CN110907576A - 同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法，具体步骤如下：S1制备供试品溶液；S2制备得到一系列分别具有不同已知浓度的16个活性成分的混合对照品溶液；S3采用HPLC‑QTRAP‑MS/MS法，在确定的色谱和质谱条件下，得到各浓度混合对照品溶液的提取离子流色谱图，以各活性成分的峰面积为y值，以各活性成分的浓度为x值，分别建立各活性成分的标准曲线；S4将步骤S1制备的供试品溶液在与步骤S3相同的色谱和质谱条件下，进行定量分析。本发明所提供的方法，能够准确测定冠心静胶囊中16个活性成分的含量，具备分析快捷，灵敏度高，稳定性好，检出限低，重复性好的优点。

Description

同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法
技术领域
本发明涉及中成药质量控制技术领域，特别是涉及同时测定冠心静胶囊中16个活性成含量的方法。
背景技术
中药是中华民族的瑰宝，其在临床中有着悠久的历史，经过千百年的传承与发展，中医药理论体系逐渐完善，在疾病治疗中发挥着至关重要的作用。而中药复方根据症候差异，遵循整体观念与君臣佐使的组方原则，在应用中更是能够最大程度地发挥其功效，具有多组分，多靶点的优势。但同时也因其成分众多，组方复杂，对于中药产品的质量控制方法仍不够完善，这也成为中药走向现代化、国际化的主要障碍之一。
冠心静胶囊由丹参、赤芍、川芎、红花、玉竹、三七、人参、苏合香、冰片9味中药组方而成。在组方上融合了复方丹参制剂、速效救心丸等传统冠心病药物的优势，并特别增加了具有心理舒缓功能的成分，具有活血化瘀，益气通脉之功效，能够调节血脂，有效控制动脉粥样硬化、冠心病等疾病的进程，临床上用于气虚血瘀引起的胸痹，胸痛，气短心悸及冠心病见上述症状者。长期临床实践证实其对冠心病心绞痛有明显疗效，服用安全，临床结果显示无不良反应的发生，是中医药治疗冠心病的常用药之一。
冠心静胶囊作为一个中药复方，药味众多，成分复杂，且目前，对于冠心静胶囊的研究主要集中在临床疗效方面，对于其化学成分与质量控制的研究报道较少，在其现行质量标准中，对于含量测定项，仅将原儿茶醛这一单一成分作为定量指标，但原儿茶醛既不是其主要有效成分也缺乏特征性，不能与制剂的安全性与有效性直接关联，难以客观反应冠心静胶囊的质量。目前本领域亟需一种针对于冠心静胶囊活性成分含量检测方法，为冠心静胶囊的质量控制提供依据。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法。
为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
本发明的目的在于提供一种同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法，所述16种活性成分为羟基红花黄色素A、原儿茶醛、芍药内酯苷、芍药苷、三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸B、人参皂苷Rb1、二氢丹参酮 I、蒿本内酯、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA，具体步骤如下：
S1制备供试品溶液
取冠心静胶囊，去除囊壳，内容物混匀，研细，精密称定后精密加入定量适宜溶剂，超声提取，提取液微孔滤膜过滤，制得供试品溶液；
S2制备对照品溶液
分别精密称定所述16个活性成分的对照品，用适宜溶剂溶解，配制成已知浓度的各对照品储备液，混合并稀释各物质储备液，得到一系列分别具有不同已知浓度的16个活性成分的混合对照品溶液；
S3建立对照品的标准曲线
采用HPLC-QTRAP-MS/MS法，在相同色谱和质谱条件下，将步骤S2制备的各浓度混合对照品溶液分别注入高效液相色谱质谱联用仪中，得到各浓度混合对照品溶液的提取离子流色谱图，以各活性成分的峰面积为y值，以各活性成分的浓度为x值，分别建立各活性成分的标准曲线；
S4供试品含量测定
将步骤S1制备对的供试品溶液在与步骤S3相同的色谱和质谱条件下，注入高效液相色谱质谱联用仪中进行分析，获得供试品溶液的提取离子流色谱图，根据各个活性成分的峰面积和S3步骤中建立的各活性成分的标准曲线，分别计算出各个活性成分的含量。
在本发明的一些实施方案中，所述步骤S3和步骤S4的色谱条件为：
色谱柱：采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（5 μm，4.6×150 mm）；流动相：A为0.1-0.3%甲酸水，B为0.1-0.3%甲酸乙腈，梯度洗脱；流速：0.5-1.0 mL·min-1；柱温：20~35℃；进样量：5-15 μL。
