CN111265618A - 鼓槌石斛提取物及毛兰素的医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药学领域,特别是涉及一种鼓槌石斛提取物及毛兰素的医药用途。本发明的鼓槌石斛提取物及毛兰素可用于防治非酒精性脂肪性肝病。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域,特别是涉及一种鼓槌石斛提取物及毛兰素的医药用途。
背景技术
非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一类以脂肪在肝脏的异位沉积,肝脏脂肪变性为特征的,且这种脂肪变性与酒精滥用无关的一类肝脏疾病谱,它包括简单的肝脏脂肪变性,到非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholicsteatohepatitis,NASH),包括不同程度的肝脏纤维化,进展至肝硬化及肝脏终末期病变,并且涉及到相关并发症,如肝细胞性肝癌。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)影响全球25%的成年人,是全球最常见的慢性肝病。随着肥胖和糖尿病患者的增多,NAFLD已成为西方发达国家慢性肝病和肝功能试验异常的首要病因,并呈现全球化和低龄化趋势。目前已有研究指出,2016-2030年间,中国NAFLD患者人数以及患病率将会大大提升,其数量将由2016年的2.46亿提升到2030年的3.13亿,患病率提高29.1%。且在该研究所覆盖的几个国家中,中国的相对增长率同样为同期最大,达到22.2%。而目前尚无治疗NAFLD的特效药物,由此可见NAFLD正逐渐成为威胁我国人民身体健康的重大问题。
石斛是兰科植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl、鼓槌石斛Dendrobiumchrysotoxum Lindl.或流苏石斛Dendrobium fimbriatum Hook.的栽培品及其同属植物近似种的新鲜或干燥茎。现代研究发现,石斛的化学成分包括生物碱类、多糖、黄酮类、联苄类等,其中联苄类成分毛兰素是药典中鼓槌石斛的鉴别及含量测定的指标成分。
发明内容
本发明的目的旨在提供一种鼓槌石斛提取物及毛兰素的新的医药用途。
具体地说,本发明提供了一种鼓槌石斛提取物在制备防治非酒精性脂肪性肝病的药物中的应用,所述鼓槌石斛提取物含0.71%毛兰素。
本发明还提供了一种毛兰素在制备防治非酒精性脂肪性肝病的药物中的应用。
在一优选例中,所述毛兰素是作为唯一的活性成分用于制备防治非酒精性脂肪性肝病的的药物。
本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述,本发明的特点、目的和优势将更为明显。
附图说明
图1是鼓槌石斛提取物(DC)和毛兰素(Erianin)降低db/db小鼠肝组织中升高的甘油三酯(TG)含量(A.DC;B.Erianin)。数据均用平均数±标准误(Mean±SEM)表示,与空白组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与模型组相比,#P<0.05,##P<0.01, ###P<0.001
图2是Erianin降低GK大鼠肝组织中甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(NEFA)的含量(A.TG;B.NEFA)。数据均用平均数±标准误(Mean±SEM)表示,与空白组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与模型组相比,#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001
图3是GK大鼠肝脏油红O染色结果。A.Wistar大鼠组;B.GK大鼠组;C.GK+Erianin(0.5mg/kg)组;D.GK+Erianin(5mg/kg)组
具体实施方式
本发明的问世部分是基于这样一个意外发现:鼓锥石斛提取物及毛兰素可以明显降低小鼠肝组织中升高的甘油三酯(TG)含量,因此,鼓锥石斛提取物及毛兰素可用于制备防治非酒精性脂肪性肝病的药物。
本发明的鼓槌石斛提取物的制备过程并无特别之处。将鼓槌石斛药材打粉,用水、20%~ 95%乙醇、丙酮、乙酸乙酯、汽油或石油醚回流提取,加入常见药用辅料制成任何一种药学上所说的剂型,优选浸膏、流浸膏、酒剂、酊剂、口服液、滴眼剂、丸剂、散剂、滴丸、片剂或胶囊剂。
本发明的毛兰素的分子式:C18H22O5,分子量:318.364,其结构式如下:
本发明的毛兰素可通过商业途径从上海源叶生物技术有限公司等处购买获得。其纯度均符合药用标准。毛兰素的纯度以>98%最佳。
本发明的鼓槌石斛提取物或毛兰素可以单独使用或以药物组合物的形式使用。药物组合物包括作为活性成分的本发明的鼓槌石斛提取物或毛兰素及可药用载体。较佳地,本发明的药物组合物含有0.1-99.9%重量百分比的作为活性成分的本发明的毛兰素。“可药用载体”不会破坏本发明的毛兰素的药学活性,同时其有效用量,即能发挥药物载体作用时的用量对人体无毒。
