CN110859848A - 百蕊草素i在制备治疗全身重症脓毒症药物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种百蕊草素I在制备治疗全身重症脓毒症药物中的用途，属于生物医药技术领域，本发明的发明人发现，百蕊草素I能够通过降低血清中重症脓毒症引起的TNF‑α，IL‑6升高和IL‑10降低；降低肝脏中重症脓毒症引起的TNF‑α，IL‑6升高和IL‑10降低；降低肺脏中重症脓毒症引起的TNF‑α，IL‑6升高和IL‑10降低；降低脾脏中重症脓毒症引起的TNF‑α，IL‑6升高和IL‑10降低来改善和治疗重症脓毒症。其次，百蕊草素I能够通过降低重症脓毒症引起的肺损伤，以及抑制重症脓毒症导致的ERK1/2、JNK和p38的磷酸化程度升高和IκB和NF‑κB的磷酸化程度升高来改善和治疗重症脓毒症。因此，百蕊草素I可以作为制备治疗全身重症脓毒症相关疾病的潜在药物。

Description

百蕊草素I在制备治疗全身重症脓毒症药物中的用途
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及百蕊草素I在制备治疗全身重症脓毒症药物中的用途。
背景技术
脓毒症是一种危及生命的内科重症疾病,以感染引起失调的免疫反应导致危及生命的多器官功能障碍为主要表现。脓毒症是由于多种病原菌进入机体血液***后迅速繁殖和产生大量毒素导致机体受刺激所述产生的过度炎症反应。
重症脓毒症为脓毒症的一种，重症脓毒症的病情凶险且患者的致死率高，患者多伴随有器官功能损伤，且存在急性肺损伤，目前重症脓毒症治疗的主要困难在于诊断难和治疗难。到目前为止还没有专门针对重症脓毒症的有效治疗方法，因此，研发新的药物去治疗重症脓毒症是目前急需解决的问题。
百蕊草素I(Kaempferol-3-O-glucorhamnoside，KA)最早提取自檀香科植物百蕊草全草而得名的黄酮类化合物又名阿福豆苷；其分子式为C27H30O15，分子量为594.52，CASNO.40437-72-7，结构式如下图所示：
Figure BDA0002306950710000011
百蕊草对急性乳腺炎、急性扁桃腺炎、上呼吸道感染以及大叶性肺炎等多种炎症疾病,药效显著且对患者没有毒副作用。尽管目前对于百蕊草已经进行了较多的研究，但是对于百蕊草素I活性尚鲜有报道，且百蕊草素I在制备治疗全身重症脓毒症中的用途至今尚未报道。
发明内容
本发明的目的在于丰富百蕊草素I的医药用途以及针对现有技术中重症脓毒症治疗中存不足的问题，提出一种百蕊草素I在制备治疗重症脓毒症药物中的用途。
为了实现上述发明目的，本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了百蕊草素I在制备治疗全身重症脓毒症药物中的用途。
此外，本发明提供了百蕊草素I在制备治疗肝脏重症脓毒症药物中的用途。
此外，本发明提供了百蕊草素I在制备治疗肺脏重症脓毒症药物中的用途。
此外，本发明提供了百蕊草素I在制备治疗脾脏重症脓毒症药物中的用途。
优选地，所述用途包括，使用百蕊草素I改善重症脓毒症引起的细胞生存率下降。
优选地，所述用途包括，所述用途包括，使用百蕊草素I抑制血清中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低；使用百蕊草素I抑制肝脏中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低；使用百蕊草素I抑制肺脏中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低；使用百蕊草素I抑制脾脏中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低。
优选地，所述用途包括，使用百蕊草素I降低重症脓毒症所引起的肺脏损伤。
优选地，所述用途包括，使用百蕊草素I抑制重症脓毒症导致的ERK1/2、JNK和p38的磷酸化程度升高。
优选地，所述用途包括，使用百蕊草素I抑制重症脓毒症导致的IκB和NF-κB的磷酸化程度升高。
优选地，所述百蕊草素I可与药学上可接受的载体混合用于制备治疗全身脓毒症药物。
本发明的有益效果在于：
1.本发明提供了一种百蕊草素I的新用途，并且为重症脓毒症患者的治疗提供了一种新的药物。
