CN109100516A - 一种检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 - Google Patents

一种检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 Download PDF

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CN109100516A CN201811092187.7A CN201811092187A CN109100516A CN 109100516 A CN109100516 A CN 109100516A CN 201811092187 A CN201811092187 A CN 201811092187A CN 109100516 A CN109100516 A CN 109100516A
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Abstract

本发明涉及一种检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法，属于免疫分析技术领域。本发明的试剂盒包括校准品；R1试剂；R2试剂；R3试剂；R1试剂为磁珠包被CMV抗原；R2试剂为吖啶酯标记的抗人IgG抗体；R3试剂为项目稀释液。本发明还提供试剂盒的制备方法。本发明提供的化学发光免疫分析测定试剂盒用于检测巨细胞病毒IgG抗体，其检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、检测范围广、成本相对较低的优点，可广泛用于临床检测。解决了现有的常用巨细胞病毒IgG抗体检测方法如RIA存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤、操作繁琐、检测时间长等缺点；ELISA具有灵敏度低、检测范围窄、检测时间长、重复性差等缺点。

Description

一种检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒 及其制备方法
技术领域
本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。
背景技术
人巨细胞病毒(hCMV)属疱疹病毒科，是一种对人具有致病性的疱疹病毒。它广泛存在且具种族特异性，通过人群的密切接触传播。病毒衣壳为正20面体，由162个壳微粒组成，内含一个DNA核，一个或多个含脂质的外膜环绕在外壳周围。巨细胞病毒感染分为原发性感染和继发性感染。原发性感染可通过不同的传播途径和人不同的生理期获得(例如，分为先天性感染和后天感染)。原发性感染后，巨细胞病毒进入潜伏期，在此期间，B淋巴细胞中可发现病毒。当宿主的免疫调节功能发生变化，如怀孕、重大疾病、免疫抑制治疗，精神压力等，潜伏病毒的复制便被激活(继发性感染)。先天性感染由孕妇经胎盘传染给胎儿或出生时传染给胎儿。即使孕妇体内已存在抗hCMV抗体(被外源性病毒重新感染)，胎儿的感染也可能发生。如果血清反应阴性的妇女在怀孕期间接触了巨细胞病原，由此感染了巨细胞病毒，可引起流产、死产或新生儿畸形。怀孕期间感染hCMV病毒，生产正常婴儿的可能性为50％。先天性巨细胞病毒感染的临床表现通常非常严重，表现为痴呆，耳聋，视网膜脉络膜炎，头部畸形，脑积水，心脏病，肝炎，肝脾肿大，血小板减少等症状，死亡率很高。
大多数人(40％-90％)在童年或成人期间首次感染hCMV病毒，为后天性感染。后天性感染通过接触被感染的体液(如尿液、唾液、乳汁、***、宫颈分泌物、粪便等)及被污染的血液制品传染，偶尔通过器官移植感染。后天性感染在免疫功能正常的感染者中，临床表现通常是比较缓和或无明显症状的。普遍表现为发烧、不舒服、血液中转氨酶水平增高且无黄疸。而有免疫类抑制的患者(器官移植病人，艾滋病患者，淋巴恶性增生患者或癌症病人)，hCMV感染会因为病毒扩散或侵入内脏产生严重的症状，包括：脾肿大，肺炎，溶血性贫血症、心肌炎和脑炎。hCMV感染对这类病人可能是致命的。被感染的患者数周后体内就可产成IgM抗体，随后一周内会产生IgG抗体。
特异性IgG的检测有助于区分是否感染hCMV病毒。这对疑似患者采取合适的预防措施尤其重要。检测hCMV的免疫***状况具有重大意义：(a)可以预防免疫抑制病人感染后造成致命危害；(b)可以预防育龄期妇女或孕妇把病毒传染给胎儿；(c)可以预防器官移植造成的感染；(d)可以预防输血过程造成的感染。白细胞可携带hCMV，会通过血液或器官移植感染输血者或器官移植者。检测hCMV特异性IgM抗体有助于对患者进行充分的治疗。可以通过高低度的病毒特异性免疫球蛋白来预防hCMV感染。另外，有明显症状的病人应该用特异性抗病毒的药物进行治疗。
目前常用的检测巨细胞病毒IgG抗体的方法有放射免疫技术(RIA)、酶联免疫分析技术(ELISA)，但这两种方法存在诸多不足，如RIA存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤、操作繁琐、检测时间长等缺点；ELISA具有灵敏度低、检测范围窄、检测时间长、重复性差等缺点。
