CN111234975A - 一种丰花玫瑰花酒及其酿制方法 - Google Patents

一种丰花玫瑰花酒及其酿制方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种丰花玫瑰花酒及其酿制方法。所述方法如下：1）将糯米浸泡、蒸熟、冷却；2）采摘丰花品种可食用玫瑰花，洗净，将玫瑰花瓣分开；3）将玫瑰花瓣分次与熟糯米混合拌匀得到花米混合物，并加入安琪酒曲开始发酵，然后在发酵第7天加入白酒曲，拌匀；4）将拌匀后的花米混合物放置于22‑28℃环境中自然发酵35‑40天；5）发酵结束后，将发酵产物过滤，装瓶，得到丰花玫瑰花酒。本发明将玫瑰花洗净后与糯米直接拌匀进行发酵，在室温条件下可以充分完成酵母发酵的过程，成本低，可实现玫瑰花瓣中多种原始的天然活性物质得到充分降解释放，呈现出发酵玫瑰花酒更加醇厚的玫瑰芳香和口感，同时具有微量的酒精度，赋予怡人的酒精刺激。

Description

一种丰花玫瑰花酒及其酿制方法
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种丰花玫瑰花酒及其酿制方法。
背景技术
丰花品种食用玫瑰花色彩艳丽、香气怡人，开花期集中于每年的4-6月，检测表明花中成分高达300多种，含有丰富的花色苷、醇、醛、脂肪酸、多糖、多酚、黄酮等活性物质，具有很高的药用价值和营养价值，对人体具有活血化淤、调节内分泌、排毒养颜、缓解紧张心情、助消化睡眠等多种功效。早在17世纪王象晋所著的《群芳谱》中就有记载，食用玫瑰“堪入茶、入酒、入蜜”等食用用途。食用玫瑰花可加工成饮料、食品和化妆品等，如制成玫瑰花茶、玫瑰花酒、玫瑰花酱、玫瑰浸膏、玫瑰纯露、玫瑰精油等，都是名贵的天然产品。
目前玫瑰花酒的酿制方法，一般是将玫瑰花瓣浸泡后所得浸提液再与糯米混合发酵，其酿制工艺还有待改进。
发明内容
本发明的目的在于提供一种充分释放玫瑰花瓣中天然活性物质的丰花玫瑰花酒及其酿制方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，包括以下步骤：
1）将糯米浸泡、蒸熟、冷却，得到熟糯米；
2）采摘丰花品种可食用玫瑰花，用清水洗去尘土，将玫瑰花瓣分开；
3）将清洗后的玫瑰花瓣分次与熟糯米混合拌匀得到花米混合物，并加入安琪酒曲开始发酵，所述分次是指在发酵第1、3、5天往熟糯米中加入玫瑰花瓣，3次加入的玫瑰花瓣总重量与熟糯米重量比为2.8-3.2∶10，所述安琪酒曲在发酵开始的第一天加入；
然后在发酵第7天加入白酒曲，拌匀，起到降酸作用；
4）将步骤3）拌匀后的花米混合物放置于22-28℃环境中自然发酵35-40天；
5）发酵结束后，将发酵产物过滤，装瓶，得到丰花玫瑰花酒。
步骤1）所述浸泡是将糯米用水浸泡15-20小时，沥干时米粒用手指可碾碎。
步骤1）所述冷却是将蒸熟后的糯米在室内摊凉静置40-50分钟，温度下降至30-35℃。
步骤2）所述丰花品种可食用玫瑰花的采摘时间为早晨4-6点钟。
步骤3）所述安琪酒曲与花米混合物的重量比为30-35g∶7500g。
步骤3）所述白酒曲的用量为花米混合物总重量的0.50-0.55%。
步骤3）每次加入的玫瑰花瓣重量相同，即为加入的玫瑰花瓣总重量的1/3。
步骤5）所述过滤是采用纱布过滤。
本发明所用到的容器、器具等在使用之前进行高温杀菌。
本发明采用以上技术方案，酿制的丰花玫瑰花酒的总花色苷含量为7.43 mg/100g-8.5mg/100g，总糖含量为5.79%-5.83%，总酸含量为8.55g/kg-8.62g/kg，可溶性固形物含量为25.3%-26.1%。用丰花玫瑰花发酵酿制的玫瑰花酒富含花色苷，花色苷具有抗氧化、防癌、抗炎、抑制血小板凝集、预防糖尿病、活血等功能活性，玫瑰花酒中富含花色苷等功能活性物质，共同呈现出玫瑰花酒的功能特性，有美容养颜、和血化瘀、静心益脑、帮助睡眠、滋阴补阳、健脾益胃等功效。
