应液用EA(40mL)稀释，有机相倾倒出来，残余黑色黏稠物用EA(30mL×3)洗涤，有机相合并，减压蒸干，上样硅胶柱层析(PE:EA＝4:1-2:1)，得淡黄色固体280即为目标产物(收率64.54％)。LC-MS:m/z＝164.15[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(s,1H),8.25(s,1H),7.23(s,1H),4.51(s,2H),3.85(s,3H)。
步骤2：3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙炔醛
室温下，向3-(5-甲氧基-3-吡啶基)丙-2-炔-1-醇(280mg,1.7160mmol)的二氯甲烷(17.2mL)溶液中依次加入碳酸氢钠(724mg,8.58mmol)和戴斯马丁试剂(1.102g,2.572mmol)，室温反应1h。反应液用饱和硫代硫酸钠溶液淬灭(20mL)，水相用DCM(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，硅胶柱层析(PE:EA＝3:1)，得白色固体202mg(收率73.0％)，即为目标产物。LC-MS:m/z＝162.10[M+H]+。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.42(s,1H),8.42(s,1H),8.38(d,J＝2.5Hz,1H),7.34(s,1H),3.87(s,3H)。
步骤3：3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙炔酸
在10mL单口瓶中,将磷酸二氢钠水溶液(0.31mL,0.28mmol,0.91mol/L,浓盐酸调pH＝2)、双氧水(0.11mL,1.1mmol,30mass％)加入到3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙炔醛(150mg,0.93075mmol)的乙腈(0.76mL)溶液中。冰浴条件下，亚氯酸钠水溶液(1.1mL,1.1mmol,1mol/L)缓慢加入到上述溶液中，保持温度在10℃以下反应2h。停止反应，分出水相用EA萃取(20mL×3)，合并有机相用饱和碳酸氢钠溶液反萃取(20mL×3)，合并水相用浓盐酸调pH值为1，EA萃取(20mL×3)，合并有机相饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥后减压旋干得白色固体0.84mg，即为目标产物(收率51％)。LC-MS:m/z＝178.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.37-8.31(m,2H),7.63(s,1H),3.91(s,3H)。
步骤4：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈
氮气保护下，将6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，15mg,0.032mmol)和3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙酸(9mg,0.051mmol)用DCM(2mL)溶解后加入DMAP(2mg,0.016mmol)和EDCI(12mg,0.063mmol)，反应置于室温下搅拌过夜。往反应液中加入30mL DCM和10mL水，分离有机相10mL水洗，有机相无水硫酸钠干燥后旋干，过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂MeOH:DCM＝1:50-1:30)，得白色固体9mg，即为目标产物。收率50.62％。Rf＝0.3(MeOH:DCM＝1:30)。LC-MS:m/z＝552.20[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.39(s,1H),8.36(dd,J＝4.9,2.5Hz,2H),8.21(s,1H),8.17(d,J＝2.0Hz,1H),7.76(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.36(dd,J＝2.6,1.7Hz,1H),7.16(d,J＝2.0Hz,1H),6.81(d,J＝9.1Hz,1H),3.99-3.95(m,2H),3.89(s,3H),3.87(s,2H),3.85-3.80(m,4H),3.73-3.70(m,2H),1.40(s,6H)。HPLC:98.95％。
实施例343：6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-4-[6-[4-[3-(3-吡啶基)丙-2-炔酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001501
步骤1：3-(3-吡啶基)丙-2-炔-1-醇
室温，将CuI(72mg,0.378mmol)，PdCl2(PPh3)2(270mg,0.385mmol)置于25mL双口瓶中，氮气保护下抽真空，加入三乙胺(11mL,78.9mmol)、丙炔醇(0.89mL,15mmol)和3-溴吡啶(0.73mL,7.6mmol)，50℃下反应过夜。TLC显示反应完毕。加入20mL饱和氯化铵淬灭反应，抽滤，滤饼40mLEA洗涤，分出有机相，再用EA(40mL×2)萃取水相，合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝3：1-1：1)，得到棕黄色固体0.705g(收率70％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝134.20[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(d,J＝1.3Hz,1H),8.51(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.73(dt,J＝7.9,1.8Hz,1H),7.31–7.26(m,1H),4.50(s,2H),3.72(s,1H)。
步骤2：3-(3-吡啶基)丙-2-炔醛
100mL单口瓶中，加入3-(3-吡啶基)丙-2-炔-1-醇(200mg,1.502mmol)，NaHCO3(0.634g,7.51mmol)，戴斯马丁氧化剂(0.83g,2.0mmol)，DCM(15mL)溶解，置于室温搅拌反应3h。TLC显示反应完毕。加入饱和硫代硫酸钠溶液10mL淬灭反应，分出有机相，水相再用DCM(20mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝6:1-3:1)，得到棕黄色固体60mg(收率30.46％)，即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.43(s,1H),8.83(d,J＝1.1Hz,1H),8.69(dd,J＝4.8,1.2Hz,1H),7.89(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),7.37(dd,J＝7.9,5.0Hz,1H)。
步骤3：3-(3-吡啶基)丙-2-炔酸
0℃条件下，10mL单口瓶中用浓盐酸调节NaH2PO4(0.14mL,0.14mmol)和H2O2(0.051mL,0.50mmol)的溶液pH值为3，加入3-(3-吡啶基)丙-2-炔醛(60mg,0.458mmol)的乙腈(1.5mL)溶液，分三次缓慢加入NaClO2(46mg,0.504mmol)固体，保温反应20min，后转移至室温反应。TLC显示反应完毕后，加入水1mL淬灭反应，EA(5mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水5mL洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，旋干，浓缩，得到黄色固体0.042g(收率62％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝148.2[M+H]+。
步骤4：6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-4-[6-[4-[3-(3-吡啶基)丙-2-炔酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈
5mL单口瓶中，依次加入6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-4-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，15mg,0.032mmol)，3-(3-吡啶基)丙-2-炔酸(16.8mg,0.114mmol)，EDCI(36mg,0.188mmol)和DMAP(1.0mg,0.008mmol)，加入DCM(2mL)溶解，室温搅拌反应过夜。TLC显示反应完毕。反应液直接旋干，残渣硅胶柱层析(洗脱剂纯DCM-DCM:MeOH＝25：1)，得淡黄色固体0.008g(收率50％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝522.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.81(s,1H),8.66(s,1H),8.37(d,J＝2.2Hz,1H),8.20(s,1H),8.17(d,J＝1.9Hz,1H),7.88(d,J＝7.7Hz,1H),7.76(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.35(s,1H),7.16(d,J＝1.9Hz,1H),6.81(d,J＝9.0Hz,1H),3.96(d,J＝5.4Hz,2H),3.87(s,2H),3.85–3.78(m,4H),3.74–3.68(m,2H),2.11(s,1H),1.39(s,6H)。HPLC:98.71％。
实施例344：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(3-苯基丙炔酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001511
5mL的反应瓶中加入6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(15mg,0.032mmol)和DCM(2mL)，冰浴条件下加入3-苯基丙-2-炔酸(10mg,0.068mmol)，N，N'-二环己基碳二亚胺(10mg,0.048mmol)，室温下搅拌。TLC监控反应完毕后直接旋干反应液，硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3)，得到白色固体4.0mg,即为目标产物(产率：59.63％)。LC-MS：m/z＝521.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.39(d,J＝2.4Hz,1H),8.23(s,1H),8.19(d,J＝2.0Hz,1H),7.78(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.60(d,J＝6.9Hz,2H),7.46(d,J＝7.1Hz,1H),7.42(d,J＝7.5Hz,1H),7.37(d,J＝2.3Hz,1H),7.18(d,J＝1.9Hz,1H),6.83(d,J＝8.8Hz,1H),4.05–3.97(m,2H),3.89(s,1H),3.86(d,J＝5.7Hz,2H),3.85–3.80(m,2H),3.76–3.71(m,2H),3.67(s,2H),1.27(s,6H)。HPLC:95.36％。
实施例345：4-(5-氟-6-(4-(3-苯基丙炔酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-甲氧基[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001512
步骤1：6-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
氮气保护下，反应瓶中依次加入4-溴-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(800mg,3.1737mmol)，4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.5g,5.9mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(0.3g,0.3mmol)，醋酸钾(0.95g,9.6mmol,99.0mass％)，1,4-二氧六环(8mL)，90℃下反应过夜。TLC监控反应完成后，反应液加入水(25mL)，乙酸乙酯(40mL)，分出水相EA萃取(40mL×2),合并有机相饱和食盐水洗涤(30mL)，无水硫酸纳干燥，过滤，滤液浓缩，残余物硅胶柱层析(Pe/EA＝10/1-4/1),得白色固体788mg，即为目标产物(收率57.94％)。LC-MS:m/z＝217.10[M+1]+。
步骤2：4-(5,6-二氟吡啶-3-基)-6-甲氧基[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在25mL的双口瓶中依次加入6-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊硼-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(326mg,1.082mmol)，5-溴-2,3-二氟-吡啶(150mg,0.773mmol)，XantPhos(90mg,0.155mmol)，Na2CO3aq(1mL,2mmol,2mol/L)，二氧六环(4mL)，鼓氮气5min后再加入Pd2(dba)3(36mg,0.039mmol)，再鼓氮气10min，密闭后90℃反应过夜。反应液加入水(15mL)，乙酸乙酯(30mL)，分出水相EA萃取(30mL×2)，合并有机相饱和食盐水洗涤(30mL)，无水硫酸纳干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(PE/EA＝20/1-5/1)，得白色固体25mg，即为目标产物(收率11.30％)。LC-MS:m/z＝287.00[M+1]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22(s,2H),8.16(s,1H),7.78(t,J＝8.9Hz,1H),7.18(s,1H),3.93(s,3H)。
步骤3：4-(3-苯基丙-2-炔基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
25mL单口瓶中，加入3-苯基丙-2-炔酸(500mg,3.422mmol)，用DMF(5mL)溶解,置于低温槽0℃，加入叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(637mg,3.420mmol)，分批加入N,N-二环己基碳二亚胺(706mg,3.422mmol)，保温反应4h。TLC显示反应完毕，取样，加水25mL洗涤，EA(100mL×2)萃取，饱和食盐水40mL洗涤，分出有机相无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝8：1-2：1)，得到黄白色固体0.985g(收率91.6％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝315.3[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.57–7.52(m,2H),7.39(ddd,J＝15.9,7.2,1.9Hz,3H),3.84–3.78(m,2H),3.70–3.63(m,2H),3.5–3.50(m,2H),3.48–3.42(m,2H),1.48(s,9H)。
步骤4：3-苯基-1-哌嗪-1-基-丙-2-炔-1-酮盐酸盐
100mL单口瓶中，加入4-(3-苯基丙-2-炔基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.985g,3.13mmol)，盐酸乙酸乙酯溶液(9.85mL,39.4mmol)，室温搅拌反应，固体溶解，后析出白色固体，溶液变为白色悬浊液，继续反应3h。TLC显示反应完毕，将反应液直接旋干，得到黄色油状物，放入烘箱60℃烘干，得到理论量黄白色固体0.785g，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝215.3[M+H]+。
步骤5：4-(5-氟-6-(4-(3-苯基丙炔酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-甲氧基[1,5-a]吡啶-3-甲腈
于微波管中将4-(5,6-二氟-3-吡啶基)-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(25mg,0.087mmol)，DIPEA(0.07mL,0.4mmol)和3-苯基-1-哌嗪-1-基-丙-2-炔-1-酮盐酸盐(30mg,0.119mmol)溶解于DMSO(2mL)中，135℃，5个压强下微波反应6h。反应液加入EA(20mL)和水(10mL)，分出水相，EA萃取(20mL×2)，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10mL)，无水硫酸钠干燥过滤，母液旋干硅胶柱层析(DCM/MeOH＝200/1-50/1)，得到白色固体12mg，即为目标产物(收率28.59％)。LC-MS:m/z＝481.1[M+1]+。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.24(s,1H),8.21(s,1H),8.19(d,J＝2.0Hz,1H),7.61–7.58(m,2H),7.51(dd,J＝13.3,1.9Hz,1H),7.46(t,J＝7.4Hz,1H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.16–7.14(m,1H),4.04–4.01(m,2H),3.94(s,3H),3.90–3.87(m,2H),3.78–3.75(m,2H),3.72–3.69(m,2H)。HPLC：97.19％。
实施例346：1-[4-[4-(6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)苯基]哌嗪-1-基]-3-苯基-丙-2-炔-1-酮
Figure BDA0002307183200001521
步骤1：6-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
氮气保护下，25mL双口瓶中,加入4-溴-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶(800mg,3.523mmol)，醋酸钾(1.037g,10.57mmol)，4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.342g,5.286mmol)和PdCl2(dppf)CH2Cl2(291mg,0.353mmol)，加入1,4-二氧六环(6.4mL)，90℃加热回流反应过夜。TLC显示反应完毕，抽滤，EA多次洗涤(80mL)，有机相饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，母液旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝10：1-1：1)，得到褐色油状物0.82g(收率84.87％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝275.10[M+H]+。
步骤2：4-(4-溴苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
在25mL单口瓶中依次加入1-溴-4-碘-苯(956mg,3.379mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(600mg,3.221mmol)，Pd2(dba)3(300mg,0.327mmol)，XantPhos(56mg,0.096mmol)，叔丁醇钠(1.24g,12.9mmol)，甲苯(12mL)，鼓氮气5min，密闭60℃下搅拌反应5h。反应液加入水(25mL)，乙酸乙酯(40mL)，分出水相EA萃取(40mL×2)，合并有机相饱和食盐水洗涤(30mL)，无水硫酸纳干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(PE/EA＝20/1-10/1)，得到白色轻质固体305mg,即为目标产物(收率27.75％)。LC-MS:m/z＝341.10[M+1]+。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.35(d,J＝9.0Hz,2H),6.79(d,J＝8.8Hz,2H),3.60–3.55(m,4H),3.13–3.06(m,4H),1.48(s,9H)。
步骤3：4-[4-(6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯
10mL双口瓶中，加入6-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶(100mg,0.3648mmol)，醋酸钾(108mg,1.100mmol)和PdCl2(dppf)CH2Cl2(31mg,0.0376mmol)，4-(4-溴苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(187mg,0.5481mmol)，氮气保护下抽真空，加入1,4-二氧六环(2mL)溶解，置于90℃加热回流反应过夜。TLC显示反应完毕，抽滤，EA多次洗涤(40mL)，有机相饱和食盐水洗涤(15mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝8：1-1：1)，得到粉白色固体0.122g(收率82％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝409.30[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(s,1H),7.88(d,J＝2.1Hz,1H),7.51(d,J＝8.6Hz,2H),7.05(d,J＝7.2Hz,2H),6.61(d,J＝12.2Hz,2H),4.01(s,3H),3.66–3.59(m,4H),3.24–3.18(m,4H),1.49(s,9H)。
步骤4：6-甲氧基-4-(4-哌嗪-1-基苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶二盐酸盐
25mL单口瓶中，加入4-[4-(6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(122.3mg,0.2994mmol)，盐酸乙酸乙酯溶液(4mL,16mmol)，置于室温搅拌反应2h。TLC显示反应完毕，直接旋干，60℃烘干，得到理论量黄白色固体。LC-MS(ES-API):m/z＝309.10[M+H]+。
步骤5：1-[4-[4-(6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)苯基]哌嗪-1-基]-3-苯基-丙-2-炔-1-酮
5mL单口瓶中，依次加入6-甲氧基-4-(4-哌嗪-1-基苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶二盐酸盐(40mg,0.105mmol)，EDCI(100.6mg,0.5248mmol)和DMAP(2.6mg,0.021mmol)，DCM(2mL)溶解后加入3-苯基丙-2-炔酸(46mg,0.315mmol)，置于室温搅拌8h。TLC显示反应完毕，直接旋干，硅胶柱层析(洗脱剂纯DCM-DCM:MeOH＝25:1)，得到灰白色固体27.3mg(收率59.6％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝437.10[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(s,1H),7.88(d,J＝2.1Hz,1H),7.60–7.56(m,2H),7.52(d,J＝8.7Hz,2H),7.44(d,J＝7.3Hz,1H),7.40(d,J＝7.4Hz,2H),7.04(d,J＝8.7Hz,2H),6.64–6.59(m,2H),4.04(d,J＝5.1Hz,2H),4.02(s,3H),3.91–3.87(m,2H),3.35–3.31(m,2H),3.30–3.25(m,2H)。HPLC：97.53％。
实施例347：1-(4-(5-(6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-苯基丙-2-炔-1-酮
Figure BDA0002307183200001541
步骤1：6-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶
25mL双口瓶中,加入4-溴-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶(1g,4.404mmol)，醋酸钾(1.297g,13.22mmol)，4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.677g,6.605mmol)和PdCl2(dppf)CH2Cl2(363mg,0.440mmol)，氮气保护下抽真空，加入1,4-二氧六环(8mL)，90℃加热回流反应过夜。TLC显示反应完毕，抽滤，EA80mL洗涤，有机相饱和食盐水20mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝10：1-1：1)，得到褐色油状物0.785g(收率65.06％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝275.20[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(s,1H),7.90(d,J＝2.1Hz,1H),6.60(s,2H),3.97(s,3H),1.35(s,12H)。
步骤2：4-(6-氟-3-吡啶基)-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶
25mL双口瓶中，加入6-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶(785mg,2.864mmol)，醋酸钾(843g,8590mmol)和PdCl2(dppf)CH2Cl2(236mg,0.286mmol)，氮气保护下抽真空，加入1,4-二氧六环(6.4mL)溶解，再加入5-溴-2-氟-吡啶(0.442mL,4.29mmol)，置于90℃加热回流反应过夜。抽滤，EA80mL多次洗涤滤饼，有机相饱和食盐水20mL洗涤母液，分出有机相无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝8：1-1：1)，得到褐色固体0.6754g(收率96.97％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝244.10[M+H]+。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.44(d,J＝2.1Hz,1H),8.33(s,1H),7.98(td,J＝8.2,2.6Hz,1H),7.93(d,J＝1.6Hz,1H),7.05(dd,J＝8.4,3.0Hz,1H),6.68(s,1H),6.51(s,1H),4.03(s,3H)。
步骤3：4-(3-苯基丙-2-炔基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
25mL单口瓶中，加入3-苯基丙-2-炔酸(500mg,3.422mmol)，用DMF(5mL)溶解,置于低温槽0℃，加入叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(637mg,3.420mmol)，分批加入N,N-二环己基碳二亚胺(706mg,3.422mmol)，保温反应4h。TLC显示反应完毕，取样，加水25mL洗涤，EA(100mL×2)萃取，饱和食盐水40mL洗涤，分出有机相无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝8：1-2：1)，得到黄白色固体0.985g(收率91.6％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝315.3[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.57–7.52(m,2H),7.39(ddd,J＝15.9,7.2,1.9Hz,3H),3.84–3.78(m,2H),3.70–3.63(m,2H),3.5–3.50(m,2H),3.48–3.42(m,2H),1.48(s,9H)。
步骤4：3-苯基-1-哌嗪-1-基-丙-2-炔-1-酮盐酸盐
100mL单口瓶中，加入4-(3-苯基丙-2-炔基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.985g,3.13mmol)，盐酸乙酸乙酯溶液(9.85mL,39.4mmol)，室温搅拌反应，固体溶解，后析出白色固体，溶液变为白色悬浊液，继续反应3h。TLC显示反应完毕，将反应液直接旋干，得到黄色油状物，放入烘箱60℃烘干，得到理论量黄白色固体0.785g，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝215.3[M+H]+。
步骤5：1-(4-(5-(6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)-2-吡啶基)哌嗪-1-基)-3-苯基-丙-2-炔-1-酮
10mL微波管中，依次加入4-(6-氟-3-吡啶基)-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶(100mg,0.411mmol)，3-苯基-1-哌嗪-1-基-丙-2-炔-1-酮盐酸盐(155mg,0.618mmol)，碳酸钾(227mg,1.642mmol)，加入DMSO(3mL)，置于微波150℃加热反应5h。加水20mL，EA(100mL×3)萃取，有机相饱和食盐水80mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂纯DCM-DCM:MeOH＝20：1)，得到淡黄色固体12.5mg(收率6.95％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝438.10[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(d,1H),8.29(s,1H),7.89(d,J＝1.9Hz,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.58(d,J＝6.9Hz,2H),7.44(d,J＝7.2Hz,1H),7.40(d,J＝7.4Hz,2H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),6.64(d,J＝1.3Hz,1H),6.54(s,1H),4.02(s,3H),4.00–3.98(m,2H),3.87–3.83(m,2H),3.78–3.75(m,2H),3.67–3.64(m,2H)..HPLC：82.47％。
实施例348：1-(4-(5-(6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-苯基-丙-2-炔-1-酮
Figure BDA0002307183200001551
步骤1：4-(2-氯嘧啶-5-基)-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶
