CN110876751A

CN110876751A - 曲美替尼在制备预防和/或治疗非酒精性肝炎和/或非酒精性脂肪性肝病中的应用

Info

Publication number: CN110876751A
Application number: CN201911033194.4A
Authority: CN
Inventors: 王靖翔; 刘祖瑞; 高明景
Original assignee: Beijing Yiyao Technology Co Ltd
Current assignee: Beijing Yiyao Technology Co Ltd
Priority date: 2019-10-28
Filing date: 2019-10-28
Publication date: 2020-03-13
Anticipated expiration: 2039-10-28
Also published as: WO2021082683A1; CN110876751B

Abstract

本发明提供了曲美替尼在制备预防和/或治疗非酒精性肝炎中的应用，还提供了曲美替尼在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝病中的应用。本发明提供了曲美替尼在制备预防和/或治疗非酒精性肝炎、非酒精性脂肪性肝病中的应用，结果显示，曲美替尼能够有效降低MCD模型中ALT、AST、CHO和TG值，降低肝指数，曲美替尼处理组染色面值较小、脂肪粒消失、无炎症坏死；曲美替尼还能够有效降低高脂/果糖模型中的脂肪和炎症反应，曲美替尼处理组染色面值较小、脂肪粒明显减少，损伤较小。

Description

曲美替尼在制备预防和/或治疗非酒精性肝炎和/或非酒精性脂肪性肝病中的应用

技术领域

本发明属于药学领域，特别涉及曲美替尼在制备预防和/或治疗非酒精性肝炎和/或非酒精性脂肪性肝病中的应用。

背景技术

随着生活水平的提高，非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)影响到越来越多人的健康。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)指的是饮酒很少或不饮酒的人肝脏中脂肪过多的情况。最常见的NAFLD是一种称为肝脂肪变性(脂肪肝)的非严重疾病，脂肪在肝细胞中积聚：尽管这不正常，但它本身可能不会损害肝脏。NAFLD最常出现在有一系列称为代谢综合征的危险因素的个体中，其特征是空腹血糖升高，或餐后血糖不耐受，超重或肥胖，高血脂(如胆固醇和甘油三酯和低高密度脂，蛋白胆固醇(HDL-C)水平和高血压)；但并非所有患者都有代谢综合征的所有表现。肥胖被认为是NAFLD最常见的原因；一些专家估计大约三分之二的肥胖成人和一半的肥胖儿童可能有脂肪肝。大多数NAFLD患者无症状，体检正常(尽管肝脏可能有轻微肿大)；儿童可能出现腹痛和疲劳等症状，并可能出现斑片状深色皮肤变色(黑棘皮病)。NAFLD的诊断通常首先怀疑是超重或肥胖的人，在常规检查中发现他们的肝血检查有轻微升高，尽管NAFLD可以出现在正常的肝血检查中，或者在腹部超声或CT扫描等影像学检查中偶然发现。最常见确诊方式是经影像学研究证实，如肝脏超声或磁共振成像(MRI)。

一些非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者可能患上更严重的疾病-非酒精性脂肪性肝炎(NASH)：约2-5％的成年人和高达20％的肥胖者可能患上NASH。在NASH中，肝脏中的脂肪积累与炎症和不同程度的瘢痕有关。NASH是一种潜在的严重疾病，具有发展为终末期肝病、肝硬化和肝细胞癌的巨大风险。有些肝硬化患者有肝衰竭的风险，最终可能需要进行肝移植。

NAFLD可通过NAFLD活性评分(NAS)与NASH相区别：脂肪变性肝活检组织病理学评分(0-3)、小叶炎症(0-2)和肝细胞膨胀(0-2)。小于3的NAS对应于NAFLD，3-4对应于临界NASH，大于5的NAS对应于NASH。活检也被评分为纤维化(0到4)。

