CN111134334A - 一种益生菌微胶囊软颗粒及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种益生菌微胶囊软颗粒，及其制备方法，其中所述益生菌微胶囊软颗粒包括益生菌微胶囊椰纤果软颗粒和益生菌微胶囊凝胶球软颗粒。

Description

一种益生菌微胶囊软颗粒及制备方法

对相关申请的引用

本申请要求了2018年11月6日提交的中国专利申请号201811314766.1、2018年11月6日提交的中国专利申请号201811314761.9、2018年11月6日提交的中国专利申请号201811314765.7和2018年11月6日提交的中国专利申请号201811314763.8的优先权，将这些申请的全部内容并入本文作为说明书的一部分。

技术领域

本发明属于食品生物技术领域。更具体地，本发明涉及一种益生菌微胶囊软颗粒，包括益生菌微胶囊椰纤果软颗粒和益生菌微胶囊凝胶球软颗粒，还涉及所述的益生菌微胶囊软颗粒的制备方法。

背景技术

益生菌微胶囊是一种强化益生菌功效、确保益生菌能够发挥益生功效等一项技术。目前的益生菌有多种多样的加工、保护、包埋方法，包括挤压造粒、乳化制粒等方式，生产出的益生菌微胶囊都是仅仅是提供透明的、具备保护益生菌初级功效的产品和方法，因此目前的益生菌微胶囊产品大多数只具备益生菌的功效，忽略了益生菌微胶囊的口感。另外在微胶囊产品中，由于普通益生菌微胶囊采用单层包埋的抗逆性差，受到胃酸和酶作用影响，导致最终进入肠道内的益生菌数量急剧减少而不能有效发挥其益生作用。

椰纤果是经椰子水或椰浆利用木醋杆菌发酵制作而成的一种白色或乳白色凝胶状物质，椰纤果的主要成分为细菌纤维素，它是通过加入木醋杆菌发酵而成的纤维束，这种纤维束是由D-葡萄糖以β-1.4糖苷键相联而成，形成多晶纤维束，具备良好的咀嚼感，可添加于杂果罐头、果冻、饮料、珍珠奶茶等食品中，具有调节血糖值、抑制胰高血糖素分泌、预防糖尿病、调节血中脂质、调节血中胆固醇、防止肥胖等功效。在椰纤果使用时，采用脱酸和脆化、糖化等工艺配合获得良好的口味和口感。

海藻酸钙凝胶球(简称凝胶球)是海藻酸钠滴到固化液中形成的具有包裹作用的小球。具备咀嚼感，广泛用于果冻产品中，可添加于杂果罐头、饮料、珍珠奶茶等食品中。凝胶球可随设备的不同制作成不同大小，并且通过添加其他胶类物质，可改善其咀嚼性，强度和口感。

为了获得果粒般的口味和口感，同时又有益生菌的功效，采用益生菌微胶囊干燥或湿润颗粒，加入到椰纤果或海藻酸钙凝胶球的制备工艺中，在椰纤果中通过实施二次或多次发酵，形成高凝胶强度的切割颗粒，从而对益生菌微胶囊进行二次椰纤果包埋。或是将益生菌微胶囊加入至海藻酸钠溶液，滴入固化液中形成海藻酸钙包裹益生菌微胶囊的小球。最后，可选择同时添加果粒、香精改善口感，提高益生菌微胶囊软颗粒的口味，同时有效阻止益生菌微胶囊所处环境对益生菌的存活影响，还可以极大降低胃酸和酶作用影响，使益生菌到达人体肠道时保持相对较高的数量和活性。

益生菌微胶囊还可通过加入到结冷胶或变性淀粉中，形成球状颗粒，从而起到改善口感，对益生菌进行二次保护的作用。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种益生菌微胶囊软颗粒，其包括益生菌微胶囊椰纤果软颗粒和益生菌微胶囊凝胶球软颗粒，其中益生菌微胶囊椰纤果软颗粒包括：椰子水、椰浆、椰果酱、蔗糖、白砂糖、果葡糖浆、木醋杆菌、酸度调节剂、益生菌微胶囊、乙醇和纯净水中的一种或多种，优选地，其中蔗糖含量为约5-10％、白砂糖含量为约3-5％、果葡糖浆含量为约0-5％、磷酸二氢铵含量为约0.3-0.8％、木醋杆菌含量为约0.1-0.5％、酸度调节剂含量为约1-5％。其中益生菌微胶囊凝胶球软颗粒包括：白砂糖、海藻酸钠、黄原胶、魔芋胶、卡拉胶、固化液(含乳酸钙、氯化钙)、益生菌微胶囊、色素、纯净水中的一种或多种，优选地，其中白砂糖含量为约10-15％、海藻酸钠约0.5-1％、黄原胶约0.1-0.3％、魔芋胶约0.1-0.2％，固化液中乳酸钙浓度约1-3％。

所述益生菌微胶囊是可常温条件下长期保存的固态干粒微胶囊，采用一层、双层或多层壁材将益生菌包埋制成50～500μm的固体颗粒，应用及保存条件受环境的影响较小，可应用到药品、保健品及食品领域。所述的微胶囊尤其是双层和多层包衣的微胶囊，其微胶囊内的活菌量显著升高，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下能够长期储存，例如存放30天后、60天或120天后微胶囊内活菌量下降较小，仍然保持了较高的活菌量。而且，上述微胶囊能够耐酸，使得最终进入肠道内的益生菌数量增多。此外，所述微胶囊还具有良好的疏水性，颗粒表面菌残留更低，从而减小了益生菌泄漏的发生几率。

本发明所述的益生菌微胶囊软颗粒既具有椰果功能性又具有益生菌的益生特性，具有丰富的营养、极佳的风味、良好的咀嚼口感和较强益生菌存活性和功能。相比现有的含椰果软颗粒的产品，该产品不但能在至少6个月的常温货架储存条件下保持较高稳定性，且益生菌数量及菌活力更高，充分保证了产品食用后抵达人类肠道的益生菌数量，真正发挥更好的益生作用。

本产品添加的微胶囊采用的是椰果包埋微胶囊的方式。相比直接添加微胶囊，该产品不但增加了椰果的功能特性，并且对于益生菌进行了二次保护，使得益生菌菌数存活率比直接添加微胶囊更高，效果更好。同时，爽脆的椰果口感充分保证了终产品的口感口味。此外，本产品添加的微胶囊还采用将其加入至海藻酸钠溶液，滴入固化液中形成海藻酸钙包裹益生菌微胶囊的小球的方式。

本发明的另一目的是提供一种益生菌微胶囊椰纤果软颗粒的制备方法，其中基础制备方法，包括以下步骤：

(1)配制椰纤果培养基，进行无菌接种木醋杆菌，得到椰纤果料液；

(2)铺盘：将椰纤果料液洒入经消毒处理的塑料盘，铺盘温度为70℃，铺盘厚度为0.5-0.8cm；质量约为0.8-1kg，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温；

(3)加入微胶囊：当塑料盘底层培养液长完时，均匀洒入0.2～0.5％的微胶囊于培养液中进行接种；

(4)培养：静置培养4～6天，培养过程中保持温度为28～32℃，湿度为85～95％；

(5)收盘杀菌：培养液长完时开始收盘，将收盘后的椰纤果送入杀菌房杀菌；

杀菌温度为50-60℃，杀菌时间为20-30min；

(6)切割、筛选：将杀菌后的椰纤果平摊并抚平在模板中央，将模板连同椰纤果送入切割机，进行前后2次垂直切割；

(7)漂洗脱酸：

每千克椰纤果加饱和石灰水约500ml；脱酸30min，漂洗2小时；不断搅拌；脱酸完全之后，用水冲洗直到无味即可；

(8)脆化糖化：

将脆化剂加入到糖液中对椰纤果进行脆化糖化，脆化糖化的温度为55～60℃，脆化糖化的时间为45～60min；糖液浓度为33％。

其中优化制备方法，包括以下步骤：

(1)配制椰纤果培养基，进行无菌接种木醋杆菌，得到椰纤果料液；

(2)一次铺盘：

将椰纤果料液洒入经消毒处理的塑料盘，铺盘温度为70℃，铺盘厚度为0.5-0.8cm；质量为0.8-1kg，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温；

(3)一层培养：

静置培养4-6天，培养过程中每天保持温度为28-32℃，湿度为85-95％，温度过高时通风排气；

(4)加入微胶囊：

观察到塑料盘底层培养液长完时，均匀洒入0.2-0.5％的微胶囊于培养液表面；

(5)二次铺盘：

将料液洒在一层培养液上，铺盘厚度为0.3-0.8cm；洒盘完成后喷入少量C₂H₅OH，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，冷却到室温；

(6)二层培养：

静置培养4-6天，培养过程中每天保持温度为28-32℃，湿度为85-95％，温度过高时通风排气；

(7)收盘杀菌：

培养液长完时开始收盘，将收盘后的椰纤果送入杀菌房杀菌；

杀菌温度为50-60℃，杀菌时间为20-30min；

(8)切割、筛选：

将杀菌后的椰纤果平摊并抚平在模板中央，将模板连同椰纤果送入切割机，进行前后2次垂直切割；

(9)漂洗脱酸：

每千克椰果加饱和石灰水约500ml，脱酸30min，漂洗2小时；不断搅拌；脱酸完全之后，用水冲洗直到无味；

(10)脆化糖化：

将脆化剂加入到糖液中对椰果进行脆化糖化，脆化糖化的温度为55-60℃，脆化糖化的时间为45-60min；糖液浓度为33％。

所述的脆化剂为羧甲基纤维素钠CMC-Na，脆化剂的添加量为0.15-0.3％。

益生菌微胶囊凝胶球软颗粒的制备方法为：

(1)配制凝胶溶液：

将海藻酸钠溶于水中加热配制约1-1.5％的海藻酸钠溶液，加入约0.2％的黄原胶和约0.1％的魔芋胶，溶液冷却至室温；

(2)加入微胶囊：

每千克凝胶溶液中加入约1-3％的微胶囊，加入或不加入色素，混合均匀；

(3)配制固化液：

将乳酸钙溶于水中配制约1-3％的乳酸钙溶液；

(4)凝胶球形成：

将凝胶溶液通过凝胶球制备设备滴入固化液中，凝胶球粒径为约0.3-1cm。

定义

除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常理解相同的含义，但如有冲突，则以本说明书中的定义为准。

如说明书和权利要求书中所用，单数形式“一”、“一个”和“该(所述)”包括复数形式，除非上下文另有明确说明。

如无特殊说明，本说明书中的百分比(％)均为重量百分比(重量％)。

在说明书和权利要求书中使用的涉及组分量、工艺条件等的所有数值或表述在所有情形中均应理解被“约”修饰。术语“约”当指数量或数值范围时，意思是所指数量或者数值范围是试验变异性内(或统计学实验误差内)的近似值，因此该数量或者数值范围可以在所述数量或数值范围的例如+5之间变化。

涉及相同组分或性质的所有范围均包括端点，该端点可独立地组合。由于这些范围是连续的，因此它们包括在最小值与最大值之间的每一数值。还应理解的是，本申请引用的任何数值范围预期包括该范围内的所有子范围。

当本发明针对物理性质例如分子量或者针对化学性质范围时，应包括范围的所有组合和亚组合以及其内的具体实施方式。术语“包含”(以及相关术语例如“含有”或“含”或“具有”或“包括”)包括这样一些实施方式，该实施方式为例如，物质、组合物、方法或过程等的任何组合，其“由所描述的特征组成”或者“基本上由所描述的特征组成”。

本说明书和权利要求中使用的“和/或”，应当理解为相关联的组分“二者择一或二者”，即组分在一些情况中联合存在而在另一些情况中分开存在。多个用“和/或”列出的组分应当以同样的方式理解，即“一种或多种”相关联的组分。除了“和/或”从句具体确定的组分，其它组分可任选地存在，无论与那些具体确定的组分相关还是不相关。因此，作为非限制性实例，提及“A和/或B”，当用于连接开放式结尾的文字如“包括”，在一个实施方案中，可仅指A(任选地包括除B外的组分)；在另一实施方案，可仅指B(任选地包括除A外的组分)；在再一实施方案中，指A和B(任选的包括其它组分)等。

本说明书和权利要求书中所用的“或”，应当理解为和上述定义的“和/或”具有相同的含义。例如，当在列表中分隔项目时，“或”或“和/或”应当译为包括在内的，即，包括多个或列表组分中的至少一个，但也包括多于一个，和任选的其它未列出的项目。只有术语明确地指向对立面，如“仅一个”或“正好一个”，或在权利要求书中使用的“由…组成”应当指的是包括多个或列表组分中的正好一个。通常，本文所用的术语“或”仅仅当有排他性的先行词如“要么”“之一”“仅一个”或“正好一个”时才被认为指向排他性的选择(即，一个或另一个但不是两者)。

应当理解，除非明确地相反指示，否则在本文要求保护的包括多于一步或一个行为的任何方法中，该方法的步骤和行为的顺序不必限制于所叙及的方法的步骤和行为的顺序。

本发明使用的缩写具有在食品、生物学和化学领域的通常含义。

益生菌：本发明的益生菌微胶囊内的益生菌类型，使用国家批准的任何益生菌作为微胶囊包埋芯材的保护对象。包括：青春双歧杆菌、动物双歧杆菌(乳双歧杆菌)、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、德氏乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜热链球菌、凝结芽孢杆菌等益生菌中一种或多种。具体如附表A～D所示。

A.可用于食品的菌种名单

B.可用于保健食品的益生菌菌种名单

C.可用于婴幼儿食品的菌种名单

D.可用于保健食品的真菌菌种名单

序号	中文名	英文名
			1	酿酒酵母	Saccharomyces cerevisiae
2	产朊假丝酵母	Cadida atilis
			3	乳酸克鲁维酵母	Kluyveromyces lactis
4	卡氏酵母	Saccharomyces carlsbergensis
			5	蝠蛾拟青霉	Paecilomyces hepiali Chen et Dai，sp.Nov
6	蝙蝠蛾被毛孢	Hirsutella hepiali Chen et Shen
			7	灵芝	Ganoderma lucidum
8	紫芝	Ganoderma sinensis
			9	松杉灵芝	Ganoderma tsugae
10	红曲霉	Monacus anka
			11	紫红曲霉	Monacus purpureus

壁材：用来包覆、保护或控制释放芯材的成囊物质称为微胶囊的壁材、囊壁或囊壳。壁材是构成微胶囊外壳的材料，也可以称为包衣或包材。

在选择壁材时要考虑壁材本身的性能，如渗透性、稳定性、机械强度、溶解性、可聚合性、电性能、吸湿性及成膜性等，对于生物活性物质的芯材，还要着重考虑壁材的毒性，与芯材的相容性。在本发明中选择具有无毒、成膜性或成球性较好、免疫原性低、生物相容性好、可降解且产物无毒副作用的壁材。