在本发明的一些实施方案中，所述步骤S3和步骤S4的色谱条件为：流动相：A为0.2%甲酸水，B为0.2%甲酸乙腈，梯度洗脱；流速：0.8 mL·min-1；柱温：25±1℃；进样量：10μL。
在本发明的一些实施方案中，所述梯度洗脱的程序如下：0~6 min, 85%A; 6~6.1min, 85%A→65%A; 6.1~10 min, 65%A; 10~10.1 min, 65%A→30%A; 10.1~18min, 30%A;18~25 min, 30%A→5%A; 25~28 min, 5%A。
在本发明的一些实施方案中，所述步骤S3和步骤S4的质谱条件为：离子源：电喷雾离子源（ESI源）；检测方式：多反应离子监测（MRM）模式，采用正负离子切换模式；源喷射电压（IS）：-4500/5500 V；源温度（TEM）：550-700℃；雾化气压力（GS1，N2）：55.0-65.0psi；干燥气压力（GS2，N2）：60.0-70.0 psi；气帘气压力（CUR，N2）：25-40 psi。
在本发明的一些实施方案中，所述步骤S3和步骤S4的质谱条件为：离子源：电喷雾离子源（ESI源）；检测方式：多反应离子监测（MRM）模式，采用正负离子切换模式；源喷射电压（IS）：-4500/5500 V；源温度（TEM）：650℃；雾化气压力（GS1，N2）：60.0 psi； 干燥气压力（GS2，N2）：65.0 psi；气帘气压力（CUR，N2）：35.0 psi。
在本发明的一些实施方案中，各个活性成分的质谱多反应离子监测的分析参数如下：
Figure 531262DEST_PATH_IMAGE001
在本发明的一些实施方式中，所述步骤S2中各混合对照品溶液中各活性成分浓度范围如下：羟基红花黄色素A 的浓度为0.470-15.030μg/ml、原儿茶醛的浓度0.242-7.740μg/ml、芍药内酯苷的浓度0.293-9.375μg/ml、芍药苷的浓度为2.351-75.225μg/ml、三七皂苷R1的浓度为1.886-60.360μg/ml、人参皂苷Re的浓度为0.311-9.940μg/ml、人参皂苷Rg1的浓度为1.170-37.425μg/ml、阿魏酸的浓度为0.487-15.570μg/ml、迷迭香酸的浓度为0.162-5.200μg/ml、丹酚酸B的浓度为4.678-149.700μg/ml、人参皂苷Rb1的浓度为1.132-36.225μg/ml、二氢丹参酮Ⅰ的浓度为0.008-0.257μg/ml、蒿本内酯的浓度为9.459-302.700μg/ml、隐丹参酮的浓度为0.017-0.547μg/ml、丹参酮Ⅰ的浓度为0.003-0.198μg/ml、丹参酮ⅡA的浓度为0.008-0.266μg/ml。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：
本发明所提供的方法，采用HPLC-QTRAP-MS/MS法，可同时测定羟基红花黄色素A、原儿茶醛、芍药内酯苷、芍药苷、三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸B、人参皂苷Rb1、二氢丹参酮 I、蒿本内酯、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA的含量，为冠心静胶囊的质量控制研究提供依据。
本发明所提供的方法，通过对色谱条件和质谱条件进行优选，对母离子和子离子的碎裂碰撞条件研究，能够准确测定冠心静胶囊中16个活性成分的含量，具备分析快捷，灵敏度高，稳定性好，检出限低，重复性好的优点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1冠心静胶囊中16个成分的质谱图；
图2冠心静胶囊负离子模式下活性成分的提取离子流图；
图3冠心静胶囊正离子模式下活性成分的提取离子流图；
在附图中：1.羟基红花黄色素A；2.原儿茶醛；3.芍药内酯苷；4.芍药苷；5：三七皂苷R1；6.人参皂苷Re；7.人参皂苷Rg1；8.阿魏酸；9.迷迭香酸；10.丹酚酸B；11.人参皂苷Rb1；12.二氢丹参酮 I；13.蒿本内酯；14.隐丹参酮；15.丹参酮I；16.丹参酮IIA；A.空白溶剂；B.混合对照品溶液；C.样品溶液。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例对发明进行清楚、完整的描述。
在本具体实施例部分，所用的仪器如下：
3200Q-Trap质谱仪（美国AB SCIEX公司），配有三重四极杆线性离子阱串联质量分析器和Turbo V电喷雾离子源；Agilent-1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司），配有四元梯度洗脱泵，自动进样器与在线脱气机；Analyst1.6.2分析软件（美国AB SCIEX公司）；BT125D分析天平（德国Sartorius公司）；E180H超声波清洗器（德国Elma公司）；TD-12001电子天平（天津天平仪器有限公司）。
