CN110882246B - 不同生物活性的黄连生物碱的提取方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中药活性成分提取技术领域，具体涉及不同生物活性的黄连生物碱的提取方法及应用，其包括以下步骤：(1)粗提取：黄连预处理，硫酸浸泡，渗漉，渗漉液中和，浓缩，过滤，得精制的黄连提取浓缩液；(2)活性生物碱I的提取：向黄连提取浓缩液中加入浓盐酸和氯化钠，沉淀，固液分离，固体即为活性生物碱I，液体即为母液I；(3)活性生物碱II的提取：采用有机溶剂萃取母液I，浓缩萃取后的有机相，得到活性生物碱II，萃取后的水相为母液II；(4)活性生物碱III的提取：采用有机溶剂萃取母液II，浓缩萃取后的有机相，得到活性生物碱III；该提取方法能够得到三种不同生物活性的黄连生物碱，提高黄连的综合利用率。

Description

不同生物活性的黄连生物碱的提取方法及应用
技术领域
本发明属于中药活性成分提取技术领域，具体涉及不同生物活性的黄连生物碱的提取方法及应用。
背景技术
黄连始载于《神农本草经》，列为上品。黄连味苦，性寒，有泻火、解毒、清热、燥湿的功能。用于烦热神昏、心烦失眠、湿热痞满、呕吐、腹痛泻痢、目赤肿毒、口舌生疮、湿疹、烫伤、吐血、衄血等。随着现代提取技术的提升，黄连生物碱的提取技术的发展也取得了较大的进步。
专利CN1730480A公开了一种黄连总生物碱提取方法，主要包括：黄连药材，用水煎煮，上大孔树脂净化，水洗，含水乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩干燥，得到产品等过程。其黄连总生物碱含量达到25～100％。
专利CN101269132A公开了一种黄连总生物碱提取工艺，主要包括：原料(黄连或黄连须根或黄连叶)——粉碎(如为黄连须根或黄连叶不需粉碎)——加入适量0.01～10％的硫酸浸泡——升温提取四次——预浓缩——净化——氯化钠和高价金属盐沉淀——过滤——烘干——黄连总生物碱产品。产品的主要活性成分为黄连素、黄连碱、药根碱、巴马汀、表小檗碱等黄连有效成分，黄连总生物碱含量为20％以上，其中黄连素的含量10％以上。该工艺生产的黄连总生物碱含量偏低(25％)，生物碱总收率不高。
专利CN103393780A公开了一种高***连总生物碱提取方法，该方法将黄连总生物碱的含量提高至50％，其具体工艺为原料(黄连或黄连须根或黄连灰渣)—粉碎(如为黄连须根或黄连灰渣不需粉碎)—加入0.1～5％的硫酸浸泡—升温提取四次—过滤—氧化钙(或氢氧化钙)中和—过滤并洗涤沉淀—预浓缩—调酸—氯化钠沉淀—过滤—母液回收生物碱—沉淀烘干—黄连总生物碱产品。
专利CN104644793A公开了黄连生物总碱的高效提取方法，该方法将生物总碱的提取率提高至98％，其具体工艺步骤为：1)原料粉碎；2)原料预处理；3)渗漉；4)渗漉液的中和；5)浓缩；6)盐析；7)过滤和洗涤；8)总生物碱母液处理；9)烘干。本发明方法操作简单，能耗低，使工业生产的成本大大降低，对黄连总生物碱的提取率达到98％以上；黄连总生物碱的主要活性成分为黄连素即小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀、药根碱等黄连总生物碱。