在本发明中，优选与活菌具有很好的生物相容性的成膜材料、食品中可选用的肠溶材料、具有阻湿性的成膜材料、具有阻氧性的成膜材料。

优选的，具体的实例包括下列的一种或多种的组合：

(1)可食用蛋白类：包括动物蛋白如乳蛋白、卵蛋白、酪蛋白，植物蛋白如谷类蛋白等；

优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自乳清蛋白：

包括浓缩乳清蛋白(WPC)、分离乳清蛋白(WPI)或乳清蛋白肽，尤其优选分离乳清蛋白(WPI)；其中，WPI是在浓缩乳清蛋白(WPC)的基础上经过进一步工艺处理得到的高纯度乳清蛋白，纯度可达90％以上，且更易消化吸收，安全无毒无副作用；

乳蛋白：包括酪蛋白或乳清蛋白。乳清蛋白质是指溶解分散在乳清中的蛋白，约占乳蛋白质的18％～20％，可分为热稳定和热不稳定乳清蛋白两部分。

浓缩乳清蛋白(WPC)

将乳清直接烘干后，可得到乳清粉末，其中的乳清蛋白极低，一般为百分之十几，不超过百分之三十。乳清经过澄清、超滤、干燥等过程后得到的产物就是浓缩乳清蛋白。过滤程度的不同可以得到蛋白浓度从34～80％不等的产品。

分离乳清蛋白(WPI)

分离乳清蛋白是在浓缩乳清蛋白的基础上经过进一步的工艺处理得到的高纯度乳清蛋白，纯度可达90％以上。其价格昂贵，是浓缩乳清蛋白的2～3倍，但是它也更容易消化吸收。分离乳清蛋白的真正妙处在于它的营养价值，它拥有高含量的优质蛋白，能为某些特定需要的人群比如婴儿和住院病人提供所需优质蛋白。此外，分离乳清蛋白所含有的生物活性化合物如α～乳白蛋白和β～乳球蛋白、乳铁蛋白以及免疫球蛋白，都为市场注入了新鲜的活力。

乳清蛋白肽

乳清蛋白肽是乳清蛋白的水解产物，是乳清蛋白的精华，它在机体中能更快地参与肌肉合成的过程。

优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自下列中的一种或者多种的组合：

植物蛋白：包括油料种子蛋白、豆类蛋白质、谷类蛋白等，

其中，油料种子蛋白包括：花生蛋白、芝麻蛋白、油菜子蛋白、向日葵蛋白、棉子蛋白、红花蛋白、椰子蛋白等；

其中，豆类蛋白包括：大豆蛋白、蚕豆蛋白、豌豆蛋白、绿豆蛋白、红小豆蛋白、芸豆蛋白等；

其中，谷类蛋白包括：稻类(籼稻、粳稻、糯稻)蛋白、麦类(小麦、大麦、燕麦、黑麦)蛋白、玉米蛋白、高粱蛋白、粟蛋白、黍蛋白、黄米蛋白、荞麦蛋白等，以及薯类蛋白：包括甘薯蛋白、马铃薯蛋白、山药蛋白、芋蛋白、木薯蛋白等；

其中，玉米蛋白包括玉米醇溶蛋白、玉米胚蛋白等；

优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自玉米蛋白，包括玉米醇溶蛋白、玉米胚蛋白，尤其优选玉米醇溶蛋白。

(2)油脂类：

本发明中，油脂是油和脂肪的统称，是脂肪族羧酸与甘油所形成的酯，在室温下呈液态的称为油，呈固态或半固态的的称为脂肪。天然油脂大都是混合甘油酯。从植物种子中得到的大多为油，来自动物的大多为脂肪。

本发明中，根据脂肪酸的种类，各种天然脂肪酸分子是由不同碳链(4～24C)所组成的直链脂肪酸。除个别例外，碳原子均为双数。此类脂肪酸有两种分类法：一种是根据碳原子数将脂肪酸分为短链(4～6C)、中链(8～12C)及长链(12C以上)脂肪酸。另一种是将脂肪酸分为饱和及不饱和脂肪酸。饱和脂肪酸的一般分子式为C_nH_2nO₂，而不饱和脂肪酸带有1、2、3个以至更多的双键，其一般分子式为C_nH_2n～2O₂、CnH_2n～4O₂、CnH_2n～6O₂。其中有两个以上双键的亚油酸、亚麻酸及花生四烯酸称为多不饱和脂肪酸。除直接脂肪酸外，还有环状脂肪酸，大枫子油中的大枫子油酸与亚大枫子油酸。

本发明中的油脂中的脂肪酸大多是含偶数碳原子的饱和的或不饱和的脂肪酸，常见的有肉豆蔻酸(C14)、软脂酸(C16)、硬脂酸(C18)等饱和酸和棕榈油酸(C16，单烯)、油酸(C18，单烯)、亚油酸(C18，二烯)、亚麻酸(C18，三烯)等不饱和酸。某些油脂中含有若干特殊的脂肪酸，如桐油中的桐油酸，菜油中的油菜酸，蓖麻油中的蓖麻酸，椰子油中的橘酸等。

根据来源将脂肪分成动物性脂肪和植物性脂肪。动物性脂肪又有两大类，一类为水产动物脂肪，如鱼类、虾、海豹等另一类是陆生动物脂肪，其中大部分含饱和脂肪酸和较少量的不饱和脂肪酸。植物性脂肪如棉子油、花生油、菜子油、豆油等，其脂肪中主要含不饱和脂肪酸，而且多不饱和脂肪酸(亚油酸)含量很高，占脂肪总量的40～50％。但椰子油中的脂肪酸主要是饱和的脂肪酸。

中链甘油三酯(MCT)：其为己酸(C6)到月桂酸(C12)组成的甘油三酯，尤其是指其组成中的脂肪酸为辛酸、癸酸等六碳链到十二碳链的脂肪酸的一种结构脂质，天然的MCT主要来源于椰子油、棕榈油等植物油中。低于己酸构成的甘油三酯为短链脂肪酸甘油三酯(SCT)，高于月桂酸组成的甘油三酯称为长链脂肪酸甘油三酯(LCT)。

棕榈油：又称棕油、棕皮油，包括：毛棕榈油(CPO)、棕榈粕(PE)、毛棕榈仁油(CPKO)、棕榈仁粕(PKE)、～精炼棕榈油(RBD PO)、棕榈油色拉油(RBD PKO)、棕榈油酸(PFAD)、棕榈液油(简称OLEAN)、棕榈硬脂(简称STEARINE或ST)等。棕榈油在常温下呈半固态，其稠度和熔点在很大程度上取决于游离脂肪酸的含量。常把低酸值的棕榈油叫做软油，高酸值的油则叫做硬油。

本发明的益生菌微胶囊的壁材优选选自棕榈油，尤其优选约33℃棕榈油、约40℃棕榈油、约44℃棕榈油、约52℃棕榈油、约58℃棕榈油，更优选熔点为约40℃以上的棕榈油，尤其是熔点为约40～50℃的棕榈油，例如熔点为约40℃的棕榈油。

优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自下列中的一种或者多种的组合：

植物油：包括代可可脂、可可脂、菜籽油、大豆油、玉米油、花生油、棉籽油、葵花籽油、棕榈油(固体棕榈油或者液体棕榈油)、棕仁油、椰子油等；或者

动物油：猪油、牛油、鱼油、乳脂、羊脂等。

优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自优选熔点为约40℃以上的油脂，尤其是熔点为约40～50℃的油脂，例如熔点为约40℃的棕榈油或MCT。

尤其优选下列中的一种或者多种的组合：中链甘油三酯(MCT)、代可可脂、棕榈油、卵磷脂、棕榈油甘油单酯、氢化油脂(如：氢化棕榈油、硬化油、氢化大豆油)等，它们的熔点优选约40℃以上，尤其优选熔点为约40～50℃。

(3)其他材料：

包括：海藻酸钠、虫胶、CMC-Na、胶凝糖、黄原胶、k-角叉菜胶、醋酸邻苯二甲酸纤维素、麦芽糊精、淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、葡聚糖、玉米糖浆、果胶、***胶、壳聚糖、乙酰化单双甘油脂肪酸酯、魔芋胶、卡拉胶、蜡质或明胶等的一种或者多种的组合。

肠溶性壁材：肠溶性指微胶囊顺利通过胃环境，而不被破坏或降解，最终进入肠道，壁材发生崩解、溶解或降解，导致胶囊内部的芯材被释放出来的过程。肠溶性壁材可以是某一种单独的壁材，也可是复合壁材。包括：虫胶、果胶、海藻酸钠、甘油单酯、甘油三脂、氢化油脂(如：棕榈油、氢化棕榈油，硬化油，氢化大豆油等)等。

优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材具备肠溶性。

复合壁材：本发明的复合壁材是指将两种或者多种前述壁材混合复配以得到更优性能的壁材。本发明的复合壁材具有良好的协同作用，有利于提高壁材中含有这些成分的微胶囊的稳定性和致密性，改善微胶囊产品的品质，进而促进微胶囊技术在各行业的应用。

亲水胶体：通常是指能溶解于水，并在一定条件下充分水化形成黏稠、滑腻或胶冻溶液的大分子物质，在食品、医药、化工及其他许多领域中广泛应用。亲水胶体按来源可分为：植物分泌物，如果胶、瓜尔豆胶、***胶等；微生物发酵、代谢产物，如黄原胶、结冷胶等；海藻胶提取物，如卡拉胶、琼脂、海藻酸盐等。

果胶：果胶是从植物细胞壁中提取的天然多糖类高分子化合物，柑橘果皮、苹果糊、甜菜浆等是提取果胶最常见的原料。根据果胶分子中酯化的半乳糖醛酸基的比例可将其分为高甲氧基果胶(包括高甲氧基水溶性番茄果胶与高甲氧基柑橘果胶等)和低甲氧基果胶(酯化度50％为区分值)。

固化剂：本发明中的固化剂包括至少一种下列化合物：乙酸钠、冰乙酸、柠檬酸、柠檬酸钠、钙盐、表面活性剂。

固化剂优选乙酸钠、冰乙酸和表面活性剂混合液，这样可以使蛋白在非共价键和共价键(如二硫键)的可共同作用下形成不可逆的化学凝胶，并结合表面活性剂的作用，提高蛋白颗粒凝胶强度和在分散相中的稳定性。

粘合剂：包括淀粉、变性淀粉、可压性淀粉、糊精、乳糖、动物胶如明胶、***胶、蔗糖、西黄芪胶、液状葡萄糖、虫胶、皮胶、松香、羟甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚维酮、羟丙基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、微晶纤维素、无机盐类等。用于本发明的益生菌微胶囊的优选粘合剂为：淀粉，优选的粘合剂浓度为5％～20％。

具体实施方式

本发明涉及一种益生菌微胶囊，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括：菌芯颗粒和任选的至少一层包覆所述菌芯颗粒的外壳，其中，所述菌芯颗粒包括芯材和第一层壁材，所述芯材包括一种或多种益生菌粉或菌泥，所述芯材被所述第一层壁材所包覆；

所述至少一层包覆所述菌芯颗粒的外壳包括一层、两层或更多层壁材，分别为第二层壁材、第三层壁材或者更多层壁材。

任选的，上述菌芯颗粒中还包括粘合剂。

优选的，以1000重量份的干粒微胶囊为基准，上述微胶囊的组成的重量比例为：菌泥或菌粉为约50至500重量份；第一层壁材为约150至950重量份；第二层壁材为约0至350重量份；第三层壁材约为0至350重量份；第四层壁材约为0至260重量份。

优选的，上述益生菌微胶囊的制备方法中，以1000重量份微胶囊干粒为基准，

益生菌菌泥或菌粉为约50至约500重量份，更优选：约100重量份、约150重量份、约200重量份、约250重量份、约300重量份、约350重量份、约400重量份、约450重量份或其间的任意范围，尤其优选约250～约400重量份；

第一层壁材为约150至约950重量份，更优选：约200重量份、约250重量份、约300重量份、约350重量份、约400重量份、约450重量份、约500重量份、约550重量份、约600重量份、约650重量份、约700重量份、约750重量份、约800重量份、约850重量份、约900重量份或其间的任意范围，尤其优选约450～约750重量份；

任选的第二层壁材为约0至约350重量份，更优选：约100重量份、约150重量份、约200重量份、约250重量份、约300重量份或其间的任意范围，尤其优选约200～约300重量份；

任选的第三层约0至约350重量份，更优选：约100重量份、约150重量份、约200重量份、约250重量份、约260重量份、约300重量份或其间的任意范围，尤其优选约200～约300重量份；

任选的第四层约0至约250重量份，更优选：约100重量份、约150重量份、约200重量份、约250重量份、约260重量份、约250重量份或其间的任意范围，尤其优选约100～约250重量份。

优选的，上述益生菌选自青春双歧杆菌、动物双歧杆菌(乳双歧杆菌)、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、德氏乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜热链球菌、凝结芽孢杆菌等益生菌中的一种或多种。

在一个实施方案中，上述益生菌微胶囊的壁材选自食用蛋白、油脂或者其他材料中的一种或多种组合。

优选的，上述可食用蛋白选自动物蛋白或者植物蛋白中的一种或多种组合：

其中，动物蛋白为适用于本发明的益生菌微胶囊的任意动物蛋白，例如本发明中定义的任意动物蛋白中的一种或多种组合，优选乳蛋白、卵蛋白、酪蛋白等，更优选乳清蛋白，包括浓缩乳清蛋白(WPC)、分离乳清蛋白(WPI)或乳清蛋白肽，尤其优选分离乳清蛋白(WPI)；

其中，植物蛋白为适用于本发明的益生菌微胶囊的任意植物蛋白，例如本发明中定义的任意植物蛋白中的一种或多种组合，包括油料种子蛋白、豆类蛋白质、谷类蛋白等；

其中，油料种子蛋白优选：花生蛋白、芝麻蛋白、油菜子蛋白、向日葵蛋白、棉子蛋白、红花蛋白、椰子蛋白等；

其中，豆类蛋白优选：大豆蛋白、蚕豆蛋白、豌豆蛋白、绿豆蛋白、红小豆蛋白、芸豆蛋白等；

其中，谷类蛋白优选：稻类(籼稻、粳稻、糯稻)蛋白、麦类(小麦、大麦、燕麦、黑麦)蛋白、玉米蛋白、高粱蛋白、粟蛋白、黍蛋白、黄米蛋白、荞麦蛋白等，以及薯类蛋白：包括甘薯蛋白、马铃薯蛋白、山药蛋白、芋蛋白、木薯蛋白等；

其中，玉米蛋白优选玉米醇溶蛋白、玉米胚蛋白等。

优选的，上述油脂为适用于本发明的益生菌微胶囊的任意油脂，例如本发明中定义的油脂中的一种或多种组合，优选选自下列中的一种或者多种的组合：

优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自下列中的一种或者多种的组合：

植物油：包括代可可脂、可可脂、菜籽油、大豆油、玉米油、花生油、棉籽油、葵花籽油、棕榈油(固体棕榈油或者液体棕榈油)、棕仁油、椰子油等；或者

动物油：猪油、牛油、鱼油、乳脂、羊脂等。

优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自优选熔点为40℃以上的油脂，尤其是熔点为40～50℃的油脂，例如熔点为40℃的棕榈油或MCT。

