CN110938518A - 一种用于微生物酶活测试的过滤装置及方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用于微生物酶活测试的过滤装置及方法，该装置包括用于提供待过滤液体的供液机构、用于收集滤液的收集机构，供液机构包括上连接台，收集机构包括收集容器，收集容器上设有用于放置滤膜的下连接台，上连接台、下连接台可拆卸连接，上连接台、下连接台上贯穿设有至少一个过滤通道，供液机构中的待过滤液体穿过过滤通道以及滤膜，进入收集机构的集液腔，滤膜上富集截留物。本发明的装置通过过滤的方式富集细胞，所需过滤的细胞液用量显著减少，单次过滤样品的数量显著增多，进而使得后续酶活测试时所需的底物显著减少，该装置及方法实现高通量过滤，操作简单，造价低廉，便于推广应用。

Description

一种用于微生物酶活测试的过滤装置及方法

技术领域

本发明涉及微生物酶活测试技术领域，特别是涉及一种用于微生物酶活测试的过滤装置及方法。

背景技术

卤代有机污染物具有持久性强、难生物降解的特点，主要包括全氟或部分氟代化合物(PFCs)、氯代有机物(COCs)和溴代有机物(BOCs)。虽然有机卤代物常作为原材料、中间体、溶剂等广泛应用于有机合成中，在人类生产和生活中作用显著。然而，许多有机卤代物随意或不可避免地排放到环境中，对臭氧层、生态安全及人类健康造成严重危害。

卤代有机物的大量使用和排放使得水体中卤代物污染日益严重，威胁着生态安全与人体健康。并且，卤代有机污染物具有环境持久性、难生物降解、生物积累性、高毒性和长距离迁移能力等特点，在土壤和大气等野外环境中也均有分布，因此，如何有效解决卤代污染物已成为环境领域关注的焦点。目前，卤代有机污染物污染土壤与地下水修复方法主要有物理修复、化学修复和微生物修复。厌氧微生物脱卤过程由于不产生二次污染、成本较低、相对物理、化学脱卤方法具有较高环境友好性等优点，成为目前环境卤代有机物污染最具潜力的原位修复方法之一。利用厌氧微生物进行脱卤的过程本质就是由脱卤酶催化的酶促反应，因此需进行大量实验测试脱卤酶活性。

微生物体外酶活实验是研究微生物酶催化反应的手段之一，能够在短时间内测试微生物酶对底物的催化活性，研究催化底物转化的特异性酶的功能特性；通过调整反应条件，可以研究微生物底物利用机理。以现有的微生物细胞体外酶活实验为例，如图1所示，具体是将1升的细胞菌液分装到离心管离心(10000×g，5分钟，4℃)，撇除上清液，使每管离心管余3mL上清液，混匀沉淀物，进行第二次离心(15000×g，5分钟，4℃)，撇除上清液，如此循环(通常要离心二十多次，耗时约1-2h，或者更久)，直至将1升细胞菌液全部用完，最后，将各离心管的细胞液合并，最终得到体积约为0.1mL，酶浓度为100-150μg/mL的细胞菌液，再与4mL的反应液反应，进行酶活性测试。该方法操作繁琐、离心收集的细胞有限、耗时长、通量低、测试反应体系大以及耗材用量大，因此需研发一种操作便捷，造价低廉且细胞回收率高的酶活测试技术，以便进一步研究微生物酶促反应。

