CN110982827A - 大豆威廉姆斯82中小G蛋白基因GmRAB7及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种大豆威廉姆斯82中小G蛋白基因，该基因命名为大豆威廉姆斯82NAC膜结合转录因子基因GmRAB7，其cDNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了所述基因在提高植株耐盐中的应用。实验证明，本发明所述转GmRAB7基因植株比非转基因植株的耐盐能力得到了很大程度的提高，预示该基因有望在培育耐盐的植物品种发挥重要的作用，此也为提高作物耐盐性提供了新的理论依据和实践基础。

Description

大豆威廉姆斯82中小G蛋白基因GmRAB7及其应用

技术领域

本发明属于生物基因工程技术领域，尤其涉及一种大豆(Glycine max(L.)Merr)威廉姆斯82(Williams 82)中小G蛋白基因——GmRAB7及其应用。

背景技术

植物暴露在自然环境当中，经常受到各种环境胁迫的影响，比如干旱、极端的温度、养分缺乏和病虫害等。这些环境胁迫不仅制约了植物的生长发育，同时也导致了粮食作物的减产。

高等植物自身生长发育和对环境变化的响应是通过调控目的基因的表达来实现。RAB蛋白为小G蛋白家族中的一员，广泛分布在真核生物中，主要定位于细胞质中的内膜上，参与到囊泡运输、细胞骨架的组装、细胞信号转导等，在信号转导途径中，受GTP/GDA调控。当外界信号刺激时，Rab蛋白的上游信号分析GEF和GAP就会调控Rab蛋白，使其激活或者失活，Rab蛋白通过结合GTP或者GDP来使构象发生改变，响应外界信号，调节细胞内囊泡的运输，将不同的蛋白从细胞不同的区室锚定到最终目的地。基于此，可以通过分析其在囊泡运输中的作用，了解各种细胞器形态生成和功能维护。有研究表明，Rab家族的不同成员在囊泡运输中发挥着很重要的作用,其介导的内吞作用对动物细胞和酵母的生长、繁殖及抗病具有重要的作用,其在植物中参与调控囊泡运输，但其在植物盐胁迫耐受中的机制还不清楚。经检索，有关大豆小G蛋白基因GmRAB7及其在提高植株盐胁迫耐受性的作用还未见报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种大豆威廉姆斯82中小G蛋白基因——GmRAB7及其在提高植株耐盐中的应用。

本发明所述的大豆威廉姆斯82中小G蛋白基因，其特征在于：所述基因命名为大豆威廉姆斯82NAC膜结合转录因子基因GmRAB7，该基因cDNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明还提供了一种含有权利要求1所述大豆威廉姆斯82中小G蛋白基因的植物表达载体，该植物表达载体命名为表达载体pB2GW7::GmRAB7，该表达载体克隆区域核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

上述大豆威廉姆斯82中小G蛋白基因在提高植株耐盐中的应用。

上述表达载体pB2GW7::GmRAB7在提高植株耐盐中的应用。

其中：所述植株优选是大豆或拟南芥。所述大豆优选是荷豆12。

申请人从大豆Williams 82中分离得到小G蛋白基因——GmRAB7，并将该基因转到拟南芥中证明其功能，结果得到了耐盐性提高的转基因拟南芥植株。证实了所述大豆威廉姆斯82中小G蛋白基因GmRAB7在提高植株耐盐中的应用。

具体的，先在Williams 82植株中克隆到小G蛋白基因GmRAB7；利过Gateway***将GmRAB7基因通过BP反应连接到pDONR221载体上(见图1)，然后通过转化的方法在大肠杆菌DH5α中得到大量克隆，接着进行LR反应把本发明所述基因GmRAB7连接到表达载体pB2GW7(见图2)上，并在大肠杆菌DH5α中表达；接着筛选转基因大肠杆菌，并提取转化质粒，最后将转化质粒转入农杆菌菌株GV3101中。将转化农杆菌菌株转化拟南芥Col-0，通过转基因拟南芥验证了基因GmRAB7的表达及其高盐胁迫耐受性能力的提高。

本发明的有益效果是：利用现有的植物基因工程技术，本发明首次克隆得到了Williams 82小G蛋白基因GmRAB7并在拟南芥或大豆中进行过表达。实验证实：本发明的提供的GmRAB7基因能使转基因拟南芥获得了非转基因拟南芥所不具备的高盐胁迫耐受性的能力。充分证明了本发明所述的大豆威廉姆斯82小G蛋白基因GmRAB7在提高植株在盐胁迫耐受性中具有重要的作用。基于本发明所述转GmRAB7基因植株比非转基因植株的耐盐能力得到了很大程度的提高，预示该基因有望在培育耐盐的植物品种发挥重要的作用，此也为提高作物耐盐性提供了新的理论依据和实践基础。

附图说明

图1为入门载体pDONR221图谱。

图2为植物表达载体pB2GW7图谱。

图3为Williams 82小G蛋白基因GmRAB7的CDS全长克隆电泳图

其中：M为Marker，泳道1为基因的CDS全长克隆。

图4为35S::GmRAB7转基因拟南芥植株耐盐性分析

其中：A-C图分别为转基因植株(GmRAB7-1，GmRAB7-2)及对照(Col-0)在0,100,150mmol/L NaCl胁迫下生长7天的照片。

图5为35S::GmRAB7转基因拟南芥植株耐盐性分析根长统计柱状图。

具体实施方式

下面结合具体附图和实施例对本发明内容进行详细说明。如下所述例子仅是本发明的较佳实施方式而已，应该说明的是，下述说明仅仅是为了解释本发明，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

下述实施例中，所使用的实验方法，未做具体说明的，均为常规方法，例如可以参考《分子克隆实验指南》(Sambrook和Russell,2001)。

下述实施例中，所使用的材料、试剂、菌株、载体等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1 GmRAB7的克隆

1.1 Williams 82总RNA的提取

(1)将Williams 82植物材料放入研钵中，利用液氮将其研磨成粉末(直接应用于下面的实验或者冻于-80℃超低温冰箱保存备用)；

(2)等液氮挥发后，立即将100-200mg植物粉末转入到1.5ml离心管中，然后迅速的加入1ml Trizol提取液，涡旋震荡使样品充分溶入提取液中，室温放置5min；

(3)4℃，12,000rpm，离心10min，将0.9ml上清液转移到新的1.5ml离心管中，再加入0.2ml氯仿剧烈振荡混匀15sec，室温放置2-5min；

(4)4℃，12,000rpm，离心10min，将0.4ml上清液转移到新的1.5ml离心管中，再加入0.4ml异丙醇，上下翻转15次混匀溶液，室温放置15mim；

(5)4℃，12,000rpm，离心10min，弃上清，用1ml 75％的乙醇洗涤沉淀两次，4℃，8,000rpm，离心5min；

(6)弃上清，开盖于超净工作台中上干燥RNA约2-5min，加入40μl RNase-Free水，在60℃中充分溶解RNA 10min；

(7)用紫外分光光度计测RNA样品的OD值和浓度，A₂₆₀/A₂₈₀达到1.7-2.0为佳；琼脂糖凝胶电泳检测的质量。

1.2 RNA的反转录

(1)向离心管中依次加入下列物质(40μl反应体系)：

(2)轻轻混匀后，65℃变性5min，立即插到冰上，冰浴至少1min；

(3)向离心管中依次加入下列物质

(4)轻轻混匀后，42℃恒温水浴1h，65℃变性10min，-20℃保存备用。

1.3 GmRAB7基因克隆

GmRAB7OX-F：5’-AA AAA GCA GGC TATGCCTTCCCGAAGAAG-3’

GmRAB7OX-R：5’-A GAA AGCTGG TTCAGCACTCACATCCTG-3’

(1)高保真酶Primer Star进行Gateway***的第一步扩增的反应体系如下(50μl体系)：

扩增条件如下：

反应结束后，反应液于0.8％TAE琼脂糖凝胶电泳检测。

(2)克隆基因片段的纯化回收(天根试剂盒)

