CN111253391A

CN111253391A - 一种含氘氮杂环二酮化合物用于治疗流感

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Publication number: CN111253391A
Application number: CN201811454009.4A
Authority: CN
Inventors: 沈旺; 党奎峰; 刘劲强; 蔡雨婷; 陈春明; 韩巧; 靡佳晨; 沈家磊; 孙亚波; 王鑫; 张超; 马随军; 赖新忠
Original assignee: Weiqing Biotechnology Shanghai Co Ltd
Current assignee: Weiqing Biotechnology Shanghai Co Ltd
Priority date: 2018-11-30
Filing date: 2018-11-30
Publication date: 2020-06-09

Abstract

本发明提供了一种含氘氮杂环二酮化合物，其特征在于：由如下结构式所表示的化合物或其药学上可接受的盐；

此类化合物对流行性感冒(流感)病毒有增殖抑制活性的化合物，特别是通过对流感相关的帽依赖性核酸内切酶的抑制达到抑制流感病毒增殖，进而治疗流感。

Description

一种含氘氮杂环二酮化合物用于治疗流感

技术领域

本发明涉及有机合成领域，具体地，涉及一种用于治疗流感的含氘氮杂环二酮化合物及其制备方法。

发明背景

流感病毒属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)家族的病毒，为负义单链RNA病毒。流感病毒已知有三种：流感病毒A、流感病毒B、流感病毒C。流感病毒的感染会引起的急性呼吸道感染病，同时可引起其他呼吸道病毒感染，包括上呼吸道和下呼吸道病毒感染。上呼吸道病毒性感染涉及鼻、鼻窦、咽和/或喉。下呼吸道病毒性感染涉及声带以下的呼吸***，包括气管、主支气管和肺。流感病毒的感染是每年数百万人死亡的主要原因。在婴幼儿、老年人等高风险人群中是特别重要的疾病，老年人中，肺炎并发率高，老年人占了因流感而死亡的人数的大多数。

人类感染的流感由流感A和流感B引起。而流感病毒A感染又占流感的大多数，病患的病情也更为严重。流感病毒A具有源自宿主细胞的脂质膜，其包含从病毒表面突出的血凝素、神经氨酸酶和M2蛋白质。根据血凝素(H或HA)和神经氨酸酶(N)抗原类型，流感病毒A可以进一步分类。现在已经知道有16种H抗原(H1至H16)和9种N抗原(NI至N9)。流感病毒A根据H和N抗原的结合，区分成若干亚型。现在已经发现存在的亚型包括H1N1、H1N2、H2N2、H3N1、H3N2、H3N8、H5N1、H5N2、H5N3、H5N8、H5N9、H7N1、H7N2、H7N3、H7N4、H7N7、H7N9、 H9N2和H10N7。流感病毒聚合酶是由3种亚基组成的异三聚体：聚合酶酸(PA)、聚合酶碱 1(PB1)和聚合酶碱2(PB2)。在受感染细胞的细胞核中，流感病毒聚合酶负责病毒RNA的复制和转录。PA亚基包含核酸内切酶活性部位。PA的核酸内切酶切割宿主细胞的mRNA，随后细胞mRNA被PBl亚基用作引物用于病毒mRNA合成。

通过与流感患者的分泌物，或与被污染的表面或物体的直接接触，流感病毒可在人与人之间传播。流感病毒感染的并发症包括肺炎、支气管炎、脱水以及鼻窦和耳部感染。

接种疫苗是控制流感病毒传播的主要途径。然而，由于流感疫苗的制备存在诸多局限，例如在新爆发病毒的鉴定到疫苗的临床应用大约要有6个月的滞后。所以，抗病毒药物是目前来说迫切需要的预防和治疗流感的方法。

已经被批准的抗流感药物有两大类：(1)抑制病毒的脱壳过程，药物有兴梅屈尔(Symmetrel，商品名：金刚烷胺(Amantadine)，和盐酸金刚乙胺(Flumadine，商品名：金刚乙胺(Rimantadine))；(2)抑制病毒自细胞中出芽/释放的作为的神经氨酸酶抑制剂，奥塞米韦(Oseltamivir，商品名：达菲Tamiflu)，扎那米韦(Zanamivir，商品名：瑞乐沙Relenza)，帕拉米韦(permivir),辛酸拉尼米韦(laninamivir octanoate)。

尽管这些已有的药物有很好的效果，治疗流感依然有很多问题需要克服，如：现有药物的使用已经引起耐药流感病毒株的出现；这些药物有相当大的毒副作用；可能出现病原性或致死性高的新型流感病毒的世界性大流行。因此开发出新型机理的抗流感药物仍然有必要性和迫切性。

帽依赖性核酸内切酶是源自流感病毒的酶、是病毒增殖起关键作用，而且具有宿主所没有的病毒特异性的酶活性，因此帽依赖性核酸内切酶是开发新型抗流感药物的独特的好靶点。帽依赖性核酸内切酶的活性是：以宿主mRNA前体为底物、生成包含帽结构的9～13个碱基(帽结构的碱基不包含在该数目中)的片段。该片段发挥病毒RNA聚合酶的引物的功能，用于编码病毒蛋白的mRNA的合成。即，抑制帽依赖性核酸内切酶的物质是通过抑制病毒mRNA的合成来抑制病毒蛋白的合成，达到抑制病毒增殖。

目前，尚缺一种在临床上作为抗流感药物使用的药物或其组合物。

发明内容

本发明旨在提供一种能够用于治疗流感的，新型的含氘氮杂环二酮化合物。

本发明提供的一种含氘氮杂环二酮化合物，其特征在于：由如下结构式所表示的化合物或其药学上可接受的盐；

其中，-O-R¹基团选自羟基或羟基发生反应后的产物；该羟基发生反应后的产物指常规的以酰卤化合物、卤化物、磺酰化合物、酸、醇等物质为原料，与该羟基发生发生后得到的产物，该产物可以为醚类、酯类等形式存在。

一般来说，该R¹多选用作羟基保护基的作用，如：乙酰基(Ac),2-甲氧基乙氧甲基醚(MEM), 甲氧甲基醚(MOM),对甲氧基苄基醚(PMB),甲硫甲基醚(MTM),特戊酰基(Piv),四氢吡喃(THP), 硅醚保护基,甲基醚等基团，或为，磺酰基、苄基等体积大，易于离去的基团。