现有的真空抽滤装置结构设计不合理，无法用于微生物体外酶活实验中的细胞分离。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种用于微生物酶活测试的过滤装置及方法，本发明克服了现有微生物脱卤实验中，酶活测试的操作繁琐、离心收集细胞的回收率低、耗时长、通量低、测试反应体系大以及耗材用量大等缺陷，尤其针对微生物生长量极低的脱卤菌，本发明利用抽吸膜过滤的方式，把富集了细胞的各玻璃纤维膜分别与微量底物(0.4mL)反应，可实现极少量(每管≤10mL)细胞液同时快速富集不同微生物胞外酶，以测试在不同底物下的酶活性。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种用于微生物酶活测试的过滤装置，包括用于提供待过滤液体的供液机构、用于收集滤液的收集机构，所述供液机构包括上连接台，所述收集机构包括收集容器，所述收集容器上设有用于放置滤膜的下连接台，所述上连接台、下连接台可拆卸连接，所述上连接台、下连接台上贯穿设有至少一个过滤通道，所述供液机构中的待过滤液体穿过所述过滤通道以及所述滤膜，进入所述收集机构的集液腔，所述滤膜上富集截留物。过滤通道的数量可以根据需要而设计，相对于现有的离心机离心分离法，其每次离心时所能放置的离心管的数量有限，本发明的过滤装置克服了上述缺陷，具有高通量过滤的特点，每次过滤的样品数量远大于离心机。

可选地，所述上连接台上设有位于所述滤膜上方的供液腔，所述下连接台上设有位于所述滤膜下方的下通道，所述供液腔、下通道组合形成所述过滤通道。

可选地，所述下连接台上设有位于所述滤膜外侧的凹槽，所述上连接台上设有可***所述凹槽的凸缘。

可选地，所述凹槽内设有第一密封圈，所述凸缘***所述凹槽，将所述第一密封圈压紧。

可选地，还包括供液容器，所述供液容器上设有出液部，所述出液部***所示供液腔中。

可选地，还包括第二密封圈，所述上连接台上设有位于供液腔下部的限位台，所述限位台将所述第二密封圈压紧在所述滤膜的边缘。

可选地，所述下连接台上设有至少一个用于支撑滤膜的支撑台，所述支撑台设置在所述下通道的内壁。

可选地，所述上连接台与所述下连接台之间的连接方式为粘接或卡合连接。

可选地，所述收集容器连通有负压装置。

可选地，还包括卡合件，所述下连接台的边缘设有向下的下凸台，所述下凸台与下连接台的侧壁之间形成下卡槽，所述上连接台的边缘设有向上的上凸台，所述上凸台与所述上连接台的侧壁之间形成上卡槽，所述上连接台、下连接台贴合后，所述上凸台、下凸台组合形成的形状与所述卡合件的凹槽相匹配，所述卡合件从所述上凸台、下凸台的侧面***，将所述上凸台、下凸台锁紧。

本发明还提供一种微生物酶活测试方法，包括以下步骤：

(1)制备含有待检测微生物的细胞液，采用上述过滤装置抽滤，得到富集有待检测细胞的滤膜；

(2)提供含有底物的反应液，将所述滤膜置于所述反应液中，反应结束后，检测产物与底物的比值，计算得到脱卤效率。

可选地，所述步骤(1)中，每个过滤通道所抽滤的细胞液体积为2-10mL，具体可以为2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL、8mL、9mL、10mL等，优选为3-9mL，还优选为3-7mL，还优选为4-7mL，还优选为4-6mL，还优选为5mL。

可选地，所述步骤(1)中，细胞液抽滤所需时间为10-60s，具体可以为10s、20s、30s、40s、50s、60s等，优选为20-60s，还优选为20-50s，还优选为20-40s，还优选为30s。

可选地，所述步骤(2)中，计算产物与底物的物质峰面积之比，得到脱卤效率。

可选地，所述步骤(2)中，通过气相色谱电子捕获检测器检测产物及底物，计算得到物质峰面积之比，即为脱卤效率。

可选地，所述步骤(2)中，所述底物选自多氯联苯-180，所述产物为多氯联苯-153。

可选地，所述步骤(2)中，所述含有底物的水溶液中，底物浓度为0.5mg/L。

可选地，所述步骤(2)中，将每个滤膜独立置于0.4mL所述含有底物的水溶液中反应。

本发明还提供上述装置在微生物酶活测试、细胞收集、细胞酶收集中的应用，本装置也可用于收集滤液，优选用于微生物酶活测试。

本发明具有以下有益效果：

本发明针对现有细胞富集装置及方法效率低，操作繁琐，耗材消耗量大等不足，提供一种小型的高效富集细胞的装置，本发明的装置通过过滤的方式富集细胞，所需过滤的细胞液用量显著减少，相比于现有离心机，本装置单次过滤样品的数量显著增多，进而使得后续酶活测试时所需的底物显著减少，该装置及方法实现高通量过滤，操作简单、快速，造价低廉，显著提高富集效率，显著减少过滤所需的细胞液体积，进一步减少后续酶活测试时所需的反应液体积，便于推广应用。