上述公开的提取工艺已将黄连生物碱的提取率和含量提高到较高水平，但上述提取方法均针对黄连生物总碱，若要研究或使用具有某种生物活性的生物碱则需要进一步采用成本较高的层析等分离技术从生物总碱中分离。现代药学研究结果表明，黄连主要活性成分为黄连生物碱，主要包括小檗碱(黄连素)、巴马汀、黄连碱、表小檗碱、非洲防己碱、药根碱和木兰碱等。研究发现，不同的黄连生物碱具有不同的生物活性。并且，黄连为贵重中药，如果能够在提取黄连生物碱是按其生物活性分别提取，不仅可以显著提升黄连的综合药用价值，而且可以降低以黄连为原料的药物制剂的成本。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种不同生物活性的黄连生物碱的提取方法，该提取方法能够得到三种不同生物活性的黄连生物碱，提高黄连的综合利用率。
不同生物活性的黄连生物碱的提取方法，包括以下步骤：
(1)粗提取：黄连预处理，硫酸浸泡，渗漉，渗漉液中和，浓缩，过滤，得精制的黄连提取浓缩液；
(2)活性生物碱I的提取：向黄连提取浓缩液中加入浓盐酸，加入浓盐酸与黄连提取浓缩液的体积比为0.5～1％，加入黄连提取浓缩液重量5～10％的氯化钠，沉淀0.1-30天，固液分离，固体即为活性生物碱I，液体即为母液I；
(3)活性生物碱II的提取：采用乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷或/和***萃取母液I，浓缩萃取后的有机相，得到活性生物碱II，萃取后的水相为母液II；
(4)活性生物碱III的提取：采用乙酸乙酯-丁醇或丁醇萃取母液II，浓缩萃取后的有机相，得到活性生物碱III。
优选的，所述黄连提取浓缩液的浓度为0.1～5g生药(原料药材)/mL的溶液。
优选的，所述步骤(3)和(4)中，萃取是指用与母液I或II等体积的有机溶剂萃取2次。
优选的，所述步骤(2)中，加入的浓盐酸与黄连提取浓缩液的体积比为0.5％。
优选的，所述步骤(2)中，加入氯化钠的重量为黄连提取浓缩液重量的5％。
优选的，上述提取方法还包括分别对活性生物碱II和活性生物碱III进行硅胶柱层析和重结晶得到活性生物碱II精品和活性生物碱III精品，硅胶柱层析的洗脱剂为甲醇、乙醇或丙酮。
优选的，所述重结晶选用溶剂为甲醇。
优选的，所述步骤(1)中，所述黄连预处理是指对黄连、黄连须根、黄连灰渣或黄连茎叶进行切片或粉碎。
优选的，所述步骤(1)中，所述硫酸浸泡是指采用0.5％的硫酸(v/v)淹没浸泡24h。
优选的，所述渗漉液中和是指将收集的渗漉液用石灰或氢氧化钙中和至pH为2～10。
利用上述提取方法提取的活性生物碱I、活性生物碱II、活性生物碱II精品、活性生物碱III或活性生物碱III精品也属于本发明的保护范围。
优选的，所述活性生物碱I主要含有小蘖碱和黄连碱，所述活性生物碱II主要含有木兰碱，所述活性生物碱III主要含有表小蘖碱和巴马汀。
上述提取方法和/或利用上述提取方法提取的活性生物碱I在制备治疗糖尿病、高血脂、肥胖或心血管类疾病药物中的应用同样属于本发明的保护范围。
上述提取方法、利用上述提取方法提取的活性生物碱II或活性生物碱II精品在制备治疗湿疹药物中的应用同样属于本发明的保护范围。
上述提取方法、利用上述提取方法提取的活性生物碱III或活性生物碱III精品在制备治疗痤疮药物中的应用同样属于本发明的保护范围。
本发明的有益效果在于：
1.本发明提供的提取方法将黄连生物碱直接在提取阶段分为三种不同生物活性的活性生物碱I、II和III，无需将合并盐析产物和母液得到的黄连生物总碱进行再次分离，进而降低了分离提取的难度，同时上述提取方法除了得到纯度较高的小蘖碱和黄连碱，还能得到黄连本身含量较少的木兰碱和巴马汀，有利于进一步的制备药剂；