1)将切下带有目的片段的凝胶放入1.5ml离心管并称凝胶重量，加入3倍体积的溶胶液，60℃溶胶10min，溶胶期间不断的翻转；

2)凝胶完全融化后，全部吸取到回收柱中，放置片刻；

3)室温，12000rpm，离心30Sec，弃溶液；

4)在柱中加入700μl的漂洗液，12000rpm，离心1min，弃漂洗液；

5)在柱中加入500μl的漂洗液，12000rpm，离心1min，弃漂洗液；

6)空柱，12000rpm，离心2min；

7)回收柱开盖晾干1-2min，放入新的干净的1.5ml离心管，加入60℃预热的40μl灭菌水或者EB缓冲液，放置2min；

8)12000rpm离心1min，所得溶液即为回收片段。

(3)高保真酶Primer Star进行Gateway***的第二步扩增。

attb引物序列：

attb-F：5’-G GGG ACA AGT TTG TAC AAA AAA GCA GGC T-3’

attb-R：5’-GGG GAC CAC TTT GTA CAA GAA AGC TGG GT-3’

反应体系如下(50μl体系)：

扩增条件如下：

反应结束后，反应液于0.8％TAE琼脂糖凝胶电泳检测，见图3。

1.4克隆基因片段的BP反应

BP反应(Gateway***)体系如下：

25℃反应8小时-过夜。

1.5大肠杆菌感受态的制备(无菌操作)

(1)取DH5α菌种接种于20ml LB液体培养基中，37℃摇床培养过夜；

(2)按1:100接种于50ml LB液体培养基中，37℃，200rpm培养1小时，至OD₆₀₀值为0.4-0.6；

(3)将菌液放置在冰上30min；

(4)4℃，4200rpm，离心10min，弃上清，加入10ml预冷的0.1M的CaCl₂悬浮菌体；

(5)将菌液放置在冰上10min；

(6)4℃，4200rpm，离心10min，弃上清，加入2ml预冷的0.1M的CaCl₂悬浮菌体，分装于1.5ml离心管中，现用或加入终体积30％甘油经液氮速冻后-80℃保存备用。

1.6大肠杆菌的质粒转化(无菌操作)

(1)将1-5μl质粒DNA或者连接产物加入50μl的感受态细胞中，轻弹离心管混匀，冰浴30min；

(2)42℃，温水浴热激90sec，立即冰浴2-3min；

(3)加入1ml LB培养基，37℃培养40-50min；

(4)室温，4000rpm，离心3min，收集菌体；

(5)将菌涂布于含有相应抗生素的培养平板上，37℃倒置培养过夜。

1.7大肠杆菌PCR验证

反应体系如下(20μl体系)：

扩增条件如下：

反应结束后，反应液于0.8％TAE琼脂糖凝胶电泳检测。

1.8 DNA测序

挑取含有重组质粒的阳性单菌落用含有Kan(25mg/L)的液体LB摇过夜，然后送上海博亚生物技术有限公司测序，得到测序结果：基因cDNA序列如序列表SEQ ID No.1所示。

经过序列分析，上述cDNA序列与大豆Willms82的核苷酸同源100％，三次实验证明得到的就是Willms82 NAC膜结合转录因子基因，命名为GmRAB7，所述基因GmRAB7的cDNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

1.9大肠杆菌质粒DNA的提取

(1)挑取单克隆接种于10ml含有相应抗生素的LB液体培养基中，37℃培养8h；

(2)室温，12,000rpm，离心1min，收集菌体；

(3)弃上清，加入100μl低温预冷的溶液I，振荡悬浮菌体；

(4)加200μl新鲜配制的溶液II，快速翻转混匀，冰浴5min；

(5)溶液澄清后加入150μl低温预冷的溶液III，轻轻混匀后冰浴5min；

(6)4℃，12000rpm，离心10min，吸取上清至新的1.5ml离心管中；

(7)加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇(25/24/1)，振荡混匀；

(8)室温，12,000rpm，离心10min，转移上层水相于另一新的1.5ml离心管中，加入等体积的氯仿：异戊醇(24∶1)，再抽提一次，振荡混匀；

(9)室温，12,000rpm，离心10min，转移上层水相于另一新的1.5ml离心管中，加入等体积的异丙醇，混匀并于-20℃放置30min；

(10)室温，12,000rpm，离心10min，弃上清保留沉淀。

(11)用75％乙醇洗涤沉淀两次，真空干燥5min，溶于40μl灭菌水，放至-20℃保存备用。1.10克隆基因片段的LR反应

LR反应(Gateway***)体系如下：

25℃反应8小时。

1.11大肠杆菌感受态的制备和质粒转化(同1.5、1.6)

1.12大肠杆菌PCR验证(同1.7)

1.13大肠杆菌质粒DNA的提取(同1.9)

验证转入pB2GW7载体的阳性pB2GW7::GmRAB7质粒的克隆区域核苷酸序列如SEQIDNo.4所示。

1.14农杆菌感受态的制备(无菌操作)

(1)取农杆菌GV3101菌种接种于10ml YEP液体培养基中，28℃摇床培养过夜；

(2)按1:50接种于50ml YEP液体培养基中，28℃振荡培养3-4小时，至OD₆₀₀值为0.4-0.6；

(3)4℃，4,200rpm，离心10min，收集菌体；

(4)弃上清，加入10ml预冷的0.15mol/L的NaCl悬浮菌体；

(5)重复步骤3；

(6)弃上清，加入2ml预冷的20mmol/L的CaCl₂悬浮菌体，分装于1.5ml离心管中，现用或加入终体积7％DMSO经液氮速冻后-80℃保存备用。

1.15农杆菌的质粒转化(无菌操作)

(1)将10μl质粒DNA加入50μl的感受态细胞中，轻弹离心管混匀，冰浴30min；

(2)液氮速冻1min；然后37℃水浴5min，立即冰浴2-3min；

(3)加入1ml YEP培养基，28℃培养2-4h；

(4)室温，4,000rpm，离心3min，收集菌体；

(5)将菌涂布于含有相应抗生素的YEP培养平板上，28℃倒置培养48h。

1.16转化农杆菌的PCR验证

反应体系如下(20μl体系)：

扩增条件如下：

反应结束后，反应液于0.8％TAE琼脂糖凝胶电泳检测。

实施例2在拟南芥中表达Williams 82小G蛋白基因GmRAB7的功能验证

2.1花侵染法转化拟南芥

(1)拟南芥(Col-0野生型)生长至抽苔1cm时，将顶端减掉以诱导侧生花序的生成；

(2)在转化前一天，取1ml活化过的含有表达载体质粒的农杆菌GV3101加到含相应抗生素及50μg/ml利福平的40ml YEP培养基中，28℃震荡培养至OD₆₀₀约为1.0-1.2；

(3)室温，4,200rpm,离心10min，收集菌体，用浸染液(5％蔗糖，0.02％Silwet L-77)重悬菌体，使OD₆₀₀约为0.8；

(4)用移液器将农杆菌滴到花序上进行浸染，待所有花序都被侵染后，将拟南芥放入真空干燥器中抽真空1min；

(5)用保鲜袋覆盖花序，至于20-22℃避光培养一天剪开顶部露出花序，再培养一天后揭去保鲜袋，培养至种子成熟。

2.2拟南芥种子的表面消毒

将适量待灭菌的拟南芥中子放入1.5ml离心管中，加入1ml 75％的乙醇(含有0.03％体积比的TritonX-100)震荡消毒1min，再用90％的乙醇震荡消毒1min(两次)，最后用吸头将种子吸到无菌滤纸上吹干，然后用无菌的牙签将其点入培养基中。

2.3转基因植株的筛选

对收获的T0代种子进行表面消毒，然后后均匀涂布于1/2MS平板上(含Basta)。春化处理3d后移入人工气候室生长。萌发约10天，子叶深绿色的植株为转基因植株，而子叶发浅绿甚至黄化的植株为非转基因植株。将转基因植株转入土中生长直至收获得到T1代转基因种子，T1代植株单株收种子，每株收取的种子继续筛选，将后代分离比为3∶1(阳性：阴性)的阳性植株移栽后生长至收获T2代转基因种子，单株收种后，每株收取的种子经筛选可以得到纯系T2代转基因种子。

