CN111233999B - 一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，涉及生物制药技术领域。其技术要点是：采用阴离子交换树脂作为吸附剂，加入到孕妇尿液中进行搅拌、过滤、洗涤，通过乙酸铵溶液经层析法进行洗脱，然后对洗脱液进行沉淀，收集沉淀以及测定效价，得到人绒毛膜***。通过上述方法对人尿中的人绒毛膜***进行提取，增加了提纯效率，节约了生产成本，减少了污染排放。
Description
技术领域
本发明涉及生物制药技术领域，更具体地说，它涉及一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法。
背景技术
人绒毛膜***(HCG)是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，是由α和β二聚体的糖蛋白组成的。人绒毛膜***(HCG)，由合体滋养细胞合成。成***性因受精的卵子移动到子宫腔内着床后，形成胚胎，在发育成长为胎儿的过程中，胎盘合体滋养层细胞产生大量的人绒毛膜***(HCG)，可通过孕妇血液循环而***到尿中。当妊娠1～2.5周时，血清和尿中的HCG水平即可迅速升高，第8周孕期达到高峰，至孕期第4个月始降至中等水平，并一直维持到妊娠末期。
现在国内外人们提取人绒毛膜***(HCG)是从孕妇尿中提取。人绒毛膜***(HCG)在医学上有重要的用途，在国际医药市场上人绒毛膜***(HCG)的需要量是很大的。人绒毛膜***(HCG)是分子量约为30000-40000的糖蛋白性激素，它能刺激性腺活动，对雌性可促使卵胞成熟及***功能，对雄性可促使细精管功能及***活动，增加雄性素产生，促使睾丸下降，可治疗神经衰弱，习惯性流产，严重子宫出血，闭经，***症等，而且，人绒毛膜***(HCG)还可以用来制备妊娠试剂和放射免疫试剂，用以妊娠检验和绒毛膜癌的诊断。
在申请公开号为CN1302818A的中国发明专利申请中公开了一种高纯度的人绒毛膜***(HCG)及其制备方法，本发明是从妊娠女性尿液中提取出的一种人绒毛膜***(HCG)的分离纯化技术。孕妇尿液中存在含有人绒毛膜***(HCG)，通过苯甲酸钠或者高岭土，乙醇吸附制得人绒毛膜***(HCG)粗制品。
本发明制备方法的特征是通过用醋酸钠的高盐抽提和低盐反抽技术得到人绒毛膜***(HCG)中间体，经过SP-葡聚糖凝胶的分离纯化技术制得一种高纯度的人绒毛膜***(HCG)，经过无菌无热原的处理制得医用的注射用人绒毛膜***(HCG)精品原料。
1、粗品制造：
吸附、洗脱、干燥，按孕妇尿量:苯甲酸乙醇饱和液:乙醇＝1:0.75:5的配料比投料。
取盐酸调尿液pH至4-5，加苯甲酸乙醇饱和液搅拌1小时，静置2-3小时过滤，弃上清液得吸附物。用95％乙醇在搅拌下洗脱，直到苯甲酸全部溶解为止，即有孥状沉淀物产生。静置过夜离心，沉淀物用95％乙醇和丙酮洗涤，千燥得粗制品，每毫克单位效价为10iu以上，每千克粗品含HCG量大于1000万单位。
2、注射用HCG原料制造：
1)中间体(500u/mg士)制造工段；
2)纯品HCG制造工段；
3)注射用HCG制造工段。
3、HCG中间体的制造方法为高盐抽提法及低盐反抽法，中间体产品质量可达500iu/mg士50iu，收率为95％以上。
4、采用SP-sephandex c-50纯化HCG中间体其上样及SP平衡洗涤液处方。
5、纯化后的精制品再进行二次磷酸钙去热原，使产品内毒素指标稳定地控制在注射针剂规定的范围并使产品纯度再提高15％，其操作中Na3PO4及CaAC2浓度应控制在0.1-0.3M，pH在8.2-8.6之间，最好在8.5，液温应保持5C士1C。
上述技术方案中存在如下缺陷：不仅通过上述方法获得的产物的效价比较低，且用到的盐酸是挥发性和腐蚀性比较强的溶剂，会产生更多的污染，经济效益较差，而且污染环境。因此，需要提出一种新的方案来解决上述问题。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，其具有增加提纯效率,节约生产成本,减少污染排放的优点。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，采用阴离子交换树脂作为吸附剂，加入到孕妇尿液中进行搅拌、过滤、洗涤，通过乙酸铵溶液经层析法进行洗脱，然后对洗脱液进行沉淀，收集沉淀以及测定效价，得到人绒毛膜***。