尤其优选下列中的一种或者多种的组合：中链甘油三酯(MCT)、代可可脂、棕榈油、卵磷脂、棕榈油甘油单酯、氢化油脂(如：氢化棕榈油、硬化油、氢化大豆油)等，它们的熔点优选40℃以上，尤其优选熔点为40～50℃。

更优选：熔点为40℃以上的棕榈油，尤其是熔点为40～50℃的棕榈油，例如熔点为40℃的棕榈油。

优选的，上述其他材料选自海藻酸钠、虫胶、CMC-Na、胶凝糖、黄原胶、k-角叉菜胶、醋酸邻苯二甲酸纤维素、麦芽糊精、淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、葡聚糖、玉米糖浆、果胶、***胶、壳聚糖、乙酰化单双甘油脂肪酸酯、魔芋胶、卡拉胶、蜡质或明胶等的一种或者多种的组合。

在一个实施方案中，上述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括：菌芯颗粒和一层包覆所述菌芯颗粒的外壳，其中，所述菌芯颗粒包括芯材和第一层壁材，所述芯材包括一种或多种益生菌粉或菌泥，所述芯材被所述第一层壁材所包覆，以及所述一层包覆所述菌芯颗粒的外壳包括第二层壁材，任选的第三层壁材和任选的第四层壁材；任选的，上述菌芯颗粒还包括粘合剂，

其中，上述第一层壁材为油脂或者乳清蛋白(WPI)或其组合。

在一个实施方案中，上述的益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，其中所述第二层壁材为WPI或油脂或其组合。

在一个实施方案中，上述的益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，其中所述第一层壁材为WPI，优选为约150至约950重量份，更优选：约300～750重量份；

任选的第二层壁材为WPI，优选为约0～350重量份，更优选约300～350重量份；或者

任选的第二层壁材为油脂，优选熔点为40～50℃的油脂，尤其是棕榈油或者MCT，优选的，其为为约0～350重量份，更优选约150、200或300重量份；

任选的第三层壁材为WPI，优选为约0～350重量份，更优选约250、260重量份；或者

任选的第三层壁材为油脂，优选熔点为40～50℃的油脂，尤其是棕榈油或MCT，优选的，其为为约0～350重量份，更优选约150、200或300重量份；

任选的第四层壁材为WPI，优选为约0～250重量份，更优选约300～350重量份。

在一个实施方案中，上述益生菌微胶囊的壁材是选自多种材料组合的复合壁材。

本发明的复合壁材包括蛋白质和亲水胶体，或者由蛋白质和亲水胶体组成，其中：

所述蛋白质选自上述可食用蛋白，例如动物蛋白如乳蛋白、卵蛋白、酪蛋白，植物蛋白如谷类蛋白等；所述亲水胶体选自上述植物分泌物、微生物发酵或代谢来源的胶体、海藻胶提取物等。

优选的，所述亲水胶体选自下列的一种或多种：果胶(如桃胶)、***胶、k～角叉菜胶、刺槐豆胶、卡拉胶、黄原胶、瓜尔豆胶、罗望子胶、亚麻籽胶、皂荚豆胶、黄蓍胶、印度树胶、刺梧桐胶、魔芋胶、印度芦荟提取液、菊糖、仙草多糖、亚麻籽胶、凝结多糖、普鲁兰糖、结冷胶、海藻酸丙二醇酯等。

在一个实施方案中，本发明的复合壁材包括一种或多种乳蛋白和一种或多种亲水胶体，其中：

优选的，乳蛋白选自酪蛋白或乳清蛋白，如分离乳清蛋白、浓缩乳清蛋白、乳清蛋白肽；

优选的，亲水胶体选自果胶、卡拉胶、黄原胶、瓜尔豆胶。

在一个实施方案中，上述壁材中，蛋白质的浓度为9～13％(重量)。

在一个实施方案中，上述壁材中，亲水胶体和蛋白质的重量比为约1:500～约1:25，优选的，亲水胶体和蛋白质的重量比为约1:450、约1:400、约1:350、约1:300、约1:250、约1:200、约1:150、约1:100、约1:50或其间的任意范围。

在本发明的一方面，本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括：菌芯颗粒和任选的至少一层包覆所述菌芯颗粒的外壳，其中，所述菌芯颗粒包括芯材和第一层壁材，所述芯材包括一种或多种益生菌粉或菌泥，所述芯材被所述第一层壁材所包覆，以及所述至少一层包覆所述菌芯颗粒的外壳包括一层、两层或更多层壁材，分别为第二层壁材、第三层壁材或者更多层壁材；

任选的，上述菌芯颗粒还包括粘合剂；

上述益生菌微胶囊的制备包括以下步骤：

(1)单层微胶囊制备：任选的将菌粉或菌泥与第一壁材均匀混合并任选经固化、过滤收集湿粒进行干燥得到单层微胶囊干粒；和任选的

(2)多层微胶囊制备：将上述单层微胶囊干粒作为菌芯颗粒，在菌芯颗粒外均匀涂布一层壁材(优选通过流化床喷雾造粒法)，并任选喷涂固化液使胶囊壁固化，将所制微胶囊干燥(优选于流化床中干燥)，收集双层微胶囊干粒或者将其继续再次或多次包衣。

在一个实施方案中，上述益生菌微胶囊的制备方法中，以上述方法所得的益生菌微胶囊以1000重量份微胶囊干粒为基准，

益生菌菌泥或菌粉为约50至约500重量份，更优选：约50重量份、约100重量份、约150重量份、约200重量份、约250重量份、约300重量份、约350重量份、约400重量份、约450重量份、约500重量份或其间的任意范围，尤其优选约250～约400重量份；

第一层壁材为约150至约950重量份，更优选：约200重量份、约250重量份、约300重量份、约350重量份、约400重量份、约450重量份、约500重量份、约550重量份、约600重量份、约650重量份、约700重量份、约750重量份、约800重量份、约850重量份、约900重量份、约950重量份或其间的任意范围，尤其优选约450～约750重量份；

任选的第二层壁材为约0至约350重量份，更优选：约100重量份、约150重量份、约200重量份、约250重量份、约300重量份、约350重量份或其间的任意范围，尤其优选约200～300重量份；

任选的第三层约0至约350重量份，更优选：约100重量份、约150重量份、约200重量份、约250重量份、约260重量份、约300重量份、约350重量份或其间的任意范围，尤其优选约200～约300重量份。

在一个实施方案中，上述益生菌微胶囊的制备方法中，菌粉或菌泥和第一层壁材的比例为：约1:1～约1:19，优选为：约1:1、约1:2、约1:3、约1:4、约1:5、约1:6、约1:7、约1:8、约1:9、约1:10、约1:11、约1:12、约1:13、约1:14、约1:15、约1:16、约1:17、约1:18、约1:19或其间的任意范围，尤其优选为约1:3～4:6。

在一个实施方案中，本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括以下步骤：

(1)第一层微胶囊的包被：

a.任选的，向菌泥或菌粉中添加粘合剂进行造粒；

b.任选的，对第一壁材进行预处理：

将第一壁材与水混合，充分溶解后进行冷热交替处理形成稳定凝胶：

(i)优选的，将所述第一壁材与水混匀，于低温约2至8℃搅拌约约4至16小时，优选的转速约170至240每分钟；

(ii)更优选进一步对第一壁材进行约75至约96℃(优选约75℃、约76℃、约77℃、约78℃、约79℃、约80℃、约81℃、约82℃、约83℃、约84℃、约85℃、约86℃、约87℃、约88℃、约89℃、约90℃、约91℃、约92℃、约93℃、约94℃、约95℃、约96℃，或其间的任意范围)，约30至约180分钟的热处理(优选约35、约40、约45、约50、约55、约60、约65、约70、约75、约80、约85、约90、约95、约100、约105、约110、约115、约120、约125、约130、约135、约140、约145、约150、约155、约160、约165、约170、约175分钟，或其间的任意范围)，优选的转速85至115rpm/每分钟；

(iii)再优选立即冷却，冷却温度约～20至约4℃；约4℃存放约12～约60小时(优选约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19、约20、约21、约22、约23、约24、约25、约26、约27、约28、约29、约30、约31、约32、约33、约34、约35、约36、约37、约38、约39、约40、约41、约约42、约43、约44、约45、约46、约47、约48、约49、约50、约51、约约52、约53、约54、约55、约56、约57、约58、约59、约60小时，或其间的任意范围)得到第一壁材的凝胶溶液；

优选的，上述第一壁材为WPI，优选为约150至约950重量份，更优选：约300～750重量份；

c.将第一壁材液滴均匀包裹到菌粉、菌泥，或者上述步骤a中所得的颗粒上；

d.固化：使固化液液滴均匀包裹上述步骤c中所得的颗粒；

e.干燥；

优选的，菌粉或菌泥和第一层壁材的比例为：2～10：8～16；

(2)任选的第二层微胶囊的包被：

f.将步骤(1)得到的单层微胶囊干粒作为菌芯颗粒与第二层壁材混合制备双层微胶囊，所述第二壁材优选为油脂(优选熔点为40～50℃的油脂，尤其是棕榈油或者MCT)或着乳清蛋白，优选为约0～350重量份；

g.将步骤f所制微胶囊干燥并收集双层微胶囊干粒；

(3)任选第三次或更多次包衣：

j.将步骤(2)得到的双层微胶囊按照前述方法继续进行第三次或更多次包衣；

所述第三壁材优选为油脂(优选熔点为40～50℃的油脂，尤其是棕榈油或者MCT)或着乳清蛋白，优选为约0～350重量份。

优选的，上述益生菌微胶囊的制备方法，其中，第(1)第一层微胶囊的包被的步骤中制得的湿颗粒经干燥后粒径≤400um，优选为50～300um。

优选的，上述第(1)第一层微胶囊的包被的步骤中，使用挤压造粒法。

优选的，上述第(1)第一层微胶囊的包被的步骤中，使用使用流化床造粒法。

优选的，上述益生菌微胶囊的制备方法，其中，第(1)第一层微胶囊的包被的步骤中的固化剂选自乙酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、钙盐、冰乙酸和表面活性剂中的一种或几种的混合物。优选的，固化剂为乙酸～乙酸钠缓冲液，添加占固化剂溶液体积约0.01％至约0.1％的吐温-20。优选的，固化剂溶液浓度为约0.5mol/L，pH约4.5至约5.3。

本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括以下步骤：

(1)第一层微胶囊的包被：

a.任选的，向菌泥或菌粉中添加粘合剂进行造粒；

b.任选的，按照前述方法对第一壁材进行预处理；

c.将第一壁材液滴均匀包裹到菌粉、菌泥，或者上述步骤a中所得的颗粒上；优选的，上述第一壁材为为油脂(优选熔点为40～50℃的油脂，尤其是棕榈油或者MCT)，优选为约150至约350重量份，更优选：约200～350重量份；

d.固化：使固化液液滴均匀包裹上述步骤c中所得的颗粒；

e.干燥。

(2)任选的第二层微胶囊的包被：

f.将步骤(1)得到的单层微胶囊干粒作为菌芯颗粒与第二层壁材混合制备双层微胶囊，所述第二壁材优选为乳清蛋白或者油脂(优选熔点为约40～50℃的油脂，尤其是棕榈油或者MCT)，优选为约150～750重量份，优选为约200、250、300、550、750重量份；

g.将步骤h所制微胶囊干燥并收集双层微胶囊干粒；

(3)任选第三次或更多次包衣：

h.将步骤(2)得到的双层微胶囊按照前述方法继续进行第三次包衣；

所述第三壁材优选为油脂(优选熔点为约40～50℃的油脂，尤其是棕榈油或者MCT)或着乳清蛋白，优选为约0～350重量份；

(4)任选第四次或更多次包衣：

i.将步骤(3)得到的三层微胶囊按照前述方法继续进行第四次或更多次包衣；

所述第三壁材优选为油脂(优选熔点为40～50℃的油脂，尤其是棕榈油或者MCT)或着乳清蛋白，优选为约0～250重量份，更优选约100重量份。

优选的，上述益生菌微胶囊的制备方法，其中，第(1)第一层微胶囊的包被的步骤中制得的湿颗粒经干燥后粒径≤400um，优选为约50～300um。

优选的，上述第(1)第一层微胶囊的包被的步骤中，使用挤压造粒法。

优选的，上述第(1)第一层微胶囊的包被的步骤中，使用锐角挤压造粒法造粒得到乳清蛋白包被的微胶囊。

优选参数为：挤压喷头孔径为约150～约750μm(优选约150、约200、约250、约300、约350、约400、约450、约500、约550、约600、约650、约700、约750μm或其间的任意范围)，优选喷头约150至约200μm与约300至约500μm组合，电压约1500至约1800mv(优选约1300、约1400、约1500、约1600、约1700、约1800mv或其间的任意范围)，频率约1300至约1500Hz(优选约1300、约1400、约1500或其间的任意范围)，气压约290至约330mbar。

优选的，上述第(1)第一层微胶囊的包被的步骤中，使用使用流化床造粒法。

优选的，上述第(1)第一层微胶囊的包被的步骤中，使用使用流化床造粒法，具体包括下列步骤：

a.配制粘合溶液：

将粘合剂(优选淀粉)溶解于温水中，充分溶解后在约30～80℃下保温约1小时，并且不间断搅拌，优选的，在约30℃、约35℃、约40℃、约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约70℃、约75℃、约80℃或期间的任意范围的温度下保温；

优选的浓度为约5～25％，优选约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％，或期间的任意范围；

b.流化床喷雾造粒：

将益生菌菌粉投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将粘合溶液通过喷枪雾化喷射到流化床中，液滴与粉体结合制成颗粒；

其中：

益生菌菌粉为约50至约500重量份，更优选约250～约400重量份；流化床进风温度优选为约30～80℃；

c.过筛：将流化床内内粉体取出，取约50～400微米之间颗粒；

d.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，取第一

壁材优选为油脂通过喷枪雾化喷射到流化床中，使壁材均匀包裹颗粒；

其中：优选的，油脂为棕榈油或者MCT，为约200至约350重量份。

优选的，上述益生菌微胶囊的制备方法，其中，第(2)第二层微胶囊的包被的步骤中，所述第二层壁材为WPI或油脂(优选为棕榈油或者MCT)或者其组合物。

优选的，上述益生菌微胶囊的制备方法，其中，第(3)第二层微胶囊的包被的步骤中，采用流化床法进行第二次包衣，优选采用升温至25至75℃乳清蛋白凝胶液，优选流化床进风温度为30至80摄氏。

优选的，上述益生菌微胶囊的制备方法，其中，第(2)第二层微胶囊的包被的步骤中，所述第二层壁材为油脂，油脂优选为棕榈油或者中链甘油三酯(MCT)，并将步骤(2)得到的微胶囊用WPI进一步进行第三次包衣。

