CN110960562A - 抗敏作用的益生菌组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗敏作用的益生菌组合物，其包括：植物乳杆菌，干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC‑N235以及其他可接受的药物或者食品赋形剂。所述干酪乳杆菌为干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC‑N235，所述菌株已于2012年5月10日，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC M 2012157。所述乳杆菌优选为植物乳杆菌LP45。本发明复合菌剂成分确切，安全，尤其是对皮肤瘙痒问题效果显著。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗敏作用的益生菌组合物，属于微生物技术领域。
背景技术
过敏性疾病（变应性疾病）是当前世界性的卫生问题，包括变应性鼻炎、哮喘、特应性皮炎和变应性胃肠炎等。在过去的二三十年里过敏性疾病的发病率在许多国家呈逐年上升趋势，“卫生假说”认为这与社会经济发展、卫生条件逐渐提升有关，而肠道菌群的作用在“卫生假说”中占有重要位置。目前的研究普遍认为肠道菌群的紊乱可能是过敏性疾病发病增加的原因之一，已有人群研究证实某些益生菌可以通过改变肠道菌群结构从而改善特应性皮炎病情并延缓复发，但研究中发现，同一种菌的不同菌株，对免疫***的激活作用差异相当大。
乳酸菌是一类发酵碳水化合物产乳酸的细菌总称，常为革兰阳性，厌氧或兼性厌氧，不产生芽孢。已知乳酸菌进入机体后，通过其免疫调节作用，恢复机体的TH1／TH2细胞平衡，从而实现过敏性疾病的防治作用。现有技术已经发现有多种乳酸菌具有潜在的抗敏效果，但是普遍存在效果不够显著的问题，尤其是对皮肤瘙痒问题无法解决。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗敏作用的益生菌组合物，其调节免疫的效果显著，尤其对缓解过敏引起的皮肤瘙痒效果显著，具有很大的应用潜力。
植物乳杆菌LP45是一株现有技术已知的菌株，已知其对人体健康有多种益处，但是单独使用时其抗敏效果并不明确。
中国专利2012101725644公开过一株干酪乳杆菌LC-N235(Lactobacilluscasei)，所述菌株已于2012年5月10日，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC M2012157。该菌株的已知功能为高产乳酸。本发明所用干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC-N235来自南京工业大学研究人员赠送。
本发明所用植物乳杆菌LP45购自河北一然生物科技有限公司。本发明团队在研究和实践过程中，发现联合口服植物乳杆菌LP45和干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC-N235可以有效增强抗敏作用，尤其是对过敏引起的皮肤瘙痒症状有非常好的缓解作用。
本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。
一种抗敏作用的益生菌组合物，其包括：
植物乳杆菌，干酪乳杆菌以及其他可接受的药物或者食品赋形剂。
所述干酪乳杆菌为干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC-N235，所述菌株已于2012年5月10日，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC M 2012157。
所述乳杆菌优选为植物乳杆菌LP45。
所述复合菌剂可以做成口服液，也可以做成冻干粉，胶囊等。
本发明的优点：
本发明复合菌剂成分确切，安全，可以直接做成口服液，也可以做成冻干粉，胶囊等，食用方便，效果显著，尤其是对皮肤瘙痒问题效果显著，可以长期作为保健服用，作为免疫调节剂具有非常重要的意义和广阔的前景。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
本发明的具体实施例如以下说明。
实施例1