发明内容
本发明要解决现有技术中检测巨细胞病毒IgG抗体的方法的有效期短、操作繁琐、灵敏度低、检测成本高的技术问题，提供一种检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，包括：1)校准品；2)R1试剂；3)R2试剂；4)R3试剂；
所述R1试剂的主要成分为磁珠包被CMV抗原；
所述R2试剂的主要成分为吖啶酯标记的抗人IgG抗体；
所述R3试剂为项目稀释液。
在上述技术方案中，所述R1试剂储存于pH为6.0-8.0的含有蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液中，其浓度为0.03％-0.5％；所述R2试剂储存于pH为6.0-8.0的柠檬酸缓冲溶液中，其质量浓度为0.1-0.5μg/mL；所述R3试剂为含有0.5％-3％蛋白的pH为6.0-8.0的柠檬酸缓冲液。
在上述技术方案中，所述R1试剂缓冲液为含有0.05％吐温和0.05％Proclin300、pH6.0-8.0的100mM磷酸盐缓冲液；所述R2试剂缓冲液为含有0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM柠檬酸缓冲液；所述R3试剂缓冲液为含有0.5％-3％蛋白、0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM柠檬酸缓冲液。
在上述技术方案中，所述磁珠包被CMV抗原中CMV抗原与磁珠的包被质量比为0.5％-3％。
在上述技术方案中，吖啶酯标记的抗人IgG抗体中抗人IgG抗体与吖啶酯的摩尔比1:3-1:15。
在上述技术方案中，所述的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒还包括两点企业校准品，校准品中含有巨细胞病毒IgG抗体的浓度分别为30U/mL和100U/mL。
在上述技术方案中，所述校准品的缓冲液为含有20％小牛血清的100mM PBS缓冲液。
一种检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
S1、制备R1试剂：
充分混匀磁珠后，置于离心管中，集磁，去上清，加入封闭剂，充分混匀后再次集磁，去上清，重复封闭3次，再次加入封闭剂，充分混匀，加入包被用CMV抗原，使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育后，集磁，去上清，加入清洗缓冲液，混匀，集磁，去上清，重复清洗3次，得到磁珠包被CMV抗原；用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300、pH6.0-8.0的100mM磷酸盐缓冲液配制成磁珠浓度为0.03％-0.5％的固相R1试剂；
S2、制备R2试剂：
将抗人IgG抗体加入50mM-200mM PBS缓冲溶液，将抗人IgG抗体与吖啶酯混合，充分混匀；室温放置2-4小时后，加入赖氨酸封闭液，混匀，封闭；封闭后对吖啶酯标记抗体溶液进行纯化，收取纯化后溶液，得到吖啶酯标记的抗人IgG抗体；用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM柠檬酸缓冲液稀释至终浓度为0.1-0.5μg/mL的R2试剂；
S3、制备R3试剂：
用0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM的柠檬酸缓冲液配制含有0.5％-3％蛋白的R3试剂；
S4、配制校准品
用含有20％小牛血清的100mM PBS缓冲液将巨细胞病毒IgG抗体稀释成不同浓度的校准品；
S5、分装校准品、R1试剂、R2试剂和R3试剂，组装成成品。
在上述技术方案中，步骤S2中纯化步骤采用的是AKTA蛋白纯化仪。
在上述技术方案中，所述的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的检测步骤为：将待测样本与R1试剂和R3试剂孵育18min，洗涤，加入R2试剂再孵育5min，洗涤，加入激发液记录相对发光强度；在一定范围内，样本中巨细胞病毒IgG抗体的含量与相对发光强度成正比。
本发明采用间接法的反应模式，定量测定人体血清中巨细胞病毒IgG抗体的含量，确保检测的灵敏度。本发明的各项检测指标均优于同类进口试剂盒的平均水平。
本发明的有益效果是：
本发明提供的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒使用吖啶酯化学发光体系，稳定性好，特异性强，灵敏度高，线性范围广，检测时间短，为临床诊断提供更为特异、稳定、快速、可靠的检测手段。
本发明提供的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒用于检测巨细胞病毒IgG抗体，其检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、检测范围广、成本相对较低的优点，可广泛用于临床检测。解决了现有的常用巨细胞病毒IgG抗体检测方法如RIA存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤、操作繁琐、检测时间长等缺点；ELISA具有灵敏度低、检测范围窄、检测时间长、重复性差等缺点。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