在本具体实施例部分，所用的试药和试剂如下：
对照品羟基红花黄色素A（批号：wkq18011601，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）；芍药内酯苷（批号：wkq17122003，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）、芍药苷（批号：150314，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）、三七皂苷R1（批号：wkq18061104，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）、人参皂苷Re（批号：wkq18091703，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）、人参皂苷Rg1（批号：wkq17111503，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）、迷迭香酸（批号：wkq18042802，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）、丹酚酸B（批号：wkq18042503，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）、人参皂苷Rb1（批号：wkq18020808，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）、二氢丹参酮Ⅰ（批号：wkq18070205，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）、蒿本内酯（批号：wkq18010501，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）、隐丹参酮（批号：wkq18021408，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）、丹参酮Ⅰ（批号：wkq18050206，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）、丹参酮ⅡA（批号：wkq18012309，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%）；原儿茶醛（批号：110810-200506，中国药品生物制品检定所）；阿魏酸（批号：110773-201313，中国食品药品检定研究院，纯度99.6%）。
甲醇和乙腈（色谱纯，TEDIA，USA）；超纯水（杭州哇哈哈有限公司）；甲酸（色谱级，Diamond，USA）。冠心静胶囊均由保定中药制药股份有限公司提供（批号160923，160924，160925，160926，161027，161028，161129，161131，161235，170101，170102，170103，170204，170205，170207，170208，170309，170412，170414，170515，170516）。
实施例1
本发明同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法包括如下步骤：
S1制备供试品溶液
取冠心静胶囊10粒，去除囊壳，内容物混匀，研细，取约0.2 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，称定重量，超声提取30 min，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
S2制备对照品溶液
分别精密称取羟基红花黄色素A、原儿茶醛、芍药内酯苷、三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、阿魏酸、迷迭香酸、人参皂苷Rb1、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA对照品适量，制成约为1mg/mL对照品溶液，芍药苷、丹酚酸B、蒿本内酯对照品适量，制成约为5mg/mL的对照品溶液，丹参酮Ⅰ对照品适量，制成浓度约为0.2mg/mL的对照品溶液作为储备液。其中羟基红花黄色素A用70%甲醇溶解并定容，其他物质用甲醇溶解并定容。