R²和R³相同或不相同，选自氢、烷基、取代的烷基；

R⁴选自氢、卤素、氰基、烷基、取代的烷基；

X¹,X²,X³,X⁴,X⁵,X⁶,X⁷,X⁸相同或不相同，选自氢，氘，卤素，氰基，硝基,氨基,胺基；

Y¹,Y²,Y³相同或不相同，选自氢，氘；

上述X¹,X²,X³,X⁴,X⁵,X⁶,X⁷,X⁸，Y¹,Y²,Y³中至少有一个是氘。

此外，本发明还提供了一种含氘氮杂环二酮化合物，其特征在于：由如下结构式所表示的化合物或其药学上可接受的盐；

其中，

R1选自：氢、-C(＝O)R^A,-C(＝O)OR^A,-CH₂OC(＝O)R^A,-CH₂OC(＝O)OR^A,-CH(Me)OC(＝O)R^A, -CH(Me)OC(＝O)OR^A；

R^A选自烷基、取代的烷基

R⁴选自氢、卤素、氰基、烷基、取代的烷基；

n为0-5的自然数；即、此处的取代基为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基；此外，上述环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基上的任一或任几个碳还可以为氧、硫、氮所取代后形成杂环烷基；

R₂‘指环烷基或杂环烷基上的任意个氢原子为氢、卤素、烷基、取代的烷基所取代；

Y¹,Y²,Y³相同或不相同，选自氢，氘；

进一步地，在本发明涉及的含氘氮杂环二酮化合物中，还具有这样的特点：即、上述R¹选自H,-C(＝O)R^A,-C(＝O)OR^A,-CH₂OC(＝O)R^A,-CH₂OC(＝O)OR^A,-CH(Me)OC(＝O)R^A, -CH(Me)OC(＝O)OR^A；

其中，R^A选自氢、烷基。

进一步地，在本发明涉及的含氘氮杂环二酮化合物中，还具有这样的特点：即、上述取代的烷基指烷基上的氢原子中的一个或一个以上为羟基、卤素、氰基、硝基、氨基、胺基、醚基、酯基所取代。

在本发明中，烷基一般指碳原子数不大于10的烷基基团。

进一步地，本发明还提供了上述含氘氮杂环二酮化合物的制备方法，其特征在于：由摩尔比为1：1-5的底物A和底物B在酸性反应条件下，发生取代反应得到目标含氘氮杂环二酮化合物；

其中，底物A为如下结构所示的化合物：

底物B为如下结构所示的化合物：

其中，当R^1A为羟基保护基的情况下，目标含氘氮杂环二酮化合物还可通过脱保护来获得 R^1A为氢的产物；

当R^1A为氢的情况下，目标含氘氮杂环二酮化合物上的羟基还可发生任何氢被取代基取代的反应。如：成醚、酯化等反应。

进一步地，本发明提供的含氘氮杂环二酮化合物的制备方法，还具有这样的特点：即、上述目标含氘氮杂环二酮化合物经手性分离工序获得手性产物。

进一步地，本发明提供的含氘氮杂环二酮化合物的制备方法，还具有这样的特点：即、上述底物A经由如下步骤制备而成：以吡喃甲醛的衍生物A0为原料，经反应依次得到中间产物A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10后胺基脱保护得到底物A；

其中，吡喃甲醛的衍生物A0，以及中间产物A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10 的结构分别如下所示：

吡喃甲醛的衍生物A0为

中间产物A1为

中间产物A2为

中间产物A3为

中间产物A4为

中间产物A5为

中间产物A6为

中间产物A7为

中间产物A8为

中间产物A9为

中间产物A10为

其中，pro为羟基保护基；

pro’为胺基保护基；如：苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(BOC)、9-芴甲氧羰基(FMOC)、苄基(Bn)、对甲氧苯基(PMP)、三苯甲基衍生物等能用于对NH上的氢进行保护的基团。

lea为离去基。如：烷基，苄基等。

其具体反应方程式如下所示：

进一步地，本发明提供的含氘氮杂环二酮化合物的制备方法，还具有这样的特点：即、上述底物A经由如下步骤制备而成：以吡喃甲醛的衍生物A0为原料，经反应依次得到中间产物A1-2、A2-2、A3-2、A4-2、A5-2、A6-2、A7-2后胺基脱保护得到底物A；

其中，吡喃甲醛的衍生物A0，以及中间产物A1-2、A2-2、A3-2、A4-2、A5-2、A6-2、A7-2 的结构分别如下所示：

吡喃甲醛的衍生物A0为

中间产物A1-2为

中间产物A2-2为

中间产物A3-2为

中间产物A4-2为

中间产物A5-2为

中间产物A6-2为

中间产物A7-2为

其中，pro为羟基保护基；

pro’为胺基保护基；

所对应的碳为R²，R³基团所取代，或为环烷基、取代的环烷基、杂环烷基或取代的杂环烷基所取代。

其具体反应方程式如下所示：

进一步地，本发明提供的含氘氮杂环二酮化合物的制备方法，还具有这样的特点：即、上述底物B经由如下步骤制备而成：以卤代苯衍生物B0为原料，经反应依次得到中间产物 B1、B2、B3、B4后，将羰基还原为羟基得到底物B；

其中，卤代苯衍生物B0，以及中间产物B1、B2、B3、B4的结构分别如下所示：

卤代苯衍生物B0为

中间产物B1为

中间产物B2为

中间产物B3为

中间产物B4为

或

上述中间产物B4在氘代试剂的作用下能得到中间产物B4-2后，经羰基还原为羟基得到底物B；

上述中间产物B4-2为如下结构所示的化合物：

其具体反应方程式如下所示：

此外，本发明提供的一种含氘氮杂环二酮化合物，其特征在于：作为一种治疗流感的药物或药物组合物中的组分之一进行使用。

本发明的作用和效果：

本发明公开的一些实施方案涉及改善和/或治疗流感病毒感染的方法，上述方法可包括向流感病毒病毒性感染的个体给予有效量的一种或多种式的化合物及其前药，或其药学上可接受的盐，或包含一种或多种式的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。

本发明公开的一些实施方案涉及预防正粘病毒感染的方法，上述方法可包括向可能会被流感病毒病毒性感染的个体给予有效量的一种或多种式的化合物及其前药，或其药学上可接受的盐，或包含一种或多种式的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。流感病毒感染可以是由流感病毒的一个亚型引起的，如流感A、B和/或C。