图1为本发明的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方及制备流程设计图。
图2为采用本发明的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的测试校准品检测相对发光值的标准曲线，横坐标为浓度，单位为U/mL，纵坐标为相对光强度。
具体实施方式
结合图1具体说明本发明提供一种检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，主要包括以下试剂：
R1试剂：含有磁珠包被CMV抗原的液体；
R2试剂：含有吖啶酯标记的抗人IgG抗体的液体；
R3试剂：项目稀释液。
其中，R1试剂中CMV抗原与磁珠包被的质量比为0.5％-3％，磁珠包被CMV抗原的浓度为0.03％-0.5％；
R2试剂中抗人IgG抗体与吖啶酯的摩尔比为1:3-1:15；吖啶酯标记的抗人IgG抗体的浓度为0.1-0.5μg/mL；
R3试剂为含有0.5％-3％蛋白的项目稀释液。
R1、R2和R3缓冲液的pH值均为6.0-8.0。
进一步地，上述的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，还包括两点企业校准品，校准品中含有巨细胞病毒IgG抗体的浓度分别为30U/mL和100U/mL。
进一步地，校准品缓冲液为含有20％小牛血清的100mM PBS缓冲液。
进一步地，R1试剂的制备方法为：充分混匀磁珠后，取1mL(即10mg磁珠)于离心管中，集磁，去上清，加入1mL封闭剂，充分混匀后再次集磁，去上清，重复封闭3次，再次加入1mL封闭剂，充分混匀，加入100μg CMV包被抗原，使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育3h后，集磁，去上清，加入1mL清洗缓冲液，混匀，集磁，去上清，重复清洗3次，得到磁珠包被CMV抗原。用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300、pH6.0-8.0的100mM磷酸盐缓冲液配制成磁珠浓度为0.03％-0.5％的固相R1试剂。
进一步地，R2的制备方法为：将抗人IgG抗体加入50mM-200mM PBS缓冲溶液，将抗人IgG抗体与吖啶酯按摩尔体积比1:3-1:15混合，充分混匀；室温放置2-4小时后，加入1mL20％赖氨酸封闭液，混匀，封闭时间为1h；封闭后对吖啶酯标记抗体溶液进行纯化，收取纯化后溶液，用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM柠檬酸缓冲液稀释至终浓度为0.1-0.5μg/mL的R2试剂。
进一步地，R3的制备方法为：用0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM的柠檬酸缓冲液配制含有0.5％-3％蛋白的R3试剂。
进一步地，上述纯化步骤采用的是AKTA蛋白纯化仪。
本发明还提供了上述的巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
S1、制备R1试剂，R1试剂的制备方法为：充分混匀磁珠后，取1mL(即10mg磁珠)于离心管中，集磁，去上清，加入1mL封闭剂，充分混匀后再次集磁，去上清，重复封闭3次，再次加入1mL封闭剂，充分混匀，加入100μg CMV包被抗原，使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育3h后，集磁，去上清，加入1mL清洗缓冲液，混匀，集磁，去上清，重复清洗3次，得到磁珠包被CMV抗原。用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300、pH6.0-8.0的100mM磷酸盐缓冲液配制成磁珠浓度为0.03％-0.5％的固相R1试剂。
S2、制备R2试剂，R2试剂的制备方法为：将抗人IgG抗体加入50mM-200mM PBS缓冲溶液，将抗人IgG抗体与吖啶酯按摩尔体积比1:3-1:15混合，充分混匀；室温放置2-4小时后，加入1mL 20％赖氨酸封闭液，混匀，封闭时间为1h；封闭后对吖啶酯标记抗体溶液进行纯化，收取纯化后溶液，用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM柠檬酸缓冲液稀释至终浓度为0.1-0.5μg/mL的R2试剂。
S3、制备R3试剂，R3试剂的制备方法为：用0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM的柠檬酸缓冲液配制含有0.5％-3％蛋白的R3试剂。
S4、配制校准品
S5、分装校准品、R1试剂、R2试剂和R3试剂，组装成成品。