通过混合并稀释各物质储备液，得到一系列的标准溶液，各对照品浓度范围如下：羟基红花黄色素A(0.470-15.030μg/ml)、原儿茶醛(0.242-7.740μg/ml)、芍药内酯苷(0.293-9.375μg/ml)、三七皂苷R1(1.886-60.360μg/ml)、人参皂苷Re(0.311-9.940μg/ml)、人参皂苷Rg1(1.170-37.425μg/ml)、阿魏酸(0.487-15.570μg/ml)、迷迭香酸(0.162-5.200μg/ml)、人参皂苷Rb1(1.132-36.225μg/ml)、二氢丹参酮Ⅰ(0.008-0.257μg/ml)、隐丹参酮(0.017-0.547μg/ml)、丹参酮ⅡA(0.008-0.266μg/ml)、芍药苷(2.351-75.225μg/ml)、丹酚酸B(4.678-149.700μg/ml)、蒿本内酯(9.459-302.700μg/ml)、丹参酮Ⅰ(0.003-0.198μg/ml)。
S3建立对照品的标准曲线
采用HPLC-QTRAP-MS/MS法，具体检测条件如下：
色谱条件如下：
采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（5 μm，4.6×150 mm），流动相：A为0.2%甲酸水，B为0.2%甲酸乙腈。梯度洗脱：0~6 min, 85%A; 6~6.1 min, 85%A→65%A; 6.1~10 min,65%A; 10~10.1 min, 65%A→30%A; 10.1~18min, 30%A; 18~25 min, 30%A→5%A; 25~28min, 5%A。每针进样前平衡6 min；流速0.8 mL·min-1; 柱温：25℃；进样量：10 μL。
质谱条件如下：
离子源：电喷雾离子源（ESI源）；检测方式：多反应离子检测（MRM）模式；采用正负离子切换模式，0~15 min采用负离子模式，15~28 min采用正离子模式；源喷射电压（IS）为-4500/5500 V；源温度（TEM）：650℃；雾化气（GS1，N2）：60.0psi; 干燥气（GS2，N2）：65.0 psi；气帘气（CUR，N2）：35.0 psi。16种被测成分监测离子对，去簇电压(DP)，碰撞电压(CE)见表1，质谱图见图1，提取离子流图见图2和图3。
表1 16个成分的保留时间(RT)，母离子，子离子，去簇电压(DP)，碰撞电压(CE)
化合物 RT(min) MS<sup>1</sup>(m/z) MS<sup>2</sup>(m/z) DP(V) CE(eV)
羟基红花黄色素A 3.43 611.2 325.3 -73 -44
原儿茶醛 5.67 137.0 107.8 -62 -33
芍药内酯苷 7.09 525.3 121.0 -28 -35
芍药苷 8.78 525.4 120.9 -33 -42
三七皂苷 R1 9.62 931.5 637.4 -80 -35
人参皂苷 Re 9.66 946.7 88.9 -95 -74
人参皂苷 Rg1 9.70 799.3 637.6 -90 -26
阿魏酸 10.14 192.9 133.9 -31 -24
迷迭香酸 10.57 359.1 161.0 -33 -24
丹酚酸 B 10.79 717.1 519.2 -40 -25
人参皂苷 Rb1 11.18 1107.7 88.9 -95 -100
二氢丹参酮 I 17.05 279.2 233.2 73 30
蒿本内酯 17.23 191.2 91.1 54 39
隐丹参酮 20.06 297.3 254.2 77 35
丹参酮 I 20.47 277.2 249.2 79 29
丹参酮 IIA 24.49 295.3 249.2 81 31
按上述色谱和质谱条件对步骤S2制备的各浓度混合对照品溶液进行检测，得到各浓度混合对照品溶液的提取离子流色谱图，以各活性成分的峰面积为y值，以各活性成分的浓度为x值，分别建立各活性成分的标准曲线。
S4供试品含量测定
将步骤S1制备的供试品溶液在与步骤S3相同的色谱和质谱条件下，注入高效液相色谱质谱联用仪中进行分析，获得供试品溶液的提取离子流色谱图，根据各个活性成分的峰面积和S3步骤中建立的各活性成分的标准曲线，分别计算出各个活性成分的含量，不同批次的冠心静胶囊的含量结果如表2所示。
Figure 917244DEST_PATH_IMAGE002
1.羟基红花黄色素A；2.原儿茶醛；3.芍药内酯苷；4.芍药苷；5.三七皂苷R1；6.人参皂苷Re；7.人参皂苷Rg1；8.阿魏酸；9.迷迭香酸；10.丹酚酸B；11.人参皂苷Rb1；12.二氢丹参酮 I；13.蒿本内酯；14.隐丹参酮；15.丹参酮I；16.丹参酮IIA。
实施例2 方法学验证
1、线性范围、检测限和定量限
取系列标准溶液，按实施例1中方法，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程。