通过采用上述技术方案，采集孕妇的尿液，向孕妇的尿液中加入阴离子交换树脂，然后对孕妇的尿液和阴离子交换树脂进行混合搅拌，进而使阴离子交换树脂对尿液中的人绒毛膜***进行吸附，吸附作用是依靠它和被吸附的分子(吸附质)之间的范德华引力，通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作，使有机化合物根据有吸附力及其分子量大小可以经一定溶剂洗脱分开而达到分离、纯化、除杂、浓缩等不同目的。离子交换树脂是一类具有离子交换功能的高分子材料。在溶液中它能将本身的离子与溶液中的同号离子进行交换。按交换基团性质的不同，离子交换树脂可分为阳离子交换树脂和阴离子交换树脂两类。阴离子交换树脂含有季胺基[-N(CH3)3OH]、胺基(-NH2)或亚胺基(-NH2)等碱性基团。它们在水中能生成OH-离子，可与各种阴离子起交换作用，其交换原理为：R—N(CH3)3OH+Cl-——R—N(CH3)3Cl+OH-，在孕妇尿液中，阴离子交换树脂中的OH-与人绒毛膜***中的阴离子交换，使阴离子交换树脂与人绒毛膜***交联，实现吸附，然后对孕妇的尿液和阴离子交换树脂的混合液进行过滤，对吸附后的阴离子交换树脂进行洗涤，洗去一些尿液中的杂质，避免对下一步的实验造成影响，洗涤过后，再通过乙酸铵溶液对吸附在阴离子交换树脂上的人绒毛膜***进行洗脱，并收集洗脱液，进行沉淀，获得沉淀固体，进行测定效价，就得到了从孕妇的尿液中提取的人绒毛膜***。
层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术，所有的层析***都由两个相组成：一是固定相，另一是流动相。当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用(吸附、溶解、结合等)的能力不同，在两相中的分配(含量比)不同，且随流动相向前移动，各组分不断地在两相中进行再分配。分步收集流出液，可得到样品中所含的各单一组分，从而达到将各组分分离的目的。
此实验过程的原理就是将已吸附人绒毛膜***粗品的阴离子交换树脂装入层析***，通过流动相10％乙酸铵溶液，再通过固定相，由于人绒毛膜***和阴离子交换树脂的理化性质存在很大的差异，两者会在固定相和流动相中进行再分配，分步收集流出液，即可得到含有单一组分人绒毛膜***的洗脱液，即达到人绒毛膜***和阴离子交换树脂的相互分离目的。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述阴离子交换树脂的用量为孕妇尿液体积的1％-5％。
通过采用上述技术方案，采用阴离子交换树脂的用量为孕妇尿液体积的1％-5％，使阴离子交换树脂在这样的一个合适范围，便于更好地吸收孕妇尿液中的人绒毛膜***。
进一步优选为，所述阴离子交换树脂采用的是陶氏550A(OH)阴离子交换树脂。
通过采用上述技术方案，陶氏550A(OH)阴离子交换树脂是上海凯茵化工有限公司从美国进口的一线品牌原料，陶氏550A(OH)阴离子交换树脂是一种具有极高交换容量的高品质树脂，它除了具有超强的颗粒完整性以外，还具有极易与阳树脂加以识别的浅色。它特别适合于火电厂和核电厂凝结水精处理***的高速混床使用，具有较强的吸附能力，对孕妇尿液中的人绒毛膜***的吸附效果好。
进一步优选为，所述孕妇尿液为怀孕2-6个月的孕妇新鲜尿液。
进一步优选为，所述孕妇尿液优选为怀孕2-4个月的孕妇新鲜尿液。
通过采用上述技术方案，成***性因受精的卵子移动到子宫腔内着床后，形成胚胎，在发育成长为胎儿过程中，胎盘合体滋养层细胞产生大量的人绒毛膜***，可通过孕妇血液循环而***到尿中。当妊娠1-2.5周时，血清和尿中的HCG水平即可迅速升高，第8周孕期达到高峰，至孕期第4个月始降至中等水平，并一直维持到妊娠末期，所以选用2-4个月的孕妇新鲜尿液能从中提取出更多的人绒毛膜***，提高提取效率。