25mL双口瓶中，加入4-溴-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶(500mg,2.202mmol)，(2-氯嘧啶-5-基)硼酸(366mg,2.311mmol)和PdCl2(dppf)CH2Cl2(182mg,0.221mmol)，氮气保护下抽真空，加入1,4-二氧六环(7.5mL)搅拌溶解，冰浴条件下加入醋酸钾(4.4mL,4.4mmol)水溶液，置于油浴锅中85℃反应过夜。抽滤，滤饼用EA(40mL)洗涤，有机相饱和食盐水15mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝8：1-1：2)，得黄色固体105.5mg(收率20％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝261.20[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.85(s,2H),8.36(s,1H),7.96(d,J＝2.0Hz,1H),6.72(d,J＝1.4Hz,1H),6.47(s,1H),4.05(s,3H)。
步骤2：4-(3-苯基丙-2-炔基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
25mL单口瓶中，加入3-苯基丙-2-炔酸(500mg,3.422mmol)，DMF(5mL)，0℃下加入叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(637mg,3.420mmol)，分批加入N,N-二环己基碳二亚胺(706mg,3.422mmol)，此温度反应4h。反应液加水25mL，EA(100mL×2)萃取，合并有机相饱和食盐水40mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝8：1-2：1)纯化，得黄白色固体0.985g(收率91.6％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝315.3[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.57–7.52(m,2H),7.39(ddd,J＝15.9,7.2,1.9Hz,3H),3.84–3.78(m,2H),3.70–3.63(m,2H),3.5–3.50(m,2H),3.48–3.42(m,2H),1.48(s,9H)。
步骤3：3-苯基-1-哌嗪-1-基-丙-2-炔-1-酮盐酸盐
100mL单口瓶中，加入4-(3-苯基丙-2-炔基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.985g,3.13mmol)，盐酸乙酸乙酯溶液(9.85mL,39.4mmol)，室温搅拌反应3h。将反应液直接旋干，得到黄色油状物，放入烘箱60℃烘干，得到理论量黄白色固体0.785g，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝215.3[M+H]+。
步骤4：1-(4-(5-(6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-苯基-丙-2-炔-1-酮
25mL单口瓶中，加入4-(2-氯嘧啶-5-基)-6-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶(35mg,0.134mmol)，3-苯基-1-哌嗪-1-基-丙-2-炔-1-酮盐酸盐(36mg,0.144mmol)，碳酸钾(56mg,0.405mmol)，乙腈(3.5mL)溶解，置于80℃油浴锅中加热反应过夜。反应液加水4mL，EA(20mL×3)萃取，有机相饱和食盐水10mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂纯DCM-DCM:MeOH＝10：1)，得到灰白色固体15.8mg(收率26.8％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝439.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(s,2H),8.26(s,1H),7.90(d,J＝2.0Hz,1H),7.58(d,J＝6.9Hz,2H),7.44(d,J＝7.2Hz,1H),7.40(d,J＝7.5Hz,2H),6.66(s,1H),6.46(s,1H),4.02(s,3H),4.01–3.99(m,2H),3.95(q,J＝4.9Hz,4H),3.83–3.79(m,2H)。HPLC：98.44％。
实施例349：4-(6-(6-(3-乙炔基-4-氟苄基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001561
步骤1：4-氟-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲醛
室温氮气保护下，向3-溴-4-氟-苯甲醛(600mg,2.9555mmol)，双(三苯基膦)二氯化钯(82mg,0.12mmol)，碘化亚铜(28mg,0.14702mmol)的混合物中依次加入三乙胺(4.4mL,32mmol)和三甲基硅乙炔(0.84mL,5.9mmol)，室温反应过夜。减压蒸干溶剂，残余物拌硅胶上样，硅胶柱层析(PE:EA＝20:1)，得黄色固体367mg(收率56.4％)，即为目标产物。
步骤2：3-乙炔基-4-氟苯甲醛
室温下，向4-氟-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲醛(367mg,1.6658mmol)的甲醇(4.2mL％)溶液加入碳酸钾(23mg,0.16641mmol)，室温反应2h。饱和NH4Cl(10mL)淬灭反应。减压蒸除有机溶剂，剩余溶液以EA(40mL×2)萃取，有机相合并，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，残余物上样，硅胶柱层析(PE:EA＝20:1)，得白色固体184mg(收率74.6％)，即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.94(s,1H),8.02(dd,J＝6.7,2.0Hz,1H),7.89(ddd,J＝8.2,5.0,2.0Hz,1H),7.25(t,J＝8.6Hz,1H),3.40(s,1H)。
步骤4：4-(6-(6-(3-乙炔基-4-氟苄基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL的单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15mg,0.03708mmol)，3-乙炔基-4-氟苯甲醛(11mg,0.074259mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(24mg,0.11324mmol)，DCE(2mL)，35℃下反应过夜。直接旋干，残渣硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/2)，得到白色固体13mg(收率63.78％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝537.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(d,J＝1.9Hz,1H),8.22(s,1H),8.16(d,J＝1.9Hz,1H),7.80-7.76(m,1H),7.51(d,J＝6.3Hz,1H),7.35(s,1H),7.17(d,J＝1.7Hz,1H),7.02(d,J＝8.9Hz,1H),6.69(d,J＝8.7Hz,1H),3.87(s,2H),3.84-3.77(m,4H),3.65-3.57(m,4H),3.29(s,1H),2.77-2.70(m,1H),2.05-2.00(m,1H),1.40(s,6H)。HPLC:92.88％。
实施例350：4-(6-(6-(4-乙炔基-2,6-二氟苄基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001571
步骤1：3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇
氮气保护下，在100mL的双口瓶中依次加入4-溴-2,6-二氟-苯甲酸(1g,4.2194mmol)，THF(40mL)，冰浴下缓慢加入混溶在100ml THF的二甲硫醚硼烷(4.3mL,45mmol)，滴加完毕后室温下反应6h。反应液加入甲醇至不产生气泡为止，转移至500mL单口瓶中旋干，残渣加入乙酸乙酯(200mL)和水(80mL)，分出有机相用水洗(80mL)，饱和食盐水洗(80mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，硅胶柱层析(PE/EA＝100/1-100-5)，得到白色固体880mg，即为目标产物(93.5％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.13(d,J＝6.7Hz,2H),4.76(d,J＝6.3Hz,2H),1.90(t,J＝6.5Hz,1H)。
步骤2：(2,6-二氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)甲醇
氮气保护下，在三口瓶中加入3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇(500mg,2.2420mmol,)，CuI(51mg,0.268mmol)和PdCl2(PPh3)2(47mg,0.067mmol)，加入TEA(5mL)，乙炔基(三甲基)硅烷(0.4mL,3mmol)，70℃下反应过夜。反应液加入EA(30mL)，铺硅藻土抽滤，适量EA洗涤，滤液旋干，硅胶柱层析(EA:PE＝0:100-3:100)，得淡黄色液体158mg，即为目标产物(收率29.3％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.03-6.95(m,2H),4.75(s,2H),1.93(s,1H),0.25(s,9H)。
步骤3：(4-乙炔基-2,6-二氟苯基)甲醇
10mL单口瓶中加入(2,6-二氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)甲醇(150mg,0.624mmol),甲醇(5mL)，溶清后加入K2CO3(170mg,1.23mmol)，常温搅拌反应3h。反应液加入EA(15mL)、水(10mL)，分液，水相用EA萃取(10mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。硅胶柱层析(PE/EA＝100/0-100/3)，得类白色固体88mg，即为目标产物(83.85％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.03(d,J＝7.5Hz,2H),4.77(d,J＝6.2Hz,2H),3.16(s,1H),1.90(t,J＝6.5Hz,1H)。
步骤4：2-(溴甲基)-5-乙炔基-1,3-二氟苯
10mL单口瓶中加入(4-乙炔基-2,6-二氟苯基)甲醇(85mg,0.50553mmol),DCM(2.5mL)，溶清后冰盐浴下缓慢加入PBr3(0.1mL,1mmol)，冰浴搅拌反应5h。停止反应，加入DCM(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(5mL)，分液，水相用DCM(10mL)萃取，合并有机相饱和食盐水洗(10mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩至即将旋干，不经进一步纯化，投下一步反应。
步骤5：4-(6-(6-(4-乙炔基-2,6-二氟苄基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL的单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-α]吡啶3-腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，20mg,0.04189mmol)，2-(溴甲基)-5-乙炔基-1,3-二氟苯(14mg,0.060596mmol)，DMF(2mL)，碳酸钾(23mg,0.170mmol)，室温下反应过夜。反应液加入水(8mL)，EA(20mL)，分出水相EA萃取(20mL)，合并有机相后水洗(10mL×2)，饱和食盐水洗涤(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/0-100/3)，得白色固体4.8mg(收率21％)，即为目标产物。LC-MS(ESI)：m/z＝555.2[M+1]。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.42(d,J＝2.2Hz,1H),8.21(s,1H),8.16(d,J＝1.6Hz,1H),7.79(dd,1H),7.16(d,J＝1.7Hz,1H),7.01(d,J＝7.4Hz,2H),6.73(d,J＝8.8Hz,1H),4.05(d,J＝11.8Hz,2H),3.98-3.90(m,2H),3.87(s,2H),3.73-3.66(m,4H),3.14(s,1H),2.84-2.74(m,1H),2.24-2.15(m,1H),1.28(s,6H)。HPLC:94.26％。
实施例351：4-(6-(4-(4-乙炔基苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001581
步骤1：4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲醛
室温下，氮气保护下，向4-溴苯甲醛(600mg,3.2429mmol)，双(三苯基膦)二氯化钯(91mg,0.129647mmol)，碘化亚铜(30mg,0.15752mmol)的混合物中依次加入三乙胺(4.9mL,35mmol)和三甲基硅乙炔(0.92mL,6.5mmol)，室温反应过夜。减压蒸干溶剂，残余物拌硅胶上样，硅胶柱层析(PE:EA＝20:1)，得黄色固体631mg(收率96.2％)，即为目标产物。
步骤2：4-乙炔基苯甲醛
室温下，向4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲醛(631mg,3.1188mmol)的甲醇(7.8mL)溶液加入碳酸钾(43mg,0.31112mmol)。室温反应4h。饱和NH4Cl(10mL)淬灭反应。减压蒸除有机溶剂，剩余溶液以EA(40mL×2)萃取，有机相合并，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干，残余物上样，硅胶柱层析(PE:EA＝15:1)，得白色固体378mg(收率93.1％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝131.10[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.99(s,1H),7.82(d,J＝8.2Hz,2H),7.61(d,J＝8.1Hz,2H),3.29(s,1H)。
步骤3：4-(6-(4-(4-乙炔基苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL的单口瓶中依次6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，20mg,0.04297mmol)，4-乙炔基苯甲醛(10mg,0.076840mmol)，DCM(2mL)，三乙酰基硼氢化钠(36mg,0.16986mmol)，室温下反应过夜。直接旋干，残渣硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/3)，得到白色固体15mg(收率68.9％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝507.2[M+H]；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(d,J＝2.4Hz,1H),8.19(s,1H),8.15(d,J＝1.9Hz,1H),7.70(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.50-7.45(m,2H),7.36-7.32(m,2H),7.13(d,J＝1.9Hz,1H),6.75(d,J＝8.9Hz,1H),3.85(s,2H),3.74-3.62(m,5H),3.60(s,2H),3.07(s,1H),2.63-2.56(m,4H),1.38(s,6H).。HPLC:98.15％。
实施例352：4-(6-(6-(4-乙炔基-2,3,5,6-四氟苄基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001591
步骤1：4-溴-2,3,5,6-四氟苯甲醛
N2保护下，50mL两口瓶依次加入LiBr(333mg,3.83mmol)，NMP(5mL)，2,3,4,5,6-五氟苯甲醛(0.31mL,2.5mmol)，160℃油浴加热搅拌过夜。反应液冷却后加入EA(25mL)，水洗涤(8mL×4)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，残余物柱层析分离(洗脱剂PE/EA＝15：1)，得到淡黄色固体340mg，即为目标产物，收率53％。LC-MS:(ESI-MS):m/z＝255.0[M-H]-。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.30(s)。19F NMR(375MHz,CDCl3):δ–144.0(mc,2F,Ar-o-F),–131.2(mc,2F,Ar-m-F)。
步骤2：2,3,5,6-四氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲醛
N2保护下，50mL两口瓶依次加入PdCl2(PPh3)2(29mg,0.041mmol)，CuI(29mg,0.15mmol)，4-溴-2,3,5,6-四氟苯甲醛(150mg,0.58mmol)，TEA(5mL)，最后注入三甲基硅乙炔(0.14mL,0.99mmol)，60℃油浴加热搅拌4h。反应液冷却后，加入水25ml，EA萃取(20mL×2)，合并有机相，饱和氯化铵溶液洗涤(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物柱层析分离(洗脱剂PE/EA＝15：1)，得淡黄色固体130mg，即为目标产物(收率80％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.29(s,1H),0.07(s,9H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-135.35(dd,J＝19.5,12.6Hz,2F),-145.84(dd,J＝19.5,12.6Hz,2F)。
步骤3：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(2,3,5,6-四氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苄基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
10mL单口瓶依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)-3-吡啶基]-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，25mg,0.057mmol)，2,3,5,6-四氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯甲醛(46mg,0.17mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(63mg,0.30mmol)，DCE(4mL)，rt搅拌过夜。反应液加入15mL氯化铵溶液，EA萃取(20mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，旋干直接投下一步反应。
步骤4：4-(6-(6-(4-乙炔基-2,3,5,6-四氟苄基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
50mL单口瓶依次加入6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(2,3,5,6-四氟-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苄基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(0.056mmol,)，K2CO3(33mg,0.24mmol)，MeOH(4mL)，rt搅拌1h。反应液加入氯化铵溶液20mL，EA萃取(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝25：1)，得到白色固体5mg，即为目标产物。LC-MS:(ESI-MS):m/z＝591.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.42(d,J＝2.3Hz,1H),8.22(s,1H),8.16(d,J＝1.8Hz,1H),7.79(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.16(d,J＝1.8Hz,1H),6.73(d,J＝8.8Hz,1H),3.99(d,J＝12.1Hz,2H),3.90–3.81(m,4H),3.70–3.61(m,5H),2.68(m,1H),2.08(m,1H),1.40(s,6H)。HPLC：99.57％。
实施例353：4-(6-(6-((6-乙炔基-5-氟吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001601
步骤1：(6-乙炔基-5-氟吡啶-3-基)甲醇
氮气保护下，在双口瓶中加入(6-溴-5-氟-3-吡啶基)甲醇(150mg,0.73mmol)，CuI(28mg,0.15mmol)，PdCl2(PPh3)2(51mg,0.073mmol)溶解于中THF(3mL)和TEA(3mL)，70℃搅拌下加入乙炔基(三甲基)硅烷(108mg,1.1mmol)，此温度下反应。TLC监控反应结束后将反应液过硅藻土抽滤，滤饼用少量EA洗涤，滤液经无水硫酸钠干燥后过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:5-1:2)，得棕色固体100mg，即为目标产物。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(s,1H),7.46(d,J＝9.4Hz,1H),4.64(s,2H),4.57(s,1H),3.37(s,1H)。
步骤2：5-(溴甲基)-2-乙炔基-3-氟吡啶
0℃，在单口瓶中将(6-乙炔基-5-氟吡啶-3-基)甲醇(30mg,0.20mmol)溶解于DCM(2mL)中，搅拌下滴加PBr3(0.03mL,0.3mmol)，加毕继续在此温度下搅拌。TLC检测反应结束后搅拌下往反应液中加入饱和碳酸氢钠调节水相pH至8，再加10mL DCM稀释，分离有机相，5mL水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后，过滤，母液旋除大部分DCM，残余物直接投入下一步反应，按理论收率计算。
步骤3：4-(6-(6-((6-乙炔基-5-氟吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下在单口瓶中加入4-[6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)-3-吡啶基]-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15mg,0.031mmol)，碳酸钾(22mg,0.16mmol)，加入2mL DMF使其溶解，5min后加入溶解于1mLDCM的5-(溴甲基)-2-乙炔基-3-氟吡啶(10mg,0.047mmol)，加毕继续在此温度下反应。TLC监控反应结束后将反应液倒入10mL水中，EA(30mL×2)萃取，有机相水洗(20mL×3)，饱和食盐水洗(20mL)，无水硫酸钠干燥后过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂MeOH:DCM＝1:80-1:20)，得淡黄色固体4mg，即为目标产物。Rf＝0.3(DCM:MeOH＝30:1)。LC-MS:m/z＝538.10[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(d,J＝2.4Hz,1H),8.39(s,1H),8.22(s,1H),8.16(d,J＝2.1Hz,1H),7.79(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.57(s,1H),7.16(d,J＝2.0Hz,1H),6.69(d,J＝8.8Hz,1H),3.87(s,2H),3.80(d,J＝5.1Hz,4H),3.69(s,2H),3.66–3.61(m,2H),3.41(s,1H),2.75–2.71(m,1H),2.07–2.05(m,1H),1.40(s,6H)。HPLC:95.71％。
实施例354：4-(6-(4-((6-乙炔基-吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)-吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001611
步骤1：6-(2-三甲基硅乙炔基)吡啶-3-甲醛
室温下，在25mL双口瓶中依次加入6-溴吡啶-3-甲醛(1000mg,5.376mmol)，PdCl2(PPh3)2(151mg,0.215mmol)和CuI(52mg,0.273mmol)，氮气保护下抽真空，加入三乙胺(8.1mL,58mmol)、乙炔基(三甲基)硅烷(1.52mL,10.8mmol)，室温反应过夜。TLC显示反应完毕。直接旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝10：1-8：1)，得到黄白色产品0.66g(收率60％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝204.2[M+H]+。
步骤2：6-乙炔基吡啶-3-甲醛
在25mL的单口瓶中，依次加入6-(2-三甲基硅乙炔基)吡啶-3-甲醛(660mg,3.246mmol)、K2CO3(897mg,6.490mmol)和MeOH(8.12mL)，室温搅拌反应。TLC显示反应完毕。滴加饱和氯化铵(10mL)淬灭反应，减压除去甲醇，残渣用EA(20mL×2)萃取，有机相饱和食盐水(10mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝10:1-4:1)，得到黄白色产品0.240g(收率56.4％)即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝132.1[M+H]+。
步骤3：4-(6-(4-((6-乙炔基-吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)-吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5ml单口瓶中依次加6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-4-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，15mg,0.032mol)，6-乙炔基吡啶-3-甲醛(10mg,0.076mol)，STAB(33.4mg,0.153mmol)和DCE(2mL)，室温搅拌反应过夜。反应液直接旋干，硅胶柱层析(洗脱剂DCM-DCM:MeOH＝20:1)得到淡黄色固体0.005g(收率30％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝508.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(s,1H),8.33(d,J＝2.3Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.71(dd,J＝8.8,2.6Hz,2H),7.48(d,J＝7.8Hz,1H),7.14(d,J＝1.9Hz,1H),6.75(d,J＝8.6Hz,1H),3.86(s,2H),3.66(t,4H),3.59(s,2H),3.15(s,1H),2.57(t,4H),1.28(s,6H).HPLC：92.42％。
实施例355：4-(6-(6-((4-乙炔基-3-氟苯基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)-吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001621
步骤1：(3-氟-4-碘-苯基)甲醇
25ml双口瓶中加入LiAlH4(295mg,7.539mmol)，氮气保护下抽真空，0℃条件下加入无水THF(10mL)溶解，持续通氮气条件下分批加入3-氟-4-碘-苯甲酸(1000mg,3.759mmol)，加毕，保温反应30min，后置于室温搅拌反应。TLC显示反应完毕。冰浴条件加水15mL淬灭反应，EA(40×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水40mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝30:1-8:1)，得到黄色油状物0.54g(收率57％)，即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.69(dd,J＝8.0,6.5Hz,1H),7.07(dd,J＝5.6,4.8Hz,1H),6.88(d,J＝8.1Hz,1H),4.63(s,2H),2.25(s,1H).
步骤2：3-氟-4-碘-苯甲醛
25ml单口瓶中，加入(3-氟-4-碘-苯基)甲醇(540mg,2.143mmol)，NaHCO3(0.9g,10mmol)，戴斯马丁氧化剂(1.2g,2.8mmol)，用DCM(15mL)溶解，置于室温搅拌反应。TLC显示反应完毕。加入饱和硫代硫酸钠溶液10mL淬灭反应，分层后分出有机相，再用DCM(20mL×2)萃取水相，合并有机相，饱和食盐水15mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝10：1-2：1)，得到黄白色固体0.45g(收率84％)，即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.95(d,J＝1.6Hz,1H),7.97(dd,J＝8.0,6.0Hz,1H),7.52(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),7.41(dd,J＝8.0,1.7Hz,1H).
步骤3：3-氟-4-(2-三甲基甲硅烷氧基)苯甲醛
25mL双口瓶中，加入3-氟-4-碘-苯甲醛(450mg,1.80mmol,)，CuI(35mg,0.184mmol)，PdCl2(PPh3)2(64mg,0.091mmol)，氮气保护下抽真空，加入无水THF(4.5mL)，三乙胺(4.5mL,32mmol)，溶解后加入乙炔基(三甲基)硅烷(0.51mL,3.6mmol)，室温搅拌反应。TLC显示反应完毕。抽滤，EA120mL多次洗涤滤饼，滤液饱和食盐水30mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝100:1-30:1)，得到棕黄色油状物0.195g(收率49.2％)，即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.95(d,J＝1.7Hz,1H),7.61–7.59(m,2H),7.55(d,J＝9.1Hz,1H),0.27(s,9H).
步骤4：4-乙炔基-3-氟-苯甲醛
在10mL的单口瓶中，依次加入3-氟-4-(2-三甲基甲硅烷氧基)苯甲醛(195mg,0.885mmol)、K2CO3(245mg,1.773mmol)和MeOH(2.5mL)，室温搅拌反应。TLC显示反应完毕。加水2mL，EA(10mL×3)萃取，饱和食盐水8mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂纯PE-PE:EA＝50：1)，得到白色固体0.071g(收率54％)，即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.98(d,J＝1.7Hz,1H),7.68–7.62(m,2H),7.59(d,J＝9.2Hz,1H),3.51(s,1H).
