CN111100133B - 一种金属卟啉化合物及其制法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种金属卟啉化合物及其制法和应用，属于药物化学技术领域。本发明的如式I所示的金属卟啉化合物，或其光学异构体、药学上可接受的盐或溶剂化合物，其具有特异性的艾滋病毒RNA识别作用和优秀的艾滋病毒逆转录酶抑制能力。本发明的化合物在制备艾滋病毒TAR RNA选择性识别试剂中的应用，以及在制备艾滋病毒逆转录酶抑制剂的应用。
Figure DDA0002343979220000011

Description

一种金属卟啉化合物及其制法和应用
技术领域
本发明属于药物化学技术领域，具体涉及艾滋病毒逆转录酶抑制剂和艾滋病毒药物研发领域，尤其涉及一种金属卟啉化合物及其制法和应用。
背景技术
艾滋病是一种严重危害人类健康生活的疾病。2012年至2018年，我国艾滋病的新发例数和死亡人数均呈逐年上升趋势。中国疾控中心最新数据显示，截至2019年10月底，全国报告存活感染者95.8万。艾滋病死亡数已经是我国传染病死亡数的第一位。密切相关的疾病的治疗和早期防治作用(Science，1992，256，1783-1790；Biochemistry，2011，50，5042-5057)。因此，艾滋病毒逆转录酶成为当前抗艾滋病药物设计的首要靶点(Curr.Top.Med.Chem.，2004，4，1045-1057)。目前临床上应用的逆转录酶抑制剂主要分为“核苷类逆转录酶抑制剂”和“非核苷类逆转录酶抑制剂”。核苷类逆转录酶抑制剂为核苷类似物，它们能够与病毒RNA逆转录形成的病毒DNA竞争结合逆转录酶，在一定程度上抑制逆转录酶的活性。然而，长期使用核苷类逆转录酶抑制剂会产生严重的毒副作用和明显的抗药性，因而面临着被淘汰的命运。近年来，人们发现了一些结构各异的小分子化合物表现出较好的逆转录酶抑制活性，称其为非核苷类的逆转录酶抑制剂。它们对“酶－底物”复合物的亲和力比对酶的亲和力高，通过与逆转录酶的相互作用可以引起酶的构型变化，从而使底物活性部位的亲和性降低。由于非核苷类逆转录酶抑制剂不会直接损坏底物结合区域的功能，因此细胞毒性较小，并且在极低浓度即可抑制逆转录酶病毒的活性(Chem.Soc.Rev.，2012，41，4657-4670)。
TAR和RRE是艾滋病病毒RNA上两个重要的功能区域，对病毒RNA的逆转录活性起着至关重要的作用(Mol.Cell Biol.，1988，8，2555-2561)。最近，一种氨基噻唑类化合物表现出了较好的TAR RNA选择性(Chem.Eur.J.，2014，20，2071-2079；Chem.Commun.，2010，46，6162-6164)。该类化合物可以排除DNA和tRNA的影响，选择性的结合TAR RNA的U-A碱基对部位，抑制HIV-1菌株的生长，而对正常细胞的生长没有明显的影响。然而，该类化合物虽然表现出较好的选择性，在与TARRNA的结合能力上却有所欠缺。同时具有高选择性和高结合强度的TARRNA结合试剂是逆转录酶抑制领域研究中亟待解决的问题。
发明内容
本发明解决的技术问题是：提供一种如式I所示的金属卟啉化合物，或其光学异构体、药学上可接受的盐或溶剂化合物，其具有特异性的艾滋病毒RNA识别作用和优秀的艾滋病毒逆转录酶抑制能力。
本发明的目的之二在于，提供该金属卟啉类化合物的制备方法。
本发明的目的之三在于，提供该金属卟啉类化合物的应用。
发明人经研究发现，金属卟啉能够有效的选择RNA作为作用靶点，并有效抑制逆转录酶的活性。本发明创造性地将金属卟啉的结构引入噻唑类化合物，进一步设计和优化分子结构，得到了一种具有良好水溶性和光谱性质的、具有对艾滋病毒RNA具有特异性识别作用的氨基噻唑功能基团的金属卟啉化合物，使其能够选择性结合艾滋病毒RNA的TAR区域，并显著抑制艾滋病毒逆转录酶的活性。该金属卟啉化合物不仅是艾滋病毒RNA的特异性结合试剂，还是艾滋病毒逆转录酶的特异性抑制剂，是潜在的高活性的艾滋病特异性药物。
本发明采用的技术方案如下：
本发明所述的一种如式I所示的化合物、或其光学异构体、药学上可接受的盐或溶剂化合物，
Figure BDA0002343979200000021
其中，R1选自H、OH、t-Bu、F、Cl、Br、OMe、NMe2、NO2、CH3中的任意一种，R2选自H、t-Bu、OH、OMe、NMe2、NO2、F、Cl、Br、CH3中的任意一种。
本发明的一个实施例中，R1为H，R2为H。
本发明的另一个实施例中，R1为OH，R2为t-Bu。
