CN111154688A

CN111154688A - 一株生防贝莱斯芽孢杆菌sf259及其应用

Info

Publication number: CN111154688A
Application number: CN202010064158.0A
Authority: CN
Inventors: 邹丽芳; 黄梦桑; 李生樟; 杨瑞环; 陈路生; 屈伊凝; 陈功友
Original assignee: Shanghai Jiaotong University
Current assignee: Shanghai Jiaotong University
Priority date: 2020-01-20
Filing date: 2020-01-20
Publication date: 2020-05-15
Anticipated expiration: 2040-01-20
Also published as: CN111154688B

Abstract

本发明涉及一株生防贝莱斯芽孢杆菌SF259及其应用。所述贝莱斯芽孢杆菌株已于2019年9月20日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏名称为：贝莱斯芽孢杆菌SF259(Bacillus velezensis SF259)，保藏编号为CCTCC M 2019735。本发明的贝莱斯芽孢杆菌对水稻白叶枯病菌具有显著的抑制效果，同时对水稻细菌性条斑病菌、香蕉细菌性枯萎病菌、豇豆枯萎病菌、棉花细菌性角斑病菌、灰霉病菌和水稻稻瘟病菌等也表现广谱的抑菌活性，具有重要的生防应用前景。

Description

一株生防贝莱斯芽孢杆菌SF259及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术应用领域，尤其是涉及一株生防贝莱斯芽孢杆菌及其应用。

背景技术

水稻是世界上极其重要的粮食作物，尤其是在亚洲地区。稻黄单胞菌的两个致病变种X.oryaze pv.oryaze(Xoo)和X.oryaze pv.oryzicola(Xoc)能够侵染水稻，并引起水稻白叶枯病(bacterial leaf blight,BLB)和水稻条斑病(bacterial leaf streak,BLS)。这两种病害严重危及水稻的产量和品质，在热带和亚热带的亚洲地区发生较重。

水稻白叶枯病为水稻上的三大病害之一，在全球各个稻区都有发生，在我国，水稻白叶枯病又被称为地火烧或白叶瘟，水稻感染病害后会减产20％-30％，严重时可达50％-60％(Ou,S,H.,Rice diseases.Commonwealth Agricultural Bureau,Kew Surrey[J].1985)。水稻条斑病多发生在亚洲和非洲等水稻种植区，在我国，该病害主要在华南两季稻区和华中单双混栽稻区中广泛流行，现已成为我国水稻上的主要病害(张荣胜,陈志谊,刘永锋.水稻细菌性条斑病研究进展[J].江苏农业学报,2014,30(04):901-908.)。水稻感病后的产量损失与天气相关，天气适宜时发病减产20％左右，而在暴风雨条件下病害发生比较严重，减产可达到30％以上(Zou,L,F.,Wang,X,P.,Xiang,Y.,etc.,Elucidation of thehrp clusters of Xanthomonas oryzae pv.oryzicola that control thehypersensitive response in nonhost tobacco and pathogenicity in susceptiblehose rice[J].Appl Environ Microbiol,2006,72(9),pp 6212-24.)。

水稻白叶枯病和条斑病不仅突发性强，流行速度快，而且防治较为困难，目前主要的防治方法是化学与生物防治相结合，改善栽培技术和选育抗病品种相结合。目前在生产上针对水稻白叶枯病还未发现能够对其进行根治的药物，多使用铜制剂和锌制剂，但长此以往对生态环境的破坏较大(高山林，朱力宏.水稻白叶枯病抗性遗传研究[J].南京农业大学学报，1982,5(1):22-35.)。截至目前，已经在水稻中发现了至少30个白叶枯病抗性相关基因(White F F,Yang B,Hawes M,etc.Host and pathogen factors controlling therice-Xanthomonas oryzae interaction[J].Plant Physiology,2009,150(4):1677-1686.)，其中报道较多的有Xa13(Suh J P,Jeung J U,Noh T H,et al.Development ofbreeding lines with three pyramided resistance genes that confer broad-spectrum bacterial blight resistance and their molecular analysis in rice[J].Rice,2013,6(1):5.)、Xa21(徐福荣,汤翠风,余腾琼,叶昌荣,戴陆园.云南高原粳稻抗白叶枯病新品系云资抗21号的选育[J].分子植物育种,2005,3(3):307–313.)和Xa23(Chunlian Wang,Yinglun Fan,Chongke Zheng,Tengfei Qin,Xiaoping Zhang,KaijunZhao.High-resolution genetic mapping of rice bacterial blight resistance geneXa23[J].Molecular Genetics and Genomics,2014,289(5))。但对于水稻条斑病抗性相关基因则知之甚少，已见报道的水稻品种超过了30个，而病原细菌也呈现出高度的遗传变化。因此在这两种病害的防治上还具有一定的局限性。