研究发现，碳-氘键比碳-氢键稍短，键能更高，因此导致所谓的同位素效应，即碳氘键 (C-D)比碳氢键(C-H)稳定，一级动力学的同位素效应在室温时大约6.5倍(kH/kD＝6.5)。一种小分子的氢原子被氘置换以后，能显著改善这种化合物的体内代谢特征。当然，这里的氘代替氢，正好发生在药物潜在的代谢位点，这样的氘代就能提高药物的生物稳定性和疗效。因此通过氘代来改善一个药物的代谢稳定性，达到改善一个药物的体内动力学(提高体内浓度，延长半衰期，及减轻副作用等)已经成为现代药物化学的一个组成部分。

附图说明

图1、药动结果图；

图2、药动结果图。

具体实施方式

中间物系列1

中间物A:5-(苄氧基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-4,6-二酮

具体反应方程式如下所示：

步骤A：3-(3-(苄氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-3-羟基丙酸甲酯(化合物A.1)

将乙酸甲酯(1.92g，26mmol)溶解在20mL四氢呋喃溶液中，氮气保护下，在零下 65℃滴加LDA(0.5M,13mL)，搅拌1小时。加入3-(苄氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲醛(2g，8.66mmol),保持零下65℃搅拌30分钟。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用90mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。旋干、纯化得到产物A.1(1.54g,产率：59％)。LCMS ESI(+)m/z：305.1(M+1).

步骤B：3-(苄氧基)-2-(1,3-二羟基丙基)-4H-吡喃-4-酮(化合物A.2)

将化合物A.1(1.5g，4.93mmol)溶解在15mL四氢呋喃溶液中，0℃下分批加入硼氢化锂(500mg，13.34mmol)，搅拌4小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用60mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，，用无水硫酸钠干燥。旋干、纯化得到产物A.2(1.1g，产率： 80％)。LCMS ESI(+)m/z：27.2(M+1).

步骤C：3-(苄氧基)-2-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-1-羟基丙基)-4H-吡喃-4- 酮(化合物A.3)

将化合物A.2(1.1g，3.99mmol)溶解在10mL N,N—二甲基甲酰胺溶液中，加入咪唑(596mg，8.77mmol)，在0℃下加入TBSCl(661mg，4.38mmol)搅拌1小时。加水淬灭反应，用60mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，旋干，纯化得到产物A.3(600mg，产率： 38％)。LCMSESI(+)m/z：391.2(M+1).

步骤D：3-(苄氧基)-2-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-1-羟基丙基)吡啶-4(1H)- 酮(化合物A.4)

将化合物A.3(1.8g,4.62mmol)溶解在20mL甲醇溶液中，加入氨水(30mL)溶液在室温下搅拌36小时。LCMS监测到反应完全，用60mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。旋干、纯化得到产物A.4(560mg，产率：31％)。LCMS ESI(+)m/z：390.2 (M+1).

步骤E：1-氨基-3-(苄氧基)-2-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-1-羟基丙基)吡啶-4(1H)-酮(化合物A.5)

将化合物A.4(560mg，1.44mmol)溶解在8mL N,N—二甲基甲酰胺溶液中，随后加入2.4-二硝基苯基羟胺(344mg，1.73mmol)和碳酸钾(993mg，7.2mmol)。在室温下搅拌2 小时，加水(20mL)淬灭反应，然后用50mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥。旋干、纯化得到产物A.5(480mg，产率：82％)。LCMS ESI(+)m/z：405.2(M+1).

步骤F：叔丁基(3-(苄氧基)-2-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-1-羟基丙基)-4- 氧代吡啶-1(4H)-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物A.6)

将化合物A.5(200mg，0.5mmol)溶解在10mL四氢呋喃溶液中，依次加入二碳酸二叔丁酯(119mg，0.55mmol)，三乙胺(100mg，1mmol)和4-二甲氨基吡啶(6mg，0.05mmol)，在室温下搅拌30分钟。TLC监测到反应完全后，减压浓缩除去四氢呋喃，剩余物加入水(20mL)稀释，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。过滤、旋干纯化得到产物A.6(170mg，产率：68％)。LCMS ESI(+)m/z：505.3(M+1).

步骤G:叔丁基(3-(苄氧基)-2-(1,3-二羟基丙基)-4-氧代吡啶-1(4H)-基) 氨基甲酸叔丁酯(化合物A.7)

将化合物A.6(170mg，0.34mmol)溶解在5mL四氢呋喃溶液中，在0℃下加入对甲苯磺酸(128mg，0.67mmol)并搅拌2小时。加水(10mL)稀释反应液，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤、旋干纯化得到产物A.7(140mg，产率： 95％)。LCMS ESI(+)m/z：391.2(M+1).

步骤H：(3-(苄氧基)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-3-羟丙基甲磺酸酯(化合物A.8)

将化合物A.7(140mg，0.36mmol)溶解在5mL二氯甲烷溶液中，在0℃下加入DIPEA(56 mg，0.43mmol)和MsCl(49mg，0.43mmol)并搅拌1小时。加水淬灭反应，用30mL二氯甲烷分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。过滤、旋干纯化得到产物A.8(140mg，产率：83％)。LCMS ESI(+)m/z：469.2(M+1).

步骤I：5-(苄氧基)-4-羟基-6-氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物A.9)

将化合物A.8(140mg，0.30mmol)溶解在5mL四氢呋喃溶液中，加入TBAF(1M,0.4mL)，在室温下搅拌过夜。反应完后加水(20mL)稀释，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，纯化得到产物A.9(80mg，产率：71％)。LCMS ESI(+)m/z： 373.2(M+1).

步骤J：5-(苄氧基)-4，6-二氧代-2,3,6-三氢-1H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-1-羧酸叔丁酯 (化合物A.10)

将化合物A.9(80m)溶于200mL二氯甲烷溶液中，冷却至0摄氏度，缓慢加入120mg戴斯-马丁氧化剂，升至室温后搅拌1小时。加入碳酸氢钠和硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，用90mL二氯甲烷分三次萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥有机相。过滤、旋干，纯化得到产物A.10(78mg，产率：97％)。LCMS ESI(+)m/z:371.2(M+1).

步骤K：5-(苄氧基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-4,6-二酮

将化合物A.10(78mg,0.22mmol)溶解在5mL二氯甲烷溶液中，在0℃下加入三氟乙酸 (2.5mL)溶液，搅拌1小时。低温下加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，用15mL二氯甲烷分三次萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，柱层析纯化得到中间物A(45mg，产率：77％)。LCMS ESI(+)m/z：271.2(M+1).