2.4转基因拟南芥耐盐性检测

(1)拟南芥种子的表面消毒(同2.2)。

(2)NaCl处理

将无菌的Col-0、GmRAB7-1、GmRAB7-2纯系种子分别均匀撒在于1/2MS培养基平板上。春化处理3天后移入人工气候室生长。萌发约3d，根长至0.5cm左右，将拟南芥小苗移至添加不同浓度NaCl(0、100、150mmol/L)的1/2MS培养基平板上。待小苗长至8d，观察小苗根长生长状况。

结果：在正常的1/2MS培养基上，GmRAB7-1、GmRAB7-2和Col-0主根长度无明显差异。在含100mM、150mM NaCl的1/2MS培养基中，GmRAB7-1、GmRAB7-2的主根平均长度均高于Col-0，说明转基因植株主根伸长对盐胁迫有较高的耐受性。

见图4、图5。

实施例3转基因大豆耐盐性检测

(1)转基因大豆的制备方法同2.1～2.3。

(2)大豆种子的表面消毒(同2.2)。

(3)取大豆GmRAB7过表达植株及野生型大豆种子用水浸泡4个小时后，放在白瓷盘里盖上纱布，萌发2天，期间保持纱布湿润。2天后将豆芽放入种子萌发袋中，每袋约放8棵植株。摆豆子时注意袋与袋间种子位置应不同，避免位置效应。将种子萌发袋放在光照培养箱内，25度长日照培养，每天定时向种子萌发袋内加水，每次添加20ml，每天一次。在种子萌发袋内培养至长出第一对真叶，每个种子袋每天添加20ml 150mM NaCl，培养4天后照相。

结果：在水处理中，GmRAB7过表达转基因大豆和野生型大豆主根长度无明显差异。在分别含150mM NaCl处理下，GmRAB7过表达转基因大豆的主根平均长度均高于野生型大豆，说明转基因植株主根伸长对盐胁迫有较高的耐受性。

序列表

<110>山东大学

<120>大豆威廉姆斯82中小G蛋白基因GmRAB7及其应用

<141> 2019-12-24

<160> 4

<210> 1

<211> 621

<212> cDNA

<213>大豆(Glycine max?(L.) Merr)

<221>大豆威廉姆斯82 小G蛋白基因GmRAB7

<222>（1）…（621）

<400> 1

atgccttccc gaagaagaac tctcttgaag gtcatcattc tcggtgacag cggggtgggg 60

aagacgtctt tgatgaacca gtatgtgaat aagaagttta gtaatcagta caaggcaacc 120

attggagcgg attttttaac caaagaagtg caatttgaag ataggctttt caccttacag 180

atttgggata cagctggcca agaaagattc caaagccttg gagttgcttt ctatcgtggt 240

gctgattgtt gtgttcttgt atatgatgtt aattcaatga aatcatttga caaccttaat 300

aactggaggg aggaatttct gattcaagca agtccttccg atccagagaa ttttcctttt 360

gttgtcatag gaaacaaaat agatattgat ggtggaaaca gcagagtggt gtcagaaaag 420

aaggctcggg cttggtgtgc atcaaaagga aatattccat attttgagac atctgccaaa 480

gaaggtatta atgttgaaga agcattccaa tgcatagcaa agaatgccct gaaaagtgga 540

gaagaagaag aattatacct gccagacaca attgatgttg gaaacagcag tcagccacgg 600

gcaacaggat gtgagtgctg a 621

<210> 2

<211> 4762

<212> DNA

<213> 人工序列

<221> 入门载体pDONR221

<222>（1）…（4762）

<400> 2

ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga 60

taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga 120

gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca 180

cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaata cgcgtaccgc 240

tagccaggaa gagtttgtag aaacgcaaaa aggccatccg tcaggatggc cttctgctta 300

gtttgatgcc tggcagttta tggcgggcgt cctgcccgcc accctccggg ccgttgcttc 360

acaacgttca aatccgctcc cggcggattt gtcctactca ggagagcgtt caccgacaaa 420

caacagataa aacgaaaggc ccagtcttcc gactgagcct ttcgttttat ttgatgcctg 480

gcagttccct actctcgcgt taacgctagc atggatgttt tcccagtcac gacgttgtaa 540

aacgacggcc agtcttaagc tcgggcccca aataatgatt ttattttgac tgatagtgac 600

ctgttcgttg caacacattg atgagcaatg cttttttata atgccaactt tgtacaaaaa 660

agctgaacga gaaacgtaaa atgatataaa tatcaatata ttaaattaga ttttgcataa 720

aaaacagact acataatact gtaaaacaca acatatccag tcactatgaa tcaactactt 780

agatggtatt agtgacctgt agtcgaccga cagccttcca aatgttcttc gggtgatgct 840

gccaacttag tcgaccgaca gccttccaaa tgttcttctc aaacggaatc gtcgtatcca 900

gcctactcgc tattgtcctc aatgccgtat taaatcataa aaagaaataa gaaaaagagg 960

tgcgagcctc ttttttgtgt gacaaaataa aaacatctac ctattcatat acgctagtgt 1020

catagtcctg aaaatcatct gcatcaagaa caatttcaca actcttatac ttttctctta 1080

caagtcgttc ggcttcatct ggattttcag cctctatact tactaaacgt gataaagttt 1140

ctgtaatttc tactgtatcg acctgcagac tggctgtgta taagggagcc tgacatttat 1200

attccccaga acatcaggtt aatggcgttt ttgatgtcat tttcgcggtg gctgagatca 1260

gccacttctt ccccgataac ggagaccggc acactggcca tatcggtggt catcatgcgc 1320

cagctttcat ccccgatatg caccaccggg taaagttcac gggagacttt atctgacagc 1380

agacgtgcac tggccagggg gatcaccatc cgtcgcccgg gcgtgtcaat aatatcactc 1440

tgtacatcca caaacagacg ataacggctc tctcttttat aggtgtaaac cttaaactgc 1500

atttcaccag cccctgttct cgtcagcaaa agagccgttc atttcaataa accgggcgac 1560

ctcagccatc ccttcctgat tttccgcttt ccagcgttcg gcacgcagac gacgggcttc 1620

attctgcatg gttgtgctta ccagaccgga gatattgaca tcatatatgc cttgagcaac 1680

tgatagctgt cgctgtcaac tgtcactgta atacgctgct tcatagcata cctctttttg 1740

acatacttcg ggtatacata tcagtatata ttcttatacc gcaaaaatca gcgcgcaaat 1800

acgcatactg ttatctggct tttagtaagc cggatccacg cggcgtttac gccccgccct 1860

gccactcatc gcagtactgt tgtaattcat taagcattct gccgacatgg aagccatcac 1920

agacggcatg atgaacctga atcgccagcg gcatcagcac cttgtcgcct tgcgtataat 1980

atttgcccat ggtgaaaacg ggggcgaaga agttgtccat attggccacg tttaaatcaa 2040

aactggtgaa actcacccag ggattggctg agacgaaaaa catattctca ataaaccctt 2100

tagggaaata ggccaggttt tcaccgtaac acgccacatc ttgcgaatat atgtgtagaa 2160

actgccggaa atcgtcgtgg tattcactcc agagcgatga aaacgtttca gtttgctcat 2220

ggaaaacggt gtaacaaggg tgaacactat cccatatcac cagctcaccg tctttcattg 2280

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aaaacttgtg cttatttttc tttacggtct ttaaaaaggc cgtaatatcc agctgaacgg 2400