活化菌种：
植物乳杆菌LP45：取一环乳酸菌接种到 MRS 固体培养基中划线，37℃厌氧培养24 h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至 MRS 液体培养基中活化，厌氧培养 成108cfu/ml植物乳杆菌种子液。
干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC-N235：活化菌种方法同植物乳杆菌。最后配置成108cfu/ml干酪乳杆菌LC-N235种子液。
另选一种普通干酪乳杆菌：干酪乳杆菌CGMCC 1.8727，购自中国普通微生物菌种保藏中心。活化菌种方法同植物乳杆菌。最后配置成108cfu/ml普通干酪乳杆菌种子液。
再另行配置乳酸溶液，浓度为30mmol/L。
将70只KM雌性小鼠，体质量18～22 g，随机分为7组（每组10只），各组之间小鼠体重无统计学差异。7组分别为空白对照组、OVA阳性对照组、LP45干预组、LC-N235干预组、LP45+ LC-N235干预组、LP45+乳酸干预组、LP45+普通干酪乳杆菌组，具体如下：
空白对照组及OVA阳性对照组：每只小鼠每次给予0.2ｍＬ生理盐水灌胃；
LP45干预组：每只小鼠每次分别给予0.2ml 108cfu/ml的LP45菌液灌胃；
LC-N235干预组：每只小鼠每次分别给予0.2ml 108cfu/ml的nk1菌液灌胃；
LP45+LC-N235干预组：每只小鼠每次分别给予0.1ml 108cfu/ml的nk1+0.1ml 108cfu/ml的LP45菌液灌胃；
LP45+乳酸干预组：每只小鼠每次分别给予0.1ml 乳酸溶液+0.1ml 108cfu/ml的LP45菌液灌胃；
LP45+普通干酪乳杆菌组：每只小鼠每次分别给予0.1ml 108cfu/ml的普通干酪乳杆菌+0.1ml 108cfu/ml的LP45菌液灌胃。
每天灌胃１次，分别于实验开始后第7ｄ、第14ｄ、第21ｄ对OVA阳性对照组和各菌株干预组小鼠进行腹腔OVA混悬液注射（200ug/ml OVA+20mg/ml AL（OH）3），每只小鼠每次注射0.1ｍＬ配制好的OVA混悬液，空白对照组小鼠不进行腹腔注射。最后１次腹腔OVA注射７ｄ后处死各组。
灌胃前采用尾部动脉法收集小鼠血液。处死各组小鼠后立即采集小鼠血，使用ELISA试剂盒测定试验前后血清总IgE浓度。
统计学处理：使用SPSS16.0,进行统计学分析，计量资料的结果表示为均值±标准差,采用组间t检验。
表1 不同组别小鼠治疗后的lgE的检测
| 试验前IgE（ng /mL） | 试验后IgE（ng /mL） | |
| 空白组 | 3.15±0.42 | 5.31±2.11 |
| 阳性对照组 | 2.64±0.30 | 51.24±8.28 |
| LP45干预组 | N.D | 47.28±11.40<sup>1</sup> |
| 干酪乳杆菌LC-N235干预组 | 1.5±0.41 | 46.23±5.71<sup>1</sup> |
| LP45+ LC-N235干预组 | N.D | 12.74±6.44<sup>2</sup> |
| LP45+乳酸干预组 | 1.98±0.62 | 48.21±8.43<sup>1</sup> |
| LP45+普通干酪干预组 | 1.01±0.71 | 43.28±13.22<sup>1</sup> |
注：t检验,l：P<0.05 (与空白组比较)；2：P<0.05 (和阳性对照组比较)； N.D：notdetect
可见试验前各组小鼠的IgE水平均较低或未检出，实验结束时， OVA阳性对照组、LP45干预组、LC-N235干预组、LP45+乳酸干预组、LP45+普通干酪乳杆菌组的IgE水平明显高于空白组，差异有统计学差异（P<0.05)、LP45+ LC-N235干预组IgE水平较阳性对照组和其他干预组低，差异有统计学差异（P<0.05)。说明单独使用均无IgE的显著下调，联合LP45+ LC-N235使用会显著下调IgE，有明显的抗过敏的作用。
实施例2
活化菌种操作同实施例1。
将70只KM雌性小鼠，体质量18～22 g，随机分为7组（每组10只），各组之间小鼠体重无统计学差异。7组分别为空白对照组、阳性对照组、LP45干预组、LC-N235干预组、LP45+LC-N235干预组、LP45+乳酸干预组、LP45+普通干酪乳杆菌组。具体处理如下：