中间物B:5-(苄氧基)-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-4,6-二酮

具体反应方程式如下所示：

步骤A:3-(3-(苄氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-3-羟基-2,2-二甲基丙醛(化合物B3.1)

将3-(苄氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲醛(10g,43mmol)溶于100mL四氢呋喃中，在室温下加入的吡咯烷(0.35mL,17.5mmol),冰醋酸(3.73mL,97mmol)和异丁醛(4.3g,60mmol)，搅拌2小时。把反应液直接旋干，柱层析纯化得到产物B.1(9g，产率：68.5％)。LCMS ESI(+)m/z:303.1(M+1).

步骤B:5-(苄氧基)-4-羟基-3,3-二甲基-3H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-6(4H)-酮(化合物B.2)

将化合物B.1(13g,43mmol)溶入200mL的N，N-二甲基甲酰胺中，加入盐酸肼(30g,430mmol)，在80摄氏度搅拌2小时。将反应液倒入1L的水中，用500mL的乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥.过滤、旋干,柱层析纯化得产物B.2(5g，产率：38.8％)。LCMS ESI(+)m/z:299.1(M+1).

步骤C:5-(苄氧基)-3,3-二甲基-6-氧代-4,6-二氢-3H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-4-基碳酸叔丁酯(化合物B.3)

将化合物B.2(12.5g,41mmol),三乙胺(6.35g,62.9mmol)和N,N-二甲基-4-氨基吡啶(512mg，4.1mmol)溶入200mL的四氢呋喃中，在零度下将含有二碳酸二叔丁酯 (13.8g,63mmol)的50mL四氢呋喃溶液缓慢滴入，在室温搅拌1小时。反应液中加入500mL 的水，用250mL的乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥.旋干，纯化得产物B.3(12.5g,产率：74.9％，油状物)。LCMS ESI(+)m/z:399.1 (M+1).

步骤D:5-(苄氧基)-3,3-二甲基-6-氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-4-基碳酸叔丁酯(化合物B.4)

将化合物B.3(12.5g,31.3mmol)溶于200mL的四氢呋喃溶液中，在冰浴下分批加入硼氢化钠(2.2g,58.1mmol)，搅拌30分钟。用饱和的氯化铵水溶液淬灭.用250mL的乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，柱层析纯化得产物B.4(12g,产率：95.5％)。LCMS ESI(+)m/z:401.1(M+1).

步骤E:(苄基氧基)-4-((叔丁氧基羰基)氧基)-3,3-二甲基-6-氧代-2,3,4,6- 四氢-1H-吡啶并(9H-芴-9-基)并[1,2-b]哒嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物B.5)

将化合物B.4(5g,12.5mmol)溶于50mL四氢呋喃溶液中，冰浴下加入芴甲氧羰酰氯(3.9g，15.1mmol)和碳酸氢钠饱和水溶液(10mL)，升到室温搅拌0.5小时。加150mL水淬灭反应，用100mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，有机相用无水硫酸钠干燥.过滤、旋干，纯化得到产物B.5(7.9g，产率：67％)。LCMS ESI(+)m/z: 622.2(M+1).

步骤F:(9H-芴-9-基)甲基5-(苄氧基)-4-羟基-3,3-二甲基-6-氧代-2,3,4,6-四氢 -1H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物B.6)

将化合物B.5(7.9g,12.7mmol)溶于40mL二氯甲烷溶液中，冰浴下滴加三氟乙酸(20mL)，缓慢升至室温并搅拌30分钟。将反应液直接旋干得到产物B.6(6g，产率：98％)。LCMS ESI(+)m/z:523.2(M+1).

步骤G:(9H-芴-9-基)甲基5-(苄氧基)-3,3-二甲基-4,6-二氧代-2,3,4,6-四氢 -1H-吡啶并[1,2-b]啶-1-羧酸(化合物B.7)

将化合物B.6(6g,11.5mmol)溶于200mL二氯甲烷溶液中，冷却至0摄氏度，缓慢加入9.8g戴斯-马丁氧化剂，升至室温后搅拌1小时。加入碳酸氢钠和硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，用200mL二氯甲烷分三次萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥有机相。过滤、旋干，纯化得到产物B.7(5.5g，产率：98％)。LCMS ESI(+)m/z:521.2(M+1).

步骤H:5-(苄氧基)-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-4,6-二酮(中间物B)

将化合物B.7(5.5g,10.6mmol)溶于55mL二氯甲烷溶液中，加入5.5mL哌啶，在室温下搅拌1小时，加水淬灭反应，用200mL二氯甲烷分三次萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥有机相。过滤、旋干，柱层析纯化得到中间物B(2.8g，产率：94％)。LCMS ESI(+)m/z:299.1(M+1).¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.74(d,J＝ 7.6Hz,1H),7.49–7.41(m,2H),7.35(dd,J＝8.5,3.6Hz,3H),7.01(t,J＝7.1 Hz,1H),6.23(d,J＝7.6Hz,1H),5.16(s,2H),3.20(d,J＝7.1Hz,2H),1.11(s, 6H).

中间物C：5'-(苄氧基)-1'，2'-二氢螺[环丙烷-1,3'-吡啶并[1,2-b]哒嗪]-4'，6'-二酮

具体反应方程式如下所示：

步骤A:1-((3-(苄氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)(羟基)甲基)环丙烷甲醛(化合物C.1)

将3-(苄氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲醛(8g,30.4mmol)溶于400mL四氢呋喃中，在室温下加入吡咯烷(0.2mL，10mmol)，冰醋酸(1.73mL，45mmol)和环丙基甲醛(3g，36.5mmol)，搅拌2小时。把反应液直接旋干，过柱纯化得到产物C.1(1.1g,产率：12％)。LCMS ESI(+) m/z:301.1(M+1).

步骤B：4'，5'-二羟基螺[环丙烷-1,3'-吡啶并[1,2-b]哒嗪]-6'(4'H)-酮嗪]-6'(4'H)-酮(化合物C.2)

将化合物C.1(1.1g，3.67mmol)溶于20mL的N，N-二甲基甲酰胺中，加入盐酸肼(2.5g,36.7mmol)，升温至80度搅拌2小时。将反应液倒入100mL的水中，用60mL的乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，柱层析纯化得到产物C.2(670mg，产率：62％)。LCMS ESI(+)m/z:297.1(M+1).

步骤C：5'-(苄氧基)-6'-氧代-4'，6'-二氢螺[环丙烷-1,3'-吡啶并[1,2-b]哒嗪]-4'- 基酯(化合物C.3)

将化合物C.2(670mg，2.26mmol)，三乙胺(461mg，4.52mmol)和N,N-二甲基-4-氨基吡啶 (83mg，0.68mmol)溶入10mL的四氢呋喃中，在0度下将含有醋酸酐(462mg，4.52mmol)的3mL 四氢呋喃溶液缓慢滴入，然后在室温下搅拌1小时。反应液中加入10mL的水，用30mL的乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，过柱纯化得油状产物C.3(800mg，产率：99％)。LCMS ESI(+)m/z:339.1(M+1).