tctggttata ggtacattga gcaactgact gaaatgcctc aaaatgttct ttacgatgcc 2460

attgggatat atcaacggtg gtatatccag tgattttttt ctccatttta gcttccttag 2520

ctcctgaaaa tctcgataac tcaaaaaata cgcccggtag tgatcttatt tcattatggt 2580

gaaagttgga acctcttacg tgccgatcaa cgtctcattt tcgccaaaag ttggcccagg 2640

gcttcccggt atcaacaggg acaccaggat ttatttattc tgcgaagtga tcttccgtca 2700

caggtattta ttcggcgcaa agtgcgtcgg gtgatgctgc caacttagtc gactacaggt 2760

cactaatacc atctaagtag ttgattcata gtgactggat atgttgtgtt ttacagtatt 2820

atgtagtctg ttttttatgc aaaatctaat ttaatatatt gatatttata tcattttacg 2880

tttctcgttc agctttcttg tacaaagttg gcattataag aaagcattgc ttatcaattt 2940

gttgcaacga acaggtcact atcagtcaaa ataaaatcat tatttgccat ccagctgata 3000

tcccctatag tgagtcgtat tacatggtca tagctgtttc ctggcagctc tggcccgtgt 3060

ctcaaaatct ctgatgttac attgcacaag ataaaataat atcatcatga acaataaaac 3120

tgtctgctta cataaacagt aatacaaggg gtgttatgag ccatattcaa cgggaaacgt 3180

cgaggccgcg attaaattcc aacatggatg ctgatttata tgggtataaa tgggctcgcg 3240

ataatgtcgg gcaatcaggt gcgacaatct atcgcttgta tgggaagccc gatgcgccag 3300

agttgtttct gaaacatggc aaaggtagcg ttgccaatga tgttacagat gagatggtca 3360

gactaaactg gctgacggaa tttatgcctc ttccgaccat caagcatttt atccgtactc 3420

ctgatgatgc atggttactc accactgcga tccccggaaa aacagcattc caggtattag 3480

aagaatatcc tgattcaggt gaaaatattg ttgatgcgct ggcagtgttc ctgcgccggt 3540

tgcattcgat tcctgtttgt aattgtcctt ttaacagcga tcgcgtattt cgtctcgctc 3600

aggcgcaatc acgaatgaat aacggtttgg ttgatgcgag tgattttgat gacgagcgta 3660

atggctggcc tgttgaacaa gtctggaaag aaatgcataa acttttgcca ttctcaccgg 3720

attcagtcgt cactcatggt gatttctcac ttgataacct tatttttgac gaggggaaat 3780

taataggttg tattgatgtt ggacgagtcg gaatcgcaga ccgataccag gatcttgcca 3840

tcctatggaa ctgcctcggt gagttttctc cttcattaca gaaacggctt tttcaaaaat 3900

atggtattga taatcctgat atgaataaat tgcagtttca tttgatgctc gatgagtttt 3960

tctaatcaga attggttaat tggttgtaac actggcagag cattacgctg acttgacggg 4020

acggcgcaag ctcatgacca aaatccctta acgtgagtta cgcgtcgttc cactgagcgt 4080

cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct 4140

gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc 4200

taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgttc 4260

ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc 4320

tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg 4380

ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt 4440

cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg 4500

agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg 4560

gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt 4620

atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag 4680

gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt 4740

gctggccttt tgctcacatg tt 4762

<210> 3

<211> 11135

<212> DNA

<213> 人工序列

<221> 植物表达载体pB2GW7核苷酸序列

<222>（1）…（11135）

<400> 3

ctcccatatg gtcgactaga gccaagctga tctcctttgc cccggagatc accatggacg 60

actttctcta tctctacgat ctaggaagaa agttcgacgg agaaggtgac gataccatgt 120

tcaccaccga taatgagaag attagcctct tcaatttcag aaagaatgct gacccacaga 180

tggttagaga ggcctacgcg gcaggtctca tcaagacgat ctacccgagt aataatctcc 240

aggagatcaa ataccttccc aagaaggtta aagatgcagt caaaagattc aggactaact 300

gcatcaagaa cacagagaaa gatatatttc tcaagatcag aagtactatt ccagtatgga 360

cgattcaagg cttgcttcat aaaccaaggc aagtaataga gattggagtc tctaagaaag 420

tagttcctac tgaatcaaag gccatggagt caaaaattca gatcgaggat ctaacagaac 480

tcgccgtgaa gactggcgaa cagttcatac agagtctttt acgactcaat gacaagaaga 540

aaatcttcgt caacatggtg gagcacgaca ctctcgtcta ctccaagaat atcaaagata 600

cagtctcaga agaccaaagg gctattgaga cttttcaaca aagggtaata tcgggaaacc 660

tcctcggatt ccattgccca gctatctgtc acttcatcaa aaggacagta gaaaaggaag 720

gtggcaccta caaatgccat cattgcgata aaggaaaggc tatcgttcaa gatgcctctg 780

ccgacagtgg tcccaaagat ggacccccac ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg 840