将对照品溶液逐步稀释并进行测定，以信噪比S/N=10和S/N=3时各物质的量作为定量限（LOQ）与检测限（LOD）。各待测成分的回归方程、线性范围结果、定量限和检测限结果见表3。
表3 冠心静胶囊中16个成分的线性范围、检测限和定量限
Figure 759298DEST_PATH_IMAGE003
在本实施例检测条件下，各待测组分标准曲线相关系数r≥ 0.9922，表明其线性良好。
2、精密度
在实施例1确定的色谱条件和质谱条件下，取同一混合对照品溶液，连续测定6次，记录峰面积，计算相对标准偏差（RSD）评价仪器精密度。取同一批次冠心静胶囊样品6份，按照“供试品溶液制备”项下所述方法处理，平行制备样品溶液，进样分析，测得被测成分含量及RSD值，考察方法的日内精密度。连续测定3天，考察方法的日间精密度，结果见表4。
表4 冠心静胶囊中16个成分的精密度
Figure 747982DEST_PATH_IMAGE004
实验结果显示16个待测成分的仪器精密度RSD小于6.9%，方法的日内、日间精密度RSD分别小于9.8%和9.3%，结果说明仪器重复稳定，方法精密度良好。
3、加样回收率
取同一批次且含量已知的冠心静胶囊样品约0.1g，精密称定9份，分别精密加入高、中、低三种浓度的混合对照品溶液，每个浓度平行3份，使最后对照品的加入量与所取供试品中各成分的含有量之比约为1.5:1，1:1，0.5:1，在实施例1确定的色谱条件和质谱条件下，测定样品溶液中被测成分含量并计算加样回收率。计算公式为：加样回收率（%）=（测得量-原有量）/加入量×100%。结果见表5。
表5 冠心静胶囊中16个成分的加样回收率（n=3）
Figure 31196DEST_PATH_IMAGE006
实验结果显示16个待测成分的平均加样回收率范围为90.8-105.0%，RSD为0.6-8.4%，结果表明该方法准确、可靠。
4、稳定性
取冠心静胶囊样品，按照实施例1步骤S1下所述方法制备样品溶液，分别于0、4、6、8、12、24h进样分析，比较被测成分峰面积与0h的差异，计算RSD值，以此考察供试品溶液的稳定性，结果见表6。
表6冠心静胶囊中16个成分的稳定性（n=3）
Figure 181555DEST_PATH_IMAGE008
实验结果显示，供试品溶液中16个待测成分峰面积的RSD小于6.7%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。

Claims (8)

1.一种同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法，其特征在于，所述16种活性成分为羟基红花黄色素A、原儿茶醛、芍药内酯苷、芍药苷、三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸B、人参皂苷Rb1、二氢丹参酮 I、蒿本内酯、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA，具体步骤如下：
S1制备供试品溶液
取冠心静胶囊，去除囊壳，内容物混匀，研细，精密称定后精密加入定量适宜溶剂，超声提取，提取液微孔滤膜过滤，制得供试品溶液；
S2制备对照品溶液
分别精密称定所述16个活性成分的对照品，用适宜溶剂溶解，配制成已知浓度的各对照品储备液，混合并稀释各物质储备液，得到一系列分别具有不同已知浓度的16个活性成分的混合对照品溶液；
S3建立对照品的标准曲线
采用HPLC-QTRAP-MS/MS法，在相同色谱和质谱条件下，将步骤S2制备的各浓度混合对照品溶液分别注入高效液相色谱质谱联用仪中，得到各浓度混合对照品溶液的提取离子流色谱图，以各活性成分的峰面积为y值，以各活性成分的浓度为x值，分别建立各活性成分的标准曲线；
S4供试品含量测定
将步骤S1制备的供试品溶液在与步骤S3相同的色谱和质谱条件下，注入高效液相色谱质谱联用仪中进行分析，获得供试品溶液的提取离子流色谱图，根据各个活性成分的峰面积和S3步骤中建立的各活性成分的标准曲线，分别计算出各个活性成分的含量。
2.根据权利要求1所述的一种同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法，其特征在于，所述步骤S3和步骤S4的色谱条件为：
色谱柱：采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（5 μm，4.6×150 mm）；流动相：A为0.1-0.3%甲酸水，B为0.1-0.3%甲酸乙腈，梯度洗脱；流速：0.5-1.0 mL·min-1；柱温：20~35℃；进样量：5-15 μL。