本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有双层层包埋结构，包括以下步骤：

(1)采用锐角挤压造粒法进行第一次WPI包衣；

(2)采用流化床法进行第二次WPI包衣；和任选的

(3)固化；

优选的，所述WPI经上述预变性处理。

本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有双层包埋结构，其中，上述益生菌微胶囊以1000重量份微胶囊干粒为基准，益生菌菌泥或菌粉为约250至约400重量份，第一层壁材为约300至约650重量份，第二层壁材为约150至约350重量份。

包括以下步骤：

(1)采用锐角挤压造粒法进行第一次WPI包衣：

将第一层壁材优选WPI与益生菌菌粉或菌泥优选为凝结芽孢杆菌或鼠李糖乳杆菌均匀混合，其中：

优选的，乳清蛋白进行预变性处理：取乳清蛋白与水混匀，于低温约2至约8℃(优选为约4℃)搅拌约4至约16小时(优选为约16小时)，转速约170至约240每分钟(优选为约180rpm/分钟)；对乳清蛋白溶液进行约75至约96℃(优选为约78℃)，约30至约180分钟的热处理(优选为约45分钟)，转速约85至约115rpm/每分钟(优选为约95rpm/分钟)；立即冷却，冷却温度约～20至约4℃(优选为约0℃)；约4℃存放约12～60小时(约12小时)；

优选的，锐角挤压造粒法的喷头孔径为约150至约750μm，电压约1500至约1800v，频率约1300至约1500Hz，气压约290至约330bar；

(2)固化：将通过锐角挤压造粒法制得的液滴滴入固化剂溶液中固化，固化时间优选至少约10分钟；优选的，固化剂为乙酸～乙酸钠缓冲液，添加占固化剂溶液体积约0.01％至约0.1％的吐温-20；

(3)干燥：将固化后的湿粒进行干燥，并收集单层微胶囊干粒；

优选的，采用热干燥，干燥温度约40至约70℃；或者采用冷冻干燥；制得单层微胶囊干粒粒径≤约150μm；

(4)采用流化床法进行第二次WPI包衣：

将WPI与水混匀制成乳清蛋白水溶液或者凝胶液，所述乳清蛋白水溶液或者凝胶液升温至约25至约75℃(优选为约50℃)；所述流化床进风温度为约30至约80℃(优选为约40℃)；

将上述WPI水溶液或凝胶液喷射到流化床中，使液滴均匀包裹上述制得的单层微胶囊干粒；

任选喷涂固化液使胶囊壁固化而不溶于水；

(5)所制微胶囊继续于流化床中干燥，收集双层微胶囊干粒，

所述微胶囊成品粒径为约100～约300μm(优选粒径约300μm)。

本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有三层包埋结构，包括以下步骤：

(1)采用锐角挤压造粒法进行第一次WPI包衣；

(2)采用流化床法进行第二次油脂包衣；

(3)采用流化床法进行第三次WPI包衣；和任选的

(4)固化；

优选的，所述WPI经上述预变性处理。

本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有三层包埋结构，其中，上述益生菌微胶囊以1000重量份微胶囊干粒为基准，益生菌菌泥或菌粉为约250至约400重量份，第一层壁材为约200至约400重量份，第二层壁材为约200至约350重量份，第三层壁材为约150至约300重量份，

包括以下步骤：

(1)采用与上述双层益生菌微胶囊的相同的制备方法进行第一次WPI包衣；

(2)采用流化床法进行第二次油脂包衣：

将棕榈油或者MCT乳浊液升温至约25至约75℃，流化床进风温度为约30至约80℃；

通过喷枪雾化棕榈油或者MCT乳浊液喷射到流化床中，使液滴均匀包裹步骤(1)中制备得到的单层微胶囊干粒；

(3)采用流化床法进行第三次WPI包衣：

将WPI与水混匀制成乳清蛋白溶液或者凝胶液，将该溶液或者凝胶液升温至约25至约75℃(优选为约50℃)；所述流化床进风温度为约30至约80℃(优选为约40℃)；

在上述双层油脂颗粒外均匀喷涂WPI溶液，其中第三层蛋白固形物含量为0至约300重量份；

(4)进行固化并于流化床中干燥。

本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有一层或者多层包埋结构，包括以下步骤：

(1)流化床造粒：

a.配制粘合溶液：

将粘合剂(优选淀粉)溶解于温水中，充分溶解后在约30～80℃下保温约1小时，并且不间断搅拌，优选的，在约30℃、约40℃、约50℃、约60℃、约70℃、约80℃或期间的任意范围的温度下保温；

优选的浓度为约5～25％，优选约5％、约10％、约20％、约25％，或期间的任意范围；

b.流化床喷雾造粒：

将粘合剂溶液通过喷枪雾化并使液滴与粉体结合形成颗粒；

其中：益生菌菌粉为约250至约400重量份，更优选约250重量份；流化床进风温度优选为约30～70℃；更优选约30℃、约40℃、约50℃、与60℃、约70℃；

所述粘合剂优选为淀粉；

(2)颗粒筛分：

c.过筛：将流化床内内粉体颗粒取出，过筛，优选经筛分得到约50～400

微米的颗粒；

(3)第一次包衣：壁材为WPI(浓度为9～13％)，优选为150～950重量份；更优选300～750重量份；

d.按照前述方法对WPI预变性处理；

e.将液体WPI通过喷枪雾化喷射的流化床中，使其均匀包裹颗粒，；

(4)任选的第二次包衣：壁材为WPI(浓度为9～13％)或油脂(优选棕榈油或者MCT，更优选熔点为40℃)，优选150～750重量份，

使第二壁材均匀包裹上述步骤e中所得的颗粒

f.固化：取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹上述步骤f中所得的颗粒；

g.干燥：将步骤f中制备的微胶囊在流化床中继续干燥约10～30min，；

(5)任选的第三次包衣：

h.按照前述步骤采用蛋白(优选WPI)或者油脂(选棕榈油或者MCT，更优选熔点为40℃)对步骤g中所得到的颗粒进行第三次包衣，其中优选棕榈油或者MCT为约150～200重量份；

(6)任选的第四次包衣：

i.按照前述步骤采用蛋白(优选WPI)或者油脂(选棕榈油或者MCT，更优选熔点为40℃)对步骤h中所得到的颗粒进行第四次包衣，其中优选WPI为约100～250重量份。

本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有双层包埋结构，包括以下步骤：

(1)流化床造粒：

a.任选的配制粘合溶液：按照前述方法配制粘合溶液；

b.流化床喷雾造粒：

将优选约30℃粘合剂溶液通过喷枪雾化并使液滴与粉体结合形成颗粒；

其中：益生菌菌粉为约250至约400重量份，更优选约250重量份；流化床进风温度优选为约30℃；菌泥或菌粉与粘合剂的比例优选为95:5；粘合剂的浓度优选为约10％；

所述粘合剂优选为淀粉；

(2)颗粒筛分：

c.过筛：将流化床内内粉体颗粒取出，过筛，优选经筛分得到50～400

微米的颗粒；

(3)第一次包衣：壁材为壁材为棕榈油或者MCT优选熔点为40℃

d.将液体棕榈油或者MCT通过喷枪雾化喷射的流化床中，将油脂喷雾到颗粒上后迅速降低到约40℃以下，便于包衣增加微胶囊厚度，使油滴均匀包裹颗粒；优选的，棕榈油或者MCT为约200至约350重量份；

(4)第二次包衣：壁材为WPI，浓度为约9～13％，为约300～750重量份

e.按照前述方法对WPI进行预变性处理；

f.将步骤e中所得的WPI溶液升温至约25～35℃，并使液滴均匀包裹上述步骤d中所得的颗粒；

g.固化；

h.干燥：将步骤f中制备的微胶囊在流化床中继续干燥。

本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有三层包埋结构，包括以下步骤：

(1)流化床造粒：

a.任选的配制粘合溶液：按照前述方法配制粘合溶液；

b.流化床喷雾造粒：

将优选约40℃粘合剂溶液通过喷枪雾化并使液滴与粉体结合形成颗粒；

其中：益生菌菌粉为约250至约400重量份，更优选约250重量份；流化床进风温度优选为约40℃；菌泥或菌粉与粘合剂的比例优选为95:5；粘合剂的浓度优选为约10％；

所述粘合剂优选为淀粉；

(2)颗粒筛分：

c.过筛：将流化床内内粉体颗粒取出，过筛，优选经筛分得到约50～400

微米的颗粒；

(3)第一次油脂包衣：壁材为棕榈油或者MCT，优选熔点为约40℃，

d.将液体棕榈油或者MCT通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀

包裹颗粒，将油脂喷雾到颗粒上后迅速降低到约40℃以下，优选的，

棕榈油或者MCT为约200至约350重量份；

(4)第二次包衣：壁材为WPI，浓度为约9～13％，为约300～750重量份；

e.按照前述方法对WPI进行预变性处理；

f.将步骤e中所得的WPI溶液升温至约25～35℃，并使液滴均匀包裹上述步骤d中所得的颗粒；

g.固化；

h.干燥：将步骤f中制备的微胶囊在流化床中继续干燥；

(5)第三次包衣：

i.按照前述步骤采用棕榈油或者MCT对步骤h中所得到的颗粒进行第三次包衣，其中优选棕榈油或者MCT为约150～200重量份。

本发明还涉及一种益生菌微胶囊，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，其根据上述的益生菌微胶囊的制备方法制备得到。

优选的，上述的一层或多层益生菌微胶囊，其中第一层包衣后得到的菌芯颗粒外径约为≤400μm，优选约为50～300μm，更优选约为50～200μm；双层或多层微胶囊外径为约100～约500μm，更优选100～300μm。

在一个实施方案中，本发明还涉及一种益生菌微胶囊椰纤果软颗粒，其包含本文中记载的上述的益生菌微胶囊，其中，基于所述含益生菌微胶囊的椰纤果软颗粒的总重量，含有重量百分比为约0.2～0.5％的益生菌微胶囊，还含有椰子水、椰浆、椰果酱、蔗糖、白砂糖、果葡糖浆、木醋杆菌、酸度调节剂、乙醇和水中的一种或多种，优选地，其中蔗糖含量为约5-10％、白砂糖含量为约3-5％、果葡糖浆含量为约0-5％、磷酸二氢铵含量为约0.3-0.8％、木醋杆菌含量为约0.1-0.5％、酸度调节剂含量为约1-5％。

在一个实施方案中，本发明还涉及一种制备益生菌微胶囊椰纤果软颗粒的方法，包括以下步骤：

(1)配制椰纤果培养基，进行无菌接种木醋杆菌，得到椰纤果料液；

(2)铺盘：将椰纤果料液洒入经消毒处理的塑料盘，铺盘温度为70℃，铺盘厚度为0.5-0.8cm；质量为0.8-1kg，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温；

(3)加入微胶囊：当塑料盘底层培养液长完时，均匀洒入0.2～0.5％的微胶囊于培养液中进行接种；

(4)培养：静置培养4～6天，培养过程中保持温度为28～32℃，湿度为85～95％；

(5)收盘杀菌：培养液长完时开始收盘，将收盘后的椰纤果送入杀菌房杀菌；

杀菌温度为50-60℃，杀菌时间为20-30min；

(6)切割、筛选：将杀菌后的椰纤果平摊并抚平在模板中央，将模板连同椰纤果送入切割机，进行前后2次垂直切割；

(7)漂洗脱酸：

每千克椰纤果加饱和石灰水约500ml；脱酸30min，漂洗2小时；不断搅拌；脱酸完全之后，用水冲洗直到无味即可；

(8)脆化糖化：

将脆化剂加入到糖液中对椰纤果进行脆化糖化，脆化糖化的温度为55～60℃，脆化糖化的时间为45～60min；糖液浓度为33％。

所述的脆化剂为羧甲基纤维素钠CMC-Na，脆化剂的添加量为0.15-0.3％。

在一个实施方案中，本发明还涉及一种制备益生菌微胶囊椰纤果软颗粒的方法，包括以下步骤：

(1)配制椰纤果培养基，进行无菌接种木醋杆菌，得到椰纤果料液；

(2)一次铺盘：

将椰纤果料液洒入经消毒处理的塑料盘，铺盘温度为70℃，铺盘厚度为0.5-0.8cm；质量为0.8-1kg，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温；

(3)一层培养：

静置培养4-6天，培养过程中每天保持温度为28-32℃，湿度为85-95％，温度过高时通风排气；

(4)加入微胶囊：

观察到塑料盘底层培养液长完时，均匀洒入0.2-0.5％的微胶囊于培养液表面；

(5)二次铺盘：

将料液洒在一层培养液上，铺盘厚度为0.3-0.8cm；洒盘完成后喷入少量C₂H₅OH，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，冷却到室温；

(6)二层培养：

静置培养4-6天，培养过程中每天保持温度为28-32℃，湿度为85-95％，温度过高时通风排气；

(7)收盘杀菌：

培养液长完时开始收盘，将收盘后的椰纤果送入杀菌房杀菌；

杀菌温度为50-60℃，杀菌时间为20-30min；

(8)切割、筛选：

将杀菌后的椰纤果平摊并抚平在模板中央，将模板连同椰纤果送入切割机，进行前后2次垂直切割；

(9)漂洗脱酸：

每千克椰果加饱和石灰水约500ml，脱酸30min，漂洗2小时；不断搅拌；脱酸完全之后，用水冲洗直到无味；

(10)脆化糖化：

将脆化剂加入到糖液中对椰果进行脆化糖化，脆化糖化的温度为55-60℃，脆化糖化的时间为45-60min；糖液浓度为33％。

所述的脆化剂为羧甲基纤维素钠CMC-Na，脆化剂的添加量为0.15-0.3％。

在另一个实施方案中，本发明还涉及一种益生菌微胶囊凝胶球软颗粒，其包含本文中记载的上述的益生菌微胶囊，其中，基于所述含益生菌微胶囊凝胶球软颗粒的总重量，含有重量百分比为约0.2～0.5％的益生菌微胶囊，优选地，其中，还含有白砂糖、海藻酸钠、黄原胶、魔芋胶、卡拉胶、固化液(含乳酸钙、氯化钙)、益生菌微胶囊、色素、纯净水中的一种或多种；优选地，其中白砂糖含量为约10-15％、海藻酸钠约0.5-1％、黄原胶约0.1-0.3％、魔芋胶约0.1-0.2％，固化液中乳酸钙浓度约1-3％。

一种制备益生菌微胶囊凝胶球软颗粒的方法，包括以下步骤：

(1)配制凝胶溶液：

将海藻酸钠溶于水中加热配制约1-1.5％的海藻酸钠溶液，加入约0.2％的黄原胶和约0.1％的魔芋胶，溶液冷却至室温；

(2)加入益生菌微胶囊：

每千克凝胶溶液中加入约1-3％的益生菌微胶囊，加入或不加入色素，混合均匀；

(3)配制固化液：

将乳酸钙溶于水中配制约1-3％的乳酸钙溶液；

(4)凝胶球软颗粒形成：

将凝胶溶液通过凝胶球制备设备滴入固化液中，凝胶球软颗粒粒径为约0.3-1cm。

应该理解，实质上并不影响本发明各种实施方案的作用的修改也包括在本申请提供的发明的定义中。因此，以下实施例旨在阐述而不是限制本发明。

优选的，本发明还涉及以下实施方案：

方案1、一种益生菌微胶囊，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括：菌芯颗粒和任选的至少一层包覆所述菌芯颗粒的外壳，