2.利用本提取方法得到三种活性生物碱均具有优异的生物活性，其中，活性生物碱I主要含有小蘖碱和黄连碱，相较于单一的黄连素，其具有更为理想的降血糖、降血脂和减肥效果，可用作黄连、黄连浓缩制品、黄连素等产品的代用品，是治疗糖尿病、高血脂、肥胖、心血管类疾病和抗菌的优质原料；活性生物碱II精品主要含有木兰碱，纯度高达95％，相较于黄连和黄连素，其能够更为有效的治疗湿疹；活性生物碱III主要含有巴马汀和表小檗碱的含量高达90％，经过进一步精制巴马汀和表小蘖碱的纯度均大于90％，精制后所得的巴马汀相较于黄连素和黄连碱，其能够更有效的治疗痤疮。
3.本发明提供的提取方法实现了黄连生物碱的综合利用，黄连中的所有生物碱均被分别加以利用，没有浪费，实现了黄连资源的充分利用。
附图说明
图1为实施例1制备的黄连提取浓缩液的HPLC图谱；
图2为实施例1提取的活性生物碱I的HPLC图谱；
图3为实施例1提取的活性生物碱II的HPLC图谱；
图4为实施例1提取的活性生物碱II精品的HPLC图谱；
图5为实施例1提取的活性生物碱III的HPLC图谱；
图6为实施例1提取的活性生物碱III(巴马汀部位)的HPLC图谱；
图7为实施例1提取的活性生物碱III精品(巴马汀部位)的HPLC图谱；
图8为实施例1提取的活性生物碱III(表小蘖碱部位)的HPLC图谱；
图9为实施例1提取的活性生物碱III精品(表小蘖碱部位)的HPLC图谱。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚完整的描述，显然所描述的实施例仅是本发明的部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
另外，除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备均可通过市场购买获得或现有方法制备得到。
实施例1活性生物碱I、II、和III的分别提取
黄连10kg，切片，用0.5％的硫酸淹没浸泡24小时以后，渗漉，每天收集10升渗漉溶液，连续收集5天；渗漉液用石灰中和到溶液的pH 2，过滤；残渣再用适量的水洗涤1次，合并滤液和洗液；合并后的中和液减压浓缩到浓度为0.1g生药(原料药材)/mL的黄连提取浓缩液，冷却过滤；在黄连提取浓缩液中添加0.5％体积比的浓盐酸，再加入浓缩液重量5％比例的氯化钠，沉淀总生物碱，放置0.1天；沉淀自然过滤，用水洗涤，烘干，得到活性生物碱I。参见图2，HPLC分析含量，小檗碱含量55％，黄连碱含量20％、巴马汀5％、表小檗碱3％、药根碱2％、非洲防己碱1％、木兰碱0.5％。
提取活性生物碱I以后的母液，用等体积的乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯，烘干，得到活性生物碱II。参见图3，HPLC分析含量，木兰碱为12％、小檗碱含量1％，黄连碱含量0.5％、巴马汀1％、表小檗碱1％、药根碱0.2％、非洲防己碱0.3％。10g活性生物碱II，用20g硅胶拌料；在硅胶柱底部放上30g硅胶，然后，将拌料的原料和硅胶放于上部，用甲醇洗脱；收集木兰碱部位，回收甲醇，得到木兰碱。参见图4，HPLC分析含量，木兰碱为65％。在甲醇中重结晶一次，木兰碱纯品(黄连活性生物碱II精品)。参见图5，HPLC分析含量，木兰碱为95％。