进一步优选为，利用纯净水对吸附后的阴离子交换树脂进行洗涤。
通过采用上述技术方案，利用纯净水对吸附人绒毛膜***的树脂进行洗涤，环保无污染，而且在洗涤之后，方便进行下一步的洗脱操作，减少了吸附后的陶氏550A(OH)阴离子交换树脂上含有的杂质，减小实验误差。
进一步优选为，所述乙酸铵溶液的质量分数为8％-12％。
通过采用上述技术方案，使用乙酸铵溶液对陶氏550A(OH)阴离子交换树脂上的人绒毛膜***进行洗脱，人绒毛膜***与乙酸铵溶液反应形成洗脱溶液，顺利地从陶氏550A(OH)阴离子交换树脂上脱落下来，乙酸铵溶液的质量分数可选用8％-12％之间的数值，更容易与陶氏550A(OH)阴离子交换树脂上的人绒毛膜***反应洗脱。
进一步优选为，所述乙酸铵溶液的体积为孕妇尿液体积的2％-10％。
通过采用上述技术方案，经过换算可得，上述采用乙酸铵溶液的用量为阴离子交换树脂用量的2倍左右，由此使乙酸铵溶液更容易洗脱掉阴离子交换树脂上的人绒毛膜***。
进一步优选为，利用乙醇对洗脱液中的人绒毛膜***进行沉淀。
通过采用上述技术方案，在乙酸铵溶液和人绒毛膜***混合的洗脱液中，加入乙醇，溶解洗脱液中的乙酸铵，使人绒毛膜***顺利沉淀下来，便于收集。
进一步优选为，所述洗脱液与乙醇的比例设置为1:(4-6)。
通过采用上述技术方案，洗脱液与乙醇的比例为1:4到1:6之间，添加大量的乙醇，更有利于乙醇溶解乙酸铵，使更多的人绒毛膜***沉淀下来，提高测得效价，提高从人尿中提取人绒毛膜***的提取效率。
进一步优选为，所述乙醇对洗脱液的溶解搅拌时间为15-30分钟。
通过采用上述技术方案，溶解搅拌15-30分钟，使洗脱液中的乙酸铵溶液尽可能溶解，使人绒毛膜***尽可能多的沉降下来，提高提纯效率。
综上所述，与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)从人尿中提取人绒毛膜***的方法，采用阴离子交换树脂作为吸附剂，加入到孕妇尿液中进行搅拌、过滤、洗涤，通过乙酸铵溶液进行洗脱,然后对洗脱液进行沉淀,收集沉淀以及测定效价，得到人绒毛膜***。增加了提纯效率，节约了生产成本，减少了污染排放。
(2)在整个从孕妇尿液中提取人绒毛膜***的过程中，用到一些树脂、乙酸铵和乙醇这些溶剂，环保无污染，而且可以重复利用，降低整个实验成本。
(3)本方法采用美国陶氏的品牌,以及型号550A(OH)的阴离子交换树脂，此阴离子交换树脂是一种具有极高交换容量的高品质树脂，陶氏550A(OH)阴离子树脂对人绒毛膜***的吸附效果好，而且阴离子树脂可以重复利用，降低成本，经济效益较好，对环境更友好。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进行详细描述。
一、实施例
实施例1：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，人绒毛膜***是一种存在于孕妇尿液中的***，本提取方法包括以下步骤：
步骤一、收集怀孕2个月的孕妇尿液100升，向100升的孕妇尿液中加入3升的陶氏550A(OH)阴离子交换(上海凯茵化工有限公司从美国进口的陶氏品牌、型号为550A(OH)的阴离子交换树脂)，机械搅拌30分钟后利用带有滤纸的漏斗对混合液过滤。
步骤二、过滤结束后，通过纯净水对过滤后的已吸附人绒毛膜***粗品的阴离子交换树脂进行洗涤，洗涤1次，洗涤5个柱体积，通过洗涤除杂之后，将已吸附树脂装入层析***。
步骤三、加入2.5L10％的乙酸铵溶液，对已吸附树脂进行洗脱，在整个洗脱的过程中，洗脱流速为0.5BV/h(就是每小时流量为树脂装填体积量的0.5倍)，在洗脱过程中，由于前500毫升洗脱液中的孕妇尿液中的***含量很少(孕妇尿液中的***小于等于5％)，因此前500毫升的洗脱液(即人绒毛膜***和10％的乙酸铵溶液的混合液)丢弃，然后收集后2升的洗脱液。