2.本发明证明百蕊草素I能够通过抑制血清中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低；使用百蕊草素I抑制肝脏中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低；使用百蕊草素I抑制肺脏中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低；使用百蕊草素I抑制脾脏中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低来改善和治疗重症脓毒症。
3.本发明证明百蕊草素I能够通过降低重症脓毒症引起的肺损伤，以及抑制重症脓毒症导致的ERK1/2、JNK和p38的磷酸化程度升高和IκB和NF-κB的磷酸化程度升高来改善和治疗重症脓毒症。
4.百蕊草素I来源于百蕊草的提取物中，具有毒性小、疗效好的特点，同时，使用百蕊草素治疗脓毒症可以减少抗生素的使用。
附图说明
图1百蕊草素I对细胞生存率的影响。
图2百蕊草素I对LPS攻击过的RAW264.7细胞中炎性细胞因子分泌的影响。
图3百蕊草素I对LPS攻击过的C57小鼠血清中炎性细胞因子分泌的影响。
图4百蕊草素I对LPS攻击过的C57小鼠肝脏中炎性细胞因子分泌的影响。
图5百蕊草素I对LPS攻击过的C57小鼠脾脏中炎性细胞因子分泌的影响。
图6百蕊草素I对LPS攻击过的C57小鼠肺脏中炎性细胞因子分泌的影响。
图7百蕊草素I对LPS感染小鼠肺病理的影响。
(A)空白组TNF-α(B)LPS组TNF-α(C)百蕊草素I组TNF-α
(D)空白组IL-10(E)LPS组IL-10(F)百蕊草素I组IL-10
图8百蕊草素I对LPS感染的C57小鼠肺脏组织蛋白中MAPK和NF-κB通路情况的影响。
(A)百蕊草素I对LPS感染的C57小鼠肺脏组织蛋白中p38，ERK和JNK磷酸化的影响。(B)百蕊草素I对LPS感染的C57小鼠肺脏组织蛋白中IκB和NF-κB磷酸化的影响。
具体实施方式
为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
实施例1
百蕊草素I对细胞生存率的影响
实验方法
实验分组：空白对照组，LPS组，百蕊草素I组
将RAW 264.7细胞接种到96孔板(2×104个细胞/孔)中培养24小时并加入浓度为4μg/ml百蕊草素I，处理时间1小时，然后暴露于LPS 18小时。随后，用PBS将96孔板洗涤两次，将MTT(5mg/ml)加入到细胞中，然后再孵育4小时。加入DMSO溶解，在570nm测定吸光度；空白对照组不进行任何处理，LPS组只进行LPS处理，不使用百蕊草素I处理。
实验结果
表1百蕊草素I对细胞生存率的影响
Figure BDA0002306950710000041
(所有数据均以均值±SEM表示(n＝5)##P<0.01与空白对照组比较；*P<0.05，**P<0.01，与LPS组比较。)
用百蕊草素I(4μg/ml)处理的RAW264.7细胞在LPS感染后细胞生存率如图1和表1所示，LPS组与空白对照组相比，细胞生存率降低至0.30，差异极其显著(P＜0.01)证明本发明的造模成功；百蕊草素I组与LPS组相比，百蕊草素I组细胞生存率提高，差异显著(P＜0.01)。表明百蕊草素I对细胞具有保护和促进细胞生长的作用。
实施例2
百蕊草素I对于细胞的抗炎作用
实验方法
实验分组和给药处理同实施例1，每组设置5个复孔，给药处理后，细胞置于37℃、5％CO2培养箱中连续培养72h，之后，在96孔板中将细胞吹打均匀，收集细胞悬液，离心(3000r/min，20min)，收集细胞上清液，操作步骤按照ELISA检测试剂盒说明书进行，检测TNF-α、IL-10、IL-6的含量。
实验结果
表2百蕊草素I对LPS攻击过的RAW264.7细胞中炎性细胞因子分泌的影响
Figure BDA0002306950710000042
Figure BDA0002306950710000051
(所有数据均以均值±SEM表示(n＝5)##P<0.01与空白对照组比较；*P<0.05，**P<0.01，与LPS组比较。)