附图说明

图1显示为现有的微生物细胞体外酶活实验流程图。

图2显示为本发明实施例的过滤装置结构示意图。

图3显示为图2中上连接台的横截面结构示意图。

图4显示为图2中下连接台的横截面结构示意图。

图5显示为本发明另一实施例的过滤装置待合并结构示意图。

图6显示为图5中合并后的过滤装置结构示意图。

图7显示为采用图6中过滤装置进行过滤的流程示意图。

图8显示为应用本发明的酶活测试装置及方法与现有技术富集细胞后脱卤酶pcbA1反应效率的对比图。

编号说明：

1—收集机构

2—收集容器

21—集液腔

3—通气孔

4—第一密封圈

5—凹槽

6—滤膜

7—供液机构

8—凸缘

9—第二密封圈

10—供液腔

11—供液容器

110—出液部

12—下通道

13—支撑台

14—下连接台

15—上连接台

16—下卡台

161—下卡槽

17—上卡台

171—上卡槽

18—卡合件

19—限位台

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

如图2-图4所示，提供一种用于微生物酶活测试的过滤装置，包括用于提供待过滤液体的供液机构7、用于收集滤液的收集机构1，供液机构7包括上连接台15，收集机构1包括收集容器2，收集容器2上设有用于放置滤膜6的下连接台14，上连接台15、下连接台14可拆卸连接，可拆卸连接结构一方面便于过滤时组装成密闭结构，另一方面，便于过滤结束后，将上连接台15、下连接台14分离，从下连接台14上取出滤膜6，进行微生物酶活测试，上连接台15、下连接台14上贯穿设有至少一个过滤通道，过滤通道的开设数量可以为任意个数，如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个等，每个滤膜对应一个过滤通道，过滤通道的开设数量根据实验的需要而定，供液机构7中的待过滤液体穿过过滤通道以及滤膜6，进入收集机构1的集液腔21，滤膜6上富集截留物，当过滤的对象为细胞液时，滤膜6上富集细胞，即为待测物。

在一实施例中，上连接台15上设有位于滤膜6上方的供液腔10，下连接台14上设有位于滤膜6下方的下通道12，在一些实施例中，下通道12的直径可以为10-12mm，具体可以为10mm、11mm、12mm等，优选为11mm，供液腔10、下通道12组合形成过滤通道，供液腔10位于滤膜6上方，在真空泵的作用下，供液容器11中的液体通过供液腔10，经滤膜6过滤之后，过滤液进入集液腔21，滤膜6上富集截留物。在一些实施例中，供液腔10、下通道12的内径可以保持一致，下通道12位于供液腔10的正下方，使得细胞液被充分过滤。

在一实施例中，下连接台14上设有位于滤膜6外侧的凹槽5，上连接台15上设有可***凹槽5的凸缘8，凹槽5内设有第一密封圈4，凸缘8***凹槽5，将第一密封圈4压紧，使得过滤时滤膜6上的细胞液被充分分离，细胞被尽量多地截留在滤膜上，进而提高脱卤效率。

在一实施例中，还包括供液容器11，供液容器11的底部设有出液部110，出液部110***供液腔10中，使得供液容器11中的液体顺利流入供液腔10中，从而进行后续的过滤步骤。供液容器11具体可以为现有的注射器，底部的注射嘴即为出液部110，通过活塞柄吸取所需量的细胞液后，将底部的注射嘴***供液腔10中，启动真空泵，即可进行过滤。

在一实施例中，还包括第二密封圈9，上连接台15上设有位于供液腔10下部的限位台19，限位台19将第二密封圈9压紧在滤膜6的边缘，有效提升装置的密闭性，提高过滤效率。