近年来，生物防治逐渐成为科学家们的研究热点，一方面其对于环境的影响比较温和，另一方面其对病原菌有一定的特异性，也不易使病原菌产生抗性。因此，大力响应国家提倡和推广生物防治措施的号召，从自然环境中筛选出对病害具有拮抗作用的生物资源，是一项具有重大意义的工作。

发明内容

本发明的目的就是为了提供一株生防贝莱斯芽孢杆菌SF259及其应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明的第一方面是：提供一株芽孢杆菌，分离自中国青海省乐都区园艺场果园地樱桃树土壤，命名为贝莱斯芽孢杆菌SF259(Bacillus velezensis SF259)，所述芽孢杆菌已于2019年9月20日在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC M2019735。

通过固体培养基平板培养，观察所述贝莱斯芽孢杆菌的菌落颜色为乳白色，边缘不光滑，不规则，表面干燥粗糙，不透明；通过显微镜观察，该菌株的菌体为短杆状，可产生芽孢。

通过生理生化测试，明确所述贝莱斯芽孢杆菌是一株***，能够分泌明胶酶，不能水解β-半乳糖苷酶、精氨酸双水解酶、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酶脱羧酶及脲酶；能够利用3-羟基丁酮产生乙酰甲基甲醇，不能产生吲哚；不能够氧化葡萄糖、甘露醇、肌醇、山梨醇、鼠李糖、蔗糖、密二糖、苦杏仁苷和***糖。能够利用甘油、L-***糖、核糖、D-木糖、葡萄糖等19种碳源。

通过16S rRNA基因和gyrA基因分别构建***进化树，进行亲缘关系的比较分析，并结合菌株的生理生化特征，证明该菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。

其中，16S rRNA基因的序列如SEQ ID NO.1所示，gyrA基因的序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的第二方面是：提供所述芽孢杆菌的应用，包括以下应用：

在本发明的一个具体实施方式中，所述贝莱斯芽孢杆菌对水稻黄单胞菌具有拮抗作用。所述水稻黄单胞菌包括水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)和水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)两个致病变种。

在本发明的一个具体实施方式中，所述贝莱斯芽孢杆菌SF259对水稻白叶枯病菌具有显著的拮抗作用。

在本发明的一个具体实施方式中，所述水稻白叶枯病菌包括PXO99^A、AH1、YNB01-4、XZ35、JL3、JC1、YC11、LYG46、XC18。

在本发明的一个具体实施方式中，所述贝莱斯芽孢杆菌SF259对水稻条斑病菌具有拮抗作用。

在本发明的一个具体实施方式中，所述水稻细菌性条斑病菌包括HANB12-26、RS85、HNB07-3、ZJB01-25、RS105、JSB1-39、AHB3-7、YNB01-3、HNB3-17。

在本发明的一个具体实施方式中，所述贝莱斯芽孢杆菌对水稻白叶枯病菌和水稻条斑病菌具有拮抗作用。

在本发明的一个具体实施方式中，所述贝莱斯芽孢杆菌SF259对多种植物黄单胞属的病原黄单胞菌均具有拮抗作用。所述植物病原黄单胞菌包括香蕉细菌性枯萎病菌(X.campestris pv.musacearum)、豇豆枯萎病菌(X.axonopodis pv.vignicola)、棉花细菌性角斑病菌(X.campestris pv.malvacearum)、辣椒斑点病菌(X.campestrispv.vesicatoria)、菜豆枯萎病菌(X.campestris pv.phaseoli)、甘蔗流胶病菌(X.axonopodis pv.vasculorum)、大豆疮痂病菌(X.axonopodis pv.glycines)。

在本发明的一个具体实施方式中，所述贝莱斯芽孢杆菌SF259对植物病原真菌具有拮抗作用。所述植物病原真菌包括灰霉病菌(Botrytis cinerea)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)、禾谷镰刀病菌(Fusarium graminearum)、疫霉病菌(Phytophthoracapsici)、尖孢镰刀病菌(Fusarium oxysporium)等。