步骤5：4-(6-(6-((4-乙炔基-3-氟苯基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基]-吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL单口瓶中依次加4-[6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基-3-吡啶基]-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，20mg,0.042mmol)，4-乙炔基-3-氟-苯甲醛(25mg,0.169mmol)，DCE(2mL)溶解，滴加一滴冰醋酸，室温搅拌反应30min，加入三乙酰氧基硼氢化钠(36mg,0.165mmol)，室温搅拌反应。TLC显示反应完毕。反应液直接旋干，硅胶柱层析(洗脱剂纯DCM-DCM:MeOH＝20:1)，得到白色固体0.011g(收率49％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝537.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(d,J＝2.1Hz,1H),8.22(s,1H),8.16(d,J＝1.9Hz,1H),7.78(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.41(t,J＝7.5Hz,1H),7.19–7.15(m,2H),7.10(d,J＝8.4Hz,1H),6.68(d,J＝8.8Hz,1H),3.87(s,2H),3.84–3.77(m,4H),3.64(s,2H),3.63–3.55(m,2H),3.27(s,1H),2.73(d,J＝6.3Hz,1H),2.02(d,J＝6.7Hz,1H),1.28(s,6H).HPLC：97.72％。
实施例356：4-(6-(6-((6-乙炔基-5-氟吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001631
步骤1：(6-乙炔基-5-氟吡啶-3-基)甲醇
氮气保护下，在双口瓶中加入(6-溴-5-氟-3-吡啶基)甲醇(150mg,0.73mmol)，CuI(28mg,0.15mmol)，PdCl2(PPh3)2(51mg,0.073mmol)溶解于中THF(3mL)和TEA(3mL)，70℃搅拌下加入乙炔基(三甲基)硅烷(108mg,1.1mmol)，此温度下反应。TLC监控反应结束后将反应液过硅藻土抽滤，滤饼用少量EA洗涤，滤液经无水硫酸钠干燥后过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:5-1:2)，得棕色固体100mg，即为目标产物。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(s,1H),7.46(d,J＝9.4Hz,1H),4.64(s,2H),4.57(s,1H),3.37(s,1H)。
步骤2：5-(溴甲基)-2-乙炔基-3-氟吡啶
0℃，在单口瓶中将(6-乙炔基-5-氟吡啶-3-基)甲醇(30mg,0.20mmol)溶解于DCM(2mL)中，搅拌下滴加PBr3(0.03mL,0.3mmol)，加毕继续在此温度下搅拌。TLC检测反应结束后搅拌下往反应液中加入饱和碳酸氢钠调节水相pH至8，再加10mL DCM稀释，分离有机相，5mL水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥后，过滤，母液旋除大部分DCM，残余物直接投入下一步反应，按理论收率计算。
步骤3：4-(6-(6-((6-乙炔基-5-氟吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下在单口瓶中加入4-[6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)-3-吡啶基]-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15mg,0.031mmol)，碳酸钾(22mg,0.16mmol)，加入2mL DMF使其溶解，5min后加入溶解于1mLDCM的5-(溴甲基)-2-乙炔基-3-氟吡啶(10mg,0.047mmol)，加毕继续在此温度下反应。TLC监控反应结束后将反应液倒入10mL水中，EA(30mL×2)萃取，有机相水洗(20mL×3)，饱和食盐水洗(20mL)，无水硫酸钠干燥后过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂MeOH:DCM＝1:80-1:20)，得淡黄色固体4mg，即为目标产物。Rf＝0.3(DCM:MeOH＝30:1)。LC-MS:m/z＝538.10[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(d,J＝2.4Hz,1H),8.39(s,1H),8.22(s,1H),8.16(d,J＝2.1Hz,1H),7.79(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.57(s,1H),7.16(d,J＝2.0Hz,1H),6.69(d,J＝8.8Hz,1H),3.87(s,2H),3.80(d,J＝5.1Hz,4H),3.69(s,2H),3.66–3.61(m,2H),3.41(s,1H),2.75–2.71(m,1H),2.07–2.05(m,1H),1.40(s,6H)。HPLC:95.71％。
实施例357：6-乙氧基-4-(6-(6(6-乙炔基-吡啶-3-基)甲基]-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基]-吡啶-3-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001641
步骤1：6-(2-三甲基硅乙炔基)吡啶-3-甲醛
室温下，在25mL双口瓶中依次加入6-溴吡啶-3-甲醛(1000mg,5.376mmol)，PdCl2(PPh3)2(151mg,0.215mmol)和CuI(52mg,0.273mmol)，氮气保护下抽真空，向体系中加入三乙胺(8.1mL,58mmol)、乙炔基(三甲基)硅烷(1.52mL,10.8mmol)，得到黑色浑浊液，反应过夜。TLC显示反应完毕。直接旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝10：1-8：1)，得到黄白色产品0.66g,(收率60％)，即为目标产物，LC-MS(ES-API):m/z＝204.2[M+H]+。
步骤2：6-乙炔基吡啶-3-甲醛
在25mL的单口瓶中，依次加入6-(2-三甲基硅乙炔基)吡啶-3-甲醛(1.0g,4.919mmol)、K2CO3(1.36g,9.84mmol)和MeOH(12.3mL)，室温搅拌反应。TLC显示反应完毕。滴加饱和氯化铵(15mL)淬灭反应，减压除去大部分甲醇，得到的浑浊液用EA(40mL×2)萃取，有机相饱和食盐水(15mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝8:1-4:1)，得到黄白色产品0.3g(收率50％)即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝132.1[M+H]+。
步骤3：(6-乙炔基-3-吡啶基)甲醇
在25mL双口瓶中，加入6-乙炔基吡啶-3-甲醛(150mg,1.144mmol)，硼氢化钠(66mg,1.71mmol)，氮气保护下抽真空，加入无水THF(7.5mL)，置于低温槽0℃下搅拌反应15min，后置于室温反应。TLC显示反应完毕。加水(10mL)淬灭反应，EA(30mL×2)萃取，有机相用饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝2：1-1：2)，得到黄白色固体0.06g(收率40％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝134.1[M+H]+。
步骤4：5-(溴甲基)-2-乙炔基-吡啶
低温槽0℃下，在10mL单口瓶中，用DCM(2mL)溶解(6-乙炔基-3-吡啶基)甲醇(23mg,0.173mmol)，后缓慢加入PBr3(0.033mL,0.35mmol)，反应30min后，TLC显示反应完毕，缓慢加水(2mL)淬灭反应，滴加饱和碳酸钾溶液(5mL)调PH为碱性，DCM(15mL×2)萃取，浓缩部分DCM，直接投入下步反应，产率按100％计算。
步骤5：6-乙氧基-4-(6-(6(6-乙炔基-吡啶-3-基)甲基]-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基]-吡啶-3-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
10mL单口瓶中加入4-[6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-3-吡啶基]-6-乙氧基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体8的合成，25mg,0.058mmol)，K2CO3(32mg,0.229mmol)，N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，以及5-(溴甲基)-2-乙炔基-吡啶(26.5mg,0.135mmol)，缓慢升温至40℃反应过夜。TLC显示反应完毕。加水(10mL)淬灭反应，用EA(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(10mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂纯DCM-DCM:MeOH＝20:1)，得到淡黄色固体产物0.011g(收率40％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝476.20[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.61(s,1H),8.42(d,J＝2.0Hz,1H),8.23(s,1H),8.14(d,J＝1.8Hz,1H),7.81(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.75(d,J＝7.9Hz,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),7.14(s,1H),6.71(d,J＝8.8Hz,1H),4.12(q,J＝6.9Hz,2H),3.83(d,J＝5.8Hz,4H),3.70(s,2H),3.65(d,J＝14.2Hz,2H),3.15(s,1H),2.79–2.72(m,1H),2.06(d,J＝7.4Hz,1H),1.35(s,3H).HPLC：90.44％。
实施例358：4-(6-(4-(4-乙炔基苄基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001651
步骤1：4-(4-溴苄基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下，在25mL双口瓶中依次加入4-亚甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(450mg,2.2811mmol)，9-硼二环[3.3.1]壬烷(4.6mL,2mmol,0.5mol/L)，70℃下回流反应1h。降至室温，氮气保护下往上述反应液中依次加入1-溴-4-碘-苯(600mg,2.12mmol)，碳酸钾(380mg,2.72206mmol)，DMF(6mL)，水(0.6mL)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(50mg,0.068mmol)，升温至60℃反应3h。反应液加入EA(60mL)，水洗(20mL×3)，饱和食盐水洗(20mL)，分出有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液浓缩，硅胶柱层析(洗脱剂为PE/EA＝100/0-100/2)，得白色固体239mg(收率31.81％)，即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42(d,J＝8.3Hz,2H),7.03(d,J＝8.3Hz,2H),4.19-3.99(m,2H),2.65(t,J＝12.3Hz,2H),2.51(d,J＝6.9Hz,2H),1.72-1.62(m,2H),1.60-1.58(m,1H),1.47(s,9H),1.22-1.08(m,2H)。
步骤2：4-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苄基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在10mL双口瓶中，氮气保护下依次加入4-(4-溴苄基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(190mg,0.5363mmol)，双(三苯基膦)二氯化钯(40mg,0.0564177mmol)，DMF(3mL)，三乙胺(0.25mL,1.8mmol)，搅拌15min后再加入碘化亚铜(10mg,0.052508mmol)，三甲基硅乙炔(0.16mL,1.1mmol)，50℃下反应过夜。硅藻土过滤反应液，EA洗涤滤饼(40mL)，母液加入水(20mL)，分出水相EA(50mL×3)萃取，有机相水洗(50mL)，饱和食盐水洗(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，母液浓缩，硅胶柱层析(洗脱液PE/EA＝100/2-100/6)，得淡黄色粘稠液体152mg，即为目标产物(76.28％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(d,J＝8.1Hz,2H),7.06(d,J＝8.1Hz,2H),4.15-3.98(m,2H),2.62(t,J＝12.6Hz,2H),2.51(d,J＝7.0Hz,2H),1.68-1.62(m,1H),1.59-1.54(m,2H),1.44(s,9H),1.17-1.06(m,2H),0.24(s,9H)。
步骤3：4-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苄基)哌啶盐酸盐
在10mL单口瓶中依次加入4-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苄基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg,0.4037mmol)，HCl/EA(5mL,20mmol,4mol/L)，室温下反应6h。35℃直接旋干得到130mg浅棕色固体即为目标产物。不经过进一步纯化直接投下一步反应。
步骤4：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苄基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，向4-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苄基)哌啶盐酸盐(65mg,0.1882mmol)、4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，30mg,0.09194mmol)中加入甲苯(2mL)，DIPEA(0.1mL,0.6mmol)，120℃反应过夜。降至室温，减压旋干溶剂。不经过进一步纯化直接投下一步反应。
步骤5：4-(6-(4-(4-乙炔基苄基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL单口瓶中依次加入6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苄基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(53mg,0.09173mmol)，MeOH(2mL)，K2CO3(16mg,0.11577mmol)，室温下搅拌反应过夜。减压旋干反应液，硅胶柱层析(洗脱剂为DCM/MeOH＝100/1-30/1)，得淡黄色固体30.1mg，即为目标产物(收率64.9％)。LC-MS(ESI):m/z＝＝506.30[M+H]；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(d,J＝2.2Hz,1H),8.28(d,1H),8.24(s,1H),7.74(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),7.43(d,J＝8.1Hz,2H),7.27(d,1H),7.12(d,J＝8.1Hz,2H),6.82(d,J＝9.0Hz,1H),4.37(d,J＝13.3Hz,2H),3.88(s,2H),3.05(s,1H),2.93(t,J＝12.0Hz,2H),2.59(d,J＝7.0Hz,2H),2.37-2.16(m,4H),2.07-1.99(m,1H),1.38(s,6H)。HPLC:97.24％。
实施例359：4-(6-(4-(4-乙炔苯甲基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001661
步骤1：4-溴苯甲基溴化镁
50mL二口瓶N2保护下依次加入Mg(205mg,8.433mmol)，***(无水)(5mL)，于-5℃低温，1-溴-4-溴甲基苯(1380mg,5.52mmol)溶于9ml***缓缓加入，加完后rt搅拌，反应液渐渐变为乳白色搅拌到1h后，入0℃低温，直接投下一步反应。
步骤2：叔丁基4-(4-溴苯基)-4-羟基哌啶-1-羧酸酯
0℃低温下，4-溴苯甲基溴化镁(5.52mmol)缓缓加入(15-20min加完)叔丁基4-氧代哌啶-1-羧酸酯(1050mg,5.27mmol)的无水***溶液中(10mL)。5min后移至rt搅拌3h。反应液-5℃低温下，加入饱和氯化铵溶液(15mL)淬灭反应，EA萃取(25mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物硅胶柱层析(洗脱剂PE/EA＝5：1)，得白色固体350mg(2步总收率18％)。LC-MS:(ESI-MS):m/z＝392.2；394.2[M+Na]+。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.41(d,J＝8.0Hz,2H),7.05(d,J＝8.1Hz,2H),3.82(s,2H),3.06(s,2H),2.69(s,2H),1.53(m,2H),1.45(m,2H),1.43(s,9H)。
步骤3：叔丁基4-羟基-4-(4-((三甲基硅基)乙炔基)苯甲基)哌啶-1-羧酸酯
N2保护下，50mL双口瓶依次加入PdCl2(PPh3)2(36mg,0.051mmol)，CuI(9.5mg,0.050mmol)，叔丁基4-(4-溴苯基)-4-羟基哌啶-1-羧酸酯(185mg,0.50mmol)，TEA(4mL)加入，三甲基硅乙炔(0.25mL,1.80mmol)，45℃油浴加热加热搅拌过夜。反应液冷却后过滤，EA洗涤(5mL×3)，滤液浓缩，硅胶柱层析分离(洗脱剂PE/EA＝5：1)，得到淡黄色固体105mg(收率54％)。LC-MS:(ESI-MS):m/z＝388.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.38(m,1H),7.30(dd,J＝15.6,8.2Hz,1H),7.18(dd,J＝11.0,4.3Hz,1H),7.08(dd,J＝14.5,8.4Hz,1H),3.83(s,2H),3.24(s,1H),3.08(s,2H),2.77-2.65(m,2H),1.63–1.50(m,2H),1.48(s,2H),1.45(s,9H),0.24(s,9H)。
步骤4：叔丁基4-羟基-4-(4-乙炔苯甲基)-4-羟基哌啶-1-羧酸酯
50mL单口瓶依次加入叔丁基4-羟基-4-(4-((三甲基硅基)乙炔基)苯甲基)哌啶-1-羧酸酯(305mg,0.79mmol)，MeOH(12mL)，K2CO3(610mg,4.41mmol)，rt搅拌4h。反应液加入氯化铵溶液(10mL)，EA萃取(25mL×2)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液旋干得到250mg油状物，无进一步纯化直接投下一步反应。LC-MS:(ESI-MS):m/z＝338.2[M+Na]+。
步骤5：4-(4-乙炔苯甲基)哌啶-4-醇
50mL单口瓶依次加入叔丁基4-羟基-4-(4-乙炔苯甲基)-4-羟基哌啶-1-羧酸酯(73mg,0.23mmol)，DCM(5.0mL)，0℃低温下加入TFA(0.32mL)，反应过夜后，加入饱和碳酸氢钠溶液(30mL)EA萃取(15mL×4)，有机相合并，干燥，浓缩，柱硅胶层析分离(洗脱剂DCM/MeOH＝8:1(1％Et3N))，得55mg粗产物，直接投下一步反应。LC-MS:(ESI-MS):m/z＝216.3[M+H]+。
步骤6：4-(6-(4-(4-乙炔苯甲基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
5mL微波管依次加入4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，36mg,0.11mmol)，4-(4-乙炔苯甲基)哌啶-4-醇(28mg,0.13mmol)，DMSO(3.5mL)，N,N-二异丙基乙胺(0.16mL,0.97mmol)。110℃微波反应3.5h。反应结束冷却后加入EA(20mL)，氯化铵溶液洗涤(10mL×2)，合并水相，EA萃取(15mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，母液浓缩。硅胶柱层析分离(洗脱剂PE/EA＝2：3)，得淡黄色固体5mg，即为目标产物。LC-MS:(ESI-MS):m/z＝522.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(d,J＝1.8Hz,1H),8.19(s,1H),8.14(m,1H),7.69(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),7.46(d,J＝7.8Hz,2H),7.19(d,J＝7.9Hz,2H),7.14(m,1H),6.78(d,J＝8.9Hz,1H),4.16(d,J＝13.1Hz,2H),4.11(s,1H),3.86(s,2H),3.33(m,2H),3.08(s,1H),2.98(s,1H),2.80(s,2H),1.76-1.70(m,4H),1.39(s,6H)。HPLC：88.63％。
实施例360：4-(6-(4-(3,5-二氟-4-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001681
步骤1：(4-溴-3,5-二氟苯基)甲醇
0℃，N2保护下，4-溴-3,5-二氟苯甲酸(3g,12.658mmol,)溶于THF(60mL)，缓慢加入BH3.Me2S(25mL,250mmol,10mol/L)，冰浴下搅拌自然升至室温反应过夜。缓慢加入甲醇淬灭反应至无气泡产生，浓缩，残余物硅胶柱层析(淋洗液PE/EA＝15/1-10/1)，得白色固体2.672g，即为目标产物(收率94.65％)。
步骤2：4-溴-3,5-二氟苯甲醛
冰浴下，(4-溴-3,5-二氟苯基)甲醇(3g,13.45mmol)溶于DCM(60mL)，缓慢加入戴斯-马丁(11.4g,26.9mmol)，冰浴下搅拌0.5h后升至室温继续搅拌反应过夜。反应液直接浓缩，残余物硅胶柱层析(洗脱剂PE/EA＝100/1-50/1)，得白色固体2.024g，即为目标产物(收率68.08％)。
步骤3：4-(4-溴-3,5-二氟苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
在25mL的单口瓶中依次加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(480mg,2.577mmol)，4-溴-3,5-二氟苯甲醛(600mg,2.714mmol)，DCE(20mL,100mass％)，冰乙酸(0.16mL,2.8mmol)，反应30min后再加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.65g,7.79mmol)，室温下反应5h。直接旋干反应液，残余物硅胶柱层析(PE/EA＝100/2-100/5)，得无色透明液体750mg，即为目标产物(收率74.4％)。
步骤4：4-(3,5-二氟-4-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
N2保护下，依次加入4-(4-溴-3,5-二氟苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(600mg,1.534mmol)、PdCl2(PPh3)2(215mg,0.306mmol)、CuI(30mg,0.157mmol)、PPh3(40mg,0.15250mmol)，DMF(12mL)和Et3N(0.85mL,6.1mmol)，然后缓慢加入2-甲基丁-3-炔-2-醇(0.4mL,4mmol)，80℃搅拌反应过夜。停止反应，降至室温，加入水(10mL)，EA(30mL×3)萃取，合并有机相水洗(20mL)，饱和食盐水洗(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，母液浓缩，残余物硅胶柱层析(淋洗液PE/EA＝100/4-100/10)，得淡黄色晶体410mg，即为目标产物(收率67.8％)。LC-MS：H m/z＝395.10[M+1]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.90(d,J＝7.9Hz,2H),3.46(s,2H),3.45–3.39(m,4H),2.42–2.30(m,4H),2.12(s,1H),1.64(s,6H),1.45(s,9H)。
步骤5：4-(2,6-二氟-4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)-2-甲基丁-3-基-2-醇盐酸盐
在10mL单口瓶中依次加入4-(3,5-二氟-4-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.2535mmol)，HCl/EA(5mL,20mmol,4mol/L)，室温下搅拌过夜。直接旋干，泵抽得到深黄色固体，无进一步纯化投下一步反应，按理论收率计算。LC-MS:m/z＝295.2[M-HCl+H]+。
步骤6：4-(6-(4-(3,5-二氟-4-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，向4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，60mg,0.184mmol)，4-(2,6-二氟-4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)-2-甲基丁-3-基-2-醇盐酸盐(84mg,0.254mmol)中加入甲苯(3mL)，DIPEA(0.2mL,1mmol)，120℃条件下搅拌回流8天。后处理：直接旋干反应液，残余物硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝50/1)，得黄色固体58mg，即为目标产物(收率52.51％)。LC-MS：m/z＝601.20[M+1]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(d,J＝2.2Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.71(dd,J＝8.8，2.4Hz，1H),7.14(d,J＝2.1Hz,1H),6.95(d,J＝7.8Hz,2H),6.75(d,J＝8.9Hz,1H),3.86(s,2H),3.67(t,J＝4.8Hz，4H),3.53(s,2H),2.56(t,J＝4.8Hz，4H),1.65(s,6H),1.39(s,6H)。HPLC：94.67％。
实施例361：4-(6-(4-(4-乙炔基-3,5-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001691
4-(6-(4-(3,5-二氟-4-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见实施例360的合成，40mg,0.066mmol)溶于甲苯(2mL)，rt搅拌10min。加入KOH(10mg,0.178mmol)，回流搅拌反应11h。反应液直接旋干，残余物硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝50/1)，得白色固体12.5mg，即为目标产物(收率34.6％)。LC-MS：m/z＝543.15[M+1]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(d,J＝2.1Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.71(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.14(d,J＝2.0Hz,1H),6.99(d,J＝8.0Hz,2H),6.76(d,J＝8.8Hz,1H),3.86(s,2H),3.68(t,J＝4.4Hz,4H),3.54(s,2H),3.49(s,1H),2.57(t,J＝4.8Hz,4H),1.39(s,6H)。HPLC：99.51％。
实施例362：4-(6-(6-(3-(2-氟苯基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001692
步骤1：3-(2-氟苯基)丙-2-炔-1-醇
室温氮气保护下，向1-氟-2-碘代苯(800mg,3.6036mmol)和双(三苯基膦)二氯化钯(126mg,0.179511mmol)，碘化亚铜(34mg,0.17853mmol)的混合物中依次加入三乙胺(5.4mL,39mmol)和丙-2-炔-1-醇(0.43mL,7.3mmol)，室温反应过夜。反应液用EA(40mL)稀释，有机相倾倒出来，残余黑色黏稠物用EA(30mL×3)洗涤，有机相合并，浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝2:1)，得淡黄色固体505mg(收率93.3％)，即为目标产物。
步骤2：3-(2-氟苯基)丙炔醛
室温下，向3-(2-氟苯基)丙-2-炔-1-醇(505mg,3.3633mmol)的二氯甲烷(33.6mL)溶液中依次加入碳酸氢钠(1.42g,16.8mmol)和戴斯马丁试剂(1.73g,4.04mmol)。室温反应1.5h。饱和Na2S2O3溶液(20mL)淬灭反应，DCM(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，残余物硅胶柱层析(PE:EA＝10:1)，得淡黄色液体445mg(收率89.3％)，即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.45(s,1H),7.62-7.53(m,1H),7.48(dd,J＝7.8,5.8Hz,1H),7.23-7.11(m,2H)。