步骤四、沉淀的具体操作步骤为：按照洗脱液：乙醇＝1：5的比例向2升洗脱液中加入10升乙醇，通过乙醇溶解洗脱液中的10％乙酸铵溶液，溶解25分钟，进而使人绒毛膜***沉淀下来，产生沉淀后，进行干燥，收集得到5.7g的固体。
步骤五、按照《中国药典》2015版方法进行测定，对得到的5.7g固体进行计算效价。
实施例2：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：用于吸附100L孕妇尿液中人绒毛膜***的陶氏550A(OH)阴离子交换树脂的用量为1升。
实施例3：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：用于吸附100L孕妇尿液中人绒毛膜***的陶氏550A(OH)阴离子交换树脂的用量为5升。
实施例4：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：用于洗脱陶氏550A(OH)阴离子交换树脂上的人绒毛膜***的10％乙酸铵溶液的用量体积为2升。
实施例5：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：用于洗脱陶氏550A(OH)阴离子交换树脂上的人绒毛膜***的10％乙酸铵溶液的用量体积为10升。
实施例6：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：收集的孕妇尿液为孕妇怀孕4个月的尿液。
实施例7：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：收集的孕妇尿液为孕妇怀孕6个月的尿液。
实施例8：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：收集的孕妇尿液为10％(体积)的孕妇怀孕6个月的尿液、30％(体积)孕妇怀孕5个月的尿液、60％(体积)孕妇怀孕2个月的尿液。
实施例9：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：收集的孕妇尿液为10％(体积)的孕妇怀孕4个月的尿液、30％(体积)孕妇怀孕5个月的尿液、60％(体积)孕妇怀孕3个月的尿液。
实施例10：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：对已吸附人绒毛膜***粗品的陶氏550A(OH)阴离子交换树脂进行洗脱的乙酸铵溶液的质量分数为8％。
实施例11：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：对已吸附人绒毛膜***粗品的陶氏550A(OH)阴离子交换树脂进行洗脱的乙酸铵溶液的质量分数为12％。
实施例12：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：在对洗脱液中的人绒毛膜***进行沉淀时，洗脱液与乙醇的比例为1：4。
实施例13：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：在对洗脱液中的人绒毛膜***进行沉淀时，洗脱液与乙醇的比例为1：6。
实施例14：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：乙醇对洗脱液中的10％乙酸铵溶液的溶解时间为15分钟，使洗脱液中的人绒毛膜***尽可能沉降下来。
实施例15：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：乙醇对洗脱液中的10％乙酸铵溶液的溶解时间为30分钟，使洗脱液中的人绒毛膜***尽可能沉降下来。
实施例16：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：采用原方法同样条件，但换成amberlite ira-400阴离子交换树脂。同等条件得到样品7g。按照《中国药典》2015版方法进行测定效价。
二、对比例