步骤D：5'-(苄氧基)-6'-氧代-1'，2'，4'，6'-四氢螺[环丙烷-1,3'-吡啶并[1,2-b] 吡啶]-4'-基酯(化合物C.4)

将化合物C.3(800mg，3.2mmol)溶于20mL的四氢呋喃溶液中，在冰浴下分批加入硼氢化钠(171mg，5.3mmol)，搅拌30分钟。用饱和的氯化铵溶液淬灭，用30mL的乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，纯化得产物C.4(725mg,产率：90％)。LCMS ESI(+)m/z:341.1(M+1).

步骤E:4'-乙酰氧基-5'-(苄氧基)-6'-氧代-4'，6'-二氢螺[环丙烷-1,3'-吡啶并[1,2-b] 哒嗪]-1'1H)-羧酸叔丁酯(化合物C.5)

将化合物C.4(900mg，2.64mmol),三乙胺(342mg，5.3mmol)和N,N-二甲基-4氨基吡啶(28mg，0.23mmol)溶入10mL的四氢呋喃中，在0度下将含有二碳酸二叔丁酯(641mg，5.3mmol) 的3mL四氢呋喃溶液缓慢滴入，然后在室温下搅拌1小时。反应液中加入20mL的水稀释，用30mL的乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，过柱纯化得到油状产物C.5(1.1g，产率：95％)。LCMS ESI(+)m/z:441.1(M+1).

步骤F：(苄氧基)-4'-羟基-6'-氧代-4'，6'-二氢螺[环丙烷-1,3'-吡啶并[1,2-b]哒嗪]-1'(21H)-羧酸叔丁酯(化合物C.6)

将化合物C.5(1.1g，2.50mmol)溶于20mL甲醇溶液中，加入碳酸钾(312mg,2.26mmol)，在室温下搅拌1小时。反应完后减压浓缩，剩余物加水(30mmL)稀释，用40mL乙酸乙酯萃取两次，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，纯化得到产物C.6(550mg，产率：55％)。 LCMS ESI(+)m/z:399.1(M+1).

步骤G：(苄氧基)-4'，6'-二氧代-4'，6'-二氢螺[环丙烷-1,3'-吡啶并[1,2-b]哒嗪]-1' (2'H)-甲酸叔丁酯(化合物C.7)

将化合物C.6(550mg，1.38mmol)溶于10mL二氯甲烷溶液中，冷却至0度，缓慢加入1.4g 戴斯-马丁氧化剂，逐渐升至室温搅拌1小时。加入碳酸氢钠和硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，用20mL二氯甲烷分三次萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥有机相。过滤、旋干，纯化得到产物C.7(500mg，产率：91％)。LCMS ESI(+)m/z:397.1(M+1).

步骤H：5'-(苄氧基)-1'，2'-二氢螺[环丙烷-1,3'-吡啶并[1,2-b]哒嗪]-4'，6'-二酮(中间物C)

将化合物C.7(500mg，1.26mmol)溶于10mL二氯甲烷溶液中，冰浴下慢慢滴加3mL三氟乙酸，加完后升到室温搅拌30分钟。将反应液直接旋干得到中间物C(100mg，产率：27.1％)。 LCMS ESI(+)m/z:297.1(M+1).

合成中间物C的方法被用来合成出下表中列出的中间物

表1

中间物系列2

中间物I：7,8-二氟-6，11-二氢二苯并([b，e]硫杂七环-1,2,3,4-d4-11-醇

具体合成步骤如下：

步骤A：苯硫酚-d5(化合物I.1)

将镁屑(4.4g，0.18mol)，1，2-二溴乙烷溶(1mL)加入到100mL四氢呋喃溶液中，氮气保护下，滴加溴苯-d5(2g,12.3mmol)，待反应引发后将溴苯d5(18g，0.11mol)的100mL 四氢呋喃溶缓慢滴加到反应液里，在70度回流一个小时。然后降至室温，分批加入5.5g的硫磺粉，搅拌反应一个小时。把反应液过滤，滤液用浓盐酸淬灭.水相用100mL的乙酸乙酯萃取两次，合并有机相.有机相用100mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干得到黄色油状的粗产物I.1(14g，0.12mol)。

步骤B：3,4-二氟-2-((苯硫基-d5)甲基)苯甲酸甲酯(化合物I.2)

将2-(溴甲基)-3,4-二氟苯甲酸甲酯(30.6g,0.12mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(150mL)中，冰浴下加入化合物I.1(14g,0.12mol)和碳酸钾(21.8g，0.16mol),在0℃下搅拌1小时。待反应完全后，将反应液倒入1L的水中，用200mL的乙酸乙酯萃取三次，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，柱层析纯化得到无色油状产物I.2(20.7g，59.8％)。LCMS ESI(+)m/z:300.1(M+1).

步骤C：3,4-二氟-2-((苯硫基-d5)甲基)苯甲酸(化合物I.3)

将化合物I.2(20.7g，0.069mol)溶于100mL的四氢呋喃和15mL的甲醇溶液中，室温下加入氢氧化钠水溶液(6N，100mL)，室温下搅拌过夜。反应液用浓盐酸中和至pH＝5，用200mL的乙酸乙酯萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干得到白色固体的化合物I.3(19.2g，产率：99.3％)。LCMS ESI(+)m/z:286.1(M+1).

步骤D：7,8-二氟二苯并[b,e]硫杂七环-11(6H)酮-1,2,3,4-d4(化合物I.4)

将化合物I.3(19.1g,66.9mmol)溶于40g多聚磷酸和150mL环丁砜中,升温至100℃并搅拌反应2小时。加水(400mL)到反应液中，用乙酸乙酯(200mLX3)萃取。有机相用饱和碳酸氢钠溶液(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干得到黄色固态化合物I.4(10.8g，产率:60.7％)。LCMS ESI(+)m/z:267.1(M+1).¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.51-7.38(m,2H),4.34(d,J＝1.0Hz,2H).