NASH是终末期肝病的主要原因；而NAFLD和更大程度上的NASH与代谢综合征的状态密切相关，包括胰岛素抵抗(糖尿病前期)和2型糖尿病(T2DM)以及腹部肥胖。T2DM 是NAFLD预后不良最显著的预测因子，而肝酶升高被认为是不可靠的。长期存在的T2DM 患者中NASH的发病率更高，大多数隐源性肝硬化患者是肥胖和/或糖尿病患者。研究表明，60％的T2DM和NAFLD患者经活检证实为NASH，75％的糖尿病和高血压患者出现晚期肝纤维化，而没有这两种疾病的患者只有7％。Haukeland，“异常葡萄糖耐受是非酒精性脂肪性肝病患者非酒精性脂肪性肝炎和纤维化的预测因子”，Scand J.Gastenterol.， 401469-1477(2005)，报道了糖耐量受损(IGT)和T2DM是严重NAFLD和NASH的唯一独立危险因素，增加了患病几率。Mofrad“非酒精性脂肪性肝病的临床和组织学谱与丙氨酸转氨酶水平正常相关”，《肝病》，371286-1292(2003)，报道了一项研究，该研究证明了肝转氨酶升高对NAFLD患者诊断NASH缺乏预测价值，并发现T2DM是唯一独立相关的因素。泰德会增加晚期纤维化的风险。因此，NASH是一种被忽视的T2DM并发症，通常与纤维化相关，约10％的患者会导致肝硬化；而在T2DM和NASH患者中，肝细胞癌的风险也会增加。NAFLD和NASH患者通常表现为混合性血脂异常和上述其他代谢紊乱，包括动脉粥样硬化性低密度脂蛋白(LDL)表型，主要由小的致密颗粒组成。代谢综合征和NAFLD/NASH的特点是心血管炎症增加，通过高灵敏度C反应蛋白(hscrp)和其他炎症细胞因子的升高来衡量。

全球肥胖、代谢综合征、糖尿病前期和糖尿病的发病率都很高，预计到2030年，全球糖尿病的发病率将翻倍至3.66亿。据估计，2011年美国糖尿病人口为2540万(患病率为11.5％)，到2031年为3770万(14.5％)，20.2％的西班牙裔成年人患有糖尿病。由于大约70％的T2DM患者有脂肪肝，并且糖尿病患者的坏死和纤维化(即NASH)更为严重，糖尿病流行病学表明NASH和慢性肝病患者的发病率显著增加。利用核磁共振成像对肝脏脂肪变性进行无创评估，在美国或大约8000万人中，NAFLD的患病率估计为34％，三分之二的肥胖受试者中，NAFLD的患病率大于5％。然而，这种患病率在T2DM中被认为要高得多。在107例未经选择的T2DM患者中，MRI显示NAFLD的患病率为76％，这与意大利和巴西最近的研究相似。最近的研究表明，肥胖的儿童和青少年，特别是西班牙裔血统的儿童，NAFLD的患病率正在迅速上升。

目前还没有批准用于预防或治疗NAFLD或NASH的药物。许多药物干预已经在NAFLD/NASH中尝试过，但总体效果有限。抗氧化剂可以阻止脂质过氧化，细胞保护剂可以稳定磷脂膜，但迄今为止，抗氧化剂的尝试没有成功，或只是取得了适度的效果，包括熊去氧胆酸、维生素E(α-生育酚)和C以及己酮可可碱等。与仅仅使用饮食和运动来达到减肥(“单独减肥”)相比，奥利司他等减肥药没有显著的益处。NAFLD/NASH中的大多数减肥研究都是短期和有限成功的先导性研究，仅报告坏死或纤维化的轻微改善。一项随机、双盲、安慰剂对照的6个月试验(Belfort，“吡格列酮对非酒精性脂肪性肝炎患者的安慰剂对照试验”，N.Engl.J.Med.，355，2297-2307(2006))单用吡格列酮 (噻唑烷二酮类过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(pparγ)激动剂和胰岛素增敏剂) 减肥，未能证明单用吡格列酮治疗对减肥有任何改善，但用吡格列酮治疗可改善血糖控制、胰岛素敏感性、全身性炎症指标。NASH和IGT或T2DM患者的LAMMation(包括hscrp、肿瘤坏死因子α和转化生长因子β)和肝脏组织学。吡格列酮治疗也改善了脂肪、肝脏和肌肉的红外光谱，并与坏死斑块减少约50％(p<0.002)和纤维化减少37％(p＝0.08) 有关。最近在另一项为期12个月的吡格列酮对照试验中报告了肝细胞损伤和纤维化的改善。与此相反，虽然罗格列酮(另一种噻唑烷二酮被批准用于糖尿病治疗)的第一项随机临床研究表明，在NASH中，罗格列酮治疗对坏死、炎症或纤维化没有明显的影响，但其能降低胰岛素、血浆丙氨酸转氨酶(ALT)水平和脂肪变性。对该试验的2年开放式随访的初步报告也令人失望，罗格列酮治疗没有显著益处。因此，对NASH最有效的药物是吡格列酮。不幸的是，吡格列酮也与女性和男性体重增加、水肿、充血性心力衰竭和骨质疏松性骨折的风险显著增加有关。