步骤3：4-(6-(6-(3-(2-氟苯基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL的单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶3-腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，12mg,0.02967mmol)，3-(2-氟苯基)丙炔醛(10mg,0.067508mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(19mg,0.089648mmol)，DCE(2mL)，35℃下反应4.5h。反应液直接旋干，残渣硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/2)，得到白色固体5.5mg(收率32.0％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝537.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.60(d,J＝18.1Hz,2H),8.42(d,J＝2.2Hz,1H),8.22(s,1H),8.17(d,J＝1.9Hz,1H),7.82-7.78(m,1H),7.35(d,J＝2.4Hz,1H),7.17(d,J＝1.9Hz,1H),7.10-7.06(m,1H),6.71(d,J＝8.8Hz,1H),3.92-3.83(m,4H),3.78-3.63(m,6H),3.53(s,1H),2.37-2.31(m,1H),2.25-2.19(m,1H),1.37(s,6H)。HPLC:91.02％。
实施例363：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001701
步骤1：3-(吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇
室温氮气保护下，向3-碘吡啶(400mg,1.9512mmol)和双(三苯基膦)二氯化钯(68mg,0.097mmol)，碘化亚铜(18mg,0.094514mmol)的混合物中依次加入三乙胺(2.9mL,21mmol)和丙-2-炔-1-醇(0.23mL,3.9mmol)，室温反应4.5h。反应液用EA(40mL)稀释，有机相倾倒出来，残余黑色黏稠物用EA(30mL×3)洗涤，有机相合并，浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝3:1-2:1)，得淡黄色固体242.4mg(收率93.3％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝134.15[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.75(s,1H),8.53(d,J＝4.2Hz,1H),7.74(d,J＝7.8Hz,1H),7.29–7.24(m,1H),4.52(s,2H),3.33(br s,1H)。
步骤2：3-(吡啶-3-基)丙炔醛
室温下，在50ml单口瓶中加入3-(吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇(50mg,0.37552mmol)，DCM(2mL)，戴斯马丁试剂(240mg,0.5659mmol)溶解到2ml DCM中加入到上述反应液中，冰浴下反应4h。反应液加入饱和Na2S2O3溶液(20mL)淬灭反应，DCM萃取(30mL×2)，分出有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，室温减压浓缩得到淡黄色粘稠固体。无进一步纯化，直接投下一步反应。收率按100％计算。
步骤3：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL的单口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，25mg,0.05237mmol)，3-(吡啶-3-基)丙炔醛(10mg,0.076260mmol)，DCM(2mL)，三乙酰基硼氢化钠(45mg,0.21232mmol)，室温下反应过夜。反应液直接旋干，残渣硅胶柱层析(洗脱剂DCM/MeOH＝100/0-100/3)，得到白色固体8mg(收率29.4％)，即为目标产物。LC-MS(ESI):m/z＝520.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.65(s,1H),8.52(d,1H),8.40(d,J＝2.2Hz,1H),8.22(s,1H),8.16(d,J＝1.9Hz,1H),7.78(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.71(d,J＝7.9Hz,1H),7.25-7.20(m,1H),7.16(d,J＝1.9Hz,1H),6.71(d,J＝8.8Hz,1H),4.01(d,J＝4.9Hz,2H),3.91-3.85(m,4H),3.79-3.59(m,3H),3.56(s,2H),2.85-2.75(m,1H),2.06-1.97(m,1H),1.40(s,6H)。HPLC:95.90％。
实施例364：6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-4-(6-(4-(3-(吡啶-2-基)丙-2-炔基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001711
步骤1：3-(2-吡啶基)丙-2-炔-1-醇
室温，将CuI(60mg,0.315mmol)，PdCl2(PPh3)2(222mg,0.316mmol)置于25ml双口瓶中，氮气保护下抽真空，加入三乙胺(9.5mL,68mmol)、丙炔醇(0.744mL,12.7mmol)和2-溴吡啶(0.6mL,6mmol)，50℃下反应过夜。TLC显示反应完毕。反应液旋干，加入15mL饱和氯化铵洗涤，EA(40mL×2)萃取，抽滤，用EA(10mL×3)洗涤固体，合并有机相，饱和食盐水(15mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝3：1-1：1)，得到黄白色产品0.664g(产率80％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝134.25[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.56(d,J＝4.3Hz,1H),7.66(td,J＝7.8,1.7Hz,1H),7.43(d,J＝7.8Hz,1H),7.24(dd,J＝4.6,3.0Hz,1H),4.53(s,2H),2.63(s,1H)。
步骤2：2-(3-溴丙-1-炔基)吡啶
0℃下，在25mL单口瓶中，DCM(10mL)溶解3-(2-吡啶基)丙-2-炔-1-醇(100mg,0.225mmol)，后缓慢加入PBr3(0.141mL,0.45mmol)，此温度下继续反应。TLC显示反应完毕。缓慢加水(5mL)淬灭反应，滴加饱和碳酸钾溶液(15mL)调PH为碱性，DCM(30mL×2)萃取，饱和食盐水(20mL)萃取，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩，收率按100％计算，直接投入下步反应。
步骤3：6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-4-(6-(4-(3-(吡啶-2-基)丙-2-炔基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈
5mL单口瓶中加入6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-4-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，15mg,0.032mmol)，K2CO3(18.3mg,0.131mmol)，DMF(2mL)溶解，加入2-(3-溴丙-1-炔基)吡啶(25mg,0.128mmol)，室温搅拌反应。TLC显示反应完毕后加9mL水淬灭反应，EA(20mL×2)萃取，有机相饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂纯DCM-DCM:MeOH＝20:1)，得到黄白色固体0.011g(收率67％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):[M+H]+＝508.2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.56(s,1H),8.34(d,J＝2.4Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.72(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.64(t,J＝7.7Hz,1H),7.45(d,J＝7.8Hz,1H),7.22(d,J＝6.3Hz,1H),7.14(d,J＝2.0Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),3.86(s,2H),3.78–3.68(m,4H),3.66(s,2H),2.90–2.62(m,4H),2.01(s,1H),1.39(s,6H)。HPLC：88.56％。
实施例365：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001721
步骤1：2-(3-溴丙-1-炔-1-基)吡啶
25mL单口瓶依次加入3-(吡啶-2-基)丙-2-炔-1-醇(21mg,0.16mmol)，DCM(5mL)，-5℃下，缓慢加入PBr3(0.04mL,0.40mmol)，5min加完，此温度下反应2h。5％的K2CO3溶液(10mL)缓缓加入反应液，收集有机相，水相DCM萃取(10mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。按当量直接投下一步反应。LC-MS:(ESI-MS):m/z＝196.1,198.1[M+H]+。
步骤2：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
10mL单口瓶依次加入4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，5mg,0.011mmol)，DMF(2mL)，K2CO3(16mg,0.12mmol)，2-(3-溴丙-1-炔-1-基)吡啶(29mg,0.15mmol)，40℃反应过夜。反应液加入EA 10mL)，水洗(5mL×4)，合并水相，EA萃取(10mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析纯化(洗脱剂DCM/MeOH＝30：1)，得淡黄色固体4mg，即为目标产物(收率65％)。LC-MS:(ESI-MS):m/z＝520.2[M+H]+。HPLC：90.90％。
实施例366：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001722
步骤1：3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇
氮气保护下在双口瓶中加入3-溴-5-甲氧基吡啶(600mg,3.2mmol)，PdCl2(PPh3)2(224mg,0.32mmol)和碘化铜(122mg,0.64mmol)，加入5mL TEA使其溶解，搅拌下加入丙-2-炔-1-醇(0.23mL,4.0mmol)，加毕将反应置于70℃油浴中加热。反应结束后将反应液经硅藻土抽滤，滤饼用少量EA洗涤，滤液旋干过柱层析，洗脱剂EA:PE＝1:5-1:2，得白色固体233mg，即为目标产物。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝1.0Hz,1H),8.23(d,J＝2.7Hz,1H),7.23(s,1H),4.50(s,2H),3.84(s,3H),3.08(s,1H)。
步骤2：3-(3-溴丙-1-炔-1-基)-5-甲氧基吡啶
0℃，在单口瓶中将3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇(60mg,0.37mmol)溶解于2mL DCM中，搅拌下滴加PBr3(10mg,0.037mmol)，加毕继续在此温度下搅拌。TLC检测原料完毕后搅拌下往反应液中加入饱和碳酸氢钠调节水相pH至8，再加10mLDCM稀释，分离有机相，5mL水洗一次，无水硫酸钠干燥后，旋去部分DCM得到浓稠物，直接投入下一步反应，按理论收率计算。
步骤3：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(3-(5-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
10mL单口瓶中加入6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-4-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，15mg,0.032mmol)，碳酸钾(14mg,0.10mmol)，加入2mL DMF使其溶解，转移反应液至0℃，搅拌下加入3-(3-溴丙-1-炔基)-5-甲氧基-吡啶(11mg,0.049mmol)，加毕继续在此温度下反应。反应结束后往反应液中加入水(10mL)，EA(30mL×2)萃取，有机相水洗(10mL×2)，饱和食盐水洗(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干硅胶柱层析，洗脱剂为MeOH:DCM＝1:50-1:30，得类白色固体1.5mg，即为目标产物。Rf＝0.3(DCM:MeOH＝20:1)。LC-MS:m/z＝538.20[M+H]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(d,J＝2.3Hz,1H),8.28(s,1H),8.24(s,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.72(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.35(d,J＝2.3Hz,1H),7.14(d,J＝2.1Hz,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,1H),3.86(s,2H),3.85(s,3H),3.76–3.73(m,4H),3.63(s,2H),2.81–2.77(m,4H),1.28(s,6H)。
实施例367：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(3-(吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001731
步骤1：3-(3-吡啶基)丙-2-炔-1-醇
室温，将CuI(72mg,0.378mmol)，PdCl2(PPh3)2(270mg,0.385mmol)置于25mL双口瓶中，氮气保护下抽真空，加入三乙胺(11mL,78.9mmol)、丙炔醇(0.89mL,15mmol)和3-溴吡啶(0.73mL,7.6mmol)，50℃下反应过夜。TLC显示反应完毕。加入20mL饱和氯化铵淬灭反应，抽滤，滤饼40mLEA洗涤，分出有机相，再用EA(40mL×2)萃取水相，合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝3：1-1：1)，得到棕黄色固体0.705g(收率70％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝134.20[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(d,J＝1.3Hz,1H),8.51(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.73(dt,J＝7.9,1.8Hz,1H),7.31–7.26(m,1H),4.50(s,2H),3.72(s,1H)。
步骤2：3-(3-溴丙-1-炔基)吡啶
0℃下，在25mL单口瓶中，DCM(15mL)溶解3-(3-吡啶基)丙-2-炔-1-醇(200mg,1.502mmol)，缓慢加入PBr3(0.282mL,3.00mmol)，保温反应。TLC显示反应完毕。缓慢加水(5mL)淬灭反应，滴加饱和碳酸钾溶液调PH为碱性，DCM(20mL×2)萃取，饱和食盐水(15mL)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，收率按100％计算，直接投入下步反应。
步骤3：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(3-(吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
5mL单口瓶中加入6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-4-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，15mg,0.032mmol)，加入K2CO3(18.3mg,0.131mmol)，以及3-(3-溴丙-1-炔基)吡啶(25mg,0.128mmol)，DMF(1.5mL)溶解，室温搅拌反应过夜。加水淬灭反应(9mL)，EA(15mL×2)萃取，有机相饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。硅胶柱层析(洗脱剂纯DCM-DCM:MeOH＝25:1)，得到黄白色固体8.9mg(收率54％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝508.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.68(s,1H),8.53(s,1H),8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.77–7.69(m,2H),7.14(d,J＝2.0Hz,1H),6.83(d,J＝7.7Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),3.85(s,2H),3.80–3.68(m,4H),3.63(s,2H),2.86–2.68(m,4H),1.39(s,6H).HPLC：96.21％。
实施例368：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(3-苯基丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001741
步骤1：3-苯基丙-2-炔-1-醇
50mL的双口瓶依次加入双三苯基磷二氯化钯(209mg,0.294783mmol)，碘化亚铜(112mg,0.58809mmol)，抽真空充氮气，然后加入三乙胺(20mL)，碘苯(1.64mL,14.7mmol)，丙-2-炔-1-醇(1.71mL,29.4mmol)，室温下搅拌12h。反应液过滤，EA(100mL)洗，滤液旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝50：1-20：1)，得到淡黄色油状物1.94g，即为目标化合物(产率：99.8％)，Rf＝0.5(PE:EA＝20:1)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ＝7.47-7.41(m,2H),7.35-7.28(m,3H),4.50(d,J＝3.8Hz,2H),1.96(s,1H)。
步骤2：(3-溴丙-1-炔-1-基)苯
0℃条件下，3-苯基丙-2-炔-1-醇(50mg,0.37833mmol)溶于DCM(4mL)，缓慢加入三溴化磷(0.1mL,1mmol)，保温反应6h。加水淬灭反应，用饱和碳酸钾调至碱性，DCM萃取(20mL)，浓缩至4mL，直接投下一步，产率按100％计算。
步骤3：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(3-苯基丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-4-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，15mg,0.03223mmol)溶解到DMF(1mL)中，加入K2CO3(18mg,0.128940mmol)，再加入含有3-溴丙-1-炔基苯(0.18mg,0.00092mmol)的DCM(1mL)溶液，室温反应过夜。反应液加入水(10mL)，EA(20mL)萃取，有机相水(5mL×2)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3.5)，得黄色固体产物13mg，即为目标产物(产率：79.62％)。LC-MS：m/z＝507.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.37(d,J＝2.4Hz,1H),8.22(s,1H),8.18(d,J＝1.9Hz,1H),7.75(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.47(dd,J＝6.4,2.9Hz,2H),7.37(d,J＝2.3Hz,1H),7.34–7.31(m,2H),7.16(d,J＝1.9Hz,1H),6.81(d,J＝8.9Hz,1H),3.88(s,2H),3.77(s,4H),3.67(s,1H),3.65(s,2H),2.83(s,4H),1.31(s,6H)。HPLC:98.75％。
实施例369：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-苯基丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001751
单口瓶中，把4-[6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)-3-吡啶基]-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15mg,0.03142mmol)和3-苯基丙-2-炔醛(12mg,0.092208mmol)溶于DCE(2mL)中，加入三乙酰氧基硼氢化钠(19mg,0.086959mmol)，室温下搅拌过夜。直接旋干反应液，残渣用硅胶柱层析(洗脱剂DCM:MeOH＝0-100:3.5)纯化，得淡黄色固体8mg(产率：49.10％)，即为目标产物。Rf＝0.5(DCM/MeOH＝10:1)。LC-MS：m/z＝519.2[M+H]+，HPLC：96.76％.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.42(d,J＝2.2Hz,1H),8.24(s,1H),8.18(d,J＝2.0Hz,1H),7.80(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.45(dd,J＝6.6,3.0Hz,2H),7.35–7.29(m,3H),7.18(d,J＝2.1Hz,1H),6.72(d,J＝8.8Hz,1H),3.98(d,J＝5.4Hz,2H),3.93–3.83(m,4H),3.72–3.62(m,2H),3.53(s,2H),2.79-2.76(m,1H),2.29-2.19(m,1H),1.42(s,6H)。
实施例370：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(3-(4-甲氧基苯基)丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001752
步骤1：3-(4-甲氧基苯基)丙-2-炔-1-醇
氮气保护下，在25mL三口瓶中依次加入4-碘苯甲醚(2.5g,11mmol,)，碘化亚铜(0.24g,1.3mmol)，双三苯基膦二氯化钯(0.22g,0.31mmol)，三乙胺(25mL)溶解，在0℃条件下滴加丙炔醇(0.93mL,16mmol)。滴加完毕此温度反应。TLC监控反应完毕后，铺硅藻土过滤，滤饼用EA(50mL)洗涤，过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂：PE/EA＝20：1-10:1)，得黄色固体1.56g，即为目标产品(收率：90.0％，Rf＝0.1(PE/EA＝20/1))。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(d,J＝8.8Hz,2H),6.84(d,J＝8.8Hz,2H),4.48(s,2H),3.81(s,3H)。
步骤2：3-(4-甲氧基苯基)丙-2-炔-1-醛
在50mL单口瓶中依次加入3-(4-甲氧基苯基)丙-2-炔-1-醇(600mg,3.6996mmol,)，戴斯马丁试剂(2.1g,5.0mmol)，碳酸氢钠(1.6g,19mmol)，二氯甲烷溶液(30mL)，室温搅拌过夜。反应液用饱和硫代硫酸钠溶液(50mL)淬灭，静止分层后，分离有机相，水相用DCM(100ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后旋干硅胶柱层析(PE/EA＝15：1)，得黄色液体510mg，即为目标产品(收率：86.067％，Rf＝0.7(PE/EA＝8/1))。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.39(s,1H),7.62–7.52(m,2H),6.92(d,J＝8.9Hz,2H),3.85(s,3H)。
步骤3：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-(3-(4-甲氧基苯基)丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在5mL单口瓶中依次加入6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，15mg,0.0322mmol)，STAB(23mg,0.1085mmol)，DCE(2mL)，3-(4-甲氧基苯基)丙-2-炔-1-醛(25mg,0.156mmol)，室温搅拌过夜。反应液过滤，母液旋干，残余物硅胶柱层析(DCM/MeOH＝50:1-30:1)，得黄色固体10.2mg，即为目标产品。(Rf＝0.15，DCM/MeOH＝50/1)。LC-MS(ES-API):m/z＝537.20[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.3Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝1.9Hz,1H),7.72(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.38(d,J＝8.6Hz,2H),7.14(d,J＝1.9Hz,1H),6.83(d,J＝8.7Hz,2H),6.78(d,J＝8.9Hz,1H),3.86(s,2H),3.80(s,3H),3.76–3.71(m,4H),3.58(s,2H),2.81–2.74(m,4H),1.39(s,6H)。HPLC:93.73％。
实施例371：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(吡啶-4-基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001761
步骤1：3-(吡啶-4-基)丙-2-炔-1-醇
N2保护室温下，4-碘吡啶(1.00g,4.88mmol)、PdCl2(PPh3)2(0.34g,0.48mmol)、CuI(93mg,0.48832mmol)、PPh3(128mg,0.48801mmol)溶于THF(15mL)，加入丙炔醇(0.55g,9.8mmol)和Et3N(0.99g,9.8mmol)，室温搅拌反应5.5h。饱和NH4Cl淬灭反应，EA(10mL×3)萃取，水洗(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，母液浓缩，硅胶柱层析(淋洗液PE/EA＝10/1-3/1)，得黄棕色固体0.52g，即为目标产物。LC-MS：m/z＝134.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(s,2H),7.34–7.27(m,2H),4.53(s,2H)。
步骤2：4-(3-溴丙-1-炔-1-基)吡啶
0℃条件下，3-(4-吡啶基)丙-2-炔-1-醇(100mg,0.75103mmol)溶于二氯甲烷(6mL)，缓慢加入三溴化磷(0.141mL,1.50mmol)，保温反应1h。加水(5mL)淬灭反应，用饱和碳酸钾调至碱性，二氯甲烷(50mL×2)萃取，浓缩至4mL，直接投下一步，产率按100％计算。LC-MS,m/z＝196.1[M+H]+。
步骤3：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(3-(吡啶-4-基)丙-2-炔-1-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
单口瓶中，把4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体3的合成，15mg,0.03142mmol)溶解到N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入碳酸钾(17mg,0.121777mmol)，再加入溶有4-(3-溴丙-1-炔基)吡啶(0.18mg,0.00092mmol)的DCM溶液，室温反应过夜。乙酸乙酯(50mL)萃取，分别用水(5mL×2)和饱和食盐水(5mL)洗，减压旋干过柱(DCM/MeOH＝0-100/3.5)得到淡黄色固体产物(3mg,0.005774mmol),产率：18.38％。Rf＝0.4(DCM/MeOH＝30/1)。LC-MS:m/z＝520.0[M+H]+.HPLC:92.03％.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.54(d,J＝5.7Hz,2H),8.40(s,1H),8.22(s,1H),8.16(s,1H),7.78(d,J＝6.0Hz,1H),7.28(s,2H),7.15(s,1H),6.70(d,J＝8.7Hz,1H),5.34(s,1H),3.94(d,J＝5.7Hz,2H),3.86(d,J＝14.6Hz,4H),3.64(s,4H),3.52(s,2H),1.40(s,6H).