本发明的检测步骤：将待测样本与R1试剂和R3试剂孵育18min，洗涤，加入R2试剂再孵育5min，洗涤，加入激发液记录相对发光强度(RLU)。在一定范围内，样本中巨细胞病毒IgG抗体的含量与相对发光强度成正比。
本发明采用间接法的反应模式，定量测定人体血清中巨细胞病毒IgG抗体的含量，确保检测的灵敏度。本发明的各项检测指标均优于同类进口试剂盒的平均水平。
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合附图和实施例对本发明作进一步的详细介绍。
实施例1主校准品的制备
用含有20％小牛血清的100mM PBS缓冲液将巨细胞病毒IgG抗体稀释成校准品，分装成0U/mL、12U/mL、25U/mL、50U/mL、100U/mL、180U/mL的6瓶主校准品。基于主校准品的拟合曲线进行回值得到两点校准值，其中企业两点校准的浓度分别为30U/mL和100U/mL。
参见图2所示，CMV IgG化学发光免疫分析测定试剂盒剂量反应校准曲线，线性相关系数r≥0.9900，校准合格，具体参数见表1。
表1校准品检测相对光量值
实施例2检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备
R1试剂的制备：充分混匀磁珠后，取1mL(即10mg磁珠)于离心管中，集磁，去上清，加入1mL封闭剂，充分混匀后再次集磁，去上清，重复封闭3次，再次加入1mL封闭剂，充分混匀，加入100μg CMV包被抗原，使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育3h后，集磁，去上清，加入1mL清洗缓冲液，混匀，集磁，去上清，重复清洗3次，得到磁珠包被CMV抗原。用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300、pH6.0的100mM磷酸盐缓冲液配制成磁珠浓度为0.03％的固相R1试剂，2～8℃保存。
R2试剂的制备：将抗人IgG抗体加入50mM-200mM PBS缓冲溶液，将抗人IgG抗体与吖啶酯按摩尔体积比1:3混合，充分混匀；室温放置2-4小时后，加入1mL 20％赖氨酸封闭液，混匀，封闭时间为1h；封闭后对吖啶酯标记抗体溶液进行纯化，收取纯化后溶液，用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0的100mM柠檬酸缓冲液稀释至终浓度为0.1μg/mL的R2试剂，2～8℃保存。
R3的制备：用0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0的100mM的柠檬酸缓冲液配制含有0.5％蛋白的R3试剂。
实施例3巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备
R1试剂的制备：充分混匀磁珠后，取1mL(即10mg磁珠)于离心管中，集磁，去上清，加入1mL封闭剂，充分混匀后再次集磁，去上清，重复封闭3次，再次加入1mL封闭剂，充分混匀，加入100μg CMV包被抗原，使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育3h后，集磁，去上清，加入1mL清洗缓冲液，混匀，集磁，去上清，重复清洗3次，得到磁珠包被CMV抗原。用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300、pH7.0的100mM磷酸盐缓冲液配制成磁珠浓度为0.1％的固相R1试剂，2～8℃保存。
R2试剂的制备：将抗人IgG抗体加入50mM-200mM PBS缓冲溶液，将抗人IgG抗体与吖啶酯按摩尔体积比1:10混合，充分混匀；室温放置2-4小时后，加入1mL 20％赖氨酸封闭液，混匀，封闭时间为1h；封闭后对吖啶酯标记抗体溶液进行纯化，收取纯化后溶液，用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH7.0的100mM柠檬酸缓冲液稀释至终浓度为0.3μg/mL的R2试剂，2～8℃保存。
R3的制备：用0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH7.0的100mM的柠檬酸缓冲液配制含有1％蛋白的R3试剂。
实施例4巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备
R1试剂的制备：充分混匀磁珠后，取1mL(即10mg磁珠)于离心管中，集磁，去上清，加入1mL封闭剂，充分混匀后再次集磁，去上清，重复封闭3次，再次加入1mL封闭剂，充分混匀，加入100μg CMV包被抗原，使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育3h后，集磁，去上清，加入1mL清洗缓冲液，混匀，集磁，去上清，重复清洗3次，得到磁珠包被CMV抗原。用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300、pH8.0的100mM磷酸盐缓冲液配制成磁珠浓度为0.5％的固相R1试剂，2～8℃保存。