空白对照组：每只小鼠每次给予0.2ｍＬ生理盐水灌胃；
阳性对照组：给予***（每日剂量为2.5 mg/kg）灌胃；
LP45干预组：每只小鼠每次分别给予0.2ml 108cfu/ml的LP45菌液灌胃；
LC-N235干预组：每只小鼠每次分别给予0.2ml 108cfu/ml的LC-N235菌液灌胃；
LP45+ LC-N235干预组：每只小鼠每次分别给予0.1ml 108cfu/ml的LC-N235+0.1ml108cfu/ml的LP45菌液灌胃；
LP45+乳酸干预组：每只小鼠每次分别给予0.1ml 乳酸溶液+0.1ml 108cfu/ml的LP45菌液灌胃；
LP45+普通干酪乳杆菌组：每只小鼠每次分别给予0.1ml 108cfu/ml的普通干酪乳杆菌+0.1ml 108cfu/ml的LP45菌液灌胃。
每天灌胃１次连续10天，第10天灌胃后1 h，各组动物尾iv 40 mg/kg右旋糖酐40注射液。即刻观察并记录各组小鼠30 min 内出现的瘙痒次数及首次开始瘙痒时间，即瘙痒阈值。
统计学处理同实施例1。
表2 右旋糖酐致不同组别小鼠全身皮肤瘙痒的影响。
| 瘙痒次数 | 瘙痒阈值/s | |
| 空白组 | 30.10±7.63 | 98.32±18.32 |
| 阳性对照组 | 10.04±3.33 | 243.24±22.35 |
| LP45干预组 | 25.77±5.73<sup>2</sup> | 103.85±13.58<sup>2</sup> |
| 干酪乳杆菌LC-N235干预组 | 29.50±8.48<sup>2</sup> | 123.29±15.88<sup>2</sup> |
| LP45+ LC-N235干预组 | 12.51±3.41<sup>1</sup> | 222.74±22.94<sup>1</sup> |
| LP45+乳酸干预组 | 28.24±5.23<sup>2</sup> | 107.85±20.57<sup>2</sup> |
| LP45+普通干酪干预组 | 26.24±5.23<sup>2</sup> | 102.22±17.50<sup>2</sup> |
注：t检验,l：P<0.05 (与空白组比较)；2：P<0.05 (和阳性对照组比较)
观察瘙痒次数和瘙痒阈值发现，LP45干预组、LC-N235干预组相、LP45+乳酸干预组、LP45+普通干酪乳杆菌组对于空白组无明显统计学差异，而相对于阳性对照组有明显统计学差异（P<0.05)，而LP45+ LC-N235干预组相对于其他干预组和空白组均有统计学差异（P<0.05)。说明联合LP45+ LC-N235使用有拮抗右旋糖酐致不同组别小鼠全身皮肤瘙痒的作用，而单独使用效果欠佳，两者具有显著的协同作用。
综上所述，本发明团队在研究和实践过程中，发现联合口服植物乳杆菌LP45和干酪乳杆菌LC-N235可以有效增强抗敏作用，尤其是对过敏引起的皮肤瘙痒症状有非常好的缓解作用，而使用其他普通干酪乳杆菌如实施例列出的干酪乳杆菌CGMCC 18727则没有这种效果。目前尚不清楚该干酪乳杆菌LC-N235如何增强植物乳杆菌的口服抗敏效果，推测是通过对肠道一系列生理生化的影响来起到协同作用的。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
Claims (6)
1.一种抗敏作用的益生菌组合物，其包括：
植物乳杆菌，干酪乳杆菌LC-N235以及其他可接受的药物或者食品赋形剂。
2.权利要求1所述的组合物，其特征在于：
所述干酪乳杆菌为干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC-N235，所述菌株已于2012年5月10日，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC M 2012157，
所述乳杆菌为植物乳杆菌LP45。
3.权利要求1或2所述的组合物，其特征在于：
所述复合菌剂做成口服液。
4.权利要求1或2所述的组合物，其特征在于：
所述复合菌剂做成冻干粉。
5.权利要求1或2所述的组合物，其特征在于：
所述复合菌剂做成胶囊。
6.权利要求1-5任一项所述的益生菌组合物在制备药品上的应用。
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