本发明的有益效果：
1、本发明选择安琪酵母，可实现玫瑰花酒具有醇厚的玫瑰花香味，同时具有微量的酒精度，赋予怡人的酒精刺激。
2、本发明将玫瑰花洗净后与糯米直接拌匀进行发酵，不同于现有技术利用鲜花浸提液进行发酵，在室温条件下可以充分完成酵母发酵的过程，成本低，可实现玫瑰花瓣中多种原始的天然活性物质得到充分降解释放，呈现出发酵玫瑰花酒更加醇厚的芳香和口感，发酵还可以抑制有害菌和降解低质量的纤维素和植物蛋白等。
具体实施方式
一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，包括以下步骤：
1）将糯米用水浸泡15-20小时（沥干时米粒用手指可碾碎），然后蒸熟，蒸熟后的糯米在室内摊凉静置40-50分钟，温度下降至30-35℃，得到熟糯米；
2）在早晨4-6点钟采摘丰花品种可食用玫瑰花，用清水洗去尘土，将玫瑰花瓣分开；
3）将清洗后的玫瑰花瓣分次与熟糯米混合拌匀得到花米混合物，并加入安琪酒曲开始发酵，所述分次是指在发酵第1、3、5天往熟糯米中加入玫瑰花瓣，每次加入的玫瑰花瓣重量相同，3次加入的玫瑰花瓣总重量与熟糯米重量比为2.8-3.2∶10，所述安琪酒曲在发酵开始的第一天加入，安琪酒曲与花米混合物的重量比为30-35g∶7500g；
然后在发酵第7天加入花米混合物总重量0.50-0.55%的白酒曲，起到降酸作用，并拌匀；
4）将步骤3）拌匀后的花米混合物放置于22-28℃环境中自然发酵35-40天；
5）发酵结束后，将发酵产物用纱布过滤，装瓶，得到丰花玫瑰花酒。
实施例1
一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，包括以下步骤：
1）将糯米用水浸泡15小时（沥干时米粒用手指可碾碎），然后蒸熟，蒸熟后的糯米在室内摊凉静置40分钟，温度下降至33℃，得到熟糯米；
2）在早晨4-6点钟采摘丰花品种可食用玫瑰花，用清水洗去尘土，将玫瑰花瓣分开；
3）将清洗后的玫瑰花瓣分次与熟糯米混合拌匀得到花米混合物，并加入安琪酒曲开始发酵，所述分次是指在发酵第1、3、5天往熟糯米中加入玫瑰花瓣，每次加入的玫瑰花瓣重量相同，3次加入的玫瑰花瓣总重量与熟糯米重量比为2.8∶10，所述安琪酒曲在发酵开始的第一天加入，安琪酒曲与花米混合物的重量比为30g∶7500g；
然后在发酵第7天加入花米混合物总重量0.50%的白酒曲，起到降酸作用，并拌匀；
4）将步骤3）拌匀后的花米混合物放置于22℃环境中自然发酵40天；
5）发酵结束后，将发酵产物用纱布过滤，装瓶，得到丰花玫瑰花酒。
本实施例得到的丰花玫瑰花酒指标指如下：
1、感官指标
色泽：特有的玫瑰红色。
外观：清澈透明，无沉淀，无悬浮物质。
香味：含有浓郁的玫瑰花特有花香。
口感：甘甜清香，醇厚柔顺，饮后口齿留香、香甜怡人，带有特殊的玫瑰香味，带有一点酒味。
2、理化指标：
总花色苷：7.43 mg/100g；
总糖：5.80%；
总酸：8.62g/kg；
可溶性固形物：25.8%。
实施例2
一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，包括以下步骤：
1）将糯米用水浸泡20小时（沥干时米粒用手指可碾碎），然后蒸熟，蒸熟后的糯米在室内摊凉静置50分钟，温度下降至30℃，得到熟糯米；
2）在早晨4-6点钟采摘丰花品种可食用玫瑰花，用清水洗去尘土，将玫瑰花瓣分开；