实施例372：4-(6-(4-(3-(5-氟吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001771
步骤1：3-(5-氟吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇
室温下，将3-溴-5-氟吡啶(300mg,1.704mmol)，碘化亚铜(35mg,0.18mmol)，PdCl2(PPh3)2(60mg,0.085mmol)置于25mL双口瓶中，抽真空，氮气保护下加入三乙胺(3mL,21.5mmol)、丙-2-炔-1-醇(0.2mL,3mmol)，在60℃下反应过夜。反应液加入EA(40mL)和饱和氯化铵溶液(20mL)，抽滤，滤饼用EA洗涤(20mL)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝3/1-1/1)，得到淡黄色固体89mg(34.54％)，即为目标产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.51(s,1H),8.41(d,J＝2.6Hz,1H),7.44(d,J＝8.2Hz,1H),4.51(s,2H),2.47(s,1H)。
步骤2：3-(3-溴丙-1-炔-1-基)-5-氟吡啶
0℃下，3-(5-氟吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇(80mg,0.53mmol)溶于DCM(2mL)，缓慢加入PBr3(0.1mL,1mmol)，低温搅拌反应2h。停止反应，加水(10mL)淬灭反应，饱和NaHCO3溶液调至碱性，DCM(20mL×3)萃取，水洗，无水硫酸钠干燥，减压30℃浓缩，得淡黄色浓缩液。不做进一步纯化，直接投下一步反应。
步骤3：4-(6-(4-(3-(5-氟吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
在10mL的单口瓶中依次加入6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，20mg,0.04297mmol)，3-(3-溴丙-1-炔-1-基)-5-氟吡啶(19mg,0.088773mmol)，DMF(2mL)，碳酸钾(0.024g,0.17mmol)，室温下反应过夜。反应液加入EA(20mL)，水(20mL)，分出水相用EA萃取(20mL)，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/0-100/3)，得淡红色固体5mg(收率22.14％)即为目标产物。LC-MS:m/z＝526.3[M+H]；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.49(s,1H),8.40(s,1H),8.35(d,1H),8.20(s,1H),8.15(d,1H),7.73(dd,1H),7.48-7.43(m,1H),7.14(d,1H),6.79(d,1H),3.86(s,2H),3.77-3.72(m,4H),3.69(s,1H),3.64(s,2H),2.81-2.75(m,4H),1.39(s,6H)。HPLC 94.13％。
实施例373：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-羟基-4-(丙-2-炔-1-基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001781
步骤1：4-羟基-4-(3-(三甲基甲硅烷基)丙-2-炔-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
两口瓶中加入CeCl3(2g,8.1146mmol)，氮气保护下注射加入THF(16mL)，室温下搅拌1h备用。另一两口瓶在氮气保护下，注射器依次加入三甲基(丙-1-炔基)硅烷(0.9g,8mmol)，THF(16mL)，降至-78℃后用注射器缓慢加入n-BuLi(3.2mL,8.0mmol,2.5mol/L)，此反应液在-78℃下反应1h备用。1h后，CeCl3溶液在-78℃下缓慢加入到上述反应液中，此混合溶液继续在-78℃下反应1.5h备用。另一两口瓶中加入4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(800mg,4.0151mmol)，氮气保护下注射加入THF(5.8mL)，完全溶解后用注射器缓慢加入到上述混合反应液中，-78℃下反应2h，TLC监控反应。反应完毕后加入饱和氯化铵溶液(20mL)，移除-78℃置于室温下搅拌过夜。加入1M稀盐酸(9.5mL)，EA(16mL)，搅拌5min后硅藻土过滤，滤液分出水相用EA(30ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥后硅胶柱层析，洗脱剂为PE/EA＝100/2-100/6，收集得到白色固体555mg。LC-MS：m/z＝256.2[m+1-Bu]+。1H-NMR(400MHz,MeOD)δ4.46(s,2H),3.80-3.71(m,2H),3.18(s,2H),1.78-1.65(m,4H),1.46(s,9H),0.17(s,9H)。
步骤2：4-羟基-4-(丙-2-炔-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在50ml单口瓶中依次加入4-羟基-4-(3-(三甲基甲硅烷基)丙-2-炔-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(550mg,1.766mmol)，MeOH(18mL)，K2CO3(0.3g,2mmol)，室温下搅拌反应，TLC监控。反应完毕，直接加入适量硅胶旋干柱层析，洗脱剂为PE/EA＝5/1-2/1，收集到产品点旋干得到无色油状液体400mg。
步骤3：4-(丙-2-炔-1-基)哌啶-4-醇盐酸盐
在100ml单口瓶中依次加入4-乙炔基-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg,1.672mmol)，HCl/MeOH(25mL,100mmol,4mol/L)，室温下搅拌过夜。反应液旋干，得淡黄色油状物240mg，无进一步纯化即按理论收率投下一步反应，收率按100％算。Rf＝0.01(PE:EA＝4:1)。
步骤4：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-羟基-4-(丙-2-炔-1-基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈
于10mL微波管中称取4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，25mg,0.07662mmol)，4-(丙-2-炔-1-基)哌啶-4-醇盐酸盐(26mg,0.14801mmol)，加入DMSO(1.5mL)溶解后再加入DIPEA(0.1mL,0.6mmol,100mass％)，微波(温度135℃，压力10bar)反应5h。TLC检测反应完成，往反应液中加入10mL水稀释后再加入EA萃取(30mL×3)，合并有机相，30mL饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥后旋干过柱层析，洗脱剂DCM:MeOH＝100:1-30:1，得淡黄色固体12mg，收率12.10％(反应未优化)。Rf＝0.2(DCM:MeOH＝30:1)。LC-MS:m/z＝446.20[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(d,J＝2.0Hz,1H),8.19(s,1H),8.15(d,J＝1.7Hz,1H),7.70(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.14(d,J＝1.7Hz,1H),6.80(d,J＝8.8Hz,1H),4.11-4.04(m,2H),3.86(s,2H),3.54-3.48(m,2H),2.57(s,1H),2.14(s,2H),2.06-2.03(m,2H),1.88-1.85(m,2H),1.39(s,6H)。HPLC:93.33％。HPLC:93.33％。
实施例374：4-(6-(4-(3-(5-氟吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001791
步骤1：3-(5-氟吡啶-2-基)丙-2-炔-1-醇
50mL的双口瓶依次加入2-溴-5-氟-吡啶(570mg,3.2388mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(114mg,0.160791mmol)，CuI(24mg,0.12602mmol)，抽真空充氮气，然后加入丙-2-炔-1-醇(0.33mL,5.7mmol)和三乙胺(3mL)，室温下搅拌过夜。反应液过滤，EA(100mL)洗，滤液旋干，残渣硅柱层析柱(PE:EA＝50：1-20：1)，得到淡黄色固体435mg，即为目标产物(产率：88.863％)。(RF＝0.2，PE/EA＝5/1)。LC-MS：m/z＝152.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.43(d,J＝2.7Hz,1H),7.46(dd,J＝8.6,4.5Hz,1H),7.39(td,J＝8.2,2.8Hz,1H),4.52(s,2H),2.76(s,1H)。
步骤2：2-(3-溴丙-1-炔-1-基)-5-氟吡啶
0℃条件下，3-(5-氟-2-吡啶基)丙-2-炔-1-醇(120mg,0.79397mmol)溶于二氯甲烷(6mL)，缓慢加入三溴化磷(0.15mL,1.6mmol)，低温反应1h。缓慢加水淬灭反应(20mL)，用饱和碳酸钾调至碱性，DCM(50mL)萃取，浓缩至4mL，直接投下一步，产率按100％计算。
步骤3：4-(6-(4-(3-(5-氟吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
单口瓶中，6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，15mg,0.032mmol)溶解到DMF(0.5mL)中，加入K2CO3(17mg,0.122mmol)，溶有2-(3-溴丙-1-炔基)-5-氟吡啶(0.18mg,0.00084mmol)的DCM溶液，室温反应过夜。反应液加入EA(20mL)萃取，水洗(5mL×3)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压旋干，硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3.5)得淡黄色固体7.0mg，即为目标产物(产率：41.32％)。RF＝0.5(DCM/MeOH＝30/1)。LC-MS:m/z＝526.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.44(d,J＝2.6Hz,1H),8.36(d,J＝2.2Hz,1H),8.22(s,1H),8.18(d,J＝2.0Hz,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.49(dd,J＝8.6,4.4Hz,1H),7.43–7.35(m,2H),7.16(d,J＝2.0Hz,1H),6.80(d,J＝8.9Hz,1H),3.88(s,2H),3.76(s,4H),3.68(s,2H),3.66(s,1H),2.84(s,4H),1.31(s,6H)。HPLC:91.63％。
实施例375：4-(6-(4-(3-(3-(3-氟吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001801
步骤1：3-(3-氟吡啶-2-基)丙-2-炔-1-醇
N2保护下，50mL两口瓶依次加入PdCl2(PPh3)2(180mg,0.26mmol)，CuI(136mg,0.71mmol)，2-溴-3-氟-吡啶(830mg,4.72mmol)，TEA(12mL)，丙炔醇(0.35mL,6.0mmol)加入，60℃油浴加热搅拌反应6h。反应液冷却后，加入水(25mL)，EA萃取(25mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，母液浓缩，硅胶柱层析分离(PE/EA＝1：1为洗脱剂)，得黄白色固体600mg，即为目标产物(收率84％)。LC-MS:(ESI-MS):m/z＝152.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.39(m,1H),7.43(td,J＝8.5,1.0Hz,1H),7.29(m,1H),4.57(d,J＝5.1Hz,2H),2.82(t,J＝5.6Hz,1H)。
步骤2：2-(3-溴丙烷-1-炔-1-基)-3-氟吡啶
25mL单口瓶依次加入3-(3-氟吡啶-2-基)丙-2-炔-1-醇(91mg,0.60mmol)，DCM(6mL)，-10℃低温下加入PBr3(0.11mL,1.2mmol)，20min加完后继续搅拌1.5h。5％K2CO3水溶液(20mL)缓慢加入反应液，水相DCM萃取(30mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，按当量直接投下一步反应。LC-MS:(ESI-MS):m/z＝214.0,216.0[M+H]+。
步骤3：4-(6-(4-(3-(3-(3-氟吡啶-2-基)丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
10mL单口瓶依次加入6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈二盐酸盐(参见中间体7的合成，25mg,0.058mmol)，DMF(2mL)，K2CO3(30mg,0.22mmol)，2-(3-溴丙烷-1-炔-1-基)-3-氟吡啶(60mg,0.28mmol)，rt搅拌反应过夜。反应液加入EA20mL，水洗8mL×3，合并水相，EA15mL萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后，残余物硅胶柱层析分离，DCM/MeOH＝20：1为洗脱剂，得到淡黄色固体13mg。收率42％。LC-MS:(ESI-MS):m/z＝526.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.39(m,1H),8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.72(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.42(td,J＝8.6,1.3Hz,1H),7.28(m,1H),7.14(d,J＝2.0Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),3.86(s,2H),3.75-3.70(m,6H),2.86–2.71(m,4H),1.39(s,6H)。HPLC：91.70％。
实施例376：4-(6-(3-(4-乙炔基苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001811
步骤1：3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
室温下，100mL单口瓶中加入3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.0g,12mmol)，EtOH(20mL)，搅拌下分次加入NaBH4(0.88g,23mmol)。TLC监控反应结束后往反应液中加入饱和氯化铵溶液至不再产生气泡，析出大量白色固体，抽滤，滤饼用乙醇洗涤(10mL)，滤液减压浓缩除去大部分乙醇，加入30mL水，EA萃取(100mL)，合并有机相，水洗(20mL×2)，饱和氯化钠洗(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:5)，得无色油状物2.0g，即为目标产物。LC-MS:m/z＝118.10[M-tBu+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ＝4.53(s,1H),4.13-4.09(m,2H),3.78(dd,J＝9.9,4.1Hz,2H),3.54-3.45(m,1H),1.41(s,9H)。
步骤2：3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下双口瓶中加入3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(500mg,2.89mmol)，DCM(15mL)，NaH(0.14g,5.8mmol)，转移至0℃搅拌下逐滴滴加MsCl(0.25mL,3.2mmol)。加毕继续在此温度下反应。TLC监控反应结束后往反应液中加入水(20mL)DCM(50mL)，分离有机相，水相再用EA萃取(50mL)，合并有机相水洗涤(20mL×2)，饱和氯化钠洗涤(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥后过滤，母液减压浓缩，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:5)，得无色油状物680mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝196.10[M-tBu+H]+，m/z＝152.10[M-Boc+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ＝5.18(tt,J＝6.7,4.2Hz,1H),4.26(ddd,J＝10.3,6.7,1.0Hz,2H),4.11–4.04(m,2H),3.05(s,3H),1.43(s,9H)。
步骤3：3-(4-碘苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
室温下将对碘苯酚(550mg,2.5mmol)溶解于DMF(4mL)，搅拌下加入t-BuOK(320mg,2.85mmol)，搅拌20min后升温至80℃，缓慢滴加溶解于DMF(1.5mL)中的3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(680mg,2.75mmol)，加毕继续保持该温度下搅拌。TLC监控反应结束后将反应液倾倒入水中(20mL)，EA萃取(50mL×2)，合并有机相，水洗(20mL×2)，饱和食盐水洗(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液旋干硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:20-1:10)，得白色固体615mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝319.9[M-56+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.56(d,J＝8.8Hz,2H),6.52(d,J＝8.8Hz,2H),4.83(ddd,J＝10.4,6.3,4.1Hz,1H),4.28(dd,J＝9.6,6.5Hz,2H),3.98(dd,J＝9.7,4.0Hz,2H),1.44(s,9H)。
步骤4：3-(4-碘苯氧基)氮杂环丁烷盐酸盐
室温搅拌下将3-(4-碘苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(615mg,1.64mmol)溶解于HCl/EA(3mL,12mmol,4mol/L)中。TLC监控反应完全后反应液直接减压浓缩，得白色固体510mg，即为目标产物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ＝11.96(s,1H),7.64(d,J＝8.9Hz,2H),6.73(d,J＝8.9Hz,2H),5.11–5.02(m,1H),4.41(dd,J＝12.3,6.6Hz,2H),3.96(dd,J＝12.3,4.7Hz,2H),1.91(s,1H)。
步骤5：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(4-碘苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，向4-(4-氟苯基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，48mg,0.1471mmol)的DMSO(2mL)溶液中加入3-(4-碘苯氧基)氮杂环丁烷盐酸盐(69mg,0.22147mmol)和DIPEA(0.08mL,0.5mmol)，加毕，微波反应10h(100℃，10bar，预热30s)。加入水(10mL)和EA(50mL)，分出有机相饱和食盐水(10mL×3)洗，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3)得到褐色液体产物660mg，即为目标产物(产率70.15％)。LC-MS,m/z:582.2[M+H]+。
步骤6：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(4-(((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
双口瓶中依次加入6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(4-碘苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(60mg,0.1032mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(1.5mg,0.0021mmol)，三乙胺(2mL)和THF(2mL)，抽真空充氮气，搅拌15min后，加入碘化亚铜(1.0mg,0.0053mmol)和乙炔基(三甲基)硅烷(0.05mL,0.4mmol)，室温下搅拌过夜。反应液减压浓缩，硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100：3)，得到棕色液体产物57mg，即为目标产物(产率：68.5％)。(Rf＝0.5，DCM/MeOH＝20/1)。LC-MS,m/z:552.3[M+H]+。
步骤7：4-(6-(3-(4-乙炔基苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
单口瓶，依次加入6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(4-(((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(57mg,0.1033mmol)，碳酸钾(29mg,0.209mmol)，甲醇(3mL)，室温下搅拌3h。反应液直接减压浓缩，硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-10:3)，得到白色固体产物21mg，即为目标产物(产率42.39％)。(Rf＝0.5，DCM/MeOH＝20/1)。LC-MS,m/z:480.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(d,J＝1.9Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝1.9Hz,1H),7.71(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.46(d,J＝8.7Hz,2H),7.14(d,J＝1.9Hz,1H),6.76(d,J＝8.7Hz,2H),6.46(d,J＝8.6Hz,1H),5.19–5.08(m,1H),4.60–4.49(m,2H),4.19(dd,J＝9.3,3.8Hz,2H),3.86(s,2H),3.02(s,1H),2.07(s,1H),1.39(s,6H)。HPLC：95.09％。
实施例377：(R)-4-(6-(3-(4-乙炔基苯氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001821
步骤1：(S)-3-((甲磺酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
双口瓶中，将(3S)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2.00g,10.7mmol)溶于THF(50mL)中，氮气条件下，加入氢化钠(0.856g,21.4mmol,60mass％)，冰浴条件下加入甲磺酰氯(0.911mL,11.8mmol)，室温反应4.5h。加入水(10mL)和EA(100mL)，分离有机相，水相用EA(50mL)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL)洗，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到无色透明液体2.84g，即为目标产物(产率：100％)。(Rf＝0.4，PE/EA＝2/1)。LC-MS:m/z＝210.2[M-tBu+H]+。
步骤2：(R)-3-(4-碘苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
单口瓶，依次加入(S)-3-(甲磺酰基)氧基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(470mg,1.7714mmol)，4-碘苯酚(300mg,1.3636mmol)，碳酸钾(565mg,4.0880mmol)和DMF(6mL)，80℃下搅拌过夜。反应液加入水(10mL)，EA(50mL)萃取，有机相用饱和食盐水洗(10mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，残余物硅胶柱层析(PE/EA＝0-20/1)得无色透明液体产物424mg，即为目标产物(产率：79.89％)。LC-MS,m/z:334.0[M-tBu+H]+。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ＝7.61–7.51(m,2H),6.64(d,J＝8.6Hz,2H),4.83(s,1H),3.65–3.55(m,2H),3.54–3.40(m,2H),2.19–2.05(m,2H),1.46(s,9H)。
步骤3：(R)-3-(4-碘苯氧基)吡咯烷盐酸盐
单口瓶中，把(R)-3-(4-碘苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(434mg,1.115mmol)溶于EA(2mL)，加入4M盐酸EA溶液(5mL,20mmol)，室温下搅拌1h。直接减压浓缩，得到土黄色固体产物363mg，即为目标产物(产率：99.99％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ＝9.39(s,2H),7.63(d,J＝8.8Hz,2H),6.83(d,J＝8.8Hz,2H),5.12(s,1H),3.48–3.40(m,1H),3.31–3.27(m,2H),3.27–3.19(m,1H),2.24–2.05(m,2H)。
步骤4：(R)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(4-碘苯氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，向4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，50mg,0.1532mmol)的DMSO(2mL)溶液中加入(R)-3-(4-碘苯氧基)吡咯烷盐酸盐(55mg,0.16893mmol)和DIPEA(0.08mL,0.5mmol)，加毕，微波反应8h(100℃，10bar，预热30s)。反应完降到室温，加入水(10mL)和EA(50mL)，有机相用饱和食盐水(6mL×3)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3)得到黄色液体产物91mg，即为目标产物(产率：99.74％)。(Rf＝0.4，DCM/MeOH＝20/1)。LC-MS,m/z＝596.7[M+H]+。
步骤5：(R)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(4-(((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈
双口瓶，依次加入(R)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(4-碘苯氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(92mg,0.1545mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(2.2mg,0.0031mmol)，三乙胺(2mL)，抽真空充氮气，注射THF(5mL)，搅拌15min后，加入碘化亚铜(1.5mg,0.0079mmol)和乙炔基(三甲基)硅烷(0.1mL,0.7mmol)，室温下搅拌5h。减压浓缩，硅胶柱层析(DCM/MeOH＝0-100/3)，得到棕色液体产物87.4mg，即为目标产物(产率100％)。(Rf＝0.4，DCM/MeOH＝20/1)。LC-MS：m/z＝566.9[M+H]+。
步骤6：(R)-4-(6-(3-(4-乙炔基苯氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
单口瓶，依次加入(R)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(4-(((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲腈(87mg,0.1538mmol)，碳酸钾(43mg,0.31112mmol)，甲醇(3mL)，室温下搅拌过夜。直接减压浓缩，硅胶柱层析(DCM/MeOH＝0-100/3)，得到黄白色固体46mg，即为目标产物(产率60.60％)。(Rf＝0.4，DCM/MeOH＝20/1)。LC-MS：m/z＝494.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(s,1H),8.20(s,1H),8.15(s,1H),7.71(dd,J＝8.7,2.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.13(s,1H),6.86(d,J＝8.5Hz,2H),6.54(d,J＝8.7Hz,1H),5.10(s,1H),3.96–3.80(m,4H),3.80–3.65(m,2H),3.01(s,1H),2.62(s,1H),2.47–2.26(m,2H),1.39(s,6H).HPLC：94.84％。
实施例378：4-(6-(3-((6-乙炔基-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(N-Boc哌啶-4-甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001841
25mL单口瓶中加入4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体5的合成，100mg,0.244mmol)，碳酸钾(158mg,1.11mmol)，4-(溴甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(280mg,1.00mmol)，DMF(3mL)，油浴90℃过夜反应。反应结束后反应液加水20mL，EA(80mL×2)萃取，有机相水洗(50mL×5)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥后浓缩柱层析，洗脱剂为DCM:MeOH＝50：1，得到白色固体产物142mg。LC-MS：m/z＝606.20[M+H]+，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(d,J＝1.8Hz,1H),8.22(d,J＝2.7Hz,1H),8.19(s,1H),8.11(d,J＝1.8Hz,1H),7.71(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),7.46(d,J＝8.6Hz,1H),7.08-7.06(m,2H),6.47(d,J＝8.6Hz,1H),5.18(s,1H),4.55(dd,J＝9.0,6.6Hz,2H),4.20(dd,J＝9.2,3.7Hz,4H),3.86(d,J＝6.2Hz,2H),3.10(s,1H),2.76(m,2H),2.09-1.98(m,1H),1.85-1.82(m,2H),1.47(s,9H),1.38–1.32(m,2H)。HPLC：98.52％。
实施例379：6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(3-((6-乙炔基-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001842
步骤1：2-(二甲基氨基)乙醇
在25mL单口瓶依次加入二甲胺的四氢呋喃溶液(8mL,16.0mmol,2.0mol/L)，2-氯乙醇(1.3mL,19mmol)，甲苯10mL，120℃加热回流5h。反应结束后反应液缓慢恢复至室温，未做后处理，收率按100％计算，直接用下一步。
步骤2：二甲氨基氯乙烷盐酸盐
在25mL单口瓶依次加入2-(二甲基氨基)乙醇，冰浴条件下缓慢加入二氯亚砜(2.4mL,31mmol)，滴加结束后恢复至室温搅拌过夜。反应结束后，浓缩除去甲苯和二氯亚砜，得到粘稠油状物，加入少量无水乙醇重结晶，析出白色固体，趁热过滤得到白色固体即为目标产物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.27(s,1H),4.02(t,J＝6.8Hz,2H),3.46(t,J＝6.8Hz,2H),2.78(s,6H)。
步骤3：6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(3-((6-乙炔基-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
5mL单口瓶中加入4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体5的合成，20mg,0.049mmol)，碳酸钾(17mg,0.12mmol)，2-氯-N,N-二甲基-乙胺盐酸盐(10mg,0.069mmol)，DMF(0.4mL)，油浴90℃下过夜反应。反应结束后反应液中加入5mL水，EA(15mL×2)萃取，有机相水洗(10mL×5)，无水硫酸钠干燥后过滤，浓缩薄层色谱纯化，得黄色固体5mg，即为目标产物。LC-MS：m/z＝480.75[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(d,J＝2.0Hz,1H),8.24 8.14(m,3H),7.70(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.46(d,J＝8.6Hz,1H),7.14(d,J＝1.9Hz,1H),7.07(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),6.46(d,J＝8.6Hz,1H),5.17(m,1H),4.55(dd,J＝9.2,6.5Hz,2H),4.24 4.15(m,4H),3.10(s,1H),2.90(s,2H),2.44(s,6H)。HPLC：96.71％。
实施例380：6-(2-(1H-咪唑-1-基)乙氧基)-4-(6-(4-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001851
步骤1：4-((6-溴吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
双口瓶，依次加入4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(868mg,4.312mmol)，6-溴吡啶-3-醇(500mg,2.873mmol)，三苯基膦(1000mg,3.736mmol)，抽真空充氮气，加入THF(10mL)，冷却到0℃，缓慢滴加二异丙基偶氮二羧酸酯(0.75mL,3.7mmol)(30min)，室温反应过夜。加入水(10mL)，反应液用EA(150mL)萃取，有机相用饱和食盐水(10mL)洗，母液减压旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)，收集比原料极性小一点的点，得到无色液体产物0.812g，即为目标产物(产率79.1％)。(Rf＝0.4，PE/EA＝4/1)。LC-MS,m/z:301.1[M-tBu]+；303.1[M-tBu+2H]+。
步骤2：4-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下，50mL的双口瓶依次加入4-((6-溴吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.812g,2.27mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(32mg,0.045mmol)，三乙胺(5mL)和THF(5mL)，搅拌15min后，加入CuI(22mg,0.115mmol)和乙炔基(三甲基)硅烷(0.5mL,4mmol)，室温下搅拌2.5h。反应液直接旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)，得到土黄色固体产物0.78g，即为目标产物(产率92％)。(Rf＝0.4，PE/EA＝4/1)。LC-MS，m/z:375.2[M+H]+。
步骤3：4-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
单口瓶，依次加入4-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.78g,2.1mmol)，碳酸钾(557mg,4.0301mmol)，甲醇(10mL)，室温下搅拌1h。反应液过滤，EA(50mL)洗，母液减压旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)，得到淡黄色固体产物0.63g，即为目标产物。(Rf＝0.3，PE/EA＝2/1)。LC-MS：m/z:303.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(d,J＝2.7Hz,1H),7.42(d,J＝8.6Hz,1H),7.15(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),4.53(tt,J＝6.9,3.3Hz,1H),3.76–3.61(m,2H),3.41–3.29(m,2H),3.07(s,1H),2.00–1.86(m,2H),1.80-1.72(m,J＝13.5,7.3Hz,2H),1.47(s,9H)。
步骤4：2-乙炔基-5-(哌啶-4-基氧基)吡啶盐酸盐
单口瓶中，依次加入4-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.63g,2.1mmol)，4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(4mL,16mmol)，室温下搅拌1h(有白色固体析出)。反应液减压旋干得到黄白色固体产物0.41g，即为目标产物(产率82％)。LC-MS：m/z:203.1[M+H]+。
步骤5：6-(2-(1H-咪唑-1-基)乙氧基)-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
10mL单口瓶中加入4-(6-氟-3-吡啶基)-6-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(98mg,0.39mmol)，碳酸钾(123mg,0.86mmol)，1-(2-氯乙基)咪唑(85mg,0.65mmol)，加入DMF使底物溶解，油浴80℃下反应。TLC检测原料反应完毕，反应液冷却至室温，加水10mL，EA(20mL×2)萃取，有机相水洗(10mL×6)，饱和食盐水(10mL×3)洗，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液柱层析，洗脱剂为DCM:MeOH＝100：1 25：1，得到黄色固体66mg。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(s,1H),8.22(s,1H),8.16(d,J＝2.0Hz,1H),8.02-7.96(m,1H),7.64(s,1H),7.13(dd,J＝6.6,4.5Hz,3H),7.09-7.02(m,1H),4.44(t,J＝4.8Hz,2H),4.30(t,J＝4.9Hz,2H)。
步骤6：6-(2-(1H-咪唑-1-基)乙氧基)-4-(6-(4-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲腈
10mL微波管中加入6-(2-(1H-咪唑-1-基)乙氧基)-4-(6-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(30mg,0.086mmol)，2-乙炔基-5-(4-哌啶基氧基)吡啶盐酸盐(25mg,0.10mmol)，DMSO(0.6mL)使其溶解后加入DIPEA(0.06mL,0.4mmol)，110℃下反应5h。补加E(35mg)继续油浴100℃下反应。TLC检测反应结束后，反应液冷却至室温，加水5mL，EA(20mL×2)萃取，有机相水洗(10mL×4)，饱和食盐水(10mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液浓缩硅胶柱层析，洗脱剂为DCM:MeOH＝20:1,得到黄色固体3mg。LC-MS:m/z＝531.20[M+H]+，HPLC：纯度为92.18％，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(dd,J＝4.8,2.6Hz,2H),8.22(s,1H),8.11(d,J＝1.8Hz,1H),7.71(dd,J＝8.8,2.5Hz,2H),7.46(d,J＝8.6Hz,1H),7.21(dd,J＝8.7,2.9Hz,1H),7.15(s,1H),7.09(dd,J＝13.7,2.1Hz,2H),6.83(d,J＝8.8Hz,1H),4.71-4.62(m,1H),4.46(t,J＝4.8Hz,2H),4.31(t,J＝4.8Hz,2H),4.03-3.94(m,2H),3.68-3.61(m,2H),3.10(s,1H),2.12-2.06(m,2H),1.95-1.90(m,2H)。
实施例381：(S)-4-(6-(3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001861
步骤1：(R)-3-((甲磺酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下，双口瓶加入(3R)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2.00g,10.7mmol)，DCM(50mL)，加入NaH(0.856g,21.4mmol)，冰浴条件下加入甲磺酰氯(0.911mL,11.8mmol)，保温反应5.5h。加入水(10mL)和EA(100mL)，水相用EA(50mL)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到无色透明液体产物2.84g，即为目标产物(产率100％)。(碘显色Rf＝0.5，PE/EA＝4/1)。LC-MS，m/z:210.1[M-tBu+H]+。
步骤2：(S)-3-((6-溴吡啶-3-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将6-溴吡啶-3-醇(590mg,3.3908mmol)溶于DMSO(6mL)，搅拌条件下加入叔丁醇钾(580mg,4.39mmol)，搅拌20min后升温至100℃，缓慢滴加溶于DMSO(30mL)的(S)-3-((甲基磺酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.00g,3.77mmol)，100℃条件下反应12h。加入水(10mL)和EA(100mL)，分出有机相用饱和氯化钠(10mL×4)洗，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物硅胶柱层析(PE:EA＝0-100：10)，得白色固体产物0.72g，即为目标产物(产率62％)。(Rf＝0.5，PE/EA＝4/1)。LC-MS：m/z:289.0[M-tBu+2H]+。
步骤3：(S)-3-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下，50mL的双口瓶中，依次加入(3S)-3-[((6-溴-3-吡啶基)氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.72g,2.1mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(30mg,0.0423133mmol)，三乙胺(5mL)和THF(5mL)，搅拌15min后，加入CuI(20mg,0.10502mmol)和乙炔基(三甲基)硅烷(0.59mL,4.2mmol)，室温下搅拌过夜。反应液直接减压浓缩，残余物硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)，得到棕色液体产物341mg，即为目标产物(产率：45％)。(Rf＝0.5，PE/EA＝4/1)。LC-MS，m/z:361.1[M+H]+。
步骤4：(S)-3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
单口瓶中，依次加入(S)-3-((6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(340mg,0.9431mmol)，碳酸钾(261mg,1.8884mmol)，甲醇(3mL)，室温下搅拌0.5h。反应液直接减压浓缩，残余物硅胶柱层析(PE:EA＝0-3：1)，得到淡黄色液体产物272mg，即为目标产物(产率100％)。(Rf＝0.3，PE/EA＝3/1)。LC-MS，m/z:289.5[M+H]+。
步骤5：(S)-2-乙炔基-5-(吡咯烷-3-基氧基)吡啶盐酸盐
单口瓶，依次加入(S)-3-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(272mg,0.9435mmol)，4N盐酸的EA溶液(4mL,16mmol,4mol/L)，室温下搅拌0.5h。减压浓缩得到土黄色固体产物212mg，即为目标产物(产率100％)。LC-MS，m/z:189.2[M+H]+。
步骤6：(S)-4-(6-(3-((6-乙炔基-3-基)氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，向4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，25mg,0.07662mmol)的DMSO(1.5mL)溶液中加入(S)-2-乙炔基-5-(吡咯烷-3-基氧基)吡啶盐酸盐(21mg,0.093462mmol)和DIPEA(0.04mL,0.2mmol)，微波反应5h(130℃，10bar，预热30s)。反应完降到室温，加入水(10mL)和EA(50mL)，有机相用饱和食盐水(6mL×3)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3)得白色固体产物12mg，即为目标产物(产率31.36％)。(Rf＝0.4，DCM/MeOH＝20/1)。LC-MS，m/z:495.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.34(s,1H),8.30(s,1H),8.20(s,1H),8.16(d,J＝1.8Hz,1H),7.75(dd,J＝8.4,1.8Hz,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H),7.19(dd,J＝8.6,2.8Hz,1H),7.15(d,J＝1.8Hz,1H),6.58(d,J＝8.7Hz,1H),5.15(s,1H),3.92(s,2H),3.86(s,2H),3.81–3.71(m,2H),3.65(s,1H),3.09(s,1H),2.44–2.32(m,2H),1.39(s,6H)。HPLC：91.10％。
实施例382：(S)-4-(6-(3-(4-乙炔基苯氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001881
步骤1：(R)-3-((甲磺酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
双口瓶中，将(3R)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2.00g,10.7mmol)溶于THF(50mL)中，氮气条件下，加入氢化钠(0.856g,21.4mmol,60mass％)(有大量气泡产生)，冰浴条件下加入甲磺酰氯(0.911mL,11.8mmol)，室温反应4.5h(反应液有白色固体悬浮液)。加入水(10mL)和EA(100mL)，分离有机相，水相用EA(50mL)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到无色透明液体产物2.84g，即为目标产物(产率：100％)。(Rf＝0.4，PE/EA＝2/1)。LC-MS,m/z＝210.2[M-tBu+H]+。
步骤2：(S)-3-(4-碘苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
单口瓶中，依次加入(R)-3-((甲磺酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(470mg,1.7714mmol)，4-碘苯酚(300mg,1.3636mmol)，碳酸钾(565mg,4.0880mmol)和DMF(6mL)，80℃下搅拌过夜。反应液加入水(10mL)，EA(100mL)萃取，有机相用饱和食盐水洗(10mL×2)，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析(PE/EA＝0-20/1)得到无色透明液体产物424mg，即为目标产物(产率：61.50％)。LC-MS,m/z:334.0[M-tBu+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.56(d,J＝8.3Hz,2H),6.64(d,J＝8.8Hz,2H),4.83(s,1H),3.66–3.55(m,2H),3.55–3.41(m,2H),2.21–2.06(m,2H),1.46(s,9H).