用百蕊草素I(4μg/ml)处理的RAW264.7细胞在LPS感染后TNF-α、IL-6和IL-10含量如图2和表2所示，LPS组与空白对照组相比，TNF-α、IL-6均升高至148.03pg/ml、42.14pg/ml，IL-10降低至26.19pg/ml，差异极其显著(P＜0.01)证明本发明的造模成功；百蕊草素I组与LPS组相比，百蕊草素I组TNF-α、IL-6降低，IL-10升高，差异显著(P＜0.01)。表明百蕊草素I对细胞能够起到抗炎作用。
实施例3
百蕊草素I对于小鼠血清，肝脏，脾脏，肺脏中TNF-α、IL-10、IL-6的影响
(1)百蕊草素I对于肝脏匀浆上清液中TNF-α、IL-10、IL-6含量的影响。
实验方式
实验分组：空白对照组，百蕊草素I组，LPS组
将18只小鼠随机分为空白对照组，百蕊草素I组(200μg/ml)，LPS组(10mg/kg)，每组6只。对百蕊草素I的小鼠注射200μg/ml的百蕊草素I，处理1小时后，对百蕊草素I组和LPS组进行攻毒；空白对照组不做任何处理。收集各组的小鼠血清，肝脏，脾脏和肺脏并制成组织匀浆悬液，将组织匀浆悬液稀释10倍，3600r/min离心10分钟，收集匀浆上清液；之后，按照ELISA检测试剂盒说明书进行血清，肝脏，脾脏，肺脏中TNF-α、IL-10、IL-6水平的检测。
实验结果
表3百蕊草素I对LPS攻击过的C57小鼠血清中炎性细胞因子分泌的影响
Figure BDA0002306950710000052
(所有数据均以均值±SEM表示(n＝5)##P<0.01与空白对照组比较；*P<0.05，**P<0.01，与LPS组比较。)
用百蕊草素I(200μg/ml)处理的小鼠在LPS感染后血清中TNF-α、IL-6和IL-10含量如图3和表3所示，LPS组与空白对照组相比，小鼠血清中TNF-α、IL-6均升高，IL-10降低，差异极其显著(P＜0.01)，证明本发明的造模成功；百蕊草素I组与LPS组相比，百蕊草素I组TNF-α、IL-6降低，IL-10升高，差异显著(P＜0.01)。表明百蕊草素I对LPS感染的重症脓毒症小鼠的全身炎症具有抑制效果。
(2)百蕊草素I对于肝脏匀浆上清液中TNF-α、IL-10、IL-6含量的影响。
表4百蕊草素I对LPS攻击过的C57小鼠肝脏中炎性细胞因子分泌的影响
Figure BDA0002306950710000061
(所有数据均以均值±SEM表示(n＝5)##P<0.01与空白对照组比较；*P<0.05，**P<0.01，与LPS组比较。)
用百蕊草素I(200μg/ml)处理的小鼠在LPS感染后肝脏匀浆上清液中TNF-α、IL-6和IL-10含量如图4和表4所示，LPS组与空白对照组相比，小鼠肝脏中TNF-α、IL-6均升高，IL-10降低，差异极其显著(P＜0.01)，证明本发明的造模成功；百蕊草素I组与LPS组相比，百蕊草素I组TNF-α、IL-6降低，IL-10升高，差异显著(P＜0.01)。表明百蕊草素I对LPS感染的重症脓毒症小鼠的肝脏炎症具有抑制效果。
(3)百蕊草素I对于脾脏匀浆上清液中TNF-α、IL-10、IL-6含量的影响
表5百蕊草素I对LPS攻击过的C57小鼠脾脏中炎性细胞因子分泌的影响
Figure BDA0002306950710000062
Figure BDA0002306950710000071
(所有数据均以均值±SEM表示(n＝5)##P<0.01与空白对照组比较；*P<0.05，**P<0.01，与LPS组比较。)
用百蕊草素I(200μg/ml)处理的小鼠在LPS感染后脾脏匀浆上清液中TNF-α、IL-6和IL-10含量如图5和表5所示，LPS组与空白对照组相比，小鼠脾脏中TNF-α、IL-6均升高，IL-10降低，差异极其显著(P＜0.01)，证明本发明的造模成功；百蕊草素I组与LPS组相比，百蕊草素I组TNF-α、IL-6降低，IL-10升高，差异显著(P＜0.01)。表明百蕊草素I对LPS感染的重症脓毒症小鼠的脾脏炎症具有抑制效果。
(4)百蕊草素I对于肺脏匀浆上清液中TNF-α、IL-10、IL-6含量的影响
表6百蕊草素I对LPS攻击过的C57小鼠肺脏中炎性细胞因子分泌的影响
Figure BDA0002306950710000072
(所有数据均以均值±SEM表示(n＝5)##P<0.01与空白对照组比较；*P<0.05，**P<0.01，与LPS组比较。)