3）将清洗后的玫瑰花瓣分次与熟糯米混合拌匀得到花米混合物，并加入安琪酒曲开始发酵，所述分次是指在发酵第1、3、5天往熟糯米中加入玫瑰花瓣，每次加入的玫瑰花瓣重量相同，3次加入的玫瑰花瓣总重量与熟糯米重量比为3.2∶10，所述安琪酒曲在发酵开始的第一天加入，安琪酒曲与花米混合物的重量比为35g∶7500g；
然后在发酵第7天加入花米混合物总重量0.55%的白酒曲，起到降酸作用，并拌匀；
4）将步骤3）拌匀后的花米混合物放置于28℃环境中自然发酵35天；
5）发酵结束后，将发酵产物用纱布过滤，装瓶，得到丰花玫瑰花酒。
本实施例得到的丰花玫瑰花酒指标指如下：
1、感官指标
色泽：特有的玫瑰红色。
外观：清澈透明，无沉淀，无悬浮物质。
香味：含有浓郁的玫瑰花特有花香。
口感：甘甜清香，醇厚柔顺，饮后口齿留香、香甜怡人，带有特殊的玫瑰香味，带有一点酒味。
2、理化指标：
总花色苷：8.0mg/100g；
总糖：5.83%；
总酸：8.55g/kg；
可溶性固形物：25.3%。
实施例3
一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，包括以下步骤：
1）将糯米用水浸泡18小时（沥干时米粒用手指可碾碎），然后蒸熟，蒸熟后的糯米在室内摊凉静置45分钟，温度下降至32℃，得到熟糯米；
2）在早晨4-6点钟采摘丰花品种可食用玫瑰花，用清水洗去尘土，将玫瑰花瓣分开；
3）将清洗后的玫瑰花瓣分次与熟糯米混合拌匀得到花米混合物，并加入安琪酒曲开始发酵，所述分次是指在发酵第1、3、5天往熟糯米中加入玫瑰花瓣，每次加入的玫瑰花瓣重量相同，3次加入的玫瑰花瓣总重量与熟糯米重量比为3.0∶10，所述安琪酒曲在发酵开始的第一天加入，安琪酒曲与花米混合物的重量比为32g∶7500g；
然后在发酵第7天加入花米混合物总重量0.52%的白酒曲，起到降酸作用，并拌匀；
4）将步骤3）拌匀后的花米混合物放置于25℃环境中自然发酵37天；
5）发酵结束后，将发酵产物用纱布过滤，装瓶，得到丰花玫瑰花酒。
本实施例得到的丰花玫瑰花酒指标指如下：
1、感官指标
色泽：特有的玫瑰红色。
外观：清澈透明，无沉淀，无悬浮物质。
香味：含有浓郁的玫瑰花特有花香。
口感：甘甜清香，醇厚柔顺，饮后口齿留香、香甜怡人，带有特殊的玫瑰香味，带有一点酒味。
2、理化指标：
总花色苷：8.5mg/100g；
总糖：5.79%%；
总酸：8.60g/kg；
可溶性固形物：26.1%。
测定的玫瑰香气成分如下：经气相色谱质谱联用仪检测，检测出玫瑰花酒的香气成分共有异丙硫醇、甘油醛、3-甲基-1-丁醇、(2R,3R)-(-)-2,3-丁二醇、2,3-丁二醇、乳酸乙酯、糠醛、3-甲基丁酸、2-甲基丁酸、正己醇、乙酸-3-甲基-1-丁醇、2-庚酮、3-(3-羟基丙氧基)丙-1-醇、戊基甲基甲醇、丁内酯、苯甲醛、乳酸異丁酯、2-(2-甲基-2-丙基)-5-丙基-1,3-二氧戊环-4-酮、己酸、6-甲基-5-庚烯-2-醇、己酸乙酯、2-氧戊二酸、柠檬烯、苯甲醇、苯乙醛、十一烷、DL-2-羟基-4-甲基、酸乙酯、乳酸异戊酯、乳酸异戊酯、正辛醇、庚酸、芳樟醇、壬醛、玫瑰醚、苯乙醇、橙花醚、丁二酸二乙酯、辛酸乙酯、癸醛、3,7-二甲基-7-辛烯醇4-蒈烯、香叶醇、醋酸苯乙酯、4-蒈烯、壬酸、丁香酚、椰子醛、甲基丁香酚、5-(2-甲基丙基)壬烷、2,4-二叔丁基苯酚、十四酸乙酯、棕榈酸乙酯、9-十六碳烯酸乙酯等53种，其中异丙硫醇含量最高，达到48.76%，其次分别为甘油醛16.54%、3-甲基-1-丁醇12.04%、苯乙醇4.87%和乳酸乙酯3.45%。