步骤3：(S)-3-(4-碘苯氧基)吡咯烷盐酸盐
单口瓶中，把(S)-3-(4-碘苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(434mg,1.115mmol)溶于EA(2mL)，加入4M盐酸EA溶液(5mL,20mmol,4mol/L)，室温下搅拌2.5h。直接减压浓缩，得到白色固体产物320mg，即为目标产物(产率：88.14％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ＝9.64–9.06(m,2H),7.63(d,J＝8.8Hz,2H),6.83(d,J＝8.8Hz,2H),5.12(s,1H),3.48–3.40(m,1H),3.31–3.26(m,2H),3.26–3.18(m,1H),2.25–2.03(m,2H)。
步骤4：(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(4-碘苯氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，向4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，50mg,0.1532mmol)的DMSO(2mL)溶液中加入(3S)-3-(4-碘苯氧基)吡咯烷盐酸盐(55mg,0.16893mmol)和DIPEA(0.08mL,0.5mmol)，加毕，微波反应8h(100℃，10bar，预热30s)。反应完降到室温。加入水(10mL)和EA(100mL)，有机相用饱和食盐水(6mL×3)洗，减压浓缩，硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3)得到淡棕色液体产物91mg，即为目标产物(产率：99.74％)。(Rf＝0.4，DCM/MeOH＝20/1)。LC-MS,m/z＝596.0[M+H]+。
步骤5：(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(4-(((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
双口瓶，依次加入(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(4-碘苯氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(92mg,0.1545mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(2.2mg,0.0031mmol)，三乙胺(2mL)和THF(5mL)，抽真空充氮气，搅拌15min后，加入碘化亚铜(1.5mg,0.0079mmol)和乙炔基(三甲基)硅烷(0.1mL,0.7mmol)，室温下搅拌过夜。减压浓缩，硅胶柱层析(DCM/MeOH＝0-100/3)，得到棕色液体产物87.4mg，即为目标产物(产率100％)。(Rf＝0.4，DCM/MeOH＝20/1)。LC-MS,m/z＝566.2[M+H]+。
步骤6：(S)-4-(6-(3-(4-乙炔基苯氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
单口瓶，依次加入(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(4-(((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(87mg,0.1538mmol)，碳酸钾(43mg,0.31112mmol)，甲醇(3mL)，室温下搅拌过夜。直接减压浓缩，硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/0-100/3)，得到黄白色固体产物40mg，即为目标产物(产率52.69％)。(Rf＝0.4，DCM/MeOH＝20/1)。LC-MS,m/z＝494.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.33(s,1H),8.20(s,1H),8.15(s,1H),7.73(d,J＝8.4Hz,1H),7.44(d,J＝8.7Hz,2H),7.14(s,1H),6.86(d,J＝8.7Hz,2H),6.56(d,J＝8.7Hz,1H),5.10(s,1H),3.94–3.86(m,2H),3.86(s,2H),3.82–3.63(m,3H),3.01(s,1H),2.45–2.30(m,2H),1.39(s,6H).HPLC：95.88％。
实施例383：4-(6-(5-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001891
步骤1：5-羟基六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-1甲酸叔丁酯
冰水浴下，LiAlH4(0.35g,9.2mmol)缓慢加入到无水THF(15mL)，低温搅拌15min后，缓慢加入5-氧代六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(1.03g,4.57mmol)，自然升至室温搅拌反应2h。饱和Na2SO4溶液淬灭反应，抽滤，浓缩，得棕黄色粘稠液体0.89g，产率86％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.34-4.23(m,1H),3.54-3.45(m,2H),3.38-3.28(m,2H),2.81-2.64(m,1H),2.62-2.52(m,2H),2.20-2.12(m,2H),1.75-1.57(m,1H),1.45(s,9H)。
步骤2：5-((甲磺酰基)氧基)六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯
冰水浴，-2(1H)5-羟基六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-1甲酸叔丁酯(0.50g,2.2mmol)溶于DCM(20mL)，缓慢加入NaH(0.18g,4.5mmol,60mass％)，搅拌10min，缓慢加入甲基磺酰氯(0.2mL,3mmol)，自然升至室温搅拌反应3h。缓慢加水淬灭反应，DCM(20mL×3)萃取，水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱层析，淋洗液PE/EA＝10/1-5/1，得无色粘稠液体0.48g，产率71％。
步骤3：5-(4-溴苯氧基)六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯
单口瓶，依次加入5-((甲磺酰基)氧基)六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(100mg,0.3274mmol)，6-溴吡啶-3-醇(56mg,0.32184mmol)，碳酸钾(136mg,0.98401mmol)和DMF(2mL)，于80℃条件下搅拌1天。反应液加入水(5mL)和EA(150mL)，分离有机相，有机相用饱和食盐水(5mL×3)洗，减压浓缩，硅胶柱层析(PE/EA＝0-2：1)，得到无色透明液体116mg，即为目标产物(产率92.67％)。(Rf＝0.5，PE/EA＝2/1)。MS:m/z＝383.5[M]+，385.5[M+H]+。
步骤4：5-(4-(((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯氧基)六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯
取一个50mL的双口瓶，依次加入5-(4-溴苯氧基)六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(0.116g,0.303mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(4.3mg,0.0061mmol)，三乙胺(2mL)和THF(2mL)，抽真空充氮气，搅拌15min后，加入碘化亚铜(3mg,0.015752mmol)和乙炔基(三甲基)硅烷(0.07mL,0.5mmol)，室温下搅拌过夜。反应液减压浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)，得到土黄色固体产物83mg，即为目标产物(产率68.5％)。(Rf＝0.5，PE/EA＝4/1)。LC-MS:m/z＝401.7[M+H]+。
步骤5：5-(4-乙炔基苯氧基)六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯
单口瓶中依次加入5-(4-(((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯氧基)六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(83mg,0.2077mmol)，碳酸钾(60mg,0.43412mmol)，甲醇(4mL)，室温下搅拌2h。反应液过滤，EA(50mL)洗，母液减压浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)得到淡黄色液体产物11mg，即为目标产物(产率16.18％)。(Rf＝0.3，PE/EA＝2/1)。
步骤6：5-(4-乙炔基苯氧基)八氢环戊烯并[c]吡咯盐酸盐
单口瓶中依次加入5-(4-乙炔基苯氧基)六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(11mg,0.03360mmol)，4N盐酸的1,4-二氧六环溶液(3mL,12mmol,4mol/L)，室温下搅拌。TLC检测反应完毕，反应液减压浓缩，得到黄白色固体产物8.8mg，即为目标产物(产率100％)。
步骤7：4-(6-(5-((6-乙炔基吡啶-3-基)氧基)六氢环戊烯并[c]吡咯-2(1H)-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，向4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，26mg,0.07968mmol)的DMSO(1.5mL)溶液中加入5-(4-乙炔基苯氧基)八氢环戊[c]吡咯盐酸盐(26mg,0.09819mmol)和DIPEA(0.5mL,3mmol)，微波反应5h(150℃，5bar，预热30s)。反应完降到室温。反应液加入EA(50mL)，水(10mL×3)洗，母液减压浓缩，硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3)，得黄白色固体2mg，即为目标产物(产率：5.0％)。(Rf＝0.4，DCM/MeOH＝20/1)。LC-MS,535.2[M+H]+。
实施例384：4-(6-(3-((5-乙炔基吡啶-2-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001911
步骤1：3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
室温下，100mL单口瓶中加入3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.0g,12mmol)，EtOH(20mL)，搅拌下分次加入NaBH4(0.88g,23mmol)，室温搅拌反应。TLC监控反应结束后往反应液中加入饱和氯化铵溶液至不再产生气泡，抽滤，滤饼用乙醇洗涤(10mL)，滤液减压浓缩除去大部分乙醇，加入30mL水，EA萃取(100mL×2)，合并有机相，水洗(20mL×2)，饱和氯化钠洗(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩，残余物硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:5)，得无色油状物2.0g，即为目标产物。LC-MS:m/z＝118.10[M-tBu+H]+，1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ4.53(s,1H),4.13-4.09(m,2H),3.78(dd,J＝9.9,4.1Hz,2H),3.54-3.45(m,1H),1.41(s,9H)。
步骤2：3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
氮气保护下双口瓶中加入3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(500mg,2.89mmol)，DCM(15mL)，NaH(0.14g,5.8mmol)，转移至0℃搅拌下逐滴滴加MsCl(0.25mL,3.2mmol)。加毕继续在此温度下反应。TLC监控反应结束后往反应液中加入水(20mL)淬灭，加入DCM(50mL)，分离有机相，水相再用DCM萃取(50mL)，合并有机相水洗涤(20mL×2)，饱和氯化钠洗涤(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥后过滤，母液减压浓缩，硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:5)，得无色油状物680mg即为目标产物。LC-MS:m/z＝196.10[M-tBu+H]+，m/z＝152.10[M-Boc+H]+；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ5.18(tt,J＝6.7,4.2Hz,1H),4.26(ddd,J＝10.3,6.7,1.0Hz,2H),4.11-4.04(m,2H),3.05(s,3H),1.43(s,9H)。
步骤3：3-((5-碘吡啶-2-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
25mL单口瓶中加入3-甲基磺酰氧基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(410mg,1.63mmol)，5-碘-2-醇吡啶(300mg,1.36mmol)，叔丁醇钾(195mg,1.65mmol)，加入DMF(5mL)使其溶解，油浴100℃下反应。TLC检测反应结束后反应液加水10mL，EA(40mL×2)萃取，有机相水洗(15mL×6)，饱和食盐水洗(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液硅胶柱层析，洗脱剂为PE:EA＝10:1，得到白色固体283mg即为产物。LC-MS：m/z＝377.10[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(d,J＝1.9Hz,1H),7.82(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),6.62(d,J＝8.7Hz,1H),5.26(tt,J＝6.6,4.3Hz,1H),4.344.24(m,2H),3.95(dd,J＝10.0,4.1Hz,2H),1.44(s,9H)。
步骤4：3-((5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-2-基)氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
50mL双口瓶中加入3-((5-碘吡啶-2-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(283mg,0.75mmol)，Pd(PPh3)Cl2(15mg,0.021mmol)，三乙胺(1.5mL,11.0mmol)，THF(8mL)，置换氮气后加入碘化亚铜(40mg,0.21mmol)，三甲基氯硅烷(1.5mL,11.0mmol)，室温下反应。TLC检测反应结束后反应液直接浓缩，残余物硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝10:1)，得到无色透明液体250mg，即为目标产物。LC-MS：m/z＝347.20[M+H]+。
步骤5：3-((5-乙炔基吡啶-2-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
25mL单口瓶中加入3-((5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-2-基)氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(250mg,0.72mmol)，加入甲醇(3mL)使其溶解，室温下加入K2CO3(300mg,2.17mmol)，室温下反应。TLC检测反应结束后反应液直接浓缩，残余物硅胶柱层析(洗脱剂为PE:EA＝20:1)，得到淡黄色固体146mg即为目标产物。LC-MS：m/z＝275.20[M+H]+。
步骤6：2-(氮杂环丁烷-3-氧基)-5-乙炔基吡啶盐酸盐
25mL单口瓶中加入3-((5-乙炔基吡啶-2-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(146mg,0.53mmol)，搅拌状态下加入HCl/EA(5mL，4N)，室温下搅拌反应。TLC检测原料反应结束后反应液旋干溶剂，真空干燥箱中60℃烘干，得类白色固体112mg即为产物。LC-MS：m/z＝211.20[M+H]+；m/z＝175.20[M+H-HCl]+。
步骤7：4-(6-(3-((5-乙炔基吡啶-2-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
10mL微波管中加入4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，30mg,0.092mmol)，2-(氮杂环丁烷-3-氧基)-5-乙炔基吡啶盐酸盐(85mg,0.40mmol)，DIPEA(0.1mL,0.6mmol)，DMSO(0.6mL)，110℃下反应12h。TLC检测反应结束后反应液加水10mL，EA(25mL×2)萃取，合并有机相水洗(5mL×3)，饱和食盐水洗(5mL×2)，无水硫酸钠干燥后过滤，滤液浓缩硅胶柱层析(洗脱剂为PE:EA＝50:1)，得黄色固体5mg即为产物。LC-MS：m/z＝481.20[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(d,J＝9.2Hz,2H),8.19(s,1H),8.15(s,1H),7.69(d,J＝8.6Hz,2H),7.13(d,J＝1.8Hz,1H),6.77(d,J＝8.6Hz,1H),6.44(d,J＝8.6Hz,1H),5.61-5.53(s,1H),4.58-4.50(m,2H),4.15(dd,J＝9.4,4.0Hz,2H),3.86(s,2H),3.13(s,1H),1.39(s,6H)。HPLC：纯度90.41％。
实施例385：4-(6-(3-(4-乙炔基-3-氟苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001921
步骤1：3-(3-氟-4-碘-苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
10mL单口瓶中加入3-氟-4-碘-苯酚(400mg,1.681mmol)，3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(507mg,2.018mmol),t-BuOK(377.2mg,3.361mmol)，后加入DMF(6mL)溶解，油浴锅100℃加热反应过夜。TLC显示反应完毕，加水25ml，EA(50mL×2)萃取，有机相饱和食盐水30ml洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，硅胶柱层析(纯PE-PE:EA＝10：1)，得到白色晶状固体(收率69％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝338.00[M-56+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.60(dd,J＝8.6,7.4Hz,1H),6.50(dd,J＝9.4,2.7Hz,1H),6.36(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),4.83(qd,J＝6.4,4.1Hz,1H),4.29(dd,J＝9.6,6.8Hz,2H),3.98(dd,J＝9.9,3.8Hz,2H),1.45(s,9H)。
步骤2：3-(3-氟-4-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
25mL双口瓶中，加入3-(3-氟-4-碘-苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(450mg,1.144mmol)，CuI(22mg,0.116mmol)，PdCl2(PPh3)2(41mg,0.058mmol)，氮气保护下抽真空多次，后加入无水THF(4.5mL)，TEA(4.5mL,32mmol)，溶解后加入乙炔基(三甲基)硅烷(0.323mL,2.29mmol)，室温搅拌反应过夜。TLC显示反应完毕，在抽滤漏斗中加入硅藻土，抽滤，EA60mL多次洗涤滤饼，滤液饱和食盐水20mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝100:1-10:1)，得到棕色固体0.398g(收率95.7％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝308.10[M-56+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(t,J＝8.5Hz,1H),6.51–6.41(m,2H),4.88–4.81(m,1H),4.29(dd,J＝9.6,6.7Hz,2H),3.98(dd,J＝9.9,3.9Hz,2H),1.45(s,9H),0.25(s,9H)。
步骤3：3-(4-乙炔基-3-氟苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
在10mL的单口瓶中，依次加入3-(3-氟-4-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(400mg,1.100mmol)、K2CO3(305mg,2.207mmol)和MeOH(3mL)，室温搅拌反应过夜。TLC显示反应完毕，滴加饱和氯化铵10mL淬灭反应，浓缩部分甲醇，用EA(30mL×2)萃取，有机相饱和食盐水15mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干。硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝100:1-5:1)，得到白色固体0.364g(收率82.3％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝236.10[M-56+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39(t,J＝8.4Hz,1H),6.51–6.45(m,2H),4.89–4.82(m,1H),4.30(dd,J＝9.4,6.8Hz,2H),3.99(dd,J＝9.9,3.7Hz,2H),3.23(s,1H),1.45(s,9H)。
步骤4：3-(4-乙炔基-3-氟-苯氧基)氮杂环丁烷盐酸盐
10mL单口瓶中，加入3-(4-乙炔基-3-氟苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(254mg,0.872mmol)，盐酸乙酸乙酯溶液(6mL,24mmol,4mol/L)，置于室温搅拌反应1h。TLC显示反应完毕，将反应液直接旋干，抽干，置于烘箱60℃烘干，得到理论量的黄白色固体。LC-MS(ES-API):m/z＝192.15[M+H]+。
步骤5：4-(6-(3-(4-乙炔基-3-氟苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
10mL单口瓶中，依次加入4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，30mg,0.092mmol)，3-(4-乙炔基-3-氟-苯氧基)氮杂环丁烷盐酸盐(63mg,0.277mmol)，加入DMAC(1.4mL,15mmol)溶解，再加入三乙胺(0.08mL,0.6mmol)，DMAP(1.2mg,0.01mmol)，置于油浴锅中90℃加热反应过夜。TLC显示反应完毕，反应液冷却至室温，加水15mL洗涤，EA(30mL×3)萃取，有机相饱和食盐水30mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，硅胶柱层析(洗脱剂纯DCM-DCM:MeOH＝10:1)，得到白色固体0.02g(收率40％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝498.50[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(d,J＝1.8Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝1.9Hz,1H),7.71(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.42(t,J＝8.4Hz,1H),7.14(d,J＝1.9Hz,1H),6.60–6.53(m,2H),6.46(d,J＝8.5Hz,1H),5.14–5.08(m,1H),4.54(dd,J＝9.0,6.7Hz,2H),4.18(dd,J＝9.4,3.7Hz,2H),3.86(s,2H),3.24(s,1H),1.39(s,6H)。HPLC：89.77％。
实施例386：4-(6-(3-(4-乙炔基-3-氟-苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)-吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001941
步骤1：3-(3-氟-4-碘-苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
10mL单口瓶中加入3-氟-4-碘苯酚(400mg,1.681mmol)，3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯507mg,2.018mmol),t-BuOK(377.2mg,3.361mmol)，后加入DMF(6mL)溶解，油浴锅100℃加热反应过夜。TLC显示反应完毕，加水25ml，EA(50mL×2)萃取，有机相饱和食盐水30ml洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，硅胶柱层析(纯PE-PE:EA＝10：1)，得到得到白色晶状固体(收率69％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝338.00[M-56+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.60(dd,J＝8.6,7.4Hz,1H),6.50(dd,J＝9.4,2.7Hz,1H),6.36(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),4.83(qd,J＝6.4,4.1Hz,1H),4.29(dd,J＝9.6,6.8Hz,2H),3.98(dd,J＝9.9,3.8Hz,2H),1.45(s,9H)。
步骤2：3-(3-氟-4-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
25mL双口瓶中，加入3-(3-氟-4-碘-苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(450mg,1.144mmol)，CuI(22mg,0.116mmol)，PdCl2(PPh3)2(41mg,0.058mmol)，氮气保护下抽真空多次，后加入无水THF(4.5mL)，TEA(4.5mL,32mmol)，溶解后加入乙炔基(三甲基)硅烷(0.323mL,2.29mmol)，室温搅拌反应过夜。TLC显示反应完毕，在抽滤漏斗中加入硅藻土，抽滤，EA60mL多次洗涤滤饼，滤液饱和食盐水20mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝100:1-10:1)，得到棕色固体0.398g(收率95.7％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝308.10[M-56+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(t,J＝8.5Hz,1H),6.51–6.41(m,2H),4.88–4.81(m,1H),4.29(dd,J＝9.6,6.7Hz,2H),3.98(dd,J＝9.9,3.9Hz,2H),1.45(s,9H),0.25(s,9H)。
步骤3：3-(4-乙炔基-3-氟苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
在10mL的单口瓶中，依次加入3-(3-氟-4-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(400mg,1.100mmol)、K2CO3(305mg,2.207mmol)和MeOH(3mL)，室温搅拌反应过夜。TLC显示反应完毕，滴加饱和氯化铵10mL淬灭反应，浓缩部分甲醇，用EA(30mL×2)萃取，有机相饱和食盐水15mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干。硅胶柱层析(洗脱剂PE:EA＝100:1-5:1)，得到白色固体0.364g(收率82.3％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝236.10[M-56+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39(t,J＝8.4Hz,1H),6.51–6.45(m,2H),4.89–4.82(m,1H),4.30(dd,J＝9.4,6.8Hz,2H),3.99(dd,J＝9.9,3.7Hz,2H),3.23(s,1H),1.45(s,9H)。
步骤4：3-(4-乙炔基-3-氟-苯氧基)氮杂环丁烷盐酸盐
10mL单口瓶中，加入3-(4-乙炔基-3-氟苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(254mg,0.872mmol)，盐酸乙酸乙酯溶液(6mL,24mmol,4mol/L)，置于室温搅拌反应1h。TLC显示反应完毕，将反应液直接旋干，抽干，得到黄白色固体，置于烘箱60℃烘干。得到理论量的黄白色固体。LC-MS(ES-API):m/z＝192.15[M+H]+。
步骤5：4-(6-(3-(4-乙炔基-3-氟-苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
10mL单口瓶中，依次加入4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，30mg,0.092mmol)，3-(4-乙炔基-3-氟-苯氧基)氮杂环丁烷盐酸盐(63mg,0.277mmol)，加入DMAC(1.4mL,15mmol)溶解，再加入三乙胺(0.08mL,0.6mmol)，DMAP(1.2mg,0.01mmol)，置于油浴锅中90℃加热反应过夜。TLC显示反应完毕，反应液冷却至室温，加水15mL洗涤，EA(30mL×3)萃取，有机相饱和食盐水30mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，硅胶柱层析(洗脱剂纯DCM-DCM:MeOH＝10:1)，得到白色固体0.02g(收率40％)，即为目标产物。LC-MS(ES-API):m/z＝498.50[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(d,J＝1.8Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝1.9Hz,1H),7.71(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.42(t,J＝8.4Hz,1H),7.14(d,J＝1.9Hz,1H),6.60–6.53(m,2H),6.46(d,J＝8.5Hz,1H),5.14–5.08(m,1H),4.54(dd,J＝9.0,6.7Hz,2H),4.18(dd,J＝9.4,3.7Hz,2H),3.86(s,2H),3.24(s,1H),1.39(s,6H)。HPLC：89.77％。