提取活性生物碱II以后的母液，用等体积的丁醇萃取3次，回收丁醇，烘干，得到活性生物碱III。参见图6，HPLC分析含量，巴马汀15％、表小檗碱12％、小檗碱1％、黄连碱1％、药根碱2％、非洲防己碱0.8％。10g活性生物碱III，用20g硅胶拌料；在硅胶柱底部放上30g硅胶，然后，将拌料的原料和硅胶放于上部，用甲醇洗脱；分别收集巴马汀部位和表小檗碱部位，回收甲醇，到巴马汀和表小檗碱2个组分。参见图6和8，HPLC分析含量，巴马汀为55％，表小檗碱为50％。甲醇中重结晶一次，得到巴马汀和表小檗碱纯品。参见图7和9，HPLC分析含量，巴马汀为90％，表小檗碱为92％。
实施例2活性生物碱I、II、和III的分别提取
黄连须10kg，用0.5％的硫酸淹没浸泡24小时以后，渗漉，每天收集10升渗漉溶液，连续收集5天；渗漉液用石灰中和到溶液的pH 10，过滤；残渣再用适量的水洗涤3次，合并滤液和洗液；合并后的中和液减压浓缩到浓度为5g生药(原料药材)/mL得到黄连提取浓缩液，冷却过滤；在黄连提取浓缩液中添加0.5％体积比的浓盐酸，再加入浓缩液重量5％比例的氯化钠，沉淀总生物碱，放置30天；沉淀自然过滤，用水洗涤，烘干，得到活性生物碱I。HPLC分析含量，小檗碱含量30％，黄连碱含量40％、巴马汀0.1％、表小檗碱5％、药根碱1％、非洲防己碱1.5％、木兰碱0.2％。
提取活性生物碱I以后的母液，用等体积的二氯甲烷萃取1次，回收二氯甲烷，烘干，得到活性生物碱II。HPLC分析含量，木兰碱为10％、小檗碱含量0.8％，黄连碱含量1.7％、巴马汀0.1％、表小檗碱0.9％、药根碱0.5％、非洲防己碱0.4％。10g活性生物碱II，用20g硅胶拌料；在硅胶柱底部放上30g硅胶，然后，将拌料的原料和硅胶放于上部，用乙醇洗脱；收集木兰碱部位，回收乙醇，得到木兰碱。HPLC分析含量，木兰碱为60％。在甲醇中重结晶一次，木兰碱纯品。HPLC分析含量，木兰碱为90％。
提取活性生物碱II以后的母液，用等体积的乙酸乙酯-丁醇(1:1)萃取1次，回收溶剂，烘干，得到活性生物碱III。HPLC分析含量，巴马汀1％、表小檗碱25％、小檗碱1％、黄连碱1％、药根碱2％、非洲防己碱0.8％。10g活性生物碱III，用20g硅胶拌料；在硅胶柱底部放上30g硅胶，然后，将拌料的原料和硅胶放于上部，用乙醇洗脱；分别收集巴马汀部位和表小檗碱部位2个部位，回收乙醇，得到巴马汀和表小檗碱。HPLC分析含量，巴马汀为50％，表小檗碱为65％。在甲醇中重结晶一次，得到巴马汀和表小檗碱纯品。HPLC分析含量，巴马汀为90％，表小檗碱为95％。
实施例3活性生物碱I、II、和III的分别提取
黄连叶10kg，粉碎，用0.5％的硫酸淹没浸泡24小时以后，渗漉，每天收集10升渗漉溶液，连续5天；渗漉液用石灰中和到溶液的pH 5，过滤；残渣再用适量的水洗涤2次，合并滤液和洗液；合并后的中和液减压浓缩到浓度为1g生药(原料药材)/mL得到黄连提取浓缩液，冷却过滤；在浓缩液中添加0.5％体积比的浓盐酸，再加入溶液重量5％比例的氯化钠，沉淀总生物碱，放置10天；沉淀自然过滤，用水洗涤，烘干，得到活性生物碱I。
HPLC分析含量，小檗碱含量50％，黄连碱含量5％、巴马汀3％、表小檗碱5％、药根碱1％、非洲防己碱0.5％、木兰碱0.2％。