在一些实施例中，供液腔10的直径为4-6mm，具体可以为4mm、4.5mm、5mm、5.5mm、6mm等。

在一实施例中，下连接台14上设有用于支撑滤膜6的支撑台13，支撑台13具体可以为环状，支撑台13的中部为镂空状，使得滤液可以从滤膜6进入集液腔21。

在一实施例中，支撑台13设置在下通道12的内壁，支撑台13的支撑面可以略低于下连接台14的上表面，便于放置滤膜6，对滤膜6起到良好的支撑作用，同时便于第二密封圈9压紧至滤膜6的边缘，避免漏气，使得滤液经过下通道12顺利流入集液腔21中。

如图2所示，供液腔10可以呈柱形，其内径略大于出液部110的外径，供液容器11的出液部110***供液腔10中，开启真空泵，真空泵通过通气孔3抽走集液腔21以及与其连通的供液腔10中的空气，使得供液容器11中的液体向滤膜6流动，实现过滤。

如在一实施例中，图5和图6所示，供液腔10的底部可以呈倒锥形，将待过滤液体注入供液腔10后，开启真空泵，在真空作用下，供液腔10中的液体向滤膜6流动，实现过滤。

在一实施例中，供液机构7与收集机构1之间的连接方式为粘接，具体地，供液机构7的上连接台15与收集机构1的下连接台14可以通过胶水粘接在一起，形成密闭结构，便于充分过滤细胞液，过滤结束后，撬开连接处，即可将上连接台15从下连接台14上拆下，然后取出滤膜，进行后续的酶活测试。

在另一实施例中，供液机构7与收集机构1之间的连接方式为卡合连接，具体地，如图5和图6所示，下连接台14的边缘设有向下的下凸台16，下凸台16与下连接台14的侧壁之间形成下卡槽161，上连接台15的的边缘设有向上的上凸台17，上凸台17与上连接台15的侧壁之间形成上卡槽171，上凸台17、下凸台16通过卡合件18卡合连接，收集容器2的左右两侧均设置上凸台17、下凸台16，当上连接台15、下连接台14贴合后，上凸台17、下凸台16组合形成T型，卡合件18具有T型凹槽，卡合件18的卡耳横向***上卡槽171、下卡槽161中，将上凸台17、下凸台16锁紧，进而使得上连接台15、下连接台14被锁紧。上凸台17、下凸台16组合形成的形状也可以是其他的形状，卡合件18的形状与其匹配，使得卡合件18可以从侧面***，将上凸台17、下凸台16顺利锁紧。

收集容器2上设有通气孔3，通气孔3连接至负压装置，负压装置具体可以为真空泵。通气孔3通常高于收集容器2内的最高液面，以避免液体被吸入管道中。

真空泵可以从市场上购买得到，具体可以为江苏丹阳丹昊机电设备有限公司，型号为OL90A。该装置的安装过程如下：在下连接台14的凹槽5上依次放置第一密封圈4，在支撑台13上放置滤膜6，在滤膜6上放置第二密封圈9，将上连接台15扣合在下连接台14上，使得凸缘8卡入凹槽5中，用外置卡合件18固定整个装置，使得上连接台15进一步压紧在下连接台14上，负压装置的通气孔3连接真空泵，将3-5mL细胞液倒入细胞液容器，即供液腔10中，进行抽滤，滤液流至滤液收集容器的集液腔21，细胞被截留在滤膜6上。将外置卡合件18取出，使得上连接台15、下连接台14分离，取出滤膜6，将富集菌的滤膜6放入反应容器内，加入反应液，在合适的酶活测试环境内进行酶催化反应。

上述过滤装置的材质具体可以为PLA，即聚乳酸，聚乳酸的热稳定性好，加工温度170～230℃，有较好的抗溶剂性，可用多种方式进行加工，如挤压、纺丝、双轴拉伸、注射吹塑等。由聚乳酸制成的产品除能生物降解外，生物相容性、光泽度、透明性、手感和耐热性良好，还具有一定的耐菌性、阻燃性和抗紫外性。