所述可药用载体包括但不限于:软磷脂、硬脂酸铝、氧化铝、离子交换材料、自乳化药物传递***、吐温或其他表面活化剂、血清蛋白、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、水、盐、电解质如硫酸盐精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅酸镁、饱和脂肪酸部分甘油酯混合物等。
其他常用的药物辅料如粘合剂(如微晶纤维素)、填充剂(如淀粉、葡萄糖、无水乳糖和乳糖珠粒)、崩解剂(如交联PVP、交联羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素)、润滑剂(如硬脂酸镁)以及吸收促进剂、吸附载体、香味剂、甜味剂、赋形剂、稀释剂、润湿剂等。
本发明的鼓槌石斛提取物或毛兰素以及其药物组合物可按本领域常规方法制备并可以通过肠道或非肠道或局部途径给药。口服制剂包括胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等;非肠道给药制剂包括注射液等;局部给药制剂包括霜剂、贴剂、软膏剂、喷雾剂等。优选为口服制剂。
本发明的鼓槌石斛提取物或毛兰素以及其药物组合物的给药途径可以为口服、舌下、经皮、经肌肉或皮下、皮肤粘膜、静脉、尿道、***等。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明,否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。
除非另行定义,文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外,任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本发明提到的上述特征,或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用,说明书中所揭示的各个特征,可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明,所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
实施例1鼓槌石斛醇提物中联苄类化合物含量的测定
1.1实验材料和方法
鼓槌石斛75%醇提取物的制备:取鼓槌石斛药材1000g,加10倍量75%乙醇,加热回流提取3次,每次3小时,合并提取液,减压浓缩除去溶剂,得到浸膏。称重。
供试品溶液的制备:精密称取石斛提取物浸膏容量瓶中,加入80%甲醇,超声溶解,过 0.22μm微孔滤膜制成50μg/ml的溶液。
含量测定:
色谱条件:
Erianin:Waters BEH C18(100mm×2.1mm,1.7μm),流动相A水,流动相B乙腈,柱温45℃,进样量5μl
质谱条件:
Erianin
离子源:电喷雾离子源(ESI),正离子模式;
毛细管电压:3.20kV;
锥孔电压:30V;
离子源温度:150℃;
去溶剂化温度:400℃;
去溶剂化气流(氮气):500L/h;
锥孔气流(氮气):50L/h
1.2实验结果
表1.鼓槌石斛75%乙醇提取物中Erianin的百分含量
从实验结果可见,鼓槌石斛提取物中富含联苄类化合物毛兰素(Erianin)。
实施例2以自发性Ⅱ型糖尿病动物模型db/db小鼠评价鼓槌石斛提取物及其指标成分毛兰素 (Erianin)对非酒精性脂肪性肝病的治疗作用,具体方法如下:
2.1实验材料
2.1.1实验动物
db/+及db/db雄性小鼠,体重12-16g(4周龄),购自南京大学模式动物中心,小鼠饲养温度(22±1)℃,相对湿度(65±10)%,照明时间每天12h。
2.1.2受试药品及其制备
鼓槌石斛提取物(按实施例1制备)以CMC-Na研磨溶解后口服灌胃给药,最终给药剂量为50mg/kg和200mg/kg。Erianin购自上海源叶生物技术有限公司,纯度98%以上。称取毛兰素溶解于橄榄油中腹腔注射给药,最终给药剂量为0.5mg/kg和5mg/kg。
2.2实验方法
2.2.1动物实验方案
db/+及db/db雄性小鼠适应性饲养一周后,将db/db小鼠随机分为5组,每组5只,分别为:db/db模型组;db/db+Erianin(1mg/kg)组;db/db+Erianin(10mg/kg)组;db/db+鼓槌石斛提取物(50mg/kg)组;db/db+鼓槌石斛提取物(200mg/kg)组。毛兰素腹腔注射给药、鼓槌石斛提取物灌胃给药,持续给药4周后,动物处死后取肝组织,液氮速冻,放于-80℃保存备用。
2.2.2肝组织TG含量检测
称取肝脏组织25mg,按照重量(g):体积(mL)=1:9的比例,加入9倍体积的匀浆介质无水乙醇,冰水浴条件下机械匀浆,2500转/分,离心10分钟,取上清液待测。在96孔板中选择一个空白孔,一个标准孔,其它为样本空,分别在空白孔,标准孔及样本孔中加入2.5μL蒸馏水、标准品和样本,每孔加入250μL工作液,混匀后,37℃孵育10分钟,波长510nm,酶标仪测定各孔吸光度值。组织样本计算公式:
甘油三酯含量=(样本OD值-空白OD值)÷(校准OD值-空白OD值)×校准品浓度(mmol/L)÷待测样本蛋白浓度(gprot/L)
2.2.3数据统计
实验数据以平均值±标准误(Mean±SEM)表示,采用SPSS 16.0软件进行统计,组之间用One-Way ANOVA统计方法进行方差分析。数据均用平均数±标准误(Mean±SEM)表示,与空白组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与模型组相比,#P<0.05,##P<0.01, ###P<0.001。