实施例387：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-((6-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001951
:步骤1：3-((6-溴吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
室温下将6-溴吡啶-3-醇(200mg,1.15mmol)溶解于DMSO(4mL)，搅拌下加入t-BuOK(168mg,1.5mmol)，搅拌20min后升温至80℃，缓慢滴加溶解于DMSO(2mL)中的3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(347mg,1.4mmol)，加毕继续保持该温度下搅拌。反应结束后将反应液倾倒入20mL水中，50mLEA萃取两次，合并有机相，水洗(20mL×2)，饱和食盐水洗(20mL)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩残余物硅胶柱层析(洗脱剂EA:PE＝1:20-1:10)，得淡黄色固体320mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝329.05[M+H]+。
步骤2：3-(((6-(丙炔基)吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
50mL双口瓶，依次加入3-[((6-溴-3-吡啶基)氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(0.573g,1.74mmol)，PdCl2(PPh3)2(25mg,0.0352611mmol)，三乙胺(2mL)和THF(2mL)，抽真空充氮气，搅拌15min后，加入碘化亚铜(17mg,0.089263mmol)和丙炔(3.5mL,3.5mmol,1mol/L)，50℃下搅拌反应。TLC检测反应完毕后反应液直接减压旋干，残余物硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)，得淡棕色固体产物326mg，即为目标产物(产率：65.0％)。LC-MS:m/z＝289.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(d,J＝2.7Hz,1H),7.32(d,J＝8.6Hz,1H),6.99(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),4.99–4.89(m,1H),4.33(dd,J＝9.8,6.6Hz,2H),4.03(dd,J＝9.9,3.7Hz,2H),2.08(s,3H),1.47(s,9H)。
步骤3：5-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-(丙-1-炔-1-基)吡啶盐酸盐
单口瓶中依次加入3-[((6-丙-1-炔基-3-吡啶基)氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(326mg,1.131mmol)和4N盐酸的EA溶液(4mL,16mmol)，室温下搅拌1h。反应液减压旋干得到黄白色固体产物254mg，即为目标产物(产率99.97％)。LC-MS：m/z＝189.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.56(s,1H),9.46(s,1H),8.21(d,J＝2.8Hz,1H),7.45(d,J＝8.6Hz,1H),7.34(dd,J＝8.7,3.0Hz,1H),5.18(dd,J＝10.8,5.7Hz,1H),4.43(td,J＝11.7,6.4Hz,2H),4.06–3.95(m,2H),2.05(s,3H)。
步骤4：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-((6-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，向4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，50mg,0.153mmol)的DMSO(2mL)溶液中加入5-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-丙-1-炔基-吡啶盐酸盐(45mg,0.200mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.1mL,0.6mmol)，加毕，微波反应5h(130℃，10bar)。反应液降到室温，加入水(30mL)和EA(100mL)，有机相用饱和食盐水(20mL×3)洗，减压浓缩，残余物硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3)，得黄色固体30mg，即为目标产物(产率39.59％)。LC-MS：m/z:495.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝1.7Hz,1H),8.22(s,1H),8.18(d,J＝1.6Hz,2H),7.74(dd,J＝8.5,2.0Hz,1H),7.35(d,J＝8.8Hz,1H),7.17(d,J＝1.6Hz,1H),7.07(dd,J＝8.6,2.7Hz,1H),6.50(d,J＝8.6Hz,1H),5.23–5.13(m,1H),4.58(dd,J＝8.8,6.7Hz,2H),4.23(dd,J＝9.2,3.6Hz,2H),3.88(s,2H),3.68(s,1H),2.09(s,3H),1.41(s,6H)。HPLC：89.36％。
实施例388：4-(6-(3-((2-乙炔基吡啶-4-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001961
:步骤1：3-((2-溴-4-吡啶基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
25mL单口瓶中加入2-溴吡啶-4-醇(1g,5.74mmol)，3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.74g,6.92mmol)，叔丁基钾(815mg,6.90mmol)，DMF(10mL)，油浴100℃下反应过夜。反应液冷却至室温，加水50mL，EA(150mL×2)萃取，合并有机相水洗(50mL×4)，饱和食盐水洗(50mL×2)，无水硫酸钠干燥后过滤，滤液浓缩后硅胶柱层析(洗脱剂为PE:EA＝4:1)，得无色液体490mg，即为产物。
步骤2：4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-溴吡啶盐酸盐
单口瓶，依次加入3-((2-溴-4-吡啶基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(140mg,0.425mmol)和盐酸EA溶液(4mL,16mmol,4mol/L)，室温下搅拌1h。直接过滤得到白色固体产物113mg，即为目标产物(99.98％)。MS，m/z＝228.9[M+H]+,231.0[M+2H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.54(s,1H),9.45(s,1H),8.24(d,J＝5.7Hz,1H),7.21(d,J＝2.2Hz,1H),7.02(dd,J＝5.7,2.3Hz,1H),5.28–5.19(m,1H),4.53–4.40(m,2H),4.00–3.94(m,2H)。
步骤3：4-(6-(3-((2-溴吡啶-4-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
室温下，反应瓶中依次加入4-(6-氟-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(参见中间体2的合成，53mg,0.1624mmol)，4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-溴吡啶盐酸盐(65mg,0.24478mmol)，碳酸钾(45mg,0.32559mmol)，DMAP(2mg,0.016371mmol)和DMSO(2mL)，90℃条件下搅拌过夜。加入水(20mL)和EA(200mL)，有机相用饱和食盐水(30mL×3)洗，减压浓缩，硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3)得到黄色固体产物87mg，即为目标产物(产率100％)。MS(ESI,pos.ion)m/z＝535.7[M]+，537.7[M+2H]+。
步骤4：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-((2-(((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-4-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
50mL双口瓶，依次加入4-(6-(3-((2-溴-4-吡啶基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)-3-吡啶基)-6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(87mg,0.1625mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(2.3mg,0.0032mmol)，三乙胺(4mL)和THF(4mL)，抽真空充氮气，搅拌15min后，加入碘化亚铜(2mg,0.010502mmol)和乙炔基(三甲基)硅烷(0.1mL,0.7mmol)，室温下搅拌过夜。反应液减压旋干，残余物硅胶柱层析(PE:EA＝0-5：1)，得棕色液体产物89.8mg，即为目标产物(产率100％)。LC-MS：m/z＝554.2[M+H]+。
步骤5：4-(6-(3-((2-乙炔基吡啶-4-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
单口瓶，依次加入6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-((2-(((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-4-基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(60mg,0.1086mmol)，碳酸钾(30mg,0.21706mmol)，甲醇(5mL)，室温下搅拌5h。反应液直接减压旋干，残余物硅胶柱层析(DCM:MeOH＝0-100:3)得到白色固体产物28mg，即为目标产物。LC-MS：m/z＝481.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.46(d,J＝5.7Hz,1H),8.34(d,J＝1.9Hz,1H),8.22(s,1H),8.18(d,J＝1.9Hz,1H),7.75(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.17(d,J＝1.9Hz,1H),6.95(d,J＝2.2Hz,1H),6.76(dd,J＝5.7,2.4Hz,1H),6.50(d,J＝8.6Hz,1H),5.23–5.16(m,1H),4.60(dd,2H),4.23(dd,J＝9.3,3.6Hz,2H),3.89(s,2H),3.51(s,1H),3.18(s,1H),1.42(s,6H)。HPLC：92.92％。
实施例389：4-(6-(4-(((3-乙炔基苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0002307183200001971
步骤1：4-(6-(4-((3-溴苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
5mL单口瓶中加入6-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-4-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈盐酸盐(参见中间体4的合成，72mg,0.15mmol)，碳酸钾(100mg,0.72mmol)，加入DMF(1mL)使其溶解，加入3-溴苯磺酰氯(0.1mL,0.75mmol)。油浴60℃下反应。TLC检测反应结束后反应液中加水5mL，EA(20mL×2)萃取，有机相水洗(5mL×3)，饱和食盐水洗(5mL×2)，无水硫酸钠干燥后过滤，滤液浓缩，残余物硅胶柱层析(洗脱剂为PE:EA＝1:1-EA)，得到黄色固体35mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝612.10[M+H]+。
步骤2：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((3-(((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
10mL双口瓶中加入Pd(PPh3)2Cl2(12mg,0.017mmol)，置换氮气后加入溶于THF(2mL)的4-(6-(4-((3-溴苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(35mg,0.057mmol)，三乙胺(0.1mL,0.7mmol)，搅拌状态下加入碘化亚铜(6mg,0.03mmol)，乙炔基三甲基硅烷(0.1mL,0.7mmol)，加入完毕后油浴40℃下反应。TLC检测反应结束后反应液直接浓缩，残余物硅胶柱层析(洗脱剂为PE:EA＝1:1-EA)，得到黄色固体15mg即为目标产物。LC-MS:m/z＝629.20[M+H]+。
步骤3：4-(6-(4-(((3-乙炔基苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈
5mL单口瓶中加入6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((3-(((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(15mg,0.024mmol)，加入甲醇使其溶解，加入碳酸钾(12mg,0.087mmol)，室温下反应。TLC检测反应结束后反应液直接浓缩，残余物硅胶柱层析纯化，得到白色固体4mg，即为目标产物。LC-MS:m/z＝557.20[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(s,1H),8.20(s,1H),8.17(s,1H),7.93(d,J＝13.7Hz,1H),7.78-7.75(m,1H),7.67(s,1H),7.49-7.47(m,2H),7.14(s,1H),6.74(d,J＝8.7Hz,1H),3.87(s,2H),3.83-3.74(m,4H),3.22(s,1H),3.20-3.12(m,4H),1.40(s,6H)。
实施例10-49、实施例54、实施例59
采用合适的原料，实施例10-49的目标化合物(10)-(49)及实施例54的目标化合物(54)、实施例59的目标化合物(59)参考实施例1或实施例2的合成路线制备得到，具体结构及表征数据如下表1所述：
表1化合物(10)-(49)、化合物(54)、化合物(59)的结构及表征数据
Figure BDA0002307183200001981
Figure BDA0002307183200001991
Figure BDA0002307183200002001
Figure BDA0002307183200002011
Figure BDA0002307183200002021
实施例50-53、实施例55-58、实施例60-65
采用合适的原料，实施例50-53的目标化合物(50)-(53)、实施例55-58的目标化合物(55)-(58)、实施例60-65的目标化合物(60)-(65)参考合成方案6或合成方案4的合成路线制备得到，具体结构及表征数据如下表2所述：
表2化合物(50)-(53)、化合物(55)-(58)、化合物(60)-(65)的结构及表征数据
Figure BDA0002307183200002022
Figure BDA0002307183200002031
实施例66-73、实施例90-91
采用合适的原料，实施例66-73的目标化合物(66)-(73)、实施例90-91的目标化合物(90)-(91)参考合成方案1或合成方案2的合成路线制备得到，具体结构及表征数据如下表3所述：
表3化合物(66)-(73)的结构及表征数据
Figure BDA0002307183200002041
实施例74-89、实施例92-109
采用合适的原料，实施例74-89的目标化合物(74)-(89)、实施例92-109的目标化合物(92)-(109)参考合成方案2或合成方案3的合成路线制备得到，具体结构及表征数据如下表4所述：
表4化合物(74)-(89)、化合物(92)-(109)的结构及表征数据
Figure BDA0002307183200002051
Figure BDA0002307183200002061
Figure BDA0002307183200002071
实施例110-141
采用合适的原料，实施例110-141的目标化合物(110)-(141)参考实施例3或合成方案3或合成方案11的合成路线制备得到，具体结构及表征数据如下表5所述：
表5化合物(110)-(141)的结构及表征数据
Figure BDA0002307183200002081
Figure BDA0002307183200002091
Figure BDA0002307183200002101
实施例142-146
采用合适的原料，实施例142-146的目标化合物(142)-(146)参考实施例297或实施例298或合成方案3的合成路线制备得到，具体结构及表征数据如下表6所述：
表6化合物(142)-(146)的结构及表征数据
Figure BDA0002307183200002102
Figure BDA0002307183200002111
实施例148-256
采用合适的原料，实施例148-256的目标化合物(148)-(256)参考实施例1或合成方案3或合成方案12的合成路线制备得到，具体结构及表征数据如下表7所述：
表7化合物(148)-(256)的结构及表征数据
Figure BDA0002307183200002112
Figure BDA0002307183200002121
Figure BDA0002307183200002131
Figure BDA0002307183200002141
Figure BDA0002307183200002151
Figure BDA0002307183200002161
Figure BDA0002307183200002171
Figure BDA0002307183200002181
Figure BDA0002307183200002191
Figure BDA0002307183200002201
Figure BDA0002307183200002211
实施例262、实施例271-274、实施例276-279
采用合适的原料，实施例262的目标化合物(262)、实施例271-274的目标化合物(271)-(274)、实施例276-279的目标化合物(276)-(279)参考实施例261或合成方案8或合成方案3的合成路线制备得到，具体结构及表征数据如下表8所述：
表8化合物(262)、化合物(271)-(274)、化合物(276)-(279)的结构及表征数据
Figure BDA0002307183200002212
Figure BDA0002307183200002221
实施例264、实施例281-284
采用合适的原料，实施例264的目标化合物(264)、实施例281-284的目标化合物(281)-(284)参考实施例263或合成方案3的合成路线制备得到，具体结构及表征数据如下表9所述：
表9化合物(264)、化合物(281)-(284)的结构及表征数据
Figure BDA0002307183200002222
Figure BDA0002307183200002231
实施例267-270、实施例280
采用合适的原料，实施例267-270的目标化合物(267)-(270)、实施例280的目标化合物(280)参考实施例266或实施例285或合成方案3的合成路线制备得到，具体结构及表征数据如下表9所述：
表10化合物(267)-(270)、化合物(280)的结构及表征数据
Figure BDA0002307183200002232
Figure BDA0002307183200002241
生物学活性测试例：
测试例1：
1、实验目的：
用HTRF方法测试系列化合物对Ret wt、VEGFR2、CCDC6-RET、Ret M918T、RetV804L、Ret V804M这6个激酶的抑制活性，并求出IC50值。
2、所用实验试剂及耗材如下：
1)HTRF KinEASE-TK kit(Cisbio，62TK0PEC)
2)Ret wt(Invitrogen，PV3082)
3)VEGFR2(invitrogeon，PV3660)
4)CCDC6-RET(Signalchem，R02-19BG-10)
5)Ret M918T(Signalchem，R02-12JG-10)
6)Ret V804L(Signalchem，R02-12BG-10)
7)Ret V804M(Signalchem，R02-12GG-10)
8)MgCl2(Sigma，M1028)
9)ATP(Promega，V910B)
10)DTT(Invitrogen，P2325)
11)DMSO(Sigma，D8418)
12)384-well plate,white,low volume,round-bottom(Greiner，784075)
13)384-Well Polypropylene microplate,Clear,Flatt Bottom,Bar Code(Labcyte，P-05525-BC)
14)96-well polypropylene plate(Nunc，249944)
15)Plate shaker(Thermo，4625-1CECN/THZ Q)
16)Centrifuge(Eppendorf，5810R)
17)Envision 2104multi-label Reader(PerkinElmer，2104-10-1)
18)Echo(Labcyte，550)
3、实验步骤
3.1制备1x激酶反应缓冲液:
1倍体积的5X激酶反应缓冲液和4倍体积的水；5mM MgCl2；1mM DTT；1mM MnCl2。
3.2用Echo 550反应板(784075,Greiner)每孔转移10nl稀释好的化合物；
3.3用封板膜封住反应板，1000g离心1分钟。
3.4用1X的酶反应缓冲液配制准备2X激酶。
3.5向反应板中每孔加入5μl激酶(步骤3中配制)。用封板膜封住板子1000g离心30秒，室温放置10分钟。
3.6用1X的酶反应缓冲液配制4x TK-substrate-biotin和4x ATP，混匀，向反应板中加入5μl K-substrate-biotin/ATP混合液。
3.7用封板膜封住板子1000g离心30秒，室温反应40分钟。
3.8用HTRF检测缓冲液配制4X Sa-XL 665(250nM)。
3.9每孔加入5μl Sa-XL 665和5μl TK-antibody-Cryptate，1000g离心30秒，室温反应1小时。
3.10用Envision 2104读615nm(Cryptate)和665nm(XL665)的荧光信号。
4、数据分析
4.1计算每孔的比率(Ratio_665/615nm)
4.2抑制率计算如下:
Figure BDA0002307183200002251
Figure BDA0002307183200002252
所有阳性对照孔CEP-32496读值的平均值
Figure BDA0002307183200002253
所有阴性对照孔DMSO孔读值的平均值
其中，CEP-32496的化学名称为：N-[3-[(6,7-二甲氧基-4-喹唑啉基)氧基]苯基]-N'-[5-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基乙基)-3-异恶唑基]脲。
4.3计算IC50并绘制化合物的抑制曲线：
利用以下非线性拟合公式来得到化合物的IC50(半数抑制浓度)：用Graphpad 6.0软件进行数据分析。
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*Hill Slope))
X:化合物浓度log值 Y:抑制率(％inhibition)
5、实验结果如表A-1-表A-4所示：
表A-1本发明化合物的激酶抑制活性
Figure BDA0002307183200002254
Figure BDA0002307183200002261
表A-2本发明化合物的激酶抑制活性
Figure BDA0002307183200002262
表A-3本发明化合物的激酶抑制活性
Figure BDA0002307183200002263
Figure BDA0002307183200002271
表A-4本发明化合物的激酶抑制活性
Figure BDA0002307183200002272
由表A-1-表A-4可知，本发明化合物对Ret wt具有好的抑制效果，另外，本发明化合物对Ret CCDC-6、Ret M918T、Ret V804L、Ret V804M均具有好的抑制效果。
除表A-1-表A-4中实施例化合物外，本发明的其他化合物对Ret wt也具有好的抑制效果，IC50值范围为0～50nM；另外本发明其他化合物对Ret CCDC-6、Ret M918T、RetV804L、Ret V804M均具有好的抑制效果，IC50值范围为0～100nM。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“一些实施方案”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例、实施方案或示例以及不同实施例、实施方案或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (29)

1.式(I)所示的化合物，或式(I)所示化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure FDA0002307183190000011
其中，
X1、X2、X3、X4和X5各独立地为CR4或N，其中X1、X2、X3和X4中的0、1或2个为N；
E为一个键、-NR6-或-O-；
A为Cyc或hetCyc，其中所述的Cyc和hetCyc各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6烷基、NR5R6(C＝O)烷氧基烷基、NR6R7烷氧基、NR6R7烷氧基烷基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、Cyc、hetCyc、hetCyc-烷基、烷氧基烷基、hetCyc-烷氧基烷基、环烷叉基和杂环叉基的取代基所取代；
Q为-(C＝O)-、-O-、-(C＝O)NR5-、-(C＝S)NR5-、-(S＝O)2-、-(S＝O)2NR5-、-NR5(C＝O)-、-NR5(C＝O)O-、-NR5(C＝O)NR5-、-NR5-、-(C＝O)O-或一个键；
M为-(C＝O)-、烷基、烯基、炔基、烷基芳基、烷基杂芳基、烯基芳基、炔基芳基、烯基杂芳基、炔基杂芳基、芳基、杂芳基、Cyc、hetCyc、芳基烷基、杂芳基烷基、Cyc-烷基或hetCyc-烷基，其中所述的烷基、烯基、炔基、烷基芳基、烷基杂芳基、烯基芳基、炔基芳基、烯基杂芳基、炔基杂芳基、芳基、杂芳基、Cyc、hetCyc、芳基烷基、杂芳基烷基、Cyc-烷基和hetCyc-烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、CF3、NR5R6、氧代、烷氧基、环烷叉基、杂环叉基、羟基烷基、烷基、环烷基、环烷基炔基和杂环基的取代基所取代；
R1为H、D、CN、F、Cl、Br、烷基、烯基或环烷基，其中所述的烷基、烯基和环烷基可独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、CN、NH2、OH和NO2的取代基所取代；
G为H、D、烷基、hetCyc、Cyc、hetCyc-烷基、Cyc-烷基、杂芳基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基烷基、R5O(C＝O)NR6烷基、R5(C＝O)NR6烷基、NR5R6(C＝O)烷基、R5(C＝O)烷基、NR5R6(C＝O)-或R5O烷基，其中所述的烷基、hetCyc、Cyc、hetCyc-烷基、Cyc-烷基、杂芳基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基烷基，以及R5O(C＝O)NR6烷基、R5(C＝O)NR6烷基、R5(C＝O)烷基、NR5R6(C＝O)烷基和R5O烷基中的烷基部分各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、氧代、环烷叉基、杂环叉基、烷基、烷氧基、烷氧基烷基、R5(C＝O)-、R5O(C＝O)-的取代基所取代；
R3为H、D、烷基、Cyc、hetCyc、芳基、杂芳基、Cyc-烷基、hetCyc-烷基、烷氧基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基或氨基烷基，其中所述的烷基、Cyc、hetCyc、芳基、杂芳基、Cyc-烷基、hetCyc-烷基、烷氧基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基和氨基烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、NR5R6、R5O-、R5O(C＝O)-、R5(C＝O)-、NR5R6(C＝O)NR5-、R5(S＝O)2-、NO2、CN、CF3、烷基和环烷基的取代基所取代；
R4为H、D、烷基、F、Cl、Br或烷氧基,其中所述的烷基和烷氧基可独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、CN、NH2、OH和NO2的取代基所取代；
R5为H、D、烷基、Cyc、hetCyc、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、Cyc-烷基或hetCyc-烷基，其中所述的烷基、Cyc、hetCyc、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、Cyc-烷基和hetCyc-烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NR6R7、烷基、烷基磺酰基、烷氧基、芳基和杂芳基的取代基所取代；
R6为H或烷基；
R7为烷基、芳基烷基或杂芳基烷基；
各Cyc独立地为环烷基、桥碳环基或螺碳环基；和
各hetCyc独立地为杂环基、桥杂环基或螺杂环基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，
G为H、D、C1-6烷基、3-12元hetCyc、3-12元Cyc、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基-C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、R5O(C＝O)NR6C1-6烷基、R5(C＝O)NR6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷基、R5(C＝O)C1-6烷基、NR5R6(C＝O)-、R5OC1-6烷基，其中所述的C1-6烷基、3-12元hetCyc、3-12元Cyc、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基-C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基，以及R5O(C＝O)NR6C1-6烷基、R5(C＝O)NR6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷基、R5(C＝O)C1-6烷基、R5O C1-6烷基中的C1-6烷基部分各独立任选地被1、2、3或4个选自氧代、F、Cl、Br、OH、C3-6环烷叉基、3-6元杂环叉基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基、R5(C＝O)-、R5O(C＝O)-的取代基所取代。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中，