ttccaaccac gtcttcaaag caagtggatt gatgtgatat ctccactgac gtaagggatg 900

acgcacaatc ccactatcct tcgcaagacc cttcctctat ataaggaagt tcatttcatt 960

tggagaggac tccggtattt ttacaacaat accacaacaa aacaaacaac aaacaacatt 1020

acaatttact attctagtcg acctgcaggc ggccgcacta gtgatatcac aagtttgtac 1080

aaaaaagctg aacgagaaac gtaaaatgat ataaatatca atatattaaa ttagattttg 1140

cataaaaaac agactacata atactgtaaa acacaacata tccagtcact atggcggccg 1200

cattaggcac cccaggcttt acactttatg cttccggctc gtataatgtg tggattttga 1260

gttaggatcc ggcgagattt tcaggagcta aggaagctaa aatggagaaa aaaatcactg 1320

gatataccac cgttgatata tcccaatggc atcgtaaaga acattttgag gcatttcagt 1380

cagttgctca atgtacctat aaccagaccg ttcagctgga tattacggcc tttttaaaga 1440

ccgtaaagaa aaataagcac aagttttatc cggcctttat tcacattctt gcccgcctga 1500

tgaatgctca tccggaattc cgtatggcaa tgaaagacgg tgagctggtg atatgggata 1560

gtgttcaccc ttgttacacc gttttccatg agcaaactga aacgttttca tcgctctgga 1620

gtgaatacca cgacgatttc cggcagtttc tacacatata ttcgcaagat gtggcgtgtt 1680

acggtgaaaa cctggcctat ttccctaaag ggtttattga gaatatgttt ttcgtctcag 1740

ccaatccctg ggtgagtttc accagttttg atttaaacgt ggccaatatg gacaacttct 1800

tcgcccccgt tttcaccatg ggcaaatatt atacgcaagg cgacaaggtg ctgatgccgc 1860

tggcgattca ggttcatcat gccgtctgtg atggcttcca tgtcggcaga atgcttaatg 1920

aattacaaca gtactgcgat gagtggcagg gcggggcgta aacgcgtgga tccggcttac 1980

taaaagccag ataacagtat gcgtatttgc gcgctgattt ttgcggtata agaatatata 2040

ctgatatgta tacccgaagt atgtcaaaaa gaggtgtgct atgaagcagc gtattacagt 2100

gacagttgac agcgacagct atcagttgct caaggcatat atgatgtcaa tatctccggt 2160

ctggtaagca caaccatgca gaatgaagcc cgtcgtctgc gtgccgaacg ctggaaagcg 2220

gaaaatcagg aagggatggc tgaggtcgcc cggtttattg aaatgaacgg ctcttttgct 2280

gacgagaaca gggactggtg aaatgcagtt taaggtttac acctataaaa gagagagccg 2340

ttatcgtctg tttgtggatg tacagagtga tattattgac acgcccgggc gacggatggt 2400

gatccccctg gccagtgcac gtctgctgtc agataaagtc tcccgtgaac tttacccggt 2460

ggtgcatatc ggggatgaaa gctggcgcat gatgaccacc gatatggcca gtgtgccggt 2520

ctccgttatc ggggaagaag tggctgatct cagccaccgc gaaaatgaca tcaaaaacgc 2580

cattaacctg atgttctggg gaatataaat gtcaggctcc cttatacaca gccagtctgc 2640

aggtcgacca tagtgactgg atatgttgtg ttttacagta ttatgtagtc tgttttttat 2700

gcaaaatcta atttaatata ttgatattta tatcatttta cgtttctcgt tcagctttct 2760

tgtacaaagt ggtgatatcc cgcggccatg ctagagtccg caaaaatcac cagtctctct 2820

ctacaaatct atctctctct atttttctcc agaataatgt gtgagtagtt cccagataag 2880

ggaattaggg ttcttatagg gtttcgctca tgtgttgagc atataagaaa cccttagtat 2940

gtatttgtat ttgtaaaata cttctatcaa taaaatttct aattcctaaa accaaaatcc 3000

agtgacctgc aggcatgcga cgtcgggccc aagcttagct tgagcttgga tcagattgtc 3060

gtttcccgcc ttcagtttaa actatcagtg tttgacagga tatattggcg ggtaaaccta 3120

agagaaaaga gcgtttatta gaataacgga tatttaaaag ggcgtgaaaa ggtttatccg 3180

ttcgtccatt tgtatgtgca tgccaaccac agggttcccc tcgggatcaa agtactttga 3240

tccaacccct ccgctgctat agtgcagtcg gcttctgacg ttcagtgcag ccgtcttctg 3300

aaaacgacat gtcgcacaag tcctaagtta cgcgacaggc tgccgccctg cccttttcct 3360

ggcgttttct tgtcgcgtgt tttagtcgca taaagtagaa tacttgcgac tagaaccgga 3420

gacattacgc catgaacaag agcgccgccg ctggcctgct gggctatgcc cgcgtcagca 3480

ccgacgacca ggacttgacc aaccaacggg ccgaactgca cgcggccggc tgcaccaagc 3540

tgttttccga gaagatcacc ggcaccaggc gcgaccgccc ggagctggcc aggatgcttg 3600

accacctacg ccctggcgac gttgtgacag tgaccaggct agaccgcctg gcccgcagca 3660

cccgcgacct actggacatt gccgagcgca tccaggaggc cggcgcgggc ctgcgtagcc 3720

tggcagagcc gtgggccgac accaccacgc cggccggccg catggtgttg accgtgttcg 3780

ccggcattgc cgagttcgag cgttccctaa tcatcgaccg cacccggagc gggcgcgagg 3840

ccgccaaggc ccgaggcgtg aagtttggcc cccgccctac cctcaccccg gcacagatcg 3900

cgcacgcccg cgagctgatc gaccaggaag gccgcaccgt gaaagaggcg gctgcactgc 3960

ttggcgtgca tcgctcgacc ctgtaccgcg cacttgagcg cagcgaggaa gtgacgccca 4020

ccgaggccag gcggcgcggt gccttccgtg aggacgcatt gaccgaggcc gacgccctgg 4080

cggccgccga gaatgaacgc caagaggaac aagcatgaaa ccgcaccagg acggccagga 4140

cgaaccgttt ttcattaccg aagagatcga ggcggagatg atcgcggccg ggtacgtgtt 4200

cgagccgccc gcgcacgtct caaccgtgcg gctgcatgaa atcctggccg gtttgtctga 4260

tgccaagctg gcggcctggc cggccagctt ggccgctgaa gaaaccgagc gccgccgtct 4320

aaaaaggtga tgtgtatttg agtaaaacag cttgcgtcat gcggtcgctg cgtatatgat 4380

gcgatgagta aataaacaaa tacgcaaggg gaacgcatga aggttatcgc tgtacttaac 4440

cagaaaggcg ggtcaggcaa gacgaccatc gcaacccatc tagcccgcgc cctgcaactc 4500

gccggggccg atgttctgtt agtcgattcc gatccccagg gcagtgcccg cgattgggcg 4560

gccgtgcggg aagatcaacc gctaaccgtt gtcggcatcg accgcccgac gattgaccgc 4620

gacgtgaagg ccatcggccg gcgcgacttc gtagtgatcg acggagcgcc ccaggcggcg 4680

gacttggctg tgtccgcgat caaggcagcc gacttcgtgc tgattccggt gcagccaagc 4740

ccttacgaca tatgggccac cgccgacctg gtggagctgg ttaagcagcg cattgaggtc 4800

acggatggaa ggctacaagc ggcctttgtc gtgtcgcggg cgatcaaagg cacgcgcatc 4860

ggcggtgagg ttgccgaggc gctggccggg tacgagctgc ccattcttga gtcccgtatc 4920

acgcagcgcg tgagctaccc aggcactgcc gccgccggca caaccgttct tgaatcagaa 4980

cccgagggcg acgctgcccg cgaggtccag gcgctggccg ctgaaattaa atcaaaactc 5040

atttgagtta atgaggtaaa gagaaaatga gcaaaagcac aaacacgcta agtgccggcc 5100

gtccgagcgc acgcagcagc aaggctgcaa cgttggccag cctggcagac acgccagcca 5160

tgaagcgggt caactttcag ttgccggcgg aggatcacac caagctgaag atgtacgcgg 5220

tacgccaagg caagaccatt accgagctgc tatctgaata catcgcgcag ctaccagagt 5280

aaatgagcaa atgaataaat gagtagatga attttagcgg ctaaaggagg cggcatggaa 5340

aatcaagaac aaccaggcac cgacgccgtg gaatgcccca tgtgtggagg aacgggcggt 5400

tggccaggcg taagcggctg ggttgtctgc cggccctgca atggcactgg aacccccaag 5460

cccgaggaat cggcgtgacg gtcgcaaacc atccggcccg gtacaaatcg gcgcggcgct 5520

gggtgatgac ctggtggaga agttgaaggc cgcgcaggcc gcccagcggc aacgcatcga 5580

ggcagaagca cgccccggtg aatcgtggca agcggccgct gatcgaatcc gcaaagaatc 5640

ccggcaaccg ccggcagccg gtgcgccgtc gattaggaag ccgcccaagg gcgacgagca 5700

accagatttt ttcgttccga tgctctatga cgtgggcacc cgcgatagtc gcagcatcat 5760

ggacgtggcc gttttccgtc tgtcgaagcg tgaccgacga gctggcgagg tgatccgcta 5820

cgagcttcca gacgggcacg tagaggtttc cgcagggccg gccggcatgg ccagtgtgtg 5880

ggattacgac ctggtactga tggcggtttc ccatctaacc gaatccatga accgataccg 5940

ggaagggaag ggagacaagc ccggccgcgt gttccgtcca cacgttgcgg acgtactcaa 6000

gttctgccgg cgagccgatg gcggaaagca gaaagacgac ctggtagaaa cctgcattcg 6060

gttaaacacc acgcacgttg ccatgcagcg tacgaagaag gccaagaacg gccgcctggt 6120

gacggtatcc gagggtgaag ccttgattag ccgctacaag atcgtaaaga gcgaaaccgg 6180

gcggccggag tacatcgaga tcgagctagc tgattggatg taccgcgaga tcacagaagg 6240

caagaacccg gacgtgctga cggttcaccc cgattacttt ttgatcgatc ccggcatcgg 6300

ccgttttctc taccgcctgg cacgccgcgc cgcaggcaag gcagaagcca gatggttgtt 6360

caagacgatc tacgaacgca gtggcagcgc cggagagttc aagaagttct gtttcaccgt 6420

gcgcaagctg atcgggtcaa atgacctgcc ggagtacgat ttgaaggagg aggcggggca 6480

ggctggcccg atcctagtca tgcgctaccg caacctgatc gagggcgaag catccgccgg 6540

ttcctaatgt acggagcaga tgctagggca aattgcccta gcaggggaaa aaggtcgaaa 6600

aggtctcttt cctgtggata gcacgtacat tgggaaccca aagccgtaca ttgggaaccg 6660

gaacccgtac attgggaacc caaagccgta cattgggaac cggtcacaca tgtaagtgac 6720

tgatataaaa gagaaaaaag gcgatttttc cgcctaaaac tctttaaaac ttattaaaac 6780

tcttaaaacc cgcctggcct gtgcataact gtctggccag cgcacagccg aagagctgca 6840

aaaagcgcct acccttcggt cgctgcgctc cctacgcccc gccgcttcgc gtcggcctat 6900

cgcggccgct ggccgctcaa aaatggctgg cctacggcca ggcaatctac cagggcgcgg 6960

acaagccgcg ccgtcgccac tcgaccgccg gcgcccacat caaggcaccc tgcctcgcgc 7020

gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct cccggagacg gtcacagctt 7080

gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg ggtgttggcg 7140

ggtgtcgggg cgcagccatg acccagtcac gtagcgatag cggagtgtat actggcttaa 7200

ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat atgcggtgtg aaataccgca 7260

cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc 7320

gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg 7380

gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa 7440

ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga 7500

cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag 7560

ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct 7620

taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg 7680

ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc 7740

ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt 7800

aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta 7860

tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac 7920

agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc 7980

ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat 8040

tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc 8100

tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg catgatatat ctcccaattt 8160

gtgtagggct tattatgcac gcttaaaaat aataaaagca gacttgacct gatagtttgg 8220

ctgtgagcaa ttatgtgctt agtgcatcta atcgcttgag ttaacgccgg cgaagcggcg 8280

tcggcttgaa cgaatttcta gctagacatt atttgccgac taccttggtg atctcgcctt 8340

tcacgtagtg gacaaattct tccaactgat ctgcgcgcga ggccaagcga tcttcttctt 8400

gtccaagata agcctgtcta gcttcaagta tgacgggctg atactgggcc ggcaggcgct 8460

ccattgccca gtcggcagcg acatccttcg gcgcgatttt gccggttact gcgctgtacc 8520

aaatgcggga caacgtaagc actacatttc gctcatcgcc agcccagtcg ggcggcgagt 8580

tccatagcgt taaggtttca tttagcgcct caaatagatc ctgttcagga accggatcaa 8640

agagttcctc cgccgctgga cctaccaagg caacgctatg ttctcttgct tttgtcagca 8700

agatagccag atcaatgtcg atcgtggctg gctcgaagat acctgcaaga atgtcattgc 8760

gctgccattc tccaaattgc agttcgcgct tagctggata acgccacgga atgatgtcgt 8820

cgtgcacaac aatggtgact tctacagcgc ggagaatctc gctctctcca ggggaagccg 8880

aagtttccaa aaggtcgttg atcaaagctc gccgcgttgt ttcatcaagc cttacggtca 8940

ccgtaaccag caaatcaata tcactgtgtg gcttcaggcc gccatccact gcggagccgt 9000

acaaatgtac ggccagcaac gtcggttcga gatggcgctc gatgacgcca actacctctg 9060

atagttgagt cgatacttcg gcgatcaccg cttcccccat gatgtttaac tttgttttag 9120

ggcgactgcc ctgctgcgta acatcgttgc tgctccataa catcaaacat cgacccacgg 9180

cgtaacgcgc ttgctgcttg gatgcccgag gcatagactg taccccaaaa aaacatgtca 9240

taacaagaag ccatgaaaac cgccactgcg ccgttaccac cgctgcgttc ggtcaaggtt 9300

ctggaccagt tgcgtgacgg cagttacgct acttgcatta cagcttacga accgaacgag 9360

gcttatgtcc actgggttcg tgcccgaatt gatcacaggc agcaacgctc tgtcatcgtt 9420

acaatcaaca tgctaccctc cgcgagatca tccgtgtttc aaacccggca gcttagttgc 9480

cgttcttccg aatagcatcg gtaacatgag caaagtctgc cgccttacaa cggctctccc 9540

gctgacgccg tcccggactg atgggctgcc tgtatcgagt ggtgattttg tgccgagctg 9600

ccggtcgggg agctgttggc tggctggtgg caggatatat tgtggtgtaa acaaattgac 9660

gcttagacaa cttaataaca cattgcggac gtttttaatg tactgaatta acgccgaatt 9720

gaattatcag cttgcatgcc ggtcgatcta gtaacataga tgacaccgcg cgcgataatt 9780

tatcctagtt tgcgcgctat attttgtttt ctatcgcgta ttaaatgtat aattgcggga 9840

ctctaatcat aaaaacccat ctcataaata acgtcatgca ttacatgtta attattacat 9900

gcttaacgta attcaacaga aattatatga taatcatcgc aagaccggca acaggattca 9960

atcttaagaa actttattgc caaatgtttg aacgatctgc ttgactctag ctagagtccg 10020

aaccccagag tcccgctcag aagaactcgt caagaaggcg atagaaggcg atgcgctgcg 10080

aatcgggagc ggcgataccg taaagcacga ggaagcggtc agcccattcg ccgccaagct 10140

cttcagcaat atcacgggta gccaacgcta tgtcctgata gcggtccgcc acacccagcc 10200

ggccacagtc gatgaatcca gaaaagcggc cattttccac catgatattc ggcaagcagg 10260

catcgccgtg ggtcacgacg agatcctcgc cgtcgggcat ccgcgccttg agcctggcga 10320

acagttcggc tggcgcgagc ccctgatgct cttcgtccag atcatcctga tcgacaagac 10380

cggcttccat ccgagtacgt gctcgctcga tgcgatgttt cgcttggtgg tcgaatgggc 10440

aggtagccgg atcaagcgta tgcagccgcc gcattgcatc agccatgatg gatactttct 10500

cggcaggagc aaggtgagat gacaggagat cctgccccgg cacttcgccc aatagcagcc 10560

agtcccttcc cgcttcagtg acaacgtcga gcacagctgc gcaaggaacg cccgtcgtgg 10620

ccagccacga tagccgcgct gcctcgtctt ggagttcatt cagggcaccg gacaggtcgg 10680

tcttgacaaa aagaaccggg cgcccctgcg ctgacagccg gaacacggcg gcatcagagc 10740

agccgattgt ctgttgtgcc cagtcatagc cgaatagcct ctccacccaa gcggccggag 10800

aacctgcgtg caatccatct tgttcaatca tgcctcgatc gagttgagag tgaatatgag 10860

actctaattg gataccgagg ggaatttatg gaacgtcagt ggagcatttt tgacaagaaa 10920

tatttgctag ctgatagtga ccttaggcga cttttgaacg cgcaataatg gtttctgacg 10980

tatgtgctta gctcattaaa ctccagaaac ccgcggctga gtggctcctt caacgttgcg 11040

gttctgtcag ttccaaacgt aaaacggctt gtcccgcgtc atcggcgggg gtcataacgt 11100

gactccctta attctcatgt atgataattc gagct 11135

<210> 4

<211> 9848

<212> DNA

<213> 人工序列

<221>含有基因GmRAB7的植物表达载体pB2GW7:: GmRAB7

<222>（1）…（9848）

<400> 4

ctcccatatg gtcgactaga gccaagctga tctcctttgc cccggagatc accatggacg 60

actttctcta tctctacgat ctaggaagaa agttcgacgg agaaggtgac gataccatgt 120

tcaccaccga taatgagaag attagcctct tcaatttcag aaagaatgct gacccacaga 180

tggttagaga ggcctacgcg gcaggtctca tcaagacgat ctacccgagt aataatctcc 240

aggagatcaa ataccttccc aagaaggtta aagatgcagt caaaagattc aggactaact 300

gcatcaagaa cacagagaaa gatatatttc tcaagatcag aagtactatt ccagtatgga 360

cgattcaagg cttgcttcat aaaccaaggc aagtaataga gattggagtc tctaagaaag 420

tagttcctac tgaatcaaag gccatggagt caaaaattca gatcgaggat ctaacagaac 480

tcgccgtgaa gactggcgaa cagttcatac agagtctttt acgactcaat gacaagaaga 540

aaatcttcgt caacatggtg gagcacgaca ctctcgtcta ctccaagaat atcaaagata 600

cagtctcaga agaccaaagg gctattgaga cttttcaaca aagggtaata tcgggaaacc 660

tcctcggatt ccattgccca gctatctgtc acttcatcaa aaggacagta gaaaaggaag 720

gtggcaccta caaatgccat cattgcgata aaggaaaggc tatcgttcaa gatgcctctg 780

ccgacagtgg tcccaaagat ggacccccac ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg 840