步骤E：7,8-二氟-6，11-二氢二苯并([b，e]硫杂七环-1,2,3,4-d4-11-醇(中间物I)

在冰浴条件下，将化合物1.4(100mg,0.38mmol)溶于四氢呋喃/甲醇(5mL/1mL) 混合溶液中，然后加入硼氢化钠(21mg，0.56mmol)，零度下继续搅拌1小时。待反应完全后，加2.5mL的饱和氯化铵溶液淬灭。用15mL乙酸乙酯萃取2遍，合并有机相。有机相用 20mL饱和食盐水洗涤。干燥浓缩，得到白色固体化合物中间物I(102mg，产率：99％)。LCMS ESI(+)m/z:269.1(M+1).

合成中间物I的方法被用于下表所列的中间物的合成

表2

实施例1

1'-(1,2,3,4-四氘代-7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-11-基)-5'-羟基-1”，2'-二氢螺[环丁烷-1,3'-吡啶并[1,2，2-b]哒嗪]-4'，6'-二酮

具体反应方程式如下所示：

步骤A：5'–(苄氧基)-1'-(7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-11-基 -1,2,3,4-D4)-1'，2'-二氢螺[环丁烷-1,3'-吡啶并[1,2-b]哒嗪]-4'，6'-二酮(化合物1.1)

将中间物D(130mg,0.42mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，然后加入中间物J(102.7mg,1.52mmol)和T3P/DMF(50％)溶液(5mL)到反应液中，反应在100℃下搅拌1 小时。用饱和碳酸氢钠溶液(5mL)淬灭反应，水相用乙酸乙酯(15mL)萃取2遍，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，纯化得到黄色固体化合物1.1(100mg，产率： 41.8％)。LCMS ESI(+)m/z:561.2(M+1).

步骤B:1'-(7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-11-基-1,2,3,4-d4)-5'-羟基-1'，2'-二氢螺[环丁烷-1,3'-吡啶并[1,2-b]哒嗪]-4，6'-二酮(化合物1)

将化合物1.1(100mg,0.18mmol)溶入5mL的N，N-二甲基甲酰胺，加入氯化锂(100mg,2.36mmol),加热至100度反应1h。往反应液中加入水10mL，乙酸乙酯10mL，搅拌后静置分层，水层用乙酸乙酯(10mL X 3)萃取，合并有机相。用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，粗产品经反相制备纯化，冻干后得到黄色固体化合物1(22mg，产率:26.3％)。LCMS ESI(+)m/z:471.1(M+1).

实施例2

采用实施例1相同的反应条件，化合物实施例2由中间体A和中间体I经两步反应得到。

1-(7,8-二氟-1,2,3,4-四氘-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-11-基)-5-羟基-2,3- 二氢-1H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-4，6二酮

LCMS ESI(+)m/z:431.1(M+1).

化合物实施例3和实施例4通过采用实施例1中相同的反应条件，从中间体B，中间体F 和中间体I经两步反应合成得到：

实施例3

1-(7,8-二氟-1,2,3,4-四氘-6,11-二氢二苯并[b,e]噻庚英-11-基-1,2,3,4-d4)-5-羟基-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2b]哒嗪-4,6-二酮

LCMS ESI(+)m/z:459.1(M+1).

实施例4

1'-(7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-11-基-1,2,3,4-d4)-5'-羟基-1”，2'-二氢螺[环戊烷-1,3'-二氢吡啶并[1,2，2-b]哒嗪]-4'，6'-二酮

LCMS ESI(+)m/z:485.2(M+1).

实施例5

1-(-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-d-11-基)-5-羟基-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-4，6二酮

具体反应方程式如下所示：

步骤A：6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-d-11-醇(化合物5.1)

称取化合物二苯并[b，e]硫杂七环-11(6H)-酮(100mg，0.44mmol)，溶解于5mL四氢呋喃和1mL甲醇中，分批加入硼氘化钠(28mg，0.663mmol)，在20度搅拌1小时。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(10mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取2次，合并的有机相用饱和食盐水(15mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到产物5.1(100mg，黄色固体，产率：99％)。

步骤B：5-(苄氧基)-1-(6,11-二氢二苯并[b，e]硫-d-11-基)-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-4,6-二酮(化合物5.2)

将化合物5.1(100mg，0.436mmol)和化合物B(100mg，0.335mmol)溶于4mL1- 丙基磷酸酐/N,N-二甲基甲酰胺(50％)。反应液于100度和氮气保护下，搅拌1小时。向反应液中加入水(20mL)，用乙酸乙酯(30ml)萃取2次，合并的有机相用饱和食盐水(15mL) 洗涤3次，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝0/1)纯化得产物5.2(122mg，白色固体，产率：71％)。LCMS ESI(+)m/z:510.2(M+1).

步骤C：1-(-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-d-11-基)-5-羟基-3,3-二甲基-2,3-二氢 -1H-吡啶并[1,2-b]哒嗪-4，6二酮(化合物5)

将化合物5.2(50mg，0.098mmol)溶于3mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入氯化锂(83mg， 1.96mmol)。反应液于100度和氮气保护下，搅拌4小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反相制备纯化得产物(36mg，淡黄色固体，产率：88％)。LCMS ESI(+)m/z:420.1(M+1).

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.47-7.34(m,4H),7.30-7.22(m,1H),7.13-7.02 (m,2H),6.87-6.78(m,2H),5.75(d,J＝7.6Hz,1H),5.66(d,J＝13.2Hz,1H), 3.87(d,J＝13.2Hz,1H),3.64(d,J＝14.8Hz,1H),3.24(d,J＝14.8Hz,1H), 1.38(s,3H),1.07(s,3H)

实施例6

1-(7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-d2-11-基)-5-羟基-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2b]哒嗪-4,6-二酮

具体反应方程式如下所示：

步骤A：7,8-二氟二苯并[b，e]硫杂七环-d2-11(6H)-酮(化合物6.1)

将化合物7,8-二氟二苯并[b，e]硫杂七环-11(6H)-酮(100mg，0.381mmol)溶于4mL氘代甲醇和1mL1,2-二氯乙烷中，加入甲醇钠(83mg，1.53mmol)，在50度和氮气保护下搅拌12小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取2次。合并的有机相用饱和食盐水(15mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析 (石油醚/乙酸乙酯＝20/1)纯化得产物(60mg，白色固体，产率：60％)。

步骤B：7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-d2-11-醇(化合物6.2)

称取化合物6.1(60mg，0.227mmol)，溶解于4mL四氢呋喃和1mL甲醇中，分批加入硼氢化钠(13mg，0.340mmol)，在0度搅拌1小时。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(10 mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取2次，合并的有机相用饱和食盐水(15mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到产物(55mg，白色固体，产率：92％)。

步骤C：5-(苄氧基)-1-(7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]硫-d2-11-基)-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,22-b]哒嗪-4,6-二酮(化合物6.3)

将化合物6.2(55mg，0.205mmol)和化合物B(51mg，0.171mmol)溶于3ml 1-丙基磷酸酐/N,N-二甲基甲酰胺50％。反应液于100度和氮气保护下，搅拌1小时。向反应液中加入水(20ml)，用乙酸乙酯(30ml)萃取2次，合并的有机相用饱和食盐水(15ml)洗 3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝0/1)纯化得产物(40mg，白色固体，产率：43％)。LCMS ESI(+)m/z:547.2(M+1).