本发明所述的制备如式I所示的化合物的方法，包括如下步骤：
步骤1.将式Ⅱ化合物、对甲酰基苯甲酸甲酯和吡咯加热反应，生成式Ⅲ化合物；
步骤2.将式Ⅲ化合物在碱性条件下水解，水解完成后，调节反应液pH值至酸性，生成式Ⅳ化合物；
步骤3.将式Ⅳ化合物与氨基噻唑化合物在1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、1-乙基-碳酰二亚胺盐酸盐、4-二甲氨基吡啶的作用下发生缩合得到式Ⅴ化合物；
步骤4.将式Ⅴ化合物与锌离子反应，得式I化合物；
所述方法的合成路线如下所示：
Figure BDA0002343979200000031
本发明的技术方案中，所述R1为H时，R2为H；所述R1为OH时，R2为t-Bu。
作为本发明的一个实施例，所述氨基噻唑化合物为N-(4-(3-氨基苯基)噻唑-2-基)乙酰胺。
本发明的技术方案中，所述步骤1中，式Ⅱ化合物、对甲酰基苯甲酸甲酯和吡咯的用量摩尔比为1-4:0.5-1.5:2-6，优选为3:1:4；
或/和所述步骤3中，式IV化合物与氨基噻唑化合物、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、1-乙基-碳酰二亚胺盐酸盐、4-二甲氨基吡啶的用量摩尔比为0.5-2：0.5-1.5：0.5-2：0.5-2：0.2-0.8；优选为1:1.2:1:1:0.5；
或/和所述步骤4中，锌离子与式V化合物的用量摩尔比大于1：1，优选为2：1。
本发明的技术方案中，所述步骤1中，将式Ⅱ化合物、对甲酰基苯甲酸甲酯溶于第一溶剂中后，加热，待反应液加热至120-150℃后，再加入吡咯反应；
优选地，所述第一溶剂包括丙酸、丁酸、异丙酸中的任意一种或几种，更优选地，所述溶剂为丙酸；
优选地，反应液加热至135-145℃；更优选地，反应液加热至150℃。
或/和所述步骤2中，将式Ⅲ化合物溶于第二溶剂中后，再加入碱液，在强碱性条件下水解，水解完成后，调节反应液pH值至酸性，生成沉淀，过滤，收集沉淀，得式Ⅳ化合物；
优选地，所述第二溶剂包括四氢呋喃、甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二氧六环、乙二醇、甘油中的任意一种或几中；更优选地为四氢呋喃；
优选地，所述碱液为浓度1mol/l以上的NaOH、KOH、乙醇钠、或叔丁醇钾；
优选地，调节反应液pH值为2-4；更优选地，调节反应液pH值为3。
具体地，采用药学上可接受的无机酸、有机酸或碱调节反应液pH值；
优选地，所述无机酸包括盐酸、硫酸、磷酸中的任意一种或几种；
优选地，所述有机酸包括甲酸、乙酸、乳酸、天门冬氨酸、枸橼酸中的任意一种或几种。
本发明的实施例中，所述步骤1制得的式Ⅲ化合物还包括纯化步骤。所述式Ⅲ化合物的纯化采用柱层析等现有技术进行。
本发明所述的式I所示的化合物、或其光学异构体、药学上可接受的盐或溶剂化合物在制备艾滋病毒TAR RNA选择性识别试剂中的应用。
本发明所述的式I所示的化合物、或其光学异构体、药学上可接受的盐或溶剂化合物在制备艾滋病毒逆转录酶抑制剂的应用。
本发明还涉及一种药物组合物，其包含本发明任意一项技术方案所述的式I所示的化合物、或其光学异构体、药学上可接受的盐或溶剂化合物，以及一种或多种药学上可接受的载体。所述“药学上可接受的载体”是指与治疗剂一同给药的稀释剂、辅剂、赋形剂或媒介物，并且其在合理的医学判断的范围内适于接触人类和/或其它动物的组织而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或与合理的益处/风险比相应的其它问题或并发症。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明设计科学，方法简单，本发明的金属卟啉化合物结构稳定，具有良好的光谱性质、良好的艾滋病毒RNA选择性结合和艾滋病毒逆转录酶抑制能力。
本发明创造性地将金属卟啉的结构引入噻唑类化合物得到一种新型金属卟啉化合物。该化合物具有以下优势：(1)具有良好的水溶性和稳定性；(2)具有良好的光谱性质，能够对RNA进行光谱响应；(3)对艾滋病毒RNA具有良好的选择性；(4)与氨基噻唑有机类化合物相比，具有更强的艾滋病毒逆转录酶抑制能力。
附图说明
图1为本发明的金属卟啉化合物与tat蛋白竞争结合TAR RNA实验的凝胶电泳图；
图2为本发明的金属卟啉化合物抑制艾滋病毒逆转录酶的酶联免疫实验数据图；