GW510516，一种有效的过氧化物酶体增殖物激活受体-δ(pparδ)激动剂，改善正常小鼠饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗，其作用伴随着代谢率和脂肪酸β-氧化的增强。它还显著改善了糖尿病，证明遗传性肥胖的db/db小鼠的葡萄糖和胰岛素水平都大幅降低。GW510516已在健康受试者的两个第一阶段研究中被证明可以降低TGS、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白B(APOB)和胰岛素水平，提高HDL-C和胰岛素敏感性，其中一项研究还显示肝脏脂肪减少20％；而后来的一项研究证实了这些作用在血脂异常的亚慢性脑损伤中的作用。腹部肥胖的CTS(肝脂肪减少20％，空腹TGS减少30％，APOB 减少26％，LDL-C减少23％，空腹非酯化脂肪酸减少40％，空腹胰岛素减少11％)。然而，在动物研究中观察到GW510516与多种器官癌症的快速发展有关后，GW510516的发展停止了。

双过氧化物酶体增殖物激活受体-α/过氧化物酶体增殖物激活受体-δ(PPARα/δ)激动剂GFT505具有优先α(EC 50＝6nM)和二级δ(EC 50＝47nM)激动剂活性。gft505 的调脂作用已在两个健康受试者以及t2dm患者、合并的腹部肥胖和混合性血脂异常、合并的腹部肥胖和糖尿病前期、动脉粥样硬化性血脂异常和胰岛素抵抗中得到证实。这些影响包括TGS、非HDL-C和总胆固醇、LDL-C和APOB的降低；HDL-C的增加。在 NAFLD/NASH的啮齿动物模型中的临床前研究表明，GFT505治疗可降低肝脂肪变性、炎症和纤维化，并降低肝功能障碍标记物；而在临床研究中，已报道了GFT505。减少一系列肝功能异常标志物，包括丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶(alp)和γ-谷氨酰转移酶 (ggt)。一项为期1年的NASH肝脏活检基础2期试验最初招募患者接受80mg/天的 GFT505或安慰剂治疗，6个月的临时安全性分析显示没有影响正在进行的研究的安全问题；第二个招募阶段选择了120mg/天的GFT505或安慰剂治疗的患者。

在美国国家糖尿病和消化和肾脏疾病研究所赞助的一项针对NASH的第2阶段研究中，研究了一种半合成胆汁酸类似物obeticholic acid(OCA，6α-乙基鹅去氧胆酸)，这是一种高效的法尼索样X受体激动剂。这项研究于2014年1月初停止，因为283名受试者中约有一半已经完成了这项研究，当时一项计划中的中期分析显示主要终点已经达到。治疗(OCA25mg/天，72周)导致主要组织学终点的高度统计显著改善(与安慰剂相比，意向治疗基础上p＝0.0024)，定义为至少两个点的NAS减少，没有纤维化恶化。

尽管报告了GFT505和OCA的初步益处，但仍然有一个重要的未满足的临床需要，即一种有效且耐受性良好的药物，可以预防或减缓NAFLD和NASH的进展。

曲美替尼是一种MEK抑制剂，对MEK1和MEK2酶的IC50为2nM，曲美替尼的中文化学名称：N-[3-[3-环丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-3，4，6，7-四氢-6,8-二甲基 -2,4,7-三氧代吡啶并[4，3-d]嘧啶-1(2H)-基]苯基]乙酰胺；分子式：C26H23FIN5O4；分子量：615.39；CAS登记号：871700-17-3。曲美替尼溶解度差，溶剂合物溶解度好。曲美替尼(0.1-100nM)可以阻断外周血细胞中的TNFα和IL-6。曲美替尼可以抑制人类9/10的结肠癌细胞，给药后可以使细胞周期阻滞在G1期。在佐剂导致的关节炎(AIA) 和II型胶原导致的关节炎(CIA)模型中，0.1mg/kg曲美替尼或10mg/kg来氟米特可有效抑制。曲美替尼与GSK2118436联用可有效阻止细胞生长，降低Erk磷酸化，降低细胞周期蛋白D1，增加P27蛋白。在裸鼠肿瘤移植模型中，曲美替尼(0.3mg/kg,1mg/kg, 口服)可有效抑制HS-29肿瘤移植。然而，曲美替尼预防和治疗NAFLD和NASH未见报告。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了提供一种有效且耐受性良好的药物，可以预防或减缓NAFLD和NASH的进展。