经过实验发现，只需过滤5mL细胞液，过滤所得的固体与底物浓度为0.5mg/L、体积0.4mL的反应液反应，95.68％的底物可转化成产物。

以下实施例选用专性厌氧有机卤化物呼吸菌Dehalococcoides mccartyi CG1进行实验，其余菌的特性与其类似，本发明同样可用于其他菌的酶活测试。

实施例1

本实施例选用专性厌氧有机卤化物呼吸菌Dehalococcoides mccartyi CG1，进行脱卤酶pcbA1的体外酶活性测试。该细菌由本实验室分离纯化而得，可参考文献：Genomiccharacterization of three unique Dehalococcoides that respire on persistentpolychlorinated biphenyls，作者：Shanquan Wang，Kern Rei Chng，Andreas Wilm等，DOI：10.1073/pnas.1404845111。

本实施例采用图5-6所示的高通量微生物体外酶活实验装置，操作流程如图7所示，细胞液容器的下端与滤液收集容器的上端通过卡扣机构可拆卸地连接在一起，过滤元件(即滤膜)安装于细胞液容器和滤液收集容器之间。外置固定机构与细胞液容器、滤液收集容器两端凸缘相互嵌合，以推拉方式拆装卡扣；将细胞液注入细胞液溶液中，滤液收集器的连接口连接负压装置，启动负压后，装入液体经过滤元件过滤后流入滤液收集器，细胞保留在玻璃纤维上；将细胞液容器与滤液收集器分离，即可将玻璃纤维膜拆下，投入装有反应液的容器中，将玻璃纤维膜完全浸没，在30℃环境下避光培养48小时。过滤元件为玻璃纤维滤膜，膜孔径0.22μm，直径13mm，购自天津市科亿隆实验设备有限公司。此滤膜孔径是根据实验中细胞大小而定，若过滤其它物质，可自由选择其它孔径。滤膜直径是根据装置设计而定，在本套装置中，各滤膜直径最好保持同样大小，以契合装置。

细胞液的制备方法参考文献“Genomic characterization of three uniqueDehalococcoides that respire on persistent polychlorinated biphenyls”(Shanquan Wanga,Kern Rei Chng,Andreas Wilm,Siyan Zhao,Kun-Lin Yang,NiranjanNagarajan,and Jianzhong He.Departments of Civil and Environmental Engineeringand Chemical and Biomolecular Engineering,National University of Singapore,Singapore 117576；and Computational and Systems Biology,Genome Institute ofSingapore,Singapore 138672；Edited by James M.Tiedje,Michigan StateUniversity,East Lansing,MI,and approved June 13,2014(received for reviewMarch 15,2014))中第12108页“材料与方法”部分。

每个样品所取的细胞液量为5mL，所使用的无油真空泵功率最大工作压强-92Kpa，抽气速率3.3L/s，细胞液完全过滤需要30s，过滤装置上设有9个过滤通道，一次性过滤9个样品。

含有底物的反应液的制备方法参考文献“Genomic characterization of threeunique Dehalococcoides that respire on persistent polychlorinated biphenyls”中的“Supporting Information”(Wang et al.10.1073/pnas.1404845111)，具体见“Enzymatic Analyses”部分，制得的反应液中的底物浓度为0.5mg/L，即0.5ppm，其他组分的浓度同上述参考文献，具体含有100mM Tris·HCl(pH 7.0)、20mM甲基紫精、15mM柠檬酸钛(III)。

脱卤酶pcbA1这一名称具体见文献：“Genomic characterization of threeunique Dehalococcoides that respire on persistent polychlorinated biphenyls”。