图3为本发明的金属卟啉化合物ZnTPPtz1分别与DNA、总RNA、tRNA、poly(A)RNA相互作用的紫外可见光谱滴定图；
图4为本发明的金属卟啉化合物ZnTPPtz2分别与DNA、总RNA、tRNA、poly(A)RNA相互作用的紫外可见光谱滴定图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明。实施例仅用以解释本发明，并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备，所用试剂和材料均为市购。
实施例1
本实施例公开了本发明的金属卟啉化合物的制备
1、羧基卟啉化合物TPPCOOH1的制备：
用250ml的双口圆底烧瓶称取对醛基苯甲酸甲酯(9mmol，1.49mg)和苯甲醛(27mmol，2.76ml)溶于120ml丙酸中。反应液加热至140℃后加入重蒸的吡咯(36mmol，2.5ml)，回流两小时后，待反应液冷却至室温，加入20ml乙醇。置于冰箱冷却过夜，有紫色固体生成，抽滤干燥之后，用二氯甲烷和石油醚2:1混合溶剂柱层析，得到四苯基卟啉羧酸甲酯1.26g。将该产品溶于80ml四氢呋喃，随后再加入1mol/L的氢氧化钾溶液160ml，置于66℃下回流72h，待TLC检测反应结束以后，用HCl调节pH至3，有紫色固体生成，抽滤之后用100ml水分多次洗涤之后，置于真空干燥箱干燥过夜，得到TPPCOOH1产物0.92g。
Figure BDA0002343979200000061
2、金属卟啉化合物ZnTPPtz1的制备：
用25ml单口圆底烧瓶称取化合物TPPCOOH1(0.15mmol,100mg)，氨基噻唑化合物N-(4-(3-氨基苯基)噻唑-2-基)乙酰胺(0.18mmol 41.9mg)，HOAt(20.5mg,0.15mmol),DMAP(0.075mmol，16.8mg)溶于5ml DMF中，缓慢滴入预先准备好的5ml DMF溶液中，室温下反应过夜。随后，在真空下把反应液浓缩至5ml，加入25ml水，有紫色沉淀生成，抽滤之后用100ml水分多次洗涤，置于真空干燥箱干燥过夜。得到98mg卟啉TPPtz1。1H-NMR(300MHz,CDCl3),δ(ppm):δ12.42(s,1H),10.77(s,1H),8.85(d,J＝9.8Hz,9H),8.68(s,1H),8.44(q,J＝8.1Hz,5H),8.24(dd,J＝6.7,2.9Hz,7H),7.92–7.75(m,11H),7.73(d,J＝7.7Hz,1H),7.62(s,2H),7.54(d,J＝8.0Hz,2H),2.24(s,3H).-2.81(s,2H)。把卟啉TPPtz1(0.1mmol,87.5mg)溶于二氯甲烷和乙醇中(v:v＝3:2,10ml)，随后加入无水醋酸锌(0.2mmol，36.6mg)，反应液置于室温下反应12小时。在真空下蒸出溶剂，把得到的粗产物溶于5mlDMSO中，加入25ml水，有紫色沉淀生成，抽滤之后用100ml水多次洗涤之后，置于真空干燥箱干燥过夜。得到86mg产物金属卟啉化合物ZnTPPtz1。1H-NMR(300MHz,CDCl3),δ(ppm):δ12.42(s,1H),10.77(s,1H),8.85(d,J＝9.8Hz,9H),8.68(s,1H),8.44(q,J＝8.1Hz,5H),8.24(dd,J＝6.7,2.9Hz,7H),7.92–7.75(m,11H),7.73(d,J＝7.7Hz,1H),7.62(s,2H),7.54(d,J＝8.0Hz,2H),2.24(s,3H)。
Figure BDA0002343979200000071
3、羧基卟啉化合物TPPCOOH2的制备：
用250ml的双口圆底烧瓶称取化合物3,5-二叔丁基对羟基苯甲醛(15mmol，3.5mg)和对醛基苯甲酸甲酯(5mmol，0.83g)溶于120ml丙酸中。反应液加热至140℃后加入重蒸的吡咯(20mmol，1.4ml),回流两小时后，待反应液冷却至室温，加入20ml乙醇。置于冰箱冷却过夜，有紫色固体生成，抽滤干燥之后，用二氯甲烷和石油醚2:1混合溶剂柱层析，得到叔丁基羟基取代的四苯基卟啉羧酸甲酯1.1g。将该产品溶于50ml四氢呋喃，随后再加入1mol/L的氢氧化钾溶液100ml，置于66℃下回流72h,待TLC检测反应结束以后，用HCl调节pH至3，有紫色固体生成，抽滤之后用100ml水分多次洗涤之后，置于真空干燥箱干燥过夜。得到1.04g羧基卟啉化合物TPPCOOH2。1H-NMR(300MHz,CDCl3),δ(ppm):δ8.94(d,J＝4.9Hz,6H),8.79(d,J＝4.8Hz,2H),8.48(d,J＝8.2Hz,2H),8.36(d,J＝8.2Hz,2H),8.04(s,6H),5.55(s,3H),1.62(s,54H),-2.71(s,2H)。