技术方案：本发明的第一方面，提供了曲美替尼在制备预防和/或治疗非酒精性肝炎中的应用。

优选地，曲美替尼的用量为0.001mg/kg～0.10mg/kg，优选0.03mg/kg～0.10mg/kg。

本发明的第二方面，提供了曲美替尼在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝病中的应用。

本发明的第三方面，提供了用于预防和/或治疗非酒精性肝炎的组合物，所述组合物中包括曲美替尼及其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或辅助剂。

优选地，所述药学上可接受的载体包括填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。

有益效果：本发明提供了曲美替尼在制备预防和/或治疗非酒精性肝炎、非酒精性脂肪性肝病中的应用，结果显示，曲美替尼能够有效降低MCD模型中ALT和AST值，曲美替尼处理组染色面值较小、脂肪粒消失、无炎症坏死；曲美替尼还能够有效降低高脂/ 果糖模型中的脂肪和炎症反应，曲美替尼处理组染色面值较小、脂肪粒明显减少，损伤较小。

附图说明

图1a为小鼠MCD模型活性测试实验中ALT水平图；

图1b为小鼠MCD模型活性测试实验中AST水平图；

图1c为小鼠MCD模型活性测试实验中CHO水平图；

图1d为小鼠MCD模型活性测试实验中TG水平图；

图2a为油红O染色法的MCD模型组的肝病理切片图；

图2b为油红O染色法的MCD模型组低剂量给药后处理的肝病理切片图；

图2c为油红O染色法的MCD模型组高剂量组给药后处理的肝病理切片图；

图2d为油红O染色法MCD模型组实验结果图；

图3a为MCD模型组的肝病理切片图；

图3b为MCD模型组低剂量组的肝病理切片图；

图3c为MCD模型组高剂量组的肝病理切片图；

以上图均为MCD模型测试结果，其中，N为正常组，M为模型组，T-0.03mg/kg为低剂量组，T-0.1mg/kg为高剂量组。

图4a为正常组用天狼星红染色法处理的肝病理切片图；

图4b为HDF+HF模型组用天狼星红染色法处理的肝病理切片图；

图4c为HDF+HF模型组给药后用天狼星红染色法处理的肝病理切片图；

图4d为天狼星红染色法处理HDF+HF模型组实验效果图；

图5a为HDF+HF正常组油红O染色法处理的病理切片图；

图5b为HDF+HF模型组油红O染色法处理的肝病理切片图；

图5c为HDF+HF模型组给药后油红O处理染色法的肝病理切片图；

图5d为油红O染色法HDF+HF模型组实验结果图；

图6a为正常组的肝病理切片图；

图6b为HDF+HF模型组的肝病理切片图；

图6c为HDF+HF模型组给药后的肝病理切片图；

图7a为正常组、HDF+HF模型及组给药后的肝形态对比图；

图7b为正常组、HDF+HF模型及组给药后的肝指数对比图；

图8a为小鼠HDF+HF模型活性测试实验中ALT水平图；

图8b为小鼠HDF+HF模型活性测试实验中AST水平图；

图8c为小鼠HDF+HF模型活性测试实验中CHO水平图；

图8d为小鼠HDF+HF模型活性测试实验中TG水平图；

图9a为小鼠HDF+HF模型血清葡萄糖水平图；

图9b为小鼠HDF+HF模型血清胰岛素水平图；

图9c为小鼠HDF+HF模型血清葡萄糖浓度随时间变化图；

图9c为小鼠HDF+HF模型葡萄糖拮抗测试图；

图9d为小鼠HDF+HF模型胰岛素抵抗指数测试图；

图10a为给药后小鼠HDF+HF模型食物消耗图；

图10b为给药后小鼠HDF+HF模型体重变化图。

以上图均为高糖和高脂(HDF+HF)模型测试结果，其中，N为正常组，HDF+HF/G为模型组，T-0.1mg/kg为给药组。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

曲美替尼在小鼠MCD模型(NASH模型)上进行活性测试：

实验方法：(1)将8周大的C57BL/6N保持在环境控制的状况下，并且可以自由进食标准饲料和饮水。将小鼠适应一周后，分为四组，正常组小鼠喂食正常饲料，模型组小鼠和给药组小鼠(低剂量、高剂量)喂食蛋氨酸胆碱缺乏饲料(MCD,A02082002B)。