与现有技术相比，本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌SF259，对水稻白叶枯病菌和水稻条斑病菌均具有显著的拮抗作用，对目前常见的多种黄单胞菌属的病原细菌具有拮抗效果，而且对重要的植物病原真菌也具有拮抗活性，为现今农业生产上的多种植物细菌病害的生物防治提供了新资源。

附图说明

图1.贝莱斯芽孢杆菌SF259的显微镜(1000X)观察照片及菌落形态。

图2.贝莱斯芽孢杆菌SF259基于16S rRNA基因构建的***发育树。

图3.贝莱斯芽孢杆菌SF259基于gyr A基因构建的***发育树。

图4.16S rRNA基因的凝胶电泳结果。其中1代表Marker；2代表16S rRNA基因的产物。

图5.贝莱斯芽孢杆菌SF259对9株水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzae,Xoo)的拮抗效果图，A：PXO99^A；B：AH1；C:YNB01-4；D：XZ35；E：JL3；F：JC1；G：YC11；H：LYG46；I：XC18。

图6.贝莱斯芽孢杆菌SF259对9株水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzicola,Xoc)的拮抗效果图，A：HANB12-26；B：RS85；C：HNB07-3；D：ZJB01-25；E：RS105；F：JSB1-39；G：AHB3-7；H：YNB01-3；I：HNB3-17。

图7.贝莱斯芽孢杆菌SF259对其它9种植物病原黄单胞菌的拮抗效果图，A：香蕉细菌性枯萎病菌(X.campestris pv.musacearum)；B：豇豆枯萎病菌(X.axonopodispv.vignicola)；C：棉花细菌性角斑病菌(X.campestris pv.malvacearum)；D：辣椒斑点病菌(X.campestris pv.vesicatoria)；E：菜豆枯萎病菌(X.campestris pv.phaseoli)；F：甘蔗流胶病菌(X.axonopodis pv.vasculorum)；G：大豆疮痂病菌(X.axonopodispv.glycines)；H：洋葱细菌性叶枯病菌(X.axonopodis pv.allii)；I：核桃细菌性黑斑病菌(Xanthomonas campestris pv.Juglandis)。

图8.贝莱斯芽孢杆菌SF259对灰霉病菌(Botrytis cinerea)的拮抗效果图，其中，A：灰霉病菌；B：无菌水对照；C：贝莱斯芽孢杆菌SF259与灰霉病菌的对歭培养效果图。

图9.贝莱斯芽孢杆菌SF259对水稻稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)的拮抗效果图，其中，A：水稻稻瘟病菌；B：无菌水对照；C：贝莱斯芽孢杆菌SF259与水稻稻瘟病菌的对歭培养效果图。

图10.贝莱斯芽孢杆菌SF259对禾谷镰刀病菌(Fusarium graminearum)的拮抗效果图，其中，A：禾谷镰刀病菌；B：无菌水对照；C：贝莱斯芽孢杆菌SF259与禾谷镰刀病菌的对歭培养效果图。

图11.贝莱斯芽孢杆菌SF259对疫霉病菌(Phytophthora capsici)的拮抗效果图，其中，A：疫霉病菌；B：无菌水对照；C：贝莱斯芽孢杆菌SF259与疫霉病菌的对歭培养效果图。

图12.贝莱斯芽孢杆菌SF259对尖孢镰刀病菌(Fusarium oxysporium)的拮抗效果图，其中，A：尖孢镰刀病菌；B：无菌水对照；C：贝莱斯芽孢杆菌SF259与尖孢镰刀病菌的对歭培养效果图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，而不构成对本发明的限制。

以下实施例中所用的菌种培养基如下：

牛肉膏蛋白胨培养基NA(g/L)：牛肉浸膏3g，多聚蛋白胨5g，蔗糖10g，酵母粉1g，琼脂粉15g，加水溶解并定容至1000mL，调节pH 7.0-7.2，高压灭菌(121℃、20min)。

PDA固体培养基(g/L)：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，加入水溶解，最后定容至1000mL，pH 7.0-7.2，高压灭菌(121℃、20min)。