提取活性生物碱I以后的母液，用等体积的三氯甲烷萃取2次，回收三氯甲烷，烘干，得到活性生物碱II。HPLC分析含量，木兰碱为15％、小檗碱含量1.2％，黄连碱含量1％、巴马汀1％、表小檗碱2％、药根碱0.8％、非洲防己碱0.4％。10g活性生物碱II，用20g硅胶拌料；在硅胶柱底部放上30g硅胶，然后，将拌料的原料和硅胶放于上部，用异丙醇洗脱；收集木兰碱部位，回收异丙醇，得到木兰碱。HPLC分析含量，木兰碱为67％。在甲醇中重结晶一次，木兰碱纯品。HPLC分析含量，木兰碱为97％。
提取活性生物碱II以后的母液，用等体积的乙酸乙酯-丁醇(1:4)萃取2次，回收溶剂，烘干，得到活性生物碱III。HPLC分析含量，巴马汀10％、表小檗碱5％、小檗碱1％、黄连碱1％、药根碱1％、非洲防己碱0.8％。10g活性生物碱III，用20g硅胶拌料；在硅胶柱底部放上30g硅胶，然后，将拌料的原料和硅胶放于上部，用异丙醇洗脱；分别收集巴马汀部位和表小檗碱部位2个部位，回收异丙醇，得到巴马汀和表小檗碱。HPLC分析含量，巴马汀为55％，表小檗碱为60％。在甲醇中重结晶一次，得到巴马汀和表小檗碱纯品。HPLC分析含量，巴马汀为93％，表小檗碱为95％。
实施例4活性生物碱I、II、和III的分别提取
灰渣10kg，用0.5％的硫酸淹没浸泡24小时以后，渗漉，每天收集10升渗漉溶液，连续收集5天；渗漉液用石灰中和到溶液的pH3，过滤；残渣再用适量的水洗涤2次，合并滤液和洗液；合并后的中和液减压浓缩到浓度为0.5g生药(原料药材)/mL的黄连提取浓缩液，冷却过滤；在浓缩液中添加0.5％体积比的浓盐酸，再加入浓缩液重量5％比例的氯化钠，沉淀总生物碱，放置2天；沉淀自然过滤，用水洗涤，烘干，得到活性生物碱I。HPLC分析含量，小檗碱含量60％，黄连碱含量25％、巴马汀5％、表小檗碱4％、药根碱1％、非洲防己碱0.5％、木兰碱0.6％。
提取活性生物碱I以后的母液，用等体积的***萃取2次，回收***，烘干，得到活性生物碱II。HPLC分析含量，木兰碱为11％、小檗碱含量1.2％，黄连碱含量1％、巴马汀1％、表小檗碱1％、药根碱0.8％、非洲防己碱0.4％。10g活性生物碱II，用20g硅胶拌料；在硅胶柱底部放上30g硅胶，然后，将拌料的原料和硅胶放于上部，用丙酮洗脱；收集木兰碱部位，回收丙酮，得到木兰碱。HPLC分析含量，木兰碱为56％。在甲醇中重结晶一次，木兰碱纯品。HPLC分析含量，木兰碱为92％。
提取活性生物碱II以后的母液，用等体积的丁醇萃取2次，回收溶剂，烘干，得到活性生物碱III。HPLC分析含量，巴马汀8％、表小檗碱7％、小檗碱1％、黄连碱1％、药根碱0.9％、非洲防己碱0.8％。10g活性生物碱III，用20g硅胶拌料；在硅胶柱底部放上30g硅胶，然后，将拌料的原料和硅胶放于上部，用丙酮洗脱；分别收集巴马汀部位和表小檗碱部位2个部位，回收丙酮，得到巴马汀和表小檗碱。HPLC分析含量，巴马汀为57％，表小檗碱为62％。在甲醇中重结晶一次，得到巴马汀和表小檗碱纯品。HPLC分析含量，巴马汀为93％，表小檗碱为94％。
实施例5本发明得到的活性生物碱I在治疗相关疾病方面的对比实验
①、降血糖活性实验
试验材料为本发明实施例4制得的活性生物碱I(小檗碱、黄连碱、巴马汀、表小檗碱等生物碱之和为95％)、黄连素(含量95％)、黄连(总生物碱含量10％)。
降血糖实验方法参照“天然药物(中药)新药研究指导原则”进行：将KK-ay小鼠分为4组：对照组、活性生物碱I组，小檗碱组、黄连组。活性生物碱I组(500mg/kg)、小檗碱组(500mg/kg)、黄连组药物组(5000mg/kg)；小鼠饲养4周后，待血糖高于10连续灌喂4周，然后采空腹血检测血脂指标，结果见表1。