Figure BDA0002343979200000072
4、金属卟啉化合物ZnTPPtz2的制备：
用25ml单口圆底烧瓶称取化合物化合物TPPCOOH2(0.15mmol,156mg)，氨基噻唑化合物N-(4-(3-氨基苯基)噻唑-2-基)乙酰胺(0.18mmol 41.9mg)，HOAt(20.5mg,0.15mmol),DMAP(0.075mmol，16.8mg)溶于5ml DMF中，缓慢滴入预先准备好的5ml DMF溶液中，室温下反应过夜。随后，在真空下把反应液浓缩至5ml，加入25ml水，有紫色沉淀生成，抽滤之后用100ml水分多次洗涤之后，置于真空干燥箱干燥过夜。得到149mg卟啉化合物TPPtz2。
1H-NMR(300MHz,CDCl3),δ(ppm):δ9.90(s,1H),8.94(d,J＝1.9Hz,6H),8.78(d,J＝4.8Hz,2H),8.49–8.16(m,5H),8.03(s,6H),7.75(d,J＝8.1Hz,1H),7.66(d,J＝7.8Hz,1H),7.49(t,J＝7.9Hz,1H),5.54(s,3H),2.23(s,3H),1.62(d,J＝1.5Hz,55H),-2.68(s,2H)。把该化合物(0.1mmol,104mg)溶于二氯甲烷和乙醇中(v:v＝3:2,10ml)，随后加入无水醋酸锌(0.2mmol，36.6mg)，把反应液置于室温下反应12h，在真空下旋干溶剂，把得到的粗产物溶于5ml DMSO中，加入25ml水，有紫色沉淀生成，抽滤之后用100ml水分多次洗涤之后，置于真空干燥箱干燥过夜。得到102mg产物金属卟啉化合物ZnTPPtz2。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6),δ(ppm):δ12.36(s,1H),10.71(s,1H),8.89(d,J＝4.0Hz,6H),8.80(d,J＝4.7Hz,2H),8.65(t,J＝1.8Hz,1H),8.40(q,J＝8.0Hz,4H),7.95(d,J＝4.3Hz,6H),7.80(d,J＝8.5Hz,1H),7.69(d,J＝7.5Hz,1H),7.59(s,1H),7.50(d,J＝7.9Hz,1H),7.39(d,J＝2.2Hz,3H),2.21(s,3H),1.60(s,55H)。
Figure BDA0002343979200000081
实施例2
本实施例公开了本发明的金属卟啉化合物识别艾滋病毒TAR RNA的电泳实验。
将艾滋病毒TAR RNA(上海生工生物)和TAR结合蛋白tat(上海强耀生物)分别在配置为0.1mM的溶液(50mMTris缓冲液，pH 7.3，)。在反应管中分别加入4μlTARRNA和4μltat，在37℃孵育1小时。加入12μl水或不同浓度的金属卟啉化合物，配置成总体积20μl的反应液，在37℃孵育1小时。取8μl上述反应液，加入2μl溴酚蓝上样缓冲液，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳实验。4S Gel Red染色，FluorChemFC3上进行凝胶成像。结果如图1所示，金属卟啉化合物的浓度从左至右依次为0，5，10，20，40，80μM，随着金属卟啉化合物浓度的升高，结合了tat蛋白的TAR RNA逐渐减少，最终完全消失。实验结果表明金属卟啉化合物与tat竞争结合同一位点。化合物ZnTPPtz2结合TAR RNA的能力显著强于ZnTPPtz1，说明位阻基团叔丁基的存在为TAR RNA与Zn离子的作用提供了更专一性的空间，使得金属卟啉化合物对TAR RNA的结合能力增强。
实施例3
本实施例公开了本发明的金属卟啉化合物抑制艾滋病毒逆转录酶的酶联免疫实验。