2.3实验结果
实验结果显示,鼓槌石斛提取物(200mg/kg)和Erianin(1,10mg/kg)均可显著降低db/db小鼠肝脏中升高的TG含量(图1)。
实施例3以自发性Ⅱ型糖尿病动物模型Goto-Kakizaki大鼠(GK大鼠)评价毛兰素(Erianin) 对非酒精性脂肪性肝病的治疗作用,具体方法如下:
3.1实验材料
3.1.1实验动物
GK及Wistar雄性大鼠,体重190-230g(8周龄),购自中科院上海实验动物中心,大鼠饲养温度(22±1)℃,相对湿度(65±10)%,照明时间每天12h。
3.1.2受试药品及其制备
Erianin购自上海源叶生物技术有限公司,纯度98%以上。称取毛兰素溶解于橄榄油中腹腔注射给药,最终给药剂量为0.5mg/kg和5mg/kg。
3.2实验方法
3.2.1动物实验方案
GK大鼠及Wistar雄性大鼠饲养6月后,将GK大鼠随机分为3组,每组6只,分别为:GK模型组;GK+Erianin(0.5mg/kg)组;GK+Erianin(5mg/kg)组。持续4周腹腔注射给药后,进行处理取材,大鼠麻醉后腹主动脉取血,解剖取肝组织,液氮速冻,放于-80℃保存备用。
3.2.2肝组织油红染色
取相同部位(肝小叶)肝组织进行病理学检查,用10%甲醛溶液固定,石蜡包埋,切片,以油红O染料染色以评价大鼠肝脏脂质累积情况。
3.2.3肝组织TG含量检测
详见2.2.2
3.2.4肝组织NEFA含量检测
准确称取组织重量20mg,按重量(g):体积(mL)=1:9的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,制成10%的匀浆,2500转/分,离心10分钟,取上清测定。在96孔板中选定一个空白孔加入4μL双蒸水,选定一个校准孔加入1.00mmol/L的校准品4μL,其余为样本孔加入样本4μL,分别在各孔中加入试剂一200μL,混匀,37℃孵育5min,在波长546nm处读取吸光度值A1,各孔加入试剂二50μL,混匀,37℃孵育5min,读取吸光度值A2,计算ΔA=A2-A1。
组织样本NEFA浓度=(ΔA样本-ΔA空白)÷(ΔA标准品-ΔA空白)×校准品浓度(mmol/L)÷待测样本蛋白浓度(g protein/L)
3.2.5数据统计
实验数据以平均值±标准误(Mean±SEM)表示,采用SPSS 16.0软件进行统计,组之间用One-Way ANOVA统计方法进行方差分析。数据均用平均数±标准误(Mean±SEM)表示,与空白组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与模型组相比,#P<0.05,##P<0.01, ###P<0.001。
3.3实验结果
3.3.1毛兰素(Erianin)减少GK大鼠肝脏中升高的TG、NEFA含量
实验结果显示,相比正常Wistar大鼠,GK大鼠肝组织中TG和NEFA的含量显著提高,而不同剂量Erianin均可降低这种上升,减轻大鼠肝组织中脂质的堆积(图2)。
3.3.2毛兰素(Erianin)减少GK大鼠肝脏的脂质堆积
油红O染色结果显示自发性Ⅱ型糖尿病模型GK大鼠肝脏发生脂质累积,而不同剂量毛兰素(Erianin)均可降低肝脏中升高的脂质累积(图3)。
实施例4流浸膏剂的制备
取鼓槌石斛500g,打粉,用75%乙醇作溶剂,浸渍48h,缓缓渗漉,收集初漉液425mL,另器保存;继续渗漉,到渗漉液接近无色为止,收集续漉液,在55℃浓缩至稠膏状,加入初漉液425mL混匀,用70%乙醇稀释至500mL,静置3d,滤过,即得。
实施例5片剂的制备
取鼓槌石斛或毛兰素500g打粉混匀,过100目筛。喷入适量75%乙醇,加入17.5%微晶纤维素,其中内加7.5%微晶纤维素和20%淀粉,制成颗粒,干燥,外加10%微晶纤维素和 1%的硬脂酸镁,混匀压片。
实施例6滴丸剂的制备
取鼓槌石斛或毛兰素500g打粉混匀,用75%乙醇回流提取3次,每次2h,回收乙醇得浸膏,以PGE4000为基质,与药物的比例为1:1.5,二甲基硅油为冷凝剂,滴制。
实施例7胶囊剂的制备
取鼓槌石斛或毛兰素500g打粉混匀,用乙酸乙酯回流提取3次,每次2h,回收乙酸乙酯得浸膏,干燥,粉碎,过100目筛,加入5%硬脂酸镁,混匀装入硬胶囊。
本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而,应理解的是,在不偏离本发明精神之前提下,本领域专业人员可对其进行等同改变和修饰,所述改变和修饰同样落入本申请所附权利要求的覆盖范围。
Claims (3)
1.鼓槌石斛提取物在制备防治非酒精性脂肪性肝病的药物中的应用,所述鼓槌石斛提取物含0.71%毛兰素。
2.毛兰素在制备防治非酒精性脂肪性肝病的药物中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述毛兰素是作为唯一的活性成分用于制备防治非酒精性脂肪性肝病的药物。
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PB01 | Publication | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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