表1降糖效果比较
组别 给药前(mmol/L) 给药后(mmol/L)
对照组 11.51±2.20 11.83±2.40
活性生物碱I(500mg/kg) 11.61±2.51 6.61±1.70
小檗碱(500mg/kg) 11.70±2.40 7.45±2.10
黄连(5000mg/kg) 11.59±2.30 7.05±2.11<sup>×</sup>
从表1中可以看到，活性生物碱I降血糖活性最好，由于同等剂量的黄连，也优于小檗碱件组。表明本发明得到的活性生物碱I具有更好的降糖活性。
②、降血脂活性实验
试验材料为实施例4制得的活性生物碱I(小檗碱、黄连碱、巴马汀、表小檗碱等生物碱之和为95％)、黄连素(含量95％)、黄连(总生物碱含量10％)。
降血脂实验方法参照“天然药物(中药)新药研究指导原则”进行：将金黄地鼠分为5组，一组(10只)给予正常饲料，一组(40只)给予高脂饲料；4周后，检测血脂指标，再将造模成功的金黄地鼠分为4组(每组8～10只)：高脂对照组、黄连总生物碱组、黄连素组、黄连总生物碱粗品组。药物组给予500mg/Kg药物；连续灌喂4周，然后采空腹血检测血脂指标，结果见表2。
表2降血脂效果比较
Figure BDA0001793489220000081
Figure BDA0001793489220000091
从表2中可以看到，与正常对照组相比，各试验组血脂均有升高，表明造模成功；与高脂组相比，各药物组胆固醇(TC)均有所下降，表明均有降血脂活性；其中活性生物碱I的降血脂活性优于小檗碱，也优于黄连。
③、抗菌活性实验
试验材料为本发明实施例4制得的活性生物碱I(小檗碱、黄连碱、巴马汀、表小檗碱等生物碱之和为95％)、黄连素(含量95％)、黄连(总生物碱含量10％)。
抗菌实验方法参照“天然药物(中药)新药研究指导原则”进行：以大肠杆菌为细菌模型，采用检测MIC，研究齐康郡活性：细菌培养以后，调节细菌浓度为1×108个/mL；在96孔板中没空添加50微升细菌，然后分别加入不同浓度的药物，培养24小时，观察细菌生长情况，判断其MIC，结果见表3。
表3抗菌(大肠杆菌)效果比较(μg/mL)
活性生物碱I 250
小檗碱 500
黄连 ≥2000
从表3中可以看到，活性生物碱I的抗菌活性最高，其次为小檗碱，黄连的抗菌活性最低。
实施例6活性生物碱II治疗湿疹效果比较
试验材料为实施例2制得的活性生物碱II精品(木兰碱90％)、黄连素(含量95％)、黄连(总生物碱含量10％)。
抗菌实验方法参照“天然药物(中药)新药研究指导原则”进行：小鼠40只，对照组10只，活性生物碱II(10只)、黄连素(10只)、黄连(10只)。小鼠脱毛，对照组仅脱毛，不致敏及激发；药物组在剃毛区处涂二硝基氯苯(DNCB)丙酮溶液致敏(丙酮：甘油＝3：1),小鼠用2％，200ul连续刺激背部3天，之后每隔一天用0.5％DNCB，40ul诱发背部；
0.5％DNCB，20ul激发左耳。造模成功后，在造模处涂药物(药物浓度为5％)，观察小鼠舔伤口次数。有关结果见下表4。
表4治疗湿疹效果比较(次/5分钟)
模型组 10.5±3.4
活性生物碱II精品 2.2±1.4
小檗碱 6.5±2.2
黄连 5.4±3.1
从表4中可以看到，三种药物均有治疗湿疹的效果，但是活性生物碱II精品的治疗湿疹活性最高，明显高于小檗碱和黄连；其次为黄连，小檗碱的活性最低。
实施例7活性生物碱III治疗痤疮(抗痤疮丙酸杆菌)效果比较