实施例1、贝莱斯芽孢杆菌SF259的获得

1、土壤来源

中国青海省乐都区园艺场果园地樱桃树土壤

2、菌株的筛选

(1)土样采集

Z字形5点采样法进行土样采集：每点采集200g土样，将土样混合均匀，以四分法取200g装入灭菌袋中，作为一个土样。每块地采集3个土样作为重复。记录好采样的时间、地点和种类。采集完成的土样置于4℃冰箱中保存，以备细菌分离所用。

(2)细菌的分离

平板稀释法：称取10g土样于锥形瓶中，加入90mL无菌水，然后在200rpm，28℃摇床中振荡，20min后取出静置在室温中10min，制成土壤菌悬液原液。将土壤菌悬液原液进行梯度稀释，分别得到10⁰、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5，共6个梯度的菌悬液稀释液。各取200μL菌悬液稀释液，均匀涂布于含有水稻条斑病菌RS105的NA平板上，每个梯度做2～3个重复。放入28℃生化培养箱中，倒放培养24h，观察。

(3)细菌纯化

观察挑选出具有抑菌圈的单菌落，在NA平板上进行划线纯化，在28℃生化培养箱倒置培养，12h后挑取单菌落，依次编号。

(4)细菌的保存

将菌株接种在液体NA培养基中，在28℃、180rpm摇床中培养12h后，吸取1mL菌液与1mL 50％的无菌甘油，轻轻振荡混匀，置于-80℃长期保存。

(5)拮抗菌的筛选

采用牛津杯法：将病原菌接种在NA液体培养基中，28℃、180rpm摇床中培养12h，吸取200μL菌悬液与NA固体培养基充分混匀后，倒板，然后在NA平板中心放上直径为6mm的牛津杯，每个牛津杯内接50μL的供试芽孢杆菌液(OD600约2.0)，每株病原菌做2～3个重复，置于28℃的生化培养箱中培养24h，观察抑菌圈的有无，记录菌株编号并测量抑菌圈大小，整理拍照。

实施例2 贝莱斯芽孢杆菌SF259的16S rRNA基因鉴定

提取菌株SF259的基因组DNA，利用引物：

27F 5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’，和

1492R 5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’，以提取的DNA为模板，进行PCR扩增，以获得目的片段。PCR反应体系为：

表1 Taq聚合酶链式反应体系

PCR反应基本条件为：94℃预变性3min，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸90s(1kb/min)，72℃预延伸8min，4℃保存，共30个循环。反应结束后，PCR产物均通过1％琼脂糖凝胶电泳检验，利用凝胶成像仪检测并记录结果(见附图4)。将PCR原液送铂尚生物技术(上海)有限公司进行测序。测序结果运用DNA Star进行分析，并在NCBI网站上进行BLAST比对，确定近缘株细菌的种属。

结果显示：菌株SF259的16SrRNA基因与Bacillus velezensis具有99％的相似度。使用MEGA6.0构建持假基因的***发育树，结果见图2。

实施例3 贝莱斯芽孢杆菌SF259的gyrA基因鉴定

提取菌株SF259的基因组DNA，利用引物：GyrA-F 5'-CAGTCAGGAAATGCGTACGTCCTT-3'和GyrA-R 5'-CAAGGTAATGCTCCAGGCATTGCT-3'，以提取的DNA为模板，进行PCR扩增，以获得目的片段。PCR反应体系为：

表2 Taq聚合酶链式反应体系

反应条件：94℃ 10min；94℃ 1min，55℃ 1min，72℃ 1min，30个循环；72℃10min，10℃ ∞。反应结束后，PCR产物均通过1％琼脂糖凝胶电泳检验，利用凝胶成像仪检测并记录结果。将PCR原液送铂尚生物技术(上海)有限公司进行测序。测序结果运用DNAStar进行分析，并在NCBI网站上进行BLAST比对，确定近缘株细菌的种属。

结果显示：菌株SF259的gyrA基因与Bacillus velezensis模式菌gyrA基因序列的相似度达99％，而与Bacillus amyloliquefaciens模式菌gyrA基因序列的相似度仅为96％。使用MEGA6.0构建持假基因的***发育树，结果见图3。