R2试剂的制备：将抗人IgG抗体加入50mM-200mM PBS缓冲溶液，将抗人IgG抗体与吖啶酯按摩尔体积比1:15混合，充分混匀；室温放置2-4小时后，加入1mL 20％赖氨酸封闭液，混匀，封闭时间为1h；封闭后对吖啶酯标记抗体溶液进行纯化，收取纯化后溶液，用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH8.0的100mM柠檬酸缓冲液稀释至终浓度为0.5μg/mL的R2试剂，2～8℃保存。
R3试剂的制备：用0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH8.0的100mM的柠檬酸缓冲液配制含有3％蛋白的R3试剂。
实施例5检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的性能评估
按照本领域常规的制造及检定规程对实施例2制备试剂盒进行检定，结果见表2。
表2试剂盒性能评估结果
综上，在本发明的研究过程中，本发明首先对所用的原材料进行了筛选及质量控制，包括抗体的浓度、纯度、亲和力的研究，磁珠包被及吖啶酯标记后抗体活性。然后对磁珠包被和吖啶酯标记体系进行了研究，使用不同标记比例及标记缓冲液进行实验，通过反复实验及对比实验，最终找到了方法简便、产率高、成本低、质量可靠的标记方法。
此外，本发明还对试剂盒的反应模式及条件进行了探索。通过不同的反应模式及反应时间对比实验，最终确定了本试剂盒采用间接两步两孵育反应模式，并最终确定了试剂孵育时间为18min+5min，缩短了检测时间，提高了检测效率。
实施例6本发明的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的方法学检定
按照本领域中行业标准及检定规程对实施例2制备的试剂盒进行检定，结果如下：
1.试剂盒线性范围测定
将实施例2中制备的试剂盒其中1批，测定线性范围样本0U/mL、12U/mL、25U/mL、50U/mL、100U/mL、150U/mL，得出线性范围为5U/mL～150U/mL，线性相关系数r≥0.9900。
表3试剂盒线性范围测定
测定线性样本浓度(U/mL) 相对光强度(RLU)
0 775
12 60646
25 111590
50 209544
100 384284
180 671306
2.试剂盒灵敏度的测定
将实施例2制备的试剂盒其中1批，测定20次零浓度样本，计算平均值(M)及标准差(SD)，得出M+2SD，根据零浓度校准品和相邻校准品之间的浓度-RLU进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD的RLU带入方程，得出相应浓度值即为试剂盒灵敏度0.0067U/mL，结果见表4和表5。
表4第一点发光值
第一点发光均值M1＝782，SD1＝16.92，M1+2SD1＝815.84
表5第二点发光值
第二点发光均值M＝61322
第一点(0，782)与第二点(12，61322)连线拟合曲线，计算的灵敏度＝0.0067U/mL。
3.试剂盒精密度测试
(1)批内精密度
将实施例2制备的试剂盒其中1批，对高值和低值两个不同浓度的样品分别重复测定10次，得出批内变异系数＜8％。
表6批内精密度测定结果
测定标准物质浓度(U/mL) 测定次数 变异系数CV％
12 10 5.82
150 10 2.36
(2)批间精密度
将实施例2制备的试剂盒其中1批，对高值和低值两个不同浓度的样品分别重复测定10次，得出批间变异系数小于15％。
表7批间精密度测定结果
测定标准物质浓度(ng/mL) 测定次数 变异系数CV％
12 30 7.28
150 30 3.52
4.试剂盒准确度测定
将实施例2制备的试剂盒其中1批，测定浓度为12U/mL及150U/mL的标准物质，相对偏差＜10％，测试结果如下：
表8准确度测定结果
测定标准物质浓度(ng/mL) 测定结果 相对偏差％
12 12.3 2.5％
150 150.9 0.6％
5.试剂盒特异性实验
巨细胞病毒IgG抗体阴性，EB病毒(IgG)阳性、巨细胞病毒(IgG)阳性、弓形虫(IgG)阳性、风疹病毒(IgG)阳性、HSV-2(IgG)阳性、水痘-带状疱疹(IgG)阳性、人***瘤病毒阳性、***阳性的临床样本进行测试，测试结果如下：
表9特异性测定结果
项目 样本阴阳性 检测结果
EB病毒(IgG) 阳性 阴性
巨细胞病毒(IgG) 阳性 阴性
弓形虫(IgG) 阳性 阴性
风疹病毒(IgG) 阳性 阴性
HSV-2(IgG) 阳性 阴性
水痘-带状疱疹(IgG) 阳性 阴性
人***瘤病毒 阳性 阴性
*** 阳性 阴性
6.试剂盒稳定性实验
将实施例2制备的试剂盒分别进行4℃及37℃14天稳定性实验，结果表明试剂盒标准品发光强度的变化、精密度、准确性等指标均在正常范围内，试剂盒有效期可达12个月。
经过大量重复性实验，本发明的试剂盒指标如下：
检测范围：3-180U/mL；
灵敏度：最低检测限不高于0.0067U/mL；
精密度：小于10％；
准确度：测值标准物质偏差小于10％。