其中，所述菌芯颗粒包括芯材和第一层壁材，所述芯材包括一种或多种益生菌粉或菌泥，所述芯材被所述第一层壁材所包覆，以及

所述至少一层包覆所述菌芯颗粒的外壳包括一层、两层或更多层壁材，分别为第二层壁材、第三层壁材或者更多层壁材。

方案2、根据方案1所述的益生菌微胶囊，其中，以1000重量份的干粒微胶囊为基准，上述微胶囊的组成的重量比例为：菌泥或菌粉50至500重量份；第一层壁材为约0～950重量份优选约150至950重量份或0～350重量份；第二层壁材为约0～950重量份优选约150至950重量份或0～350重量份；第三层壁材为约0至350重量份；第四层壁材为约0至250重量份。

方案3、根据方案1或2所述的益生菌微胶囊，第一层包衣后得到的菌芯颗粒外径为约50～约300μm，双层或多层微胶囊外径为约100～约500μm。

方案4、根据方案1～3的任一项所述的益生菌微胶囊，所述壁材选自所述壁材选自下列中的一种或者多种的组合：

植物蛋白，例如大豆蛋白、大米蛋白、小麦蛋白、玉米蛋白等；优选为玉米蛋白，或

动物蛋白，例如乳清蛋白、酪蛋白等；优选浓缩乳清蛋白(WPC)、分离乳清蛋白(WPI)或乳清蛋白肽，尤其优选分离乳清蛋白(WPI)；或者

油脂，例如熔点为约40℃以上的油脂，优选熔点为约40～50℃的油脂，尤其优选棕榈油、中链甘油酯(MCT)、氢化油脂(如：氢化棕榈油、硬化油、氢化大豆油)、卵磷脂、代可可脂、棕榈油甘油单酯、椰子油、豆油、花生油、葵花籽油，或者

其他材料，例如虫胶、CMC-Na、黄原胶、k～角叉菜胶、***胶、壳聚糖、果胶或明胶等。

方案5、根据方案1～4的任一项所述的益生菌微胶囊，所述壁材选自乳清蛋白或者油脂，尤其是WPI或者MCT；

优选的，所述壁材为复合壁材，包括一种或多种蛋白质和亲水胶体，或者由一种或多种蛋白质和亲水胶体组成，优选的，亲水胶体和蛋白质重量比约1:500～1:25；

更优选的，所述复合壁材根据以下的预处理方法制备得到：

(1)配制蛋白质和亲水胶体的混合溶液，即将蛋白质、亲水胶体与水混合、搅拌，

(2)充分溶解后对该混合溶液进行加热处理，使蛋白质变性，

(3)冷却后可形成含有亲水胶体的稳定的蛋白变性溶液，即为“壁材溶液”。

方案6、根据方案1～5的任一项所述的益生菌微胶囊，所述益生菌选自青春双歧杆菌、动物双歧杆菌(乳双歧杆菌)、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、德氏乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜热链球菌、凝结芽孢杆菌等益生菌中的一种或多种。

方案7、一种益生菌微胶囊软颗粒，其包含根据方案1～6所述的益生菌微胶囊，其包括益生菌微胶囊椰纤果软颗粒和益生菌微胶囊凝胶球软颗粒。

方案8、根据方案7所述的益生菌微胶囊软颗粒，其中，基于所述的益生菌微胶囊软颗粒的总重量，含有重量百分比为约0.2～0.5％的益生菌微胶囊；

方案9、根据方案7～8的任一项所述的益生菌微胶囊椰纤果软颗粒，还含有椰子水、椰浆、椰果酱、蔗糖、白砂糖、果葡糖浆、木醋杆菌、酸度调节剂、乙醇和水中的一种或多种，优选地，其中蔗糖含量为约5-10％、白砂糖含量为约3-5％、果葡糖浆含量为约0-5％、磷酸二氢铵含量为约0.3-0.8％、木醋杆菌含量为约0.1-0.5％、酸度调节剂含量为约1-5％；或者，根据方案7～8的任一项所述的益生菌微胶囊凝胶球软颗粒，还含有白砂糖、海藻酸钠、黄原胶、魔芋胶、卡拉胶、固化液(含乳酸钙、氯化钙)、益生菌微胶囊、色素、纯净水中的一种或多种；优选地，其中白砂糖含量为约10-15％、海藻酸钠约0.5-1％、黄原胶约0.1-0.3％、魔芋胶约0.1-0.2％，固化液中乳酸钙浓度约1-3％。

方案10、一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括以下步骤：

(1)单层微胶囊制备：将菌粉或菌泥与第一壁材等材料均匀混合并任选经固化、过滤收集湿粒，然后进行干燥得到单层微胶囊干粒；和任选的

(2)多层微胶囊制备：将上述单层微胶囊干粒作为菌芯颗粒，在菌芯颗粒外均匀涂布一层壁材，并任选喷涂固化液使胶囊壁固化，将所制微胶囊干燥，收集双层微胶囊干粒或者将其继续再次或多次包衣。

方案11、一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括以下步骤：

(1)第一层微胶囊的包被：

a.任选的，向菌泥或菌粉中添加粘合剂进行造粒；

b.任选的，对第一壁材进行预处理：

将第一壁材与水混合，充分溶解后进行冷热交替处理形成稳定凝胶：

(i)优选的，将所述第一壁材与水混匀，于低温约2至8℃搅拌约4至16小时；

(ii)更优选进一步对第一壁材进行约75至约96℃，约30至约180分钟的热处理；

(iii)再优选立即冷却，冷却温度约～20至约4℃；约4℃存放约12～约60小时得到第一壁材的凝胶溶液；

优选的，上述第一壁材为WPI，优选为约150至约950重量份，更优选约300～750重量份；

c.将第一壁材液滴均匀包裹到菌粉、菌泥，或者上述步骤a中所得的颗粒上；

d.固化：使固化液液滴均匀包裹上述步骤c中所得的颗粒；

e.干燥；

(2)任选的第二层微胶囊的包被：

f.将步骤(1)得到的单层微胶囊干粒作为菌芯颗粒与第二层壁材混合制备双层微胶囊，所述第二壁材优选为油脂(优选熔点为40～50℃的油脂，尤其是棕榈油或MCT)或者乳清蛋白，优选为约0～350重量份；

g.将步骤f所制微胶囊干燥并收集双层微胶囊干粒；

(3)任选第三次或更多次包衣：

j.将步骤(2)得到的双层微胶囊按照前述方法继续进行第三次或更多次包衣；

所述第三壁材优选为油脂(优选熔点为40～50℃的油脂，尤其是棕榈油或MCT)或者乳清蛋白，优选为约0～350重量份。

方案12、根据方案11的益生菌微胶囊的制备方法，其中，第(1)第一层微胶囊的包被的步骤中，使用锐角挤压造粒法，优选参数为：喷头约150至750μm，电压约1500至1800v，频率约1300至1500Hz，气压约290至330bar。

方案13、根据方案11的益生菌微胶囊的制备方法，其中，第(1)第一层微胶囊的包被的步骤中，使用流化床喷雾造粒法，优选将流化床内粉体取出过筛，取50～400微米之间颗粒进行第一层包衣。

方案14、根据方案11的益生菌微胶囊的制备方法，其中，

其包括使用方案5的预处理方法制备复合壁材的步骤，具体为：

(1)将益生菌的菌粉或菌泥加入到上述制备的复合壁材溶液中，并于约30℃低强度搅拌，待混合均匀后，优选过滤待用；

(2)将上述混合均匀的益生菌的菌粉和壁材溶液以喷雾冷冻方式造粒；

(3)进行固化得到微胶囊湿颗粒；

(4)将上述(3)所得的微胶囊湿颗粒进行干燥，收集得到微胶囊干颗粒；

优选的，上述制备方法中：

喷雾装置的喷嘴优选约50～约300μm；

优选的，频率为约400～约5000Hz；

优选的，喷头供料压力为约100～约3000mbar；

优选的，颗粒在下落过程中在有冷空气循环的腔体中冷冻冻结，腔体温度优选为约～40～0℃。

方案15、根据方案14的益生菌微胶囊的制备方法，其中，使用下列的预处理方法制备复合壁材：

(1)将蛋白质和亲水胶体的混合溶液于约2～8℃恒速搅拌约4～16小时；

(2)将蛋白质和亲水胶体的混合溶液置于约75～96℃，约30至约180分钟的热处理；之后

(3)迅速冷却，冷却温度约～20℃～约4℃；

(4)于冰箱中4℃条件下存放约10小时～约60小时后使用。

方案16、一种制备方案7～9的益生菌微胶囊椰纤果软颗粒的方法，包括以下步骤：

(1)根据方案10～15的益生菌微胶囊的制备方法制备益生菌微胶囊；

(2)将所述益生菌微胶囊添加到椰纤果软颗粒中，优选的，含有益生菌的微胶囊的添加量为约0.2～0.5％。

方案17、一种制备方案7～9的益生菌微胶囊椰纤果软颗粒的方法，包括以下步骤：

(1)配制椰纤果培养基，进行无菌接种木醋杆菌，得到椰纤果料液；

(2)铺盘：将椰纤果料液洒入经消毒处理的塑料盘，铺盘温度为70℃，铺盘厚度为0.5-0.8cm；质量为0.8-1kg，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温；

(3)加入微胶囊：当塑料盘底层培养液长完时，均匀洒入0.2～0.5％的微胶囊于培养液中进行接种；

(4)培养：静置培养4～6天，培养过程中保持温度为28～32℃，湿度为85～95％；

(5)收盘杀菌：培养液长完时开始收盘，将收盘后的椰纤果送入杀菌房杀菌；

杀菌温度为50-60℃，杀菌时间为20-30min；

(6)切割、筛选：将杀菌后的椰纤果平摊并抚平在模板中央，将模板连同椰纤果送入切割机，进行前后2次垂直切割；

(7)漂洗脱酸：

每千克椰纤果加饱和石灰水约500ml；脱酸30min，漂洗2小时；不断搅拌；脱酸完全之后，用水冲洗直到无味即可；

(8)脆化糖化：

将脆化剂加入到糖液中对椰纤果进行脆化糖化，脆化糖化的温度为55～60℃，脆化糖化的时间为45～60min；糖液浓度为33％。

所述的脆化剂为羧甲基纤维素钠CMC-Na，脆化剂的添加量为0.15-0.3％。

方案18、一种制备方案7～9的益生菌微胶囊椰纤果软颗粒的方法，包括以下步骤：

(1)配制椰纤果培养基，进行无菌接种木醋杆菌，得到椰纤果料液；

(2)一次铺盘：

将椰纤果料液洒入经消毒处理的塑料盘，铺盘温度为70℃，铺盘厚度为0.5-0.8cm；质量为0.8-1kg，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温；

(3)一层培养：

静置培养4-6天，培养过程中每天保持温度为28-32℃，湿度为85-95％，温度过高时通风排气；

(4)加入微胶囊：

观察到塑料盘底层培养液长完时，均匀洒入0.2-0.5％的微胶囊于培养液表面；

(5)二次铺盘：

将料液洒在一层培养液上，铺盘厚度为0.3-0.8cm；洒盘完成后喷入少量C₂H₅OH，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，冷却到室温；

(6)二层培养：

静置培养4-6天，培养过程中每天保持温度为28-32℃，湿度为85-95％，温度过高时通风排气；

(7)收盘杀菌：

培养液长完时开始收盘，将收盘后的椰纤果送入杀菌房杀菌；

杀菌温度为50-60℃，杀菌时间为20-30min；

(8)切割、筛选：

将杀菌后的椰纤果平摊并抚平在模板中央，将模板连同椰纤果送入切割机，进行前后2次垂直切割；

(9)漂洗脱酸：

每千克椰果加饱和石灰水约500ml，脱酸30min，漂洗2小时；不断搅拌；脱酸完全之后，用水冲洗直到无味；

(10)脆化糖化：

将脆化剂加入到糖液中对椰果进行脆化糖化，脆化糖化的温度为55-60℃，脆化糖化的时间为45-60min；糖液浓度为33％。

所述的脆化剂为羧甲基纤维素钠CMC-Na，脆化剂的添加量为0.15-0.3％。

方案19、一种制备益生菌微胶囊凝胶球软颗粒的方法，包括以下步骤：

(1)配制凝胶溶液：

将海藻酸钠溶于水中加热配制约1-1.5％的海藻酸钠溶液，加入约0.2％的黄原胶和约0.1％的魔芋胶，溶液冷却至室温；

(2)加入益生菌微胶囊：

每千克凝胶溶液中加入约1-3％的益生菌微胶囊，加入或不加入色素，混合均匀；

(3)配制固化液：

将乳酸钙溶于水中配制约1-3％的乳酸钙溶液；

(4)凝胶球软颗粒形成：

将凝胶溶液通过凝胶球制备设备滴入固化液中，凝胶球软颗粒粒径为约0.3-1cm。

实施例

A.益生菌微胶囊的制备

实施例A1～A3及其对比例

实施例A1

1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)

WPI 750g(浓度11％)；

水6068g；

凝结芽孢杆菌菌粉250g；

固化剂溶液6818ml，浓度0.5mol/L，其中：固化剂为乙酸钠、冰乙酸和吐温-20的混合液。乙酸钠为137g、冰乙酸为100ml、吐温-20为2.9g，水6718g。

2、制备方法

a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；

b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；

c.0℃下立即冷却；4℃存放12小时；

d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。

e.造粒：将上述预处理过的WPI与所述益生菌菌粉均匀混合造粒；

f.固化：使上述造粒所得的液滴或颗粒在固化液中形成湿粒，固化时间至少10分钟；

g.过滤收集固化湿粒，至于鼓风干燥箱中70℃烘干。

本实施例所得的微胶囊为单层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.3×10¹⁰cfu/g，粒径300um，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为9.2×10⁹cfu/g；60天后微胶囊内活菌量下降为7.7×10⁹cfu/g；120天后微胶囊内活菌量下降为4.8×10⁹cfu/g；胶囊外表面菌残留为2.3×10⁶cfu/g。该单层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为8.8×10⁹cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重19％。

对比例A1

1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)

WPI 750g(浓度11％)；

水6068g；

凝结芽孢杆菌菌粉250g；

固化剂溶液6818ml，浓度0.5mol/L，其中固化剂为乙酸钠、冰乙酸和吐温-20的混合液。乙酸钠137g、冰乙酸100ml、吐温-20为2.9g，水6818g。

2、制备方法

a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；

b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；

c.0℃下立即冷却；4℃存放4小时；

d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。

e.造粒：将上述预处理过的WPI与所述益生菌菌粉均匀混合造粒；

f.固化：使上述造粒所得的液滴或颗粒在固化液中形成湿粒，固化时间至少10分钟；

g.过滤收集固化湿粒，至于鼓风干燥箱中70℃烘干。

本对比例所得的微胶囊为单层微胶囊，微胶囊内活菌量达4.8×10⁹cfu/g，粒径330um，颗粒大小不均匀、有拖尾、光泽度欠佳。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为8.2×10⁸cfu/g，60天后微胶囊内活菌量下降为6.1×10⁷cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为3.8×10⁶cfu/g，胶囊外表面菌残留为3.6×10⁶cfu/g。该单层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为4.1×10⁷cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重65％。