试验材料为实施例2制得的活性生物碱III精品(巴马汀为90％)、黄连素(含量95％)、黄连(总生物碱含量10％)。
痤疮丙酸杆菌是引发痤疮的主要致病菌。抗菌实验方法参照“天然药物(中药)新药研究指导原则”进行：以痤疮丙酸杆菌为细菌模型，采用检测MIC，研究活性生物碱III精品活性：细菌培养以后，调节细菌浓度为1×108个/mL；在96孔板中没空添加50微升细菌，然后分别加入不同浓度的药物，培养24小时，观察细菌生长情况，判断其MIC，结果见表5。
表5抗菌(痤疮丙酸杆菌)效果比较(μg/mL)
活性生物碱III精品 250
小檗碱 500
黄连 ≥2000
从表5中可以看到，活性生物碱I的抗菌活性最高，其次为小檗碱，黄连的抗菌活性最低。

Claims (7)

1.不同生物活性的黄连生物碱的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)粗提取：黄连预处理，硫酸浸泡，渗漉，渗漉液中和，浓缩，过滤，得精制的黄连提取浓缩液；
(2)活性生物碱I的提取：向黄连提取浓缩液中加入浓盐酸，加入浓盐酸与黄连提取浓缩液的体积比为0.5～1%，加入黄连提取浓缩液重量5～10%的氯化钠，沉淀0.1-30天，固液分离，固体即为活性生物碱I，液体即为母液I，所述活性生物碱I主要含有小檗 碱和黄连碱；
(3)活性生物碱II的提取：采用乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷或/和***萃取母液I，浓缩萃取后的有机相，得到活性生物碱II，萃取后的水相为母液II，所述活性生物碱II主要含有木兰碱；
(4)活性生物碱III的提取：采用乙酸乙酯-丁醇或丁醇萃取母液II，浓缩萃取后的有机相，得到活性生物碱III，所述活性生物碱III主要含有表小檗 碱和巴马汀。
2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述黄连提取浓缩液的浓度为0.1～5g生药/mL的溶液。
3.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)和(4)中，萃取是指用与母液I或II等体积的有机溶剂萃取2次。
4.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，加入的浓盐酸与黄连提取浓缩液的体积比为0.5%，所述步骤(2)中，加入氯化钠的重量为黄连提取浓缩液重量的5%。
5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述提取方法还包括分别对活性生物碱II和活性生物碱III进行硅胶柱层析和重结晶得到活性生物碱II精品和活性生物碱III精品，硅胶柱层析的洗脱剂为甲醇、乙醇或丙酮，所述重结晶选用溶剂为甲醇。
6.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述黄连预处理是指对黄连、黄连须根、黄连灰渣或黄连茎叶进行切片或粉碎，所述步骤(1)中，所述硫酸浸泡是指采用0.5%的硫酸(v/v)淹没浸泡24h，所述渗漉液中和是指将收集的渗漉液用石灰或氢氧化钙中和至pH为2～10。
7.权利要求1～6任一项所述的提取方法提取的活性生物碱II在制备治疗湿疹药物中的应用。
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