CN110946876A - 间充质干细胞外泌体制剂在治疗斑秃中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种间充质干细胞外泌体制剂在治疗斑秃中的应用，该外泌体制剂包括人脐带间充质干细胞分泌的外泌体和PBS，人脐带间充质干细胞分泌的外泌体制备方法包括从足月顺产健康胎儿的脐带分离出的脐带间充质干细胞至于37℃下培养至P3；当细胞融合至60％‑80％时，在更换无胎牛血清的DMEM/HAM’SF‑12培养基中，饥饿培养48h收集培养基；将收集的培养基离心去除细胞和细胞碎片，而后用超速离心法提取外泌体；用PBS重悬沉淀物保存于‑80℃,即得到脐带间充质干细胞源外泌体制剂，UC‑MSCs‑Exo。本发明UC‑MSCs制备成本低廉、来源丰富、采集方便、对人体没有创伤性操作，且UC‑MSCs‑Exo成份简单、细胞因子稳定不易变性，可改善斑秃处皮肤组织结构，修复或重建受损的毛囊。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及间充质干细胞制备外泌体技术，尤其是一种间充质干细胞外泌体制剂在治疗斑秃中的应用。
背景技术
脱发，已经成为现如今一种普遍存在的“现代病”。虽然不属于严重的疾病，但是给人们的生活带来极大的烦恼和不便。脱发的诱因和脱发种类各不相同，而且有相当一部分脱发的原因尚未清楚。斑秃，是一种自身免疫性非瘢痕斑状脱发。别称圆形脱发，圆秃，鬼剃头。若头发全部脱落称之为全秃，全身毛发均脱落则称之为普秃，病区皮肤除无毛发外不存在其他异常。在对斑秃病理检查时可见毛囊减少，在毛囊周围有淋巴细胞浸润，且本病有时合并其他自身免疫性疾病。尽管目前技术与诊断器械的发展，对斑秃的了解和认识不断增多，支持或辅助的治疗措施也层出不穷，但临床上仍然需要更有效、更全面的治疗手段来治疗斑秃。
间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。脐带间充质干细胞是干细胞中优势较明显的一种，具有一些特殊的优点：具有更强的增殖、分化能力、成瘤率低、异体移植后发生移植物抗宿主病的危险性较低，且不涉及社会、道德伦理等方面的更多争议。但是间充质干细胞作用于头皮脱发疾病的限制较多，因此研究人员把目光投向了其分泌物。现已证明，脐带间充质干细胞分泌物中含有大量的细胞因子和蛋白等。其中分泌因子包括血小板源性生长因子(PDGF)、血管内皮内皮生长因子(VEGF)、***(KGF)、肝细胞生长因子(HGF)以及转化生长因子(TGF)等，而这些因子在毛发和皮肤中的应用已经得到各国科学家的普遍认可。但是分泌因子的含量低、性质不稳定和不易于保存等因素一直限制其应用。
外泌体(exosome)是一种直径约30～150nm的膜性囊泡。外泌体存在于细胞培养液和体液中，主要包括唾液、胸膜液、脑脊液、腹水、尿液、血浆、血清等所有体液中。外泌体中包含但不固定表达多种生物分子，如mRNA、miRNA、mtDNA、蛋白质、脂质等。外泌体有很好的生物相容性、无毒、无免疫反应的特性。并且，通过携带生物分子影响靶细胞-毛囊细胞的行为，如增殖、分化、凋亡、恢复、重建等。本发明利用脐带间充质干细胞分泌的外泌体生产外泌体制剂，可以有效的治疗头皮脱发疾病，代替传统生发剂，在治疗斑秃中具有较好的应用效果。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种可以治疗斑秃或脱发的间充质干细胞外泌体制剂，代替传统中药或者西药生发剂，使用时有效避免头皮受到二次伤害和激素抵抗。
本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：
一种间充质干细胞外泌体制剂在治疗斑秃中的应用，所述的间充质干细胞外泌体制剂包括人脐带间充质干细胞分泌的外泌体和PBS，所述人脐带间充质干细胞分泌的外泌体制备方法具体步骤如下：
(1)从足月顺产健康胎儿的脐带分离出的脐带间充质干细胞至于37℃下培养至P3；
(2)当细胞融合至60％-80％时，在更换无胎牛血清的DMEM/HAM’SF-12培养基中，饥饿培养48h收集培养基；
(3)将收集的培养基离心去除细胞和细胞碎片，而后用超速离心法提取外泌体；
(4)用PBS重悬沉淀物保存于-80℃,即得到脐带间充质干细胞源外泌体制剂，UC-MSCs-Exo。
而且，所述步骤(4)中保存于-80℃的PBS重悬沉淀物中的外泌体制剂浓度为10mg/mL。
而且，将所制备的脐带间充质干细胞源外泌体制剂应用在治疗斑秃或脱发中，具体方法步骤如下：
(1)C3H/HeJNju鼠斑秃模型建立和检验；
(2)UC-MSCs-Exo对鼠斑秃模型的治疗；
(3)对斑秃的治疗进行检测。
而且，所述步骤(2)中UCMSCs-Exo浓度为100ug/mL，治疗方式为表面涂抹，每3天/次，连续治疗6周。
而且，所述步骤(3)对斑秃的治疗进行检测方法包括表面观察和皮肤病理切片观察。
本发明的优点和积极效果是：