实施例A2

1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)

WPI(第一层壁材)450g(浓度11％)；

WPI(第二层壁材)300g(浓度11％)；

水6068g，包括第一层壁材所用水3641g，第二层壁材所用水2427g；

凝结芽孢杆菌菌粉250g；

固化剂溶液6818ml，浓度0.5mol/L，其中固化剂为乙酸钠、冰乙酸和吐温-20的混合液。乙酸钠137g、冰乙酸100ml、吐温-20 2.9g，水6718g。

2、制备方法

a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；

b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；

c.0℃下立即冷却；4℃存放12小时；

d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。

e.造粒：将上述预处理过的WPI与所述益生菌菌粉均匀混合造粒；

f.固化：使上述造粒所得的液滴或颗粒在固化液中形成湿粒，固化时间至少10分钟；

g.过滤收集固化湿粒，至于鼓风干燥箱中70℃烘干。

h.流化床喷雾造粒法：将300gWPI按照上述预处理后得到乳清蛋白溶液或者凝胶液，将其升温至50℃，与所述步骤g中的颗粒混合，均匀包裹步骤g中颗粒，流化床进风温度为65℃，风量根据WPI的批重量和流化状态设定，颗粒固化后在流化床中干燥。

本实施例所得微胶囊为双层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.3×10¹⁰cfu/g，粒径330um，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为9.8×10⁹cfu/g，60天后微胶囊内活菌下降为8.8×10⁹cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为7.2×10⁹cfu/g，胶囊外表面菌残留为2.2×10⁴cfu/g。该单层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为9.0×10⁹cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重9％。

实施例A3

1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)

WPI(第一层壁材)300g(浓度11％)；

MCT(第二层壁材)200g(浓度100％)；

WPI(第三层壁材)250g(浓度11％)；

水4450g，包括第一层壁材所用水2427g，第三层壁材所用水2023g；

凝结芽孢杆菌菌粉250g；

固化剂溶液5000ml，浓度0.5mol/L，其中固化剂为乙酸钠、冰乙酸和吐温-20的混合液。乙酸钠101g、冰乙酸74ml、吐温-20 2g，水4926g。

2、制备方法

a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；

b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；

c.0℃下立即冷却；4℃存放12小时；

d.将乙酸钠101g、冰乙酸74ml和4926g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2g，充分混匀后待用。

e.造粒：将上述预处理过的WPI与所述益生菌菌粉均匀混合造粒；

f.固化：使上述造粒所得的液滴或颗粒在固化液中形成湿粒，固化时间至少10分钟；

g.过滤收集固化湿粒，至于鼓风干燥箱中70℃烘干。

h.流化床喷雾造粒法：

二层油膜喷涂：将200g液态MCT油脂升温至55℃，流化床进风温度为40℃，风量根据MCT溶液的批重量和流化状态设定，流化床中干燥得到双层油粒；

三层WPI喷涂：将250gWPI与2023g水混匀制成乳清蛋白溶液(必要时也可以是凝胶液)，将该溶液升温至50℃，流化床进风温度为40℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定，颗粒固化后与流化床中干燥。

本实施例所得的微胶囊为三层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.3×10¹⁰cfu/g，粒径330um，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为1.3×10¹⁰cfu/g，60天后微胶囊内活菌下降为9.8×10⁹cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为8.8×10⁹cfu/g，胶囊外表面菌残留为1.2×10³cfu/g。该单层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为1.0×10¹⁰cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重1％。

实施例A4～A8以及对比例

实施例A4

1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)

WPI：550g，浓度11％；

凝结芽孢杆菌菌粉：250g；

固化剂溶液：0.5mol/L，pH～4.6

MCT：200g

淀粉：浓度5％

2、制备方法

a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；

b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；

c.0℃下立即冷却；4℃存放12小时；

d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。

e.造粒：将益生菌菌粉、粘合剂溶液和MCT混合均匀，使油滴均匀包裹颗粒；

f.加入乳清蛋白溶液，使液滴均匀包裹步骤e中所得的颗粒；

g.固化：使固化液液滴均匀包裹步骤f中所得的颗粒；

h.将步骤g中所制微胶囊干燥。

本实施例所得的微胶囊为双层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.3×10¹⁰cfu/g，粒径150～250μm，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为9.3×10⁹cfu/g；60天后微胶囊内活菌量下降为7.5×10⁹cfu/g；120天后微胶囊内活菌量下降为4.8×10⁹cfu/g；胶囊外表面菌残留为2.3×10⁶cfu/g。该双层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为8.8×10⁹cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重15％。

对比例A2

1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)

WPI：550g，浓度11％；

凝结芽孢杆菌菌粉250g；

固化剂溶液：0.5mol/L，pH～4.6

MCT：200g

淀粉：浓度10％

2、制备方法

a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；

b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；

c.0℃下立即冷却；4℃存放8小时；

d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。

e.造粒：将益生菌菌粉、粘合剂溶液和MCT混合均匀，使油滴均匀包裹颗粒；

f.加入乳清蛋白溶液，使液滴均匀包裹步骤e中所得的颗粒；

g.固化：使固化液液滴均匀包裹步骤f中所得的颗粒；

h.将步骤g中所制微胶囊干燥。

本对比例所得的微胶囊为双层微胶囊，微胶囊内活菌量达4.8×10⁹cfu/g，粒径150～250μm，颗粒大小不均匀、有拖尾、光泽度欠佳。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为8.2×10⁸cfu/g，60天后微胶囊内活菌量下降为6.1×10⁷cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为3.8×10⁶cfu/g，胶囊外表面菌残留为3.6×10⁶cfu/g。该双层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为4.1×10⁷cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重50％。

对比例A3

1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)

WPI：550g，浓度11％；

凝结芽孢杆菌菌粉250g；

固化剂溶液：0.5mol/L，pH～4.6

MCT：200g

淀粉：温度60℃，浓度25％

2、制备方法

a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；

b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；

c.0℃下立即冷却；4℃存放40小时；

d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。

e.造粒：将益生菌菌粉、粘合剂溶液和MCT混合均匀，使油滴均匀包裹颗粒；

f.加入乳清蛋白溶液，使液滴均匀包裹步骤e中所得的颗粒；

g.固化：使固化液液滴均匀包裹步骤f中所得的颗粒；

h.将步骤g中所制微胶囊干燥。

本对比例所得的微胶囊为单层微胶囊，微胶囊内活菌量达5.4×10⁹cfu/g，粒径150～250μm，颗粒大小不均匀、有拖尾佳。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为5.2×10⁸cfu/g，60天后微胶囊内活菌量下降为3.0×10⁷cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为2.2×10⁶cfu/g，胶囊外表面菌残留为1.6×10⁶cfu/g。该双层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为3.1×10⁷cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重50％。

实施例A5

1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)

MCT(第一层壁材)200g(浓度100％)；

WPI(第二层壁材)350g(浓度11％)；

MCT(第三层壁材)200g(浓度100％)；

凝结芽孢杆菌菌粉250g；

固化剂溶液：0.5mol/L，pH～4.6

淀粉：浓度10％

2、制备方法

a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；

b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；

c.0℃下立即冷却；4℃存放16小时；

d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。

e.造粒：将益生菌菌粉、粘合剂溶液和MCT混合均匀，使油滴均匀包裹颗粒；

f.加入乳清蛋白溶液，使液滴均匀包裹步骤e中所得的颗粒；

g.固化：使固化液液滴均匀包裹步骤f中所得的颗粒；

h.将步骤g中所制微胶囊干燥；

k.按照前述步骤采用MCT对步骤h中所得到的颗粒进行第三次包衣，其中MCT为200g。

本实施例所得微胶囊为三层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.3×10¹⁰cfu/g，粒径150～250μm，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为9.9×10⁹cfu/g，60天后微胶囊内活菌下降为8.9×10⁹cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为7.2×10⁹cfu/g，胶囊外表面菌残留为0cfu/g。该单层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为9.0×10⁹cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重5％。

实施例A6

1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)

MCT(第一层壁材)200g(浓度100％)；

WPI(第二层壁材)300g(浓度11％)；

MCT(第三层壁材)150g(浓度100％)；

WPI(第四层壁材)100g(浓度11％)；

凝结芽孢杆菌菌粉250g；

固化剂溶液：0.5mol/L，pH～4.6

淀粉：浓度10％

2、制备方法

a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；

b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；

c.0℃下立即冷却；4℃存放16小时；

d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。

e.造粒：将益生菌菌粉、粘合剂溶液和MCT混合均匀，使油滴均匀包裹颗粒；

f.加入乳清蛋白溶液，使液滴均匀包裹步骤e中所得的颗粒；

g.固化：使固化液液滴均匀包裹步骤f中所得的颗粒；

h.将步骤g中所制微胶囊干燥；

k.按照前述步骤采用MCT对步骤j中所得到的颗粒进行第三次包衣；

l.按照前述步骤采用WPI对步骤k中所得到的颗粒进行第四次包衣。

本实施例所得的微胶囊为四层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.3×10¹⁰cfu/g，粒径150～400μm，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量保持为1.3×10¹⁰cfu/g，60天后微胶囊内活菌下降为9.8×10⁹cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为9.0×10⁹cfu/g，胶囊外表面菌残留为0cfu/g。该四层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为1.0×10¹⁰cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重1％。

实施例A7

1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)

WPI：750g，浓度11％；

凝结芽孢杆菌菌粉250g；

固化剂溶液：0.5mol/L，pH～4.6

MCT：0g

淀粉：温度50℃，浓度15％

2、制备方法

a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；

b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；

c.0℃下立即冷却；4℃存放30小时；

d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。

e.造粒：将益生菌菌粉、粘合剂溶液和WPI混合均匀，使WPI均匀包裹颗粒；

f.固化：使固化液液滴均匀包裹步骤e中所得的颗粒；

g.将步骤f中所制微胶囊干燥。

本实施例所得的微胶囊为双层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.0×10¹⁰cfu/g，粒径150～250μm，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为8.9×10⁹cfu/g，60天后微胶囊内活菌量下降为7.0×10⁹cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为4.5×10⁹cfu/g，胶囊外表面菌残留为3.8×10⁶cfu/g。该双层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为8.2×10⁹cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重10％。

对比例A4

1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)

WPI：750g，浓度11％；

凝结芽孢杆菌菌粉250g；

固化剂溶液：0.5mol/L，pH～4.6

MCT：0g

淀粉：温度60℃，浓度5％

2、制备方法

a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；

b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；

c.0℃下立即冷却；4℃存放65小时；

d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。

e.造粒：将益生菌菌粉、粘合剂溶液和WPI混合均匀，使WPI均匀包裹颗粒；

f.固化：使固化液液滴均匀包裹步骤e中所得的颗粒；

g.将步骤f中所制微胶囊干燥。

本对比例双层微胶囊颗粒不成形，固化液中多为絮状。

实施例A8：

1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)

WPI：550g，浓度11％；

凝结芽孢杆菌菌粉250g；

固化剂溶液：0.5mol/L，pH～4.6

MCT：200g

淀粉：温度70℃，浓度20％

2、制备方法

a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；

b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；

c.0℃下立即冷却；4℃存放50小时；

d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。

e.造粒：将益生菌菌粉、粘合剂溶液和MCT混合均匀，使油滴均匀包裹颗粒；

f.加入乳清蛋白溶液，使液滴均匀包裹步骤e中所得的颗粒；

g.固化：使固化液液滴均匀包裹步骤f中所得的颗粒；

h.将步骤g中所制微胶囊干燥。

本实施例所得的微胶囊为双层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.2×10¹⁰cfu/g，粒径150～250μm，颗粒大小不均匀、有拖尾佳。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为9.0×10⁹cfu/g，60天后微胶囊内活菌量下降为7.4×10⁹cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为4.6×10⁹cfu/g，胶囊外表面菌残留为4.2×10⁶cfu/g。该双层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为8.0×10⁹cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重15％。

上述实施例的制备工艺和微胶囊颗粒检测结果如下表总结：

实施例A1～A8、对比例A1～A4微胶囊颗粒检测结果如下：

微胶囊对比例检测结果A1～A4

B.益生菌微胶囊椰纤果软颗粒的制备

实施例B1～B5、对比例B1～B2的具体操作如下：

实施例B1

1、原料(以1000g椰果软粒为基准)：

微胶囊3g(质量比0.3％)；

发酵培养基：椰子水(1000mL)，蔗糖(45g)，酵母粉，磷酸氢二钠(2g)，CaCl₂，柠檬酸，FeSO₄(0.005g)；木醋杆菌(3g)、C₂H₅OH 1g、水300g。

2、制备方法

(1)配制培养基，接种木醋杆菌3％，配制生产培养基，进行无菌接种。

(2)一次铺盘：将接种后的料液洒入经消毒处理的塑料盘，厚度为0.5cm，质量约为0.8～1kg。铺盘温度为70℃。用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温。

(3)一层培养：静置培养4天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(4)加入微胶囊：观察到塑料盘一层培养液长完时，均匀洒入0.3％的微胶囊于培养液表面。

(5)二次铺盘：将料液洒在一层培养液上，厚度为0.5cm，质量约为0.8～1kg。铺盘完成后喷入少量C₂H₅OH，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，冷却到室温。

(6)二层培养：静置培养5天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(7)收盘杀菌：塑料盘底层培养液长完时，便可开始收盘。将质量合格的椰果送入杀菌房杀菌。将片果(即收盘后的椰果)杀菌。53℃下杀菌30min。

(8)切割、筛选：按不同的加工需要，选择不同规格的切割模板，将片果平摊在模板中央，抚平椰果，将模板连同椰果送入切割机，前后2次垂直切割。

(9)漂洗脱酸：将经切割后的椰果浸入水池中，加入量以没过椰果为宜，每千克椰果加饱和石灰水约500ml。脱酸30min，漂洗2小时。不断搅拌。脱酸完全之后，用水冲洗直到无味即可。

(10)脆化糖化：0.2％的羧甲基纤维素钠CMC-Na作为脆化剂，加入到糖液中对椰果进行脆化糖化。糖液浓度为33％，加热60℃煮制50min。

本实施例所得的椰纤果软粒，尺寸为4mm×4mm×4mm，颗粒大小均匀、有光泽，有爽脆咀嚼感，口感光滑细腻，无颗粒感。微胶囊均匀夹在椰纤果软粒中。椰纤果软粒中微胶囊内活菌量为1.3×10¹⁰cfu/g；椰纤果软粒外部无残留活菌。

实施例B2

1、原料(以1000g椰果软粒为基准)

微胶囊3g(质量比0.3％)；

发酵培养基：椰子水(1000mL)，蔗糖(45g)，酵母粉，磷酸氢二钠(2g)，CaCl₂，柠檬酸，FeSO₄(0.005g)；木醋杆菌(3g)、C₂H₅OH 1g、水300g。