采用Roche试剂盒(Reverse Transcriptase Assay,colorimetric)，对本发明制备的金属卟啉化合物对重组的HIV-1艾滋病毒逆转录酶的抑制活性进行了基于酶联免疫法的实验测定。在单独的反应管中加入5ng重组HIV-1艾滋病毒逆转录酶，在裂解缓冲液(20μl/孔)中稀释。未添加重组HIV-1艾滋病毒逆转录酶的裂解缓冲液应用作阴性对照。在每个反应管中加入20μl在裂解缓冲液中稀释的金属卟啉化合物和20μl反应混合物(46mM Tris，266mM氯化钾，27.5mM氯化镁，9.2mM二硫苏糖醇，10μMdUTP/dTTP，0.75A260/ml模板poly(A)/引物(dT)15)，并在37℃孵育1小时。将上述样品(60μl)转移到酶标条中，用盖箔盖住，并在37℃下孵育1小时。将溶液彻底倒出。每孔用250μl/洗涤缓冲液冲洗5次，每次30秒钟，然后小心除去洗涤缓冲液。每孔加入200μl抗DIG-POD工作稀释液(200mU/ml)，用盖箔覆盖酶标条，并在37℃孵育1小时。将溶液彻底倒出。每孔用250μl洗涤缓冲液冲洗5次，每次30秒钟，然后小心除去洗涤缓冲液。每孔加入200μlABTS底物溶液(2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐)，并在25℃下温育，直到显色(绿色)足以用于光度检测(10–30分钟)。使用酶标仪(ELISA)，测量样品在405nm(参考波长：约490nm)下的吸光度。结果如附图2所示，经单指数曲线拟合，金属卟啉化合物ZnTPPtz1和ZnTPPtz1抑制半数艾滋病毒逆转录酶活性的浓度(IC50)分别为1.25和0.23μM，显著低于文献报道的未连接金属卟啉化合物的氨基噻唑化合物。因此，本发明制备的金属卟啉化合物具有很高的艾滋病毒逆转录酶抑制活性，是艾滋病等与逆转录酶密切相关的疾病的潜在药物。
实施例4
本实施例公开了本发明的金属卟啉化合物与核酸的相互作用。
分别称取20mg的小牛胸腺DNA以及总RNA、酵母tRNA和poly(A)RNA三种不同的RNA，溶于4mlTris-NaCl缓冲液(5mM Tris，50mM NaCl，pH 7.0)当中，超声波振荡15分钟之后抽滤，将滤液按需要稀释之后，测量260nm和280nm的吸光度值。A260/A280在1.8～1.9范围内，表明基本不含蛋白质和RNA。用紫外可见分光光度计测量小牛胸腺DNA在260nm的吸光度值A260，摩尔消光系数值为6600M-1cm-1。小牛胸腺DNA浓度计算按[DNA]＝K·A260/6600计算，K为稀释倍数，单位为M。最后换算为CT-DNA储备液的浓度。poly(A)RNA、总RNA，酵母tRNA浓度的确定参考上述方法进行，摩尔消光系数值分别取10100M-1cm-1、8000M-1cm-1、7700M-1cm-1。金属卟啉化合物ZnTPPtz1和ZnTPPtz2同样使用Tris-NaCl缓冲液配置成10μM浓度的溶液。用微量进样器分次向金属卟啉化合物溶液中加入一定体积的DNA或RNA溶液，使核酸与金属卟啉化合物浓度比值按一定的比例递增，直至扣除稀释效应后峰值不再改变。每次混合均匀3分钟之后，在200～800nm范围记录金属卟啉化合物的紫外光谱变化。从金属卟啉化合物ZnTPPtz1(图3)与金属卟啉化合物ZnTPPtz2(图4)与四种核酸分别相互作用的紫外光谱滴定图可以看出，ZnTPPtz2的减色效应显著强于ZnTPPtz1，尤其是三种RNA的作用图。说明ZnTPPtz2对RNA具有更强的结合作用。
综上，本发明的金属卟啉化合物是特异性的RNA结合试剂，并能够识别艾滋病毒TAR RNA上与tat蛋白结合的位点，并高效的抑制艾滋病毒逆转录酶的活性，是艾滋病等与逆转录酶目前相关的疾病的潜在的高活性药物分子。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims (21)

1.一种如式I所示的化合物、或其药学上可接受的盐，
Figure FDA0002688607750000011
其中，R1为H或OH，R2为H或t-Bu。
2.根据权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为H，R2为H。
3.根据权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为OH，R2为t-Bu。
4.一种制备如式I所示的化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1.将式Ⅱ化合物、对甲酰基苯甲酸甲酯和吡咯加热反应，生成式Ⅲ化合物；
步骤2.将式Ⅲ化合物在碱性条件下水解，水解完成后，调节反应液pH值至酸性，生成式Ⅳ化合物；
步骤3.将式Ⅳ化合物与N-(4-(3-氨基苯基)噻唑-2-基)乙酰胺在1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、1-乙基-碳酰二亚胺盐酸盐、4-二甲氨基吡啶的作用下发生缩合得到式Ⅴ化合物；