对比例1：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：采用原方法同样条件，但换成用苯甲酸钠。同等条件得到样品5.1g。按照《中国药典》2015版方法进行测定效价。
对比例2：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：用于吸附100L孕妇尿液中人绒毛膜***的陶氏550A(OH)阴离子交换树脂的用量为0.5L。
对比例3：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：用于吸附100L孕妇尿液中人绒毛膜***的陶氏550A(OH)阴离子交换树脂的用量为6L。
对比例4：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：在对洗脱液中的人绒毛膜***进行沉淀时，洗脱液与乙醇的比例为1：3。
对比例5：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：在对洗脱液中的人绒毛膜***进行沉淀时，洗脱液与乙醇的比例为1：7。
对比例6：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与对比例1的不同之处在于：采用原方法同样条件，通过盐酸对孕妇尿液进行pH调节。
对比例7：一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，与实施例1的不同之处在于：采用原方法同样条件，但换成DEAE sepharose阴离子交换树脂。同等条件得到样品10g，按照《中国药典》2015版方法进行测定效价。
三、性能检测分析试验一：吸附剂的种类对测得效价的影响
试验对象：将实施例1作为试验样1，实施例16作为试验样16；同时将对比例1、对比例7分别为试对比样1、试验样7。
试验方法：首先准备四份怀孕2个月的孕妇尿液一百升，分别向四份孕妇尿液中加入试验样1、试验样16、对比样1以及对比样7，搅拌30分钟，用漏斗滤纸过滤。用纯净水洗涤树脂，装入层析***，用10％乙酸铵溶液进行洗脱，前500毫升洗脱液丢弃，收集后2升洗脱液。按照1：5的比例加入乙醇(即10升乙醇)，产生沉淀后，收集沉淀固体。按照《中国药典》2015版方法进行测定，测得效价如下表1。
表1
试验结果：如表1可知，试验样1、试验样16、对比样1以及对比例7相比，试验样1的测得效价的值最高，达到211.7IU/mg，说明陶氏550A(OH)阴离子交换树脂对人尿中的人绒毛膜***的吸附效果最好，提纯效率最高，因此本发明优选陶氏550A(OH)阴离子交换树脂对人尿中的人绒毛膜***进行吸附效果最佳，而amberlite ira-400阴离子交换树脂效果差于陶氏550A(OH)阴离子交换树脂，也可以作为吸附人尿中的人绒毛膜***的阴离子交换树脂。
试验二：吸附剂的体积分数对测得效价的影响
试验对象：实施例1作为试验样1，实施例2、实施例3对比例2以及对比例3别为试验样2、试验样3、对比样2以及对比样3。
试验方法：首先准备六份怀孕2个月的孕妇尿液一百升，分别向六份孕妇尿液中加入0L、0.5L、1L、3L、5L以及6L的陶氏550A(OH)阴离子交换树脂，搅拌30分钟，用漏斗滤纸过滤。用纯净水洗涤树脂，装入层析***，用10％乙酸铵溶液进行洗脱，前500毫升洗脱液丢弃，收集后2升洗脱液。按照1：5的比例加入乙醇(即10升乙醇)，产生沉淀后，收集沉淀固体，得到0.1g、3.5g、5.7g、5.72g、5.73g以及5.74g。按照《中国药典》2015版方法进行测定，测得效价如表2。
表2
试验结果：如表2可知，试验样2与试验样2、试验样3、对比例2、对比例3以及空白样相比较，当陶氏550A(OH)阴离子交换树脂的量从1L继续增加时，固体质量和测得效价的值升高的相当少，几乎无上升，而陶氏550A(OH)阴离子交换树脂已经从1L、3L、5L到6L，550A(OH)阴离子交换树脂的添加量在成倍增大，而测得效价几乎无上升，为了节约资源和实验成本，获得最大经济效益，本实验选择向一百升的孕妇尿液中加入1L的陶氏550A(OH)阴离子交换树脂，测得效价达到211.7IU/mg，提纯效率高，又节约成本。