实施例4 贝莱斯芽孢杆菌SF259的生理生化鉴定

本发明的贝莱斯芽孢杆菌SF259的生理生化特征为：能够分泌明胶酶，不能水解β-半乳糖苷酶、精氨酸双水解酶、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酶脱羧酶及脲酶；能够利用3-羟基丁酮产生乙酰甲基甲醇，不能产生吲哚；不能够氧化葡萄糖、甘露醇、肌醇、山梨醇、鼠李糖、蔗糖、密二糖、苦杏仁苷和***糖。能够利用甘油、L-***糖、核糖、D-木糖、葡萄糖等19种碳源，见表3和表4。

表3 菌株SF259生理生化特性–酶活、碳源氧化

+：阳性反应；-：阴性反应；

表4菌株SF259生理生化特性—利用碳源产酸

+：阳性反应；-：阴性反应；W：弱阳性反应

实施例5、贝莱斯芽孢杆菌SF259的拮抗谱测定

1)贝莱斯芽孢杆菌SF259对9种水稻白叶枯病菌的拮抗活性测定

将9种不同的水稻水稻白叶枯病菌和供试贝莱斯芽孢杆菌SF259分别接种于NA液体培养基中，28℃、180rpm摇床中培养12h后，统一OD₆₀₀均为2.0；分别吸取200μL对应的病原菌液与NA固体培养基充分混匀后，倒板，然后在NA平板中心放上直径为6mm的牛津杯，每个牛津杯内接50μL的供试菌，每个病原菌做2～3个重复，置于28℃的生化培养箱中，培养24h后观察抑菌圈的有无，并记录抑菌圈大小，整理拍照。

表5贝莱斯芽孢杆菌SF259对不同水稻白叶枯病菌的抑菌效果

2)贝莱斯芽孢杆菌SF259对9种水稻条斑病菌的拮抗活性测定

将9种不同的水稻条斑病菌和供试贝莱斯芽孢杆菌SF259分别接种于NA液体培养基中，28℃、180rpm摇床中培养12h后，统一OD₆₀₀均为2.0；分别吸取200μL对应的病原菌液与NA固体培养基充分混匀后，倒板，然后在NA平板中心放上直径为6mm的牛津杯，每个牛津杯内接50μL的供试菌，每个病原菌做2～3个重复，置于28℃的生化培养箱中，培养24h后观察抑菌圈的有无，并记录抑菌圈大小，整理拍照。

表6贝莱斯芽孢杆菌SF259对不同水稻条斑病菌的抑菌效果

3)贝莱斯芽孢杆菌SF259对9种植物病原黄单胞菌的拮抗活性测定

将香蕉细菌性枯萎病菌、豇豆枯萎病菌、棉花细菌性角斑病菌等9种植物病原黄单胞菌和供试贝莱斯芽孢杆菌SF259分别接种于NA液体培养基中，28℃、180rpm摇床中培养12h后，统一OD₆₀₀均为2.0；分别吸取200μL对应的病原菌液与NA固体培养基充分混匀后，倒板，然后在NA平板中心放上直径为6mm的牛津杯，每个牛津杯内接50μL的供试菌，每个病原菌做2～3个重复，置于28℃的生化培养箱中，培养24h后观察抑菌圈的有无，并记录抑菌圈大小，整理拍照。

表7贝莱斯芽孢杆菌SF259对9种植物病原黄单胞菌的抑菌效果

4)贝莱斯芽孢杆菌SF259对5种植物病原真菌的拮抗活性测定

采用平板对峙培养法，将水稻稻瘟病菌、禾谷镰刀病菌、灰霉病菌、尖孢镰刀病菌、疫霉病菌分别在PDA培养基上培养，待病原菌长满平板后，用打孔器在平板边缘打取菌块备用，取其中一个菌饼，菌丝面朝下，接种到新的PDA平板中央，在菌饼左右等距离(20mm)放置无菌的牛津杯，每个牛津杯中点接50μL的供试贝莱斯芽孢杆菌SF259，每个处理3个重复，同时，以不接贝莱斯芽孢杆菌SF259只接病原真菌的平板为对照。在25℃培养箱中进行培养，5天后观察并记录抑菌现象，抑菌情况如附图8-附图12。结果显示，贝莱斯芽孢杆菌SF259对灰霉病菌具有显著的抑制效果，抑菌率为95.39％；其对水稻稻瘟病菌、禾谷镰刀病菌、疫霉病菌、尖孢镰刀病菌的抑菌率分别为79.25％、75.84％、58.46％和41.10％。