2、制备方法

(1)配制培养基，接种木醋杆菌3％，配制生产培养基，进行无菌接种。

(2)一次铺盘：将接种后的料液洒入经消毒处理的塑料盘，厚度为0.8cm，质量约为0.8～1kg。铺盘温度为70℃。用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温。

(3)一层培养：静置培养4～5天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(4)加入微胶囊：观察到塑料盘底层培养液长完时，均匀洒入0.3％的微胶囊于培养液表面。

(5)二次铺盘：将料液洒在一层培养液上，厚度为0.5cm，质量约为0.8～1kg。铺盘完成后喷入少量C₂H₅OH，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，冷却到室温。

(6)二层培养：静置培养5天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(7)收盘杀菌：塑料盘底层培养液长完时，便可开始收盘。将质量合格的椰果送入杀菌房杀菌。将片果(即收盘后的椰果)杀菌。53℃下杀菌30min。

(8)切割、筛选：按不同的加工需要，选择不同规格的切割模板，将片果平摊在模板中央，抚平椰果，将模板连同椰果送入切割机，前后2次垂直切割。

(9)漂洗脱酸：将经切割后的椰果浸入水池中，加入量以没过椰果为宜，每千克椰果加饱和石灰水约500ml。脱酸30min，漂洗2小时。不断搅拌。脱酸完全之后，用水冲洗直到无味即可。

(10)脆化糖化：0.2％的羧甲基纤维素钠CMC-Na作为脆化剂，加入到糖液中对椰果进行脆化糖化。糖液浓度为33％，加热60℃煮制50min。

本实施例所得的椰纤果软粒，尺寸为4mm×4mm×4mm，颗粒大小均匀、有光泽，有爽脆咀嚼感，口感光滑细腻，无颗粒感。微胶囊均匀夹在椰纤果软粒中。椰纤果软粒中微胶囊内活菌量为1.3×10¹⁰cfu/g；椰纤果软粒外部无残留活菌。

实施例B3

1、原料(以1000g椰果软粒为基准)

微胶囊3g(质量比0.3％)；

发酵培养基：椰子水(1000mL)，蔗糖(45g)，酵母粉，磷酸氢二钠(2g)，CaCl₂，柠檬酸，FeSO₄(0.005g)；木醋杆菌(3g)、C₂H₅OH 1g、水300g。

2、制备方法

(1)配制培养基，接种木醋杆菌3％，配制生产培养基，进行无菌接种。

(2)一次铺盘：将接种后的料液洒入经消毒处理的塑料盘，厚度为0.5cm，质量约为0.8～1kg。铺盘温度为70℃。用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温。

(3)一层培养：静置培养4天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(4)加入微胶囊：观察到塑料盘底层培养液长完时，均匀洒入0.3％的微胶囊于培养液表面。

(5)二次铺盘：将料液洒在一层培养液上，厚度为0.5cm，质量约为0.8～1kg。铺盘完成后喷入少量C₂H₅OH，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，冷却到室温。

(6)二层培养：静置培养5天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(7)收盘杀菌：塑料盘底层培养液长完时，便可开始收盘。将质量合格的椰果送入杀菌房杀菌。将片果(即收盘后的椰果)杀菌。53℃下杀菌30min。

(8)切割、筛选：按不同的加工需要，选择不同规格的切割模板，将片果平摊在模板中央，抚平椰果，将模板连同椰果送入切割机，前后2次垂直切割。

(9)漂洗脱酸：将经切割后的椰果浸入水池中，加入量以没过椰果为宜，每千克椰果加饱和石灰水约500ml。脱酸30min，漂洗2小时。不断搅拌。脱酸完全之后，用水冲洗直到无味即可。

(10)脆化糖化：0.2％的羧甲基纤维素钠CMC-Na作为脆化剂，加入到糖液中对椰果进行脆化糖化。糖液浓度为33％，加热60℃煮制50min。

本实施例所得的椰纤果软粒，尺寸为4mm×4mm×4mm，颗粒大小均匀、有光泽，有爽脆咀嚼感，口感光滑细腻，无颗粒感。微胶囊均匀夹在椰纤果软粒中。椰纤果软粒中微胶囊内活菌量为1.3×10¹⁰cfu/g；椰纤果软粒外部无残留活菌。

实施例B4

1、原料(以1000g椰果软粒为基准)

微胶囊3g(质量比0.3％)；

发酵培养基：椰子水(1000mL)，蔗糖(45g)，酵母粉，磷酸氢二钠(2g)，CaCl₂，柠檬酸，FeSO₄(0.005g)；木醋杆菌(3g)、C₂H₅OH 1g、水300g。

2、制备方法

(1)配制培养基，接种木醋杆菌3％，配制生产培养基，进行无菌接种。

(2)一次铺盘：将接种后的料液洒入经消毒处理的塑料盘，厚度为0.5cm，质量约为0.8～1kg。铺盘温度为70℃。用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温。

(3)一层培养：静置培养5天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(4)加入微胶囊：观察到塑料盘底层培养液长完时，均匀洒入0.3％的微胶囊于培养液表面。

(5)二次铺盘：将料液洒在一层培养液上，厚度为0.5cm，质量约为0.8～1kg。铺盘完成后喷入少量C₂H₅OH，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，冷却到室温。

(6)二层培养：静置培养5天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(7)收盘杀菌：塑料盘底层培养液长完时，便可开始收盘。将质量合格的椰果送入杀菌房杀菌。将片果(即收盘后的椰果)杀菌。53℃下杀菌30min。

(8)切割、筛选：按不同的加工需要，选择不同规格的切割模板，将片果平摊在模板中央，抚平椰果，将模板连同椰果送入切割机，前后2次垂直切割。

(9)漂洗脱酸：将经切割后的椰果浸入水池中，加入量以没过椰果为宜，每千克椰果加饱和石灰水约500ml。脱酸30min，漂洗2小时。不断搅拌。脱酸完全之后，用水冲洗直到无味即可。

(10)脆化糖化：0.2％的羧甲基纤维素钠CMC-Na作为脆化剂，加入到糖液中对椰果进行脆化糖化。糖液浓度为33％，加热60℃煮制50min。

本实施例所得的椰纤果软粒，尺寸为4mm×4mm×4mm，颗粒大小均匀、有光泽，有爽脆咀嚼感，口感光滑细腻，无颗粒感。微胶囊均匀夹在椰纤果软粒中。椰纤果软粒中微胶囊内活菌量为1.3×10¹⁰cfu/g；椰纤果软粒外部无残留活菌。

实施例B5

1、原料(以1000g椰果软粒为基准)

微胶囊3g(质量比0.3％)；

发酵培养基：椰子水(1000mL)，蔗糖(45g)，酵母粉，磷酸氢二钠(2g)，CaCl₂，柠檬酸，FeSO₄(0.005g)；木醋杆菌(3g)、C₂H₅OH 1g、水300g。

2、制备方法

(1)配制培养基，接种木醋杆菌3％，配制生产培养基，进行无菌接种。

(2)一次铺盘：将接种后的料液洒入经消毒处理的塑料盘，厚度为0.5cm，质量约为0.8～1kg。铺盘温度为70℃。用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温。

(3)一层培养：静置培养4天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(4)加入微胶囊：观察到塑料盘一层培养液长完时，均匀洒入0.5％的微胶囊于培养液表面。

(5)二次铺盘：将料液洒在一层培养液上，厚度为0.5cm，质量约为0.8～1kg。铺盘完成后喷入少量C₂H₅OH，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，冷却到室温。

(6)二层培养：静置培养5天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(7)收盘杀菌：塑料盘底层培养液长完时，便可开始收盘。将质量合格的椰果送入杀菌房杀菌。将片果(即收盘后的椰果)杀菌。53℃下杀菌30min。

(8)切割、筛选：按不同的加工需要，选择不同规格的切割模板，将片果平摊在模板中央，抚平椰果，将模板连同椰果送入切割机，前后2次垂直切割。

(9)漂洗脱酸：将经切割后的椰果浸入水池中，加入量以没过椰果为宜，每千克椰果加饱和石灰水约500ml。脱酸30min，漂洗2小时。不断搅拌。脱酸完全之后，用水冲洗直到无味即可。

(10)脆化糖化：0.2％的羧甲基纤维素钠CMC-Na作为脆化剂，加入到糖液中对椰果进行脆化糖化。糖液浓度为33％，加热60℃煮制50min。

本实施例所得的椰纤果软粒，尺寸为4mm×4mm×4mm，颗粒大小均匀、有光泽，有爽脆咀嚼感，口感光滑细腻，无颗粒感。微胶囊均匀夹在椰纤果软粒中。椰纤果软粒中微胶囊内活菌量为1.3×10¹⁰cfu/g；椰纤果软粒外部无残留活菌。

对比例B1

1、原料(以1000g椰果软粒为基准)

微胶囊3g(质量比0.3％)；

发酵培养基：椰子水(1000mL)，蔗糖(45g)，酵母粉，磷酸氢二钠(2g)，CaCl₂，柠檬酸，FeSO₄(0.005g)；木醋杆菌(3g)、C₂H₅OH 1g、水300g。

2、制备方法

(1)配制培养基，接种木醋杆菌3％，配制生产培养基，进行无菌接种。

(2)一次铺盘：将接种后的料液洒入经消毒处理的塑料盘，厚度为0.5cm，质量约为0.8～1kg。铺盘温度为70℃。用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温。

(3)一层培养：静置培养4天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(4)加入微胶囊：观察到塑料盘一层培养液长完时，均匀洒入0.3％的微胶囊于培养液表面。

(5)二次铺盘：将料液洒在一层培养液上，厚度为1cm，质量约为1～1.5kg。铺盘完成后喷入少量C₂H₅OH，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，冷却到室温。

(6)二层培养：静置培养5天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(7)收盘杀菌：塑料盘底层培养液长完时，便可开始收盘。将质量合格的椰果送入杀菌房杀菌。将片果(即收盘后的椰果)杀菌。53℃下杀菌30min。

(8)切割、筛选：按不同的加工需要，选择不同规格的切割模板，将片果平摊在模板中央，抚平椰果，将模板连同椰果送入切割机，前后2次垂直切割。

(9)漂洗脱酸：将经切割后的椰果浸入水池中，加入量以没过椰果为宜，每千克椰果加饱和石灰水约500ml。脱酸30min，漂洗2小时。不断搅拌。脱酸完全之后，用水冲洗直到无味即可。

(10)脆化糖化：0.2％的羧甲基纤维素钠CMC-Na作为脆化剂，加入到糖液中对椰果进行脆化糖化。糖液浓度为33％，加热60℃煮制50min。

本实施例所得的椰纤果软粒，尺寸为4mm×4mm×4mm，颗粒大小均匀、有光泽，有爽脆咀嚼感，口感光滑细腻，无颗粒感。微胶囊不均匀夹在椰纤果软粒中。椰纤果软粒中微胶囊内活菌量为1.3×10¹⁰cfu/g；椰纤果软粒外部残留2.0×10⁶cfu/g活菌量。

对比例B2

1、原料(以1000g椰果软粒为基准)

微胶囊3g(质量比0.3％)；

发酵培养基：椰子水(1000mL)，蔗糖(45g)，酵母粉，磷酸氢二钠(2g)，CaCl₂，柠檬酸，FeSO₄(0.005g)；木醋杆菌(3g)、C₂H₅OH 1g、水300g。

2、制备方法

(1)配制培养基，接种木醋杆菌3％，配制生产培养基，进行无菌接种。

(2)一次铺盘：将接种后的料液洒入经消毒处理的塑料盘，厚度为0.5cm，质量约为0.8～1kg。铺盘温度为70℃。用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，以使之发酵，之后将塑料盘码起来，冷却至室温。

(3)一层培养：静置培养4天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(4)加入微胶囊：观察到塑料盘一层培养液长完时，均匀洒入0.8％的微胶囊于培养液表面。

(5)二次铺盘：将料液洒在一层培养液上，厚度为0.5cm，质量约为0.8～1kg。铺盘完成后喷入少量C₂H₅OH，用经酒精消毒的报纸盖住，用皮筋扎紧，冷却到室温。

(6)二层培养：静置培养5天，培养过程中每天保持温度为28～32℃，湿度为85～95％，温度过高时通风排气。

(7)收盘杀菌：塑料盘底层培养液长完时，便可开始收盘。将质量合格的椰果送入杀菌房杀菌。将片果(即收盘后的椰果)杀菌。80℃下杀菌10min。

(8)切割、筛选：按不同的加工需要，选择不同规格的切割模板，将片果平摊在模板中央，抚平椰果，将模板连同椰果送入切割机，前后2次垂直切割。

(9)漂洗脱酸：将经切割后的椰果浸入水池中，加入量以没过椰果为宜，每千克椰果加饱和石灰水约500ml。脱酸30min，漂洗2小时。不断搅拌。脱酸完全之后，用水冲洗直到无味即可。

(10)脆化糖化：0.1％的羧甲基纤维素钠CMC-Na作为脆化剂，加入到糖液中对椰果进行脆化糖化。糖液浓度为33％，加热60℃煮制50min。

本实施例所得的椰纤果软粒，尺寸为4mm×4mm×4mm，颗粒大小均匀、有光泽，无爽脆咀嚼感，口感粘口，无颗粒感。微胶囊不均匀夹在椰纤果软粒中。椰纤果软粒中微胶囊内活菌量为0；椰纤果软粒外部无残留活菌。