3.根据权利要求2所述的一种同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法，其特征在于，所述步骤S3和步骤S4的色谱条件为：流动相：A为0.2%甲酸水，B为0.2%甲酸乙腈，梯度洗脱；流速：0.8 mL·min-1；柱温：25±1℃；进样量：10 μL。
4.根据权利要求1所述的一种同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序如下：0~6 min, 85%A; 6~6.1 min, 85%A→65%A; 6.1~10min, 65%A; 10~10.1 min, 65%A→30%A; 10.1~18min, 30%A; 18~25 min, 30%A→5%A;25~28 min, 5%A。
5.根据权利要求1所述的一种同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法，其特征在于，所述步骤S3和步骤S4的质谱条件为：离子源：电喷雾离子源（ESI源）；检测方式：多反应离子监测（MRM）模式，采用正负离子切换模式；源喷射电压（IS）：-4500/5500 V；源温度（TEM）：550-700℃；雾化气压力（GS1，N2）：55.0-65.0 psi； 干燥气压力（GS2，N2）：60.0-70.0psi；气帘气压力（CUR，N2）：25.0-40.0 psi。
6.根据权利要求1所述的一种同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法，其特征在于，所述步骤S3和步骤S4的质谱条件为：离子源：电喷雾离子源（ESI源）；检测方式：多反应离子监测（MRM）模式，采用正负离子切换模式；源喷射电压（IS）：-4500/5500 V；源温度（TEM）：650℃；雾化气压力（GS1，N2）：60.0 psi； 干燥气压力（GS2，N2）：65.0 psi；气帘气压力（CUR，N2）：35.0 psi。
7.根据权利要求1所述的一种同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法，其特征在于，各个活性成分的质谱多反应离子监测的分析参数如下：
化合物 RT(min) MS<sup>1</sup>(m/z) MS<sup>2</sup>(m/z) DP(V) CE(eV) 羟基红花黄色素A 3.43 611.2 325.3 -73 -44 原儿茶醛 5.67 137.0 107.8 -62 -33 芍药内酯苷 7.09 525.3 121.0 -28 -35 芍药苷 8.78 525.4 120.9 -33 -42 三七皂苷 R1 9.62 931.5 637.4 -80 -35 人参皂苷 Re 9.66 946.7 88.9 -95 -74 人参皂苷 Rg1 9.70 799.3 637.6 -90 -26 阿魏酸 10.14 192.9 133.9 -31 -24 迷迭香酸 10.57 359.1 161.0 -33 -24 丹酚酸 B 10.79 717.1 519.2 -40 -25 人参皂苷 Rb1 11.18 1107.7 88.9 -95 -100 二氢丹参酮 I 17.05 279.2 233.2 73 30 蒿本内酯 17.23 191.2 91.1 54 39 隐丹参酮 20.06 297.3 254.2 77 35 丹参酮 I 20.47 277.2 249.2 79 29 丹参酮 IIA 24.49 295.3 249.2 81 31
。
8.根据权利要求1所述的一种同时测定冠心静胶囊中16个活性成分含量的方法，其特征在于，所述步骤S2中各混合对照品溶液中各活性成分浓度范围如下：羟基红花黄色素A的浓度为0.470-15.030μg/ml、原儿茶醛的浓度0.242-7.740μg/ml、芍药内酯苷的浓度0.293-9.375μg/ml、芍药苷的浓度为2.351-75.225μg/ml、三七皂苷R1的浓度为11.886-60.360μg/ml、人参皂苷Re的浓度为0.311-9.940μg/ml、人参皂苷Rg1的浓度为1.170-37.425μg/ml、阿魏酸的浓度为0.487-15.570μg/ml、迷迭香酸的浓度为0.162-5.200μg/ml、丹酚酸B的浓度为4.678-149.700μg/ml、人参皂苷Rb1的浓度为1.132-36.225μg/ml、二氢丹参酮Ⅰ的浓度为0.008-0.257μg/ml、蒿本内酯的浓度为9.459-302.700μg/ml、隐丹参酮的浓度为0.017-0.547μg/ml、丹参酮Ⅰ的浓度为0.003-0.198μg/ml、丹参酮ⅡA的浓度为0.008-0.266μg/ml。
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