1、本发明提供的间充质干细胞外泌体制剂在斑秃中的应用，UC-MSCs-Exo来自于足月顺产的健康脐带分离的间充质干细胞，UC-MSCs制备成本低廉、来源丰富、采集方便、对人体没有创伤性操作。
2、本发明的脐带间充质干细胞源外泌体分离方法简单、通用、可规模化生产。脐带间充质干细胞源外泌体制剂成份简单、细胞因子稳定不易变性。即可结合医疗器械进行外敷，也可以体内注射。
3、本发明提供的脐带间充质干细胞源外泌体制剂(UC-MSCs-Exo),可改善斑秃处皮肤组织结构，修复或重建受损的毛囊。经过动物实验验证小鼠的脱发部位已经长出了新的毛发，并且新生毛发与原毛发在质地上无任何差别。
附图说明
图1为第三代(P3)脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的光镜图；
图2为***UC-MSCs培养饥饿48h后培养基中KGF的含量结果图；
图3为脐带间充质干细胞源外泌体的分离及表征结果图，其中A为外泌体的透射电镜(TEM)图，B为外泌体粒径图；
图4为UC-MSCs-Exo对斑秃模型治疗的结果图，其中A为斑秃造模成功及分组情况图，B为治疗6W后的实验结果图；
图5为UC-MSCs-Exo对斑秃模型治疗处皮肤HE染色图。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的分离培养及鉴定
在无菌条件下，取足月妊娠顺产健康胎儿的脐带，以盐水充分冲洗并去除脐带组织的外模和脐带动静脉，随后将剩余组织剪成直径约2-3mm大小的块状。将小块均匀涂布于培养瓶底部，37℃干燥1h，而后缓慢的加入适量的DMEM/HAM’SF-12完全培养基。
培养5-7天时采用半量换液法进行换液，一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用，一方面补充细胞生长所需营养。待细胞融合达70-80％后，用0.25％胰蛋白酶消化，进行传代培养。待UC-MSCs传至3代融合度在60％时，光学显微镜下观察并拍照鉴定干细胞纯度，结果见图1。
UC-MSCs培养基中KGF的含量检测
将融合度达到50-60％左右的***UC-MSCs更换无血清的DMEM/HAM’SF-12培养基，继续培养48-72h。收集培养基，利用分子量为3.5K的超滤管对培养基进行低速离心、浓缩。再用ELISA试剂盒对浓缩后的培养基进行KGF含量测定，测定组别共分为4组，分别是：1、培养基，2、培养基加蛋白酶K，3、培养基加0.3％浓度的triton 100加蛋白酶K，4、培养基加0.3％浓度的triton 100。其中蛋白酶K可以分解蛋白KGF，triton100为透膜物质。通过对图2的分析的，KGF可能以被包裹的形式存在于浓缩的培养基中。通过对相关资料的查询，猜测蛋白KGF极大可能是被外泌体包裹。所以接下来对脐带间充质干细胞外泌体进行分离鉴定。
脐带间充质干细胞外泌体制剂的制备
本发明通过浓缩和超速离心结合分离脐带间充质干细胞源外泌体。首先使用3.5K超滤管对收集的培养基进行10倍浓缩，而后按照超离心步骤分离外泌体，最后用PBS重悬制备成浓度为10mg/ml的脐带间充质干细胞外泌体制剂(UC-MSCs-Exo)。利用透射电镜和动态光散射(Dynamic Light Scattering，DLS)测定其形态和大小。在透射电镜下观察，间充质干细胞源外泌体呈椭圆形，直径约50-100nm，有完整的包膜结构，内含低密度物质，见图3。
UC-MSCs-Exo对斑秃的治疗效果检测
本发明中使用受试小鼠为C3H/HeJNju，约20g，斑秃模型建立是采用公认的涂抹咪唑莫特法。
UC-MSCs-Exo对斑秃模型治疗：将斑秃模型鼠随机分成2组，一组使用PBS涂抹斑秃处，一组使用等体积的UC-MSCs-Exo(浓度为100ug/mL)涂抹斑秃处，3天/次连续治疗6W。
治疗效果检测：UC-MSCs-Exo对斑秃模型的治疗效果检测，主要是:毛发再生情况观察、显微观察斑秃处的病理切片。为了观察和确定斑秃处的毛发再生情况，在每次涂抹UC-MSCs-Exo之前对各个组的受试鼠进行拍照、存档、分析。如图4所示，在UC-MSCs-Exo涂抹治疗斑秃处毛发明显多于涂抹PBS处。待治疗6周后，对小鼠进行脱脊柱处死，迅速收集血液和治疗处的皮肤，经过PFA固定、脱水、石蜡包埋、切片以及HE染色后，通过显微镜对斑秃治疗后的PBS和UC-MSCs-Exo进行观察、拍照、比对。如图5所示，UC-MSCs-Exo治疗组的HE染色中出现了明显的毛囊的结构，说明了涂抹了UC-MSCs-Exo恢复或重建了斑秃处的毛囊从而促进了毛发再生。
上述实验说明，脐带间充质干细胞分泌的外泌体能促进受损毛囊的恢复或重建，可为临床上斑秃、脂溢性脱发等头皮脱发疾病提供一种新的治疗方法。
尽管为说明目的公开了本发明的实施例和附图，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例和附图所公开的内容。
Claims (5)