步骤D：1-(7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-d2-11-基)-5-羟基-3,3-二甲基 -2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2b]哒嗪-4,6-二酮(化合物6)

将化合物6.3(40mg，0.073mmol)溶于3ml N,N-二甲基甲酰胺中，加入氯化锂(62mg， 1.46mmol)。反应液于100度和氮气保护下，搅拌3小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反相制备纯化得产物(20mg，淡黄色固体，产率：60％)。LCMS ESI(+)m/z:457.1(M+1).

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.49-7.27(m,3H),7.18-7.00(m,2H),6.92-6.77 (m,2H),5.73(d,J＝7.6Hz,1H),5.29(s,1H),3.63(d,J＝15.2Hz,1H),3.31 (d,J＝15.2Hz,1H),1.38(s,3H),1.07(s,3H)

实施例7

1-(7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-d3-11-基)-5-羟基-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2b]哒嗪-4,6-二酮

具体反应方程式如下所示：

步骤A：7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-d3-11-醇(化合物7.1)

称取化合物6.1(134mg，0.507mmol)，溶解于4mL四氢呋喃和1ml甲醇中，分批加入硼氘化钠(28mg，0.66mmol)，在20度搅拌1小时。向反应液中加入饱和氯化铵溶液 (10mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取2次，合并的有机相用饱和食盐水(15mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到产物(130mg，白色固体，产率：96％)。

步骤B：5-(苄氧基)-1-(7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]硫-d3-11-基)-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,22-b]哒嗪-4,6-二酮(化合物7.2)

将化合物7.1(130mg，0.48mmol)和化合物3.3(120mg，0.40mmol)溶于4ml 1- 丙基磷酸酐/N,N-二甲基甲酰胺50％。反应液于100度和氮气保护下，搅拌1小时。向反应液中加入水(20ml)，用乙酸乙酯(30ml)萃取2次，合并的有机相用饱和食盐水(15ml) 洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝0/1)纯化得产物(110mg，白色固体，产率：50％)。LCMS ESI(+)m/z:548.2(M+1).

步骤C：1-(7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-d3-11-基)-5-羟基-3,3-二甲基 -2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2b]哒嗪-4,6-二酮(化合物7)

将化合物7.2(110mg，0.200mmol)溶于3ml N,N-二甲基甲酰胺中，加入氯化锂(170mg， 4.02mmol)。反应液于100度和氮气保护下，搅拌2小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反相制备纯化得产物(47mg，淡黄色固体，产率：51.1％)。LCMS ESI(+)m/z:458.1(M+1).

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.46-7.29(m,3H),7.20-7.00(m,2H),6.92-6.80 (m,2H),5.75(d,J＝7.6Hz,1H),3.64(d,J＝14.8Hz,1H),3.32(d,J＝14.8Hz,1 H),1.39(s,3H),1.08(s,3H)

实施例8

1'-(7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-d2-11-基-1,2, 3,4-d4)-5'-羟基-1'，2'-二氢螺[环丁烷-1,3'-吡啶并[1,2，2-b]哒嗪]-4',6'-二酮采用化合物6相同的条件,由中间体I和中间体D经过四步合成得到实施例8 LCMS ESI(+)m/z:473.2(M+1).

实施例9

(S)-1'-(1,2,3,4-四氘代-7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-11-基)-5'-羟基-1”，2'-二氢螺[环丁烷-1,3'-吡啶并[1,2，2-b]哒嗪]-4'，6'-二酮

具体反应如下：

步骤A：化合物1.2(1.10g,2.02mmol)经过手性分离，得到化合物9.1(500mg，45％)。

手性分离条件：

手性柱:ChiralCel OD-H(Daicel chemical Industries,Ltd,250*30mm I.D.,5um)；流动相A:超临界CO2,流动相B:异丙醇(A:B＝60:40)；流速：50ml/min；柱温:38℃；检测波长:220nm

步骤B:二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]硫_-11-基)-5-羟基-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H- 吡啶并[1,2-b]哒嗪-4,6-二酮(化合物9)

将化合物9.1(50mg,0.089mmol)溶解在DMF(0.5mL)溶液中，加入氯化锂(16mg,0.37mmol)，在100℃下搅拌5小时。将溶液冷却到室温，直接经反相制备纯化，冻干后得到实施例9(18mg,42.9％)。LCMS ESI(+)m/z:471.1(M+1)。

采取实施例9同样的分离、合成条件，由实施例3，实施例4经SFC分离，脱苄得到实施例10和实施例11

实施例10

(S)-1-(7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-11-基-1,2,3,4-d4)-5-羟基 -3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2b]哒嗪-4,6-二酮

LCMS ESI(+)m/z:459.1(M+1).

实施例11

(S)-1'-(7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-11-基-1,2,3,4-d4)-5'-羟基-1”， 2'-二氢螺[环戊烷-1,3'-二氢吡啶并[1,2，2-b]哒嗪]-4'，6'-二酮

LCMS ESI(+)m/z:485.2(M+1)。

实施例12

(S)-((1”-(7,8-二氟-6,11-二氢-1,2,3,4-四氘二苯并[b，e]噻庚英-11-基)-4”，6'-二氧代-1'，2'，4'，6'-四氢螺[环丁烷-1,3'-吡啶并[1,2-b]哒嗪]-5'-基)氧基)甲基碳酸甲酯

具体合成路线如下方程式所示：

步骤A：氯甲基甲基碳酸酯(化合物12.1)

将称量好的氯甲酸氯甲酯(2g，15.5mmol)溶解于二氯甲烷(15mL)中，然后将反应瓶置于冰浴下，紧接着将甲醇(992mg，31mmol)和吡啶(1.84g，23.25mmol)加入到反应液中，然后反应液在常温条件下搅拌3小时。通过TLC(无荧光，用高锰酸钾显色剂)来确认反应完全。反应液用二氯甲烷(10mL)进行稀释，然后分别用饱和的碳酸氢钠溶液、1mol/L的盐酸溶液、饱和的碳酸氢钠溶液和饱和食盐水进行洗涤，无水硫酸钠对有机相干燥，过滤，浓缩。最后得到粗品化合物12.1(1.1g，收率：56.7％，淡黄色油状)。