由此，利用本发明提供的一株贝莱斯芽孢杆菌SF259，对水稻白叶枯病菌Xoo具有显著的拮抗作用，对水稻条斑病菌Xoc具有广谱的抑菌效果，而且对多种黄单胞菌属的病原细菌、重要的植物病原真菌也具有拮抗作用，为水稻细菌病害的生物防治提供了新资源。

上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 上海交通大学

<120> 一株生防贝莱斯芽孢杆菌SF259及其应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1447

<212> DNA

<213> 贝莱斯芽孢杆菌 (Bacillus velezensis)

<400> 1

gggcggggtg ctatacatgc aagtcgagcg gacagatggg agcttgctcc ctgatgttag 60

cggcggacgg gtgagtaaca cgtgggtaac ctgcctgtaa gactgggata actccgggaa 120

accggggcta ataccggatg gttgtctgaa ccgcatggtt cagacataaa aggtggcttc 180

ggctaccact tacagatgga cccgcggcgc attagctagt tggtgaggta acggctcacc 240

aaggcgacga tgcgtagccg acctgagagg gtgatcggcc acactgggac tgagacacgg 300

cccagactcc tacgggaggc agcagtaggg aatcttccgc aatggacgaa agtctgacgg 360

agcaacgccg cgtgagtgat gaaggttttc ggatcgtaaa gctctgttgt tagggaagaa 420

caagtgccgt tcaaataggg cggcaccttg acggtaccta accagaaagc cacggctaac 480

tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt tgtccggaat tattgggcgt 540

aaagggctcg caggcggttt cttaagtctg atgtgaaagc ccccggctca accggggagg 600

gtcattggaa actggggaac ttgagtgcag aagaggagag tggaattcca cgtgtagcgg 660

tgaaatgcgt agagatgtgg aggaacacca gtggcgaagg cgactctctg gtctgtaact 720

gacgctgagg agcgaaagcg tggggagcga acaggattag ataccctggt agtccacgcc 780

gtaaacgatg agtgctaagt gttagggggt ttccgcccct tagtgctgca gctaacgcat 840

taagcactcc gcctggggag tacggtcgca agactgaaac tcaaaggaat tgacgggggc 900

ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagcaac gcgaagaacc ttaccaggtc 960

ttgacatcct ctgacaatcc tagagatagg acgtcccctt cgggggcaga gtgacaggtg 1020

gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca 1080

acccttgatc ttagttgcca gcattcagtt gggcactcta aggtgactgc cggtgacaaa 1140

ccggaggaag gtggggatga cgtcaaatca tcatgcccct tatgacctgg gctacacacg 1200

tgctacaatg gacagaacaa agggcagcga aaccgcgagg ttaagccaat cccacaaatc 1260

tgttctcagt tcggatcgca gtctgcaact cgactgcgtg aagctggaat cgctagtaat 1320

cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac 1380

cacgagagtt tgtaacaccc gaagtcggtg aggtaacctt tatggagcca gccgccgaag 1440

tgacaga 1447

<210> 2

<211> 965

<212> DNA

<213> 贝莱斯芽孢杆菌 (Bacillus velezensis)