1.一种间充质干细胞外泌体制剂在治疗斑秃中的应用，所述的间充质干细胞外泌体制剂包括人脐带间充质干细胞分泌的外泌体和PBS，其特征在于：所述人脐带间充质干细胞分泌的外泌体制备方法具体步骤如下：
(1)从足月顺产健康胎儿的脐带分离出的脐带间充质干细胞至于37℃下培养至P3；
(2)当细胞融合至60％-80％时，在更换无胎牛血清的DMEM/HAM’SF-12培养基中，饥饿培养48h收集培养基；
(3)将收集的培养基离心去除细胞和细胞碎片，而后用超速离心法提取外泌体；
(4)用PBS重悬沉淀物保存于-80℃,即得到脐带间充质干细胞源外泌体制剂，UC-MSCs-Exo。
2.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞外泌体制剂在治疗斑秃中的应用，其特征在于：所述步骤(4)中保存于-80℃的PBS重悬沉淀物中的外泌体制剂浓度为10mg/mL。
3.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞外泌体制剂在治疗斑秃中的应用，其特征在于：将所制备的脐带间充质干细胞源外泌体制剂应用在治疗斑秃或脱发中，具体方法步骤如下：
(1)C3H/HeJNju鼠斑秃模型建立和检验；
(2)UC-MSCs-Exo对鼠斑秃模型的治疗；
(3)对斑秃的治疗进行检测。
4.根据权利要求3所述的一种间充质干细胞外泌体制剂在治疗斑秃中的应用，其特征在于：所述步骤(2)中UCMSCs-Exo浓度为100ug/mL，治疗方式为表面涂抹，每3天/次，连续治疗6周。
5.根据权利要求3所述的一种间充质干细胞外泌体制剂在治疗斑秃中的应用，其特征在于：所述步骤(3)对斑秃的治疗进行检测方法包括表面观察和皮肤病理切片观察。
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Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111821318A (zh) * | 2020-08-28 | 2020-10-27 | 上海圣特佳健康科技发展有限公司 | 用于治疗或预防白发的外泌体及其用途和使用方法 |
| CN111956787A (zh) * | 2020-07-06 | 2020-11-20 | 沃森克里克（北京）生物科技有限公司 | 一种毛发增长剂和育毛剂及其应用 |
| CN112190536A (zh) * | 2020-11-13 | 2021-01-08 | 深圳玄鸟生物科技有限公司 | 一种生发防脱的外泌体中药洗发乳及其制备方法 |
| CN112618572A (zh) * | 2020-10-16 | 2021-04-09 | 中科细胞科技(广州)有限公司 | 一种治疗秃发的组合物 |
| CN113388575A (zh) * | 2021-06-11 | 2021-09-14 | 杭州露源生物科技有限公司 | 一种皮肤损伤修复用间充质干细胞外泌体的制备方法 |
| CN114231483A (zh) * | 2021-12-21 | 2022-03-25 | 广州市新甡命科技有限公司 | 一种干细胞外泌体及其在促进生发中的应用 |
| CN114807235A (zh) * | 2021-01-18 | 2022-07-29 | 苏州恒康生命科学有限公司 | 一种永生化间充质干细胞的构建方法及制备外泌体的方法 |
| CN115227721A (zh) * | 2022-08-24 | 2022-10-25 | 兰州大学第一医院 | 一种干细胞外泌体在制备治疗脱发产品中的应用 |
| CN115814045A (zh) * | 2022-11-03 | 2023-03-21 | 山东新创生物科技有限公司 | 一种用于改善脱发的外泌体复合制剂及其制备方法与应用 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20170121685A1 (en) * | 2015-11-02 | 2017-05-04 | Tigenix S.A.U. | Mesenchymal stem cell-derived exosomes and their uses |
| CN108096279A (zh) * | 2018-01-19 | 2018-06-01 | 刘馨 | 一种人间充质干细胞分泌活性成分生发产品的制备方法 |
| CN108721200A (zh) * | 2018-06-07 | 2018-11-02 | 武汉赛云博生物科技有限公司 | 一种人间充质干细胞来源的外泌体美容制剂的制备方法及应用 |
| US20190062710A1 (en) * | 2016-03-31 | 2019-02-28 | Sanbio, Inc. | Medium, methods, cells and secreted factors for stem cell culture and therapy |