喂食MCD两周后，对给药组小鼠连续14天每天一次腹膜内注射包含曲美替尼的溶媒 (0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na，Sigma)，模型组和正常组小鼠同等频率注射溶媒。 14天后处死小鼠，并且称重小鼠体重和肝脏组织。

用4％多聚甲醛固定各个肝脏的部分，通过苏木精和伊红(HE)染色和油红染色来分析肝脏组织学特征。收集并在液氮中冷冻其他组织以便使用，并收集血清以测量代谢物参数。

实验结果：

(1)活性测试结果表明：曲美替尼0.03mg/kg和0.10mg/kg可以使ALT降低30.2％和67.5％,AST降低25.4％和73.5％。CHO,TGs和HDL与MCD组相似，见图1a、1b、1c 和1d；

(2)油红O染色法的肝病理切片显示：MCD组染色面值较大、肝中含有大量的脂肪粒、炎症坏死严重，而曲美替尼处理组染色面值较小、脂肪粒消失、无炎症坏死，见图 2a、2b、2c、2d；

(3)肝病理切片显示，MCD组肝中含有大量的脂肪粒、炎症坏死严重，而曲美替尼组脂肪粒消失、无炎症坏死，可有效降低肝指数。见图3a、3b和3c。

实施例2

曲美替尼在小鼠高脂饲料/果糖模型(NASH模型)上进行活性测试：

实验方法：8周大的C57BL/6N新环境适应一周后，分为三组，正常组喂食正常饲料，模型组小鼠和给药组小鼠喂食高脂饲料(HFD)八个周。

正常对照组给与正常饮用水和正常饲料，模型组小鼠和给药组小鼠给与高果糖和高葡萄糖饮用水(23.1g果糖和18.9g葡萄糖加到1L水里)并继续给与高脂饲料8个周后，对给药组小鼠连续14天每天一次按体重腹膜内注射包含曲美替尼的溶媒(0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na，Sigma)(曲美替尼用量为0.1mg/kg)，模型组和正常组小鼠同等频率注射溶媒。14天后测量空腹血糖，并眼眶取血离心取血清用以测量空腹胰岛素。给与小鼠按2g/kg腹腔注射葡萄糖溶液，并通过尾尖取血用罗氏血糖仪测量0， 30,60,90,120min的血糖，然后处死小鼠，并且称重小鼠体重和肝脏组织。

用4％多聚甲醛固定各个肝脏的部分，通过苏木精和伊红(HE)染色、油红染色以及天狼星红染色来分析肝脏组织学特征。收集并在液氮中冷冻其他组织以便使用，并收集血清以测量代谢物参数。

实验结果：

(1)天狼星红染色的肝病理切片显示：模型组组染色面值较大、肝中含有大量的脂肪粒、炎症坏死严重，而给药组染色面值较小、脂肪粒较少、炎症坏死少，染色面积显著减少，见图4a、4b、4c、4d；

(2)油红O染色法的肝病理切片显示：HFD+HF组染色面值较大、肝中含有大量的脂肪粒、炎症坏死严重，而给药组组染色面值较小、脂肪粒很少、炎症较轻，染色面积显著减少，见图5a、5b、5c、5d；

(3)肝病理切片显示，模型组组肝中含有大量的脂肪粒、炎症坏死严重，而给药组组脂肪粒较少、炎症较轻，见图6a、6b和6c。

(4)曲美替尼可显改善高脂肪、高糖饮食者肝脏形态著，降低肝指数，见图7a、 7b。

(5)活性测试结果表明：曲美替尼可以使ALT、AST、CHO和TGs显著降低，见图 8a、8b、8c和8d；

(6)活性测试结果表明：曲美替尼可以使血清葡萄糖、血清胰岛素水平、胰岛素拮抗显著改善，见图9a、9b、9c和9d；

(7)曲美替尼在治疗剂量下，小鼠进食和体重与对照组无显著差异，见图10a、10b。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.曲美替尼在制备预防和/或治疗非酒精性肝炎药物中的应用。

2.如权利要求1所述应用，其特征在于：曲美替尼的用量为0.001mg/kg～0.10mg/kg，优选0.005-0.1mg/kg。

3.曲美替尼在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝病药物中的应用。

4.如权利要求3所述应用，其特征在于：曲美替尼的用量为0.001mg/kg～0.10mg/kg，优选0.005-0.1mg/kg。

5.用于预防和/或治疗非酒精性肝炎或肝病的组合物，其特征在于：所述组合物中包括曲美替尼及其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或辅助剂。

6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于：所述药学上可接受的载体包括填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。