本发明实施例制备的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒使用吖啶酯化学发光体系，用于检测巨细胞病毒IgG抗体，其检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、检测范围广、成本相对较低的优点，可广泛用于临床检测。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，包括：1)校准品；2)R1试剂；3)R2试剂；4)R3试剂；
所述R1试剂的主要成分为磁珠包被CMV抗原；
所述R2试剂的主要成分为吖啶酯标记的抗人IgG抗体；
所述R3试剂为项目稀释液。
2.根据权利要求1所述的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂储存于pH为6.0-8.0的含有蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液中，其浓度为0.03％-0.5％；所述R2试剂储存于pH为6.0-8.0的柠檬酸缓冲溶液中，其质量浓度为0.1-0.5μg/mL；所述R3试剂为含有0.5％-3％蛋白的pH为6.0-8.0的柠檬酸缓冲液。
3.根据权利要求2所述的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂缓冲液为含有0.05％吐温和0.05％Proclin300、pH6.0-8.0的100mM磷酸盐缓冲液；所述R2试剂缓冲液为含有0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM柠檬酸缓冲液；所述R3试剂缓冲液为含有0.5％-3％蛋白、0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM柠檬酸缓冲液。
4.根据权利要求1所述的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述磁珠包被CMV抗原中CMV抗原与磁珠的包被质量比为0.5％-3％。
5.根据权利要求1所述的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，吖啶酯标记的抗人IgG抗体中抗人IgG抗体与吖啶酯的摩尔比1:3-1:15。
6.根据权利要求1所述的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，还包括两点企业校准品，校准品中含有巨细胞病毒IgG抗体的浓度分别为30U/mL和100U/mL。
7.根据权利要求6所述的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述校准品的缓冲液为含有20％小牛血清的100mM PBS缓冲液。
8.一种权利要求3所述的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、制备R1试剂：
充分混匀磁珠后，置于离心管中，集磁，去上清，加入封闭剂，充分混匀后再次集磁，去上清，重复封闭3次，再次加入封闭剂，充分混匀，加入包被用CMV抗原，使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育后，集磁，去上清，加入清洗缓冲液，混匀，集磁，去上清，重复清洗3次，得到磁珠包被CMV抗原；用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300、pH6.0-8.0的100mM磷酸盐缓冲液配制成磁珠浓度为0.03％-0.5％的固相R1试剂；
S2、制备R2试剂：
将抗人IgG抗体加入50mM-200mM PBS缓冲溶液，将抗人IgG抗体与吖啶酯混合，充分混匀；室温放置2-4小时后，加入赖氨酸封闭液，混匀，封闭；封闭后对吖啶酯标记抗体溶液进行纯化，收取纯化后溶液，得到吖啶酯标记的抗人IgG抗体；用含有0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM柠檬酸缓冲液稀释至终浓度为0.1-0.5μg/mL的R2试剂；
S3、制备R3试剂：
用0.05％吐温和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM的柠檬酸缓冲液配制含有0.5％-3％蛋白的R3试剂；
S4、配制校准品
用含有20％小牛血清的100mM PBS缓冲液将巨细胞病毒IgG抗体稀释成不同浓度的校准品；
S5、分装校准品、R1试剂、R2试剂和R3试剂，组装成成品。
9.根据权利要求8所述的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤S2中纯化步骤采用的是AKTA蛋白纯化仪。
10.根据权利要求1-7任意一项所述的检测巨细胞病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测步骤为：将待测样本与R1试剂和R3试剂孵育18min，洗涤，加入R2试剂再孵育5min，洗涤，加入激发液记录相对发光强度；在一定范围内，样本中巨细胞病毒IgG抗体的含量与相对发光强度成正比。
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