滤膜不需进行特殊处理，只需将滤膜完全浸泡入反应液中，脱卤酶pcbA1的反应底物为2,2′,3,4,4′,5,5′-七氯联苯(即PCB-180，也称多氯联苯-180)，反应液用量为0.4mL，室温下密闭，经过48小时的催化反应，采用GC-ECD(气相色谱电子捕获检测器)检测产物及底物比例，计算得到脱卤效率，反应结果如图8所示，PCB-153(即多氯联苯-153)为产物，脱卤效率为95.68％(原始数据为色谱仪上测得的物质峰面积，由产物与底物的峰面积比例计算得出脱卤效率)。2,2′,3,4,4′,5,5′-七氯联苯购自Dr.Ehrenstorfer GmbH，货号：C20018000，Lot:G164639。

脱卤效率的计算方法参考文献：Phylogenetically distinct bacteria involveextensive dechlorination of aroclor 1260in sediment-free cultures.(WangShanquan；He Jianzhong；Department of Civil and Environmental Engineering；National University of Singapore；Singapore.；

文献的出版信息如下：

JOURNAL:PloS one；

DOI:10.1371/journal.pone.0059178；

SOURCE:PubMed期刊；DOI:10.1371/journal.pone.0059178；YEAR:2013；PAGES:e59178；

PAGES:e59178；PUBLISHER:PubMed。

文献：“Genomic characterization of three unique Dehalococcoides thatrespire on persistent polychlorinated biphenyls”中采用现有的离心管分离细胞液，从该文献第16页的图Fig.S4(CG-1 2345-245-CB)中可以得知其实验结果，根据图中的坐标浓度估算，其脱卤效率最高约为78％，该文献中，2345-245-CB即为PCB-153。本实施例的底物、产物以及计算方法同该文献，采用的装置不同，结果显示，本实施例的脱卤效率高达95.68％，显著高于现有技术中的78％。

从文献“Genomic characterization of three unique Dehalococcoides thatrespire on persistent polychlorinated biphenyls”中的离心方法可以发现，现有的微生物酶活测试方法中，通常要用到离心机离心，一方面，离心机每次所能盛放的离心管数量有限，另一方面，每次离心结束后，离心管管壁上富集的细胞有限，再一方面，每次离心需要3-5分钟，需要在去掉上清液后，再次加入细胞液，如此循环进行多次离心，耗时较长。即便如此重复离心，最后测得的脱卤效率仍然远低于本发明，可见，增加离心次数，所能富集的细胞数量仍然有限，本发明成功克服了上述缺陷，通过真空过滤的方式，一次性过滤即可，无需重复进行，富集效率显著高于现有技术，具有高通量的特点，并且，过滤得到一个样品所需的细胞液体积仅仅约为2-10mL，细胞液抽滤所需时间仅仅为10-60s，所需反应液体积仅仅为0.4mL，而现有的离心法中，过滤得到一个样品所需的细胞液体积约为1L，要经过二十多次离心，耗时约1-2h，反应液的体积用量高达4mL(本发明实施例1的反应液中底物的种类以及摩尔量与前述文献相同)。

综上所述，至少具有如下有益效果：

(1)本装置可按需设置过滤通道的个数，细胞液容器相互独立，可同时放取，免去逐个操作的重复步骤，使用更加方便；

(2)本发明在保持高细胞回收率的同时，显著缩短了细胞富集所需的时间，简化了操作步骤，减少了实验耗材用量；

(3)本发明在保持高反应效率的同时，极大地减少了细胞液及反应液的用量；

(4)本装置的卡扣机构包括设于细胞液容器和滤液收集容器两端的凸缘以及外置的卡合件，外置卡合件将细胞液容器、滤液收集容器两端凸缘相互嵌合，以推拉方式拆装卡扣，可实现细胞液容器与滤液收集器的紧密贴合。

(5)本装置过滤元件结构为密封圈-过滤膜-密封圈，过滤膜设于两密封圈之间，过滤膜密封紧密，所述过滤膜材质为玻璃纤维膜等，在抽滤过程中，过滤膜不易变形，细胞液不会沿装置和膜缝隙渗漏，从而提高了细胞回收率。