ttccaaccac gtcttcaaag caagtggatt gatgtgatat ctccactgac gtaagggatg 900

acgcacaatc ccactatcct tcgcaagacc cttcctctat ataaggaagt tcatttcatt 960

tggagaggac tccggtattt ttacaacaat accacaacaa aacaaacaac aaacaacatt 1020

acaatttact attctagtcg acctgcaggc ggccgcacta gtgatatcac aagtttgtac 1080

aaaaaagcag gctatgcctt cccgaagaag aactctcttg aaggtcatca ttctcggtga 1140

cagcggggtg gggaagacgt ctttgatgaa ccagtatgtg aataagaagt ttagtaatca 1200

gtacaaggca accattggag cggatttttt aaccaaagaa gtgcaatttg aagataggct 1260

tttcacctta cagatttggg atacagctgg ccaagaaaga ttccaaagcc ttggagttgc 1320

tttctatcgt ggtgctgatt gttgtgttct tgtatatgat gttaattcaa tgaaatcatt 1380

tgacaacctt aataactgga gggaggaatt tctgattcaa gcaagtcctt ccgatccaga 1440

gaattttcct tttgttgtca taggaaacaa aatagatatt gatggtggaa acagcagagt 1500

ggtgtcagaa aagaaggctc gggcttggtg tgcatcaaaa ggaaatattc catattttga 1560

gacatctgcc aaagaaggta ttaatgttga agaagcattc caatgcatag caaagaatgc 1620

cctgaaaagt ggagaagaag aagaattata cctgccagac acaattgatg ttggaaacag 1680

cagtcagcca cgggcaacag gatgtgagtg ctgaacccag ctttcttgta caaagtggtg 1740

atatcccgcg gccatgctag agtccgcaaa aatcaccagt ctctctctac aaatctatct 1800

ctctctattt ttctccagaa taatgtgtga gtagttccca gataagggaa ttagggttct 1860

tatagggttt cgctcatgtg ttgagcatat aagaaaccct tagtatgtat ttgtatttgt 1920

aaaatacttc tatcaataaa atttctaatt cctaaaacca aaatccagtg acctgcaggc 1980

atgcgacgtc gggcccaagc ttagcttgag cttggatcag attgtcgttt cccgccttca 2040

gtttaaacta tcagtgtttg acaggatata ttggcgggta aacctaagag aaaagagcgt 2100

ttattagaat aacggatatt taaaagggcg tgaaaaggtt tatccgttcg tccatttgta 2160

tgtgcatgcc aaccacaggg ttcccctcgg gatcaaagta ctttgatcca acccctccgc 2220

tgctatagtg cagtcggctt ctgacgttca gtgcagccgt cttctgaaaa cgacatgtcg 2280

cacaagtcct aagttacgcg acaggctgcc gccctgccct tttcctggcg ttttcttgtc 2340

gcgtgtttta gtcgcataaa gtagaatact tgcgactaga accggagaca ttacgccatg 2400

aacaagagcg ccgccgctgg cctgctgggc tatgcccgcg tcagcaccga cgaccaggac 2460

ttgaccaacc aacgggccga actgcacgcg gccggctgca ccaagctgtt ttccgagaag 2520

atcaccggca ccaggcgcga ccgcccggag ctggccagga tgcttgacca cctacgccct 2580

ggcgacgttg tgacagtgac caggctagac cgcctggccc gcagcacccg cgacctactg 2640

gacattgccg agcgcatcca ggaggccggc gcgggcctgc gtagcctggc agagccgtgg 2700

gccgacacca ccacgccggc cggccgcatg gtgttgaccg tgttcgccgg cattgccgag 2760

ttcgagcgtt ccctaatcat cgaccgcacc cggagcgggc gcgaggccgc caaggcccga 2820

ggcgtgaagt ttggcccccg ccctaccctc accccggcac agatcgcgca cgcccgcgag 2880

ctgatcgacc aggaaggccg caccgtgaaa gaggcggctg cactgcttgg cgtgcatcgc 2940

tcgaccctgt accgcgcact tgagcgcagc gaggaagtga cgcccaccga ggccaggcgg 3000

cgcggtgcct tccgtgagga cgcattgacc gaggccgacg ccctggcggc cgccgagaat 3060

gaacgccaag aggaacaagc atgaaaccgc accaggacgg ccaggacgaa ccgtttttca 3120

ttaccgaaga gatcgaggcg gagatgatcg cggccgggta cgtgttcgag ccgcccgcgc 3180

acgtctcaac cgtgcggctg catgaaatcc tggccggttt gtctgatgcc aagctggcgg 3240

cctggccggc cagcttggcc gctgaagaaa ccgagcgccg ccgtctaaaa aggtgatgtg 3300

tatttgagta aaacagcttg cgtcatgcgg tcgctgcgta tatgatgcga tgagtaaata 3360

aacaaatacg caaggggaac gcatgaaggt tatcgctgta cttaaccaga aaggcgggtc 3420

aggcaagacg accatcgcaa cccatctagc ccgcgccctg caactcgccg gggccgatgt 3480

tctgttagtc gattccgatc cccagggcag tgcccgcgat tgggcggccg tgcgggaaga 3540

tcaaccgcta accgttgtcg gcatcgaccg cccgacgatt gaccgcgacg tgaaggccat 3600

cggccggcgc gacttcgtag tgatcgacgg agcgccccag gcggcggact tggctgtgtc 3660

cgcgatcaag gcagccgact tcgtgctgat tccggtgcag ccaagccctt acgacatatg 3720

ggccaccgcc gacctggtgg agctggttaa gcagcgcatt gaggtcacgg atggaaggct 3780

acaagcggcc tttgtcgtgt cgcgggcgat caaaggcacg cgcatcggcg gtgaggttgc 3840

cgaggcgctg gccgggtacg agctgcccat tcttgagtcc cgtatcacgc agcgcgtgag 3900

ctacccaggc actgccgccg ccggcacaac cgttcttgaa tcagaacccg agggcgacgc 3960

tgcccgcgag gtccaggcgc tggccgctga aattaaatca aaactcattt gagttaatga 4020

ggtaaagaga aaatgagcaa aagcacaaac acgctaagtg ccggccgtcc gagcgcacgc 4080

agcagcaagg ctgcaacgtt ggccagcctg gcagacacgc cagccatgaa gcgggtcaac 4140

tttcagttgc cggcggagga tcacaccaag ctgaagatgt acgcggtacg ccaaggcaag 4200

accattaccg agctgctatc tgaatacatc gcgcagctac cagagtaaat gagcaaatga 4260

ataaatgagt agatgaattt tagcggctaa aggaggcggc atggaaaatc aagaacaacc 4320

aggcaccgac gccgtggaat gccccatgtg tggaggaacg ggcggttggc caggcgtaag 4380

cggctgggtt gtctgccggc cctgcaatgg cactggaacc cccaagcccg aggaatcggc 4440

gtgacggtcg caaaccatcc ggcccggtac aaatcggcgc ggcgctgggt gatgacctgg 4500

tggagaagtt gaaggccgcg caggccgccc agcggcaacg catcgaggca gaagcacgcc 4560

ccggtgaatc gtggcaagcg gccgctgatc gaatccgcaa agaatcccgg caaccgccgg 4620

cagccggtgc gccgtcgatt aggaagccgc ccaagggcga cgagcaacca gattttttcg 4680

ttccgatgct ctatgacgtg ggcacccgcg atagtcgcag catcatggac gtggccgttt 4740

tccgtctgtc gaagcgtgac cgacgagctg gcgaggtgat ccgctacgag cttccagacg 4800

ggcacgtaga ggtttccgca gggccggccg gcatggccag tgtgtgggat tacgacctgg 4860

tactgatggc ggtttcccat ctaaccgaat ccatgaaccg ataccgggaa gggaagggag 4920

acaagcccgg ccgcgtgttc cgtccacacg ttgcggacgt actcaagttc tgccggcgag 4980

ccgatggcgg aaagcagaaa gacgacctgg tagaaacctg cattcggtta aacaccacgc 5040

acgttgccat gcagcgtacg aagaaggcca agaacggccg cctggtgacg gtatccgagg 5100

gtgaagcctt gattagccgc tacaagatcg taaagagcga aaccgggcgg ccggagtaca 5160

tcgagatcga gctagctgat tggatgtacc gcgagatcac agaaggcaag aacccggacg 5220

tgctgacggt tcaccccgat tactttttga tcgatcccgg catcggccgt tttctctacc 5280

gcctggcacg ccgcgccgca ggcaaggcag aagccagatg gttgttcaag acgatctacg 5340

aacgcagtgg cagcgccgga gagttcaaga agttctgttt caccgtgcgc aagctgatcg 5400

ggtcaaatga cctgccggag tacgatttga aggaggaggc ggggcaggct ggcccgatcc 5460

tagtcatgcg ctaccgcaac ctgatcgagg gcgaagcatc cgccggttcc taatgtacgg 5520