步骤B：碘甲基甲基碳酸酯(化合物12.2)

将化合物12.1(1.1g，8.8mmol)溶解于丙酮(15mL)中，然后碘化钠(3.96g，26.4mmol) 加入到反应液中，将反应瓶置于55摄氏度的油浴锅中搅拌2小时。反应完全后，用水泵将溶剂旋干，将残渣溶于水(20mL)中，用正己烷对水相萃取，然后合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，旋干。最后得到粗品产物12.2(890mg，收率：46.8％，棕黄色液体)。

步骤C：(S)-((1'-(7,8-二氟-1,2,3,4-四氘-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英 -11-基)-4'，6'-二氧代-1'，2'，4'，6'-四氢螺[环丁烷-1,3'-吡啶并[1,2-b]哒嗪]-5'- 基)氧基)甲基碳酸甲酯(化合物12)

将称量好的化合物实施例9(60mg，0.128mmol)溶解于丙酮(6mL)中，然后将碳酸铯(85.4mg，0.262mmol)和化合物12.2(84.89mg，0.393mmol)加入到反应瓶中，常温搅拌过夜。通过LCMS确认反应完成。用水泵将反应溶剂旋干，残渣溶于乙酸乙酯(15mL)中，有机相分别用水(10mL)和饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，将粗品溶于甲醇(3mL)中，然后通过反向制备仪器进行制备纯化，最后得到化合物实施例12(24mg，产率：33.5％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:559.2(M+1).

实施例12的合成方法被用来合成了以下实验例。

表3

实验例34

1'-(1,2,3,4-四氘代-8-氟-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-11-基)-5'-羟基-1”，2'- 二氢螺[环丙烷-1,3'-吡啶并[1,2，2-b]哒嗪]-4'，6'-二酮

使用合成实验例2的方法，用中间物C和中间物K合成出实验34

LCMS ESI(+)m/z:439.1(M+1).

实验例35

((1-(8-氟-6,11-二氢-1,2,3,4-四氘二苯并[b，e]噻庚英-11-基)-4”，6'-二氧代-1'，2'，4'，6'-四氢螺[环丙烷-1,3'-吡啶并[1,2-b]哒嗪]-5'-基)氧基)甲基碳酸甲酯

用合成实验例12的方法将实验例34转化成实验例35

LCMS ESI(+)m/z:527.2(M+1).

实施例36

1'-(1,2,3,4,7,8,9,10-八氘代-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-11-基)-5'-羟基-1”， 2'-二氢螺[环戊烷-1,3'-吡啶并[1,2，2-b]哒嗪]-4'，6'-二酮

使用合成实验例1的方法，用中间物D和中间物K合成出实验例36

LCMS ESI(+)m/z:453.2(M+1).

实施例37.

(1'-(1,2,3,4,7,8,9,10-八氘代-6,11-二氢二苯并[b，e]噻庚英-11-基)-4”，6'-二氧代-1'，2'，4'，6'-四氢螺[环戊烷-1,3'-吡啶并[1,2-b]哒嗪]-5'-基)氧基)甲基碳酸甲酯

用合成实验例12的方法将实验例36转化成实验例37。

LCMS ESI(+)m/z:555.2(M+1).

实验例38：抑制病毒增殖活性(EC₅₀)和化合物的细胞毒性(CC₅₀)

1).细胞处理：将MDCK细胞以一定密度接种于384孔板内，随后细胞置于37℃，5％CO2 培养箱中培养过夜。

2)化合物处理：待测化合物将用DMSO倍比稀释好后加入细胞培养板中。

3)病毒接种：随后在抗病毒活性检测孔内加入稀释好的influenza A/Weiss/43(H1N1)病毒液，细胞毒性测试孔中不加病毒。DMSO终浓度为0.5％。将细胞置于37℃，5％CO2培养箱中培养5天直到病毒对照孔(无化合物)中的细胞病变率达到80-95％。

4)细胞活性检测：每孔加入细胞活性检测试剂CCK-8检测试剂，37℃，5％CO2培养箱中培养细胞3-4小时后，用分光光度仪检测信号值，原始数据用于化合物抗流感病毒活性和细胞毒性计算。化合物剂量反应曲线及其EC50和CC50值将由GraphPad Prism软件分析后得到。.

用此方法测得到的部分化合物的抑制病毒增殖活性(EC50)和化合物的细胞毒性(CC50)列于下表：

实验例39：实验例11产物的比格犬药物动力学实验

实验例11产物的静注给药溶液配制：分别准确称量约40mg的实验例11，溶解于总体积 10％的N,N-二甲基乙酰胺(DMA)中，加入总体积10％聚氧乙烯蓖麻油和80％生理盐水，涡旋，过滤，得浓度为1mg·mL^-1(按游离碱计)的静注给药溶液。

实验例11产物的灌胃给药试液配制：分别准确称量约180mg的实验例11，溶解于总体积10％的N,N-二甲基乙酰胺(DMA)中，加入总体积10％聚氧乙烯蓖麻油和80％生理盐水，涡旋，得浓度为1mg·mL^-1(按游离碱计)的灌胃给药溶液。

实验当天，称量体重后，按以下公式计算每只比格犬的理论给药体积。给药试液应实验当天现配现用。每只比格犬的实际给药量和全血样品的采集时间需详细记录在相应表格中。比格犬给药4h后可恢复进食，实验过程中可自由饮水。

实验前一天，比格犬禁食过夜。实验当天，A组比格犬分别静脉注射1mg·kg^-1(按游离碱计)的实验例11的溶液，于给药前及给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、12和24h，由颈静脉采血0.5mL，置于肝素钠抗凝管中抗凝后，立即准确吸取200μL全血，加到已加入600μL乙腈的试管中蛋白沉淀，涡旋震荡，置于湿冰上。保存在-90至-60℃冰箱，用于生物样品分析。

B组比格犬灌胃5mg(按游离碱计)的实验例11的试液，分别于给药前及给药后0.25、 0.5、1、2、4、8、12和24h，由颈静脉采血0.5mL，置于肝素钠抗凝管中抗凝后，立即准确吸取200μL全血，加到已加入600μL乙腈的试管中蛋白沉淀，涡旋震荡，置于湿冰上。保存在-90至-60℃冰箱，用于生物样品分析。

药动结果如图1和图2以及下表格所示：