(6)本装置的滤液收集容器设有支撑过滤元件的支撑台，该支撑台外圈的凹槽设有密封圈，可保证在过滤过程中不漏气，过滤效果良好。

(7)本装置的细胞液容器与滤液收集容器的材质均可为PLA，即聚乳酸，聚乳酸的热稳定性好，加工温度170～230℃，有较好的抗溶剂性，可用多种方式进行加工，如挤压、纺丝、双轴拉伸，注射吹塑。由聚乳酸制成的产品除能生物降解外，生物相容性、光泽度、透明性、手感和耐热性良好，还具有一定的耐菌性、阻燃性和抗紫外性。

(8)本装置富集了细胞的过滤膜可直接与含有底物的反应液进行催化反应。

(9)细胞液经过滤膜后，细胞可全部截留在滤膜上；

(10)本发明装置所用反应体系相较传统反应体系缩小了约10倍。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于微生物酶活测试的过滤装置，其特征在于，包括用于提供待过滤液体的供液机构(7)、用于收集滤液的收集机构(1)，所述供液机构(7)包括上连接台(15)，所述收集机构(1)包括收集容器(2)，所述收集容器(2)上设有用于放置滤膜(6)的下连接台(14)，所述上连接台(15)、下连接台(14)可拆卸连接，所述上连接台(15)、下连接台(14)上贯穿设有至少一个过滤通道，所述供液机构(7)中的待过滤液体穿过所述过滤通道以及所述滤膜(6)，进入所述收集机构(1)的集液腔(21)，所述滤膜(6)上富集截留物。

2.根据权利要求1所述的过滤装置，其特征在于：所述上连接台(15)上设有位于所述滤膜(6)上方的供液腔(10)，所述下连接台(14)上设有位于所述滤膜(6)下方的下通道(12)，所述供液腔(10)、下通道(12)组合形成所述过滤通道。

3.根据权利要求1所述的过滤装置，其特征在于：所述下连接台(14)上设有位于所述滤膜(6)外侧的凹槽(5)，所述上连接台(15)上设有可***所述凹槽(5)的凸缘(8)。

4.根据权利要求3所述的过滤装置，其特征在于：所述凹槽(5)内设有第一密封圈(4)，所述凸缘(8)***所述凹槽(5)，将所述第一密封圈(4)压紧。

5.根据权利要求2所述的过滤装置，其特征在于：还包括供液容器(10)，所述供液容器(11)上设有出液部(110)，所述出液部(110)***所示供液腔(10)中。

6.根据权利要求1所述的过滤装置，其特征在于：还包括第二密封圈(9)，所述上连接台(15)上设有位于供液腔(10)下部的限位台(19)，所述限位台(19)将所述第二密封圈(9)压紧在所述滤膜(6)的边缘。

7.根据权利要求2所述的过滤装置，其特征在于：所述下连接台(14)上设有至少一个用于支撑滤膜(6)的支撑台(13)，所述支撑台(13)设置在所述下通道(12)的内壁。

8.根据权利要求1所述的过滤装置，其特征在于：所述上连接台(15)与所述下连接台(14)之间的连接方式为粘接或卡合连接，所述收集容器(2)连通有负压装置。

9.根据权利要求1所述的过滤装置，其特征在于：还包括卡合件(18)，所述下连接台(14)的边缘设有向下的下凸台(16)，所述下凸台(16)与下连接台(14)的侧壁之间形成下卡槽(161)，所述上连接台(15)的边缘设有向上的上凸台(17)，所述上凸台(17)与所述上连接台(15)的侧壁之间形成上卡槽(171)，所述上连接台(15)、下连接台(14)贴合后，所述上凸台(17)、下凸台(16)组合形成的形状与所述卡合件(18)的凹槽相匹配，所述卡合件(18)从所述上凸台(17)、下凸台(16)的侧面***，将所述上凸台(17)、下凸台(16)锁紧。

10.一种微生物酶活测试方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备含有待检测微生物的细胞液，采用权利要求1-9任意一项所述过滤装置进行抽滤，得到富集有待检测细胞的滤膜；

(2)提供含有底物的反应液，将所述滤膜置于所述反应液中，反应结束后，检测产物与底物的比值，计算得到脱卤效率。

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