agcagatgct agggcaaatt gccctagcag gggaaaaagg tcgaaaaggt ctctttcctg 5580

tggatagcac gtacattggg aacccaaagc cgtacattgg gaaccggaac ccgtacattg 5640

ggaacccaaa gccgtacatt gggaaccggt cacacatgta agtgactgat ataaaagaga 5700

aaaaaggcga tttttccgcc taaaactctt taaaacttat taaaactctt aaaacccgcc 5760

tggcctgtgc ataactgtct ggccagcgca cagccgaaga gctgcaaaaa gcgcctaccc 5820

ttcggtcgct gcgctcccta cgccccgccg cttcgcgtcg gcctatcgcg gccgctggcc 5880

gctcaaaaat ggctggccta cggccaggca atctaccagg gcgcggacaa gccgcgccgt 5940

cgccactcga ccgccggcgc ccacatcaag gcaccctgcc tcgcgcgttt cggtgatgac 6000

ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca cagcttgtct gtaagcggat 6060

gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg ttggcgggtg tcggggcgca 6120

gccatgaccc agtcacgtag cgatagcgga gtgtatactg gcttaactat gcggcatcag 6180

agcagattgt actgagagtg caccatatgc ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga 6240

gaaaataccg catcaggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg 6300

ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat 6360

caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta 6420

aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa 6480

atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc 6540

cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt 6600

ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca 6660

gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg 6720

accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat 6780

cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta 6840

cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aaggacagta tttggtatct 6900

gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac 6960

aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa 7020

aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa 7080

actcacgtta agggattttg gtcatgcatg atatatctcc caatttgtgt agggcttatt 7140

atgcacgctt aaaaataata aaagcagact tgacctgata gtttggctgt gagcaattat 7200

gtgcttagtg catctaatcg cttgagttaa cgccggcgaa gcggcgtcgg cttgaacgaa 7260

tttctagcta gacattattt gccgactacc ttggtgatct cgcctttcac gtagtggaca 7320

aattcttcca actgatctgc gcgcgaggcc aagcgatctt cttcttgtcc aagataagcc 7380

tgtctagctt caagtatgac gggctgatac tgggccggca ggcgctccat tgcccagtcg 7440

gcagcgacat ccttcggcgc gattttgccg gttactgcgc tgtaccaaat gcgggacaac 7500

gtaagcacta catttcgctc atcgccagcc cagtcgggcg gcgagttcca tagcgttaag 7560

gtttcattta gcgcctcaaa tagatcctgt tcaggaaccg gatcaaagag ttcctccgcc 7620

gctggaccta ccaaggcaac gctatgttct cttgcttttg tcagcaagat agccagatca 7680

atgtcgatcg tggctggctc gaagatacct gcaagaatgt cattgcgctg ccattctcca 7740

aattgcagtt cgcgcttagc tggataacgc cacggaatga tgtcgtcgtg cacaacaatg 7800

gtgacttcta cagcgcggag aatctcgctc tctccagggg aagccgaagt ttccaaaagg 7860

tcgttgatca aagctcgccg cgttgtttca tcaagcctta cggtcaccgt aaccagcaaa 7920

tcaatatcac tgtgtggctt caggccgcca tccactgcgg agccgtacaa atgtacggcc 7980

agcaacgtcg gttcgagatg gcgctcgatg acgccaacta cctctgatag ttgagtcgat 8040

acttcggcga tcaccgcttc ccccatgatg tttaactttg ttttagggcg actgccctgc 8100

tgcgtaacat cgttgctgct ccataacatc aaacatcgac ccacggcgta acgcgcttgc 8160

tgcttggatg cccgaggcat agactgtacc ccaaaaaaac atgtcataac aagaagccat 8220

gaaaaccgcc actgcgccgt taccaccgct gcgttcggtc aaggttctgg accagttgcg 8280

tgacggcagt tacgctactt gcattacagc ttacgaaccg aacgaggctt atgtccactg 8340

ggttcgtgcc cgaattgatc acaggcagca acgctctgtc atcgttacaa tcaacatgct 8400

accctccgcg agatcatccg tgtttcaaac ccggcagctt agttgccgtt cttccgaata 8460

gcatcggtaa catgagcaaa gtctgccgcc ttacaacggc tctcccgctg acgccgtccc 8520

ggactgatgg gctgcctgta tcgagtggtg attttgtgcc gagctgccgg tcggggagct 8580

gttggctggc tggtggcagg atatattgtg gtgtaaacaa attgacgctt agacaactta 8640

ataacacatt gcggacgttt ttaatgtact gaattaacgc cgaattgaat tatcagcttg 8700

catgccggtc gatctagtaa catatagatg acaccgcgcg cgataattta tcctagtttg 8760

cgcgctatat tttgttttct atcgcgtatt aaatgtataa ttgcgggact ctaatcataa 8820

aaacccatct cataaataac gtcatgcatt acatgttaat tattacatgc ttaacgtaat 8880

tcaacagaaa ttatatgata atcatcgcaa gaccggcaac aggattcaat cttaagaaac 8940

tttattgcca aatgtttgaa cgatctgctt gactctaggg gtcatcagat ttcggtgacg 9000

ggcaggaccg gacggggcgg caccggcagg ctgaagtcca gctgccagaa acccacgtca 9060

tgccagttcc cgtgcttgaa gccggccgcc cgcagcatgc cgcggggggc atatccgagc 9120

gcctcgtgca tgcgcacgct cgggtcgttg ggcagcccga tgacagcgac cacgctcttg 9180

aagccctgtg cctccaggga cttcagcagg tgggtgtaga gcgtggagcc cagtcccgtc 9240

cgctggtggc ggggggagac gtacacggtc gactcggccg tccagtcgta ggcgttgcgt 9300

gccttccagg gacccgcgta ggcgatgccg gcgacctcgc cgtccacctc ggcgacgagc 9360

cagggatagc gctcccgcag acggacgagg tcgtccgtcc actcctgcgg ttcctgcggc 9420

tcggtacgga agttgaccgt gcttgtctcg atgtagtggt tgacgatggt gcagaccgcc 9480

ggcatgtccg cctcggtggc acggcggatg tcggccgggc gtcgttctgg gctcatggta 9540

gatcccctcg atcgagttga gagtgaatat gagactctaa ttggataccg aggggaattt 9600

atggaacgtc agtggagcat ttttgacaag aaatatttgc tagctgatag tgaccttagg 9660

cgacttttga acgcgcaata atggtttctg acgtatgtgc ttagctcatt aaactccaga 9720

aacccgcggc tcagtggctc cttcaacgtt gcggttctgt cagttccaaa cgtaaaacgg 9780

cttgtcccgc gtcatcggcg ggggtcataa cgtgactccc ttaattctca tgtatgataa 9840

ttcgagct 9848

Claims (6)

1.一种大豆威廉姆斯82中小G蛋白基因，其特征在于：所述基因命名为大豆威廉姆斯82NAC膜结合转录因子基因GmRAB7，该基因cDNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.一种含有权利要求1所述大豆威廉姆斯82中小G蛋白基因的植物表达载体，其特征在于：所述植物表达载体命名为表达载体pB2GW7::GmRAB7，该表达载体克隆区域核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

3.权利要求1所述大豆威廉姆斯82中小G蛋白基因在提高植株耐盐中的应用。

4.权利要求2所述表达载体pB2GW7::GmRAB7在提高植株耐盐中的应用。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述植株是大豆或拟南芥。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述大豆是荷豆12。

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