用百蕊草素I(200μg/ml)处理的小鼠在LPS感染后肺脏匀浆上清液中TNF-α、IL-6和IL-10含量如图6和表6所示，LPS组与空白对照组相比，小鼠肺脏中TNF-α、IL-6均升高，IL-10降低，差异极其显著(P＜0.01)，证明本发明的造模成功；百蕊草素I组与LPS组相比，百蕊草素I组TNF-α、IL-6降低，IL-10升高，差异显著(P＜0.01)。表明百蕊草素I对LPS感染的重症脓毒症小鼠的肺脏炎症具有抑制效果。
实施例4
实验方法
将实施例3中所获得的各组小鼠的肺脏经免疫组化制成病理组织切片。
实验结果
如图7所示，百蕊草素I(200μg/ml)处理过的小鼠的肺脏损伤程度比LPS组的要轻一些。表明百蕊草素I对LPS感染的重症脓毒症小鼠的肺脏具有保护作用。
实施例5
实验方法
将实施例3中所获得的各组小鼠的肺脏组织分别提取总蛋白，测定含量，并使用Western Blot检测。
实验结果
用百蕊草素I(200μg/ml)处理的小鼠在LPS感染后小鼠肺部ERK、JNK、p38磷酸化程度如图8-A所示，LPS组与空白对照组相比，ERK、JNK、p38磷酸化程度均升高，差异极其显著(P＜0.01)证明本发明的造模成功；百蕊草素I与LPS组相比，百蕊草素I组ERK、JNK、p38磷酸化程度均降低，差异显著(P＜0.05)。表明百蕊草素I对于LPS感染的重症脓毒症小鼠的肺部MAPK通路具有抑制作用。
用百蕊草素I(200μg/ml)处理的小鼠在LPS感染后小鼠肺部IκB和p65磷酸化程度如图8-B所示，LPS组与空白对照组相比，IκB、p65磷酸化程度均升高，差异极其显著(P＜0.01)，证明本发明的造模成功，百蕊草素I组与LPS组相比，百蕊草素I组IκB、p65磷酸化程度均降低，差异显著(P＜0.05)。表明百蕊草素I对于LPS感染的重症脓毒症小鼠的肺部NF-κB通路具有抑制作用。
综上所述，百蕊草素I能够通过抑制血清中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低；使用百蕊草素I抑制肝脏中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低；使用百蕊草素I抑制肺脏中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低；使用百蕊草素I抑制脾脏中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低来改善和治疗重症脓毒症。
其次，百蕊草素I能够通过降低重症脓毒症引起的肺损伤，以及抑制重症脓毒症导致的ERK1/2、JNK和p38的磷酸化程度升高和IκB和NF-κB的磷酸化程度升高来改善和治疗重症脓毒症。

Claims (10)

1.百蕊草素I在制备治疗全身重症脓毒症药物中的用途。
2.百蕊草素I在制备治疗肝脏重症脓毒症药物中的用途。
3.百蕊草素I在制备治疗肺脏重症脓毒症药物中的用途。
4.百蕊草素I在制备治疗脾脏重症脓毒症药物中的用途。
5.根据权利要求1-4中的任意一项所述用途，其特征在于，所述用途包括，使用百蕊草素I改善重症脓毒症引起的细胞生存率下降。
6.根据权利要求1-4中的任意一项所述用途，其特征在于，所述用途包括，使用百蕊草素I抑制血清中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低；使用百蕊草素I抑制肝脏中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低；使用百蕊草素I抑制肺脏中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低；使用百蕊草素I抑制脾脏中重症脓毒症引起的TNF-α，IL-6升高和IL-10降低。
7.根据权利要求1-4中的任意一项所述用途，其特征在于，所述用途包括，使用百蕊草素I降低重症脓毒症所引起的肺脏损伤。
8.根据权利要求1-4中的任意一项所述用途，其特征在于，所述用途包括，使用百蕊草素I抑制重症脓毒症导致的ERK1/2、JNK和p38的磷酸化程度升高。
9.根据权利要求1-4中的任意一项所述用途，其特征在于，所述用途包括，使用百蕊草素I抑制重症脓毒症导致的IκB和NF-κB的磷酸化程度升高。
10.根据权利要求1-4中的任意一项所述用途，其特征在于，所述百蕊草素I可与药学上可接受的载体混合用于制备治疗全身脓毒症药物。
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