本发明的实施例B1～5、对比例B1～2的具体操作如下，采用优化制备方法：

本发明中实施例B1～5、对比例B1～2软颗粒产品结果及评价如下：

实施例6

(1)使用常规方式制备发酵乳的混合料液，混合料液的干物质，经过95℃300秒的杀菌，然后41±2℃发酵作为常温活菌酸度的基料；

(2)将除发酵菌种和微胶囊以外的原料(如牛奶、白砂糖等)进行混合配料，配料温度40～50℃，然后冷却至20℃以下；

(3)搅拌，均质(均质压力150～180bar)，然后执行温度95℃的巴氏杀菌300秒；

(4)接菌，并进行温度41～43℃的发酵；

(5)破乳，翻罐，然后冷却至25℃以下；

(6)转入待装罐，添加益生菌微胶囊0.05％；

(7)灭菌，灭菌温度75℃，灭菌时间25秒；

(8)冷却到15～30℃，进入无菌罐内，进行无菌灌装。

本实施例获得的含有活菌的酸奶，酸奶口感顺滑，无明显颗粒感。微胶囊颗粒均匀分布于酸奶中。坏包风险底。货架期内益生菌活菌数大于1.0*10⁶cfu/ml。

实施例7

(1)使用常规方式制备发酵乳的混合料液，混合料液的干物质，经过95℃300秒的杀菌，然后41±2℃发酵作为常温活菌酸度的基料；

(2)将除发酵菌种和微胶囊以外的原料(如牛奶、白砂糖等)进行混合配料，配料温度40～50℃，然后冷却至20℃以下；

(3)搅拌，均质(均质压力150～180bar)，然后执行温度95℃的巴氏杀菌300秒；

(4)接菌，并进行温度41～43℃的发酵；

(5)破乳，翻罐，然后冷却至25℃以下；

(6)转入待装罐；

(7)灭菌，灭菌温度75℃，灭菌时间25秒；

(8)冷却到15～30℃，进入无菌罐内，在此步骤前或后，采用无菌化的添加方式将0.05％益生菌微胶囊定量均匀的添加到正在流动的料液管路中；无菌灌装。

本实施例获得的含有活菌的酸奶，酸奶口感顺滑，无明显颗粒感。微胶囊颗粒均匀分布于酸奶中。有一定的坏包风险。货架期内益生菌活菌数含量大于3.0*10⁶cfu/ml。

实施例8

(1)使用常规方式制备发酵乳的混合料液，混合料液的干物质，经过95℃300秒的杀菌，然后41±2℃发酵作为常温活菌酸度的基料；

(2)将除发酵菌种和微胶囊以外的原料(如牛奶、白砂糖等)进行混合配料，配料温度40～50℃，然后冷却至20℃以下；

(3)搅拌，均质(均质压力150～180bar)，然后执行温度95℃的巴氏杀菌300秒；

(4)接菌，并进行温度41～43℃的发酵；

(5)破乳，翻罐，然后冷却至25℃以下；

(6)转入待装罐，添加3％益生菌微胶囊椰纤果软颗粒；

(7)灭菌，灭菌温度75℃，灭菌时间25秒；

(8)冷却到15～30℃，进入无菌罐内，进行无菌灌装。

本实施例获得的含有活菌的酸奶，酸奶口感顺滑，可尝到爽脆的软颗粒。软颗粒部分沉于酸奶底部。坏包风险底。货架期内益生菌活菌数含量大于5.0*10⁶cfu/ml。

实施例9

(1)使用常规方式制备发酵乳的混合料液，混合料液的干物质，经过95℃300秒的杀菌，然后41±2℃发酵作为常温活菌酸度的基料；

(2)将除发酵菌种和微胶囊以外的原料(如牛奶、白砂糖等)进行混合配料，配料温度40～50℃，然后冷却至20℃以下；

(3)搅拌，均质(均质压力150～180bar)，然后执行温度95℃的巴氏杀菌300秒；

(4)接菌，并进行温度41～43℃的发酵；

(5)破乳，翻罐，然后冷却至25℃以下；

(6)转入待装罐；

(7)灭菌，灭菌温度75℃，灭菌时间25秒；

(8)冷却到15～30℃，进入无菌罐内，在此步骤前或后，采用无菌化的添加方式将3％益生菌微胶囊椰纤果软颗粒定量均匀的添加到正在流动的料液管路中；无菌灌装。

本实施例获得的含有活菌的酸奶，酸奶口感顺滑，可尝到爽脆的软颗粒。软颗粒部分沉于酸奶底部。有一定的坏包风险。货架期内益生菌活菌数含量大于6.0*10⁶cfu/ml。

本发明中实施例6～9产品结果及评价如下：

C.益生菌微胶囊海藻酸钙凝胶球软颗粒的制备

实施例C1

(1)配制凝胶溶液：将海藻酸钠溶于水中加热配制1％的海藻酸钠溶液，加入0.2％的黄原胶和0.1％的魔芋胶，溶液冷却至室温；

(2)加入益生菌微胶囊：每千克凝胶溶液中加入1％的益生菌微胶囊，加入胭脂红色素，混合均匀；

(3)配制固化液：将乳酸钙溶于水中配制2％的乳酸钙溶液；

(4)凝胶球形成：将凝胶溶液通过凝胶球制备设备滴入固化液中，凝胶球粒径为0.5cm；将凝胶球从固化液中分离，以1:3的比例与糖渍椰果混合。

本实施例所获得的益生菌微胶囊海藻酸钙凝胶球软颗粒的尺寸为直径0.5cm的圆形小球，大小均匀。颜色为红色，透明，可明显看到内部的微胶囊颗粒，红色小球与乳白色椰果对比明显。有一定的咀嚼感，无涩味。椰果与凝胶球的混合物含有菌数约为1.3×10⁸cfu/g，椰果与凝胶球外的液体环境中无活菌数。

实施例C2

(1)配制凝胶溶液：将海藻酸钠溶于水中加热配制1％的海藻酸钠溶液，0.1％的魔芋胶，溶液冷却至室温；

(2)加入益生菌微胶囊：每千克凝胶溶液中加入3％的益生菌微胶囊，加入胭脂红色素，混合均匀；

(3)配制固化液：将乳酸钙溶于水中配制2％的乳酸钙溶液；

(4)凝胶球形成：将凝胶溶液通过凝胶球制备设备滴入固化液中，凝胶球粒径为0.5cm。

本实施例所获得的益生菌微胶囊海藻酸钙凝胶球软颗粒的尺寸为直径0.5cm的圆形小球，大小均匀。颜色为红色，透明，可明显看到内部的微胶囊颗粒，红色小球与乳白色椰果对比明显。有一定的咀嚼感，无涩味。椰果与凝胶球的混合物含有菌数约为1×10⁹cfu/g，椰果与凝胶球外的液体环境中无活菌数。

Claims (12)

1.一种益生菌微胶囊软颗粒，其中，益生菌微胶囊包埋在软颗粒中；优选地，基于所述益生菌微胶囊软颗粒的总重量，含有重量百分比为约0.2～0.5％的益生菌微胶囊。

2.根据权利要求1所述的益生菌微胶囊软颗粒，其为益生菌微胶囊椰纤果软颗粒，优选地，其中，还含有椰子水或椰浆、椰果酱、蔗糖、白砂糖、果葡糖浆、木醋杆菌或木葡糖酸醋杆菌、酸度调节剂、乙醇和水中的一种或多种；优选地，其中蔗糖含量为约5-10％、白砂糖含量为约3-5％、果葡糖浆含量为约0-5％、磷酸二氢铵含量为约0.3-0.8％、木葡糖酸醋杆菌含量为约0.1-0.5％、酸度调节剂含量为约1-5％。

3.根据权利要求1所述的益生菌微胶囊软颗粒，其为益生菌微胶囊凝胶球软颗粒，优选地，其中，还含有白砂糖、海藻酸钠、黄原胶、魔芋胶、卡拉胶、固化液(含乳酸钙、氯化钙)、益生菌微胶囊、色素、纯净水中的一种或多种；优选地，其中白砂糖含量为约10-15％、海藻酸钠约0.5-1％、黄原胶约0.1-0.3％、魔芋胶约0.1-0.2％，固化液中乳酸钙浓度约1-3％。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的益生菌微胶囊软颗粒，其中，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括：菌芯颗粒和任选的至少一层包覆所述菌芯颗粒的外壳；

其中，所述菌芯颗粒包括芯材和第一层壁材，所述芯材包括一种或多种益生菌粉或菌泥，所述芯材被所述第一层壁材所包覆，以及

所述至少一层包覆所述菌芯颗粒的外壳包括一层、两层或更多层壁材，分别为第二层壁材、第三层壁材或者更多层壁材；

优选地，以1000重量份的干粒微胶囊为基准，上述微胶囊的组成的重量比例为：菌泥或菌粉50至500重量份；第一层壁材为约0～950重量份优选约150至950重量份或0～350重量份；第二层壁材为约0～950重量份优选约150至950重量份或0～350重量份；第三层壁材为约0至350重量份；第四层壁材为约0至250重量份。

5.根据权利要求4所述的益生菌微胶囊软颗粒，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，制备步骤如下：

(1)单层微胶囊制备：将菌粉或菌泥与第一壁材等材料均匀混合并任选经固化、过滤收集湿粒，然后进行干燥得到单层微胶囊干粒；和任选地

(2)多层微胶囊制备：将上述单层微胶囊干粒作为菌芯颗粒，在菌芯颗粒外均匀涂布一层壁材，并任选喷涂固化液使胶囊壁固化，将所制微胶囊干燥，收集双层微胶囊干粒或者将其继续再次或多次包衣。

6.一种含益生菌微胶囊软颗粒的食品或保健品，优选地，所述食品或保健品选自乳制品、发酵风味食品、饮料、巧克力、糖果、烘焙食品或果蔬汁食品中的一种或多种；优选地，所述食品或保健品为酸奶；优选地，所述食品或保健品包括约1～10％、优选约2～4％、更优选约3％的益生菌微胶囊软颗粒。

7.根据权利要求6所述的含益生菌微胶囊软颗粒的食品或保健品，其中，在UHT超高温灭菌前加入益生菌微胶囊软颗粒，或者在UHT超高温灭菌后以无菌化或直接混合的添加方式加入益生菌微胶囊软颗粒；优选地，在UHT超高温灭菌前加入益生菌微胶囊椰纤果软颗粒；优选地，在UHT超高温灭菌后以无菌化或直接混合的添加方式加入益生菌微胶囊椰纤果软颗粒或益生菌微胶囊凝胶球软颗粒。

8.一种益生菌微胶囊软颗粒的制备方法，包括以下步骤：将所述益生菌微胶囊添加到软颗粒中；优选地，所述益生菌微胶囊的添加量为约0.2～0.5％；优选地，将所述益生菌微胶囊添加到椰纤果软颗粒中；优选地，将所述益生菌微胶囊添加到凝胶球软颗粒中。

9.一种益生菌微胶囊椰纤果软颗粒的制备方法，包括以下步骤：

(1)配制椰纤果培养基，进行无菌接种木醋杆菌，得到椰纤果料液；

(2)铺盘：将椰纤果料液洒入经消毒处理的塑料盘，铺盘温度为约70℃，铺盘厚度为约0.5-0.8cm；质量为约0.8-1kg，盖住，扎紧，以使之发酵，之后冷却至室温；

(3)加入微胶囊：当塑料盘底层培养液长完时，均匀洒入约0.2～0.5％的微胶囊于培养液中进行接种；

(4)培养：静置培养4～6天，培养过程中保持温度为约28～32℃，湿度为约85～95％；

(5)收盘杀菌：培养液长完时开始收盘，将收盘后的椰纤果进行杀菌(优选在杀菌房进行杀菌，更优选杀菌温度为约50-60℃，杀菌时间为约20-30min)；

(6)切割、筛选(优选将杀菌后的椰纤果平摊并抚平在模板中央，将模板连同椰纤果送入切割机，进行前后2次垂直切割)；

(7)漂洗脱酸(优选每千克椰纤果加饱和石灰水约500ml；脱酸30min，漂洗2小时；不断搅拌；脱酸完全之后，用水冲洗直到无味即可)；

(8)脆化糖化(优选在糖化过程中将脆化剂加入到糖液中对椰纤果进行脆化糖化，脆化糖化的温度为约55～60℃，脆化糖化的时间为约45～60min；糖液浓度为约33％，更优选所述脆化剂为羧甲基纤维素钠CMC-Na，脆化剂的添加量为约0.15-0.3％)；

优选地，其中，步骤(1)中制备椰纤果料液的方法：

a.配制培养基，原料为椰子水，蔗糖，酵母粉，磷酸氢二钠，CaCl₂，柠檬酸，FeSO₄，用纯净水定容至约300mL，酸碱调节pH达到约5.0，在高压灭菌器内约121℃灭菌约30min，然后冷却至约30℃；优选地，原料中蔗糖比例为约5％-12％，酵母粉比例为约0.1-0.3％，磷酸二氢铵比例为约0.4％-0.6％、柠檬酸比例为约1％-2％；

b.在培养基上扩大培养木醋杆菌菌种，木醋杆菌接种量为约3％(优选的，放在振荡摇床上使用约30℃、约150r/min振荡培养约30h进行)。

10.根据权利要求8或9所述的益生菌微胶囊椰纤果软颗粒的制备方法，其中，优选地，在步骤(2)之后且步骤(3)之前，增加对椰纤果进行培养的步骤：静置培养约4～6天，培养过程中保持温度为约28～32℃，湿度为约85～95％；

优选地，其中，优选的，在步骤(3)之后且步骤(4)之前，增加二次铺盘步骤：将椰纤果料液洒在步骤(3)所得的培养液上，铺盘厚度为约0.3～0.8cm；铺盘完成后喷入少量C₂H₅OH，盖住，扎紧，冷却到室温；

优选地，其中在二次铺盘步骤完成后，增加二层培养的步骤：静置培养约4-6天，培养过程中每天保持温度为约28-32℃，湿度为约85-95％，温度过高时通风排气。

11.一种制备益生菌微胶囊椰纤果软颗粒的方法，包括以下步骤：

(1)配制椰纤果培养基，进行无菌接种木醋杆菌，得到椰纤果料液；

(2)一次铺盘：

将椰纤果料液洒入经消毒处理的塑料盘，铺盘温度为约70℃，铺盘厚度为约0.5-0.8cm；质量为约0.8-1kg，盖住，扎紧，以使之发酵，之后冷却至室温；

(3)一层培养：

静置培养约4-6天，培养过程中每天保持温度为约28-32℃，湿度为约85-95％，温度过高时通风排气；

(4)加入微胶囊：

观察到塑料盘底层培养液长完时，均匀洒入约0.2-0.5％的微胶囊于培养液表面；

(5)二次铺盘：

将料液洒在一层培养液上，铺盘厚度为约0.3-0.8cm；洒盘完成后喷入少量C₂H₅OH，盖住，扎紧，冷却到室温；

(6)二层培养：

静置培养约4-6天，培养过程中每天保持温度为约28-32℃，湿度为约85-95％，温度过高时通风排气；

(7)收盘杀菌：培养液长完时开始收盘，将收盘后的椰纤果进行杀菌(优选在杀菌房进行杀菌，更优选杀菌温度为约50-60℃，杀菌时间为约20-30min)；

(8)切割、筛选(优选将杀菌后的椰纤果平摊并抚平在模板中央，将模板连同椰纤果送入切割机，进行前后2次垂直切割)；

(9)漂洗脱酸(优选每千克椰果加饱和石灰水约500ml，脱酸约30min，漂洗约2小时；不断搅拌；脱酸完全之后，用水冲洗直到无味)；

(10)脆化糖化(优选将脆化剂加入到糖液中对椰果进行脆化糖化，脆化糖化的温度为约55-60℃，脆化糖化的时间为约45-60min；糖液浓度为约33％(所述脆化剂为羧甲基纤维素钠CMC-Na，脆化剂的添加量为约0.15-0.3％)。

12.一种制备益生菌微胶囊凝胶球软颗粒的方法，包括以下步骤：

(1)配制凝胶溶液：

将海藻酸钠溶于水中加热配制约1-1.5％的海藻酸钠溶液，加入约0.2％的黄原胶和约0.1％的魔芋胶，溶液冷却至室温；

(2)加入益生菌微胶囊：

每千克凝胶溶液中加入约1-3％的益生菌微胶囊，加入或不加入色素，混合均匀；

(3)配制固化液：

将乳酸钙溶于水中配制约1-3％的乳酸钙溶液；

(4)凝胶球软颗粒形成：

将凝胶溶液通过凝胶球制备设备滴入固化液中，凝胶球软颗粒粒径为约0.3-1cm。