Claims (10)

1.一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，其特征在于：其包括以下步骤：
1）将糯米浸泡、蒸熟、冷却，得到熟糯米；
2）采摘丰花品种可食用玫瑰花，用清水洗去尘土，将玫瑰花瓣分开；
3）将清洗后的玫瑰花瓣分次与熟糯米混合拌匀得到花米混合物，并加入安琪酒曲开始发酵，所述分次是指在发酵第1、3、5天往熟糯米中加入玫瑰花瓣，3次加入的玫瑰花瓣总重量与熟糯米重量比为2.8-3.2∶10，所述安琪酒曲在发酵开始的第一天加入；
然后在发酵第7天加入白酒曲，拌匀；
4）将步骤3）拌匀后的花米混合物放置于22-28℃环境中自然发酵35-40天；
5）发酵结束后，将发酵产物过滤，装瓶，得到丰花玫瑰花酒。
2. 根据权利要求1所述的一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，其特征在于： 步骤1）所述浸泡是将糯米用水浸泡15-20小时。
3.根据权利要求1所述的一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，其特征在于：步骤1）所述冷却是将蒸熟后的糯米在室内摊凉静置40-50分钟，温度下降至30-35℃。
4.根据权利要求1所述的一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，其特征在于：步骤2）所述丰花品种可食用玫瑰花的采摘时间为早晨4-6点钟。
5.根据权利要求1所述的一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，其特征在于：步骤3）所述安琪酒曲与花米混合物的重量比为30-35g∶7500g。
6.根据权利要求1所述的一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，其特征在于：步骤3）所述白酒曲的用量为花米混合物总重量的0.50-0.55%。
7.根据权利要求1所述的一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，其特征在于：步骤3）每次加入的玫瑰花瓣重量相同，即为加入的玫瑰花瓣总重量的1/3。
8.根据权利要求1所述的一种丰花玫瑰花酒的酿制方法，其特征在于：步骤5）所述过滤是采用纱布过滤。
9.根据权利要求1-8任一方法得到的丰花玫瑰花酒。
10. 根据权利要求9所述的丰花玫瑰花酒，其特征在于：所述丰花玫瑰花酒的总花色苷含量为7.43 mg/100g-8.5mg/100g，总糖含量为5.79%-5.83%，总酸含量为8.55g/kg-8.62g/kg，可溶性固形物含量为25.3%-26.1%。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113122414A (zh) * 2021-05-19 2021-07-16 贵州水之源生物科技有限公司 一种发酵玫瑰花酒的传统制备工艺

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010089758A2 (en) * 2008-05-12 2010-08-12 Jayashree Rajendra Yadav Rose petal wine and method of producing the same
CN104694366A (zh) * 2015-03-25 2015-06-10 泸州品创科技有限公司 玫瑰香米烧酒及其制作方法
CN105820926A (zh) * 2016-05-24 2016-08-03 刘忠林 一种玫瑰酵酒的生产工艺
CN110527609A (zh) * 2019-09-27 2019-12-03 贵州省亚热带作物研究所 一种树莓果酒的发酵工艺

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010089758A2 (en) * 2008-05-12 2010-08-12 Jayashree Rajendra Yadav Rose petal wine and method of producing the same
CN104694366A (zh) * 2015-03-25 2015-06-10 泸州品创科技有限公司 玫瑰香米烧酒及其制作方法
CN105820926A (zh) * 2016-05-24 2016-08-03 刘忠林 一种玫瑰酵酒的生产工艺
CN110527609A (zh) * 2019-09-27 2019-12-03 贵州省亚热带作物研究所 一种树莓果酒的发酵工艺

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
付羚等: "玫瑰花甜白酒饮料的研制", 《食品研究与开发》 *
孙健: "花卉米酒工艺及陈酿的研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)》 *
王丹丹 等: "凤窝酒曲中乳酸菌的分离及其作用下的米酒品质评价", 《中国酿造》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113122414A (zh) * 2021-05-19 2021-07-16 贵州水之源生物科技有限公司 一种发酵玫瑰花酒的传统制备工艺

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