试验三：乙醇的体积量对测得效价的影响
试验对象：实施例1、实施例12、实施例13、对比例4以及对比例5分别为试验样1、试验样12、试验样13、对比样4以及对比样5。
试验方法：首先准备五份怀孕2个月的孕妇尿液一百升，分别向五份怀孕的孕妇尿液中加入1L的陶氏550A(OH)阴离子交换树脂,机械搅拌30分钟，用漏斗滤纸过滤。用纯净水洗涤树脂，装入层析系统，用10％乙酸铵溶液进行洗脱，前500毫升洗脱液丢弃，收集后2升洗脱液。分别按照1：3、1：4、1：51：6以及1：7的比例加入乙醇(即6、8、10、12以及14升乙醇)，产生沉淀后，收集沉淀固体，得到4.5g、5.2g、5.7g、5.7g以及5.7g。按照《中国药典》2015版方法进行测定，测得效价如表3。
表3
试验结果：如表3可知，试验样1、试验样12、试验样13、对比样4以及对比样5相比，测得效价为212.7IU/mg，当洗脱液：乙醇＝1：(3-4)，乙醇的量太少，乙醇无法全部溶解洗脱液中的乙酸铵，使人绒毛膜***全部沉淀下来，当洗脱液：乙醇＝1：(6-7)时，由于乙醇的量比较大，使人绒毛膜***全部沉淀下来，测得效价为212.7IU/mg，与洗脱液：乙醇＝1：5时，测得效价相等，因此为了节约实验成本，减少实验药品用量，本实验选用洗脱液：乙醇＝1：5进行操作。
试验四：乙醇的体积量对测得效价的影响
试验对象：实施例1作为试验样1，实施例2、实施例3以及对比例6分别为试验样2、试验样3以及对比样6。
试验方法：首先准备四份怀孕2个月的孕妇尿液一百升，分别向五份怀孕的孕妇尿液中加入1L、3L以及5L的陶氏550A(OH)阴离子交换树脂以及苯甲酸钠,加入苯甲酸钠的那份孕妇尿液需要用盐酸调节孕妇尿液的pH，便于苯甲酸钠的吸收，然后对四份孕妇尿液机械搅拌30分钟，用漏斗滤纸过滤。用纯净水洗涤树脂，装入层析系统，用10％乙酸铵溶液进行洗脱，前500毫升洗脱液丢弃，收集后2升洗脱液。按照1：5的比例加入乙醇(即10升乙醇)，产生沉淀后，收集沉淀固体。按照《中国药典》2015版方法进行测定，测得效价。将四组实验在整个提取人绒毛膜***的过程中产生的挥发气体分别通入到四份相同的PH＝12的氢氧化钠溶液中，与现有技术相比，氢氧化钠溶液的PH变化。
表4
试验结果：如表4可知，在本实验(实施例1、实施例2以及实施例3)进行提取人绒毛膜***的过程中，产生的挥发性气体并没有使氢氧化钠溶液的PH值发生变化，而对比例6使氢氧化钠溶液的PH值从12降低到5，说明在对比例6进行实验的过程中，有大量的盐酸挥发，对环境造成污染。因此与对比例6相比，本实验不在使用盐酸，减少对环境的污染，使实验过程更环保。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，其特征在于：采用阴离子交换树脂作为吸附剂，加入到孕妇尿液中进行搅拌、过滤、洗涤，通过乙酸铵溶液经层析法进行洗脱，然后利用乙醇对洗脱液中的人绒毛膜***进行沉淀，收集沉淀以及测定效价，得到人绒毛膜***，
其中，所述阴离子交换树脂采用的是陶氏550A（OH）阴离子交换树脂；
所述阴离子交换树脂的体积为孕妇尿液体积的1% -5%；
所述乙酸铵溶液的质量分数为8% -12%，体积为孕妇尿液体积的2% -10%；
所述洗脱液与乙醇的比例设置为1:（4-6）。
2.根据权利要求1所述的一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，其特征在于：所述孕妇尿液为怀孕2-6个月的孕妇新鲜尿液。
3.根据权利要求1所述的一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，其特征在于：利用纯净水对吸附后的阴离子交换树脂进行洗涤。
4.根据权利要求1所述的一种从人尿中提取人绒毛膜***的方法，其特征在于：所述乙醇对洗脱液的溶解搅拌时间为15-30分钟。
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