<400> 2

gcatgagcgt tatcgtatcc cgggcgcttc cggatgtgcg tgacggtctg aagccggttc 60

acagacggat tttgtacgca atgaatgatt taggcatgac cagtgacaaa ccatataaaa 120

aatctgcccg tatcgtcggt gaagttatcg gtaagtacca cccgcacggt gactcagcgg 180

tttacgaatc aatggtcaga atggcgcagg attttaacta ccgctacatg cttgttgacg 240

gacacggcaa cttcggttcg gttgacggcg actcagcggc cgcgatgcgt tacacagaag 300

cgagaatgtc aaaaatcgca atggaaattc tgcgtgacat tacgaaagac acgattgact 360

atcaagataa ctatgacggt tcagaaagag agcctgccgt catgccttcg agatttccga 420

atctgctcgt aaacggggct gccggtattg cggtcggaat ggcgacaaac attcccccgc 480

atcagcttgg ggaagtcatt gaaggcgtgc ttgccgtaag tgagaatcct gagattacaa 540

accaggagct gatggaatac atcccgggcc cggattttcc gactgcaggt cagattttgg 600

gccggagcgg catccgcaag gcatatgaat ccggacgggg atcaatcacg atccgggcta 660

aggctgaaat cgaagagact tcatcgggaa aagaaagaat tattgtcacg gaacttcctt 720

atcaggtgaa caaagcgaga ttaattgaaa aaatcgcgga tcttgtccgg gacaaaaaaa 780

tcgaaggaat taccgatctg cgagacgaat ccgaccgtaa cggaatgaga atcgtcattg 840

agatccgccg tgacgccaat gctcacgtca ttttgaataa cctgtacaaa caaacggccc 900

tgcagacgtc tttcggaatc aacctgctgg cgctcgtgac ggacagccga agacttggcc 960

atccg 965

Claims

1.一株生防贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，命名为贝莱斯芽孢杆菌SF259(Bacillusvelezensis SF259)，所述贝莱斯芽孢杆菌株已于2019年9月20日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC M 2019735。

2.根据权利要求1所述生防贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌菌落为乳白色，边缘不光滑，不规则，表面干燥粗糙，不透明；菌体为短杆状，可产生芽孢。

3.根据权利要求1所述生防贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌是一种革兰氏阳性菌，需氧或兼性厌氧细菌；能够分泌明胶酶，不能水解β-半乳糖苷酶、精氨酸双水解酶、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酶脱羧酶及脲酶；能够利用3-羟基丁酮产生乙酰甲基甲醇，不能产生吲哚；不能够氧化葡萄糖、甘露醇、肌醇、山梨醇、鼠李糖、蔗糖、密二糖、苦杏仁苷和***糖，能够利用甘油、L-***糖、核糖、D-木糖、葡萄糖。

4.根据权利要求1所述生防贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌对水稻黄单胞菌具有拮抗作用。

5.根据权利要求4所述生防贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述水稻黄单胞菌包括水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)和水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonasoryzae pv.oryzicola,Xoc)两个致病变种；

所述水稻白叶枯病菌包括PXO99^A、AH1、YNB01-4、XZ35、JL3、JC1、YC11、LYG46、XC18；

所述水稻细菌性条斑病菌包括HANB12-26、RS85、HNB07-3、ZJB01-25、RS105、JSB1-39、AHB3-7、YNB01-3、HNB3-17。

6.根据权利要求1所述生防贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌对水稻白叶枯病菌和水稻条斑病菌具有拮抗作用。

7.根据权利要求1所述生防贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌对植物病原黄单胞菌具有拮抗活性，所述植物病原黄单胞菌包括香蕉细菌性枯萎病菌(X.campestris pv.musacearum)、豇豆枯萎病菌(X.axonopodis pv.vignicola)、棉花细菌性角斑病菌(X.campestris pv.malvacearum)、辣椒斑点病菌(X.campestrispv.vesicatoria)、菜豆枯萎病菌(X.campestris pv.phaseoli)、甘蔗流胶病菌(X.axonopodis pv.vasculorum)、大豆疮痂病菌(X.axonopodis pv.glycines)。

8.根据权利要求1所述生防贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌对植物病原真菌具有拮抗活性，所述植物病原真菌包括灰霉病菌(Botrytis cinerea)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)、禾谷镰刀病菌(Fusarium graminearum)、疫霉病菌(Phytophthora capsici)、尖孢镰刀病菌(Fusarium oxysporium)。

9.如权利要求1所述生防贝莱斯芽孢杆菌的应用，其特征在于，包括以下应用：

作为水稻白叶枯病菌拮抗菌的应用；

作为水稻细菌性条斑病菌拮抗菌的应用；

作为香蕉细菌性枯萎病菌(X.campestris pv.musacearum)拮抗菌、豇豆枯萎病菌(X.axonopodis pv.vignicola)拮抗菌、棉花细菌性角斑病菌(X.campestrispv.malvacearum)拮抗菌、辣椒斑点病菌(X.campestris pv.vesicatoria)拮抗菌、菜豆枯萎病菌(X.campestris pv.phaseoli)拮抗菌、甘蔗流胶病菌(X.axonopodispv.vasculorum)拮抗菌、大豆疮痂病菌(X.axonopodis pv.glycines)拮抗菌的应用；

作为植物病原真菌灰霉病菌拮抗菌、水稻稻瘟病菌拮抗菌、禾谷镰刀病菌拮抗菌、疫霉病菌拮抗菌、尖孢镰刀病菌拮抗菌的应用。