G为H、D、C1-4烷基、3-10元hetCyc、3-10元Cyc、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、R5O(C＝O)NR6C1-4烷基、R5(C＝O)NR6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷基、R5(C＝O)C1-4烷基、NR5R6(C＝O)-、R5OC1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、3-10元hetCyc、3-10元Cyc、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基，以及R5O(C＝O)NR6C1-4烷基、R5(C＝O)NR6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷基、R5(C＝O)C1-4烷基、R5OC1-4烷基中的C1-4烷基部分各独立任选地被1、2、3或4个选自氧代、F、Cl、Br、OH、C3-6环烷叉基、3-6元杂环叉基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷基、R5(C＝O)-、R5O(C＝O)-的取代基所取代。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中，
G为H、D、C1-4烷基、3-6元hetCyc、3-6元Cyc、(3-6元hetCyc)-C1-4烷基、(3-6元Cyc)-C1-4烷基、(5-6元杂芳基)-C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、R5O(C＝O)NR6C1-4烷基、R5(C＝O)NR6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷基、R5(C＝O)C1-4烷基、NR5R6(C＝O)-或R5OC1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、3-6元hetCyc、3-6元Cyc、(3-6元hetCyc)-C1-4烷基、(3-6元Cyc)-C1-4烷基、(5-6元杂芳基)-C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基，以及R5O(C＝O)NR6C1-4烷基、R5(C＝O)NR6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷基、R5(C＝O)C1-4烷基、R5OC1-4烷基中的C1-4烷基部分各独立任选地被1、2、3或4个选自氧代、F、Cl、Br、OH、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基、吡咯烷叉基、吡唑烷叉基、四氢呋喃叉基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正丁基、异丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、正丙氧基甲基、异丙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、正丙氧基乙基、异丙氧基乙基、甲氧基丙基、乙氧基丙基、正丙氧基丙基、异丙氧基丙基、CH3(C＝O)-、CH3O(C＝O)-、CH3CH2O(C＝O)-和(CH3)3CO(C＝O)-的取代基所取代。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中，
A为3-12元Cyc或3-12元hetCyc，其中所述的3-12元Cyc和3-12元hetCyc各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、3-12元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-12元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中，
A为子结构式：
Figure FDA0002307183190000031
Figure FDA0002307183190000041
其中，Z1、Z2和Z4各独立地为CH或N；
各Z3、Z5独立地为一个键、CH2、O、S、NH、C＝O、S＝O或(S＝O)2；
m为0、1或2；
n、m1和n1各独立地为0或1；
A的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中，
A的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-4烷基、NR5R6(C＝O)C1-4烷氧基C1-4烷基、NR6R7C1-4烷氧基、NR6R7C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、3-10元hetCyc-C1-4烷氧基C1-4烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中，
A为子结构式：
Figure FDA0002307183190000042
Figure FDA0002307183190000051
其中，A的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-4烷基、NR6R7C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-4烷基、3-10元hetCyc-C1-4烷氧基C1-4烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
9.根据权利要求8所述的化合物，其中，
A的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、OH、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基、吡咯烷叉基或吡唑烷叉基的取代基所取代。
10.根据权利要求1所述的化合物，其中，
M为-(C＝O)-、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷基-C6-10芳基、C1-6烷基-(5-10元杂芳基)、C2-6烯基-C6-10芳基、C2-6炔基-C6-10芳基、C2-6烯基-(5-10元杂芳基)、C2-6炔基-(5-10元杂芳基)、C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-12元hetCyc、3-12元Cyc、C6-10芳基-C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基或(3-12元Cyc)-C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷基-C6-10芳基、C1-6烷基-(5-10元杂芳基)、C2-6烯基-C6-10芳基、C2-6炔基-C6-10芳基、C2-6烯基-(5-10元杂芳基)、C2-6炔基-(5-10元杂芳基)、C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基-C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基和(3-12元Cyc)-C1-6烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、CF3、NR5R6、氧代、C1-6烷氧基、C3-6环烷叉基、3-6元杂环叉基、羟基C1-6烷基、C1-6烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基C2-6炔基和3-7元杂环基的取代基所取代。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中，
M为-(C＝O)-、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基-(5-10元杂芳基)、C2-4烯基苯基、C2-4炔基苯基、C2-4烯基-(5-10元杂芳基)、C2-4炔基-(5-10元杂芳基)、苯基、5-10元杂芳基、3-10元hetCyc、3-10元Cyc、苯基-C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基或(3-10元Cyc)-C1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基-(5-10元杂芳基)、C2-4烯基苯基、C2-4炔基苯基、C2-4烯基-(5-10元杂芳基)、C2-4炔基-(5-10元杂芳基)、苯基、5-10元杂芳基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基-C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基和(3-10元Cyc)-C1-4烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、CF3、NR5R6、氧代、C1-4烷氧基、C3-6环烷叉基、3-6元杂环叉基、羟基C1-4烷基、C1-4烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基C2-4炔基和3-6元杂环基的取代基所取代。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中，
M为-(C＝O)-、-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-CH＝CH2-、-CH2CH＝CH-、-CH2CH＝CHCH2-、-C≡C-、-CH2CH≡CH-、-CH2CH≡CHCH2-、-CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-CH2-苯基、-C≡C-苯基、-CH2C≡C-苯基、-CH2C≡C-CH2-苯基、-CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-CH2-吡啶基、-CH＝CH-吡唑基、-CH2CH＝CH-吡唑基、-CH＝CH-嘧啶基、-CH＝CH-吡嗪基、-CH＝CH-苯并咪唑基、-CH＝CH-苯并吡唑基、-C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-CH2-吡啶基、-C≡C-吡唑基、-CH2C≡C-吡唑基、-C≡C-嘧啶基、-C≡C-吡嗪基、-C≡C-苯并咪唑基、-C≡C-苯并吡唑基、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、-CH2-吡啶基、-CH2CH2-吡啶基、-CH2-苯基、-CH2CH2-苯基、-CH2-嘧啶基、-CH2-吡嗪基、-CH2-咪唑基、-CH2-吡唑基、苯基-CH2-、苯基-CH2CH2-、吡啶基-CH2-、吡啶基-CH2CH2-、嘧啶基-CH2-、吡嗪基-CH2-、咪唑基-CH2-或吡唑基-CH2-，其中所述的-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-CH＝CH2-、-CH2CH＝CH-、-CH2CH＝CHCH2-、-C≡C-、-CH2CH≡CH-、-CH2CH≡CHCH2-、-CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-苯基、-CH2CH＝CH-CH2-苯基、-C≡C-苯基、-CH2C≡C-苯基、-CH2C≡C-CH2-苯基、-CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-吡啶基、-CH2CH＝CH-CH2-吡啶基、-CH＝CH-吡唑基、-CH2CH＝CH-吡唑基、-CH＝CH-嘧啶基、-CH＝CH-吡嗪基、-CH＝CH-苯并咪唑基、-CH＝CH-苯并吡唑基、-C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-吡啶基、-CH2C≡C-CH2-吡啶基、-C≡C-吡唑基、-CH2C≡C-吡唑基、-C≡C-嘧啶基、-C≡C-吡嗪基、-C≡C-苯并咪唑基、-C≡C-苯并吡唑基、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、-CH2-吡啶基、-CH2CH2-吡啶基、-CH2-苯基、-CH2CH2-苯基、-CH2-嘧啶基、-CH2-吡嗪基、-CH2-咪唑基、-CH2-吡唑基、苯基-CH2-、苯基-CH2CH2-、吡啶基-CH2-、吡啶基-CH2CH2-、嘧啶基-CH2-、吡嗪基-CH2-、咪唑基-CH2-和吡唑基-CH2-各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、CF3、NH2、氧代、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、环丙叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、氮杂环丁烷叉基、羟甲基、羟乙基、2-羟基-2-丙基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环丙基乙炔基、吡咯烷基和吗啉基的取代基所取代。
13.根据权利要求1所述的化合物，其中，
R3为H、D、C1-6烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基、5-10元杂芳基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、(5-10元杂芳基)C1-6烷基或氨基C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基、5-10元杂芳基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基、(3-12元hetCyc)-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、(5-10元杂芳基)C1-6烷基和氨基C1-6烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、NR5R6、R5O-、R5O(C＝O)-、R5(C＝O)-、NR5R6(C＝O)NR5-、R5(S＝O)2-、NO2、CN、CF3、C1-6烷基和C3-6环烷基的取代基所取代。
14.根据权利要求1所述的化合物，其中，
R3为H、D、C1-4烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基、5-10元杂芳基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、苯基C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基或氨基C1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基、5-10元杂芳基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基、(3-10元hetCyc)-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、苯基C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基和氨基C1-4烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、NR5R6、R5O-、R5O(C＝O)-、R5(C＝O)-、NR5R6(C＝O)NR5-、R5(S＝O)2-、NO2、CN、CF3、C1-4烷基和C3-6环烷基的取代基所取代。
15.根据权利要求1所述的化合物，其中，
R3为H、D、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、三氟甲基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊基甲基、环丙基甲基、环丁基甲基、环己基甲基、螺[4.4]壬烷基甲基、双环[3.3.0]辛烷基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、哌啶基、吗啉基、氮杂环丁烷基甲基、哌啶基甲基、吗啉基甲基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、正丙氧基甲基、异丙氧基甲基、异丙氧基乙基、正丁氧基甲基、异丁氧基甲基、叔丁氧基甲基、叔丁氧基乙基、苯基、吡啶基、咪唑基、吡唑基、嘧啶基、3H-吲哚基、吲哚基、苯并咪唑基、3,8a-二氢吲哚嗪基、苯基甲基、3,8a-二氢吲哚嗪基甲基、吡啶基甲基、咪唑基甲基、吡唑基甲基、嘧啶基甲基、3H-吲哚基甲基、吲哚基甲基、苯并咪唑基甲基、NH2CH2-、NH(CH3)CH2-、N(CH3)2CH2-、NH2(CH2)2-、NH(CH3)CH2-、NH(CH3)(CH2)2-或N(CH3)2(CH2)2-，其中所述的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、三氟甲基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊基甲基、环丙基甲基、环丁基甲基、环己基甲基、螺[4.4]壬烷基甲基、双环[3.3.0]辛烷基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、哌啶基、吗啉基、氮杂环丁烷基甲基、哌啶基甲基、吗啉基甲基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、正丙氧基甲基、异丙氧基甲基、异丙氧基乙基、正丁氧基甲基、异丁氧基甲基、叔丁氧基甲基、叔丁氧基乙基、苯基、吡啶基、咪唑基、吡唑基、嘧啶基、3H-吲哚基、吲哚基、苯并咪唑基、3,8a-二氢吲哚嗪基、苯基甲基、3,8a-二氢吲哚嗪基甲基、吡啶基甲基、咪唑基甲基、吡唑基甲基、嘧啶基甲基、3H-吲哚基甲基、吲哚基甲基、苯并咪唑基甲基、NH2CH2-、NH(CH3)CH2-、N(CH3)2CH2-、NH2(CH2)2-、NH(CH3)CH2-、NH(CH3)(CH2)2-和N(CH3)2(CH2)2-各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NH2、NO2、CN、CF3、C(CH3)3O(C＝O)-、CH3(C＝O)-、NH2(C＝O)NH-、NHCH3(C＝O)NH-、CH3(S＝O)2-、甲基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、苯氧基、吡啶基氧基、环丙基、环丁基、环戊基和环己基的取代基所取代。
16.根据权利要求1所述的化合物，其中，
R1为H、D、CN、F、Cl、Br、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、乙烯基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基，其中所述的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、乙烯基、环丙基、环丁基、环戊基和环己基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、CN、NH2、OH和NO2的取代基所取代；和
R4为H、D、F、Cl、Br、CN、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，其中所述的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基和叔丁氧基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、CN、NH2、OH和NO2的取代基所取代。
17.根据权利要求1所述的化合物，其中，
R5为H、D、C1-6烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C6-10芳基C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C6-10芳氧基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基或(3-12元hetCyc)-C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基、3-12元Cyc、3-12元hetCyc、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C6-10芳基C1-6烷基、(5-10元杂芳基)-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C6-10芳氧基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、(3-12元Cyc)-C1-6烷基和(3-12元hetCyc)-C1-6烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NR6R7、C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷氧基、C6-10芳基和5-10元杂芳基的取代基所取代；
R6为H、D或C1-6烷基；和
R7为H、D、C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基或(5-10元杂芳基)C1-6烷基。
18.根据权利要求1所述的化合物，其中，
R5为H、D、C1-4烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基、5-10元杂芳基、苯基C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、苯氧基C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基或hetCyc-C1-4烷基，其中所述的C1-4烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、苯基、5-10元杂芳基、苯基C1-4烷基、(5-10元杂芳基)-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、苯氧基C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷基氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、(3-10元Cyc)-C1-4烷基和hetCyc-C1-4烷基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NR6R7、C1-6烷基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷氧基、苯基和5-10元杂芳基的取代基所取代；
R6为H、D或C1-4烷基；和
R7为H、D、C1-4烷基、苯基C1-4烷基或(5-10元杂芳基)C1-4烷基。
19.根据权利要求1所述的化合物，其中，
R5为H、D、NH2CH2-、NH2(CH2)2-、NH(CH3)CH2-、NH(CH3)(CH2)2-、N(CH3)2CH2-、NH(CH3)2(CH2)2-、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙基甲基、环丙基乙基、环丁基乙基、环丁基甲基、环戊基甲基、环戊基乙基、环己基甲基、环己基乙基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、苯基甲基、苯基乙基、苯基正丙基、吡啶基甲基、吡啶基乙基、吡啶基正丙基、苯氧基甲基、苯氧基乙基、苯氧基正丙基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基或四氢吡喃基，其中所述的NH2CH2-、NH2(CH2)2-、NH(CH3)CH2-、NH(CH3)(CH2)2-、N(CH3)2CH2-、NH(CH3)2(CH2)2-、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙基甲基、环丙基乙基、环丁基乙基、环丁基甲基、环戊基甲基、环戊基乙基、环己基甲基、环己基乙基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、苯基甲基、苯基乙基、苯基正丙基、吡啶基甲基、吡啶基乙基、吡啶基正丙基、苯氧基甲基、苯氧基乙基、苯氧基正丙基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基和四氢吡喃基各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、OH、NH2、NH(CH3)、CH3(S＝O)2-、CH3CH2(S＝O)2-、CH(CH3)2(S＝O)2-、C(CH3)3(S＝O)2-、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、苯基、吡啶基、吡唑基和嘧啶基的取代基所取代；
R6为H、D、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；和
R7为H、D、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、苯基甲基、苯基乙基、苯基正丙基、咪唑基甲基、吡唑基甲基、吡啶基甲基、吡啶基乙基、嘧啶基甲基或嘧啶基乙基。
20.权利要求1所述的化合物具有式(I-1)的结构，或式(I-1)结构的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure FDA0002307183190000101
其中，
Z1和Z2各独立地为CH或N；
各Z3、Z5独立地为一个键、CH2、O、S、NH、C＝O、S＝O或(S＝O)2；
m为0、1或2；
Figure FDA0002307183190000102
可任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
21.根据权利要求20所述的化合物，其中，
Figure FDA0002307183190000103
为子结构式：
Figure FDA0002307183190000104
Figure FDA0002307183190000105
Figure FDA0002307183190000106
其中，
Figure FDA0002307183190000107
的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基或吡唑烷叉基的取代基所取代。
22.权利要求1所述的化合物具有式(I-2)的结构，或式(I-2)结构的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure FDA0002307183190000111
其中，
A1为以下子结构式：
Figure FDA0002307183190000112
Figure FDA0002307183190000113
Z1和Z2各独立地为CH或N；
且A1的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
23.根据权利要求22所述的化合物，其中，
A1为子结构式：
Figure FDA0002307183190000114
其中A1的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基或吡唑烷叉基的取代基所取代。
24.权利要求1所述的化合物具有式(I-3)或(I-4)的结构，或式(I-3)或(I-4)结构的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure FDA0002307183190000121
其中，Z1、Z2和Z4各独立地为CH或N；
m为0、1或2；
n、m1和n1各独立地为0或1；
Figure FDA0002307183190000122
各独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NR5R6、R5O-、R5(C＝O)NR6-、NR5R6C1-6烷基、NR5R6(C＝O)C1-6烷氧基C1-6烷基、NR6R7C1-6烷氧基、NR6R7C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、3-10元Cyc、3-10元hetCyc、3-10元hetCyc-C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、3-10元hetCyc-C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6环烷叉基和3-6元杂环叉基的取代基所取代。
25.根据权利要求24所述的化合物，其中，
Figure FDA0002307183190000123
为子结构式：
Figure FDA0002307183190000124
Figure FDA0002307183190000131
Figure FDA0002307183190000132
其中
Figure FDA0002307183190000133
的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基或吡唑烷叉基的取代基所取代；
Figure FDA0002307183190000134
为子结构式：
Figure FDA0002307183190000135
Figure FDA0002307183190000136
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其中
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的各子结构式独立任选地被1、2、3或4个选自F、Cl、Br、氧代、NH2、NHCH3、NH(CH2)3CH3、N(CH3)2、苯甲基OCH2NH-、苯甲基(C＝O)NH-、吡啶基甲基(C＝O)NH-、CH3CH2(C＝O)NH-、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、苯氧基-(CH2)2O-、NH2(CH2)2O-、N(CH3)2(CH2)2O-、1-乙基环丙基甲基、氟代吡啶基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、甲基、乙基、丙基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1,2-二氯甲基、1,2-二氟甲基、羟基甲基、羟基乙基、吡咯烷叉基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、环丙烷叉基、环丁烷叉基、环戊烷叉基、环己烷叉基、氮杂环丁烷叉基、氧杂环丁烷叉基或吡唑烷叉基的取代基所取代。
26.权利要求1所述的化合物具有以下结构之一，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure FDA0002307183190000141
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27.一种药物组合物，包含权利要求1-26任一项所述的化合物，和药学上可接受的辅剂。
28.权利要求1-26任一项所述的化合物或权利要求27所述的药物组合物在制备用于预防或治疗RET相关疾病的药物中的用途。
29.根据权利要求28所述的用途，其中，RET相关疾病包括癌症、肠易激综合征和/或与肠易激综合征相关的疼痛。
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