| CN109432127A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-03-08 | 海门生原干细胞科技有限公司 | 间充质干细胞外泌体在制备促毛发再生的药物制剂中的应用 |
| CN110302223A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-10-08 | 广州赛琅生物技术有限公司 | 一种用于修复毛囊的育发液制剂及其制备方法 |
-
2019
- 2019-10-28 CN CN201911028971.6A patent/CN110946876A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20170121685A1 (en) * | 2015-11-02 | 2017-05-04 | Tigenix S.A.U. | Mesenchymal stem cell-derived exosomes and their uses |
| US20190062710A1 (en) * | 2016-03-31 | 2019-02-28 | Sanbio, Inc. | Medium, methods, cells and secreted factors for stem cell culture and therapy |
| CN108096279A (zh) * | 2018-01-19 | 2018-06-01 | 刘馨 | 一种人间充质干细胞分泌活性成分生发产品的制备方法 |
| CN108721200A (zh) * | 2018-06-07 | 2018-11-02 | 武汉赛云博生物科技有限公司 | 一种人间充质干细胞来源的外泌体美容制剂的制备方法及应用 |
| CN109432127A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-03-08 | 海门生原干细胞科技有限公司 | 间充质干细胞外泌体在制备促毛发再生的药物制剂中的应用 |
| CN110302223A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-10-08 | 广州赛琅生物技术有限公司 | 一种用于修复毛囊的育发液制剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 张立等: "间充质干细胞在皮肤损伤修复中的作用研究", 《中国临床医学》 * |
| 杨前等: "干细胞在美容医疗方面的应用研究", 《华南国防医学杂志》 * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111956787A (zh) * | 2020-07-06 | 2020-11-20 | 沃森克里克（北京）生物科技有限公司 | 一种毛发增长剂和育毛剂及其应用 |
| CN111821318A (zh) * | 2020-08-28 | 2020-10-27 | 上海圣特佳健康科技发展有限公司 | 用于治疗或预防白发的外泌体及其用途和使用方法 |
| CN112618572A (zh) * | 2020-10-16 | 2021-04-09 | 中科细胞科技(广州)有限公司 | 一种治疗秃发的组合物 |
| CN112190536A (zh) * | 2020-11-13 | 2021-01-08 | 深圳玄鸟生物科技有限公司 | 一种生发防脱的外泌体中药洗发乳及其制备方法 |
| CN114807235A (zh) * | 2021-01-18 | 2022-07-29 | 苏州恒康生命科学有限公司 | 一种永生化间充质干细胞的构建方法及制备外泌体的方法 |
| CN114807235B (zh) * | 2021-01-18 | 2023-08-18 | 苏州恒康生命科学有限公司 | 一种永生化间充质干细胞的构建方法及制备外泌体的方法 |
| CN113388575A (zh) * | 2021-06-11 | 2021-09-14 | 杭州露源生物科技有限公司 | 一种皮肤损伤修复用间充质干细胞外泌体的制备方法 |
| CN114231483A (zh) * | 2021-12-21 | 2022-03-25 | 广州市新甡命科技有限公司 | 一种干细胞外泌体及其在促进生发中的应用 |
| CN115227721A (zh) * | 2022-08-24 | 2022-10-25 | 兰州大学第一医院 | 一种干细胞外泌体在制备治疗脱发产品中的应用 |
| CN115814045A (zh) * | 2022-11-03 | 2023-03-21 | 山东新创生物科技有限公司 | 一种用于改善脱发的外泌体复合制剂及其制备方法与应用 |
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