步骤4.将式Ⅴ化合物与锌离子反应，得式I化合物；
所述方法的合成路线如下所示：
Figure FDA0002688607750000021
，所述R1为H时，R2为H；所述R1为OH时，R2为t-Bu。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤1中，式Ⅱ化合物、对甲酰基苯甲酸甲酯和吡咯的用量摩尔比为1-4:0.5-1.5:2-6；
或/和所述步骤3中，式IV化合物与N-(4-(3-氨基苯基)噻唑-2-基)乙酰胺、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、1-乙基-碳酰二亚胺盐酸盐、4-二甲氨基吡啶的用量摩尔比为0.5-2：0.5-1.5：0.5-2：0.5-2：0.2-0.8；
或/和所述步骤4中，锌离子与式V化合物的用量摩尔比大于1：1。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤1中，式Ⅱ化合物、对甲酰基苯甲酸甲酯和吡咯的用量摩尔比为3:1:4。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤3中，式IV化合物与N-(4-(3-氨基苯基)噻唑-2-基)乙酰胺、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、1-乙基-碳酰二亚胺盐酸盐、4-二甲氨基吡啶的用量摩尔比为1:1.2:1:1:0.5。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤4中，锌离子与式V化合物的用量摩尔比为2：1。
9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤1中，将式Ⅱ化合物、对甲酰基苯甲酸甲酯溶于第一溶剂中后，加热，待反应液加热至120-150℃后，再加入吡咯反应；
或/和所述步骤2中，将式Ⅲ化合物溶于第二溶剂中后，再加入碱液，在强碱性条件下水解，水解完成后，调节反应液pH值至酸性，生成沉淀，过滤，收集沉淀，得式Ⅳ化合物。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述第一溶剂为丙酸、丁酸、异丙酸中的任意一种或几种。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述第一溶剂为丙酸。
12.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，反应液加热至135-145℃。
13.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，反应液加热至150℃。
14.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述第二溶剂为四氢呋喃、甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二氧六环、乙二醇、甘油中的任意一种或几种。
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述第二溶剂为四氢呋喃。
16.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述碱液为浓度1mol/l以上的NaOH、KOH、乙醇钠、或叔丁醇钾。
17.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，调节反应液pH值为2-4。
18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，调节反应液pH值为3。
19.权利要求1-3任意一项所述的化合物、或药学上可接受的盐在制备艾滋病毒TARRNA选择性识别试剂中的应用。
20.权利要求1-3任意一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐在制备艾滋病毒逆转录酶抑制剂中的应用。
21.一种药物组合物，其特征在于，包括如权利要求1-3任意一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。
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